CN105982074A - 核苷酸组合物及其在食品中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用作食品添加物的核苷酸组合物。更进一步地，本发明还涉及包含所述核苷酸组合物的食品及所述核苷酸组合物在制备食品中的应用。

Description

核苷酸组合物及其在食品中的应用
技术领域
本发明涉及一种用作食品添加物的核苷酸组合物。更进一步地，本发明还涉及包含所述核苷酸组合物的食品及所述核苷酸组合物在制备食品中的应用。
背景技术
近年来，有许多实验已经证明了核苷酸在生物体中的重要作用，例如核苷酸可以提高机体的免疫***和胃肠道***的功能。同时，以牛奶为基础的代乳品是目前婴幼儿重要的食品补充来源，由于核苷酸及其衍生物在牛乳中含量很低，因此将外源核苷酸添加到以牛奶为基础的代乳品中，对机体尤其是婴幼儿的生长发育(如胃肠道发育)及免疫力增强都有重要的意义。
US 4,994,442中指出将各种核苷酸添加入婴儿配方食品中可以增强T细胞免疫应答，但是在该文献中各种核苷酸组分(CMP、AMP、UMP、GMP和IMP)是以等量添加至配方食品中。EP 1549158中公开了一种婴儿奶粉组合物，其包含3.2-15.4mg/L的CMP、1.8-11.0mg/L的UMP、1.8-8.0mg/L的GMP、0.1-2.2mg/L的IMP和2.5-13.2mg/L的AMP，但是其仅意图给早产婴儿使用，而且也没有公开任何可能实现的效果。
在现有技术的基础上，为了充分发挥核苷酸对于机体生长发育的作用，优化用作食品添加物的核苷酸的效果，发明人进行了广泛的实验，调整了核酸组合物中核苷酸组分的组成及配比，以最大化该组合物作为核苷酸补充添加物的效果。同时，发明人出人意料地发现，相对于现有技术中所用的产品，通过本发明的核苷酸组合物所具有特定组成和配比，能够提供更好的效果。
发明内容
在第一方面，本发明涉及一种用作食品添加物的核苷酸组合物。
在一实施方案中，本发明的核苷酸组合物基本上由CMP、AMP、UMP、GMP和IMP组成或者由CMP、AMP、UMP、GMP和IMP组成，其中按重量计，各成分的比例为：CMP：58～70％、AMP：7.5～12.5％、UMP：12～16.5％、GMP：10～13％以及IMP：0～2.5％，条件是各种组分之和为100％。
在优选的实施方案中，本发明的核苷酸组合物基本上由CMP、AMP、UMP、GMP和IMP组成或者由CMP、AMP、UMP、GMP和IMP组成，其中按重量计，各成分的比例为：CMP：60～65％、AMP：8～12％、UMP：14～16％、GMP：11～12％以及IMP：0～2％，条件是各种组分之和为100％。
在另一实施方案中，本发明的核苷酸组合物基本上由CMP、AMP、UMP和GMP组成或者由CMP、AMP、UMP和GMP组成，其中按重量计，各成分的比例为：CMP：58～72％、AMP：6～14％、UMP：10～18％以及GMP：8～14％，条件是各种组分之和为100％。
在另一实施方案中，本发明的核苷酸组合物基本上由CMP、AMP、UMP和GMP组成或者由CMP、AMP、UMP和GMP组成，其中按重量计，各成分的比例为：CMP：60～70％、AMP：8～12％、UMP：12～16％以及GMP：10～12％，条件是各种组分之和为100％。
在另一实施方案中，本发明的核苷酸组合物基本上由CMP、AMP、UMP和GMP组成或者由CMP、AMP、UMP和GMP组成，其中按重量计，各成分的比例为：CMP：60～65％、AMP：10～12％、UMP：14～16％以及GMP：11～12％，条件是各种组分之和为100％。
在另一实施方案中，本发明的核苷酸组合物基本上由CMP、AMP、UMP和GMP组成或者由CMP、AMP、UMP和GMP组成，其中按重量计，各成分的比例为：CMP：65～70％、AMP：8～10％、UMP：12～14％以及GMP：10～11％，条件是各种组分之和为100％。
