CN105713924A - 一种用无籽刺梨制备发酵型烟用香料的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用无籽刺梨制备发酵型烟用香料的方法。将无籽刺梨洗净后压榨，过滤，使汁液与残渣分离。利用果胶酶和糖化酶对无籽刺梨汁液进行酶解，同时将黄绿木霉HLMM?04菌株制备粗酶液，发酵无籽刺梨残渣。将酶解后的汁液与发酵后的残渣混合，经回流提取、过滤除渣、减压浓缩，得无籽刺梨发酵型香料。所述黄绿木霉HLMM?04菌株保藏号为CGMCC No.10839，具有产纤维素酶的能力。所制得的发酵型烟用香料具有明显的果香，与烟气协调性较好，具有增加烟气丰富性，改善口感的作用。

Description

一种用无籽刺梨制备发酵型烟用香料的方法

技术领域

本发明属于烟用添加剂制备技术领域，具体涉及一种以无籽刺梨为原料，利用微生物并结合酶技术生产特色烟用香料的方法。

背景技术

加香加料是卷烟工艺中的关键环节，是有效提升卷烟抽吸品质，形成卷烟特有风格的有效手段之一。目前我国烟草中添加的烟用香料大多是采用传统方法萃取再加以调配所得，虽然生产操作简单，但也存在香气单调、改善卷烟抽吸效果不明显等缺点。利用微生物发酵及酶制剂处理可以增加传统提取香料中多种香气物质的含量，提升香气丰富性，进而生产出香气丰富、高品质的卷烟，满足消费者对卷烟品质的要求。

无籽刺梨(Rosa sterilis)属蔷薇科，多年生落叶攀援性灌木，高4-6m，生长强旺。幼果长满青刺形似海参奇特美观，果实成熟金黄亮丽，老果呈橙黄色，完全成熟的果实表皮毛刺基本脱落，果肉比普通刺梨肉厚，呈艳丽的橙黄色，非常脆嫩，香甜爽口，酸味适中，其雄蕊败育，几无花粉，故名无籽刺梨。无籽刺梨营养成分丰富，经分析测定，果实含糖量较高，是普通刺梨的6倍以上，含酸较低，几无单宁，富含维生素C，SOD等抗氧化酶，胡萝卜素含量较高，还含多种矿物质营养元素。果实酸甜适宜、极少涩味，口感明显优于普通刺梨。现有技术中，未见有以无籽刺梨为底物发酵制备烟用香料的报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种以无籽刺梨为原料，利用微生物并结合酶技术，制备发酵型烟用香料的方法。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现。

除非另有说明，本发明所采用的百分数均为质量百分数。

一种用无籽刺梨制备发酵型烟用香料的方法，包括以下步骤：

(1)发酵菌株粗酶液制备：将黄绿木霉HLMM-04CGMCC No.10839菌株活化两次后，接种于装有200mL PDA液体培养基的三角瓶中，在28℃，180rpm下发酵培养5d；所述的PDA液体培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，补蒸馏水至1L，pH7.0，115℃高压灭菌15min；发酵液过滤去除菌体，取上清液缓慢加入硫酸氨至80％饱和度，4℃下静置过夜，离心收集沉淀物并溶于2mL缓冲液中，再用缓冲液进行透析，得到粗酶液备用；所述的缓冲液为：0.02mol/L Na₂HPO₄-NaH₂PO₄，pH 7.3；

(2)将无籽刺梨洗净后压榨、过滤、分离汁液与残渣；

(3)将果胶酶和糖化酶按1:1的质量比混合，然后在40℃水中溶解活化，再按0.1～0.2％质量比加入无籽刺梨汁液中，40℃酶解2～4h；

(4)在无籽刺梨残渣中加入两倍重量的水，混匀，加入备用的黄绿木霉HLMM-04粗酶液进行发酵；粗酶液添加量为无籽刺梨残渣重量的5％～10％，发酵温度为40℃，发酵时间2～4h；

(5)取酶解后的无籽刺梨汁液和发酵后的无籽刺梨残渣混合，回流提取3h，过滤除渣，将上清液减压浓缩，即得所需的发酵型烟用香料。

本发明具有以下优点：通过酶解和微生物发酵，可以增加无籽刺梨提取物的得率，丰富香气物质含量。在卷烟加香中进行应用，与烟气协调性更好，具有增加烟气丰富性，改善口感的作用。

