CN106072133A - 一种具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉的制备方法 - Google Patents
一种具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉的制备方法，包括以下步骤：（1）桑椹、蓝莓和蔓越莓的预处理；（2）湿法粉碎；（3）灭菌与发酵；（4）辅料制备；（5）干燥、包装和灭菌。该方法一方面通过微生物发酵降解原料中的天然糖类成分，减少加工过程中的原料粘结和焦化，另一方面通过辅料的科学配伍和工艺优化，最大限度地保留新鲜浆果中的生物活性物质。本发明还公开了采用上述方法制成的具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉，以及所述复合浆果精粉在制备具有抗氧化和脂质代谢调节功效的保健食品中的应用。
Description
技术领域
本发明属于农产品加工技术领域，具体涉及一种具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉的制备方法。
背景技术
近年来随着社会经济的快速发展和人们生活水平的不断提高，以氧化应激和脂质代谢紊乱为共同病理特征的肥胖、糖尿病和代谢综合征等慢性疾病的发病率迅速攀升。目前全球糖尿病患者超过3亿，肥胖症和代谢综合征的患病率接近或超过 20%，以纠正机体氧化应激和脂质代谢紊乱为目标的饮食干预是该类疾病的重要防治策略。与发达国家相比，我国针对肥胖、糖尿病和代谢综合征等患者病理特征和代谢特点研发的专用食品基料或功能食品较少，加工技术相对滞后，不能满足社会健康市场的需求。
桑椹主要分布在中国，是国家***批准的“药食同源”食物。桑椹鲜食口感酸甜可口、风味宜人，且具补肝益肾、生津润燥、利水消肿和轻身等多种药用活性。现代科学研究表明，桑椹含有丰富的花青素、原花青素、多羟基生物碱和酚酸等生物活性物质，它们大都属于天然的抗氧化和脂质代谢调节功能因子。
蓝莓是一种分布于北半球（寒）温带地区的植物，除了丰富的糖、蛋白质、维生素、矿质元素等营养成分外，还含有大量的类黄酮、花青素、酚酸等生物活性物质，具有抗氧化、降血糖、降血脂、抗炎、提高机体免疫力和增进视力等多种功能，被***粮农组织列为人类五大健康食品之一。
蔓越莓是一种鲜果，具有水分高、热量低、富含多种维生素和矿物质的优点，倍受人们的青睐。蔓越莓的化学成分研究结果表明，它是一种富含原花青素和花青素，以及紫檀芪、白藜芦醇、鞣花酸和熊果酸等多种生物活性物质的健康浆果，对于炎症、肥胖和糖尿病具有较好的预防和辅助治疗作用。
尽管上述3种浆果中的花青素、原花青素、多羟基生物碱和酚酸等生物活性物质，对于肥胖、糖尿病和代谢综合症等人群的共同病理特征——氧化应激及脂质代谢紊乱具有良好的预防和辅助治疗作用，但是这3种浆果还含有一定的碳水化合物或糖类成分，不宜于直接给患者使用或加工成相关的保健食品，而且这些碳水化合物的存在也会导致这些浆果原料在高温干燥或常温粉碎过程中发生粘结和焦化，影响产品的风味品质和保健功能。目前一些常规技术对桑椹、蓝莓及蔓越莓进行加热、浓缩或粉碎等加工的过程中的粘结焦化、花青素降解、生物活性物质损失和外观品质劣变等技术难题，一直未得到有效解决，严重限制了这3种健康浆果在功能食品中的广泛应用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉的制备方法，该方法一方面通过微生物发酵降解浆果原料中的天然碳水化合物或糖类成分，减少加工过程中的原料粘结和焦化，另一方面通过辅料的科学配伍和工艺优化，最大限度地保留新鲜浆果中具有抗氧化和脂质代谢调节的生物活性物质。
本发明的目的还在于提供利用上述方法制成的具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉，或以该复合浆果精粉为主要原料加工的营养棒等产品，该类产品富含原花青素、花青素、多羟基生物碱和酚酸等天然活性成分，并且通过加工工艺和辅料组合的优化能促使产品维持有鲜艳的外观色泽。
