CN105274147A - 淡紫灰链霉菌发酵生产α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开淡紫灰链霉菌发酵生产α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法，是以淡紫灰链霉菌（<i>Streptomyces？lavendulae</i>）UN-8，保藏编号CCTCC？NO:？M？2015512的菌株通过菌种活化、种子液制备、液体发酵获得富含α-葡萄糖苷酶抑制剂的发酵液。本发明可广泛使用廉价的碳氮源，例如可溶性淀粉、木薯淀粉、玉米淀粉、玉米浆干粉、无机铵盐；且采用液体深层发酵，操作实施方便，无污染，生产效率高；可满足工业化生产的要求。本发明发酵获得的α-葡萄糖苷酶抑制剂经初步鉴定，是一种新型的α-葡萄糖苷酶抑制剂，该抑制剂能强烈抑制α-葡萄糖苷酶，其IC50是市售α-葡萄糖苷酶抑制剂阿卡波糖的321倍；体内实验，该抑制剂对餐后高血糖的形成有明显改善作用，效果与阿卡波糖相当，可以用于糖尿病的预防和治疗。
Description
技术领域
本发明属于微生物发酵领域，特别涉及淡紫灰链霉菌发酵生产α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法。
背景技术
糖尿病是以持续高血糖为主要生化特征的综合代谢性疾病，临床上主要分为I型糖尿病和II型糖尿病，我国以II型居多。临床症状表现为血液及尿液中葡萄糖浓度异常升高，患者有明显的多饮，多食，多尿，体重减轻的“三多一少”症状，并伴随有疲乏无力的症状。治疗II型糖尿病的药物主要有胰岛素及类似物、促胰岛素分泌剂、胰岛素增敏剂以及α-葡萄糖苷酶抑制剂。其中，α-葡萄糖苷酶抑制剂已被第三次亚太地区糖尿病治疗药物指南推荐为降低餐后血糖的一线药物。II型糖尿病患者服用α-葡萄糖苷酶抑制剂后，抑制了小肠绒毛上皮细胞刷状膜上的α-葡萄糖苷酶，可以延缓小肠上段对低聚糖类的分解和吸收，减少单糖生成，从而使餐后血糖变化平稳，显著减轻高血糖的危害，减少并发症和死亡率。
目前，已报道的α-葡萄糖苷酶抑制剂种类繁多，但主要都来源于三个方面：天然产物提取、化学合成产物以及微生物代谢产物。其中天然产物提取大多局限于中草药，但是中草药提取效率较低、成本高，很难产业化。化学合成方法具有目标性强的优点，国外很多学者尝试采用化学合成或生物化学合成方法来获取新的α-葡萄糖苷酶抑制剂。例如，目前临床上使用三种α-葡萄糖苷酶抑制剂（阿卡波糖、伏格列波糖、米格列醇）均是通过化学-生物合成而获得。阿卡波糖是由Formmer等从游放线菌Acetinopladesutahensis的发酵液中提取出来的，由于这个假性四糖对糖苷酶有很高的亲和性，酶活性被抑制，因此降糖效果良好，于1995年被美国FDA批准上市；伏格列波糖是一种氨基糖类似物，由日本武田从放线菌代谢产物中分离并通过化学改造得到，它可以竞争性抑制α-葡萄糖苷酶的活性，从而延缓了肠道对葡萄糖的吸收；米格列醇的结构与葡萄糖相类似，是由Palus等从杆菌的代谢产物中获得，并经过化学改造之后于1997年上市，成为一种新型的糖尿病药物。
绝大多数II型糖尿病患者服用上述三种药物，均可获得餐后血糖水平降低、糖基化血红蛋白降低、空腹血糖及脂肪水平降低，或对胰岛素需求降低的效果，但效果与药物、剂量、个体因素而存在明显差异。此外，服药后，患者会出现如下一些较明显的不良反应：胃胀、腹胀、腹泻、胃肠痉挛性疼痛、顽固性便秘、肠鸣音亢进、排气增多，部分患者甚至会出现低血糖和损害肝脏。这些药物的副作用表明，它们作为α-葡葡糖苷酶抑制剂仍然有待改进和完善，而患者也需要更安全、更方便的新型药物。因此，采用微生物发酵法生产新型α-葡萄糖苷酶抑制剂成为抗糖尿病药物的研究热点。
检索到以下关于α-葡萄糖苷酶抑制剂的制备方法及其药物用途：
