CN106491470A - 一种龙血竭提取物化妆品及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种龙血竭提取物化妆品及其制备方法。该龙血竭提取物化妆品包括龙血竭提取物：所述龙血竭提取物的制备方法如下：采用有机溶剂对龙血竭进行提取，所得提取液即为所述龙血竭提取物；所述有机溶剂为多元醇或白油。本发明龙血竭提取物化妆品中，龙血竭提取物与化妆品基质相容性好，没有降粘、破乳等情况出现；所用龙血竭提取物稳定性好，对于高温，低温，光照等恶劣条件都很稳定；提取率高(达到95％以上)，龙血竭原料损失少，达到了对龙血竭原料的最大化利用。另外，除了抗氧化、抗衰老作用，还具有显著的祛痘和美白作用。

Description

一种龙血竭提取物化妆品及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种中药提取物化妆品及其制备方法，具体涉及一种龙血竭提取物化妆品及其制备方法。
背景技术
目前，越来越多的中药植物成分被应用于护肤品中，药妆在市场中已经占据了越来越重要的市场地位，天然中药植物成分的开发和利用成为未来化妆品行业的重要发展方向。这对于开发新型化妆品具有重要意义，对于我国的中药开发利用同样具有重要意义。
龙血竭是百合科植物剑叶龙血树Dranaena cochinchinensis(Lour.)S.C.Chen的含脂木材经提取得到的树脂，主要产自广西和云南等地区。《本草纲目》记载其具有性温平，味甘咸，以及无毒等特性，主要功效为活血化瘀、收敛止血等。龙血竭的化学组成十分复杂，含黄酮类、简单酚类、甾体、萜类、烃类等多种类别化合物。
不同的工艺条件得到的龙血竭提取物中有效成分的含量不同，其药效用途均有差别，如CN 101559149 A中公开了一种龙血竭及龙血竭提取物用于制备辐射保护药物的用途，该龙血竭提取物是指龙血竭总酚和龙血竭总黄酮；CN 1857570 A公开了中药龙血竭黄酮类提取物的制备工艺方法，该提取物具有较强的α-葡萄糖苷酶抑制活性与促胰岛素分泌功能，可起到降血糖的作用。
在化妆品的研究和开发过程中，中药提取物作为功能添加剂，是制备具有特殊功效化妆品重要的物质基础。但是，由于这些化妆品生产所必需的各种中草药添加剂精制提取技术还不够完善、科技含量不高以及有效成分缺乏现代科学依据等原因，使得目前国内市场上销售的许多中药功能性化妆品使用效果不明显。已有/已报道的化妆品用龙血竭提取物的制备工艺也存在与化妆品基质相容性差，稳定性差、致敏性高、提取率低或需浓缩后再添加于化妆品等诸多问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种龙血竭提取物化妆品及其制备方法，该化妆品所采用的龙血竭提取物对人体肌肤刺激性小，致敏性低，与化妆品基质相容性好，稳定性好，并具有抗菌、祛痘、抗氧化、抗衰老、美白的功效。
本发明的第一个目的是提供一种龙血竭提取物化妆品，它包括龙血竭提取物；所述龙血竭提取物的制备方法如下：采用有机溶剂对龙血竭进行提取，所得提取液即为所述龙血竭提取物；所述有机溶剂为多元醇或白油。
上述的化妆品中，所述龙血竭可为龙血竭原料药；所述龙血竭的粒径可为10目～200目，具体可为40～60目、60～100目、50～80目、40目、50目、60目、80目或100目。
上述的化妆品中，所述多元醇优选化妆品中使用的，对肌肤刺激性小的多元醇，如1-2-丙二醇、1,3-丙二醇、1,3-丁二醇、丙三醇等。
上述的化妆品中，所述白油可为牌号为15#或26#的白油。所述牌号根据40℃运动粘度的大小来划分。
上述的化妆品中，所述提取可为浸渍提取或回流提取；所述浸渍提取的具体步骤如下：在所述龙血竭中加入所述有机溶剂进行浸泡，经过滤后，收集滤液即可得到所述龙血竭提取物。
上述的化妆品中，每1g所述龙血竭中加入1～1000g所述有机溶剂即料液比可为1：(1～1000)，具体可为每1g所述龙血竭中加入20～500g、20～200g、20～100g、20～50g、50～500g、50～200g、50～100g、100～500g、100～200g、200～500g、20g、50g、100g、200g或500g所述有机溶剂，即料液比具体可为1：(20～500)、1：(20～200)、1：(20～100)、1：(20～50)、1：(50～500)、1：(50～200)、1：(50～100)、1：(100～500)、1：(100～200)、1：(200～500)、1：20、1：50、1：100、1：200或1：500。
