CN105559084A - 牡丹酵素及制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种以牡丹花、或复配牡丹皮、牡丹饼粕中的一种或两种为原料，经过物料处理、低温灭菌、研磨打浆、发酵、后熟、过滤、超高静压灭菌等制备牡丹酵素的方法，以及该方法制备出的牡丹酵素，和该牡丹酵素的应用。本发明方法制备得到的牡丹酵素利用低温灭菌、严格控制发酵温度，利用三次植入发酵菌，有效降低了牡丹酵素中有效成分的损失，抑制了其它杂菌的滋生，最大限度的保留了牡丹酵素活性。同时，牡丹酵素具有降低胆固醇、降血压、排毒养颜、抗疲劳、增强人体免疫力、调节人体生理机能等功效优势，在食品工业、保健品和医药等领域具有广阔的开发应用前景。
Description
技术领域
本发明属于食品加工技术领域，具体涉及一种牡丹酵素及其制备方法、该牡丹酵素的应用。
背景技术
牡丹（PaeoniasuffruticosaAndr.）属毛莨科芍药属，落叶灌木，具有很高的观赏价值和医药价值。中国科学院采用化学测定的结果表明，牡丹花瓣、花蕊和花粉中含有8种人体必需的氨基酸以及多种维生素、糖类和黄酮类物质，还含有多种酶、7种常量元素和5种人体所必需的微量元素，具有防癌、抗癌、调节血脂、稳定血压、排毒养颜、延缓衰老、提高人体免疫力等作用。丹皮是牡丹的干燥根皮，始载于《神农本草经》，已有2000余年的药用历史，是中国药典收藏的常用中药品种之一，性微寒，昧苦、辛，具有清热凉血、活血化淤的功效，现代药理研究显示，牡丹皮具有调节心血管***、抗惊厥、保肝、调节泌尿***、调节免疫细胞、抗菌抗炎作用等。
牡丹籽油在2011年被***批准为新资源食品，此后牡丹籽油进入了大量生产阶段。通过脱皮后采用压榨法或浸出法制备牡丹籽油后会产生大量的牡丹籽饼粕，约占牡丹籽总量的三分之一，这些籽饼粕中含有5-15%脂肪，30-40%蛋白，还含有芍药苷类、苯甲酸、多糖等活性成分。丹凤牡丹花在2013年被***批准为新食品原料，牡丹花是重要的可开发利用资源，每年除观赏外，大量牡丹鲜花，被自然飘落，白白浪费，未对其进行开发利用，造成了宝贵资源的浪费。长久以来，牡丹深加工产品的开发利用却显得严重滞后，生产附加值很低，也没有形成产业链。因此充分利用这些剩余物中的活性和营养成分对综合利用油用牡丹，提高牡丹产业附加值具有重要意义。
随着微生物研究的不断深入，酵素对人体健康的有益作用已越来越被人们所认知。酵素是一种由氨基酸组成的具有特殊生物活性的生物大分子物质，它存在于所有活的动植物体内，是维持机体正常功能，消化食物，修复组织等生命活动的一种必需物质，几乎参与所有的生命活动：思考问题，运动，睡眠，呼吸，愤怒，哭泣或者分泌荷尔蒙等都是以酵素为中心的活动结果。酵素催化剂的催化作用催动着机体的生化反应，催动着生命现象的进行。若没有酵素，生化反应将无法进行，五大营养素（碳水化合物、类脂质、蛋白质、维生素、矿物质）都将变的对机体毫无用处，生命现象将会停止。因此，酵素对生命的重要性不言而喻，甚至很多人将它称为“活着的物质”、“掌握所有生命活动的物质”。酵素具有氧化作用、分解作用、新陈代谢作用、热能作用、净化血液作用和抗菌防御作用。但在在申请人检索的范围内，以牡丹为原料的牡丹酵素产品尚未见文献报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种牡丹酵素，及制备方法和相关应用。
