CN105169004B - 一种治疗奶牛***炎的药物及其制法与检测方法及用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及中药领域,具体涉及一种治疗奶牛***炎的药物及其制法与检测方法及用途。该药物是由以下重量份的原料制成的:紫葛1~2重量份,铺地黍1~2重量份。该药物制备成片剂、丸剂、散剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂。制法为:干燥的紫葛、铺地黍,第一次加11倍量水浸泡1小时,煎煮1小时,第二次加4倍量水煎煮1小时,合并水煎液,滤过,滤液浓缩,干燥,粉碎成细粉,过筛,混匀,制成散剂。药物质量检测方法的色谱条件为:采用HypersilDs色谱柱;流动相:比例为30:70的甲醇‑0.15%磷酸溶液;检测波长:200nm;柱温:20℃;流速:1.0mL·min‑1;进样量:10μL。本发明药物组方合理、治疗效果显著。
Description
技术领域
本发明涉及中药领域,具体涉及一种铺地黍与紫葛的活性药物及其制备方法。
背景技术
奶牛***炎又称奶牛乳腺炎(bovine mastitis),是奶牛乳腺受物理、化学、微生物刺激导致乳腺组织局部微循环障碍、乳腺腺泡发生病变、免疫功能障碍等症状的一种复杂的疾病。微生物是奶牛***炎的主要病因,目前已发现约有150多种病原体可引起奶牛***炎,常见菌以葡萄球菌、链球菌、大肠埃希菌、化脓杆菌为主,约占奶牛***炎病例90%以上。
据世界奶牛业协会统计,全世界奶牛***炎发生率在50%左右。国外奶牛***炎发病率在25%~60%,我国为20%~70%,部分奶牛场发病率更高。奶牛发生***炎后,机体启动防御体系导致牛奶中白细胞等体细胞增加,产奶量下降,奶质量下降,严重者也可能引起奶牛发情减少。研究报道,平均每头发病奶牛每年损失超100美元,全美国每年因奶牛***炎造成的损失超过20亿美元。全世界每年因***炎造成的经济损失高达350亿美元。
我国从20世纪80年代开始对奶牛***炎进行研究以来,抗生素一直是治疗***炎的首选药物,其中青霉素、链霉素、庆大霉素、氯唑西林钠、头孢噻呋钠等抗生素和化学药品在临床上治疗细菌性奶牛***炎取得了很显著的成效,治疗率高达90%。然而,长期大量使用抗生素导致了耐药菌、超级细菌的出现,各类化学合成药品的残留代谢物已严重威胁着人类健康。当前,食品质量安全逐渐引起社会的重视,研究人员开始研究新型的绿色的无公害的、无残留的、速效的药物来替代抗生素和化学药品治疗奶牛***炎。无公害、无残留、无休药期的中药成为当前的研究热点。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足,提供一种组方合理、治疗效果好的治疗奶牛***炎的药物。
本发明的另一目的是提供该药物的制备方法。
本发明还提供了该药物的质量检测方法。
本发明还提供了该药物的制药用途。
本发明药物是经发明人多年来精心研制,主要用于治疗奶牛***炎。本发明药物既能清热解毒、活血散瘀,又能促进***血液循环疏畅,有利于炎肿的吸收消散,促进乳汁的分泌,对奶牛***炎具有较好的治疗效果。
在本发明药物中原料药的基源如下:
紫葛为葡萄科蛇葡萄属植物异叶蛇葡萄Ampelopsis humulifolia Bungevar.heterophylla(Thunb.)K.Koch.[A.heterophylla(Thunb.)Sieb. et Zucc]的根皮。
铺地黍为禾本科植物铺地黍Panicum repens L.的全草。
本发明的目的是由以下方式实现的:
一种药物是由以下重量份的原料制成的:紫葛1~2重量份,铺地黍1~2重量份。
该药物优选是由以下重量份的原料制成的:紫葛1重量份,铺地黍2重量份。
该药物优选是由以下重量份的原料制成的:紫葛2重量份,铺地黍1重量份。
该药物优选是由以下重量份的原料制成的:紫葛1重量份,铺地黍1重量份。
所述的药物中可以制备成片剂、丸剂、散剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂。
所述的药物采用如下方法制备:取紫葛、铺地黍,混合,加入3~15倍量的水浸泡0.5~2小时,煎煮0.5~2小时,煎煮2~4次,每次0.5~2小时,提取液合并,滤过,滤液浓缩,干燥,粉碎成细粉,加入辅料,混匀,制成散剂,即得。
所述的药物采用如下方法制备:取干燥的紫葛、铺地黍,第一次加11倍量水浸泡1小时,煎煮1小时,第二次加4倍量水煎煮1小时,合并水煎液,滤过,滤液浓缩,干燥,粉碎成细粉,过筛,混匀,制成散剂,即得。
所述的药物采用如下方法检测:采用高效液相色谱法进行水杨苷的含量测定:
(1)色谱条件:采用HypersilDs色谱柱;流动相:比例为20~40:60~80的甲醇-0.15%磷酸溶液;检测波长:190~210nm;柱温:15~25℃;流速:0.5~1.5mL·min-1;进样量:5~20μL;
(2)对照品溶液制备:精密称取干燥至恒重的水杨苷对照品适量,加甲醇溶解制成对照品溶液;
(3)供试品溶液的制备:精密称取本发明药物,加甲醇,加热回流,提取液回流溶剂并浓缩至干,残渣加水溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取,合并正丁醇提取液,用氨试液洗涤,正丁醇提取液回收溶剂至干,残渣加甲醇溶解,摇匀,滤过,取滤液,即得供试品溶液;
(4)测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5~20μL,注入高效液相色谱仪,进行检测。
所述的药物优选采用如下方法检测:采用高效液相色谱法进行水杨苷的含量测定:
(1)色谱条件:采用HypersilDs色谱柱;流动相:比例为30:70的甲醇-0.15%磷酸溶液;检测波长:200nm;柱温:20℃;流速:1.0mL·min-1;进样量:10μL;
(2)对照品溶液制备:精密称取80℃干燥至恒重的水杨苷对照品适量,加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的对照品溶液;
(3)供试品溶液的制备:精密称取本发明药物10g,加甲醇40mL,加热回流4h,提取液回流溶剂并浓缩至干,残渣加水10mL溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取5次,每次20mL,合并正丁醇提取液,用氨试液洗涤3次,每次15mL,正丁醇提取液回收溶剂至干,残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取滤液,即得供试品溶液;
(4)测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,进行检测。
所述的药物可用于制备治疗奶牛***炎、牛急性肠炎的药物或保健品。
实验一:本发明药物治疗奶牛***炎的试验研究
1 实验材料
1.1 试验药品
本发明药物
处方:紫葛50g,铺地黍50g
制备方法:取干燥的紫葛50g、铺地黍50g第一次加1100mL水浸泡1小时,煎煮1小时,第二次加400mL,煎煮1小时,合并水煎液,滤过,滤液浓缩,干燥,得本发明药物。
对比药物A
处方:紫葛100g
制备方法:取干燥的紫葛100g,第一次加1100mL水浸泡1小时,煎煮1小时,第二次加400mL,煎煮1小时,合并水煎液,滤过,滤液浓缩,干燥,得对比药物A。
对比药物B
处方:铺地黍100g
制备方法:取干燥的铺地黍100g,第一次加1100mL水浸泡1小时,煎煮1小时,第二次加400mL,煎煮1小时,合并水煎液,滤过,滤液浓缩,干燥,得对比药物B。
1.2 试验动物
连云港市云台农场奶牛场400头泌乳奶牛,对产奶量下降的奶牛进行加州***炎检测法(CMT)检测,选取90头“++”以上的阳性奶牛,随机分为三组,即本发明药物治疗组、对比药物A治疗组、对比药物B治疗组,每组30头。
1.3 试验器材
保定栏、保定绳、投药瓶、50mL注射器、20号通乳针、加州***炎检测法(CMT)检验板。
2 试验方法
2.1 加州***炎检测法
分别吸取同等剂量的牛奶和稀释的CMT诊断液加入检验板,充分混匀,进行观察。加州***炎检测法判断标准如试剂盒说明书所述,奶牛***炎治疗效果判断标准见表1。
表1 奶牛***炎治疗效果判断标准
2.2 临床分组给药
本发明药物治疗组:本发明药物10g,用开水浸泡,冷却后搅拌均匀,用投药瓶进行灌服,每次100mL,1次/d,连用5d为一个疗程。
对比药物A治疗组:对比药物A 10g,用开水浸泡,冷却后搅拌均匀,用投药瓶进行灌服,每次100mL,1次/d,连用5d为一个疗程。
对比药物B组:对比药物B 10g,用开水浸泡,冷却后搅拌均匀,用投药瓶进行灌服,每次100mL,1次/d,连用5d为一个疗程。
对于试验奶牛,实行统一的饲养管理,统一的饲料配方,不同药物治疗三个疗程,共计15d。三个疗程后对三组奶牛进行CMT检测。
3 结果
3.1 ***炎阳性奶牛
应用加州***炎检测法对400头泌乳牛进行检测,“++”以上的阳性奶牛150头,阳性率达37.5%,其中有红、肿、热、痛症状的100头,占阳性奶牛66.7%,100头中选取90头做临床试验。
3.2 不同药物治疗效果