本发明的最后一个目的在于提供上述复合浆果精粉在制备具有抗氧化和脂质代谢调节功效的保健食品中的应用。
本发明的第一个目的是通过以下技术方案来实现的：一种具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）桑椹、蓝莓和蔓越莓的预处理：选取新鲜成熟桑椹、蓝莓和蔓越莓，预处理后备用；
（2）湿法粉碎：选取预处理后桑椹、蓝莓和蔓越莓，加入护色液混匀后，采用砂轮磨和胶体磨进行二次湿法粉碎，获得复合浆果原浆备用；
（3）灭菌与发酵：将复合浆果原浆经微波灭菌后冷却，先接种由植物乳杆菌和肠膜明串珠菌组成的复合菌种发酵，获得前段发酵产物，再接种酿酒酵母继续发酵，当发酵产物中不再检出葡萄糖和果糖时，获得后段发酵产物；
（4）辅料制备：选取辅料，经浸泡后采用砂轮磨和胶体磨进行二次湿法粉碎，制备成浆状辅料备用；
（5）干燥、包装和灭菌：将辅料与后段发酵产物混匀，经干燥、包装和灭菌处理，即制备得具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉。
本发明具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉的制备方法，以新鲜成熟的桑椹、蓝莓和蔓越莓为主要原料，经包括预处理、湿法粉碎、灭菌、接种发酵（乳酸菌、酵母菌两段发酵）、辅料添加、干燥、包装和灭菌等工序制备获得。
该制备方法通过微生物转化技术和喷雾冷冻干燥技术，在常温或低温条件下完成，能有效避免桑椹、蓝莓和蔓越莓中的原花青素、花青素、多羟基生物碱和酚酸等天然活性成分的降解或变化，并且维持产品鲜艳的外观色泽。
在上述具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉的制备方法中：
步骤（1）中所述的预处理包括除杂、消毒、清洗和滤干备用。
其中桑椹、蓝莓和蔓越莓的除杂、消毒、清洗和滤干过程为：挑选八、九成熟的新鲜桑椹、蓝莓和蔓越莓（色泽鲜艳且无霉烂），手工除去叶片、蜗牛等肉眼可见杂质，清洗采用超声气泡法清洗滤干后冷冻保藏备用。
进一步的，步骤（1）中预处理的具体过程是：挑选八、九成熟桑椹、蓝莓和蔓越莓（色泽鲜艳且无霉烂），在除去肉眼可见的杂质后，用清水或用符合规定（GB5461）的0.5%～0.8%食用盐水溶液，或其它符合国家标准规定的消毒水对桑椹、蓝莓和蔓越莓进行表面消毒，再用纯净水多次清洗，除去盐或去消毒水，洗净滤干的浆果经食品级复合膜包装材料包装后，置-18℃冷库冷冻贮藏备用，生产时取出解冻后使用。
步骤（2）中所述的桑椹、蓝莓和蔓越莓的质量份配比为3~5：1~2：0.5~1。
步骤（2）中所述的护色液为柠檬酸和异抗坏血酸钠，柠檬酸的用量为桑椹、蓝莓和蔓越莓总质量的0.10%~0.20%，异抗坏血酸钠的用量为桑椹、蓝莓和蔓越莓总质量的0.01%~0.02%。
步骤（2）和步骤（4）中采用胶体磨粉碎时，控制设备缝隙大小为25~40μm，研磨次数为2~4次，单位处理量4000g/min。
其中步骤（2）中采用砂轮磨和胶体磨进行二次湿法粉碎时，第一次采用砂轮磨对桑椹、蓝莓和蔓越莓进行初步破碎得混合原浆；第二次采用胶体磨对混合原浆进一步细磨，获得复合浆果原浆冷冻保存备用。
其中第二次将经初步破碎的混合原浆加入胶体磨，控制设备缝隙大小为25-40μm，研磨次数2-4次，单位处理量4000g/min，获得复合浆果原浆-18℃冷冻保存备用。
步骤（3）中微波灭菌时，微波炉的功率优选为400~500W，微波时间优选为150~210s。
具体的，步骤（3）中先将冷冻保存的复合浆果原浆解冻，然后优选采用管道微波杀菌机进行杀菌，微波杀菌时，微波炉的功率优选为400~500W，微波时间优选为150~210s。
步骤（3）中微波杀菌冷却后，先接种乳酸菌进行有氧发酵，继而接种酿酒酵母继续进行有氧发酵，至发酵产物中无法检测到葡萄糖和果糖时结束发酵。