在优选的实施方案中，本发明的核苷酸组合物基本上由CMP、AMP、UMP和GMP组成或者由CMP、AMP、UMP和GMP组成，其中按重量计，各成分的比例为：CMP：60％、AMP：12％、UMP：16％以及GMP：12％。
在优选的实施方案中，本发明的核苷酸组合物基本上由CMP、AMP、UMP和GMP组成或者由CMP、AMP、UMP和GMP组成，其中按重量计，各成分的比例为：CMP：65％、AMP：10％、UMP：14％以及GMP：11％。
在优选的实施方案中，本发明的核苷酸组合物基本上由CMP、AMP、UMP和GMP组成或者由CMP、AMP、UMP和GMP组成，其中按重量计，各成分的比例为：CMP：70％、AMP：8％、UMP：12％以及GMP：10％。
在上述第一方面的各个实施方案中，优选地，所述食品为婴幼儿食品，更加优选地，所述食品为乳制品的形式，例如奶粉或液态乳制品的形式，如供婴幼儿使用的奶粉或液态乳制品。
在第二方面，本发明涉及一种食品，其包含本发明的核苷酸组合物。在一优选的实施方案中，所述食品为婴幼儿食品。在更加优选的实施方案中，所述食品为乳制品的形式，例如奶粉或液态乳制品的形式，如供婴幼儿使用的奶粉或液态乳制品。
在第三方面，本发明还涉及一种制备食品的方法，所述方法包括向食品的原料中添加本发明的核苷酸组合物。在一优选的实施方案中，所述食品为婴幼儿食品。在更加优选的实施方案中，所述食品为乳制品的形式，例如奶粉或液态乳制品的形式，如供婴幼儿使用的奶粉或液态乳制品。
在第四方面，本发明还涉及本发明的核苷酸组合物在制备食品中的应用。在一优选的实施方案中，所述食品为婴幼儿食品。在更加优选的实施方案中，所述食品为乳制品的形式，例如奶粉或液态乳制品的形式，如供婴幼儿使用的奶粉或液态乳制品。在一优选实施方案中，所述食品用于提供免疫刺激效果。在另一优选实施方案中，所述食品用于促进生长发育(如胃肠道发育)及促进肠道损伤后的修复。在另一优选实施方案中，所述食品用于促进肠道有益微生物的生长。
在第五方面，本发明还涉及用于提高个体的免疫力、促进生长发育(如胃肠道发育)、促进肠道损伤后的修复和/或促进个体的肠道有益微生物的生长和/或它们的任意组合的方法，所述方法包括向所述个体施用本发明的核苷酸组合物或食品。在优选实施方案中，所述个体为人，优选人的婴幼儿。
具体实施方式
除非另外专门定义，本文使用的所有技术和科学术语都与相关领域普通技术人员的通常理解具有相同的含义。除非另外专门定义，本文中使用的比例(包括百分比)均按重量计。
核苷酸
本文所用的术语“核苷酸”指由嘌呤或嘧啶碱基、核糖或脱氧核糖以及磷酸基团组成的化合物。例如，根据糖的不同，核苷酸可以分为核糖核苷酸及脱氧核苷酸。例如，根据碱基的不同，核苷酸可以分为腺嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸、胞嘧啶核苷酸、尿嘧啶核苷酸、胸腺嘧啶核苷酸及次黄嘌呤核苷酸等。当核苷酸分子中只有一个磷酸基时，其称为一磷酸核苷酸(NMP)。5'-核苷酸的磷酸基还可进一步磷酸化生成二磷酸核苷(NDP)及三磷酸核苷(NTP)。
本文所用的术语“核苷酸”还涵盖以各种形式存在于本发明的核苷酸组合物中的胞嘧啶(C)、尿嘧啶(U)、腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)和/或次黄嘌呤(I)，例如核糖核苷、核糖核苷酸、RNA磷酸酯以及任何其他形式的衍生物或前体，只要其在体内或体外能够转化或代谢为相应的核苷酸形式。
例如，在食品添加领域，所用的核苷酸主要有CMP(胞嘧啶核苷酸)、UMP(尿嘧啶核苷酸)、AMP(腺嘌呤核苷酸)、GMP(鸟嘌呤核苷酸)、IMP(次黄嘌呤核苷酸)等。例如，目前市场上出售的5'-混合核苷酸含有5'-腺苷酸(AMP)、5'-胞苷酸(CMP)、5'-鸟苷酸(GMP)、5'-尿苷酸(UMP)和5'-肌苷酸(IMP)。通常，在组合使用的时候，这种5'-混合核苷酸可以例如以两种类型存在：一种是5'-腺苷酸和5'-胞苷酸是以游离酸的形式存在，而其他3种核苷酸以钠盐形式存在，简称两酸三钠型；另一种则均以钠盐的形式存在，简称五钠型。