CN105349272B - 一种用于微量移液针的清洗剂及其配制方法和使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于微量移液针的清洗剂及其配制方法和使用方法，该清洗剂包括0.1~1%（质量/体积）的日落黄色素和0.1~1%（体积/体积）的TritonX 100，溶剂为水。本发明的清洗剂采用食用色素日落黄色素和温和表面活性剂TritonX 100按适当比例配制而成，相比超纯水的***液，该清洗剂能够彻底清洗干净残留的核酸样品，避免多种不同核酸探针交替点样过程中造成的交叉污染；相比强酸或强碱性的清洗剂，本发明的清洗剂不会腐蚀微量移液针而导致其寿命缩短。
Description
技术领域
本发明涉及微量移液针技术领域，尤其涉及一种用于微量移液针的清洗剂及其配制方法和使用方法。
背景技术
非接触式微量点样仪的一个关键部件是压电式微量移液针，该针做工精细，容易损坏，价格昂贵。在使用该类点样仪点制核酸芯片时，由于核酸样品种类往往比较多，压电式微量移液针在不同样品尤其是高浓度样品之间切换时，会有样品残留在针头内外壁从而导致样品之间交叉污染的现象。存在交叉污染，核酸芯片即不合格。解决该问题需借助针头清洗剂，现在市面上行之有效的针头清洗剂较少，效果较好的，大多都具有强酸或强碱性，而长期使用这些强酸碱性洗涤液会导致针头使用寿命大大缩短，无形中增加了使用成本。而以超纯水为***液清洗微量移液针的方式，往往不能彻底洗净残留的核酸样品，依然存在一定程度的交叉污染现象。
发明内容
本发明提供一种用于微量移液针的清洗剂，既能彻底清洗掉残留在针头内的核酸样品又具有酸碱性适中的特性，本发明还提供该清洗剂的配制方法和使用方法。
根据本发明的第一方面，本发明提供一种用于微量移液针的清洗剂，该清洗剂包括0.1～1％(质量/体积)的日落黄色素和0.1～1％(体积/体积)的TritonX 100，溶剂为水。
作为本发明的优选方案，上述溶剂为超纯水。
作为本发明的优选方案，上述清洗剂包括0.2～0.8％(体积/体积)的TritonX100。
作为本发明的进一步优选方案，上述清洗剂包括0.3～0.7％(体积/体积)的TritonX 100。
作为本发明的更进一步优选方案，上述清洗剂包括0.4～0.6％(体积/体积)的TritonX 100。
作为本发明的最优选方案，上述清洗剂包括0.5％(体积/体积)的TritonX 100。
根据本发明的第二方面，本发明提供一种如第一方面的清洗剂的配制方法，包括：将配方量的日落黄色素和TritonX 100溶于水中，完全溶解，形成均匀的清洗剂。
根据本发明的第三方面，本发明提供一种使用如第一方面的清洗剂清洗微量移液针的方法，包括：在上述微量移液针移取并释放含有核酸探针的样品之后，吸取上述清洗剂来清洗上述微量移液针。
作为本发明的优选方案，上述清洗的时间为5-10秒。
作为本发明的进一步优选方案，上述清洗的时间为10秒。
本发明的有益效果是：本发明的清洗剂采用食用色素日落黄色素和温和表面活性剂TritonX 100按适当比例配制而成，相比超纯水的***液，该清洗剂能够彻底清洗干净残留的核酸样品，避免多种不同核酸探针交替点样过程中造成的交叉污染；相比强酸或强碱性的清洗剂，本发明的清洗剂不会腐蚀微量移液针而导致其寿命缩短。
附图说明
图1为本发明比较例和实施例中的核酸探针对芯片的点样图，其中先点样左侧点，然后使用***液或清洗剂清洗微量移液针，再点右侧点，图中左侧点和右侧点分别显示了点样液的颜色灰度；
图2为本发明比较例中采用超纯水作为***液清洗微量移液针的结果图，其中左侧为采用含核酸探针的点样工作液点样、杂交和显色结果，右侧为微量移液针清洗后采用不含核酸探针的点样工作液点样、杂交和显色结果；
图3为本发明实施例1中采用清洗剂清洗微量移液针的结果图，其中左侧为采用含核酸探针的点样工作液点样、杂交和显色结果，右侧为微量移液针清洗后采用不含核酸探针的点样工作液点样、杂交和显色结果。
具体实施方式