步骤（3）中由植物乳杆菌和肠膜明串珠菌组成的复合菌种的接种量占复合浆果原浆总质量的10~12%，其中植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的初始浓度分别为1.0×108~2.0×108cfu/mL，植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的体积比为2~3：1~1.5，接种后补加灭菌蒸馏水调整液料比为1.25~1.60：1，控制发酵温度为40 ± 2 ℃，发酵时间为48~96h，获得前段发酵产物，酿酒酵母的接种量占前段发酵产物总质量的0.10~0.20%，接种酿酒酵母继续发酵时，控制发酵温度为40 ± 2 ℃，发酵时间为12~24h。
本发明中植物乳杆菌、肠膜明串珠菌和酿酒酵母均为市售产品。
步骤（4）中所述辅料为黄豆、荞麦和燕麦中的一种或几种，水的用量为黄豆、荞麦和燕麦总质量的4~8倍，浸泡时间为8~12h。
所述辅料为黄豆和荞麦时，所述黄豆和荞麦的质量份配比为10~20：3~4；所述辅料为黄豆、荞麦和燕麦时，所述黄豆、荞麦和燕麦的质量份配比为10~20：3~4：2~5。
步骤（5）中辅料与后段发酵产物的质量份配比为1~3：5~10，干燥采用喷雾冷冻干燥，干燥至物料的含水量为8~10%。
进一步的，步骤（5）中干燥、包装和灭菌的具体过程是将辅料与后段发酵产物按1~3：5~10的质量份配比混合均匀后，加入到喷雾冷冻干燥设备中，控制冷阱温度-60℃、真空度20Pa、物料温度-25℃，经真空冷冻干燥至物料含水量8~10%，即为复合浆果精粉。
本发明的第二个目的是通过以下技术方案来实现的：采用上述方法制成的具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉。
本发明的第三个目的是通过以下技术方案来实现的：上述复合浆果精粉在制备具有抗氧化和脂质代谢调节功效的保健食品中的应用。
药学试验表明，本发明提供的复合浆果精粉，可进一步与其它辅料混合，研制成具有抗氧化和脂质代谢调节作用的营养食品（保健食品），如营养棒和代餐粉，从而可以稳态化调控患者氧化应激或脂质代谢紊乱水平。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
（1）本发明选用的主要原料是自然界中富含原花青素、花青素、多羟基生物碱和酚酸的三种健康浆果：桑椹、蓝莓和蔓越莓，所选择的辅料也是适宜于氧化应激和脂质代谢紊乱患者食用的燕麦、荞麦和黄豆等全谷物或豆类食品，以这些原料开发的食品基料对于稳态化调控患者的氧化应激和脂质代谢紊乱具有重要的健康促进作用；
（2）本发明联合使用植物乳杆菌、肠膜明串珠菌和酿酒酵母对三种浆果混合物进行两次深层液体发酵，一方面可完全降解浆果中的糖类成分，同时促进了一些结合在浆果纤维中的酚酸和多羟基生物碱等糖脂代谢功能因子的释放，在上述益生菌发酵的过程中产生了大量的益生菌，对于调节糖脂代谢紊乱患者的血糖和血脂水平也是非常有益的；
（3）本发明选用的辅料燕麦、荞麦和黄豆等均为具有糖脂代谢调节活性的健康谷物或豆类，通过合理的配比，在喷雾冷冻干燥过程中既能将物料粘合在一起，促进产品的成型，尤其重要的是，添加上述辅料混合物可以显著提高花青素的稳定性和益生菌的存活率，对于产品的外观色泽及生物活性具有非常重要的保护作用，通过这种稳态化的加工技术可以获得色泽鲜艳、粘性小而流动性极佳的精粉原料；
（4）本发明涉及的加工技术基本控制在常温或低温条件下完成，有效地避免了浆果中原花青素、花青素、多羟基生物碱和酚酸等天然活性成分的变化，保持了桑椹、蓝莓和蔓越莓3种浆果的营养、风味和功能性成分；
（5）因此，本发明方法一方面通过微生物发酵降解原料中的天然糖类成分，减少加工过程中的原料粘结和焦化，另一方面通过辅料的科学配伍和工艺优化，最大限度地保留新鲜浆果中的生物活性物质。
具体实施方式
以下实施例用于阐明与实施本发明，属于发明的保护范围，本技术领域的普通技术人员根据以上公开的内容均可实现本发明的目的。
实施例1
本实施例提供的具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）桑椹、蓝莓和蔓越莓的预处理 选择八、九成熟的新鲜桑椹、蓝莓和蔓越莓（色泽鲜艳且无霉烂），手工除去叶片、蜗牛等肉眼可见杂质，用清水或用符合规定（GB5461）的0.5%～0.8%食用盐水溶液，或其它符合国家标准规定的消毒水对水果进行表面消毒，再用超声气泡法清洗法将盐或去消毒水清洗干净，滤干备用。