三个疗程后,对三组奶牛的治疗效果进行CMT检测,并于第20天复检是否复发,结果见表2。本发明药物组、对比药物A组和对比药物B组奶牛***炎的治愈率分别是58.6%、38.2%、41.1%,有效率分别是90.2%、74.1%、85.5%,复发率分别是3.6%、12.8%、11.92%;
表2 三组不同药物治疗效果对比试验结果
4 结论
试验结果表明,本发明药物组、对比药物A组和对比药物B组的治愈率、有效率、复发率差异显著(P<0.05)。在治愈率方面本发明药物组比对比药物A组、对比药物B组分别高20.4个百分点和17.4个百分点;在有效率方面,本发明药物组比对比药物A组、对比药物B组分别高16.1个百分点和4.7个百分点,这充分证明本发明药物的治疗效果优于对比药物A和对比药物B。说明本发明药物中两种药味之间的配伍精良,缺一不可,两种药味之间的组合产生了明显的协同增效作用,产生了一加一大于二的技术效果。此外,本试验中发现33.3%的***炎患牛为隐性感染,未表现明显的临床炎症病变,建议养殖场高度重视隐性***炎的危害。
实验二:本发明药物的质量检测方法研究
1仪器与试药
1.1仪器
高效液相色谱仪(Agilent110高效液相色谱仪及工作站,G1311Aquat泵,G1314紫外检测器)。
1.2试药
水杨苷(salicin)对照品(中国药品生物制品检定研究院);本发明中药组合物;中药材(康济连锁药店提供);甲醇(色谱醇,上海生化工助剂厂);其他试剂为分析纯。
2方法与结果
2.1处方
紫葛500g,铺地黍500g。
2.2制备
取干燥的紫葛500g,铺地黍500g,第一次加11000mL水浸泡1小时,煎煮1小时,第二次加4000mL,煎煮1小时,合并水煎液,滤过,滤液浓缩,干燥,即得。
2.3 水杨苷的含量测定
2.3.1 HPLC色谱条件
采用HypersilDs(4.0mm×125mm,5μm)色谱柱;流动相:比例为30:70的甲醇-0.15%磷酸溶液;检测波长:200nm;柱温:20℃;流速:1.0mL·min-1;进样量:10μL;在该色谱条件下,对照品及样品色谱峰良好,无铺地黍阴性对照对测定无干扰。
2.3.2对照品溶液的制备
精密称取80℃干燥至恒重的水杨苷对照品适量,加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液。
2.3.3供试品溶液与阴性对照液的制备
精密称取本发明药物10g,加甲醇40mL,加热回流4h,提取液回流溶剂并浓缩至干,残渣加水10mL溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取5次,每次20mL,合并正丁醇提取液,用氨试液洗涤3次,每次15mL,正丁醇提取液回收溶剂至干,残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取滤液即得;另按处方比例制备不含铺地黍的阴性对照品,同法制成阴性对照液。
2.3.4标准曲线的绘制
精密称取80℃干燥至恒重的水杨苷对照品适量,用甲醇制成10.4,20.8,41.6,83.2,166.4μgmL-1系列浓度的溶液,分别精密量取上述5种浓度溶液各10μL,注入高效液相色谱仪进行测定。
以峰面积比值与浓度进行线性回归,得回归方程为:A=21.2763C-0.1391,r=0.9999。表明水杨苷在10.4~166.4μgmL-1浓度范围内呈良好的线性关系。
2.3.5稳定性试验
精密吸取供试品溶液10μL,分别于0,1,2,4,8h进样,并计算水杨苷含量。结果8h内RSD为0.45%(n=5)。表明样品溶液在8h内稳定。
2.3.6重复性试验
按供试品溶液制备方法平行处理样品5份,依法测定水杨苷含量并计算。结果测得水杨苷平均含量为0.12mg·g-1,RSD为1.3%。
2.3.7精密度实验
精密吸取水杨苷对照品溶液,重复进样5次,依法测定峰面积。结果RSD为0.23%(n=5)。表明精密度较好。
2.3.8回收率实验
精密称取已知水杨苷含量的同一批号的样品6份,按高、中、低浓度分别精密加入适量的水杨苷对照品溶液,按样品测定项下操作,依法测定,计算回收率。结果平均回收率为100.3%,RSD为0.45%(n=5)。
2.3.9样品含量测定
分别量取对照品溶液和供试品溶液适量,用微孔滤膜滤过,各进样10μL,按上述色谱条件测定3批样品,平行测定5次。按外标法以峰面积计算供试品溶液水杨苷的含量。本品含水杨苷应为标示含量的95%~105%,以每1g样品含水杨苷计,不得少于0.12mg。3批样品含量分别为100.8%(RSD=1.2%),101.7%(RSD=1.3%),99.2%(RSD=1.1%)。
具体实施方式:
实施例1,一种治疗奶牛***炎的药物,该药物是由以下重量份的原料制成的:紫葛1重量份,铺地黍2重量份。