上述的化妆品中，所述提取的温度为25～180℃，具体可为80～150℃、80～95℃、80～100℃、80～110℃、95～150℃、95～110℃、95～100℃、100～110℃、100～150℃、110～150℃、80℃、95℃、100℃、110℃或150℃，每次提取的时间可为10～1440分钟，具体可为30～120分钟、30～60分钟、30～90分钟、60～90分钟、60～120分钟、90～120分钟、30分钟、60分钟、90分钟或120分钟。
上述的化妆品中，所述提取的次数可为1～3次，具体可为1～2次、2～3次、1次、2次或3次。
上述的化妆品中，所述龙血竭提取物中龙血竭总酚的质量百分含量为0.01～25％。
上述的化妆品中，所述化妆品还包括化妆品基料；所述龙血竭提取物化妆品中，所述龙血竭提取物的质量百分含量可为0.0001～10.0％，如1.0％。
所述龙血竭化妆品可以是膏霜状、凝胶状或水剂状等多种能被人接受的制剂形式，包括但不限于：面膜、面霜、乳液、精华液或爽肤水。
所述化妆品为膏霜状，以重量百分数计，它可由下述组分组成：龙血竭提取物0.0001～10.0％，去离子水3～99.86％，丙三醇0.1～10％，三甲基甘氨酸(NMF-50)0.001～10％，羟乙基纤维素(HEC)0.0001～1％，山梨醇0.01～10％，D-泛醇0.001～10％,单甘酯0.001～10％，白油0.001～10％，聚二甲基硅氧烷(DM100)0.001～10％，十六十八醇(混醇)0.001～10％，LGP 0.02～6％；
具体可由下述1)-6)中的任一项的组分组成：
1)龙血竭提取物1.0～3.0％，去离子水73～73.6％，丙三醇4.5～5.5％，三甲基甘氨酸(NMF-50)4.0～5.0％，羟乙基纤维素(HEC)0.1～0.2％，山梨醇2.0％，D-泛醇1.0％,单甘酯2.0％，白油7.0％，聚二甲基硅氧烷(DM100)2.0％，十六十八醇(混醇)1.0％，LGP0.3％；
2)龙血竭提取物1.0％，去离子水73.6％，丙三醇5.0％，三甲基甘氨酸(NMF-50)5.0％，羟乙基纤维素(HEC)0.1％，山梨醇2.0％，D-泛醇1.0％,单甘酯2.0％，白油7.0％，聚二甲基硅氧烷(DM100)2.0％，十六十八醇(混醇)1.0％，LGP 0.3％；
3)龙血竭提取物1.5％，去离子水73％，丙三醇5.5％，三甲基甘氨酸(NMF-50)4.5％，羟乙基纤维素(HEC)0.2％，山梨醇2.0％，D-泛醇1.0％,单甘酯2.0％，白油7.0％，聚二甲基硅氧烷(DM100)2.0％，十六十八醇(混醇)1.0％，LGP 0.3％；
4)龙血竭提取物2％，去离子水73％，丙三醇5.5％，三甲基甘氨酸(NMF-50)4.0％，羟乙基纤维素(HEC)0.2％，山梨醇2.0％，D-泛醇1.0％,单甘酯2.0％，白油7.0％，聚二甲基硅氧烷(DM100)2.0％，十六十八醇(混醇)1.0％，LGP 0.3％；
5)龙血竭提取物2.5％，去离子水73％，丙三醇5.0％，三甲基甘氨酸(NMF-50)4.0％，羟乙基纤维素(HEC)0.2％，山梨醇2.0％，D-泛醇1.0％,单甘酯2.0％，白油7.0％，聚二甲基硅氧烷(DM100)2.0％，十六十八醇(混醇)1.0％，LGP 0.3％；
6)龙血竭提取物3.0％，去离子水73％，丙三醇4.5％，三甲基甘氨酸(NMF-50)4.0％，羟乙基纤维素(HEC)0.2％，山梨醇2.0％，D-泛醇1.0％,单甘酯2.0％，白油7.0％，聚二甲基硅氧烷(DM100)2.0％，十六十八醇(混醇)1.0％，LGP 0.3％。
所述化妆品为水剂状，以重量百分数计，它可由下述组分组成：龙血竭提取物0.0001～10.0％，去离子水23～99.86％，三甲基甘氨酸(NMF-50)0.001～10％，山梨醇0.01～20％，尿囊素0.001～10.0％，丙三醇0.1～20％，黄胶原(汉生胶)0.1％，LGP 0.02～6％。
具体可由下述1)-6)中任一项的组分组成：
