CN106480113A - 一种有机酸类的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种有机酸类的制备方法，具有以下的工序A～C、由葡萄糖制备L-酒石酸或其盐、和/或乙醇酸或其盐的步骤：(A)通过将由葡萄糖生产5-酮-D-葡萄糖酸的微生物，在能够使5-酮-D-葡萄糖酸形成水溶性盐的碱的存在下，用含有葡萄糖的培养液培养，得到含有5-酮-D-葡萄糖酸的水溶性盐的培养液的工序A；(B)通过将工序A中得到的含有5-酮-D-葡萄糖酸的水溶性盐的培养液的pH调整并维持在7～12的范围内，得到5-酮-D-葡萄糖酸的水溶性盐转换为L-酒石酸或其盐、和/或乙醇酸或其盐的反应液的工序B；(C)由工序B中得到的反应液，提取L-酒石酸或其盐、和/或乙醇酸或其盐的工序C。本发明非常有效且低成本，可以用于工业上的制备中，实用性极高。

Description

一种有机酸类的制备方法

技术领域

本发明涉及有机酸领域，具体为一种有机酸的制备方法。

背景技术

目前L-酒石酸或其盐，在食品领域中用作酸味剂、pH 调整剂，在工业领域中用作化妆品、染色、洗剂、镀层，在药品领域中用作药品原料等，为在产业界广泛利用的有用的物质。此外，由葡萄糖制备L- 酒石酸时，与L- 酒石酸同时生产的乙醇酸为用作金属洗涤剂、镀层添加剂、化妆品添加物、硬质类生物分解性聚合物的原料等的有用的物质。作为L-酒石酸的制备方法，已知各种方法，但是现在由葡萄酒酿造的残渣以及来源于石油的中间体马来酸酐来制备。此外，乙醇酸通过石油化学上的方法制备。另一方面，使用葡萄糖作为起始原料，经过5- 酮葡萄糖酸，制备酒石酸和乙醇酸的方法尚为研究阶段，过去进行了各种研究。作为由葡萄糖转换为5- 酮-D- 葡萄糖酸的方法，报道了使用属于葡糖杆菌属或醋酸杆菌属的醋酸菌，由葡萄糖经过葡萄糖酸发酵生成5-酮-D-葡萄糖酸的方法。在5-酮-D-葡萄糖酸的实际的发酵生成中，已知利用碳酸钙作为中和剂或使用氢氧化钙进行pH 控制，将5-酮-D-葡萄糖酸以水难溶性的5-酮-D-葡萄糖酸的钙盐的方式析出，将该5-酮-D-葡萄糖酸的钙盐由发酵液回收的方法。

此外已知，属于葡糖杆菌属或醋酸杆菌属的很多醋酸菌，由葡萄糖经过葡萄糖酸生成5- 酮-D- 葡萄糖酸的同时，也由上述葡萄糖酸同时生成2- 酮-D- 葡萄糖酸。该2- 酮-D- 葡萄糖酸不能形成L- 酒石酸、乙醇酸，因此导致5- 酮-D- 葡萄糖酸的收获量降低。因此，通过诱导2- 酮-D- 葡萄糖酸非生产菌株，实现5- 酮-D- 葡萄糖酸的收率的升高。但是，很多醋酸菌，不仅具有由葡萄糖经过葡萄糖酸生成5- 酮葡萄糖酸的酶，而且在细胞质内具有由5- 酮-D- 葡萄糖酸转换为葡萄糖酸的5- 酮-D- 葡萄糖酸还原酶。已知所还原的葡萄糖酸由于戊糖·磷酸途径以及恩特纳·杜多罗夫途径等代谢途径而消耗，成为L- 酒石酸和乙醇酸的原料的5- 酮-D- 葡萄糖酸的生成量降低。

另一方面，存在关于由5- 酮-D- 葡萄糖酸制备酒石酸的报告。现有技术报告了使用水难溶性的5- 酮-D- 葡萄糖酸钙盐作为起始原料，使其首先与碳酸钠接触转换为水溶性的5- 酮-D- 葡萄糖酸钠盐，然后在1 摩尔氢氧化钠溶液中进行反应，以约10％的收获量得到酒石酸。该制备方法中，由于产生副产物水难溶性的碳酸钙，在将5- 酮-D- 葡萄糖酸转换为酒石酸之前，有必要预先从反应液除去碳酸钙。此外，所除去的碳酸钙有必要作为废弃物进行处理，因此导致本制备方法的成本高。此外，根据本制备方法，存在酒石酸的收获量低，约为10％，以及除了酒石酸之外产生大量副产物不需要的有机酸，因此有必要将它们分离等问题，不能用于工业上的酒石酸的制备中。

