CN106008739A - 牡蛎多糖的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种无需乙醇沉淀、操作安全可靠、成本低、纯度高的牡蛎多糖的制备方法，按照如下步骤进行：将牡蛎肉进行匀浆处理，用体积/质量10~15倍的沸水浸提10min，间歇搅拌、过滤，得滤液；调节滤液pH为4~5，静置12h，6000rpm离心20 min，收集上清液；调节上清液pH为7~8，用上清液质量百分比0.5%~1%的复合酶在20~30℃条件下酶解6 h，所述复合酶为海洋碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶和胰蛋白酶按活力单位比为3：3：2：2比例混合；将酶解液6000rpm离心20min，收集酶解上清液；将酶解上清液经过截留分子量50kDa的超滤膜过滤，干燥过膜后截留液，得到牡蛎多糖。

Description

牡蛎多糖的制备方法

技术领域

本发明涉及一种从牡蛎中制备牡蛎多糖的方法，尤其是一种无需乙醇沉淀、操作安全可靠、成本低、纯度高的牡蛎多糖的制备方法。

背景技术

牡蛎是我国的重要经济养殖贝类之一，在我国沿海地区有大约20多种牡蛎品种，如太平洋牡蛎（Crassostrea gigas）、近江牡蛎(Crassostrea rivularis)、褶牡蛎(Crassostrea plicatula)、大连湾牡蛎(Crassostrea talienwhanensis)和密鳞牡蛎(Ostrea denselamellosa)等品种。牡蛎含有丰富的营养物质，其干品中蛋白质约占45%～57%，脂肪约占7%～11%，多糖约占19%～38%。研究表明牡蛎多糖具有促进细胞新陈代谢、改善心脏、肝脏及血液循环的功能，是牡蛎中重要的活性成分。目前，牡蛎多糖的制备方法有多种，如中国专利申请号201510322757.7的发明专利申请，公开了“一种海洋牡蛎生物多糖提取制备方法”，具体步骤是：“将牡蛎鲜肉清洗干净后绞碎，加20-30倍质量体积的水匀浆，调节pH，加入0.5%（质量分数）蛋白酶，在50-60℃保温反应3-5h；再通过离心机离心，收集沉淀，即得牡蛎粗提物；将牡蛎粗提物在15-25倍水中充分搅拌溶解，静置，通过离心机去除不溶物；将清液通过纸板过滤器过滤，然后滤液中缓慢加入2-4 倍体积量95％乙醇，在3-5℃条件下静止12-16 小时，再离心，将沉淀取出，经真空干燥，得牡蛎多糖”。虽然没有公开具体的蛋白酶，但是可以看出其酶解过程需在50-60℃高温条件下进行，需耗费能源（热能），加大生产成本。尽管如此，还是不能把多糖与蛋白质结合的交织结构彻底酶解使其分离，只能采用高浓度（95%）乙醇使液体中的多糖沉淀，而乙醇在大规模工业生产过程中存在安全隐患。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种无需乙醇沉淀、操作安全可靠、成本低、纯度高的牡蛎多糖的制备方法。

本发明的技术解决方案是：一种牡蛎多糖的制备方法，其特征在于依次按照如下步骤进行：

a. 将新鲜去壳牡蛎去内脏之后进行匀浆处理，用体积/质量10~15倍的沸水浸提10min，间歇搅拌、过滤，得滤液；

b. 调节滤液pH为4~5，静置12h，6000rpm离心20 min，收集上清液；

c. 调节上清液pH为7~8，用上清液质量百分比0.5%~1%的复合酶在20~30℃用上清液质量百分比0.5%~1%复合酶在20~30℃条件下酶解6 h，条件下酶解6 h，所述复合酶为6000u/mg的海洋碱性蛋白酶、6000u/mg的木瓜蛋白酶、15000 u/mg的风味蛋白酶和6000u/mg胰蛋白酶按活力单位比为3：3：2：2比例混合；

d. 将酶解液6000rpm离心20min，收集酶解上清液；

e. 将酶解上清液经过截留分子量50kDa的超滤膜过滤，干燥过膜后截留液，得到牡蛎多糖。

本发明是采用四种蛋白酶按比例配制成复合蛋白酶对牡蛎匀浆上清液进行酶解，各种酶相互作用，可使牡蛎中多糖与蛋白质交织结构在常温下（20~30℃）酶解分离，使收集的上清液中含有浓度较高的牡蛎多糖，无需乙醇沉淀，只需经过截留分子量50kDa的超滤膜过滤去除酶解液中的酶及酶解产物，即可得到纯度≥96%的牡蛎多糖，具有操作安全可靠、成本低、纯度高等优点。

可将牡蛎中的多糖与蛋白质结合的交织结构很好地分开，无需乙醇沉淀，只需经过截留分子量50kDa的超滤膜过滤，即可用去除分子量较小的酶及酶解产物，得到纯度≥96%的牡蛎多糖，具有操作安全可靠、成本低、纯度高等优点。

具体实施方式

a. 新鲜去壳牡蛎去内脏之后进行匀浆处理，用15倍（体积/质量）沸水浸提10min，间歇搅拌、过滤，得滤液，滤渣用同样方法再处理2次，把3次滤液合并；

b.将收集的滤液用乙酸调节pH为5，静置12h，6000rpm离心20 min，收集上清；

c. 用氢氧化钠调节上清液pH为7，将上清液质量百分比1%的复合酶加入上清液中，常温（20~30℃）酶解6 h，所述复合酶为将海洋碱性蛋白酶(6000u/mg)、木瓜蛋白酶（6000u/mg）、风味蛋白酶（15000 u/mg）和胰蛋白酶（6000u/mg）按活力单位比为3：3：2：2比例混合；

d. 将所得到的酶解液再次6000rpm离心20min，得酶解上清液；

e. 将获得的酶解上清液经过超滤膜（截留分子量50kDa），将过膜后的截留液进行喷雾干燥，得到牡蛎多糖。经苯酚硫酸法测定牡蛎多糖纯度≥96%。

Claims (1)

1.一种牡蛎多糖的制备方法，其特征在于依次按照如下步骤进行：

a. 将新鲜去壳牡蛎去内脏之后进行匀浆处理，用体积/质量10~15倍的沸水浸提10min，间歇搅拌、过滤，得滤液；

b. 调节滤液pH为4~5，静置12h，6000rpm离心20 min，收集上清液；

c. 调节上清液pH为7~8，用上清液质量百分比0.5%~1%的复合酶在20~30℃条件下酶解6h，所述复合酶为6000u/mg的海洋碱性蛋白酶、6000u/mg的木瓜蛋白酶、15000 u/mg的风味蛋白酶和6000u/mg胰蛋白酶按活力单位比为3：3：2：2比例混合；

d. 将酶解液6000rpm离心20min，收集酶解上清液；

e. 将酶解上清液经过截留分子量50kDa的超滤膜过滤，干燥过膜后截留液，得到牡蛎多糖。