1)龙血竭提取物1.0～3.0％，去离子水87～87.5％，三甲基甘氨酸(NMF-50)4.5～5.0％，山梨醇1.5～2.0％，尿囊素0.1％，丙三醇3.5～4.0％，黄胶原(汉生胶)0.0001～1％，LGP 0.3％；
2)龙血竭提取物1.0％，去离子水87.5％，三甲基甘氨酸(NMF-50)5.0％，山梨醇2.0％，尿囊素0.1％，丙三醇4.0％，黄胶原(汉生胶)0.1％，LGP 0.3％；
3)龙血竭提取物1.5％，去离子水87％，三甲基甘氨酸(NMF-50)5.0％，山梨醇2.0％，尿囊素0.1％，丙三醇4.0％，黄胶原(汉生胶)0.1％，LGP 0.3％；
4)龙血竭提取物2％，去离子水87％，三甲基甘氨酸(NMF-50)4.5％，山梨醇2.0％，尿囊素0.1％，丙三醇4.0％，黄胶原(汉生胶)0.1％，LGP 0.3％；
5)龙血竭提取物2.5％，去离子水87％，三甲基甘氨酸(NMF-50)4.5％，山梨醇2.0％，尿囊素0.1％，丙三醇3.5％，黄胶原(汉生胶)0.1％，LGP 0.3％；
6)龙血竭提取物3％，去离子水87％，三甲基甘氨酸(NMF-50)4.5％，山梨醇1.5％，尿囊素0.1％，丙三醇3.5％，黄胶原(汉生胶)0.1％，LGP 0.3％。
所述化妆品为凝胶状，以重量百分数计，它可由下述组分组成：龙血竭提取物0.0001～10.0％，去离子水32～99.96％，山梨醇0.01～10％，丙三醇0.1～20％，丁二醇0.01～20％，卡伯母U20(CARBOMER U20)0.0001～1％，甲基异噻唑啉酮(MTI)0.02～6％，氢氧化钠(NAON)0.0001～1.0％。
具体可由下述1)-6)中任一项的组分组成：
1)龙血竭提取物1.0～3.0％，去离子水88～88.5％，山梨醇2％，丙三醇3.3～4.0％，1，3-丁二醇0.01～20％，卡伯母U20(CARBOMER U20)0.0001～1％，甲基异噻唑啉酮(MTI)3.0～4.0％，氢氧化钠(NAON)0.05～0.2％；
2)龙血竭提取物1.0％，去离子水88.5％，山梨醇2％，丙三醇4.0％，1，3-丁二醇4.0％，卡伯U20(CARBOMER U20)0.3％，甲基异噻唑啉酮(MTI)0.15％，氢氧化钠(NAON)0.05％；
3)龙血竭提取物1.5％，去离子水88.2％，山梨醇2％，丙三醇3.7％，1，3-丁二醇4.0％，卡伯U20(CARBOMER U20)0.3％，甲基异噻唑啉酮(MTI)0.2％，氢氧化钠(NAON)0.1％；
4)龙血竭提取物2％，去离子水88.2％，山梨醇2％，丙三醇3.7％，1，3-丁二醇3.5％，卡伯U20(CARBOMER U20)0.3％，甲基异噻唑啉酮(MTI)0.2％，氢氧化钠(NAON)0.1％；
5)龙血竭提取物2.5％，去离子水88％，山梨醇2％，丙三醇3.5％，1，3-丁二醇3.3％，卡伯U20(CARBOMER U20)0.3％，甲基异噻唑啉酮(MTI)0.2％，氢氧化钠(NAON)0.2％；
6)龙血竭提取物3％，去离子水88％，山梨醇2％，丙三醇3.3％，1，3-丁二醇3.0％，卡伯U20(CARBOMER U20)0.3％，甲基异噻唑啉酮(MTI)0.2％，氢氧化钠(NAON)0.2％。
本发明的另一个目的是提供一种上述龙血竭提取物化妆品的制备方法，它包括如下步骤：将所述龙血竭提取物和化妆品基料进行混合，即可得到所述龙血竭化妆品。
本发明的最后一个目的是提供上述龙血竭提取物化妆品在作为具有下述1)-8)中的至少一种功能的化妆品中的应用：
1)抑制痤疮致病菌；
2)祛痘；
3)清除DPPH自由基；
4)清除ABTS自由基；
5)抗氧化；
6)抗衰老；
7)抑制酪氨酸酶的活性；
8)美白。
本发明具有如下有益效果：
本发明克服了现有技术中采用乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂(非化妆品常用溶剂)提取龙血竭，提取物提取率不高或需浓缩后再添加于化妆品中，与化妆品基质相容性差，稳定性差、致敏性高等问题。