作为进一步改善酒石酸的收获量的方法，报道了使5-酮-D-葡萄糖酸在碱条件下，在含有碳酸离子或磷酸离子的缓冲液中与贵金属催化剂氧化性地接触，由此以高收获量生产酒石酸的制备方法。进一步报道了在这种条件下，若使用钒酸作为催化剂则以进一步高的收获量生产酒石酸。但是，在这些制备方法中存在使用碳酸等昂贵的缓冲剂作为制备材料以及由于使用对于人表现出毒性的钒酸作为催化剂而必需高昂的纯化成本等缺点。

进一步随后报道了，在碱条件下，使5- 酮-D- 葡萄糖酸与铂等稀有金属碳催化剂在水溶液、碳酸、磷酸、焦磷酸或硫酸缓冲液中接触，由此以61％收获量生产酒石酸的制备方法。但是，该制备方法中，由于使用碳酸缓冲液作为溶液，导致酒石酸生产中的成本高。

如以上所述，基于以往的知识，考虑由葡萄糖制备酒石酸的方法时，该制备方法由以下工序组成：由葡萄糖通过微生物发酵生成5- 酮-D- 葡萄糖酸的钙盐，分离5- 酮-D- 葡萄糖酸钙盐的工序，将所得到的水难溶性的5- 酮-D- 葡萄糖酸钙盐转换为水溶性的盐的工序，进而将水溶性的5- 酮-D- 葡萄糖酸盐化学上转换为酒石酸的工序。但是，该制备方法中存在工序多、此外操作花费工夫的缺点，因此必需高昂的制备成本。所以至今认为在工业上不能实现由上述工序组成的酒石酸的制备方法。

作为弥补上述缺点的方法，报道了在最初的工序的利用醋酸菌由葡萄糖转换为5- 酮-D- 葡萄糖酸的培养基中，添加接下来的反应工序( 将5- 酮-D- 葡萄糖酸盐转换为酒石酸的工序) 所必需的钒酸催化剂的酒石酸的制备方法。该制备方法中，由1000g 的葡萄糖仅得到43g( 取得收率5.2 重量％ ) 的少量的酒石酸。如此，该制备方法的收获量由于非常低，该制备方法不能用于工业上的酒石酸的制备中。

另一方面，对于通过化学反应，由5- 酮-D- 葡萄糖酸制备乙醇酸的方法，至今仅已知一个报告，在反应液中除了乙醇酸之外还产生大量副产物低分子的有机酸，由796g/L 的5- 酮-D- 葡萄糖酸仅生产11.6g/L 的少量的乙醇酸。如此，由于该制备方法的收获量非常低，该制备方法不能用于工业上的乙醇酸的制备中。

发明内容

针对上述现有技术的缺点，本发明提供能够由葡萄糖有效且低成本地制备L- 酒石酸或其盐、和/ 或乙醇酸或其盐的、能够用于工业上的制备中的实用性高的方法。

本发明解决上述技术问题采用以下技术方案：一种有机酸类的制备方法，具有以下的工序A ～ C、由葡萄糖制备L- 酒石酸或其盐、和/或乙醇酸或其盐的步骤，

(A) 通过将由葡萄糖生产5- 酮-D- 葡萄糖酸的微生物，在能够使5- 酮-D- 葡萄糖酸形成水溶性盐的碱的存在下，用含有葡萄糖的培养液培养，得到含有5- 酮-D- 葡萄糖酸的水溶性盐的培养液的工序A；

(B) 通过将工序A 中得到的含有5- 酮-D- 葡萄糖酸的水溶性盐的培养液的pH 调整并维持在7 ～ 12 的范围内，得到5- 酮-D- 葡萄糖酸的水溶性盐转换为L- 酒石酸或其盐、和/或乙醇酸或其盐的反应液的工序B；

