JP2594167B2 - 新規抗生物質sf2698物質およびその製造法 - Google Patents

新規抗生物質sf2698物質およびその製造法

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Description

【発明の詳細な説明】 (産業上の利用分野) 本発明は、真菌感染症の治療薬としての有用性などが
期待される新規抗生物質SF2698物質およびその製造法に
関する。
(従来の技術) 従来、微生物の生産する抗生物質は数多く知られてい
るが、本発明による抗生物質SF2698物質と物理化学的性
状が一致する化合物は知られていない。
(発明が解決しようとする課題) 従来、微生物が生産する種々の抗生物質が知られてお
り、医薬品、動物薬、農薬等の分野で実用化されてい
る。しかしながら特に抗真菌剤の分野では、安全性や有
効性のより優れた新規な抗生物質の出現が常に求められ
ている。本発明者らは、新規な抗真菌活性を有する抗生
物質を提供するとともに、その製造法を確立することに
よって、これを解決しようとするものである。
(課題を解決するための手段) 本発明者らは、上述の期待にこたえるべく、抗真菌活
性を有する物質の探索を続けていたところ、ストレプト
マイセス属に属するある菌株の培養物中に合成培地にお
いて抗真菌活性を有する物質が生産されていることを見
出し、有効物質を単離し、その物理化学的性状を確定す
ることにより本発明を完成した。
すなわち、本発明の第一の要旨は、新規抗生物質SF26
98物質に関する発明であってSF2698物質は下記の物理化
学的特性を有する。
1.SF2698物質の塩酸塩の物理化学的性質 1)色および形状:無色結晶 2)融点:明確な融点を示さず250℃以上で分解する 3)分子式:C6H8N2O2 4)マススペクトル(HR−MS): 計算値 m/z 140.0585(C6H8N2O2) 実測値 m/z 140.0587(M+) 5)比旋光度:▲[α]25 D▼ −50゜(C1.0,水) 6)紫外部及び可視部吸収スペクトル λmax nm(ε)[MeOH]:218(9000),255(肩) 7)赤外線吸収スペクトル 第1図に示す 8)1H NMRスペクトル(400MHz,D2O) δ(ppm):7.02(1H,dt),6.23(1H,dt),4.18(1H,
t),2.92(1H,m) 2.78(1H,m) 9)13C NMRスペクトル(100MHz,D2O) δ(ppm):177.8s,159.1s,146.9d,117.3d,53.4d,27.8t 10)溶解性:水、メタノールに可溶、酢酸エチルなどの
有機溶媒には不溶である。
11)呈色反応:グリーク・リーバック(GL)試薬、ペン
タシアノアクオフェリエト試薬陽性、ニンヒドリン試薬
で黄色を呈する 12)薄層クロマトグラフィー(TLC):シリカゲルガラ
スプレート(5715メルク社製)を用い、展開溶媒として
ブタノール−メタノール−水(2:1:1)の混液を用いる
とRf0.29のスポットを与える。
以上の物理化学的性質および機器分析の結果からSF26
98物質はこれまで報告されていない新規化合物と判断さ
れ、その構造式は下記に示すとおりである。
又、条件により、次のような構造式をとりうる。
またSF2698物質は両性物質であるので、公知の方法に
より塩酸塩、硫酸塩あるいはトリフルオロ酢酸塩のよう
な無機酸あるいは有機酸との塩、またはナトリウム塩、
カリウム塩、エタノールアミン塩などの無機あるいは有
機塩基との塩を形成させることが可能である。
本発明の第二の要旨は、ストレプトマイセス属に属す
るSF2698物質生産菌を培養し、その培養物からSF2698物
質を採取することを特徴とする該抗生物質の製造法にあ
る。
本発明に使用される抗生物質SF2698生産菌の一例とし
ては、静岡県の土壌から分離されたSF2698株がある。
SF2698株の菌学的性状は下記の通りである。
I.形態 基生菌糸は長く伸長し、よく分岐し、通常の条件下で
は分断しない。気菌糸はスターチ寒天、グルコース・ア
スパラギン寒天等で豊富に着生し胞子形成も良好であ
る。気菌糸の分岐は比較的少なく、車軸分岐は見られな
い。気菌糸先端の胞子連鎖は直線状である。電子顕微鏡
による観察では、胞子は楕円型〜円筒型で、0.6〜1.0×
0.9〜1.4μmの大きさを有し、表面は平滑で通常30〜50
個位連鎖する。胞子のう、運動性胞子、菌核などは観察
されていない。
II.各種培地上の生育状態 SF2698株の各種培地上の生育状態は次表に示す通りで
ある。
色の記載について( )内に示す標準はコンテイナー
・コーポレーション・オブ・アメリカ(Container Corp
oration of America)社製の「カラー・ハーモニィ・マ