实施例2,一种治疗奶牛***炎的药物,该药物是由以下重量份的原料制成的:紫葛2重量份,铺地黍1重量份。
实施例3,一种治疗奶牛***炎的药物,该药物是由以下重量份的原料制成的:紫葛1.5重量份,铺地黍1重量份。
实施例4,一种治疗奶牛***炎的药物,,该药物是由以下重量份的原料制成的:紫葛1重量份,铺地黍1重量份。
实施例1~4中任意一项所述的药物,可以将该药物按常规制法制备成片剂、丸剂、散剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂。
实施例5,实施例1~4中任意一项所述的药物,该药物采用如下方法制备:取紫葛、铺地黍,混合,加入3~15倍量的水浸泡0.5~2小时,煎煮0.5~2小时,煎煮2~4次,每次0.5~2小时,提取液合并,滤过,滤液浓缩,干燥,粉碎成细粉,加入辅料,混匀,制成散剂,即得。
实施例6,实施例1~4中任意一项所述的药物,该药物采用如下方法制备:取干燥的紫葛、铺地黍,第一次加11倍量水浸泡1小时,煎煮1小时,第二次加4倍量水煎煮1小时,合并水煎液,滤过,滤液浓缩,干燥,粉碎成细粉,过筛,混匀,制成散剂,即得。
实施例7,实施例5或6中任意一项所述的药物,该药物采用高效液相色谱法进行水杨苷的含量测定:
(1)色谱条件:采用HypersilDs色谱柱;流动相:比例为20~40:60~80的甲醇-0.15%磷酸溶液;检测波长:190~210nm;柱温:15~25℃;流速:0.5~1.5mL·min-1;进样量:5~20μL;
(2)对照品溶液制备:精密称取干燥至恒重的水杨苷对照品适量,加甲醇溶解制成对照品溶液;
(3)供试品溶液的制备:精密称取本发明药物,加甲醇,加热回流,提取液回流溶剂并浓缩至干,残渣加水溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取,合并正丁醇提取液,用氨试液洗涤,正丁醇提取液回收溶剂至干,残渣加甲醇溶解,摇匀,滤过,取滤液,即得供试品溶液;
(4)测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5~20μL,注入高效液相色谱仪,进行检测。
实施例8,实施例5或6中任意一项所述的药物,采用高效液相色谱法进行水杨苷的含量测定:
(1)色谱条件:采用HypersilDs色谱柱;流动相:比例为30:70的甲醇-0.15%磷酸溶液;检测波长:200nm;柱温:20℃;流速:1.0mL·min-1;进样量:10μL;
(2)对照品溶液制备:精密称取80℃干燥至恒重的水杨苷对照品适量,加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的对照品溶液;
(3)供试品溶液的制备:精密称取本发明药物10g,加甲醇40mL,加热回流4h,提取液回流溶剂并浓缩至干,残渣加水10mL溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取5次,每次20mL,合并正丁醇提取液,用氨试液洗涤3次,每次15mL,正丁醇提取液回收溶剂至干,残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取滤液,即得供试品溶液;
(4)测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,进行检测。
实施例9:本发明药物硬胶囊剂
药物处方:紫葛500g,铺地黍500g
制备方法:取干燥的紫葛500g,铺地黍500g,第一次加11000mL水浸泡1小时,煎煮1小时,第二次加4000mL,煎煮1小时,合并水煎液,滤过,滤液浓缩,干燥,粉碎成细粉,加入辅料,混匀,制成散剂,制成1000g。
采用高效液相色谱法对水杨苷(salicin)进行含量测定:
(1)色谱条件:采用HypersilDs色谱柱;流动相:比例为30:70的甲醇-0.15%磷酸溶液;检测波长:200nm;柱温:20℃;流速:1.0mL·min-1;进样量:10μL;
(2)对照品溶液制备:精密称取80℃干燥至恒重的水杨苷对照品适量,加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液;
(3)供试品溶液的制备:精密称取本发明药物10g,加甲醇40mL,加热回流4h,提取液回流溶剂并浓缩至干,残渣加水10mL溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取5次,每次20mL,合并正丁醇提取液,用氨试液洗涤3次,每次15mL,正丁醇提取液回收溶剂至干,残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取滤液,即得供试品溶液;