(C) 由工序B 中得到的反应液，提取L- 酒石酸或其盐、和/ 或乙醇酸或其盐的工序C。

作为优选，使用在所述工序B 中的培养液中进一步含有过渡金属催化剂的培养液。

作为优选，过渡金属催化剂为选自由钯、铑、钌、铂、锰、铜、钴、镍、锌、钒和铁组成的组中的1 种或2 种以上的过渡金属催化剂。

作为优选，过渡金属催化剂的浓度为0.00002 ～2％。

作为优选，过渡金属催化剂的浓度为0.0001 ～ 1％。

作为优选，由葡萄糖生产5- 酮-D- 葡萄糖酸的微生物为属于葡糖杆菌属或醋酸杆菌属的微生物。

作为优选，将所述工序B 中的培养液的pH 调整并维持在8 ～ 11 的范围内。

作为优选，将所述工序B 中的培养液pH 调整并维持在9 ～ 10 的范围内。

作为优选，所述工序B 中，调整并维持培养液的pH 时，进一步将培养液的温度调整并维持在0℃～ 70℃的范围内。

作为优选，所述工序B 中，调整并维持培养液的pH 时，进一步将培养液的温度调整并维持在20℃～ 60℃的范围内。

本发明与现有技术相比具有如下优点：根据本发明，可以由葡萄糖非常有效且低成本地制备L- 酒石酸或其盐、和/ 或乙醇酸或其盐。因此，本发明的制备方法，可以用于工业上的制备中，实用性极高。

具体实施方式

为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

作为本发明的“由葡萄糖制备L- 酒石酸或其盐、和/ 或乙醇酸或其盐的方法”，只要具有通过将由葡萄糖生产5- 酮-D- 葡萄糖酸的微生物，在能够使5- 酮-D- 葡萄糖酸形成水溶性盐的碱的存在下，用含有葡萄糖的培养液培养，得到含有5- 酮-D- 葡萄糖酸的水溶性盐的培养液的工序A ；通过将工序A 中得到的含有5- 酮-D- 葡萄糖酸的水溶性盐的培养液的pH 调整并维持在7 ～ 12 的范围内，得到5- 酮-D- 葡萄糖酸的水溶性盐转换为L- 酒石酸或其盐、和/ 或乙醇酸或其盐的反应液的工序B ；以及由工序B 中得到的反应液，提取L- 酒石酸或其盐、和/ 或乙醇酸或其盐的工序C，则不特别限定。通过具有这一系列工序A ～ C，可以由葡萄糖非常有效且低成本地制备L- 酒石酸或其盐、和/ 或乙醇酸或其盐( 以下将“L- 酒石酸或其盐、和/ 或乙醇酸或其盐”仅表示为“L- 酒石酸等”。)。特别是虽然得到含有5- 酮-D- 葡萄糖酸的水溶性盐的培养液( 上述工序A)，但是不由该培养液分离纯化5- 酮-D- 葡萄糖酸，而直接如上述B 所述，通过转换为L- 酒石酸等，L- 酒石酸等的制备效率显著提高，此外，随之制备L- 酒石酸等所需的成本显著降低。

实施例1：（2-酮-D-葡萄糖酸非生产菌及5-酮-D-葡萄糖酸非消耗变异菌株的取得）

为了制备来源于氧化葡糖杆菌NBRC 3172 菌株的2- 酮-D- 葡萄糖酸非生产菌株，对于NBRC 3172 菌株进行NTG 变异处理，尝试进行2- 酮-D- 葡萄糖酸非生产菌的筛选。具体地说，用以下的方法进行。

将MA 琼脂培养基[2.5％甘露醇、0.5％酵母萃取物、0.2％蛋白胨、1.5％琼脂(无pH 调整)] 中生长的氧化葡糖杆菌NBRC 3172 菌株，以1 铂圈接种到加入有在121℃下用20 分钟高压釜杀菌的30mL 的MA 培养基的300mL 容量三角烧瓶中后，30℃下以每1 分钟220 转振荡培养19 小时，由该培养液通过离心分离无菌性地取得细胞。将所得到的细胞用0.85％灭菌生理盐水洗涤1 次后，悬浮在灭菌生理盐水中。向灭菌的试验管中依次分注Tris 盐酸缓冲液(pH ＝ 8.0、终浓度＝ 50mM) 和洗涤细胞悬浮液后，加入2000μg/mL 浓度的NTG 溶液形成5mL 以使终浓度分别为0、50、100、200、300μg/mL。将这些试验管以30℃、每分钟250 转往复振荡30 分钟，由此进行变异处理。将试验管中的反应液用灭菌生理盐水洗涤2 次后，再悬浮。将该悬浮液阶段性地稀释至107 倍，将各稀释液涂布在MA 琼脂培养基上，用30℃的恒温机培养3 ～ 5 天。由生长的菌落随机地将2600 个菌落选出到相同的琼脂培养基中，使用30℃下培养1 ～ 2 天的菌体进行筛选。在分注了含有100μL 的2％葡萄糖酸钠的50mM 磷酸钾缓冲液(pH ＝ 6.0) 的96 孔板中悬浮1 铂圈的菌体，室温下振荡1 天进行休止菌体反应。将该反应上清1μL 点样到Silica gel TLC上，用正丁醇- 乙酸- 水(3 ∶ 2 ∶ 1) 展开，接着风干后喷雾碱性四唑蓝试剂后，100℃下加热显色，目视判定2- 酮-D- 葡萄糖酸与5- 酮-D- 葡萄糖酸的生成比。