（2）桑椹、蓝莓和蔓越莓的湿法粉碎 将桑椹、蓝莓和蔓越莓按照3：1：1的质量比例称重并混合，按重量比例（以桑椹、蓝莓和蔓越莓总质量计）加入0.10%柠檬酸和0.02 %异抗坏血酸钠进行护色，第1次采用砂轮磨将混合后的桑椹、蓝莓和蔓越莓进行初步破碎后获得混合原浆；第2次将经初步破碎的混合原浆加入胶体磨，控制设备缝隙大小为40μm，研磨次数2次，单位处理量4000g/min，获得复合浆果原浆备用。
（3）杀菌、接种与发酵 将复合浆果原浆置入管道微波杀菌机中控制微波功率500w，微波时间150s，进行灭菌处理。冷却后先接种乳酸菌复合菌（植物乳杆菌和肠膜明串珠菌）发酵，由植物乳杆菌和肠膜明串珠菌组成的复合菌种的接种量为10%（以灭菌后复合浆果原浆总质量计），接种后补加灭菌蒸馏水调整液料比为1.25：1，控制发酵温度为40 ±2 ℃，发酵时间为48h，获得前段发酵产物，其中植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的初始浓度分别为1.0×108 cfu/mL、2.0×108 cfu/mL，植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的体积比为2：1.5；继而接种酿酒酵母继续发酵，酿酒酵母的接种量为0.10%（以前段发酵产物计），控制发酵温度为40 ± 2 ℃，发酵时间为24h，至发酵结束获得复合浆果后段发酵产物，植物乳杆菌、肠膜明串珠菌和酿酒酵母均为市售产品。
（4）辅料调配 辅料由黄豆和荞麦按重量比10：3混合组成，加入5倍的纯净水浸泡12h，先经砂轮磨进行初步破碎，然后将混合辅料加入胶体磨，控制设备缝隙大小为40μm，研磨次数2次，单位处理量4000g/min，获得黄豆荞麦混合原浆。
（5）喷雾冷冻干燥 将复合浆果第二阶段（后段）发酵产物与黄豆荞麦混合原浆按质量份配比为5：3混合均匀后，加入喷雾冷冻干燥设备，控制冷阱温度-60℃、真空度20Pa、物料温度-25℃，干燥至物料含水量8~10%，即为无糖型复合浆果精粉。
（6）包装与灭菌 将已干燥至含水量8~10%的无糖型复合浆果精粉用食用复合铝箔袋包装，经微波灭菌后贴标并检验合格后获得成品。
实施例2
本实施例提供的具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉的加工方法，包括以下步骤：
（1）桑椹、蓝莓和蔓越莓的预处理 选择八、九成熟的新鲜桑椹、蓝莓和蔓越莓（色泽鲜艳且无霉烂），手工除去叶片、蜗牛等肉眼可见杂质，用清水或用符合规定（GB5461）的0.8%食用盐水溶液，或其它符合国家标准规定的消毒水对水果进行表面消毒，再用超声气泡法清洗法将盐或去消毒水清洗干净，滤干备用。
（2）桑椹、蓝莓和蔓越莓的湿法粉碎 将桑椹、蓝莓和蔓越莓按照4：2： 0.5的比例称重并混合，按重量比例加入0.20%柠檬酸和0.015 %异抗坏血酸钠进行护色，第1次采用砂轮磨将混合后的桑椹、蓝莓和蔓越莓进行初步破碎后获得混合原浆；第2次将经初步破碎的混合原浆加入胶体磨，控制设备缝隙大小为30μm，研磨次数3次，单位处理量4000g/min，获得复合浆果原浆备用。
（3）杀菌、接种与发酵 将复合浆果原浆置入管道微波杀菌机中控制微波功率450w，微波时间180s，进行灭菌处理。冷却后先接种乳酸菌复合菌（植物乳杆菌和肠膜明串珠菌）发酵，植物乳杆菌和肠膜明串珠菌组成的复合菌种的接种量为11%，接种后补加灭菌蒸馏水调整液料比为1.4：1，控制发酵温度为40 ± 2 ℃，发酵时间为60h，获得前段发酵产物，其中植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的浓度分别为1.5×108 cfu/mL、1.5×108 cfu/mL，植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的体积比为3：1；继而接种酿酒酵母继续发酵，酿酒酵母的接种量为0.15%，控制发酵温度为40 ± 2 ℃，发酵时间为12h，至发酵结束获得复合浆果的后段发酵产物。本发明中植物乳杆菌、肠膜明串珠菌和酿酒酵母均为市售产品。