因此，本文所用的术语“核苷酸”还涵盖其盐的形式，例如碱金属盐或碱土金属盐，如钠盐、钾盐或钙盐等，例如一钠盐或二钠盐等，如CMPNa2、AMPNa2、UMPNa2、GMPNa2、IMPNa2和CMPK2、AMPK2、UMPK2、GMPK、IMPK2等。本领域技术人员应当理解，本发明的核苷酸组合物中的各个组分可以各自任选地且各自独立地以各种盐形式存在，包括但不限于上文提及的“两酸三钠型”；或者各个组分及其盐可以以任意组合的形式存在，例如仅GMP以盐形式存在，仅CMP以盐形式存在等。可选地，本发明的核苷酸组合物中的各个组分可以均以盐的形式存在，包括但不限于上文提及的“五钠型”。
同样，本文所用的术语“核苷酸”还涵盖其各种形式的溶剂合物(如水合物)。因此，当本发明的核苷酸组合物包含核苷酸组分的诸如上文所列的其他形式时，这些形式在组合物中的配比应当换算成其对应的核苷酸分子后计算。例如，当CMP以其二钠盐形式(CMPNa2)存在时，应当换算成CMP来计算相应的重量比。
核苷酸组合物
在一实施方案中，本发明的核苷酸组合物基本上由以下成分组成或者由以下成分组成：CMP、AMP、UMP、GMP和IMP。在另一实施方案中，本发明的核苷酸组合物基本上由以下成分组成或者由以下成分组成：CMP、AMP、UMP和GMP。
在一实施方案中，按重量计，CMP在本发明的核苷酸组合物中占58～72％，优选60～70％，例如60～65％和65～70％。应当理解，这些范围涵盖其中所有的点值，例如但不限于59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％等；以及由这些点值组成的各种亚范围，例如但不限于60～63％、60～68％、63～70％等。在具体实施方案中，按重量计，CMP在本发明的核苷酸组合物中占60％、65％或70％。
在一实施方案中，按重量计，AMP在本发明的核苷酸组合物中占6～14％，优选8～12％，例如8～10％和10～12％。应当理解，这些范围涵盖其中所有的点值，例如但不限于7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％等；以及由这些点值组成的各种亚范围，例如但不限于8～9％、8～11％、9～12％等。在具体实施方案中，按重量计，AMP在本发明的核苷酸组合物中占8％、10％或12％。
在一实施方案中，按重量计，UMP在本发明的核苷酸组合物中占10～18％，优选12～16％，例如12～14％和14～16％。应当理解，这些范围涵盖其中所有的点值，例如但不限于11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％等；以及由这些点值组成的各种亚范围，例如但不限于12～15％、14～15％等。在具体实施方案中，按重量计，UMP在本发明的核苷酸组合物中占12％、14％或16％。
在一实施方案中，按重量计，GMP在本发明的核苷酸组合物中占8～14％，优选10～12％，例如10～11％和11～12％。应当理解，这些范围涵盖其中所有的点值，例如但不限于9％、10％、11％、12％、13％等；以及由这些点值组成的各种亚范围，例如但不限于8～11％、10～14％等。在具体实施方案中，按重量计，GMP在本发明的核苷酸组合物中占10％、11％或12％。
在一实施方案中，按重量计，IMP在本发明的核苷酸组合物中占0～2.5％，优选0～2％，更优选为0％(即，本发明的核苷酸组合物不含IMP)。应当理解，这些范围涵盖其中所有的点值，例如但不限于1％、2％等；以及由这些点值组成的各种亚范围，例如但不限于0～1％、1～2％等。
本领域技术人员应当理解，上述对各种组分的所列的范围和具体值可以任意地互相组合和选择，只要这样的组合满足所选的各种组分之和为100％的条件。例如，在本发明的核苷酸组合物中，当CMP的含量为60～70％如60～65％或65～70％时，AMP的含量可以为8～12％如8～10％或10～12％。同样，当CMP和AMP的含量取任何上述范围时，UMP的含量可以为12～16％如12～14％或14～16％。类似地，当CMP、AMP和UMP的含量取任何上述范围时，GMP的含量可以为10～12％如10～11％或11～12％。基于同样的原则，当CMP、AMP、UMP和GMP的含量取任何上述范围时，IMP的含量可以为0～2.5％如0～2％或0％(即，本发明的核苷酸组合物不含IMP)。本领域技术人员应当理解，上述组合的选择条件应当满足的条件是所选的各种组分之和为100％。