中国专利，申请人：赵全成；申请号：200910067094.3；发明名称：皂角总苷元及刺囊酸在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂的药物中的应用；摘要：本发明公开了皂角总苷元及刺囊酸单一成分在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂药物中的新用途，在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂药物中可以是皂角总苷元或刺囊酸单一成分，也可以是含皂角总苷元及刺囊酸的组合物；可用于制备各种药物制剂。
中国专利，申请人：大理学院；申请号：201010521335.X；发明名称：B环甲氧基水飞蓟宾用于制备糖苷酶抑制剂的药物用途；摘要：本发明涉及B环甲氧基水飞蓟宾用于制备糖苷酶抑制剂的药物用途，具体而言，本发明公开了一种B环甲氧基取代的水飞蓟宾酯型黄酮木脂素或其可药用盐用于制备抑制α-葡萄糖苷酶、防治II型糖尿病的药物之用途。该黄酮木脂素具有极其显著的抑制α-葡萄糖苷酶的活性，其40微克/毫升浓度时对α-葡萄糖苷酶的抑制活性强度已达到75.6％，通过测定其半数抑制浓度显示：该黄酮木脂素抑制α-葡萄糖苷酶的强度是阳性对照药物阿卡波糖的8倍。药效学结果表明该黄酮木脂素或其可药用盐可预期作为糖苷酶抑制剂药物尤其是防治II型糖尿病的药物用途。
中国专利，申请人：大理学院；申请号：201010521360.8；发明名称：4-氯肉桂酰水飞蓟宾用于制备糖苷酶抑制剂的药物用途；摘要：本发明涉及4-氯肉桂酰水飞蓟宾用于制备糖苷酶抑制剂的药物用途，具体而言，本发明公开了一种4-氯肉桂酰基取代的水飞蓟宾酯型黄酮木脂素或其可药用盐在制备抑制α-葡萄糖苷酶、防治II型糖尿病的药物中的应用。该黄酮木脂素具有极其显著的抑制α-葡萄糖苷酶的活性，其在40微克/毫升浓度时对α-葡萄糖苷酶的抑制活性强度已达到92.1％，通过测定其半数抑制浓度显示：该黄酮木脂素抑制α-葡萄糖苷酶的强度是阳性对照药物阿卡波糖的30倍。药效学结果表明该黄酮木脂素或其可药用盐可预期作为糖苷酶抑制剂药物尤其是防治II型糖尿病的药物之用途。
中国专利，申请人：大理学院；申请号：201010521468.7；发明名称：一种槲皮素二聚体黄酮用于制备糖苷酶抑制剂的药物用途；摘要：本发明涉及一种槲皮素二聚体黄酮用于制备糖苷酶抑制剂的药物用途，具体而言，本发明公开了一种槲皮素二聚体黄酮或其可药用盐用于制备抑制α-葡萄糖苷酶剂、防治II型糖尿病的药物之用途，该槲皮素二聚体黄酮具有极其显著的抑制α-葡萄糖苷酶的活性，其在4微克/毫升浓度时对α-葡萄糖苷酶的抑制活性强度已达到75.0％，通过测定其半数抑制浓度显示：该槲皮素二聚体黄酮抑制α-葡萄糖苷酶的强度是阳性对照药物阿卡波糖的88倍。药效学结果表明该槲皮素二聚体黄酮或其可药用盐可预期作为糖苷酶抑制剂药物尤其是防治II型糖尿病的药物之用途。
中国专利，申请人：大理学院；申请号：201010521475.7；发明名称：E环碘取代水飞蓟宾用于制备糖苷酶抑制剂的药物用途；摘要：本发明涉及E环碘取代水飞蓟宾用于制备糖苷酶抑制剂的药物用途，具体而言，本发明公开了一种E环碘取代的水飞蓟宾酯型黄酮木脂素或其可药用盐用于制备抑制α-葡萄糖苷酶防治II型糖尿病的药物的用途。该黄酮木脂素具有极其显著的抑制α-葡萄糖苷酶的活性，其在4微克/毫升浓度时对α-葡萄糖苷酶的抑制活性强度已达到64.1％。通过测定其半数抑制浓度显示：该黄酮木脂素抑制α-葡萄糖苷酶的强度是阳性对照药物阿卡波糖的35倍。药效学结果表明该黄酮木脂素或其可药用盐可预期作为糖苷酶抑制剂药物尤其是防治II型糖尿病药物之用途。
