CN106177509A

CN106177509A - 天然降压素

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Publication number: CN106177509A
Application number: CN201510999847.XA
Authority: CN
Inventors: 赵文元
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2015-12-21
Filing date: 2015-12-21
Publication date: 2016-12-07

Abstract

原发性高血压是世界医学领域的特大难题，尤其是该病引发的脑出血，给人类的生命带来严重的威胁。种类繁多的化学药物虽然可以维持高血压的现状，但是最终还是使该病的病变实质逐日加重。为治愈高血压，本发明运用中医药经典理论，经数十年的基础和临床研究，发现了可有效治愈高血压的天然中草药，如葛根、灵芝、夏枯草等。利用超临界流体萃取技术提取各味中药的有效成份，制成可治愈高血压的中药新药——天然降压素。研究证明，该药治愈高血压的机制是，可通过促进SOD的基因表达，提高SOD的活性，清除自由基；促SOD的基因表达，增加NO的生成；抑制内皮细胞的凋亡，改善和恢复内皮细胞的功能，从实质上修复病变的血管，发挥治愈性的降压功能。

Description

天然降压素

天然降压素属中医药高科技领域。

天然降压素的处方组成：

人参、鹿茸、枸杞子、何首乌、天麻、钩藤、地骨皮、葛根、灵芝草、远志、夏枯草、银杏叶、菊花、茯苓、甘草。

天然降压素的制取：

将处方中的15味中草药分别筛制干净，60目粉碎机分别粗粉，分别放入超临界CO₂流体萃取器。

流体萃取的压力最佳是41mpa.

流体萃取的最佳温度是55℃.

流体动态萃取的最佳时间是32分钟。

流体萃取中最优的夹带剂是乙醇。

流体萃取中的夹带剂用量是整体提取量的20分之一。

动态流体萃取32分钟，进行界面提取，分别提出各味中药的有效成分，如降压素素、人参甙、亚油酸、牛磺酸、枸杞多糖。

上述提取的各种中药有效成分，混合之后即为天然降压素。

天然降压素疗效的基础研究

原发性高血压的实质，是血管内皮细胞的功能障碍。体内氧化应激条件下所产生的自由基损伤，是造成血管内皮细胞功能障碍的重要机制。自由基可以灭活NO^[1]，抑制NOS的活性^[2]，导致NO的生成大大减少，ET-1的合成与释放大大增加，表现出持久的缩血管效应，使原发性高血压得以起动和维持。根据这一理论认识，为有效的治疗原发性高血压，将研究发现的可治愈原发性高血压的天然中草药，如葛根、远志、灵芝草^[3]，应用超临界流体萃取技术，提取各味植物药草的主要有效成分，制成中药新药----天然降压素，经高效液相色普技术纯化，配成一定浓度的试验用药液，进行原发性高血压大鼠的基础实验研究。

一、材料与方法

1、实验动物：

雄性原发性高血压大鼠(SHR)，购于北京利华实验动物中心。体重200-220克，血压(176.6±3.4)。

主要仪器：定量PCR仪(美国ABI公司)；流式细胞仪(美国BD公司FACSC-alibur)；透射电子显微镜(日立7500型)；RBP-1型大鼠血压计(中日友好医院医学研究所)；生化分析仪lisa 3000plus(法国HYEL)；酶标仪(美国Bio-Tec生物科技公司产品)；

主要试剂：逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)试剂盒，购自美国QIAGEN公司；NO、NOS、MDA、SOD试剂盒，购于南京建成生物工程研究所；ET-1试剂盒，由北京华美生物工程有限公司提供。

2、实验药物：灵芝草，购于北京同仁堂药店，经超临界流体萃取技术萃取，萃取压力30千帕，萃取温度65℃，夹带剂为60％乙醇，萃取时间60分钟。所提膏状提取物，经高效液相色谱技术纯化，冷冻干燥后，粉碎装入胶囊，每粒0.3g，相当于原生药6g。实验时取胶囊内容物加蒸馏水溶化，配成60g/L的剂量。阳性对照药卡托普利片，常州制药厂生产，批号312731，每片25mg，研末加蒸馏水配成含量为2.5g/L。