本文所用的表述“基本上由…组成”表示除了所限定的核苷酸组分以外，若需要，本发明的核苷酸组合物还可以任选地包含食品或生理学上接受的载体、赋形剂或辅剂，例如防腐剂、抗氧化剂、粘合剂、增稠剂、稀释剂等以及可能存在的各种杂质。这些载体、赋形剂或辅剂和杂质对于组合物中的活性成分(核苷酸组分)而言是惰性的，其存在或量并不会干扰或明显干扰所述活性成分的功能。而且，当计算本发明的核苷酸组合物中各核苷酸组分的配比时，不考虑这些可能存在的载体、赋形剂或辅剂和杂质。另外，本领域技术人员应当理解，表述“基本上由…组成”涵盖“由…组成”的含义。
本文所用的术语“任选(地)”指可以存在或不存在。例如，所述“任选地包含食品或生理学上接受的载体、赋形剂或辅剂”指本发明的核苷酸组合物可以包含上述载体、赋形剂或辅剂，也可以不包含上述载体、赋形剂或辅剂。
食品
本文所用的术语“食品”具有本领域普通技术人员通常理解的含义，例如其表示可供人类食用或饮用的物质，包括加工食品、半成品和未加工食品等。
本文所用的术语“婴幼儿食品”通常指除了母乳以外的供婴幼儿使用的食品，其通常为了婴幼儿生长发育的需要而添加各种成分，例如核苷酸、脂肪酸、维生素、碳水化合物、植物油、微量元素等，例如本发明的核苷酸组合物。这样的食品的实例有乳制品(例如奶粉和液态乳制品)、果泥、米粉等。根据本发明的具体实施方案，所述婴幼儿食品为乳制品的形式，如奶粉或液态乳制品，例如添加了本发明的核苷酸组合物的婴幼儿奶粉或液态乳制品。
本文所用的术语“婴幼儿”通常指0～3岁的人个体。但是，本发明的核苷酸组合物的应用并不局限于这一年龄段。若需要，可以将本发明的核苷酸组合物或包含所述核苷酸组合物的食品施用于更大年龄的人个体，例如4岁、5岁、6岁、7岁、8岁、9岁、10岁或更大。
在另一方面，本发明还提供了一种食品的制备方法，其包括向所述食品中添加本发明的核苷酸组合物。在一实施方案中，所述食品为婴幼儿食品。在优选的实施方案中，所述食品为乳制品的形式，例如奶粉或液态乳制品的形式，如供婴幼儿使用的奶粉或液态乳制品。
在整个说明书中，术语“液态乳制品”和“液态奶”或“液态乳”具有相同的含义，可以互换使用，并且意图表示以液体形式存在的乳制品，其包含供人体使用的各种营养成分和能量，例如下文所示的那些成分。
根据一实施方案，本发明的核苷酸组合物在制备本发明所述的奶粉中的用量为0.2～0.58重量份(基于1000重量份的奶粉)。例如，本发明的奶粉，基于1000重量份的所述奶粉，包含：脱脂奶粉120～160重量份、乳糖240～280重量份、脱盐乳清粉180～210重量份、乳清蛋白粉(WPC34％)90～120重量份、葵花籽油155～180重量份、玉米油35～55重量份、大豆油40～60重量份、本发明的核苷酸组合物0.35～0.5重量份、大豆磷脂1～2.5重量份、双歧杆菌0.1～0.15重量份、低聚果糖粉4～5重量份、低聚半乳糖浆10～12重量份，营养学上可接受量的维生素以及营养学上可接受量的微量元素补充剂。
在一具体实施方案中，本发明的奶粉主要的制备工艺流程包括：配料、预热、均质、浓缩杀菌、喷雾干燥、干混，然后获得最终产品，其中将本发明的核苷酸组合物和DHA、ARA及双歧杆菌一起添加至喷雾干燥后奶粉中，然后混合。