以上专利都是天然中草药提取或利用化学合成技术制备α-葡萄糖苷酶抑制剂，目前还没有文献公开利用淡紫灰链霉菌发酵生产α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法。
发明内容
本发明的目的是为了提供淡紫灰链霉菌发酵生产α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法。
为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：
淡紫灰链霉菌发酵生产α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法，包括如下步骤：
(1)菌种活化、保藏
将淡紫灰链霉菌（Streptomyceslavendulae）UN-8接种于固体斜面培养基上，28～35℃恒温条件下培养3～5天，于2～8℃作短期保存。所述淡紫灰链霉菌（Streptomyceslavendulae）UN-8，保藏编号CCTCCNO:M2015512，保藏日期为2015年9月6日，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学。所述的用蒸馏水配制固体斜面培养基的浓度组分为：可溶性淀粉10～30g/L，KNO30.2～1.0g/L，NaCl0.2～1.0g/L，K2HPO40.5～2.0g/L，MgSO4·7H2O0.2～1.0g/L，FeSO4·7H2O0.005～0.02g/L，琼脂15～20g/L，pH值7.0～7.5。
(2)种子液制备
一级种子制备：将上述斜面上1.0～3.0cm2的菌苔接入装有100mL液体种子培养基的500mL三角瓶中，摇床转速160～220rpm，28～35℃恒温条件下培养24～48h；二级种子制备：将一级种子液接入装有600mL液体种子培养基的3.0L三角瓶中，接种量1～5%（v/v），摇床转速160～250rpm，28～35℃恒温条件下培养24～48h。所述的用蒸馏水配制液体种子培养基的浓度组分为：可溶性淀粉10～30g/L，KNO30.2～1.0g/L，NaCl0.2～1.0g/L，K2HPO40.5～2.0g/L，MgSO4·7H2O0.2～1.0g/L，FeSO4·7H2O0.005～0.02g/L，pH值7.0～7.5。
(3)液体发酵
将二级种子液按接种量2～10%接入装有液体发酵培养基的机械搅拌式发酵罐中，发酵罐容积10～100L，装液量30～70%，搅拌速度100～600rpm，通气量0.5～3.0vvm，培养温度28～35℃，培养时间3～5天。所述的用蒸馏水配制液体发酵培养基的浓度组分为：碳源10～100g/L，氮源5～30g/L，NaCl0.2～2.0g/L，K2HPO40.5～5.0g/L，MgSO4·7H2O0.2～2.0g/L，FeSO4·7H2O0.005～0.02g/L，pH值7.0～7.5。
以上所述碳源为蔗糖、麦芽糖、糊精、可溶性淀粉、木薯淀粉、玉米淀粉、小麦淀粉和大米淀粉中的任意一种或其组合。
以上所述氮源为玉米浆干粉、黄豆粕粉、花生麸、酵母膏、蛋白胨、NH4Cl、（NH4）2SO4、KNO3和NaNO3中的任意一种或其组合。
α-葡萄糖苷酶抑制剂的抑制率测定采用PNPG-紫外分光光度法，具体方法如下所述：
将发酵液稀释10倍后取0.1mL于试管中，加入0.4mL的0.2mol/LpH6.8磷酸缓冲液，对照组以0.1mL去离子水代替发酵液，然后加入α-葡萄糖苷酶0.1mL（10000U，0.2mol/LpH6.8磷酸缓冲液配制），37℃水浴保温15分钟，加入5mmol/L的PNPG0.4mL开始反应，15分钟后用0.5mol/L的碳酸钠2mL终止反应，室温水浴2分钟，在405nm处测定吸光度值（ABS）。
抑制率的计算方法为：抑制率=×100%