本发明龙血竭提取物化妆品中，龙血竭提取物与化妆品基质相容性好，没有降粘、破乳等情况出现；所用龙血竭提取物稳定性好，对于高温，低温，光照等恶劣条件都很稳定；提取率高(达到95％以上)，龙血竭原料损失少，达到了对龙血竭原料的最大化利用。另外，除了抗氧化、抗衰老作用，还具有显著的祛痘和美白作用。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
卡伯U20(Carbopol Ultrez 20聚合物)，INCI名称：Acrylates/C10-30 AlkylAcrylate Crosspolymer。
MTI为购自广东中鹏化工有限公司的产品，产品名称为MTI化妆品防腐剂，其活性组分为甲基异噻唑啉酮、碘丙炔基丁基甲铵酸脂。
NMF-50，化学名称为三甲基甘氨酸。
HEC(Hydroxyethyl Cellulose)，化学名称为羟乙基纤维素，规格为羟乙基纤维素HHR250。
DM100，化学名称为聚二甲基硅氧烷。
混醇，化学名称为十六十八醇。
LGP为购自广东中鹏化工有限公司的产品，产品名称为LGP化妆品防腐剂，活性成分为DMDM乙内酰脲、甲基异噻唑啉酮(MIT)、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯(IPBC)
透明汉生胶，化学名称为黄原胶。
下述实施例中，龙血竭提取物中总酚含量的测定方法如下：
a.对照品溶液制备
精密称量龙血素B标准品8.82mg，置于100mL容量瓶中，加无水乙醇定容，摇匀，即得龙血素B含量为0.0882mg/ml的溶液。
b.标准曲线绘制
取龙血素B对照品(0.0882mg/ml)0.5、0.6、0.75、1.0、1.3、1.5ml，分别置于10ml容量瓶中，加无水乙醇定容，摇匀。以无水乙醇做空白，在选定波长280nm下测定吸光度。以吸收度为横坐标，对照品浓度C(mg/mL)为纵坐标，绘制标准曲线。
c.总酚含量测定
精密取样品配制成适宜浓度溶液，在选定波长280nm下测定吸收度，根据建立的标准曲线进行总酚含量的计算。
下述实施例中龙血竭提取液得率根据龙血竭提取液总酚含量、投料量以及提取后提取液总量进行计算。计算公式如下：
式(1)中，各物理量代表的含义及单位如下：
C：提取液总酚含量，mg/mL
V：提取液总体积，mL
M：制作提取液使用的龙血竭原药中总酚的质量，g。
实施例1、龙血竭提取物的制备
一、龙血竭提取物
实验1、制备龙血竭提取物
将龙血竭粉碎至60目，按照1：50的比例(质量比)加入1,2-丙二醇，在95℃下浸泡1小时，提取完成之后，用过滤纸板过滤，所得滤液即为龙血竭提取物。
本实验中，料液比为1：50，提取温度为95℃，时间为1小时，提取次数为1次。所得提取液总酚含量为0.91％，提取率为95％。
实验2、制备龙血竭提取物
将龙血竭粉碎至100目，按照1：20的比例(质量比)加入1,3-丙二醇，在80℃下浸泡1.5小时，提取完成后，用过滤纸板过滤，收集滤液，将得到的滤渣重复上次操作，合并所有滤液即为龙血竭提取物。
本实验中，料液比为1：20，提取温度为80℃，时间为1.5小时，提取次数为2次。所得提取液总酚含量为1.2％，提取率为96％。
实验3、制备龙血竭提取物
将龙血竭粉碎至40目，按照1：100的比例(质量比)加入1,3-丁二醇，在100℃下浸泡0.5小时，提取完成之后，用过滤纸板过滤，所得滤液即为龙血竭提取物。
本实验中，料液比为1：100，提取温度为100℃，时间为0.5小时，提取次数为1次。所得提取液总酚含量为0.32％，提取率为92％。
实验4、制备龙血竭提取物
将龙血竭粉碎至80目，按照1：200的比例(质量比)加入丙三醇，在110℃下浸泡1.5小时，提取完成后，用过滤纸板过滤，收集滤液；将得到的滤渣重复上述操作，合并滤液即为龙血竭提取物。
本实验中，料液比为1：200，提取温度为110℃，时间为1.5小时，提取次数为2次。所得提取液总酚含量为0.10％，提取率为90％。
实验5、制备龙血竭提取物
将龙血竭粉碎至50目，按照1：500的比例(质量比)加入15#白油，在150℃下浸泡2小时，提取完成之后，用过滤纸板过滤，收集滤液；将得到的滤渣重复上述操作，所得滤渣再次重复上述操作，合并所有滤液即为龙血竭提取物。
本实验中，料液比为1：500，提取温度为150℃，时间为2小时，提取次数为3次。所得提取液总酚含量为0.03％，提取率为85％。
二、龙血竭提取物的效果实验
(1)龙血竭提取物稳定性试验