根据另一实施方案，本发明的液态乳制品包含以下成分(以每100g液态乳制品计)：乳铁蛋白以外的蛋白质1.75g～4.26g、脂肪1.75g～4.97g、能量250kJ～355kJ、维生素A 42.5μg～191.7μg RE、维生素D 0.625μg～2.6625μg、维生素E≥0.375mgα-TE、维生素K1≥2.5μg、维生素B1≥27.5μg、维生素B2≥27.5μg、维生素B6≥27.5μg、维生素B12≥0.1μg、烟酸(或烟酰胺)≥275μg、叶酸≥2.5μg、泛酸≥175μg、维生素C≥4.5mg、生物素≥1μg、钠≤71mg、钾45mg～244.95mg、铜17.5μg～124.25μg、镁≥3.5mg、铁0.625mg～1.775mg、锌0.25mg～1.065mg、钙≥42.5mg、磷≥20.75mg、碘≥3.5μg、氯≤184.6mg、乳铁蛋白5～13mg和碳水化合物，其中本发明的核苷酸的量为2.64～7.66mg，并且碳水化合物的量使得其与蛋白质和脂肪一共提供的能量为250kJ～355kJ。
所用的脂肪由无水奶油、大豆油、玉米油、葵花籽中的一种或多种以任意比例和组合提供。另外，为了提高液态奶体系的稳定性等性质，还可以向其中添加一些食品上可接受的食品添加剂，如乳化稳定剂等。在本发明中，优选使用的食品添加剂及量例如但不限于：卡拉胶0.005重量％～0.05重量％、单硬脂酸甘油酯0.01重量％～1重量％、瓜尔豆胶0.01重量％～0.1重量％、刺槐豆胶0.01重量％～0.1重量％中的一种或者任意多种的组合。
最后，本发明还涉及本发明的核苷酸组合物在制备食品中的应用。在一实施方案中，所述食品为婴幼儿食品。在优选的实施方案中，所述食品为乳制品的形式，例如奶粉或液态乳制品的形式，如供婴幼儿使用的奶粉或液态乳制品。
免疫刺激
在一优选实施方案中，本发明的核苷酸组合物和包含所述组合物的食品经食用后可以提供免疫刺激效果。本文所述的“免疫刺激”效果指具有提高个体的免疫功能的作用，例如表现在提高淋巴细胞转化功能，增强巨噬细胞吞噬功能，增强NK细胞活性，提高免疫应答和抗体生成等方面，如说明书的实施例部分所提供的那些效果。在优选的实施方案中，所述个体为人，优选人的婴幼儿。
促进生长发育及促进肠道损伤后的修复
本发明的核苷酸组合物和包含所述组合物的食品经食用后可以促进个体的生长发育(如胃肠道发育)及促进小肠上皮细胞的生长和损伤后的修复。例如，促进肠道细胞的生长发育及成熟，修复小肠的损伤，保护小肠细胞免受自由基的攻击，降低小肠炎症的发生等。发明人在体外实验中观察到，本发明的核苷酸组合物可促进肠上皮细胞生长，提高肠上皮细胞的增殖分化率，提高麦芽糖酶及蔗糖酶活性，促进肠上皮细胞成熟，促进肠上皮细胞的损伤后迁移。在优选的实施方案中，所述个体为人，优选人的婴幼儿。
促进肠道有益微生物的生长
本发明的核苷酸组合物和包含所述组合物的食品经食用后可以促进个体的肠道有益微生物(如双歧杆菌及乳酸杆菌)的生长，例如体现在有利于双歧杆菌的生长，如提高肠道及粪便中双歧杆菌及乳酸杆菌含量(这两种菌群可抑制厌酸型病原菌和大肠杆菌的繁殖)，降低肠道有害菌的比例，从而有益于个体的健康。对此，发明人研究发现，在肠道环境中或类似肠道环境的体外环境中添加该组合物，通过观察环境中益生菌和乳酸菌的增殖数量，尤其是双歧杆菌的增殖数量，发现本发明的核苷酸组合物对肠道有益微生物显示出显著的促生长作用。在优选的实施方案中，所述个体为人，优选人的婴幼儿。
实施例
实施例1：免疫刺激效果
本实施例意图证实本发明的核苷酸组合物在免疫刺激方面的效果，其原理和步骤参见“保健食品检验与评价技术规范(2003年版)”第二部分“功能学检验方法”第一章的规定和要求。
1.材料与方法
1.1.主要试剂
本实施例中所用的主要试剂有：RPMI-1640培养基(Gibco)；胎牛血清(Gibco)；刀豆蛋白A(ConA)(Sigma)；淋巴细胞分离液、全血及组织稀释液、细胞洗涤液(天津市灏洋生物制品科技有限责任公司)；5％鸡红细胞悬液(实验室制备)；MTT试剂盒、Hank's液(碧云天生物技术研究所)；Giemsa染液(珠海贝索生物技术有限公司)；EDTA抗凝管(BD)；96孔细胞培养板(Corning)；百呈牌牛初乳胶囊(上海孚正生物科技有限公司)；核苷酸样品(南京同凯兆业)。
1.2.主要仪器设备
CO2培养箱(三洋MCO-18AIC(UV))；超净工作台(AIRTECH)；倒置显微镜(OLYMPUS)；日立水平离心机(himac-CT6EL)；酶标仪(BIO-RAD Model680)；OLYMPUS显微镜(BX51)；DNP恒温培养箱(上海精宏实验设备有限公司)。
