CN105878875A - 一种用于防治禽坏死性肠炎的中药超微粉颗粒剂及其制备方法 - Google Patents
一种用于防治禽坏死性肠炎的中药超微粉颗粒剂及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开一种防治禽坏死性肠炎的中药超微粉颗粒剂及其制备方法,旨在提供一种用于防治由魏氏梭菌引起的鸡坏死性肠炎的中药组合物。包括以下质量份数的组分:穿心莲、三颗针,马齿苋,诃子,百部,乌梅,黄芪,甘草,六神曲,菊苣,均为纯天然中药材,资源广泛充足,易制备、成本低,经超微粉碎并制成颗粒后可增加适口性,拌料或饮水给药,提高中药的药效,并调节肠道菌群,对禽坏死性肠炎有较好的疗效。与目前常用的药物相比,具有安全性高、疗效好、无残留等优点,保证了动物源性食品安全和人类身体健康,是一种很好的治疗禽坏死性肠炎的产品。
Description
技术领域
本发明属于兽药领域,涉及一种中药超微粉颗粒制剂,特别是一种用于防治禽坏死性肠炎的中药超微粉颗粒剂及其制备方法。
背景技术
产气荚膜梭菌,又称魏氏梭菌,是一种革兰氏阳性厌氧芽孢杆菌,广泛的存在于土壤、水、空气等禽类生活的周边环境中。产气荚膜梭菌是鸡肠道中的常在菌群,任何日龄的鸡体内都可以分离到这种细菌,甚至从鸡毛、蛋壳中也可以分离得到。在正常情况下,其生存在肠道之中并不会发病,但是当肠道环境改变或者肠道受到损害的情况下,肠道正常菌群破坏,产气荚膜梭菌就会大量的增殖,并产生魏氏梭菌外毒素,使感染动物中毒死亡。
感染禽类的魏氏梭菌主要是属于A型,其次也有C型。禽类感染魏氏梭菌会发生临床型疾病(NE)和亚临床型疾病。临床型坏死性肠炎(NE)主要危害2-5周龄的雏鸡,临床特征为急性死亡和高死亡率,给养禽业带来巨大的经济损失。而亚临床型疾病主要表现为肠粘膜局灶性坏死、肝炎或胆管性肝炎,这将会影响禽产品的加工。另外,魏氏梭菌还能引起人类食物传播性疾病和引起其他动物发病。
目前疫苗不能有效预防控制禽坏死性肠炎,抗菌药物防治仍是控制该类疾病的主要手段,如硫酸新霉素、甲硝唑、痢菌净、庆大霉素等。但是,目前国家限制了甲硝唑、痢菌净等药物的使用,其他抗菌药物由于滥用及不正确使用,耐药性的产生已经使许多抗生素降低或失去治疗作用,再加上超剂量的反复使用抗生素,很容易造成机体的菌群失调,抵抗力下降,并出现了多重耐药菌株且药物残留问题越来越突出。因此,中药以其残毒低、能调节机体免疫机能且不易产生耐药性等优点而在防治疾病中的作用日益显现。中药抗菌、消炎、清热解毒可能是治疗禽坏死性肠炎更为有效的办法。
我国应用中药防治人畜的各种疾病已有2000多年的历史,积累了丰富的中医药知识和临床经验。中药属于纯天然物质,与抗生素、化学合成药物相比,具有毒副作用小、不易残留、不污染环境、耐药性不明显等特点。超微粉碎是近年来迅速发展起来的一项高新技术。利用先进的超微粉碎技术,研制开发兽用天然药物超微粉制剂,该类制剂与传统中药散剂相比,具有有效成分释放速度快、生物利用率高、临床应用效果显著、单位公斤体重用量少、降低原料成本等特点。中药经超微粉碎后可直接制粒,有助于开发兽用的颗粒剂、胶囊剂、片剂等,并可简化制粒压片工艺。本发明根据中医药理论和禽坏死性肠炎发病病因,合理利用中草药功能主治配伍而研制开发的一种预防和治疗禽坏死性肠炎的中兽药及其制备方法。该发明药物为中药超微粉颗粒剂,具有质量稳定、运输、贮存、携带、应用都比较方便等特点。