取实验1中制得的龙血竭提取物100g分别装于四个透明样品瓶中置于不同环境下，定期取四瓶样品同时观察状态。四瓶样品分别放置于室内阳光照射处，38度培养箱中，-20度冰箱冷冻室，室温阴凉处，于一周，两周，一个月时间分别观察其状态变化极小，表明龙血竭提取物具有很好的稳定性。
取实验2中制的的龙血竭提取物100g分别装于四个透明样品瓶中置于不同环境下，定期取四瓶样品同时观察状态。四瓶样品分别放置于室内阳光照射处，38度培养箱中，-20度冰箱冷冻室，室温阴凉处，于一周，两周，一个月时间分别观察其状态变化极小，表明龙血竭提取物具有很好的稳定性。
取实验3中制的的龙血竭提取物100g分别装于四个透明样品瓶中置于不同环境下，定期取四瓶样品同时观察状态。四瓶样品分别放置于室内阳光照射处，38度培养箱中，-20度冰箱冷冻室，室温阴凉处，于一周，两周，一个月时间分别观察其状态变化极小，表明龙血竭提取物具有很好的稳定性。
取实验4中制的的龙血竭提取物100g分别装于四个透明样品瓶中置于不同环境下，定期取四瓶样品同时观察状态。四瓶样品分别放置于室内阳光照射处，38度培养箱中，-20度冰箱冷冻室，室温阴凉处，于一周，两周，一个月时间分别观察其状态变化极小，表明龙血竭提取物具有很好的稳定性。
取实验5中制的的龙血竭提取物100g分别装于四个透明样品瓶中置于不同环境下，定期取四瓶样品同时观察状态。四瓶样品分别放置于室内阳光照射处，38度培养箱中，-20度冰箱冷冻室，室温阴凉处，于一周，两周，一个月时间分别观察其状态变化极小，表明龙血竭提取物具有很好的稳定性。
(2)龙血竭提取物的体外抑菌试验
选择痤疮致病菌，痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌作为测试菌种。痤疮丙酸杆菌Propionibacterium acnes的ATCC编号为10312，公众可从ATCC购买得到。金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus的ATCC编号为10384，公众可从ATCC购买得到。
配置含菌约1×106CFU/mL的菌悬液。将滤纸剪切为直径6mm圆片并经160℃干热灭菌2h，用无菌镊子分别将滤纸片放入抑菌原液(实验1-实验5所制备得到的龙血竭提取物)中浸泡1h后取出。分别取0.2mL菌悬液于对应无菌已凝固培养基中，用无菌玻璃三角筢均匀进行涂布为含菌平板，将浸泡好的滤纸片置于平皿中央，并作空白对照，进行三组平行试验，放入厌氧或生化培养箱中37℃培养24小时。
取出观察抑菌圈，结果如表1所示。抑菌圈的出现证明龙血竭提取物分别对痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用，抑菌圈直径越大，抑菌活性越强。
表1、龙血竭提取液抑菌圈数据表
注：“＜6”表示没有抑菌圈。
(3)龙血竭提取物的抗氧化功效评价
1)DPPH自由基清除能力测定
DPPH是一种早期合成的有机自由基，常用来评估抗氧化物的供氢能力，它在有机溶剂中非常稳定，呈紫色，而且在517nm处有一个特征吸收峰，当遇到自由基清除剂时，DPPH的孤对电子被配对而使其退色，也就是在最大吸收波长处的吸光值变小。因此，可通过测定吸光值的变化来评价样品对DPPH自由基的清除效果。
待测液：将实验1-实验5中制备得到的龙血竭原液分别用无菌水配制含0.30％原液的稀释液。采用无菌水作为空白对照、15μg/mL维生素C溶液作为对照。
取0.1mL的待测液与5.8mL DPPH溶液混匀为A；取0.2mL的无水乙醇与5.8mL DPPH溶液混匀为B；取5.8mL的无水乙醇与0.2mL的待测液混匀为C；反应30min后，在517nm下分别测定A、B、C的吸光度值。
计算方法：
不同实施例制备得到的龙血竭提取物稀释得到的0.3％龙血竭提取液及对照对DPPH自由基清除率如表2所示。
表2、龙血竭提取液DPPH自由基清除率
2)ABTS自由基清除能力测定
ABTS在适当的氧化剂作用下氧化成绿色的ABTS·+，在抗氧化物存在时ABTS·+的产生会被抑制，在734nm测定ABTS的吸光度即可测定并计算出样品的总抗氧化能力。