结果，亲本菌株的氧化葡糖杆菌NBRC 3172 菌株以大致1 ∶ 1 的比率生成2- 酮-D- 葡萄糖酸与5- 酮-D- 葡萄糖酸，与此相对地，得到7 株主要仅生成5- 酮-D- 葡萄糖酸、几乎不生成2- 酮-D- 葡萄糖酸的菌株(2- 酮-D- 葡萄糖酸非生产性菌株)。进一步地，对于所得到的7 株的2- 酮-D- 葡萄糖酸非生产菌株中的1 株的氧化葡糖杆菌TABT-200 菌株，通过与上述相同的方法进行NTG 变异处理，尝试5- 酮-D- 葡萄糖酸非消耗变异菌株的筛选。将NTG 处理后得到的1600 个菌落选出到琼脂培养基中，使用30℃下生长的菌体。在分注了含有75μL 的0.3％的5- 酮-D- 葡萄糖酸的100mM 磷酸钾缓冲液(pH ＝ 6.0) 的96 孔板中悬浮1 铂圈的菌体，同样地进行菌体反应。反应后，将上清15μL 取到平底的96 孔板中，加入对于5- 酮-D- 葡萄糖酸特异性地显色为粉红色的1- 甲基-1- 苯基肼溶液，95℃下加热60 分钟进行显色反应，目视调查5- 酮-D- 葡萄糖酸的消耗。结果得到3 株除了具有2- 酮-D- 葡萄糖酸非生产性之外、而且完全不消耗5- 酮-D- 葡萄糖酸的变异菌株。这些变异菌株由于为2- 酮-D- 葡萄糖酸非生产性且为5- 酮-D- 葡萄糖酸非消耗性，因此认为由葡萄糖的5- 酮-D- 葡萄糖酸生产性提高。所得到的3 株中的1 株的氧化葡糖杆菌TADK-267 菌株用于以后的实验中。

实施例2：(由葡萄糖制备酒石酸及乙醇酸(添加过渡金属催化剂))

将上述实施例1 中得到的氧化葡糖杆菌TADK-267 菌株接种到加入有在121℃下加热杀菌20 分钟的5mL 的MB 培养基[2.5％甘露醇、0.5 酵母萃取物、0.3％蛋白胨]的试验管3 根中，28℃下以250转往复振荡培养17 小时。将这3 根试验管中的培养液合并作为种培养液。本培养如下进行，在1L 的发酵槽中，加入含有6％葡萄糖、0.09％氯化铵、0.06％磷酸二氢钾、0.18％玉米浆干粉、0.1％酵母萃取物、0.015％硫酸镁7 水盐、0.0029％硫酸锰5 水盐、0.12％氯化钙的培养基500mL，同样地加热杀菌后，接种上述种培养液10mL 开始本培养。用6M 氢氧化钾溶液将pH 调整为5.5 以上的同时，以30℃、1vvm、800转进行通气搅拌培养，将培养液用1M 盐酸溶液稀释51 倍后，进行离心上清的HPLC 分析经时性地定量产物。在培养开始后第50 小时，培养液中的葡萄糖完全消耗，在培养液中残留2.2g/L 的葡萄糖酸，但是生成70.5g/L 的5- 酮-D- 葡萄糖酸。向该培养液中添加6M 氢氧化钾溶液将培养液的pH 升高到9.6 后，直接添加该氢氧化钾溶液将培养液的pH 维持在9.6以上的同时，继续通气搅拌直至第144 小时后，生成12.1g/L 的酒石酸和6.0g/L 的葡萄糖酸。若考虑到由于蒸发及添加氢氧化钾溶液所导致的液量变化，以及由于中途中取样所导致的液量减少份来进行计算，则由葡萄糖的酒石酸的摩尔收率为23.0％，由葡萄糖的乙醇酸的摩尔收率为22.5％。