1.3.实验动物
5～6周龄雄性KM小鼠160只，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。
1.4.动物分组
使KM小鼠适应性饲养7天后，将其随机分为8组，每组20只，即空白对照组，阳性对照组，样品一的高、中、低剂量组以及比较样品的高、中、低剂量组。向每组动物分别灌胃溶解了各样品(见下文)的无菌水，空白对照组灌胃相同体积的无菌水。每天1次，连续饲喂或灌胃30天。
高剂量组的饲喂的剂量为67.37mg﹒kg-1﹒d-1，中剂量组的剂量为41.82mg﹒kg-1﹒d-1，低剂量组的剂量为23.23mg﹒kg-1﹒d-1。阳性对照组的剂量为150.17mg﹒kg-1﹒d-1。
阳性对照组：牛初乳胶囊。
实验组：
样品一：本发明的核苷酸组合物，其组成和配比(按重量计)为CMP：60％、AMP：12％、UMP：16％和GMP：12％。
比较样品：该样品为根据市售的某款添加核苷酸的婴幼儿食品中所用的核苷酸组分和配比制备的核苷酸组合物，其组成和配比(按重量计)为CMP：33.7％、AMP 20.3％、UMP 23.1％、GMP 7.6％和IMP 15.3％。
1.5.检测指标
淋巴细胞转化实验：各组于实验第38天，随机取10只小鼠，使用2mLEDTA抗凝管，摘除眼球采血，采用Ficoll密度梯度离心法，无菌分离淋巴细胞。取1mL新鲜抗凝血，将其与全血和组织稀释液以1:1混匀，然后小心加于等体积淋巴细胞分离液的液面上。用水平离心机以1500转/分钟离心15分钟，收集环状乳白色淋巴细胞层，将其用细胞洗涤液洗涤2次。用RPMI-1640完全培养液配制为1×107个/mL，然后加入96孔细胞培养板，每孔100μL，每鼠6孔，其中3孔加入ConA(终浓度为5μg/mL)，另3孔不加作为对照。在5％CO2和37℃的CO2培养箱中培养68小时后，加入MTT(5mg/mL)溶液(10μL/孔)，继续培养4小时后，每孔加入100μL Formazan(甲臜)溶液，然后在37℃的CO2培养箱内继续孵育，直至观察到Formazan全部溶解。在酶标仪上以波长570nm测定OD值，计算刺激指数(SI)：SI＝ConA刺激管OD平均值/对照管OD平均值。
腹腔巨噬细胞吞噬实验：各组于实验第38天，随机取10只小鼠，每鼠腹腔注射5％鸡红细胞悬液1mL。30分钟后，以颈椎脱臼法处死小鼠。腹腔注入l mL生理盐水，轻揉小鼠腹部1分钟，剪开腹壁皮肤，在肌肉层上开口，用吸管伸入腹腔吸取腹腔液l mL，滴加于洁净的载玻片上。将载玻片放入垫有湿纱布的搪瓷盒中，然后放入37℃培养箱孵育30分钟。取出载玻片，漂洗去除上清液和未粘附在玻片上的细胞，然后在室温下晾干，用1:1丙酮/甲醇溶液固定后，置于Giemsa染色液中，浸染15～30分钟，然后水洗并晾干。在高倍镜下计数巨噬细胞，每张玻片计数100个，分别计算吞噬百分率和吞噬指数。
1.6.统计学分析
数据均以表示，采用SPSS 13.0统计软件对数据进行方差分析，两两比较采用snk法，检验水准为α＝0.05。
2.结果
2.1.样品对淋巴细胞增殖功能的影响
表1样品对小鼠淋巴细胞增殖功能的影响(n＝10)
注：*与空白对照组相比差异显著(p<0.05)
由表1可见，样品一的高、中、低剂量组的SI值均显著高于空白对照组(p<0.05)，并且呈剂量依赖性；比较样品的高剂量组的SI值显著高于空白对照组(p<0.05)，比较样品的中、低剂量组SI值与空白对照组差异不显著(p>0.05)；样品一的低剂量组的SI值显著高于比较样品中剂量组(p<0.05)。
以上结果表明本发明的核苷酸组合物可显著提高小鼠淋巴细胞增殖功能，且效果优于比较样品。
2.2.样品对巨噬细胞吞噬功能的影响
表2样品对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响(n＝10)
注：*与空白对照组相比差异显著(p<0.05)