本发明所获得的发酵液，经分离纯化得到α-葡萄糖苷酶抑制剂精制品AGI256的物理化学与生物学性质如下：
α-葡萄糖苷酶抑制剂AGI256为白色无定型粉末，易溶于水和二甲基亚砜，微溶于甲醇、乙醇和丙酮，不溶于其它有机溶剂；强酸强碱处理不会对影响其抑制活性。
α-葡萄糖苷酶抑制剂AGI256在紫外光谱下无特征吸收峰，红外光谱吸收集中在3312cm-1和1039cm-1，结合核磁共振和元素分析，该抑制剂AGI256由C、H、O、N四种元素构成。
α-葡萄糖苷酶体外抑制实验结果表明，该抑制剂AGI256具有强烈的α-葡萄糖苷酶抑制活性，其IC50（抑制率达50%时的抑制剂浓度）是市售α-葡萄糖苷酶抑制剂阿卡波糖的321倍。
小鼠体内α-葡萄糖苷酶抑制实验结果表明，该抑制剂AGI256可以降低正常小鼠的餐后血糖水平，对餐后高血糖的形成有明显改善作用，效果与阿卡波糖相当，可以用于糖尿病的预防和治疗。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1.本发明以淡紫灰链霉菌为生产菌株，可广泛使用廉价的碳氮源，例如可溶性淀粉、木薯淀粉、玉米淀粉、玉米浆干粉、无机铵盐；且采用液体深层发酵，操作实施方便，无污染，生产效率高；这些廉价原料和生产方式可以满足工业化生产的要求。
2.本发明发酵获得的α-葡萄糖苷酶抑制剂经初步鉴定，是一种新型的α-葡萄糖苷酶抑制剂，该抑制剂能强烈抑制α-葡萄糖苷酶，其IC50是市售α-葡萄糖苷酶抑制剂阿卡波糖的321倍；体内实验，该抑制剂对餐后高血糖的形成有明显改善作用，效果与阿卡波糖相当，可以用于糖尿病的预防和治疗。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式并不局限于实施例表示的范围。
实施例1～8：
(1)菌种活化、保藏
将淡紫灰链霉菌（Streptomyceslavendulae）UN-8接种于固体斜面培养基上，30℃恒温条件下培养3天，于4℃作短期保存。用蒸馏水配制固体斜面培养基的浓度组分为：可溶性淀粉20g/L，KNO30.5g/L，NaCl0.5g/L，K2HPO41.0g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L，FeSO4·7H2O0.01g/L，琼脂20g/L，pH值7.2。
(2)种子液制备
一级种子制备：将上述斜面上2.0cm2的菌苔接入装有100mL液体种子培养基的500mL三角瓶中，摇床转速160rpm，30℃恒温条件下培养36h；二级种子制备：将一级种子液接入装有600mL液体种子培养基的3.0L三角瓶中，接种量2%（v/v），摇床转速160rpm，30℃恒温条件下培养36h。用蒸馏水配制液体种子培养基的浓度组分为：可溶性淀粉20g/L，KNO30.5g/L，NaCl0.5g/L，K2HPO41.0g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L，FeSO4·7H2O0.01g/L，pH值7.2。
(3)液体发酵
将二级种子液按接种量5%接入装有液体发酵培养基的机械搅拌式发酵罐中，发酵罐容积10L，装液量30%，搅拌速度300rpm，通气量1.2vvm，培养温度30℃，培养时间3天。用蒸馏水配制液体发酵培养基的浓度组分为：碳源20g/L，酵母膏10g/L，NaCl0.5g/L，K2HPO41.0g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L，FeSO4·7H2O0.01g/L，pH值7.2。
其中所述碳源为蔗糖、麦芽糖、糊精、可溶性淀粉、木薯淀粉、玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉，按上述方法发酵后，取发酵液稀释10倍测定α-葡萄糖苷酶抑制剂的抑制率，结果如下表所示。