向A组试管依次加入500μL待测液，将500μL乙醇水溶液加入B组试管，加完试剂及时盖帽，涡旋混匀。将500μL ABTS自由基储备溶液依次加入A试管和B试管中，加完试剂及时盖帽，涡旋混匀。反应10min后在734nm检测吸光值。向C组试管依次加入500μL待测液和500μL乙醇水溶液涡旋混匀，734nm处测吸光值。
计算方法：
待测液：将实验1-实验5制备得到的龙血竭原液采用无菌水分别配制为0.10％的稀释度。采用无菌水作为空白对照。采用0.001％维生素C溶液作为对照。
不同实施例制备得到的龙血竭提取物稀释得到的0.10％的龙血竭提取液及对照对ABTS自由基清除率如表3所示。
表3、龙血竭提取液ABTS自由基清除率
通过以上实验数据可知，龙血竭提取物具有较强的抗氧化能力，可清除自由基，促进细胞代谢，增强细胞活力，改善机体的结构和功能，提高机体生命力，从而延缓细胞老化，发挥其抗衰老的作用。
(5)龙血竭提取物的美白作用
酪氨酸酶属氧化还原酶，是黑色素合成的主要限速酶，其活性大小决定黑色素形成的数量，目前市场上销售的许多美白、祛斑产品都是以抑制酪氨酸酶活性达到美白作用，故对酪氨酸酶抑制作用的强弱是评价增白化妆品的主要指标。
L-酪氨酸在酪氨酸酶的作用下生成多巴，多巴被酪氨酸酶进一步作用生成多巴醌，最后经过一系列生化过程生成黑色素。其中多巴醌在475nm波长处有最大吸收峰，通过单位时间内，测定其吸光度，间接反应酶的活力大小，经过计算得到酪氨酸酶的抑制率。
实验分为四组，在各组中按照表4中组分用量准确加入磷酸缓冲液、L-酪氨酸酶溶液及待测液，混匀，于37℃保温10min。磷酸盐缓冲液：称取71.63gNa2HPO4·12H2O，用去离子充分溶解定容于1000mL容量瓶中，配制成0.2mol/LNa2HPO4溶液；称取31.20g NaH2PO4·2H2O，用去离子水充分溶解定容于1000mL容量瓶中，配制成0.2mol/LNaH2PO4溶液；两者按照1:1比例混合，配制成pH值为6.8的磷酸盐缓冲液。酪氨酸酶溶液：按照酶活力单位为200U/mL称量一定量的酪氨酸酶，用磷酸盐缓冲液溶解，定容于所需体积的容量瓶中，存于冰箱中备用。其中，在温度为25℃，pH为6.5，波长为280nm时,每分钟引起吸光度下降0.001为一个活力单位(U)。
在A组和C组中加入酪氨酸酶溶液混匀，反应10min，反应结束后立即在475nm出测定四组吸光度值。
表4、测试液组分用量表
计算方法：
待测液：将实验1-实验5制备得到的龙血竭提取物原液分别用无菌水配制含1.0％原液的稀释液。采用无菌水作为空白对照。采用0.1％熊果苷溶液作为对照。
不同实施例制备得到的龙血竭提取物稀释得到的1.0％龙血竭提取液及对照对酪氨酸酶的抑制率如表5所示。
表5、龙血竭提取液酪氨酸酶抑制率
由上述结果可以看出，在化妆品的适宜添加浓度范围内，龙血竭提取液呈现出很好的酪氨酸酶抑制能力，龙血竭提取液是一款优秀的植物天然美白成分。
(6)龙血竭提取物的安全性评价
1)毒理学检测(皮肤刺激性试验)
本实验采用5％龙血竭提取液(分别由实验1-实验5中制备得到的龙血竭提取物原液采用无菌水稀释得到)作为测试品，根据《化妆品卫生规范》2007版要求进行皮肤刺激性试验，实验结果见表6-10所示。
表6、皮肤刺激性试验数据(实验1)
表7、皮肤刺激性试验数据(实验2)
表8、皮肤刺激性试验数据(实验3)
表9、皮肤刺激性试验数据(实验4)
表10、皮肤刺激性试验数据(实验5)
实验数据表明，5％龙血竭提取液未见刺激性反应，顺利通过皮肤刺激性试验，符合要求。
2)人体安全性检测(人体皮肤斑贴试验)
本实验采用5％浓度龙血竭提取液(分别由实验1-实验5中制备得到的龙血竭提取物原液采用无菌水稀释得到)作为测试品，根据《化妆品卫生规范》2007版要求进行皮肤封闭性斑贴试验，参与实验人数为30人，试验数据见表11-15所示。
表11、人体皮肤斑贴试验数据(实验1)
表12、人体皮肤斑贴试验数据(实验2)
表13、人体皮肤斑贴试验数据(实验3)
表14、人体皮肤斑贴试验数据(实验4)
表15、人体皮肤斑贴试验数据(实验5)
实验数据表明，5％龙血竭提取液无人体皮肤不良反应，顺利通过人体皮肤斑贴实验，符合要求。
因此，通过毒理学检测和人体安全性检测，证明龙血竭提取液在适当浓度范围内使用对人体没有刺激及任何不良反应，将龙血竭提取液添加入化妆品中使用是安全可靠的。
实施例2、龙血竭提取物化妆品的制备(水剂状)