发明内容
本发明是为了解决抗生素和化学合成药物可能引起的药物残留、耐药性及药效低等问题,提供一种能够迅速、有效防治禽坏死性肠炎的药物组合物。
本发明的第二个目的是为了克服传统中药散剂用量大、费用高、不能使药效得到充分发挥的问题,提供一种天然、无药残、无毒副作用、服用量减少、疗效好的对禽坏死性肠炎有显著防治效果的中药组合物的超微粉颗粒的制备方法。
本发明的第三个目的是提供一种防治禽坏死性肠炎的中药组合物超微粉颗粒的应用。
本发明通过以下技术方案来实现:一种用于防治禽坏死性肠炎的中药超微粉颗粒剂,由下列重量份的活性成分制备而成:穿心莲80-130份,三颗针50-80份,马齿苋50-80份,诃子50-80份,百部50-80份,乌梅30-50份,黄芪30-50份,甘草20-40份,六神曲20-40份,菊苣20-40份。
优选地,所述的用于防治禽坏死性肠炎的中药超微粉颗粒剂,由下列重量份的活性成分制备而成:穿心莲90-120份,三颗针50-70份,马齿苋50-70份,诃子50-70份,百部50-70份,乌梅35-45份,黄芪35-45份,甘草20-30份,六神曲25-35份,菊苣25-35份。
一种用于防治禽坏死性肠炎的中药超微粉颗粒剂及其制备方法,步骤是:
(1)将组方中的各种成分分别经初级粉碎后,在加入超微粉碎机中粉碎至500目筛通过率≥95%,制得各种组分的超微粉。
(2)按重量称取各组分超微粉,穿心莲90-120份,三颗针50-70份,马齿苋50-70份,诃子50-70份,百部50-70份,混合5-15分钟至均匀。
(3)按重量称取各组分超微粉,乌梅35-45份,黄芪35-45份,甘草20-30份,六神曲25-35份,菊苣25-35份,混合5-15分钟至均匀。
(4)将上述(2)、(3)步骤制得混合物合并于混合机中,混合5-15分钟至均匀;加入糖粉(约为制各量的1/3-1/2)及其它辅料边搅拌边加入适量70%乙醇,待软材合格后,通过摇摆式制粒机(12-14目)挤出制粒,经干燥后,整粒、装袋,即得颗粒产品。
依据中兽医中君、臣、佐、使的组方原则,穿心莲具有清热、解毒、抗菌、消炎的功效,对大肠杆菌、沙门氏菌、魏氏梭菌、痢疾杆菌、坏死杆菌等各种肠道细菌及病毒均有抑杀作用,主治细菌性痢疾、肠炎等,为方中的君药。三颗针、马齿苋连用,即清热利湿又凉血解毒,对痢疾杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、沙门氏菌、魏氏梭菌等有抑制作用,主治肠道感染及赤痢、菌痢等;诃子对各种痢疾杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌有效外,其所含鞣质对肠道具有收敛作用。百部具有抗菌、润肺止咳、杀虫作用;四药合用能助君药清热解毒、抗菌、燥湿止痢,均为辅药。乌梅、黄芪、菊苣、六神曲等佐药联合使用具有敛肺、涩肠、止泻、生津、补气固表、敛疮生肌、健脾和胃、消食调中、提高免疫力、调整肠道菌群的功效。甘草作为使药,具有补脾益气、和中缓急、调和诸药的功能。
优点:
本发明相比现有技术具有以下优点:本发明提供了一种用于防治禽坏死性肠炎的中药超微粉颗粒剂制备方法,该中药超微粉颗粒剂是利用中药超微粉碎技术并添加适宜辅料制成的颗粒剂。超微粉碎可使药材所含有效成分在溶出量和溶出速率上均明显优于普通散剂,加辅料制成颗粒剂后,还具有以下优点:
1、水溶性改善:由于中药经超微粉碎后粒径变小,入水时漂浮在水面上,不易搅拌均匀,不利于动物水线饮水或灌服给药。超微粉经制粒后,可迅速入水且能在水中呈分布均匀的混悬液,方便通过饮水或灌服给药。
2、易于拌料使用:由于超微粉的粒径小质地轻,易被吹散,也不易与目前常用的畜禽颗粒料混合均匀。经制粒后易于与颗粒料混合均匀,因此超微粉制成颗粒剂方便拌料使用。
3、改善适口性:穿心莲、三颗针、百部等均味苦,经超微粉碎后有效成分溶出量增大的同时也增加了苦味,拌料或饮水给药均可导致畜禽采食量降低。经添加糖粉及其它调味辅料后制粒,可以改善药物适口性,不影响采食量。
4、利于保存:组方中部分药物经超微粉碎后,因其表面积大而增大吸湿性,且直接暴露出来的某些成分可能会遭到外界因素影响,如氧化、挥发等破坏,超微粉制成颗粒后利于有效成分的保护。
因此我们将此产品制成超微粉颗粒剂。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明做进一步详述,以下实施例只是描述性的,不是限定性的,不能以此限定本发明的保护范围。
实施例1:
一种用于防治禽坏死性肠炎的中药组合物超微粉颗粒剂及其制备方法,步骤是:
(1)取组方中的各种成分饮片,分别粉碎成100目细粉,再经超微粉碎机粉碎,至500目筛通过率≥95%,制得各种组分的超微粉。
(2)按重量称取各组分超微粉,穿心莲120g,三颗针65g,马齿苋65g,诃子60g,百部60g,混合5-15分钟至均匀。
(3)按重量称取各组分超微粉,乌梅30g,黄芪30g,菊苣25g,六神曲25g,甘草20g,混合5-15分钟至均匀。
(4)将上述(2)、(3)步骤制得混合物合并于混合机中,加入糖粉450g,调味剂50g,混合5-15分钟至均匀,再加入适量70%乙醇,待软材合格后,通过摇摆式制粒机(12-14目)挤出制粒,经干燥后,整粒、装袋,即得颗粒产品。
临床效果实证:
实例一:治疗鸡坏死性肠炎试验性临床试验
1材料与方法
1.1供试药品
本发明中药超微粉颗粒,推荐剂量1kg兑水200kg,或1kg拌料100kg;对照药物:6.5%硫酸新霉素可溶性粉。
1.2试验动物
450只1日龄健康白羽肉雏鸡,购自沈阳某种鸡场,运送至本公司实验室禽舍笼养,常规管理,饲喂全价料至10日龄,经实验室检测没有发生大肠杆菌等细菌性疾病,即可视为试验用鸡。其中100只用来做攻毒剂量预实验,其余350只试验用健康鸡分成7组,其中1、2、3组分别为攻毒组,且为本发明药物高、中、低剂量治疗组,4组为硫酸新霉素可溶性粉对照组,5组为阴性对照组(不攻毒不治疗的健康对照组),6组为阳性对照组(攻毒不治疗对照组),安全对照组(按照5倍本发明药物推荐剂量使用于健康试验鸡只)。
1.3魏氏梭菌人工感染剂量的确定
1.3.1菌种分离鉴定
无菌采集临床病鸡的肠道内容物,接种于厌氧肉肝汤中42℃厌氧培养24h,再将培养物接种于紫牛乳培养液中42℃厌氧培养6h-9h,对紫牛***裂发酵反应阳性的样品取其厌氧肉肝汤培养物接种于TSC琼脂培养基42℃厌氧培养48h,选取单个疑似菌落纯化培养,取少许分离菌株纯培养物涂片革兰染色镜检。取分离菌株纯培养物进行生化试验鉴定。提取已分离鉴定的魏氏梭菌纯培养物及参考菌株的基因组DNA,进行PCR鉴定。