下面通过具体实施方式结合附图对本发明作进一步详细说明。
本发明的用于微量移液针的清洗剂，包括0.1～1％(质量/体积)的日落黄色素和0.1～1％(体积/体积)的TritonX 100，溶剂为水。
需要说明的是，日落黄色素在清洗剂中的含量按照质量/体积计为0.1～1％，其中质量/体积的单位按照本领域通常的理解，比如克/毫升(g/mL)，例如0.1～1％(质量/体积)可以表示在100mL清洗剂中含有0.1～1g日落黄色素。类似地，TritonX 100在清洗剂中的含量按照体积/体积计为0.1～1％，其中体积/体积的单位按照本领域通常的理解，比如毫升/毫升(mL/mL)，例如0.1～1％(体积/体积)可以表示在100mL清洗剂中含有0.1～1mLTritonX 100。当然，上述对单位的说明仅是示例性的，并不排除采用其它单位的表示方式。
TritonX 100是一种温和表面活性剂，中文名称也称为“曲拉通-100”。
虽然，本发明的清洗剂也可以以超纯水以外的其它纯净的水作为溶剂，然而一般采用本领域常用的超纯水，该超纯水具有本领域的一般性概念，例如作为***液的超纯水，因此其概念是清楚明确的。
我们发现，日落黄色素在清洗剂中的含量在0.1～1％(质量/体积)范围内变化，对于清洗效果没有太明显的影响；然而TritonX 100在清洗剂中的含量在0.1～1％(体积/体积)范围内变化，对于清洗效果有一定的影响。不过，TritonX100在清洗剂中的含量在0.1～1％(体积/体积)整个范围内，均能实现较好的清洗效果，表现在以INS值作为反映显色点颜色深浅的情况下，均显示阴性结果，只是INS值的具体大小有一定差别，TritonX 100在0.1～1％(体积/体积)范围内，越靠近中间值的情况下，INS值越小，说明清洗效果越好。因此，作为本发明的优选方案，上述清洗剂包括0.2～0.8％(体积/体积)的TritonX 100；作为本发明的进一步优选方案，上述清洗剂包括0.3～0.7％(体积/体积)的TritonX 100；作为本发明的更进一步优选方案，上述清洗剂包括0.4～0.6％(体积/体积)的TritonX 100；作为本发明的最优选方案，上述清洗剂包括0.5％(体积/体积)的TritonX 100。
本发明还提供了上述清洗剂的配制方法，包括：将配方量的日落黄色素和TritonX100溶于水中，完全溶解，形成均匀的清洗剂。
上述“配方量”是指，配制以后清洗剂中日落黄色素和TritonX 100的终浓度含量。例如，0.1～1％(质量/体积)的日落黄色素和0.1～1％(体积/体积)的TritonX 100；0.1～1％(质量/体积)的日落黄色素和0.2～0.8％(体积/体积)的TritonX 100；0.1～1％(质量/体积)的日落黄色素和0.3～0.7％(体积/体积)的TritonX 100；0.1～1％(质量/体积)的日落黄色素和0.4～0.6％(体积/体积)的TritonX 100；0.1～1％(质量/体积)的日落黄色素和0.5％(体积/体积)的TritonX 100。
本发明还提供了使用上述清洗剂清洗微量移液针的方法，包括：在上述微量移液针移取并释放含有核酸探针的样品之后，吸取上述清洗剂来清洗上述微量移液针。
本发明的清洗微量移液针的方法相对于现有清洗微量移液针的方法，差别就在于以本发明的清洗剂替代了现有技术中的超纯水或者强酸或强碱性的清洗剂。至于清洗程序和时间可以与现有技术相同，没有什么特别要求。一般来讲，清洗的时间为5-10秒较好，更优选10秒。
以下通过比较例和实施例详细说明本发明的清洗剂及其配制方法和使用方法，以及其清洗效果。
如图1所示，实验方法为：在芯片(或膜片)上点制两个点，其中左侧点为含核酸探针的点样工作液，右侧点为不含核酸探针的点样工作液。点样过程为：点样完左侧点的样品之后，对微量移液针分别采用***液，即超纯水(比较例)清洗10s或者采用本发明的清洗剂(实施例)清洗10s，然后点制右侧点的样品。