二、实验方法：

1.动物分组和治疗：雄性原发性高血压大鼠(SHR)30只，血压(176.6±3.4)mmHg，随机分成对照组、天然降压素治疗组(简称天然降压素组)、阳性药物卡托普利对照组(简称阳性组)。各组SHR在正常饲养的基础上，对照组给以蒸馏水灌胃治疗，天然降压素组给以天然降压素0.6g/kg灌胃治疗，阳性组给以卡托普利0.03g/kg，每天1次灌胃治疗。

2.大鼠血压测量：

治疗8周后，测量SHR大鼠的血压，重复测定3次。

3.生化指标检测：

各组大鼠治疗后，空腹6h，麻醉后左颈总动脉插管取血5ml，离心后取上清液，按照试剂盒说明，测定NO、NOS、ET-1、SOD、MDA的含量，及血脂的变化。用考马斯亮蓝比色法进行蛋白定性，测定SOD、NOS的活性。

5.分子生物学指标的测定

采用Northern Blotting方法、免疫组化、Western印迹和RT-PCR法检测SOD、NOS、HDL的基因表达，用流式细胞术检测内皮细胞的凋亡。

4、统计方法：

各组实验所得数据用(X±S)表示，采用SPSS17.0统计软件进行成组设计的t检验和方差分析，比较各组之间的差异。

三.实验结果

1.血压的变化：

各组大鼠治疗8周后，天然降压素组大鼠的血压趋于正常水平，和对照组比较，P＜0.01，和阳性组比较，P＜0.01。动性观察可见，天然降压素有增强大鼠体能的作用。具体数据见表1。

表1各组大鼠治疗8周后的血压变化(x±S，mmHg)

注：天然降压素组、阳性组分别与对照组比较，#：P＜0.05，##：P＜0.01；天然降压素组与阳性组比较，*：P＜0.05，**：P＜0.01。下同

2.各组大鼠治疗后血清NO、NOS、ET-1的变化：

天然降压素组大鼠的NO的含量显著升高，ET-1的水平显著下降，和对照组比较，P＜0.01。详细数据见表2。

表2各组大鼠治疗前NO、NOS、NOS、ET的变化(x±s，n＝10)

3.各组大鼠治疗后抗氧化指标的变化：

天然降压素组大鼠MDA的含量明显下降，SOD的活性明显上升，和对照组比较，P＜0.01，详细数据见表3。

表3各组大鼠治疗后MDA及SOD的变化(x±s，n＝10)

4.各组大鼠治疗后基因表达的检测结果：

天然降压素组大鼠主动脉SOD、NOS的基因表达明显上调，肝脏HDL的基因表达也明显上调，和对照组比较，P＜0.01。内皮细胞的凋亡率也明显降低，和对照组比较，P＜0.01。

表4各组大鼠治后主动脉SOD、NOS、肝脏HDL基因表达的变化及EC的凋亡率(x±s)

5.各组大鼠治疗后血脂的变化：

各组大鼠治疗8周后，天然降压素组大鼠的血清TC、TG、LDL均明显降低，而HDL的水平显著上升，和对照组比较，P＜0.01。详细数据见表5。

表5各组大鼠冶疗后血清脂类代谢的变化(x±s，n＝10)

讨论

氧化应激条件下所产生的自由基，是内皮细胞功能障碍的重要机制，是原发性高血压的实质。高血压状态时，NO的生成量显著降低，而NO是体内重要的信使分子和效应分子，为血管的舒张、神经信号的传递，起着重要的调控作用^[4]。NOS是催化NO合成的主要物质^[5]。自由基可以灭活NO，并加速一氧化氮的降解。从而导致内皮细胞功能障碍的发生，导致ET-1的合成和释放增加，表现出持久的缩血管效应。因此，高血压的药物治疗研究，应以清除自由、增加NO的生成，改善和恢复内皮细胞的功能为靶点。

体内过高的LDL，可进入内皮细胞，刺激内皮细胞产生活性氧，它可作为信号传导通路的第二信使，诱导内皮细胞的损伤^[6]，又可抑制内皮细胞中NOS的活性，并加速NO的降解，导致内皮细胞的凋亡^[7]。本研究结果表明，天然降压素组大鼠的SOD的基因表达明显上调，活性明显增强，MDA的含量明显降低，同时内皮细胞的凋亡率也明显降低，和对照组比较，差异都十分显著。由此证明，天然降压素可有效地促进SOD的基因表达，增强SOD的含量与活性，清除自由基，减少MDA的生成，又可抑制内皮细胞的凋亡，从抗氧化、抗凋亡的角度，改善和恢复内皮细功能，从而使高血压得到有效的治疗。