1.3.2试验菌液的制备
将经PCR鉴定的魏氏梭菌接种于无菌营养肉汤进行增菌后,革兰氏染色镜检无杂菌生长,作为试验菌液,并用平板稀释法进行活菌计数约为6×109CFU/ml。
1.3.3攻毒剂量预实验
100只健康鸡,分为5组,每组20只。1-4组为感染组,各组每只鸡接种菌液0.5ml,菌量分别为1.5×109个、1.2×109个、0.9×109个、0.6×109个;5组对照组肌注0.5ml生理盐水。根据发病、病变和致死情况,最后确定接种2.4×109CFU/ml菌液0.5ml为试验攻毒量。
1.4试验方法
除阴性对照组和安全对照组外,每只鸡肌注1.2×109个魏氏梭菌。攻毒8小时,雏鸡表现精神不振、喜卧、不愿站立、停食,大部分出现下痢,严重者粪便混有血液,剖检病鸡小肠肠道肿胀充血、肠内有泡沫状液体,肠黏膜有出血点,肝脏和脾脏肿大出血等症状。将病变组织触片染色,确诊为魏氏梭菌。并马上用药,连续使用5天,观察治疗效果。
表1 试验分组、药物处理及实验处理
注:本发明中药超微粉颗粒生药含量为50%。
1.5疗效判定
治愈:在试验期间经内服给药后鸡只精神状态、食欲恢复正常,粪便较好且成形,不再出现红褐色煤焦油状稀粪等临床症状,均属治愈。
有效:在试验期间经内服给药后,完全治愈的鸡只和没有死亡但临床症状减轻者,均为有效;实验结束时,每组存活的鸡数占试验鸡数的百分率为有效率。
死亡:在试验期间出现鸡魏氏梭菌的典型症状,且经内服给药治疗后仍死亡,尸体剖检有典型的病变特征,并从肝脏、心脏分离培养出魏氏梭菌,判定为感染该菌而死亡。
增重:根据试验开始及试验结束时各组鸡只体重,计算每组试验鸡只的平均增重。相对增重率是按各用药治疗组与健康对照组的增重之比计算,其中健康对照组鸡增重率设为100%。
2试验结果
本发明药物及其他药物给药后,与感染对照组比较,各组药物均能较迅速减轻临床症状。开始内服给药后,各组鸡的治愈率、有效率、死亡率及增重见表2。
表2 各组药物对鸡魏氏梭菌的疗效比较
2.1治愈率与有效率
各组用药相比较,本发明药物高、中剂量组治愈率较高,均超过75%;有效率也较高,均超过80%。本发明低剂量组、药物对照组(硫酸新霉素可溶性粉)的治愈率、有效率均相对较低。
2.2死亡率
本发明药物高、中、低剂量组,及药物对照组的死亡率均低于阳性对照组的死亡率。且本发明药物高、中剂量组死亡率明显低于低剂量组和药物对照组。
2.3增重率
本发明药物高、中剂量组的增重率明显高于本发明低剂量组和药物对照组。
3结论
3.1本发明药物疗效
本发明药物高剂量组和中剂量组对治疗禽魏氏梭菌病疗效有差异,但不明显,考虑到养殖户的经济利益,建议本发明药物中剂量即可应用于临床治疗。
3.2安全性试验
安全对照组用药期间,鸡只精神状态、采食、粪便均正常,剖检后内脏器官及组织未见异常,增重率与阴性对照组无明显差异,说明本发明药物对靶动物鸡是安全的。
实例二:对临床感染鸡坏死性肠炎的疗效及其回肠菌群的影响
1材料与方法
1.1供试药品
本发明中药超微粉颗粒,推荐剂量1kg兑水200kg,或1kg拌料100kg;对照药物:本发明中药组合物的散剂(100目细粉混合制成),推荐剂量1kg拌料100kg;6.5%硫酸新霉素可溶性粉。
1.2试验动物
