CN105169004B - 一种治疗奶牛***炎的药物及其制法与检测方法及用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及中药领域，具体涉及一种治疗奶牛***炎的药物及其制法与检测方法及用途。该药物是由以下重量份的原料制成的：紫葛1～2重量份，铺地黍1～2重量份。该药物制备成片剂、丸剂、散剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂。制法为：干燥的紫葛、铺地黍，第一次加11倍量水浸泡1小时，煎煮1小时，第二次加4倍量水煎煮1小时，合并水煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成细粉，过筛，混匀，制成散剂。药物质量检测方法的色谱条件为：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30：70的甲醇‑0.15%磷酸溶液；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min^‑1；进样量：10μL。本发明药物组方合理、治疗效果显著。

Description

一种治疗奶牛***炎的药物及其制法与检测方法及用途

技术领域

本发明涉及中药领域，具体涉及一种铺地黍与紫葛的活性药物及其制备方法。

背景技术

奶牛***炎又称奶牛乳腺炎（bovine mastitis），是奶牛乳腺受物理、化学、微生物刺激导致乳腺组织局部微循环障碍、乳腺腺泡发生病变、免疫功能障碍等症状的一种复杂的疾病。微生物是奶牛***炎的主要病因，目前已发现约有150多种病原体可引起奶牛***炎，常见菌以葡萄球菌、链球菌、大肠埃希菌、化脓杆菌为主，约占奶牛***炎病例90%以上。

据世界奶牛业协会统计，全世界奶牛***炎发生率在50%左右。国外奶牛***炎发病率在25%～60%，我国为20%～70%，部分奶牛场发病率更高。奶牛发生***炎后，机体启动防御体系导致牛奶中白细胞等体细胞增加，产奶量下降，奶质量下降，严重者也可能引起奶牛发情减少。研究报道，平均每头发病奶牛每年损失超100美元，全美国每年因奶牛***炎造成的损失超过20亿美元。全世界每年因***炎造成的经济损失高达350亿美元。

我国从20世纪80年代开始对奶牛***炎进行研究以来，抗生素一直是治疗***炎的首选药物，其中青霉素、链霉素、庆大霉素、氯唑西林钠、头孢噻呋钠等抗生素和化学药品在临床上治疗细菌性奶牛***炎取得了很显著的成效，治疗率高达90%。然而，长期大量使用抗生素导致了耐药菌、超级细菌的出现，各类化学合成药品的残留代谢物已严重威胁着人类健康。当前，食品质量安全逐渐引起社会的重视，研究人员开始研究新型的绿色的无公害的、无残留的、速效的药物来替代抗生素和化学药品治疗奶牛***炎。无公害、无残留、无休药期的中药成为当前的研究热点。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种组方合理、治疗效果好的治疗奶牛***炎的药物。

本发明的另一目的是提供该药物的制备方法。

本发明还提供了该药物的质量检测方法。

本发明还提供了该药物的制药用途。

本发明药物是经发明人多年来精心研制，主要用于治疗奶牛***炎。本发明药物既能清热解毒、活血散瘀，又能促进***血液循环疏畅，有利于炎肿的吸收消散，促进乳汁的分泌，对奶牛***炎具有较好的治疗效果。

在本发明药物中原料药的基源如下：

紫葛为葡萄科蛇葡萄属植物异叶蛇葡萄Ampelopsis humulifolia Bungevar.heterophylla（Thunb.）K.Koch.[A.heterophylla（Thunb.）Sieb. et Zucc]的根皮。

铺地黍为禾本科植物铺地黍Panicum repens L.的全草。

本发明的目的是由以下方式实现的：

一种药物是由以下重量份的原料制成的：紫葛1～2重量份，铺地黍1～2重量份。

该药物优选是由以下重量份的原料制成的：紫葛1重量份，铺地黍2重量份。

该药物优选是由以下重量份的原料制成的：紫葛2重量份，铺地黍1重量份。

该药物优选是由以下重量份的原料制成的：紫葛1重量份，铺地黍1重量份。

所述的药物中可以制备成片剂、丸剂、散剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂。

所述的药物采用如下方法制备：取紫葛、铺地黍，混合，加入3～15倍量的水浸泡0.5～2小时，煎煮0.5～2小时，煎煮2～4次，每次0.5～2小时，提取液合并，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成细粉，加入辅料，混匀，制成散剂，即得。