保藏生物材料的说明

本发明的菌株，已于2015年5月22日，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCG)；该中心地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。该菌株分类命名为黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)HLMM-04，保藏号为CGMCC No.10839。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明做进一步的详细说明，但实施例并不是对本发明技术方案的限定。

实施例1

将黄绿木霉HLMM-04菌株活化两次后，接种于装有200mL PDA液体培养基(马铃薯200g，葡萄糖20g，补蒸馏水至1L，pH 7.0，115℃高压灭菌15min)的三角瓶中，在28℃，180rpm下发酵培养5d。过滤去除菌体。取上清液缓慢加入硫酸氨至80％饱和度，4℃下静置过夜，离心收集沉淀物并溶于少量缓冲液(0.02mol/L Na₂HPO₄和NaH₂PO₄的缓冲液，pH 7.3)中，用同样的缓冲液进行透析，得到粗酶液。

将无籽刺梨洗净后压榨，过滤，将汁液与残渣进行分离。

将果胶酶和糖化酶在40℃水中溶解活化后，加入无籽刺梨汁液中进行酶解，果胶酶和糖化酶添加量均为0.08％，酶解温度为40℃，酶解时间为3h。

无籽刺梨残渣中加入两倍重量的水，混匀，加入黄绿木霉HLMM-04粗酶液进行发酵。粗酶液添加量为残渣重量的8％，发酵温度为40℃，发酵时间3h。

将经果胶酶、糖化酶酶解后的无籽刺梨汁液和黄绿木霉HLMM-04菌株粗酶液发酵后的残渣混合，回流提取3h，过滤除渣，将上清液减压浓缩，即得无籽刺梨发酵烟用香料。

实施例2

重复实施例1，有以下不同点：果胶酶和糖化酶添加量均为0.05％，酶解温度为40℃，酶解时间为2h。粗酶液添加量为5％，发酵温度为40℃，发酵时间2h。

实施例3

重复实施例1，有以下不同点：果胶酶和糖化酶添加量均为0.1％，酶解温度为40℃，酶解时间为4h。粗酶液添加量为10％，发酵温度为40℃，发酵时间4h。

应用实施例1

将实施例1所得无籽刺梨发酵香料按烟丝重量的0.1％、0.2％、0.3％分别添加到烟丝上，装入干净的密封袋内，于室温下放置2h后，将烟丝于120℃烘箱中烘干，使水分含量达到11％-13％。将处理后的烟丝及对照放入恒温恒湿箱中，在温度22℃、湿度60％条件下平衡24h，手工卷制成卷烟，由评吸专家组成的评吸小组进行感官评吸。以未发酵无籽刺梨提取香料为对照。经评吸小组反复评吸，认为无籽刺梨发酵香料与对照区别明显，无籽刺梨发酵香料添加量为0.1％、0.2％时效果最佳，具有提升烟叶香气丰富性、增加酸香、果香、掩盖杂气、减少刺激的作用。评价结果见表1。

表1滇橄榄发酵香料评吸结果

Claims (1)

1.一种用无籽刺梨制备发酵型烟用香料的方法，包括以下步骤：

(1)发酵菌株粗酶液制备：将黄绿木霉HLMM-04 CGMCC No.10839菌株活化两次后，接种于装有200mL PDA液体培养基的三角瓶中，在28℃，180rpm下发酵培养5d；所述的PDA液体培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，补蒸馏水至1L，pH7.0，115℃高压灭菌15min；发酵液过滤去除菌体，取上清液缓慢加入硫酸氨至80％饱和度，4℃下静置过夜，离心收集沉淀物并溶于2mL缓冲液中，再用缓冲液进行透析，得到粗酶液备用；所述的缓冲液为：0.02mol/L Na₂HPO₄-NaH₂PO₄，pH 7.3；

(2)将无籽刺梨洗净后压榨、过滤、分离汁液与残渣；

(3)将果胶酶和糖化酶按1:1的质量比混合，然后在40℃水中溶解活化，再按0.1～0.2％质量比加入无籽刺梨汁液中，40℃酶解2～4h；

(4)在无籽刺梨残渣中加入两倍重量的水，混匀，加入备用的黄绿木霉HLMM-04粗酶液进行发酵；粗酶液添加量为无籽刺梨残渣重量的5％～10％，发酵温度为40℃，发酵时间2～4h；

(5)取酶解后的无籽刺梨汁液和发酵后的无籽刺梨残渣混合，回流提取3h，过滤除渣，将上清液减压浓缩，即得所需的发酵型烟用香料。