点样完成后，进行DNA杂交和显色，该杂交和显色可以按照本领域通常的做法进行。以下实施例中，按照如下方法进行杂交和显色。
1DNA杂交：
1.1准备
1.1.1准备试剂
将杂交中和液及洗液B置55℃预热。
1.1.2准备湿盒
建议制作方法：用适当大小(不小于20cm×15cm×10cm)的带盖塑料盒，内置吸水纸，加水浸湿，以无流动水为宜，55℃预热。
注意：在基因芯片的温育操作中必须用湿盒保湿，切忌湿盒干燥！
1.1.3基因芯片定位
小心转移基因芯片至96孔板内，按正位摆放在芯片孔内(正位指芯片水平放置、黑色定位点面朝上，定位点正对孔内左下角；芯片孔指已定位芯片的孔位)。
注意：转移芯片时应避免器械接触芯片中心区及污损芯片！
1.2预杂交
向各芯片孔中加入100μL洗液B，55℃温育15分钟；吸干孔内液体。
1.3变性
取30μL变性液加至PCR产物管中，轻微摇动混匀，静置10分钟。
1.4中和与杂交
向各芯片孔中分别加入100μL杂交中和液和变性的PCR产物(约60μL)，轻微摇动混匀。
55℃温育30分钟，吸干孔内液体。
1.5清洗
向各芯片孔中加入150μL洗液B，轻微摇动漂洗3分钟，吸干孔内液体；重复2次。
注意：应使芯片孔内温度不低于20℃，否则影响清洗效果！
2显色
2.1准备试剂
2.1.1将洗液A和显色液B置37℃预热。
2.1.2配制酶标工作液
按表1要求，用洗液A将酶标原液稀释为酶标工作液。
注意：实际计算用量时应计入损耗量。
表1配制酶标工作液
| 用量 | 酶标原液 | 洗液A |
| 1份检测用量 | 1μL | 100μL |
| 24份检测用量 | 24μL | 2.4mL |
2.2酶标
取100μL酶标工作液，加至清洗的芯片孔内，37℃温育30分钟；吸干孔内液体。
2.3清洗
加入150μL洗液A，轻微摇动漂洗3分钟，吸干孔内液体；重复1次。
加入150μL洗液C，轻微摇动漂洗3分钟，吸干孔内液体。
注意：应使芯片孔内温度不低于20℃，否则影响清洗效果！
2.4显色
分别加入50μL显色液A和50μL显色液B，轻微摇动混匀，室温显色5分钟。
吸干孔内液体，加入150μL洗液C，静置约1分钟，吸干孔内液体。
2.5风干
45℃风干。注意：请确认风干后检测。
3检测与分析
检查确认芯片孔内基因芯片均为正位，用HPV分型基因芯片检测阅读***对基因芯片检测并分析。
比较例
1、将80μL点样液加到等体积的2.4μM的5’-氨基标记核酸探针工作液F1中(F1核酸探针序列为：5’-GCAGACCGAAGTGGATTGCGAGTATTT GA-3’,来自GeneBank ID：NM_117849)，混合均匀；
2、将80μL点样液加到等体积的超纯水中，混合均匀；
3、将1和2步中的两份样品RCF9552离心5min，将离心好的样品分别加样至96孔板内相邻两孔；
4、将规定大小的膜片平整铺陈在点样仪的载台上；
5、设置点样仪参数，将针头洗涤程序设置为***液洗涤10s，开启点样程序，点样方案如图1所示；
6、用包含F1核酸探针序列的反向互补序列的核酸溶液(含有0.1μM的5’-生物素标记的人工合成核酸片段，序列为：5’-TCTCTTCCGTTAATTTCTCAACACATCTTTTCAAATACTCGCAATCCACTTCGGTCTGC-3’)与芯片杂交并显色，记录INS值及阴阳性结果。
实施例1
1、将80μL点样液加到等体积的核酸探针工作液F1中，混合均匀；
2、将80μL点样液加到等体积的超纯水中，混合均匀；
3、将1和2中的两份样品RCF9552离心5min，将离心好的样品分别加样至96孔板内相邻两孔；
4、配制终浓度分别为0.1％TritonX 100和0.1％日落黄色素的混合溶液100mL作为针头清洗剂；
5、将规定大小的膜片平整铺陈在点样仪的载台上；
6、设置点样仪参数，将针头洗涤程序设置为针头清洗剂洗涤10s，开启点样程序，点样方案如图1所示；
7、依据上述杂交方法，用F1核酸探针的反向互补序列与芯片杂交并显色记录INS值及阴阳性。