ニアル(Color Harmony Manual)」に記載のものを用い
た。観察は28℃で14〜21日培養後に行った。
III.生理的性質 (1)生育温度範囲:イースト・スターチ寒天において
15〜33℃の温度範囲で生育し、25〜30℃付近で良好に生
育する。
(2)ゼラチンの液化:陰性 (3)スターチの加水分解:陰性 (4)硝酸塩の還元:陽性 (5)脱脂乳のペプトン化:陰性 脱脂乳の凝固:陰性 (6)耐塩性:5%NaCl含有培地では生育するが、7%以
上では殆ど生育しない。
(7)メラニン様色素の生成:陽性(ペプトン・イース
ト・鉄寒天培地) IV.炭素源の利用性(ISP−9培地使用) (1)利用する:D−グルコース、D−フラクトース、グ
リセロール、D−マンニトール、ラフィノース (2)利用しない:L−アラビノース、L−ラムノース、
シュクロース (3)利用が疑わしい:D−キシロース、myo−イノシト
ール V.菌体分析 ベッカー(Becker)らの方法(Appl.Microbiol.13:23
6,1965)により分析した結果、全菌体加水分解物中のジ
アミノピメリン酸はLL型であった。
以上の性状より、SF2698株は放線菌の中でストレプト
マイセス属に属し、気菌糸色調は“Yellow"シリーズ、
気菌糸先端は直線状で、胞子表面は平滑状、裏面色調は
淡黄色〜黄褐色で、顕著な可溶性色素を生産しない菌株
と要約される。本発明者らはSF2698株をストレプトマイ
セス・エスピー・SF2698(Streptomycessp.SF2698)と
命名した。なお、本菌株は工業技術院微生物工業技術研
究所に、微工研菌寄第11235号(FERM P−11235)とし
て受託されている。
SF2698株は他の放線菌に見られるように、その性状が
変化しやすい。例えば、SF2698株の、またはこの株に由
来する突然変異株(自然発生または誘発性)、形質接合
体または遺伝子組換え体であっても、抗生物質SF2698を
生産するものは全て本発明に使用出来る。本発明の方法
では、前記の菌を通常の微生物が利用しうる栄養物を含
有する培地で培養する。栄養源として、従来放線菌の培
養に利用されている公知のものが使用できる。例えば、
炭素源として、グルコース、水あめ、デキストリン、澱
粉、糖みつ、動・植物油等を使用しうる。まな窒素源と
して、大豆粕、小麦胚芽、コーンスティープリカー、綿
実粕、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、硫酸アンモニ
ウム、硝酸ソーダ、尿素等を使用しうる。その他、必要
に応じ、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシ
ウム、コバルト、塩素、燐酸、硫酸、およびその他のイ
オンを生成することができる無機塩類を添加することは
有効である。また菌の発育を助け、抗生物質SF2698の生
産を促進するような有機および無機物を適当に添加する
ことができる。
培養法としては、好気的条件での培養法、特に深部培
養法が最も適している。培養に適当な温度は25〜30℃で
あるが、多くの場合、28℃付近で培養する。新抗生物質
SF2698の生産は培地や培養条件により異なるが、振盪培
養、タンク培養のいずれにおいても通常2〜7日の間で
その蓄積が最高に達する。培養中の新抗生物質SF2698の
蓄積量が最高になった時に培養を停止し、培養液から目
的物質を単離精製する。
本発明によって得られる抗生物質SF2698物質の培養物
からの採取に当たっては、その性状を利用した通常の分
離手段、例えば、イオン交換樹脂法、吸着または分配カ
ラムクロマト法、ゲル濾過法、透析法、沈澱法等を単独
でまたは適宜組み合わせて抽出精製することができる。
例えば、培養中に蓄積されたSF2698物質は強酸性イオン
交換樹脂であるダイヤイオンPK−208(三菱化成工業社
製)等に吸着される。また、活性炭等の吸着剤を用いる
クロマトグラフィーにより効果的に精製される。SF2698
物質をさらに精製するには、シリカゲル(ワコーゲル
C−200、和光純薬工業社製等)、アルミナ等の吸着剤
やセファデックスG−10(ファルマシア社製)等を用い
るクロマトグラフィーを行うとよい。
(発明の効果) 本発明の新規抗生物質SF2698物質は後述の試験例の通
り、抗真菌活性を有しており、たとえば人および動物の
真菌感染症にたいする治療に用いることが可能であり抗
真菌剤としての有用性が期待される。この治療用には、
公知の製剤化技術に従って種々の剤形の医療組成物に処
方して用いることができる。またSF2698物質は医療品な
どの合成中間体としても利用することができる。以下に
試験例および実施例を挙げて更に具体的に本発明を説明
する。