本发明提供一种牡丹酵素的制备方法，所述方法是以牡丹花、或复配牡丹皮、牡丹饼粕中的一种或两种为原料制备而成。进一步，所述牡丹花、牡丹皮或牡丹饼粕来源于凤丹牡丹或者紫斑牡丹。
进一步，所述牡丹酵素以牡丹花、或复配牡丹皮、牡丹饼粕中的一种或两种为原料，经过物料处理、低温灭菌、研磨打浆、发酵、后熟、过滤、超高静压灭菌，得到液体牡丹酵素。或者再经过低温真空浓缩、冷冻干燥得到固体牡丹酵素。
进一步，所述物料处理，在于将牡丹花、牡丹皮或牡丹饼粕分开处理。
优选的，所述牡丹花，是采摘自田间半开至盛开的、花朵完好、鲜嫩、无病害的牡丹花，采摘时间为上午6-10点钟、下午4点钟以后，并去除异物，在无菌水中清洗，沥干待用。
优选的，所述牡丹皮或牡丹饼粕，是将牡丹皮或牡丹饼粕干燥至水分含量≤7wt%，干燥条件为50℃以下，然后粉碎至200目以上，得牡丹皮微粉或牡丹饼粕微粉待用。
进一步，所述低温灭菌，在于将牡丹花、牡丹皮微粉或牡丹饼粕微粉，在50-75℃低温灭菌20-40min。
进一步，所述研磨打浆，在于按比例将牡丹花、或复配牡丹皮微粉、牡丹饼粕微粉中的一种或两种，添加2-5倍的无菌水，搅拌混合均匀后，将其混合物置于研磨机中，研磨成牡丹发酵液，发酵液粒度设定为80-100目，于25-30℃的环境中储藏，待用。
优选的，所述牡丹花：牡丹皮微粉和/或牡丹饼粕微粉的重量比为10：1-4。
优选的，所述牡丹花：牡丹皮微粉：牡丹饼粕微粉的重量比为20：1-3：1:4。
进一步，所述发酵，在于包括酵母菌发酵、乳酸菌发酵、纳豆菌发酵三个过程。
优选的，所述酵母菌发酵，在于接入牡丹发酵液10-15％的酵母菌种子液（每ml种子液中含酵母菌5*107CFU），搅拌均匀，在温度25-35℃发酵10-15d，当发酵体系的PH到达4.0时终止发酵，得酵母菌发酵液。
更优选的，所述酵母菌包括异常汉逊酵母、酿酒酵母、鲁氏接合酵母和威尔酵母中的一种或多种。
优选的，所述乳酸菌发酵，在于将酵母菌发酵液，加入5-10％的乳酸菌种子液（每ml种子液中含乳酸菌5*108CFU），搅拌均匀，在温度35-45℃发酵15-30d，当pH达到4.3时终止发酵，得乳酸菌发酵液。
更优选的，所述乳酸菌包括植物乳杆菌、发酵乳杆菌、肠膜明串珠菌、嗜热链球菌、双歧杆菌、保加利亚乳杆菌和嗜酸乳杆菌中的一种或多种。
优选的，所述纳豆菌发酵，在于将乳酸菌发酵液，加入8-15％的纳豆菌种子液（每ml种子液中含纳豆菌4.5*107CFU），搅拌均匀，在温度30-40℃发酵30-60d，得纳豆菌发酵液。
更优选的，所述纳豆菌是纳豆芽孢杆菌。
进一步，所述后熟，在于将纳豆菌发酵液置于8-15℃下低温贮罐保藏60-110d。
进一步，所述过滤，在于将后熟后的料液，先虹吸抽取上清液，再经0.22μm微孔滤膜板框压滤机进行过滤。
进一步，所述超高静压灭菌，在于所用设备超高静压压力为200-400Mpa，处理时间为20-40min，即得液体牡丹酵素。
进一步，所述液体牡丹酵素，经过低温真空浓缩，-40℃温度下冷冻干燥得到固体牡丹酵素。