（4）辅料调配 辅料由黄豆、荞麦和燕麦按重量比15：3：3混合组成，加入8倍的纯净水浸泡10h，先经砂轮磨进行初步破碎，然后将混合辅料加入胶体磨，控制设备缝隙大小为30μm，研磨次数3次，单位处理量4000g/min，获得混合辅料原浆。
（5）喷雾冷冻干燥 将复合浆果后段发酵产物与混合辅料原浆按质量份配比为7：2混合均匀后，加入喷雾冷冻干燥设备，控制冷阱温度-60℃、真空度20Pa、物料温度-25℃，干燥至物料含水量8~10%，即为复合浆果精粉。
（6）包装与灭菌 将已干燥至含水量8~10%的复合浆果精粉用食用复合铝箔袋包装，经微波灭菌后贴标并检验合格后获得成品。
实施例3
本实施例提供的具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）桑椹、蓝莓和蔓越莓的预处理。 选择八、九成熟的新鲜桑椹、蓝莓和蔓越莓（色泽鲜艳且无霉烂），手工除去叶片、蜗牛等肉眼可见杂质，用清水或用符合规定（GB5461）的0.5%～0.8%食用盐水溶液，或其它符合国家标准规定的消毒水对水果进行表面消毒，再用超声气泡法清洗法将盐或去消毒水清洗干净，滤干备用。
（2）桑椹、蓝莓和蔓越莓的湿法粉碎。 将桑椹、蓝莓和蔓越莓按照5：1.5：0.8的质量比例称重并混合，按混合浆果重量比例（以桑椹、蓝莓和蔓越莓总质量计）加入0.15%柠檬酸和0.01 %异抗坏血酸钠进行护色，第1次采用砂轮磨将混合后的桑椹、蓝莓和蔓越莓进行初步破碎后获得混合原浆；第2次将经初步破碎的混合原浆加入胶体磨，控制设备缝隙大小为25μm，研磨次数4次，单位处理量4000g/min，获得复合浆果原浆备用。
（3）杀菌、接种与发酵。 将复合浆果原浆置入管道微波杀菌机中控制微波功率400w，微波时间210s，进行灭菌处理。冷却后先接种乳酸菌复合菌（植物乳杆菌和肠膜明串珠菌）发酵，由植物乳杆菌和肠膜明串珠菌组成的复合菌种的接种量为12%（以灭菌后复合浆果原浆总质量计），接种后补加灭菌蒸馏水调整液料比为1.6：1，控制发酵温度为40 ± 2℃，发酵时间为96h，获得前段发酵产物，其中植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的初始浓度分别为2.0×108 cfu/mL、1.0×108 cfu/mL，植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的体积比为2.5：1.2；继而接种酿酒酵母继续发酵，酿酒酵母的接种量为0.2%（以前段发酵产物计），控制发酵温度为40 ± 2 ℃，发酵时间为18h，至发酵结束获得复合浆果后段发酵产物，植物乳杆菌、肠膜明串珠菌和酿酒酵母均为市售产品。
（4）辅料调配。 辅料为燕麦，加入6倍的纯净水浸泡8h，先经砂轮磨进行初步破碎，然后将混合辅料加入胶体磨，控制设备缝隙大小为25μm，研磨次数4次，单位处理量4000g/min，获得黄豆荞麦混合原浆。
（5）喷雾冷冻干燥。 将复合浆果后段发酵产物与黄豆荞麦混合原浆按质量份配比为10：1）混合均匀后，加入喷雾冷冻干燥设备，控制冷阱温度-60℃、真空度20Pa、物料温度-25℃，干燥至物料含水量8~10%，即为无糖型复合浆果精粉。
（6）包装与灭菌。 将已干燥至含水量8~10%的无糖型复合浆果精粉用食用复合铝箔袋包装，经微波灭菌后贴标并检验合格后获得成品。
实施例4 具有抗氧化和脂质代谢调节作用的代餐营养棒制备工艺
（1）辅料制备混合。将燕麦片、浓缩乳清蛋白、大豆分离蛋白、低聚异麦芽糖和核桃仁等5种辅料按质量份配比5：0.5：1：0.2：1称量后混合均匀后，另外按重量比30：1称取山茶油，缓慢加入到混合辅料中搅拌5-6min至较均匀状态。
（2）原辅料混合。将实施例2制备的复合效果精粉与辅料按重量比1：2的比例混合搅拌均匀。