辽宁沈阳市辽中县地区某肉鸡养殖场,15日龄自然感染发病的商品代白羽肉鸡,经剖检及实验室诊断为鸡坏死性肠炎。
1.3试验方法
临床选用该鸡场330只体重在0.4-0.5kg的患病肉鸡,将患病鸡隔离单独饲养,饲喂全价饲料,并随机分为6组,每组55只,饲养环境完全相同。试验分组及药物处理见下表1。
表1 试验分组及药物处理
注:本发明中药超微粉颗粒生药含量为50%。
1.4测定指标与方法
1.4.1增重:试验开始给药前及试验结束时的清晨喂料前称各组鸡只体重,计算每组试验鸡只的平均增重。
1.4.2回肠菌群测定
分别于试验开始给药前及试验结束时的清晨喂料前每组随机抽取5只鸡,处死,打开腹腔,结扎含较多粪便的回肠两端并剪下,放入无菌20ml离心管中冷藏待测。无菌操作台内无菌称取回肠内容物0.5g,加入无菌生理盐水4.5ml,振荡3-5min,制成10-1稀释液,并依次进行10-1~10-7倍稀释。采用倾注平板法对回肠中大肠杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌、魏氏梭菌计数。大肠杆菌利用麦康凯培养基计数,乳酸杆菌利用MRS培养基计数,双歧杆菌利用TPY培养基计数,产气荚膜梭菌用TSC琼脂培养基计数。换算出每克回肠内容物菌落数以log10(cfu/g)内容物表示,计算公式如下:每克回肠内容物菌落数=log10(菌落数×稀释倍数×每次稀释取样体积)/(接种用样品体积×样品质量)。
1.5疗效判定
治愈:在试验期间经内服给药后鸡只精神状态、食欲恢复正常,粪便较好且成形,不再出现红褐色煤焦油状稀粪等临床症状,均属治愈。
有效:在试验期间经内服给药后,完全治愈的鸡只和没有死亡但临床症状减轻者,均为有效;实验结束时,每组存活的鸡数占试验鸡数的百分率为有效率。
死亡:在试验期间出现鸡魏氏梭菌的典型症状,且经内服给药治疗后仍死亡,尸体剖检有典型的病变特征,并从肝脏、心脏分离培养出魏氏梭菌,判定为感染该菌而死亡。
2试验结果
2.1各组治愈率、有效率、死亡率及增重比较
与空白对照组比较,各组药物均能较迅速减轻临床症状。给药结束后,本发明药物高剂量组和推荐剂量组的治愈率、有效率、增重均高于中药散剂高剂量组、推荐剂量组及硫酸新霉素对照组。中药散剂高剂量组、推荐剂量组治愈率、有效率、增重均高于硫酸新霉素对照组。详见表2。
表2 各组药物的疗效比较
2.2各组回肠菌群比较
表3 各组鸡只回肠菌群比较
表4 各组鸡只给药前后回肠菌群变化趋势
2.2.1各组有益菌数量比较
本发明药物高、推荐剂量组及中药散剂高剂量组的乳酸杆菌、双歧杆菌数量均比用药前增加,其余各组均呈下降趋势。本发明药物推荐剂量组乳酸杆菌、双歧杆菌数量比中药散剂两个组及硫酸新霉素组增加幅度大。
2.2.2各组有害菌数量比较
各药物组大肠杆菌均比用药前降低,以本发明药物高剂量组降低幅度较大。本发明药物高、推荐剂量组魏氏梭菌数量降低幅度较大,且4个中药组均比硫酸新霉素组魏氏梭菌数量降低幅度大。本发明药物推荐剂量组大肠杆菌、魏氏梭菌数量比中药散剂两个组及硫酸新霉素组降低幅度大。
3结论
本发明药物高、推荐剂量组比中药散剂高、推荐剂量组和硫酸新霉素组对治疗魏氏梭菌引起的禽坏死性肠炎疗效有差异,其中本发明药物推荐剂量组即可达到比中药散剂高、推荐剂量组和硫酸新霉素组更好的疗效,且对于增加肠道有益菌数量、降低有害菌数量的作用也优于中药散剂高剂量组、推荐剂量组和硫酸新霉素组。