由表2可见，样品一的高、中、低剂量组的吞噬百分率及吞噬指数均显著高于空白对照组(p<0.05)；比较样品的高剂量组的吞噬百分率及吞噬指数显著高于空白对照组(p<0.05)，比较样品的中、低剂量组的吞噬百分率及吞噬指数与空白对照组差异不显著(p>0.05)；样品一的低剂量组的吞噬百分率及吞噬指数显著高于比较样品的中剂量组(p<0.05)。
以上结果表明本发明的核苷酸组合物(样品一)可显著提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能，且效果优于比较样品。
3.结论
从以上实验结果可知，本发明的核苷酸组合物可显著提高淋巴细胞转化功能，增强腹腔巨噬细胞吞噬功能，具有提高免疫功能的作用，且免疫调节作用显著高于比较样品。
从另一个角度而言，更强的免疫调节作用意味着以更少的剂量能够实现相同或相似的效果，这对于大规模工业生产会具有经济成本上的明显优势。
在此基础上，发明人还重复了以上实验，其中将样品一分别替换为样品二(组成和配比为CMP：65％、AMP：10％、UMP：14％和GMP：11％)和样品三(组成和配比为CMP：70％、AMP：8％、UMP：12％和GMP：10％)。对于样品二和样品三，同样获得了与样品一类似的结果。
实施例2：婴儿奶粉制备(1000公斤，干法添加)
本发明的奶粉所用的原料有：脱脂奶粉140千克、乳糖260千克、脱盐乳清粉200千克、乳清蛋白粉(WPC34％)100千克、玉米油52千克、大豆油42千克、葵花籽油170千克、低聚果糖粉4.8千克、低聚半乳糖浆12千克、复配营养素6.4千克以及2千克的大豆磷脂。将上述原料混合均匀后，经巴氏杀菌、均质、蒸发浓缩和喷雾干燥成粉状半成品，然后添加0.38千克本发明的核苷酸组合物、0.1千克双歧杆菌、4.32千克DHA、6.0千克ARA，并经过干混机混合。将混合均匀后的奶粉充氮包装即得终产品。
实施例3：婴儿奶粉制备(1000公斤，干法添加)
将脱脂奶粉150千克、乳糖250千克、脱盐乳清粉190千克、乳清蛋白粉(WPC34％)110千克、玉米油44千克、大豆油44千克、葵花籽油175千克、低聚果糖粉4.5千克、低聚半乳糖浆11千克、复配营养素7千克、2千克大豆磷脂混合均匀，然后进行巴氏杀菌、均质、蒸发浓缩和喷雾干燥，制成成粉状半成品。再添加0.5千克本发明的核苷酸组合物、0.1千克双歧杆菌、5.2千克DHA和6.7千克ARA，通过干混机混合。将混合均匀后的奶粉充氮包装即得终产品。
实施例4：婴儿奶粉食品制备(1000公斤，湿法添加)
将脱脂奶粉150千克、乳糖250千克、脱盐乳清粉190千克、乳清蛋白粉(WPC34％)110千克、玉米油43千克、大豆油44.7千克、葵花籽油178千克、低聚果糖粉4.5千克、低聚半乳糖浆11千克、复配营养素7千克、0.4千克本发明的核苷酸组合物和2千克的大豆磷脂混合均匀。然后进行巴氏杀菌、均质、蒸发浓缩和喷雾干燥制成粉状半成品。再添加0.1千克双歧杆菌、3.9千克DHA和5.4千克ARA，经过干混机混合，混合均匀后的奶粉充氮包装即得终产品。
实施例5：婴儿液态奶的制备(按100g液态乳计)
本发明的液态乳包含以下营养成分：
蛋白质2.2g、脂肪3.0g、乳糖9.0g、维生素A 80μgRE、维生素D 1.5μg、维生素E 1mgα-TE、维生素K16μg、维生素B170μg、维生素B270μg、维生素B6200μg、维生素B120.5μg、烟酸350μg、叶酸3.5μg、泛酸200μg、维生素C 7mg、生物素2μg、钠50mg、钾70mg、铜80μg、镁30mg、铁1mg、锌0.7mg、钙80mg、磷45mg、碘20μg、氯100mg、乳铁蛋白10mg以及本发明的核苷酸组合物2.7mg，其中能量为约300kJ。
脂肪由无水奶油、大豆油、玉米油、葵花籽由以任意比例组合提供，但其中以100g总配料量计，含亚油酸0.5g。
制备方法如下(原料及工艺均符合国家相关标准)：
1、原料乳验收、检验和优选。
2、(1)用温水溶解蛋白质(包括酪蛋白、乳清蛋白、乳铁蛋白)、B族维生素和维生素C以及本发明的核苷酸组合物；
(2)用温水溶解碳水化合物类原料和卡拉胶、单硬脂酸甘油酯、瓜尔豆胶等食品添加剂；用温水溶解矿物质；并用40℃～50℃的脂肪类料液溶解其它原料；然后将上述三份溶解好的料液混合均匀；