本发明还提供一种牡丹酵素，由上述任一的方法制备而成。
进一步，所述牡丹酵素是液体牡丹酵素或者固体牡丹酵素。
优选的，所述牡丹酵素是粉末、或在粉末基础上进一步加工成颗粒、口服液、片剂、胶囊等形式。
本发明还提供一种包含上述牡丹酵素的制品。
本发明还提供一种牡丹酵素在制备制品中的用途。
优选的，所述制品是食品、保健品和美容制品等。
本发明方法制备得到的牡丹酵素利用低温灭菌或超高静压灭菌、严格控制发酵温度，有效降低了牡丹酵素中有效成分的损失，最大限度的保留了牡丹酵素活性，不含任何人工香精、色素，产品使用安全有效。利用三次植入发酵菌，有效抑制了其它杂菌的滋生，保证产品质量的稳定，同时有利于提升酵素产品的综合活性。本发明产品的有效物质不是活菌，而是活菌产生的稳定的低分子活性成分，如低分子肽、寡糖、皂苷、异黄酮等活性因子，故不需低温保存，保存期长。同时，牡丹酵素具有降低胆固醇、降血压、排毒养颜、抗疲劳、增强人体免疫力、调节人体生理机能等功效优势，在食品工业、保健品和医药等领域具有广阔的开发应用前景。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明，应当理解，这些实例不能作为本发明的限制，在不背离本发明精神和实质的情况下，所作的修改或替换均属于本发明的范围。若未特别指明，下述实施方案中的手段为本领域所熟知的常规手段。
实施例1牡丹发酵液制备。
步骤一、牡丹花采摘。
上午6-10点钟、下午4点钟以后，采摘田间半开至盛开的、花朵完好、鲜嫩、无病害的牡丹花，并去除异物，在无菌水中清洗，沥干待用。
步骤二、低温灭菌。
将牡丹花在75℃低温灭菌20min。
步骤三、研磨打浆。
选取低温灭菌后的牡丹花，添加2倍的无菌水，搅拌混合均匀后，将其混合物置于研磨机中，研磨成牡丹发酵液，发酵液粒度设定为80目，于25-30℃的环境中储藏，待用。
实施例2牡丹发酵液制备。
步骤一、牡丹花采摘。
上午6-10点钟、下午4点钟以后，采摘田间半开至盛开的、花朵完好、鲜嫩、无病害的牡丹花，并去除异物，在无菌水中清洗，沥干待用。
步骤二、低温灭菌。
将牡丹花在50℃低温灭菌40min。
步骤三、研磨打浆。
选取低温灭菌后的牡丹花，添加5倍的无菌水，搅拌混合均匀后，将其混合物置于研磨机中，研磨成牡丹发酵液，发酵液粒度设定为100目，于25-30℃的环境中储藏，待用。
实施例3牡丹发酵液制备。
步骤一、牡丹花采摘。
上午6-10点钟、下午4点钟以后，采摘田间半开至盛开的、花朵完好、鲜嫩、无病害的牡丹花，并去除异物，在无菌水中清洗，沥干待用。
步骤二、牡丹皮处理。
将牡丹皮干燥至水分含量≤7wt%，干燥条件为50℃以下，然后粉碎至200目以上，得牡丹皮微粉待用。
步骤三、低温灭菌。
将牡丹花、牡丹皮微粉，在75℃低温灭菌20min。
步骤四、研磨打浆。
按重量比10:1选取牡丹花、牡丹皮微粉，添加上述物料2倍的无菌水，搅拌混合均匀后，将其混合物置于研磨机中，研磨成牡丹发酵液，发酵液粒度设定为80目，于25-30℃的环境中储藏，待用。
实施例4牡丹发酵液制备。
步骤一、牡丹花采摘。
上午6-10点钟、下午4点钟以后，采摘田间半开至盛开的、花朵完好、鲜嫩、无病害的牡丹花，并去除异物，在无菌水中清洗，沥干待用。