实施例9～16：
(1)菌种活化、保藏
将淡紫灰链霉菌（Streptomyceslavendulae）UN-8接种于固体斜面培养基上，30℃恒温条件下培养3天，于4℃作短期保存。用蒸馏水配制固体斜面培养基的浓度组分为：可溶性淀粉20g/L，KNO30.5g/L，NaCl0.5g/L，K2HPO41.0g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L，FeSO4·7H2O0.01g/L，琼脂20g/L，pH值7.2。
(2)种子液制备
一级种子制备：将上述斜面上2.0cm2的菌苔接入装有100mL液体种子培养基的500mL三角瓶中，摇床转速160rpm，30℃恒温条件下培养36h；二级种子制备：将一级种子液接入装有600mL液体种子培养基的3.0L三角瓶中，接种量2%（v/v），摇床转速160rpm，30℃恒温条件下培养36h。用蒸馏水配制液体种子培养基的浓度组分为：可溶性淀粉20g/L，KNO30.5g/L，NaCl0.5g/L，K2HPO41.0g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L，FeSO4·7H2O0.01g/L，pH值7.2。
(3)液体发酵
将二级种子液按接种量5%接入装有液体发酵培养基的机械搅拌式发酵罐中，发酵罐容积10L，装液量50%，搅拌速度300rpm，通气量1.2vvm，培养温度30℃，培养时间3天。用蒸馏水配制液体发酵培养基的浓度组分为：可溶性淀粉20g/L，氮源10g/L，NaCl0.5g/L，K2HPO41.0g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L，FeSO4·7H2O0.01g/L，pH值7.2。
其中所述氮源为玉米浆干粉、黄豆粕粉、花生麸、酵母膏、蛋白胨、NH4Cl、（NH4）2SO4、KNO3和NaNO3，按上述方法发酵后，取发酵液稀释10倍测定α-葡萄糖苷酶抑制剂的抑制率，结果如下表所示。
实施例17：
(1)菌种活化、保藏
将淡紫灰链霉菌（Streptomyceslavendulae）UN-8接种于固体斜面培养基上，28℃恒温条件下培养5天，于4℃作短期保存。用蒸馏水配制固体斜面培养基的浓度组分为：可溶性淀粉10g/L，KNO30.2g/L，NaCl0.2g/L，K2HPO40.5g/L，MgSO4·7H2O0.2g/L，FeSO4·7H2O0.005g/L，琼脂20g/L，pH值7.0。
(2)种子液制备
一级种子制备：将上述斜面上1.0cm2的菌苔接入装有100mL液体种子培养基的500mL三角瓶中，摇床转速200rpm，28℃恒温条件下培养48h；二级种子制备：将一级种子液接入装有600mL液体种子培养基的3.0L三角瓶中，接种量5%（v/v），摇床转速200rpm，28℃恒温条件下培养48h。用蒸馏水配制液体种子培养基的浓度组分为：可溶性淀粉10g/L，KNO30.2g/L，NaCl0.2g/L，K2HPO40.5g/L，MgSO4·7H2O0.2g/L，FeSO4·7H2O0.005g/L，pH值7.0。
(3)液体发酵
将二级种子液按接种量2%接入装有液体发酵培养基的机械搅拌式发酵罐中，发酵罐容积10L，装液量50%，搅拌速度600rpm，通气量1.2vvm，培养温度28℃，培养时间5天。用蒸馏水配制液体发酵培养基的浓度组分为：可溶性淀粉10g/L，酵母膏5g/L，NaCl0.2g/L，K2HPO40.5g/L，MgSO4·7H2O0.2g/L，FeSO4·7H2O0.005g/L，pH值7.0。
按上述方法发酵后，取发酵液稀释10倍测定α-葡萄糖苷酶抑制剂的抑制率为40.5±0.8。
实施例18：
(1)菌种活化、保藏