一、配方
配方1：龙血竭提取物(实验1)1.0％，去离子水87.5％，NMF-50 5.0％，山梨醇2.0％，尿囊素0.1％，丙三醇4.0％，透明汉生胶0.1％，LGP 0.3％。
配方2：龙血竭提取物(实验2)1.5％，去离子水87％，NMF-50 5.0％，山梨醇2.0％，尿囊素0.1％，丙三醇4.0％，透明汉生胶0.1％，LGP 0.3％。
配方3：龙血竭提取物(实验3)2％，去离子水87％，NMF-50 4.5％，山梨醇2.0％，尿囊素0.1％，丙三醇4.0％，透明汉生胶0.1％，LGP 0.3％。
配方4：龙血竭提取物(实验4)2.5％，去离子水87％，NMF-50 4.5％，山梨醇2.0％，尿囊素0.1％，丙三醇3.5％，透明汉生胶0.1％，LGP 0.3％。
配方5：龙血竭提取物(实验5)3％，去离子水87％，NMF-50 4.5％，山梨醇1.5％，尿囊素0.1％，丙三醇3.5％，透明汉生胶0.1％，LGP 0.3％。
二、制备方法
表16、水剂状龙血竭提取物化妆品的原料配方
如表16所示，将A相所有成分按比例称重，混合，搅拌加热到95℃保温30min后，降温到60℃添加B相，搅拌均匀，灌装即可。
实施例3、龙血竭提取物化妆品的制备(凝胶状)
一、配方
配方1：龙血竭提取物(实验1)1.0％，去离子水88.5％，山梨醇2％，丙三醇4.0％，1，3-丁二醇4.0％，卡伯U20 0.3％，MTI0.15％，NAON 0.05％。
配方2：龙血竭提取物(实验2)1.5％，去离子水88.2％，山梨醇2％，丙三醇3.7％，1，3-丁二醇4.0％，卡伯U20 0.3％，MTI0.2％，NAON 0.1％。
配方3：龙血竭提取物(实验3)2％，去离子水88.2％，山梨醇2％，丙三醇3.7％，1，3-丁二醇3.5％，卡伯U20 0.3％，MTI0.2％，NAON 0.1％。
配方4：龙血竭提取物(实验4)2.5％，去离子水88％，山梨醇2％，丙三醇3.5％，1，3-丁二醇3.3％，卡伯U20 0.3％，MTI0.2％，NAON 0.2％。
配方5：龙血竭提取物(实验5)3％，去离子水88％，山梨醇2％，丙三醇3.3％，1，3-丁二醇3.0％，卡伯U20 0.3％，MTI0.2％，NAON 0.2％。
二、制备方法
表17、凝胶状龙血竭提取物化妆品的原料配方
如表17所示，将A相所有成分按比例称重，混合，搅拌加热到95℃保温30min后，降温到60℃添加B相，搅拌均匀后添加C相，搅拌均匀，抽真空，灌装即可。
实施例4、龙血竭提取物化妆品的制备(膏霜)
一、配方
配方1：龙血竭提取物(实验1)1.0％，去离子水73.6％，丙三醇5.0％，NMF-505.0％，HEC 0.1％，山梨醇2.0％，D-泛醇1.0％,单甘酯2.0％，白油7.0％，DM100 2.0％，混醇1.0％，LGP 0.3％。
配方2：龙血竭提取物(实验2)1.5％，去离子水73％，丙三醇5.5％，NMF-50 4.5％，HEC 0.2％，山梨醇2.0％，D-泛醇1.0％,单甘酯2.0％，白油7.0％，DM100 2.0％，混醇1.0％，LGP 0.3％。
配方3：龙血竭提取物(实验3)2％，去离子水73％，丙三醇5.5％，NMF-50 4.0％，HEC 0.2％，山梨醇2.0％，D-泛醇1.0％,单甘酯2.0％，白油7.0％，DM100 2.0％，混醇1.0％，LGP 0.3％。
配方4：龙血竭提取物(实验4)2.5％，去离子水73％，丙三醇5.0％，NMF-50 4.0％，HEC 0.2％，山梨醇2.0％，D-泛醇1.0％,单甘酯2.0％，白油7.0％，DM100 2.0％，混醇1.0％，LGP 0.3％。
配方5：龙血竭提取物(实验5)3.0％，去离子水73％，丙三醇4.5％，NMF-50 4.0％，HEC 0.2％，山梨醇2.0％，D-泛醇1.0％,单甘酯2.0％，白油7.0％，DM100 2.0％，混醇1.0％，LGP 0.3％。
二、制备方法
表18、膏霜状龙血竭提取物化妆品的原料配方
如表18所示，将A相，B相分别将所有成分按比例称重，混合，搅拌加热到95℃保温30min后，均质30min后搅拌降温到60℃添加C相，搅拌均匀，抽真空，灌装即可。
实施例5、临床试验