步骤二、牡丹皮处理。
将牡丹皮干燥至水分含量≤7wt%，干燥条件为50℃以下，然后粉碎至200目以上，得牡丹皮微粉待用。
步骤三、低温灭菌。
将牡丹花、牡丹皮微粉，在50℃低温灭菌40min。
步骤四、研磨打浆。
按重量比10:4选取牡丹花、牡丹皮微粉，添加上述物料5倍的无菌水，搅拌混合均匀后，将其混合物置于研磨机中，研磨成牡丹发酵液，发酵液粒度设定为100目，于25-30℃的环境中储藏，待用。
实施例5牡丹发酵液制备。
步骤一、牡丹花采摘。
上午6-10点钟、下午4点钟以后，采摘田间半开至盛开的、花朵完好、鲜嫩、无病害的牡丹花，并去除异物，在无菌水中清洗，沥干待用。
步骤二、牡丹饼粕处理。
将牡丹饼粕干燥至水分含量≤7wt%，干燥条件为50℃以下，然后粉碎至200目以上，得牡丹饼粕微粉待用。
步骤三、低温灭菌。
将牡丹花、牡丹饼粕微粉，在75℃低温灭菌20min。
步骤四、研磨打浆。
按重量比10:1选取牡丹花、牡丹饼粕微粉，添加上述物料2倍的无菌水，搅拌混合均匀后，将其混合物置于研磨机中，研磨成牡丹发酵液，发酵液粒度设定为100目，于25-30℃的环境中储藏，待用。
实施例6牡丹发酵液制备。
步骤一、牡丹花采摘。
上午6-10点钟、下午4点钟以后，采摘田间半开至盛开的、花朵完好、鲜嫩、无病害的牡丹花，并去除异物，在无菌水中清洗，沥干待用。
步骤二、牡丹饼粕微粉处理。
将牡丹饼粕干燥至水分含量≤7wt%，干燥条件为50℃以下，然后粉碎至200目以上，得牡丹饼粕微粉待用。
步骤三、低温灭菌。
将牡丹花、牡丹饼粕微粉，在50℃低温灭菌40min。
步骤四、研磨打浆。
按重量比10:4选取牡丹花、牡丹饼粕微粉，添加上述物料5倍的无菌水，搅拌混合均匀后，将其混合物置于研磨机中，研磨成牡丹发酵液，发酵液粒度设定为80目，于25-30℃的环境中储藏，待用。
实施例7牡丹发酵液制备。
步骤一、牡丹花采摘。
上午6-10点钟、下午4点钟以后，采摘田间半开至盛开的、花朵完好、鲜嫩、无病害的牡丹花，并去除异物，在无菌水中清洗，沥干待用。
步骤二、牡丹皮和牡丹饼粕处理。
将牡丹皮、牡丹饼粕干燥至水分含量≤7wt%，干燥条件为50℃以下，然后粉碎至200目以上，得牡丹皮微粉和牡丹饼粕微粉待用。
步骤三、低温灭菌。
将牡丹花、牡丹皮微粉、牡丹饼粕微粉，在75℃低温灭菌20min。
步骤四、研磨打浆。
按重量比20:1:4选取牡丹花、牡丹皮微粉、牡丹饼粕微粉，添加上述物料2倍的无菌水，搅拌混合均匀后，将其混合物置于研磨机中，研磨成牡丹发酵液，发酵液粒度设定为80目，于25-30℃的环境中储藏，待用。
实施例8牡丹发酵液制备。
步骤一、牡丹花采摘。
上午6-10点钟、下午4点钟以后，采摘田间半开至盛开的、花朵完好、鲜嫩、无病害的牡丹花，并去除异物，在无菌水中清洗，沥干待用。
步骤二、牡丹皮和牡丹饼粕处理。
将牡丹皮、牡丹饼粕干燥至水分含量≤7wt%，干燥条件为50℃以下，然后粉碎至200目以上，得牡丹皮微粉和牡丹饼粕微粉待用。
步骤三、低温灭菌。
将牡丹花、牡丹皮微粉、牡丹饼粕微粉，在50℃低温灭菌40min。
步骤四、研磨打浆。