将淡紫灰链霉菌（Streptomyceslavendulae）UN-8接种于固体斜面培养基上，32℃恒温条件下培养3天，于4℃作短期保存。用蒸馏水配制固体斜面培养基的浓度组分为：可溶性淀粉30g/L，KNO31.0g/L，NaCl1.0g/L，K2HPO42.0g/L，MgSO4·7H2O1.0g/L，FeSO4·7H2O0.02g/L，琼脂20g/L，pH值7.5。
(2)种子液制备
一级种子制备：将上述斜面上3.0cm2的菌苔接入装有100mL液体种子培养基的500mL三角瓶中，摇床转速180rpm，32℃恒温条件下培养24h；二级种子制备：将一级种子液接入装有600mL液体种子培养基的3.0L三角瓶中，接种量5%（v/v），摇床转速180rpm，32℃恒温条件下培养24h。用蒸馏水配制液体种子培养基的浓度组分为：可溶性淀粉30g/L，KNO31.0g/L，NaCl1.0g/L，K2HPO42.0g/L，MgSO4·7H2O1.0g/L，FeSO4·7H2O0.02g/L，pH值7.5。
(3)液体发酵
将二级种子液按接种量10%接入装有液体发酵培养基的机械搅拌式发酵罐中，发酵罐容积50L，装液量60%，搅拌速度400rpm，通气量3.0vvm，培养温度32℃，培养时间3天。用蒸馏水配制液体发酵培养基的浓度组分为：可溶性淀粉50g/L，酵母膏20g/L，NaCl2.0g/L，K2HPO42.0g/L，MgSO4·7H2O1.0g/L，FeSO4·7H2O0.02g/L，pH值7.5。
按上述方法发酵后，取发酵液稀释10倍测定α-葡萄糖苷酶抑制剂的抑制率为73.2±2.7。
实施例19：
与实施例18不同之处在于：
(3)液体发酵
将二级种子液按接种量5%接入装有液体发酵培养基的机械搅拌式发酵罐中，发酵罐容积50L，装液量60%，搅拌速度400rpm，通气量1.5vvm，培养温度32℃，培养时间3天。用蒸馏水配制液体发酵培养基的浓度组分为：可溶性淀粉300g/L，酵母膏10g/L，NaCl1.0g/L，K2HPO41.0g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L，FeSO4·7H2O0.01g/L，pH值7.2。
按上述方法发酵后，取发酵液稀释10倍测定α-葡萄糖苷酶抑制剂的抑制率为62.8±2.1。
实施例20：
(1)菌种活化、保藏
将淡紫灰链霉菌（Streptomyceslavendulae）UN-8接种于固体斜面培养基上，35℃恒温条件下培养3天，于8℃作短期保存。用蒸馏水配制固体斜面培养基的浓度组分为：可溶性淀粉20g/L，KNO31.0g/L，NaCl0.5g/L，K2HPO41.0g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L，FeSO4·7H2O0.01g/L，琼脂20g/L，pH值7.2。
(2)种子液制备
一级种子制备：将上述斜面上2.0cm2的菌苔接入装有100mL液体种子培养基的500mL三角瓶中，摇床转速220rpm，35℃恒温条件下培养24h；二级种子制备：将一级种子液接入装有600mL液体种子培养基的3.0L三角瓶中，接种量3%（v/v），摇床转速250rpm，35℃恒温条件下培养24h。用蒸馏水配制液体种子培养基的浓度组分为：可溶性淀粉20g/L，KNO31.0g/L，NaCl0.5g/L，K2HPO41.0g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L，FeSO4·7H2O0.01g/L，pH值7.2。
(3)液体发酵