本发明药物推荐剂量1%(含生药0.5%)拌料即可达到比本发明中药的散剂高剂量组(2%)、推荐剂量组(1%)治疗禽坏死性肠炎更好的效果,说明本发明中药组合物制成超微粉颗粒后其降低50%药量即可到达药效,并可节约成本。
实例三:治疗鸡坏死性肠炎扩大临床试验
1发病鸡群情况及诊断
辽宁营口市熊岳地区某肉鸡养殖小区,该养殖小区共有6栋鸡舍,每栋鸡舍约4000只鸡,饲养至13日龄进行法氏囊弱毒苗免疫后,其中2栋鸡舍16日龄时,陆续出现增料缓慢或减料、精神不振、排稀薄粪,素后粪便中有粘液、血丝(块)的发病情况。18日龄时死亡率突然增加到2%左右。病死鸡剖检可见小肠中后段极度胀大,内有气体,肠壁脆薄,外观见肠壁有出血斑点,肠粘膜坏死脱落,肠内充满褐色致密的伪膜,并有红棕色血样物或含有血凝块的糊状物,有腥臭味。无菌刮取病变肠粘膜部位涂片,革兰氏染色后镜检可见两端钝圆的粗短革兰氏阳性杆菌,单独或成双排列。根据鸡群发病情况及剖检症状,结合实验室诊断,符合鸡坏死性肠炎感染的症状。
2试验方法
该养殖场以往也曾多次出现过此类疾病,习惯上采用抗生素类药物进行治疗,在一定程度上可以控制死亡的持续增加,但是已产生耐药性和药物残留,且后期死淘率较大。经与该厂技术人员沟通协商后,对发病的鸡舍进行疗效对比试验。其中,一栋鸡舍采用以往曾用过的硫酸新霉素可溶性粉作为对照组;另一栋鸡舍,随机分成两个实验组,分别使用本发明药物超微粉颗粒、本发明中药组合物的散剂。实验组与对照组均统计一个疗程(5天)内的死亡率。
3试验结果:
注:本发明中药超微粉颗粒生药含量为50%。
结果,硫酸新霉素组第4日上午粪便开始改善,死亡率有所下降,一直用药到第5天,鸡舍仍有病鸡死亡现象。本发明药物超微粉颗粒组第2日下午粪便开始改善,用药第4天后,基本未再出现死亡现象。本发明药物散剂第3日下午粪便开始改善,用药第5天后,出现个别鸡只死亡现象。以上结果表明,本发明药物超微粉颗粒对鸡坏死性肠炎的治疗效果优于本发明药物散剂组及抗生素组。
后应养殖场要求,硫酸新霉素组也采用了本发明药物超微粉颗粒治疗,连用2天后有效控制了死亡。其他鸡舍用本发明药物超微粉颗粒拌料预防,剂量减半,0.5%拌料,连用5天,至45日龄出栏前未出现此类病症,进一步验证了该中药的效果。
通过上述2个临床实例,与传统中药散剂相比,本发明在防治禽坏死性肠炎用药量减少50%的情况下可达到更好的治疗效果,且在使用过程中无任何不良反应。试验证明本发明的药物在使用过程中安全、有效、无残留,尤其对调整肠道菌群效果更好,且用药量减少,降低成本,具有较好的经济效益及社会效益。
Claims (2)
1.一种用于防治禽坏死性肠炎的中药超微粉颗粒剂,其特征是由以下组分按重量份数混合配制而成:穿心莲80-130份,三颗针50-80份,马齿苋50-80份,诃子50-80份,百部50-80份,乌梅30-50份,黄芪30-50份,甘草20-40份,六神曲20-40份,菊苣20-40份。制备方法是:将上述原料经超微粉碎后混合制成颗粒制剂。
2.一种用于防治禽坏死性肠炎的中药超微粉颗粒制剂,其特征在于:它是用于预防和治疗禽坏死性肠炎疾病。
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