按重量比20:3:1选取牡丹花、牡丹皮微粉、牡丹饼粕微粉，添加上述物料5倍的无菌水，搅拌混合均匀后，将其混合物置于研磨机中，研磨成牡丹发酵液，发酵液粒度设定为100目，于25-30℃的环境中储藏，待用。
实施例9液体牡丹酵素制备。
步骤一、酵母菌发酵。
将实施例1-8任一牡丹发酵液，加入10％的酿酒酵母菌种子液（每ml种子液中含有酿酒酵母菌5*107CFU），搅拌均匀，在温度25-35℃发酵15d，当发酵体系的PH到达4.0时终止发酵，得酵母菌发酵液。
步骤二、乳酸菌发酵。
将酵母菌发酵液，加入10％的植物乳杆菌种子液（每ml种子液中含有植物乳杆菌5*108CFU），搅拌均匀，在温度35-45℃发酵15d，当pH达到4.3时终止发酵，得乳酸菌发酵液。
步骤三、纳豆菌发酵。
将乳酸菌发酵液，加入8％的纳豆芽孢杆菌种子液（每ml种子液中含有纳豆芽孢杆菌4.5*107CFU），搅拌均匀，在温度30-40℃发酵60d，得纳豆菌发酵液。
步骤四、后熟。
将纳豆菌发酵液置于8-15℃下低温贮罐保藏60d。
步骤五、过滤。
将后熟后的料液，先虹吸抽取上清液，再经0.22μm微孔滤膜板框压滤机进行过滤。
步骤六、超高静压灭菌。
超高静压灭菌，所用设备超高静压压力为400Mpa，处理时间为20min，即得液体牡丹酵素。
实施例10液体牡丹酵素制备。
步骤一、酵母菌发酵。
将实施例1-8任一牡丹发酵液，加入15％的异常汉逊酵母菌种子液（每ml种子液中含有异常汉逊酵母菌5*107CFU），搅拌均匀，在温度25-35℃发酵10d，当发酵体系的PH到达4.0时终止发酵，得酵母菌发酵液。
步骤二、乳酸菌发酵。
将酵母菌发酵液，加入5％的发酵乳杆菌种子液（每ml种子液中含有发酵乳杆菌5*108CFU），搅拌均匀，在温度35-45℃发酵30d，当pH达到4.3时终止发酵，得乳酸菌发酵液。
步骤三、纳豆菌发酵。
将乳酸菌发酵液，加入15％的纳豆芽孢杆菌种子液（每ml种子液中含有纳豆芽孢杆菌4.5*107CFU），搅拌均匀，在温度30-40℃发酵30d，得纳豆菌发酵液。
步骤四、后熟。
将纳豆菌发酵液置于8-15℃下低温贮罐保藏110d。
步骤五、过滤。
将后熟后的料液，先虹吸抽取上清液，再经0.22μm微孔滤膜板框压滤机进行过滤。
步骤六、超高静压灭菌。
超高静压灭菌，所用设备超高静压压力为200Mpa，处理时间为40min，即得液体牡丹酵素。
实施例11液体牡丹酵素制备。
步骤一、酵母菌发酵。
将实施例1-8任一牡丹发酵液，加入12％的混合酵母菌种子液，其中，混合酵母菌种子液中鲁氏接合酵母菌和威尔酵母菌体积比为1:1（鲁氏接合酵母菌种子液中每mL含有鲁氏接合酵母菌5×107cfu，威尔酵母菌种子液中每mL含有威尔酵母菌5×107cfu），搅拌均匀，在温度25-35℃发酵15d，当发酵体系的PH到达4.0时终止发酵，得酵母菌发酵液。
步骤二、乳酸菌发酵。
将酵母菌发酵液，加入8％的肠膜明串珠菌种子液（每ml种子液中含有肠膜明串珠菌5*108CFU），搅拌均匀，在温度35-45℃发酵15d，当pH达到4.3时终止发酵，得乳酸菌发酵液。
步骤三、纳豆菌发酵。
将乳酸菌发酵液，加入8％的纳豆芽孢杆菌种子液（每ml种子液中含有纳豆芽孢杆菌4.5*107CFU），搅拌均匀，在温度30-40℃发酵60d，得纳豆菌发酵液。