所述的药物采用如下方法制备：取干燥的紫葛、铺地黍，第一次加11倍量水浸泡1小时，煎煮1小时，第二次加4倍量水煎煮1小时，合并水煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成细粉，过筛，混匀，制成散剂，即得。

所述的药物采用如下方法检测：采用高效液相色谱法进行水杨苷的含量测定：

（1）色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为20～40：60～80的甲醇-0.15%磷酸溶液；检测波长：190～210nm；柱温：15～25℃；流速：0.5～1.5mL·min^-1；进样量：5～20μL；

（2）对照品溶液制备：精密称取干燥至恒重的水杨苷对照品适量，加甲醇溶解制成对照品溶液；

（3）供试品溶液的制备：精密称取本发明药物，加甲醇，加热回流，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；

（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5～20μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。

所述的药物优选采用如下方法检测：采用高效液相色谱法进行水杨苷的含量测定：

（1）色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30：70的甲醇-0.15%磷酸溶液；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min^-1；进样量：10μL；

（2）对照品溶液制备：精密称取80℃干燥至恒重的水杨苷对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的对照品溶液；

（3）供试品溶液的制备：精密称取本发明药物10g，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；

（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。

所述的药物可用于制备治疗奶牛***炎、牛急性肠炎的药物或保健品。

实验一：本发明药物治疗奶牛***炎的试验研究

1 实验材料

1.1 试验药品

本发明药物

处方：紫葛50g，铺地黍50g

制备方法：取干燥的紫葛50g、铺地黍50g第一次加1100mL水浸泡1小时，煎煮1小时，第二次加400mL，煎煮1小时，合并水煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，得本发明药物。

对比药物A

处方：紫葛100g

制备方法：取干燥的紫葛100g，第一次加1100mL水浸泡1小时，煎煮1小时，第二次加400mL，煎煮1小时，合并水煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，得对比药物A。

对比药物B

处方：铺地黍100g

制备方法：取干燥的铺地黍100g，第一次加1100mL水浸泡1小时，煎煮1小时，第二次加400mL，煎煮1小时，合并水煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，得对比药物B。

1.2 试验动物

连云港市云台农场奶牛场400头泌乳奶牛，对产奶量下降的奶牛进行加州***炎检测法（CMT）检测，选取90头“++”以上的阳性奶牛，随机分为三组，即本发明药物治疗组、对比药物A治疗组、对比药物B治疗组，每组30头。

1.3 试验器材

保定栏、保定绳、投药瓶、50mL注射器、20号通乳针、加州***炎检测法（CMT）检验板。

2 试验方法

2.1 加州***炎检测法

分别吸取同等剂量的牛奶和稀释的CMT诊断液加入检验板，充分混匀，进行观察。加州***炎检测法判断标准如试剂盒说明书所述，奶牛***炎治疗效果判断标准见表1。

表1  奶牛***炎治疗效果判断标准

2.2 临床分组给药

本发明药物治疗组：本发明药物10g，用开水浸泡，冷却后搅拌均匀，用投药瓶进行灌服，每次100mL，1次/d，连用5d为一个疗程。

对比药物A治疗组：对比药物A 10g，用开水浸泡，冷却后搅拌均匀，用投药瓶进行灌服，每次100mL，1次/d，连用5d为一个疗程。

对比药物B组：对比药物B 10g，用开水浸泡，冷却后搅拌均匀，用投药瓶进行灌服，每次100mL，1次/d，连用5d为一个疗程。

对于试验奶牛，实行统一的饲养管理，统一的饲料配方，不同药物治疗三个疗程，共计15d。三个疗程后对三组奶牛进行CMT检测。

3 结果

3.1 ***炎阳性奶牛

应用加州***炎检测法对400头泌乳牛进行检测，“++”以上的阳性奶牛150头，阳性率达37.5%，其中有红、肿、热、痛症状的100头，占阳性奶牛66.7%，100头中选取90头做临床试验。

3.2 不同药物治疗效果

三个疗程后，对三组奶牛的治疗效果进行CMT检测，并于第20天复检是否复发，结果见表2。本发明药物组、对比药物A组和对比药物B组奶牛***炎的治愈率分别是58.6%、38.2%、41.1%，有效率分别是90.2%、74.1%、85.5%，复发率分别是3.6%、12.8%、11.92%；