NO和ET-1是内皮细胞分泌的一对相互拮抗的活性物质。正常情况下，两者的拮抗效应处于动态平衡之中，从而维持着血管的正常舒张和收缩功能，以及血压的稳定。高血压状态时，NOS的活性被抑制，NO的生成大大减少，导致ET-1的过度合成和释放。这一活性物质的水平升高，表现为持久的缩血管效应，进一步促使高血压的形成和发展。本研究结果表明，天然降压素组大鼠NOS的基因表达明显上调，NO的生成显著上升，ET的水平显著下降。由此证明，天然降压素可有效地促进NOS的基因表达，增加NOS的含量与活性，促进NO的生成，降低ET-1的水平，在改善内皮细胞的功能上，使血压稳定在正常状态。

LDL在血管内皮下的沉积，是氧化应激反应的基础，是高血压形成的重要始动环节之一^[8]，氧化应急的原因，是脂类的代谢异常所致。而HDL在脂类代谢中起着非常重要的作用。HDL的主要功能，是将血浆中激离的胆固醇转化成胆固醇酯，阻止激离的胆固醇在血管壁的沉积，阻止内皮细胞功能障碍的发生。有研究证明，HDL在脂类的代谢机制中，表现为一个HDL分子可以转运5--6个LDL分子或TG分子至肝脏进行分解代谢。然而，由于HDL的分子体积特别小，可穿行于动脉内膜，将沉积在动脉内膜里面的胆固醇带出血管壁，从而修复了血管内皮，恢复了血管的弹性，使内皮细胞发挥正常的舒缩血管、调控血压的功能。因此，调节或升高血浆HDL的水平，也是治疗原发性高血压的一个重要方向。本研究结果显示，天然降压素组大鼠HDL的基因表达明显上调，其含量明显升高，LDL的蓄积明显减少，和对照组比较，具有明显之差异，由此可见，天然降压素可准确地调控HDL的基因表达，提高HDL的水平，加速胆固醇的代谢，降低LDL堆积，减少氧化应激反应的发生，阻止内皮细胞功能障碍形成与发展，恢复内皮细胞舒张血管、调控血压的功能，使血压趋于平衡状态。

参考文献

1Tai MH，Wang LL，Wu kL，et.al.Increasd superoxid anion in rostralventrolateral medulla contributes to hypertension in spontaneouslyhypertensive rats via interactions wirh nitric oxide[J].Fadic Biol Med，2005，38：450-462.

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天然降压素疗效的临床研究

原发性高血压病，和动脉硬化密切相关，是世界医学领域中的十大难题之一。世界卫生组织统计数字显示，该病的发病率正逐年递增，人类成年之后的人群中，已有三分之一的人群，患有原发性高血压。高血压的发病率不仅很高，而且，该病的致死致残率也分厂惊人，是中风和心脏病死亡人数的一半。因此，高血压已成为危害人类健康的严重问题。西医药治疗高血压往往需要联合用药才能达到降压效果。而药物的不良反应，反而导致该症的病机逐日加重。因此，应用中医中药防治高血压，则显得十分必要。为此，本研究总结多年的临床经验，自拟出二龙一虎降压方，并经超临界流体萃取技术，制成降压素颗粒剂，经临床辨证治疗原发性高血压患者数百例，均取得突出独到的疗效，具体研究方法和结果如下。

1、临床资料

1.1一般资料

200例原发性高血压病人来自2009年6月——2012年5月本院门诊，采用Dool’s临床病例随机表，将病人随机分成两组，治疗组100例，共中男性70例，女性30例，年龄27——71岁，平均年龄(51.3±10.5)，病程1-25年，平均病程(11.6±4.5)年。平均血压168.3±12.5/93.6±8.9mmHg(1mmHg＝0.133kpa)。对照组100例患者，男性60例，女性40例，年龄28-68岁，平均(58.2±10.6)岁。病程1-28年，平均病程(10.6±6.5)，平均血压(158.8±13.6)(93.6±8.8)mmHg，，上两组患者的基线资料比较，差异性无统计学意义(p＞0.05)，具有可比性。