步骤四、后熟。
将纳豆菌发酵液置于8-15℃下低温贮罐保藏60d。
步骤五、过滤。
将后熟后的料液，先虹吸抽取上清液，再经0.22μm微孔滤膜板框压滤机进行过滤。
步骤六、超高静压灭菌。
超高静压灭菌，所用设备超高静压压力为400Mpa，处理时间为20min，即得液体牡丹酵素。
实施例12液体牡丹酵素制备。
步骤一、酵母菌发酵。
将实施例1-8任一牡丹发酵液，加入10％的酿酒酵母菌种子液（每ml种子液中含有酿酒酵母菌5*107CFU），搅拌均匀，在温度25-35℃发酵10d，当发酵体系的PH到达4.0时终止发酵，得酵母菌发酵液。
步骤二、乳酸菌发酵。
将酵母菌发酵液，加入10％的嗜热链球菌种子液（每ml种子液中含有嗜热链球菌5*108CFU），搅拌均匀，在温度35-45℃发酵30d，当pH达到4.3时终止发酵，得乳酸菌发酵液。
步骤三、纳豆菌发酵。
将乳酸菌发酵液，加入15％的纳豆芽孢杆菌种子液（每ml种子液中含有纳豆芽孢杆菌4.5*107CFU），搅拌均匀，在温度30-40℃发酵30d，得纳豆菌发酵液。
步骤四、后熟。
将纳豆菌发酵液置于8-15℃下低温贮罐保藏110d。
步骤五、过滤。
将后熟后的料液，先虹吸抽取上清液，再经0.22μm微孔滤膜板框压滤机进行过滤。
步骤六、超高静压灭菌。
超高静压灭菌，所用设备超高静压压力为200Mpa，处理时间为40min，即得液体牡丹酵素。
实施例13液体牡丹酵素制备。
步骤一、酵母菌发酵。
将实施例1-8任一牡丹发酵液，加入15％的异常汉逊酵母菌种子液（每ml种子液中含有异常汉逊酵母菌5*107CFU），搅拌均匀，在温度25-35℃发酵15d，当发酵体系的PH到达4.0时终止发酵，得酵母菌发酵液。
步骤二、乳酸菌发酵。
将酵母菌发酵液，加入5％的双歧杆菌种子液（每ml种子液中含有双歧杆菌5*108CFU），搅拌均匀，在温度35-45℃发酵15d，当pH达到4.3时终止发酵，得乳酸菌发酵液。
步骤三、纳豆菌发酵。
将乳酸菌发酵液，加入8％的纳豆芽孢杆菌种子液（每ml种子液中含有纳豆芽孢杆菌4.5*107CFU），搅拌均匀，在温度30-40℃发酵60d，得纳豆菌发酵液。
步骤四、后熟。
将纳豆菌发酵液置于8-15℃下低温贮罐保藏60d。
步骤五、过滤。
将后熟后的料液，先虹吸抽取上清液，再经0.22μm微孔滤膜板框压滤机进行过滤。
步骤六、超高静压灭菌。
超高静压灭菌，所用设备超高静压压力为400Mpa，处理时间为20min，即得液体牡丹酵素。
实施例14液体牡丹酵素制备。
步骤一、酵母菌发酵。
将实施例1-8任一牡丹发酵液，加入12％的混合酵母菌种子液，其中混合酵母菌种子液中，鲁氏接合酵母菌和威尔酵母菌体积比为1:1（鲁氏接合酵母菌种子液中每mL含有鲁氏接合酵母菌5×107cfu，威尔酵母菌种子液中每mL含有威尔酵母菌5×107cfu），搅拌均匀，在温度25-35℃发酵10d，当发酵体系的PH到达4.0时终止发酵，得酵母菌发酵液。
步骤二、乳酸菌发酵。
将酵母菌发酵液，加入8％的混合乳酸菌种子液，其中混合乳酸菌种子液中，保加利亚乳杆菌和嗜酸乳杆菌体积比为3:2（保加利亚乳杆菌种子液中每mL含有保加利亚乳杆菌5×108cfu，嗜酸乳杆菌种子液中每mL含有嗜酸乳杆菌5×108cfu），搅拌均匀，在温度35-45℃发酵30d，当pH达到4.3时终止发酵，得乳酸菌发酵液。