实施例2
1、将80μL点样液加到等体积的核酸探针工作液F1中，混合均匀；
2、将80μL点样液加到等体积的超纯水中，混合均匀；
3、将1和2中的两份样品RCF9552离心5min，将离心好的样品分别加样至96孔板内相邻两孔；
4、配制终浓度分别为0.1％TritonX 100和0.5％日落黄色素的混合溶液100mL作为针头清洗剂；
5、将规定大小的膜片平整铺陈在点样仪的载台上；
6、设置点样仪参数，将针头洗涤程序设置为针头清洗剂洗涤10s，开启点样程序，点样方案如图1所示；
7、依据上述杂交方法，用F1核酸探针的反向互补序列与芯片杂交并显色记录INS值及阴阳性。
实施例3
1、将80μL点样液加到等体积的核酸探针工作液F1中，混合均匀；
2、将80μL点样液加到等体积的超纯水中，混合均匀；
3、将1和2中的两份样品RCF9552离心5min，将离心好的样品分别加样至96孔板内相邻两孔；
4、配制终浓度分别为0.1％TritonX 100和1％日落黄色素的混合溶液100mL作为针头清洗剂；
5、将规定大小的膜片平整铺陈在点样仪的载台上；
6、设置点样仪参数，将针头洗涤程序设置为针头清洗剂洗涤10s，开启点样程序，点样方案如图1所示；
7、依据上述杂交方法，用F1核酸探针的反向互补序列与芯片杂交并显色记录INS值及阴阳性。
实施例4
1、将80μL点样液加到等体积的核酸探针工作液F1中，混合均匀；
2、将80μL点样液加到等体积的超纯水中，混合均匀；
3、将1和2中的两份样品RCF9552离心5min，将离心好的样品分别加样至96孔板内相邻两孔；
4、配制终浓度分别为0.5％TritonX 100和0.1％日落黄色素的混合溶液100mL作为针头清洗剂；
5、将规定大小的膜片平整铺陈在点样仪的载台上；
6、设置点样仪参数，将针头洗涤程序设置为针头清洗剂洗涤10s，开启点样程序，点样方案如图1所示；
7、依据上述杂交方法，用F1核酸探针的反向互补序列与芯片杂交并显色记录INS值及阴阳性。
实施例5
1、将80μL点样液加到等体积的核酸探针工作液F1中，混合均匀；
2、将80μL点样液加到等体积的超纯水中，混合均匀；
3、将1和2中的两份样品RCF9552离心5min，将离心好的样品分别加样至96孔板内相邻两孔；
4、配制终浓度分别为0.5％TritonX 100和0.5％日落黄色素的混合溶液100mL作为针头清洗剂；
5、将规定大小的膜片平整铺陈在点样仪的载台上；
6、设置点样仪参数，将针头洗涤程序设置为针头清洗剂洗涤10s，开启点样程序，点样方案如图1所示；
7、依据上述杂交方法，用F1核酸探针的反向互补序列与芯片杂交并显色记录INS值及阴阳性。
实施例6
1、将80μL点样液加到等体积的核酸探针工作液F1中，混合均匀；
2、将80μL点样液加到等体积的超纯水中，混合均匀；
3、将1和2中的两份样品RCF9552离心5min，将离心好的样品分别加样至96孔板内相邻两孔；
4、配制终浓度分别为0.5％TritonX 100和1％日落黄色素的混合溶液100mL作为针头清洗剂；
5、将规定大小的膜片平整铺陈在点样仪的载台上；
6、设置点样仪参数，将针头洗涤程序设置为针头清洗剂洗涤10s，开启点样程序，点样方案如图1所示；
7、依据上述杂交方法，用F1核酸探针的反向互补序列与芯片杂交并显色记录INS值及阴阳性。
实施例7
1、将80μL点样液加到等体积的核酸探针工作液F1中，混合均匀；
2、将80μL点样液加到等体积的超纯水中，混合均匀；
3、将1和2中的两份样品RCF9552离心5min，将离心好的样品分别加样至96孔板内相邻两孔；
4、配制终浓度分别为1％TritonX 100和0.1％日落黄色素的混合溶液100mL作为针头清洗剂；
5、将规定大小的膜片平整铺陈在点样仪的载台上；
6、设置点样仪参数，将针头洗涤程序设置为针头清洗剂洗涤10s，开启点样程序，点样方案如图1所示；
7、依据上述杂交方法，用F1核酸探针的反向互补序列与芯片杂交并显色记录INS值及阴阳性。