1.2诊断标准

西医学诊断标准采用《中国高血压防治指南》[1]标准，即成人收缩压(SBP)≥140Hg，舒张压(DBP)≥90mmHg。中医学诊断标准，依据《中药新药临床指导原则》[2]中的肝阳上亢、阴虚阳亢型之诊断标准。

1.3纳入标准

①符合原发性高血压的西医学诊断标准。

②符合中医学肝阳上亢、阴虚阳亢的辨证标准。

③高血压患者之年龄在27-71岁。

④取得各患者的知情同意，同时具备以上4项条件者方可纳入试验。

1.4排登记标准

①SBP＞225mmHg和DBP＞125mmHg的原发性高血压患者。

②继发性高血压患者

③妊娠或哺乳期女性。

④合并有脑出血、左心衰、肾功能衰竭及其他心、脑、肝和造血***等严重原发性病病者。

⑤精神病患者、过敏体质及不能停用其他降压药物者。

⑥未按规定服药，无法判定疗效或资料不全等影响疗效和安全性判断者。

2.研究方法

2.1治疗方法

治疗组：服用天然降压素，天然降压素分为肝阳上亢和阴虚阳亢二种。

①肝阳上亢型之处方：天麻6g、龙骨15g、石决明15g、玄参6g、白芍6g、菊花6g、龙胆草3g、黄芩6g、生地6g、柴胡6g、当归6g、丹参6g、茯苓6g、甘草3g。

②阴虚阳亢型之处方：天麻6g、龙骨15g、玄参6g、白芍6g、菊花6g、醋龟板10g、枸杞子6g、制何首乌10g、黄精10g、牛膝6g、红花3g、熟地6g、甘草3g。

以上药物均以水浸醇沉技术提取制成丸剂，每次服3g，每日服2次。各型患者各报各型用药。

对照组：服用山西津华晕星制药有限公司生产的卡托普利片，每片25mg，每日每人服3次。

两组患者各连续治疗6周，观察疗效。治疗期间均以低盐、低脂饮食，停用其他降压、降脂和影响血压的药物。治疗期间如出现其他严重病变者，须退出试验治疗。

2.2观察指标和方法

①血压的测定：使用票人汞柱的血压计，坐位测量血压3次，取平均值记录结果，每周至少测量3次。

②临床症状改善情况：包括脑晕、头痛、急燥易怒、腰酸腿软、五心烦热、心悸、失眠、多梦、面红目赤、口干舌燥、耳鸣、健忘、便秘、溲赤。

③治疗前后分别检查血液和大小便常规，以及肝肾功能、血脂和心电图。

2.3疗效标准

2.3.1降压疗效判定标准

依据《中药新药临床研究指导原则试行》[2]中的血压疗效判定标准评定结果。

显效：DBP下降10mmHg以上，并达到正常血压范围，或者DBP虽未降至正常范围，但血压已下降20mmHg或以上者。

有效：治疗后DBP下降虽然未达10mmHg，但是已达到还范围，或DBP较治疗前下降10-19mmHg，但未达到正常血压范围，或SBP较治疗前下降30mmHg以下，须具各其中1项标准。

无效：治疗后血压未达到以上疗效标准。

2.3.2单项症状疗效判定标准

显效：治疗后，原有症状完全消失或者显著减轻。

有效：治疗后，原有症状有所好转或者有所减轻。

无效：治疗后，原有症状未见改善。

2.4统计学方法

本研究应用SPSS16.0软件包，进行数据统计分析。计数资料使用X²检验，计量资料采用七检验，P＜0.05表示差异具有统计学意义。

3结果

3.1两组症状疗效比较

除了耳鸣、健忘症状组间差异无统计学意义外(P＞0.05)，其余症状组间差异均有统计学意义(P＜0.05)，治疗组症状改善优于对照组，结果见表1

表1两组原发性高血压患者症状疗效比较(例)

注：和对照组比较，*P＜0.05

3.2两组原发性高血压患者治疗后降压疗效的比较，见表2。

表2 2组原发性高血压患者降压疗效的比较(例)