步骤三、纳豆菌发酵。
将乳酸菌发酵液，加入15％的纳豆芽孢杆菌种子液（每ml种子液中含有纳豆芽孢杆菌4.5*107CFU），搅拌均匀，在温度30-40℃发酵30d，得纳豆菌发酵液。
步骤四、后熟。
将纳豆菌发酵液置于8-15℃下低温贮罐保藏110d。
步骤五、过滤。
将后熟后的料液，先虹吸抽取上清液，再经0.22μm微孔滤膜板框压滤机进行过滤。
步骤六、超高静压灭菌。
超高静压灭菌，所用设备超高静压压力为200Mpa，处理时间为40min，即得液体牡丹酵素。
实施例15固体牡丹酵素制备。
将实施例9-14任一液体牡丹酵素，经过低温真空浓缩，-40℃温度下冷冻干燥得到固体牡丹酵素。
一、为了比较不同菌种发酵制得的牡丹酵素的营养物质差异，以实施例4的牡丹发酵液为例，我们测定了各个实施例中牡丹酵素蛋白、总酚、总黄酮、总多糖等主要营养物质的含量，及牡丹酵素的抗氧化性。
使用不同菌种的牡丹酵素主要营养物质和抗氧化性。
指标说明。
1、粗蛋白质含量采用微量凯氏定氮法。
2、总酚测定采用福林比色发。
3、总黄酮测定采用液相色谱法。
4、总多糖测定采用蒽酮比色法。
5、还原糖测定采用DNS比色法。
6、抗氧化性采用DPPH方法，以对自由基氧的清除率作为指标，检测其抗氧化性。
7、实施例9的牡丹酵素是以实施例4的牡丹发酵液为原料举例说明，即实施例9（4）的样本为实施例4所制备的牡丹发酵液，其他举例参照上述格式。
结果显示，对同一种牡丹发酵液，经过我们发明所利用的不用菌种协同发酵，牡丹酵素中的蛋白、总酚、总黄酮、总多糖等主要营养物质有了显著的提高。优选的，在酵母菌发酵阶段，和使用单一菌种发酵的实施例9、10、12、13相比，使用鲁氏接合酵母菌和威尔酵母菌混合菌发酵的实施例11，牡丹酵素中的蛋白、总酚、总黄酮、总多糖、DPPH抑制率得到了显著性提高（p<0.05）；在乳酸菌发酵阶段，和使用单一菌种发酵的实施例9-13相比，使用保加利亚乳杆菌和嗜酸乳杆菌混合菌发酵的实施例14，牡丹酵素中的蛋白、总酚、总黄酮、总多糖、DPPH抑制率得到了显著性提高（p<0.05）。所以，多种菌的协同作用更有利于牡丹酵素中营养成分和活性成分的释放，提高其营养利用率和抗氧化性，最大限度的保留了牡丹酵素活性。
二、为了比较不同原料制得的牡丹酵素的营养物质差异，我们测定了各个实施例中牡丹酵素蛋白、总酚、总黄酮、总多糖等主要营养物质的含量，及牡丹酵素的抗氧化性。
不同原料的牡丹酵素主要营养物质和抗氧化性。
指标说明。
1、表中各种参数的测定方法参照第一部分。
2、实施例9的牡丹酵素分别以实施例1-8的牡丹发酵液为原料举例说明，即实施例9（1）的样本为实施例1所制备的牡丹发酵液，其他举例参照上述格式；实施例15[9(1)]的固体牡丹酵素是以实施例9制备的液体牡丹酵素（以实施例1的牡丹发酵液为原料举例说明）为原料举例说明，其他举例参照上述格式，将固体牡丹酵素按1：10的料液比加无菌水溶解测定。