实施例8
1、将80μL点样液加到等体积的核酸探针工作液F1中，混合均匀；
2、将80μL点样液加到等体积的超纯水中，混合均匀；
3、将1和2中的两份样品RCF9552离心5min，将离心好的样品分别加样至96孔板内相邻两孔；
4、配制终浓度分别为1％TritonX 100和0.5％日落黄色素的混合溶液100mL作为针头清洗剂；
5、将规定大小的膜片平整铺陈在点样仪的载台上；
6、设置点样仪参数，将针头洗涤程序设置为针头清洗剂洗涤10s，开启点样程序，点样方案如图1所示；
7、依据上述杂交方法，用F1核酸探针的反向互补序列与芯片杂交并显色记录INS值及阴阳性。
实施例9
1、将80μL点样液加到等体积的核酸探针工作液F1中，混合均匀；
2、将80μL点样液加到等体积的超纯水中，混合均匀；
3、将1和2中的两份样品RCF9552离心5min，将离心好的样品分别加样至96孔板内相邻两孔；
4、配制终浓度分别为1％TritonX 100和1％日落黄色素的混合溶液100mL作为针头清洗剂；
5、将规定大小的膜片平整铺陈在点样仪的载台上；
6、设置点样仪参数，将针头洗涤程序设置为针头清洗剂洗涤10s，开启点样程序，点样方案如图1所示；
7、依据上述杂交方法，用F1核酸探针的反向互补序列与芯片杂交并显色记录INS值及阴阳性。
比较例和实施例1的显色结果分别如图2和图3所示。图2为采用超纯水作为***液清洗微量移液针的结果图，其中左侧为采用含核酸探针的点样工作液点样、杂交和显色结果，右侧为微量移液针清洗后采用不含核酸探针的点样工作液点样、杂交和显色结果。图2的结果显示，右侧的点有比较明显的显色灰度，表明清洗效果不好。图3为采用清洗剂清洗微量移液针的结果图，其中左侧为采用含核酸探针的点样工作液点样、杂交和显色结果，右侧为微量移液针清洗后采用不含核酸探针的点样工作液点样、杂交和显色结果。图3的结果显示，右侧的点观察不到明显的显色灰度，表明清洗效果良好。
表2示出了以上比较例和实施例得到的INS值及阴阳性结果。
表2比较例和实施例得到的INS值及阴阳性
注：INS值大小反映显色点颜色深浅，当INS值≧11判断为阳性结果，<11为阴性结果。
以上内容是结合具体的实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1. 一种用于微量移液针的清洗剂，其特征在于，所述清洗剂包括0.1~1%（质量/体积）的日落黄色素和0.1~1%（体积/体积）的TritonX 100，溶剂为水。
2.根据权利要求1所述的清洗剂，其特征在于，所述溶剂为超纯水。
3. 根据权利要求1或2所述的清洗剂，其特征在于，所述清洗剂包括0.2~0.8%（体积/体积）的TritonX 100。
4. 根据权利要求1或2所述的清洗剂，其特征在于，所述清洗剂包括0.3~0.7%（体积/体积）的TritonX 100。
5. 根据权利要求1或2所述的清洗剂，其特征在于，所述清洗剂包括0.4~0.6%（体积/体积）的TritonX 100。
6. 根据权利要求1或2所述的清洗剂，其特征在于，所述清洗剂包括0.5%（体积/体积）的TritonX 100。
7. 一种如权利要求1-6任一项所述的清洗剂的配制方法，其特征在于，将配方量的日落黄色素和TritonX 100溶于水中，完全溶解，形成均匀的清洗剂。
8.一种使用如权利要求1-6任一项所述的清洗剂清洗微量移液针的方法，其特征在于，在所述微量移液针移取并释放含有核酸探针的样品之后，吸取所述清洗剂来清洗所述微量移液针。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述清洗的时间为5-10秒。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述清洗的时间为10秒。
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