注：两组比较，P＜0.05。

3.3两组原发性高血压患者治疗前后血压的变化比较，见表3

表3两组原发性高血压患者治疗前后血压变化比较(例)

组别	时间	例数	SBP	DBP
					治疗组	治前	100	161.1±13.5	96.3±9.6
	治后	100	117.3±6.8^※Δ	78.2±2.8^※Δ
					对照组	治前	100	162.2±14.6	95.1±9.6
	治后	100	143.5±4.9^※	88.6±2.3^※

注：和本组治前比较，※P＜0.05；和对照组治后比较，ΔP＜0.05

3.4两组原发性高血压患者治疗前后心率的变化比较

治疗组平均心率治疗前(78.3±12.5)次/min，治疗后的心率是(76.1±12.6)次/min；对照组治疗前(78.1±11.8)次/min，(76.4±13.3)次/min。两组治疗前后及组间比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)

3.5两组原发性高血压治疗前后血脂的变化比较

治疗后，治疗组总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)，均有显著改善，P＜0.05，而对照组仅是TG1项有显著改善，P＜0.05。详细数据见表4。

表4 2组原发性高血压病人治疗前后血脂变化比较(例)

注：和本组治疗前比较。※P＜0.05；和对照组治后比较，ΔP＜0.05

3.6不良反应

治疗组患者无主观之不适。治疗前后两组患者的血、尿、肝功能、肾功能、心电图检查均未见异常变化(P＞0.05)。

4、讨论

本研究发现，原发性高血压早期多为肝火上炎、肝阳偏亢，中期之后，逐渐发展为肝肾阴虚，出现阴虚阳亢为主的症候。一般而言，肝阳上亢型的患者，年龄较轻，病程较短，而阴虚阳亢型的病人，年龄较大，病程较长，在发病过程中往往虚实夹杂，而且许多原发性高血压患者，常伴有脂质代谢紊乱^[4]。然而，天然降压素主要以天麻、龙骨、菊花等，以平肝潜阳；以夏枯草、茯苓、生地等，而清肝泻火；以枸杞子、鹿茸、西红花等，以滋补肝肾。根据证型组合，分别治疗肝阳上亢和阴虚阳亢两大类型之原发性高血压。方中之天麻，性味甘平，具有平肝熄风之功。而钩藤性味甘凉，也具有清热熄风之功。方中之夏枯草性味成寒，具有清肝泻火、平肝熄风之功效，三者合为君药，和其它诸药并用，共奏平肝潜阳、滋阴降火、调和气血、燮理阴阳之效。现代药理研究表明，钩藤、天麻、菊花、茯苓、远志、夏枯草、何首乌等，均具有明显的降压作用，何首乌、枸杞子、菊花等，还具有抗氧化、降血脂之功用，又有保护内皮细胞的作用^[5-6]。本研究结果表明，天然降压素具有显著地降压作用，并能有效地改善和消除原发性高血压的临床症状，同时还具有独到的降血压、升高高密度脂蛋白，和重要的保护和修复血管内皮细之功能。

5、参考文献

1、中国高血压防治指南修订委员会、中国高血压防治指南(修订版)[M]，北京，人民卫生出版社，2005。

2、郑筱黄中药新药临床研究指导原则(试行)[S]。

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3、唐仕欢，杨洪军、黄璐琦等，中医临床处方饮片用量调研报告(内科)[J]，中国中药杂志，20083，33(19)：2257-2263。

Claims

1.天然降压素属现代中医药科技领域，该药的处方，由纯天然中草药组成，即：人参、鹿茸、枸杞子、何首乌、天麻、钩藤、地骨皮、葛根、灵芝草远志、夏枯草、银杏叶、菊花、茯苓、甘草。方中各药，利用超临界流体萃取技术提取，再以高效液相色谱技术纯化，后经冷冻干燥制成颗粒，命名为天然降压素。大量研究证明，天然降压素可通过促进SOD的基因表达，提高SOD活性，清除自由基；促进NOS的基因表达，增强NOS的活性，增加NO的生成；抑制内皮细胞的凋亡，调控HDL的基因表达，提高HDL的水平，从而改善和恢复内皮细胞的功能，从实质上有效的发挥降压功能，解决了原发性高血压难以治愈的世界难题。