(4)测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,进行检测,检测结果为水杨苷的含量为0.1712mg/g。
此外,应当理解,虽然本说明书按照实施方式加以描述,但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案,说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见,本领域技术人员应当将说明书作为一个整体,各实施例中的技术方案也可以经适当组合,形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (4)
1.一种治疗奶牛***炎的药物,其特征在于,该药物是由以下重量份的原料制成的:紫葛1重量份,铺地黍1重量份;取干燥的紫葛、铺地黍,第一次加11倍量水浸泡1小时,煎煮1小时,第二次加4倍量水煎煮1小时,合并水煎液,滤过,滤液浓缩,干燥,粉碎成细粉,过筛,混匀,制成散剂,即得。
2.如权利要求1所述的药物,其特征在于,该药物制备成片剂、丸剂、散剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂。
3.如权利要求1或2所述的药物,其特征在于,该药物采用如下方法检测:采用高效液相色谱法进行水杨苷的含量测定:
(1)色谱条件:采用HypersilDs色谱柱;流动相:比例为20~40:60~80的甲醇-0.15%磷酸溶液;检测波长:190~210nm;柱温:15~25℃;流速:0.5~1.5mL·min-1;进样量:5~20μL;
(2)对照品溶液制备:精密称取干燥至恒重的水杨苷对照品适量,加甲醇溶解制成对照品溶液;
(3)供试品溶液的制备:精密称取所述药物,加甲醇,加热回流,提取液回收溶剂并浓缩至干,残渣加水溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取,合并正丁醇提取液,用氨试液洗涤,正丁醇提取液回收溶剂至干,残渣加甲醇溶解,摇匀,滤过,取滤液,即得供试品溶液;
(4)测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5~20μL,注入高效液相色谱仪,进行检测。
4.如权利要求3所述的药物,其特征在于,该药物采用如下方法检测:采用高效液相色谱法进行水杨苷的含量测定:
(1)色谱条件:采用HypersilDs色谱柱;流动相:比例为30:70的甲醇-0.15%磷酸溶液;检测波长:200nm;柱温:20℃;流速:1.0mL·min-1;进样量:10μL;
(2)对照品溶液制备:精密称取80℃干燥至恒重的水杨苷对照品适量,加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的对照品溶液;
(3)供试品溶液的制备:精密称取所述药物10g,加甲醇40mL,加热回流4h,提取液回收溶剂并浓缩至干,残渣加水10mL溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取5次,每次20mL,合并正丁醇提取液,用氨试液洗涤3次,每次15mL,正丁醇提取液回收溶剂至干,残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取滤液,即得供试品溶液;
(4)测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,进行检测。
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CN1237448A (zh) * | 1999-06-15 | 1999-12-08 | 李珍蓉 | 中草药治***肿块的方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
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饲用药用植物的开发利用;翁长江;《中国草食动物》;19920629(第03期);第29,36页 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
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CN105169004A (zh) | 2015-12-23 |
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