实施例3：（由葡萄糖制备酒石酸和乙醇酸(添加钯碳)）

与上述实施例2同样地将氧化葡糖杆菌TADK-267 使用发酵槽培养50 小时后，葡萄糖完全消耗，残留2.8g/L 的葡萄糖酸，但是在溶液中生成67.4g/L 的5- 酮-D- 葡萄糖酸。向该培养液中添加6M 氢氧化钾溶液将培养液的pH 升高到9.6 后，添加10g 的钯活性碳(10％)，之后添加氢氧化钾溶液将pH 维持在9.6 以上的同时，继续通气搅拌直至第144小时后，得到含有31.9g/L的酒石酸和15.9g/L 的乙醇酸的反应液。若考虑到由于蒸发及添加氢氧化钾溶液所导致的液量变化，以及由于中途中取样所导致的液量减少份来进行计算，则由葡萄糖的酒石酸的摩尔收率为61％，由葡萄糖的乙醇酸的摩尔收率为60％。

实施例4：（酒石酸和乙醇酸的提取）

将上述实施例3 中得到的反应液总量与发酵槽的洗液一起以5000 转进行离心处理，分离菌体残渣、钯碳等不溶性馏分后，用约100mL 的水洗涤一次，合并离心上清，由635mL 的溶液进行纯化。通过HPLC 分析确认，在所得到的溶液中含有13.1g 的酒石酸和5.9g 的乙醇酸。向上述所得到的该溶液中缓慢加入浓盐酸将pH 降低至3.7 后，生成沉淀，因此5℃下放置一晚后进行离心处理，分离为沉淀和上清。沉淀中含有酒石酸，上清中含有乙醇酸。沉淀含有微细的钯碳、稍微灰色，但是通过HPLC 分析确认，酒石酸的峰面积值占总面积值的94％。将该沉淀悬浮在水中，缓慢地加入氢氧化钾溶液进行溶解后，用1M 盐酸缓慢地将pH 降低至3.7 进行重结晶，以白色粉末的形式得到酒石酸一钾14.1g。然后对于所提取的酒石酸，通过以下所述的酶学上的方法进行检测。作为标准物质，分别正确地称量L- 酒石酸、D- 酒石酸和内消旋酒石酸，制备0、2.5、5、7.5mM 溶液。向安装在样品侧的微量吸收池中加入20mM 氯化锰、2mM 二硫苏糖醇、15mM 氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、5单位的D-苹果酸脱氢酶、60mM 甘氨酰甘氨酸缓冲液(用氢氧化钾将pH 调整为9.0) 以及上述制备的含有各浓度的L- 酒石酸、D- 酒石酸或内消旋酒石酸的混合液( 总量150μL)，此外向安装在对照侧的微量吸收池中加入150μL 的水，使用UV2200 分光光度计在340mm 的波长下测定50 分钟的吸光度的增加。结果，对于L- 酒石酸，7.5mM 的浓度下表现出3.75 的吸光度的增加，将0、2.5、5、7.5mM 溶液的各吸光度的增加作为纵轴，将L- 酒石酸的浓度作为横轴进行绘图后可知，对于所有的L- 酒石酸标准溶液，绘制在通过原点的直线上。与此相对地，对于D- 酒石酸，所有浓度下完全未发现吸光度的增加，此外对于高浓度的内消旋酒石酸，发现吸光度稍微增加，但是若与L- 酒石酸的吸光度的增加相比则为可以无视的程度的增加。因此，所提取的酒石酸认为为酒石酸一钾，正确地称量制备5mM 的溶液，通过与上述相同的方法测定吸光度的增加。结果，吸光度的增加表现为2.45，由L- 酒石酸的标准曲线判明，所得到的酒石酸为纯度99.7％的L- 酒石酸。