（3）干燥成型。将混合好的原辅料置于模具中，充分挤压成型，使得表面平整、组织紧凑，最后放置于微波真空干燥箱中干燥15min，控制微波功率为1 kW，相对压力为-80kPa，并以10 r/min的速度转动。
（4）冷却脱模。将已经干燥成型的营养棒在室温自然冷却后，脱模后进行包装与灭菌。
（5）包装与灭菌。将已成型的代餐营养棒用食用复合铝箔袋包装，经微波灭菌后贴标并检验合格后获得成品。
实施例5 复合浆果精粉的抗氧化和脂质代谢调节药效学试验
本发明所选用的桑椹、蓝莓和蔓越莓等3种浆果含有原花青素、花青素、多羟基生物碱和酚酸等多种活性功能因子，已有文献报道了上述功能因子的抗氧化和脂质代谢调节作用。所选择的辅料如黄豆、燕麦和荞麦也是氧化应激和脂代谢紊乱患者的推荐食品，因此上述原辅料在肥胖、糖尿病和代谢综合症等慢性疾病的预防和治疗都有广泛的应用，以下通过的动物药效试验来说明本发明制备的复合浆果精粉在机体氧化应激和脂代谢紊乱方面的调节作用。
一、试验材料：
1、样品：本药效试验的样品由上述实施例2制备。
2、试剂：链脲佐菌素（STZ）分析纯 （Sigma）；血脂水平检测试剂盒（总甘油三酯、总胆固醇）和血液氧化应激水平检测试剂盒（SOD、GSH-Px、MDA和Fe3+还原能力购自南京建成生物工程研究所。
3、实验仪器：FA1104分析天平 上海天平仪器，ZL-1型真空冷冻干燥机 上海鑫泵，EYELA N-1001旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)，UV-1700紫外分光光度计（日本岛津），酶标仪（KHB ST-360），气浴恒温摇床(Thermo)，96 孔酶标板（Costar），移液枪（Bio-Rad）。
4、实验动物：昆明种小白鼠（20 ± 2g），SPF级，雄性，广东省实验动物中心提供。
二、试验方法：
1、高脂饮食诱导脂质代谢紊乱和氧化应激小鼠模型的建立：昆明种小鼠（平均体重20± 2g）进行高脂饲料喂养4周后，禁食12h，次日测空腹血液总胆固醇（TC）和甘油三酯（TG），TC ≥ 3.0mmol/L, TG ≥ 0.65mmol/L，MDA ≥ 6.5 nmol/mL者为脂质代谢紊乱且处于氧化应激状态的小鼠。
2、动物分组与给药：将经T检验无显著差异的小鼠按体重随机分为5组：空白对照组、模型对照组、样品低剂量组、中剂量组和高剂量组。各组处理方法为：低剂量组给药量200 mg/kg·(bw)；中剂量组给药量400 mg/kg·(bw)；高剂量组给药量800 mg/kg·(bw)；正常对照和模型对照组每次给予等体积的生理盐水，每天经口灌胃1次，继续喂养4周，期间自由摄食饮水，每3天称量一次体重。
3、实验各指标的测定：实验期间，每三天测一次体重与采食量。实验结束后采用眼眶静脉丛取血法取血，测定血液总胆固醇（TC）和甘油三酯等指标。
三、数据处理
数据处理和统计分析采用SPSS 19.0软件包，结果以均数±标准差()表示，各组间的比较采用最小显著差异法(Least Significant Difference，LSD)。
四、试验结果
通过糖脂代谢紊乱模型小鼠体内试验评价复合浆果精粉的抗氧化和脂质代谢调节活性，下表1中的结果表明通过添加本产品，脂质代谢紊乱和氧化应激模型小鼠的2种血脂指标（TC,TG）、2种抗氧化酶指标（SOD, GSH-Px）、Fe3+还原能力指标（FRAP）和脂质过氧化产物指标（MDA）均得到较好的控制，各指标水平与不添加本产品的模型对照组小鼠存在显著性差异，接近空白组水平，说明本产品能起到较好的抗氧化和脂质代谢调节作用。
表1 本发明颗粒产品对糖脂代谢紊乱小鼠的血清的抗氧化及脂质代谢相关指标的改善作用
注：表中不同小写字母表示两者之间在0.05水平上有显著差异。TC，总胆固醇；TG，总甘油三酯；SOD，超氧化物歧化酶；GSH-Px，谷胱甘肽过氧化物酶；FRAP，Fe3+还原能力；MDA，丙二醛。
以上实施例仅用于阐述本发明，而本发明的保护范围并非仅仅局限于以上实施例。本技术领域的普通技术人员依据以上本发明公开的内容和各参数所取范围，均可实现本发明的目的。
Claims (10)
1.一种具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉的制备方法，其特征是包括以下步骤：