(3)将步骤(1)得到的料液通过膜过滤除菌处理、杀菌；
(4)将步骤(2)得到的混合均匀的料液通过UHT(超高温瞬时处理)灭菌处理；
(5)将上述步骤(3)和(4)得到的料液进行无菌混合，并用水定容至总配料量；
(6)将上述混合后的料液进行无菌均质；以及
(7)无菌灌装、包装。
除非另有说明，本说明书(包括权利要求书)中使用的所有表示成分、细胞培养、处理条件等的量的数字应当理解为在所有条件下受到术语“约”的修饰。因此，除非另有相反的说明，数值参数为近似值，并且可以根据通过本发明试图获得的期望特性而变化。除非另有说明，一系列元素之前的术语“至少”应当理解为指该系列中的每个元素。本领域技术人员会认识到或者能够利用不超过常规实验确定本文所述的本发明的具体实施方案的许多等同物。所附权利要求书意图涵盖这类等同物。
本领域技术人员会清楚，可以进行本发明的许多修改和变化而不背离其精神和范围。本文所述的具体实施方案仅通过实例的方式提供，并不意味着以任何方式限制。本发明的真正范围和精神通过所附权利要求书示出，说明书和实施例仅是示例性的。

Claims (19)

1.一种用作食品添加物的核苷酸组合物，其中按重量计，所述组合物基本上由CMP、AMP、UMP和GMP组成，并且各组分的比例为CMP：58～72％、AMP：6～14％、UMP：10～18％以及GMP：8～14％，条件是各种组分之和为100％。
2.权利要求1的组合物，其中各组分的比例为CMP：60～70％、AMP：8～12％、UMP：12～16％以及GMP：10～12％，条件是各种组分之和为100％。
3.权利要求1的组合物，其中各组分的比例为CMP：60～65％、AMP：10～12％、UMP：14～16％以及GMP：11～12％，条件是各种组分之和为100％。
4.权利要求1的组合物，其中各组分的比例为CMP：65～70％、AMP：8～10％、UMP：12～14％以及GMP：10～11％，条件是各种组分之和为100％。
5.权利要求1-4中任一项的组合物，其中各组分的比例为
CMP：60％、AMP：12％、UMP：16％以及GMP：12％；
CMP：65％、AMP：10％、UMP：14％以及GMP：11％；或者
CMP：70％、AMP：8％、UMP：12％以及GMP：10％。
6.一种用作食品添加物的核苷酸组合物，其中按重量计，所述组合物基本上由CMP、AMP、UMP、GMP和IMP组成，并且各组分的比例为CMP：58～70％、AMP：7.5～12.5％、UMP：12～16.5％、GMP：10～13％以及IMP：0～2.5％，条件是各种组分之和为100％。
7.权利要求6的组合物，其中各组分的比例为CMP：60～65％、AMP：8～12％、UMP：14～16％、GMP：11～12％以及IMP：0～2％，条件是各种组分之和为100％。
8.权利要求1-7中任一项的组合物，其中所述食品为婴幼儿食品。
9.权利要求1-8中任一项的组合物，其中所述食品为乳制品的形式。
10.权利要求1-9中任一项的组合物，其中所述食品为奶粉或液态乳制品的形式。
11.一种食品，其包含权利要求1-10中任一项的核苷酸组合物。
12.权利要求11的食品，其为婴幼儿食品。
13.权利要求11或12的食品，其中所述食品为乳制品的形式。
14.权利要求11-13中任一项的食品，其中所述食品为为奶粉或液态乳制品的形式。
15.权利要求1-10中任一项的核苷酸组合物在制备食品中的应用。
16.权利要求15的应用，其中所述食品为婴幼儿食品。
17.权利要求15或16的应用，其中所述食品为乳制品的形式。
18.权利要求15-17中任一项的应用，其中所述食品为奶粉或液态乳制品的形式。
19.权利要求15-18中任一项的应用，其中所述食品用于实现以下方面的效果：提供免疫刺激效果、促进生长发育、促进肠道损伤后的修复、促进肠道有益微生物的生长和/或它们的任意组合。
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