将离心分离得到的含有乙醇酸的上清约630mL 用5M 氢氧化钠将pH 调整为7.0 后，通过1000mL的CG400阴离子交换树脂的色谱柱。该色谱柱用1000mL 的20mM 甲酸钠溶液洗涤后，流通200mM 甲酸钠溶液，将该洗脱液每10mL 分馏。对分馏的馏分进行HPLC 分析，收集具有表现出与乙醇酸标准液相同的保留时间的峰的馏分序号54 ～ 205 的洗脱馏分。为了由该洗脱液除去钠离子等阳离子，通过2000mL 的50W×8阳离子交换树脂(OH-型) 的色谱柱后，进一步用500mL 的去离子水洗涤。将该非吸附馏分和洗液一起收集，用2mM 氨溶液将pH 调整为7.0 后，将该中和溶液在35℃下减压浓缩除去甲酸铵。进一步在真空减压下干燥一晚，得到4.7g 的乙醇酸铵的白色粉末。将该粉末的一部分溶解在水中，使LCMS-2010A 液相色谱质量分析仪与色谱柱连接，在含有0.1％甲酸的乙腈/0.1％甲酸水溶液的溶剂***中，将含有0.1％甲酸的乙腈从0％直线性地增加至50％，以每1 分钟0.3mL 的流速流通28 分钟，进行210nm 的波长下的液相色谱、所检出的峰的紫外线吸收光谱及阴离子质谱、质量色谱测定。结果，在提取的物质中，用液相色谱在10.2 分钟检出峰，该峰与标准品的乙醇酸的保留时间，紫外线吸收光谱，以m/z ＝ 75.05、121.05 为特征的阴离子质谱，及它们的阴离子的质量色谱一致。结果鉴定所提取的物质为乙醇酸。

实施例5：（钯碳的再利用）

在含有1％的5- 酮-D- 葡萄糖酸钾盐的5mL 的0.45M 碳酸钠缓冲液(pH9.55) 中添加40mg 的钯碳，振荡9 天。结果生成4g/L 的L- 酒石酸和1g/L 的乙醇酸，残留0.7g/L的5- 酮-D- 葡萄糖酸。将该3.5mL 的反应液离心而回收钯碳，加入0.5M 的相同碳酸钠缓冲液3.15mL 和0.10％的5- 酮-D- 葡萄糖酸钾35mL，振荡7 天后，生成5g/L 的L- 酒石酸和1.2g/L 的乙醇酸，残留2.1g/L 的5- 酮-D- 葡萄糖酸。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征及本发明的优点，本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内，本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (10)

1.一种有机酸类的制备方法，其特征在于：具有以下的工序A ～ C、由葡萄糖制备L- 酒石酸或其盐、和/或乙醇酸或其盐的步骤，

(A) 通过将由葡萄糖生产5- 酮-D- 葡萄糖酸的微生物，在能够使5- 酮-D- 葡萄糖酸形成水溶性盐的碱的存在下，用含有葡萄糖的培养液培养，得到含有5- 酮-D- 葡萄糖酸的水溶性盐的培养液的工序A；

(B) 通过将工序A 中得到的含有5- 酮-D- 葡萄糖酸的水溶性盐的培养液的pH 调整并维持在7 ～ 12 的范围内，得到5- 酮-D- 葡萄糖酸的水溶性盐转换为L- 酒石酸或其盐、和/或乙醇酸或其盐的反应液的工序B；

(C) 由工序B 中得到的反应液，提取L- 酒石酸或其盐、和/ 或乙醇酸或其盐的工序C。

2.如权利要求1 所述的方法，其特征在于，使用在所述工序B 中的培养液中进一步含有过渡金属催化剂的培养液。

3.如权利要求2 所述的方法，其特征在于，过渡金属催化剂为选自由钯、铑、钌、铂、锰、铜、钴、镍、锌、钒和铁组成的组中的1 种或2 种以上的过渡金属催化剂。

4.如权利要求2 或3 所述的方法，其特征在于，过渡金属催化剂的浓度为0.00002 ～2％。

5.如权利要求2 ～ 4 中任意一项所述的方法，其特征在于，过渡金属催化剂的浓度为0.0001 ～ 1％。

6.如权利要求1 ～ 5 中任意一项所述的方法，其特征在于，由葡萄糖生产5- 酮-D- 葡萄糖酸的微生物为属于葡糖杆菌属或醋酸杆菌属的微生物。

7.如权利要求1 ～ 6 中任意一项所述的方法，其特征在于，将所述工序B 中的培养液的pH 调整并维持在8 ～ 11 的范围内。

8.如权利要求1 ～7 中任意一项所述的方法，其特征在于，将所述工序B 中的培养液pH 调整并维持在9 ～ 10 的范围内。

9.如权利要求1 ～ 8 中任意一项所述的方法，其特征在于，所述工序B 中，调整并维持培养液的pH 时，进一步将培养液的温度调整并维持在0℃～ 70℃的范围内。

10.如权利要求1 ～ 9 中任意一项所述的方法，其特征在于，所述工序B 中，调整并维持培养液的pH 时，进一步将培养液的温度调整并维持在20℃～ 60℃的范围内。