将二级种子液按接种量10%接入装有液体发酵培养基的机械搅拌式发酵罐中，发酵罐容积100L，装液量70%，搅拌速度300rpm，通气量1.5vvm，培养温度35℃，培养时间3天。用蒸馏水配制液体发酵培养基的浓度组分为：可溶性淀粉100g/L，酵母膏30g/L，NaCl2.0g/L，K2HPO45.0g/L，MgSO4·7H2O2.0g/L，FeSO4·7H2O0.02g/L，pH值7.2。
按上述方法发酵后，取发酵液稀释10倍测定α-葡萄糖苷酶抑制剂的抑制率为58.6±1.8。
Claims (5)
1.淡紫灰链霉菌发酵生产α-葡萄糖苷酶抑制剂，其特征在于：包括如下步骤：
（1）菌种活化、保藏
将淡紫灰链霉菌（Streptomyceslavendulae）UN-8接种于固体斜面培养基上，28～35℃恒温条件下培养3～5天，于2～8℃作短期保存；
所述淡紫灰链霉菌（Streptomyceslavendulae）UN-8，保藏编号CCTCCNO:M2015512，保藏日期为2015年9月6日，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学；
（2）种子液制备
一级种子制备：将上述斜面上1.0～3.0cm2的菌苔接入装有100mL液体种子培养基的500mL三角瓶中，摇床转速160～220rpm，28～35℃恒温条件下培养24～48h；二级种子制备：将一级种子液接入装有600mL液体种子培养基的3.0L三角瓶中，接种量1～5%（v/v），摇床转速160～250rpm，28～35℃恒温条件下培养24～48h；
（3）液体发酵
将二级种子液按接种量2～10%接入装有液体发酵培养基的机械搅拌式发酵罐中，发酵罐容积10～100L，装液量30～70%，搅拌速度100～600rpm，通气量0.5～3.0vvm，培养温度28～35℃，培养时间3～5天。
2.根据权利要求1所述的淡紫灰链霉菌发酵生产α-葡萄糖苷酶抑制剂的制备方法，其特征在于：步骤（1）所述的用蒸馏水配制固体斜面培养基的浓度组分为：可溶性淀粉10～30g/L，KNO30.2～1.0g/L，NaCl0.2～1.0g/L，K2HPO40.5～2.0g/L，MgSO4·7H2O0.2～1.0g/L，FeSO4·7H2O0.005～0.02g/L，琼脂15～20g/L，pH值7.0～7.5。
3.根据权利要求1所述的淡紫灰链霉菌发酵生产α-葡萄糖苷酶抑制剂的制备方法，其特征在于：步骤（2）所述的用蒸馏水配制液体种子培养基的浓度组分为：可溶性淀粉10～30g/L，KNO30.2～1.0g/L，NaCl0.2～1.0g/L，K2HPO40.5～2.0g/L，MgSO4·7H2O0.2～1.0g/L，FeSO4·7H2O0.005～0.02g/L，pH值7.0～7.5。
4.根据权利要求1所述的淡紫灰链霉菌发酵生产α-葡萄糖苷酶抑制剂的制备方法，其特征在于：步骤（3）所述的用蒸馏水配制液体发酵培养基的浓度组分为：碳源10～100g/L，氮源5～30g/L，NaCl0.2～2.0g/L，K2HPO40.5～5.0g/L，MgSO4·7H2O0.2～2.0g/L，FeSO4·7H2O0.005～0.02g/L，pH值7.0～7.5。
5.根据权利要求4所述的用蒸馏水配制液体发酵培养基的浓度组分，其特征在于：所述碳源为蔗糖、麦芽糖、糊精、可溶性淀粉、木薯淀粉、玉米淀粉、小麦淀粉和大米淀粉中的任意一种或其组合；所述氮源为玉米浆干粉、黄豆粕粉、花生麸、酵母膏、蛋白胨、NH4Cl、（NH4）2SO4、KNO3和NaNO3中的任意一种或其组合。
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- 2015-10-28 CN CN201510712070.4A patent/CN105274147A/zh active Pending
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