（1）桑椹、蓝莓和蔓越莓的预处理：选取新鲜成熟桑椹、蓝莓和蔓越莓，预处理后备用；
（2）湿法粉碎：选取预处理后桑椹、蓝莓和蔓越莓，加入护色液混匀后，采用砂轮磨和胶体磨进行二次湿法粉碎，获得复合浆果原浆备用；
（3）灭菌与发酵：将复合浆果原浆经微波灭菌后冷却，先接种由植物乳杆菌和肠膜明串珠菌组成的复合菌种发酵，获得前段发酵产物，再接种酿酒酵母继续发酵，当发酵产物中不再检出葡萄糖和果糖时，获得后段发酵产物；
（4）辅料制备：选取辅料，经浸泡后采用砂轮磨和胶体磨进行二次湿法粉碎，制备成浆状辅料备用；
（5）干燥、包装和灭菌：将辅料与后段发酵产物混匀，经干燥、包装和灭菌处理，即制备得具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉。
2.根据权利要求1所述的具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉的制备方法，其特征是：步骤（2）中所述的桑椹、蓝莓和蔓越莓的质量份配比为3~5：1~2：0.5~1。
3.根据权利要求1所述的具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉的制备方法，其特征是：步骤（2）中所述的护色液为柠檬酸和异抗坏血酸钠，柠檬酸的用量为桑椹、蓝莓和蔓越莓总质量的0.10%~0.20%，异抗坏血酸钠的用量为桑椹、蓝莓和蔓越莓总质量的0.01%~0.02%。
4.根据权利要求1所述的具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉的制备方法，其特征是：步骤（2）和步骤（4）中采用胶体磨粉碎时，控制设备缝隙大小为25~40μm，研磨次数为2~4次，单位处理量4000g/min。
5.根据权利要求1所述的具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉的制备方法，其特征是：步骤（3）中微波灭菌时，微波炉的功率为400~500W，微波时间为150~210s。
6.根据权利要求1所述的具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉的制备方法，其特征是：步骤（3）中由植物乳杆菌和肠膜明串珠菌组成的复合菌种的接种量占复合浆果原浆总质量的10~12%，其中植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的初始浓度分别为1.0×108~2.0×108 cfu/mL，植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的体积比为2~3：1~1.5，接种后补加灭菌蒸馏水调整液料比为1.25~1.60：1，控制发酵温度为40 ± 2 ℃，发酵时间为48~96h，获得前段发酵产物，酿酒酵母的接种量占前段发酵产物总质量的0.10~0.20%，接种酿酒酵母继续发酵时，控制发酵温度为40 ± 2 ℃，发酵时间为12~24h。
7.根据权利要求1所述的具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉的制备方法，其特征是：步骤（4）中所述辅料为黄豆、荞麦和燕麦中的一种或几种，浸泡时水的用量为辅料总质量的4~8倍，浸泡时间为8~12h。
8.根据权利要求1所述的具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉的制备方法，其特征是：步骤（5）中辅料与后段发酵产物的质量份配比为1~3：5~10，干燥采用喷雾冷冻干燥，干燥至物料的含水量为8~10%。
9.采用权利要求1-8任一项方法制成的具有抗氧化和脂质代谢调节作用的复合浆果精粉。
10.权利要求9所述的复合浆果精粉在制备具有抗氧化和脂质代谢调节功效的保健食品中的应用。
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