(1)上述实施例制得的化妆品，选取18-25岁志愿者192名，随机分为16组，每组12人，连续试用30天(每人均仅使用相应的实施例或对比例化妆品，不再使用其他祛痘产品)，对比分析评价上述各实施例中所制得的化妆品的祛痘效果，结果见表19。
测试区域：脸部长痘处。
评价标准：显效，有效，无效。其中青春痘基本消除判断为显效；部分青春痘消除判断为有效；青春痘没有减少或减少不明显则判断为无效。
对比例1：市售某品牌祛痘化妆品。
表19、各实施例中所制得的龙血竭提取物化妆品的祛痘效果
组别 有效 显效 无效
实施例2(配方1) 3 8 1
实施例2(配方2) 3 9 0
实施例2(配方3) 3 8 1
实施例2(配方4) 3 6 3
实施例2(配方5) 3 5 4
实施例3(配方1) 6 6 0
实施例3(配方2) 5 5 2
实施例3(配方3) 5 5 2
实施例3(配方4) 5 4 3
实施例3(配方5) 4 4 4
实施例4(配方1) 4 7 1
实施例4(配方2) 4 7 1
实施例4(配方3) 4 6 2
实施例4(配方4) 4 6 2
实施例4(配方5) 3 5 4
对比例1 2 4 6
(2)上述实施例制得的化妆品，选取25-55岁的160名人员，随机分为16组，每组10人，连续试用30天(每人均仅使用相应的实施例或对比例化妆品，不再使用其他美白抗氧化产品)，对比分析评价上述各实施例中所制得的化妆品的美白和抗氧化效果。其中，所述的美白和抗氧化效果为皮肤暗陈、色斑、皮肤粗糙等的改善情况，结果见表20。
测试区域：脸部皮肤。
评价标准：通过患者自述感受，及电脑比对皮肤纹理图鉴定皮肤改善程度。有效：肤色提亮，色斑颜色减淡，皮肤细腻度提高。无效：皮肤肤色、色斑及细腻度与试验前无任何变化。
对比例2：市售某品牌美白抗氧化化妆品。
表20、各实施例中所制得的龙血竭提取物化妆品的美白和抗氧化效果
组别 有效 无效
实施例2(配方1) 10 0
实施例2(配方2) 9 1
实施例2(配方3) 9 1
实施例2(配方4) 8 2
实施例2(配方5) 7 3
实施例3(配方1) 10 0
实施例3(配方2) 9 1
实施例3(配方3) 9 1
实施例3(配方4) 9 1
实施例3(配方5) 8 2
实施例4(配方1) 10 0
实施例4(配方2) 10 0
实施例4(配方3) 9 1
实施例4(配方4) 8 2
实施例4(配方5) 7 3
对比例2 4 6

Claims (8)

1.一种龙血竭提取物化妆品，其特征在于：它包括龙血竭提取物：所述龙血竭提取物的制备方法如下：采用有机溶剂对龙血竭进行提取，所得提取液即为所述龙血竭提取物；所述有机溶剂为多元醇或白油。
2.根据权利要求1所述的化妆品，其特征在于：所述多元醇为1-2-丙二醇、1,3-丙二醇、1,3-丁二醇和丙三醇中的任一种。
3.根据权利要求1或2所述的化妆品，其特征在于：所述白油为牌号为15#或26#的白油。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的化妆品，其特征在于：所述提取为浸渍提取或回流提取。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的化妆品，其特征在于：每1g所述龙血竭中加入1～1000g所述有机溶剂；和/或，
所述提取的温度为25～180℃，每次提取的时间为10～1440分钟；和/或，
所述提取的次数为1～3次。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的化妆品，其特征在于：所述化妆品由所述龙血竭提取物和化妆品基料组成；所述龙血竭提取物化妆品中，所述龙血竭提取物的质量百分含量为0.0001～10.0％。
7.权利要求1-6中任一项所述的龙血竭提取物化妆品的制备方法，它包括如下步骤：将所述龙血竭提取物与化妆品基料混合，即可得到所述龙血竭提取物化妆品。
8.权利要求1-6中任一项所述的化妆品在作为具有下述1)-8)中的至少一种功能的化妆品中的应用：
1)抑制痤疮致病菌；
2)祛痘；
3)清除DPPH自由基；
4)清除ABTS自由基；
5)抗氧化；
6)抗衰老；
7)抑制酪氨酸酶的活性；
8)美白。
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