試験例 各被験者に対する実施例で得たSF2698物質の最小発育
阻止濃度を求め第一表に示した。
第一表から明らかなようにSF2698物質はある種の真菌
に対し抗菌力を示す。
以下に本発明の実施例を示すが、SF2698物質の性状が
本発明によって明らかにされたので、それらの性状にも
とずきSF2698物質の製造法を種々考案することができ
る。従って本発明は実施例に限定されるものではなく、
実施例の修飾手段は勿論、本発明によって明らかにされ
たSF2698物質の性状にもとずいて公知の手段を施してSF
2698物質を生産、濃縮、抽出、精製する方法をすべて包
括する。
以上に本発明の実施例を示すが、これらは単なる一例
であって本発明を限定するものではない。ここに例示し
なかった多くの変法あるいは修飾手段を用いうることは
勿論のことである。
実施例1 種培地として、スターチ1.0%、グルコース1.0%、ポ
リペプトン0.5%、酵母エキス0.3%、大豆粕0.2%およ
び肉エキス0.2%、(殺菌前 pH7.0)の組成からなる培
地を用いた。
また、生産培地として、グルコース(別殺)5.0%、
大豆粕2.5%、肉エキス0.2%、ポリペプトン0.2%、酵
母エキス0.2%、硫酸ナトリウム(無水)0.2%、および
炭酸カルシウム0.5%、(殺菌前 pH6.0)の組成からな
る培地を用いた。
前記の種培地20mlを分注した100ml容三角フラスコを1
21℃で20分間殺菌し、これにストレプトマイセス・エス
ピー・SF2698株(FERM P−11235)の斜面寒天培養の
2〜3白金耳を接種し、28℃で24時間振盪培養し、第1
種培養とした。次いで、種培地80mlを分注した500ml容
三角フラスコを121℃で30分間殺菌し、前記第1種培養4
mlを接種し、28℃で24時間振盪培養し、これを第2種培
養とした。更に、種培地700mlを分注した2L容三角フラ
スコを121℃で30分間殺菌し、第2種培養35mlを接種
し、28℃で24時間振盪培養し、これを第3種培養とし
た。
予め、121℃で30分間殺菌した35Lの生産培地を含む50
L容ジャーファーメンターに、前記の第3種培養を700ml
接種し、28℃で5日間通気(17.5L/分)、撹拌(初期25
0rpm、24時間以降400rpm)培養した。
培養終了後、濾過助剤として珪藻土を加えて濾過し
た。培養濾液(60)をクロマト用活性炭(6)のカ
ラムに通した。カラムを水洗(40)し得られた洗液を
減圧濃縮した。得られた濃縮液(4)をダイヤイオン
PK208(H+型、800ml、三菱化成工業社製)のカラムに通
した。カラムを水洗後、0.1Nのアンモニア水(13)で
活性成分を溶離した。活性成分を含む溶離液を0.5N塩酸
で中和し、クロマト用活性炭(1)のカラムに通し
た。カラムを水洗後30%メタノール水(2)で活性成
分を溶離した。溶離液を減圧濃縮後、セファデックスG
−10(1.8、ファルマシア社製)のカラムを用い、水
を展開溶媒とするクロマトグラフィーをおこない活性画
分を濃縮することによりSF2698物質の塩酸塩の無色結晶
を103mg得た。
【図面の簡単な説明】
第1図:SF2698物質塩酸塩の臭化カリウム錠での赤外部
吸収スペクトルを示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 渡部 宏臣 神奈川県横浜市港北区師岡町760 明治 製菓株式会社薬品総合研究所内 (72)発明者 小山 正夫 神奈川県横浜市港北区師岡町760 明治 製菓株式会社薬品総合研究所内

Claims (3)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】下記の式で示されるSF2698物質及びその
    塩。
  2. 【請求項2】塩酸塩が下記の物理化学的性質を有するSF
    2698物質 1)色および形状:無色結晶 2)融点:明確な融点を示さず250℃以上で分解する 3)分子式:C6H8N2O2・1/2HCl 4)マススペクトル(HR−MS): 計算値 m/z 140.0585(C6H8N2O2) 実測値 m/z 140.0587(M+) 5)紫外部及び可視部吸収スペクトル λmax nm(ε)[MeOH]:218(9000),255(肩) 6)13C NMRスペクトル(100MHz,D2O) δ(ppm):177.8s,159.1s,146.9d,117.3d,53.4d,27.8t
  3. 【請求項3】ストレプトマイセス属に属するSF2698物質
    生産菌を培養し、その培養物からSF2698物質を採取する
    ことを特徴とする抗生物質SF2698物質の製造法。
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