表2  三组不同药物治疗效果对比试验结果

4 结论

试验结果表明，本发明药物组、对比药物A组和对比药物B组的治愈率、有效率、复发率差异显著（P<0.05）。在治愈率方面本发明药物组比对比药物A组、对比药物B组分别高20.4个百分点和17.4个百分点；在有效率方面，本发明药物组比对比药物A组、对比药物B组分别高16.1个百分点和4.7个百分点，这充分证明本发明药物的治疗效果优于对比药物A和对比药物B。说明本发明药物中两种药味之间的配伍精良，缺一不可，两种药味之间的组合产生了明显的协同增效作用，产生了一加一大于二的技术效果。此外，本试验中发现33.3%的***炎患牛为隐性感染，未表现明显的临床炎症病变，建议养殖场高度重视隐性***炎的危害。

实验二：本发明药物的质量检测方法研究

1仪器与试药

1.1仪器

高效液相色谱仪（Agilent110高效液相色谱仪及工作站，G1311Aquat泵，G1314紫外检测器）。

1.2试药

水杨苷（salicin）对照品（中国药品生物制品检定研究院）；本发明中药组合物；中药材（康济连锁药店提供）；甲醇（色谱醇，上海生化工助剂厂）；其他试剂为分析纯。

2方法与结果

2.1处方

紫葛500g，铺地黍500g。

2.2制备

取干燥的紫葛500g，铺地黍500g，第一次加11000mL水浸泡1小时，煎煮1小时，第二次加4000mL，煎煮1小时，合并水煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，即得。

2.3 水杨苷的含量测定

2.3.1 HPLC色谱条件

采用HypersilDs（4.0mm×125mm，5μm）色谱柱；流动相：比例为30：70的甲醇-0.15%磷酸溶液；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min^-1；进样量：10μL；在该色谱条件下，对照品及样品色谱峰良好，无铺地黍阴性对照对测定无干扰。

2.3.2对照品溶液的制备

精密称取80℃干燥至恒重的水杨苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液。

2.3.3供试品溶液与阴性对照液的制备

精密称取本发明药物10g，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液即得；另按处方比例制备不含铺地黍的阴性对照品，同法制成阴性对照液。

2.3.4标准曲线的绘制

精密称取80℃干燥至恒重的水杨苷对照品适量，用甲醇制成10.4，20.8，41.6，83.2，166.4μgmL^-1系列浓度的溶液，分别精密量取上述5种浓度溶液各10μL，注入高效液相色谱仪进行测定。

以峰面积比值与浓度进行线性回归，得回归方程为：A=21.2763C-0.1391，r=0.9999。表明水杨苷在10.4～166.4μgmL^-1浓度范围内呈良好的线性关系。

2.3.5稳定性试验

精密吸取供试品溶液10μL，分别于0，1，2，4，8h进样，并计算水杨苷含量。结果8h内RSD为0.45%（n=5）。表明样品溶液在8h内稳定。

2.3.6重复性试验

按供试品溶液制备方法平行处理样品5份，依法测定水杨苷含量并计算。结果测得水杨苷平均含量为0.12mg·g^-1，RSD为1.3%。

2.3.7精密度实验

精密吸取水杨苷对照品溶液，重复进样5次，依法测定峰面积。结果RSD为0.23%（n=5）。表明精密度较好。

2.3.8回收率实验

精密称取已知水杨苷含量的同一批号的样品6份，按高、中、低浓度分别精密加入适量的水杨苷对照品溶液，按样品测定项下操作，依法测定，计算回收率。结果平均回收率为100.3%，RSD为0.45%（n=5）。

2.3.9样品含量测定

分别量取对照品溶液和供试品溶液适量，用微孔滤膜滤过，各进样10μL，按上述色谱条件测定3批样品，平行测定5次。按外标法以峰面积计算供试品溶液水杨苷的含量。本品含水杨苷应为标示含量的95%～105%，以每1g样品含水杨苷计，不得少于0.12mg。3批样品含量分别为100.8%（RSD=1.2%），101.7%（RSD=1.3%），99.2%（RSD=1.1%）。