2.根据权利要求书1所述之处方组成，其主要特征是，该方以君、臣、佐、使的法则，所组成，其功能是调和气血，燮理阴阳，平肝熄风、活血化淤、化腐生新、聪耳明目、轻身耐老。

3.根据权利要求书1所述之：“清除活性氧“，其主要特征是，天然降压素的主要方药为灵芝草，而灵芝草生深山老林，聚天地之灵气，积万物之精华，为历代养生保健、轻身耐老之佳品。其主要有效成份---灵芝多糖，独具清除活性氧、阻止自由基生成之功，修复病变之血管，是原发性高血压恢复正常。

4.根据权利要求书1所述；“增强超氧化物歧化酶的活性”，其主要特征是，超氧化物歧化酶作为体内重要的抗氧化酶之一，可有效地清除活性氧。活性氧是研究衰老和抵抗衰老的主要检测指标。研究证明，天然降压素可促进超氧化物歧化酶的基因表达，增强超氧化物歧化酶的活性，是天然降压素清除活性氧自由基的重要作用机制。

5.根据权利要求1所述；抑制内皮细胞的凋亡，从而改善和恢复内皮细胞的功能，从实质上有效的发挥降压功能，解决了原发性高血压难以治愈的世界难题。

6.根据权利要求书1所述：“清除和阻止自由基的形成”，其主要特征是；自由基是机体抗氧化反应中产生的有害物质，具有强氧化性，可损害体内的组织与细胞，进而引起细胞的凋亡和人体的衰老。研究证明，天然降压素不仅可以抗氧化，尚可有效的阻止自由基的生成而阻止细胞的老化。

7.根据权利要求书1所述；促进NOS的基因表达，增加NO的生成，是改善血管内皮细胞功能的基础。主要特征是，NO是体内重要的信使分子和效应分子，为血管的舒张、神经信号的传递，起着重要的调控作用^[4]。NOS是催化NO合成的主要物质^[5]。自由基可以灭活NO，并加速一氧化氮的降解。从而导致内皮细胞功能障碍的发生，导致ET-1的合成和释放增加，表现出持久的缩血管效应。因此，高血压的药物治疗研究，应以清除自由、增加NO的生成，改善和恢复内皮细胞的功能为靶点。

8.根据权利要求书1所述；抑制内皮细胞的凋亡，从而改善和恢复内皮细胞的功能，从实质上有效的发挥降压功能。其主要特征是，天然降压素可使SOD的基因表达明显上调，活性明显增强，MDA的含量明显降低，同时内皮细胞的凋亡率也明显降低，和对照组比较，差异都十分显著。由此证明，天然降压素可有效地促进SOD的基因表达，增强SOD的含量与活性，清除自由基，减少MDA的生成，又可显著抑制内皮细胞的凋亡，从抗氧化、抗凋亡的角度，改善和恢复内皮细功能，从而使高血压得到理想的治愈。

9.根据权利要求书1所述：“增强一氧化氮合成酶的活性”，其主要特征是：一氧化氮合成酶广泛存在于内皮细胞、神经细胞，可催化L-精氨酸生成一氧化氮，在维持内皮细胞的功能和阻止细胞的老化上发挥着极为重要的作用。该酶只能在珍贵物种如海龙、鱼精蛋白中方能提出，研究表明，天然降压素能够有效的促进一氧化氮合酶的基因表达，提高该酶的含量。

10.根据权利要求书1所述：“升高一氧化氮的水平”，其主要特征是：一氧化氮这一重要的信息分子，在调控血管的生理功能上发挥着十分关键的作用。所以，一氧化氮水平的高低，决定着细胞的老化程度，升高一氧化氮的水平是延缓细胞衰老的关键。研究表明，天然降压素可显著的升高一氧化氮的水平，对维持细胞的活力，发挥着无可替代的作用。

11.根据权利要求书1所述：“天然降压素可准确地调控高密度脂蛋白(HDL)的基因表达，提高HDL的水平”，其主要特征是，天然降压素可准确地调控HDL的基因表达，提高HDL的水平，加速胆固醇的代谢，降低LDL堆积，减少氧化应激反应的发生，阻止内皮细胞功能障碍形成与发展，恢复内皮细胞舒张血管、调控血压的功能，使血压趋于平衡状态。