结果显示，与常见的沙棘酵素相比，通过本发明的制备方法得到的牡丹酵素，含有大量的蛋白、总酚、总黄酮、总多糖等主要营养物质，对DPPH自由基的清除率也较高，在食品工业、保健品和医药等领域具有广阔的开发应用前景。
三、为了比较超高静压灭菌的效果，以实施例1的牡丹发酵液为例，我们测定了在实施例9中替换使用普通高温灭菌营养成分和感官的差异。
超高静压灭菌和高温灭菌的差异。
指标说明。
1、表中各种参数的测定方法参照第一部分。
2、细菌总数按GB4789.2-2010的方法进行测定。
结果显示，与高温灭菌相比，超高静压灭菌在保证灭菌效果的前提下，通过超高静压灭菌制备方法得到的牡丹酵素，含有更多的总酚、总黄酮、总多糖等主要营养物质，感官效果更好，所以，超高静压灭菌更好了保持的牡丹酵素的原有风味、色泽和营养价值。
Claims (10)
1.一种牡丹酵素的制备方法，其特征在于，所述牡丹酵素是以牡丹花、或复配牡丹皮、牡丹饼粕中的一种或两种为原料，经过物料处理、低温灭菌、研磨打浆、发酵、后熟、过滤、超高静压灭菌制备而成液体牡丹酵素，或者再经过低温真空浓缩、冷冻干燥得到固体牡丹酵素。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述发酵包括酵母菌发酵、乳酸菌发酵、纳豆菌发酵三个过程，依次为
（1）酵母菌发酵过程，接入牡丹发酵液10-15％的酵母菌种子液（每ml种子液中含酵母菌5*107CFU），搅拌均匀，在温度25-35℃发酵10-15d，当发酵体系的PH到达4.0时终止发酵，得酵母菌发酵液；
（2）乳酸菌发酵过程，将酵母菌发酵液加入5-10％的乳酸菌种子液（每ml种子液中含乳酸菌5*108CFU），搅拌均匀，在温度35-45℃发酵15-30d，当pH达到4.3时终止发酵，得乳酸菌发酵液；
（3）纳豆菌发酵过程，将乳酸菌发酵液加入8-15％的纳豆菌种子液（每ml种子液中含纳豆菌4.5*107CFU），搅拌均匀，在温度30-40℃发酵30-60d，得纳豆菌发酵液。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述酵母菌包括异常汉逊酵母、酿酒酵母、鲁氏接合酵母和威尔酵母中的一种或多种。
4.如权利要求2-3任一所述的制备方法，所述乳酸菌包括植物乳杆菌、发酵乳杆菌、肠膜明串珠菌、嗜热链球菌、双歧杆菌、保加利亚乳杆菌和嗜酸乳杆菌中的一种或多种。
5.如权利要求1-4任一所述的制备方法，所述后熟，在于将纳豆菌发酵液置于8-15℃下低温贮罐保藏60-110d。
6.如权利要求1-5任一所述的制备方法，所述超高静压灭菌，在于所用设备超高静压压力为200-400Mpa，处理时间为20-40min。
7.权利要求书1-6任一制备方法获得的牡丹酵素。
8.如权利要求7所述的牡丹酵素，其特征在于，所述牡丹酵素是液体牡丹酵素或者固体牡丹酵素，优选的，所述牡丹酵素是粉末、或在粉末基础上进一步加工成颗粒、口服液、片剂、胶囊等形式。
9.一种包含权利要求7-8任一牡丹酵素的制品，优选的，所述制品是食品、保健品和美容制品等。
10.权利要求7-8任一牡丹酵素在制备制品中的用途，优选的，所述制品是食品、保健品和美容制品等。
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