具体实施方式：

实施例1，一种治疗奶牛***炎的药物，该药物是由以下重量份的原料制成的：紫葛1重量份，铺地黍2重量份。

实施例2，一种治疗奶牛***炎的药物，该药物是由以下重量份的原料制成的：紫葛2重量份，铺地黍1重量份。

实施例3，一种治疗奶牛***炎的药物，该药物是由以下重量份的原料制成的：紫葛1.5重量份，铺地黍1重量份。

实施例4，一种治疗奶牛***炎的药物，，该药物是由以下重量份的原料制成的：紫葛1重量份，铺地黍1重量份。

实施例1～4中任意一项所述的药物，可以将该药物按常规制法制备成片剂、丸剂、散剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂。

实施例5，实施例1～4中任意一项所述的药物，该药物采用如下方法制备：取紫葛、铺地黍，混合，加入3～15倍量的水浸泡0.5～2小时，煎煮0.5～2小时，煎煮2～4次，每次0.5～2小时，提取液合并，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成细粉，加入辅料，混匀，制成散剂，即得。

实施例6，实施例1～4中任意一项所述的药物，该药物采用如下方法制备：取干燥的紫葛、铺地黍，第一次加11倍量水浸泡1小时，煎煮1小时，第二次加4倍量水煎煮1小时，合并水煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成细粉，过筛，混匀，制成散剂，即得。

实施例7，实施例5或6中任意一项所述的药物，该药物采用高效液相色谱法进行水杨苷的含量测定：

（1）色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为20～40：60～80的甲醇-0.15%磷酸溶液；检测波长：190～210nm；柱温：15～25℃；流速：0.5～1.5mL·min^-1；进样量：5～20μL；

（2）对照品溶液制备：精密称取干燥至恒重的水杨苷对照品适量，加甲醇溶解制成对照品溶液；

（3）供试品溶液的制备：精密称取本发明药物，加甲醇，加热回流，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；

（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5～20μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。

实施例8，实施例5或6中任意一项所述的药物，采用高效液相色谱法进行水杨苷的含量测定：

（1）色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30：70的甲醇-0.15%磷酸溶液；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min^-1；进样量：10μL；

（2）对照品溶液制备：精密称取80℃干燥至恒重的水杨苷对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的对照品溶液；

（3）供试品溶液的制备：精密称取本发明药物10g，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；

（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。

实施例9：本发明药物硬胶囊剂

药物处方：紫葛500g，铺地黍500g

制备方法：取干燥的紫葛500g，铺地黍500g，第一次加11000mL水浸泡1小时，煎煮1小时，第二次加4000mL，煎煮1小时，合并水煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成细粉，加入辅料，混匀，制成散剂，制成1000g。

采用高效液相色谱法对水杨苷（salicin）进行含量测定：

（1）色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30：70的甲醇-0.15%磷酸溶液；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min^-1；进样量：10μL；

（2）对照品溶液制备：精密称取80℃干燥至恒重的水杨苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液；

（3）供试品溶液的制备：精密称取本发明药物10g，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；

（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测，检测结果为水杨苷的含量为0.1712mg/g。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (4)

1.一种治疗奶牛***炎的药物，其特征在于，该药物是由以下重量份的原料制成的：紫葛1重量份，铺地黍1重量份；取干燥的紫葛、铺地黍，第一次加11倍量水浸泡1小时，煎煮1小时，第二次加4倍量水煎煮1小时，合并水煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成细粉，过筛，混匀，制成散剂，即得。

2.如权利要求1所述的药物，其特征在于，该药物制备成片剂、丸剂、散剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂。

3.如权利要求1或2所述的药物，其特征在于，该药物采用如下方法检测：采用高效液相色谱法进行水杨苷的含量测定：

（1）色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为20～40：60～80的甲醇-0.15%磷酸溶液；检测波长：190～210nm；柱温：15～25℃；流速：0.5～1.5mL·min^-1；进样量：5～20μL；

（2）对照品溶液制备：精密称取干燥至恒重的水杨苷对照品适量，加甲醇溶解制成对照品溶液；

（3）供试品溶液的制备：精密称取所述药物，加甲醇，加热回流，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；

（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5～20μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。

4.如权利要求3所述的药物，其特征在于，该药物采用如下方法检测：采用高效液相色谱法进行水杨苷的含量测定：

（1）色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30：70的甲醇-0.15%磷酸溶液；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min^-1；进样量：10μL；

（2）对照品溶液制备：精密称取80℃干燥至恒重的水杨苷对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的对照品溶液；

（3）供试品溶液的制备：精密称取所述药物10g，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；

（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。