CN105168649A - 一种从大叶藻中提取黄酮类化合物的方法 - Google Patents

一种从大叶藻中提取黄酮类化合物的方法 Download PDF

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张朝辉
李静
应锐
段筱杉
李八方
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Abstract

本发明涉及一种大叶藻黄酮类化合物的纯化方法。本方法以大叶藻为原料，将提取的大叶藻黄酮类化合物与金属盐反应，搅拌，调节温度和pH值，反应完全后收集沉淀并溶解于乙醇溶液中，然后加入EDTA解络合剂振荡反应，旋转蒸干，再用甲醇溶解过滤，滤液浓缩、干燥即得纯化后大叶藻黄酮类化合物。本方法可使大叶藻黄酮类化合物的含量达到55％以上。本发明工艺流程简单，操作周期短，原料易得，溶剂易回收，耗能低，是一种有发展前景的黄酮类化合物的纯化方法。

Description

一种从大叶藻中提取黄酮类化合物的方法
技术领域
本发明属于黄酮类物质纯化技术领域，特别是涉及一种从大叶藻中提取黄酮类化合物的纯化方法。
背景技术
大叶藻(ZosteramarinaL.)是多年生海草，属被子植物门，单子叶植物纲，沼生目，隶属于眼子菜科大叶藻属。大叶藻属中的大叶藻、宽叶大叶藻、丛生大叶藻、具茎大叶藻和矮大叶藻在我国均有分布。其中，大叶藻主要分布在我国辽宁(大连、兴城和绥中)、山东(青岛、长岛、荣成、石岛和乳山)和河北(北戴河)沿海区域。大叶藻作为一种生长在咸水环境中的高等植物，其独特的生长环境就决定了其体内肯定会有很多具有生物活性的物质。黄酮类化合物就是其中的一种活性物质，具有抗氧化、抗衰老、降血脂等多种生物活性。
黄酮类化合物的纯化是研究具有生物活性的黄酮类化合物的重要课题，目前对大叶藻中黄酮类化合物的纯化主要有硅胶柱层析法和大孔树脂吸附法。经大孔树脂纯化后的大叶藻黄酮类化合物的含量达到51％左右，整个纯化周期约为4h，纯化周期较长。因此，寻求一种更加方便快捷、生产周期短的纯化方法成为研究热点。
发明内容
本发明的目的是提供一种以大叶藻为主要原料并具有工艺流程简单、周期短、能耗低、溶剂易回收的大叶藻黄酮类化合物的纯化方法。
本发明的方法，包括如下步骤：
1)大叶藻黄酮类化合物的提取：
将大叶藻烘干研磨成粉并过40～60目筛，按1:15～1:20的料液比加入70～75％(V/V)的乙醇，按0.02～0.03g/g原料比加入纤维素酶，调节pH为4.5～6.5，在45～65℃下反应25～35min，然后置于功率为200～300W的超声波设备中处理10～20min，再置于50～60℃条件下浸提3h；将浸提液浓缩、干燥，即得大叶藻黄酮类化合物的粗提物；
2)大叶藻黄酮-金属络合物的制备
将步骤1)所得大叶藻黄酮类化合物的粗提物用70～75％(V/V)乙醇溶液配制成浓度为10～18mg/mL的溶液，边搅拌边加入金属盐；调节溶液的pH值为8～10，进行络合反应，反应结束后收集沉淀，该沉淀即为大叶藻黄酮-金属络合物；
3)大叶藻黄酮-金属络合物的解离：
将步骤2)所得大叶藻黄酮-金属络合物均匀分散溶解于30～35％(V/V)乙醇溶液中，加入EDTA进行解络合反应，振荡反应至沉淀完全溶解，冷却至室温，旋转蒸干，用甲醇溶解过滤，将滤液浓缩、干燥即得纯化后大叶藻黄酮类化合物。
其中步骤2)所述金属盐为硫酸锌或乙酸锌。
步骤2)所述络合反应温度为50～60℃，络合反应时间为30～60min。
步骤3)所述解络合反应温度为55～65℃。
本发明提供的一种海草黄酮类化合物的纯化方法，以大叶藻为原料，采用金属络合-解离的方法对大叶藻黄酮类化合物进行纯化，纯化后的大叶藻黄酮类化合物含量达到55％以上，纯化周期约为2.5h，与大孔树脂纯化方法相比纯化效果更好、纯化周期大大缩短。本发明工艺流程简单、周期短、原料易得、溶剂易回收、能耗低、能够显著提高大叶藻黄酮类化合物的含量。
具体实施方式
以下为本发明的具体实例，进一步描述本发明。
实施例1
步骤一：大叶藻黄酮类化合物的提取
将大叶藻烘干研磨成粉并过40目筛，按1:16的料液比加入70％(V/V)的乙醇，按0.025g/g原料(大叶藻)加入纤维素酶，调节pH为5，在45℃下反应30min，然后置于功率为250W的超声波设备中处理15min，再置于55℃条件下浸提3h。将浸提液浓缩、干燥，即得大叶藻黄酮类化合物的粗提物。
以芦丁为标准品，采用亚硝酸钠-硝酸铝显色法测定黄酮类化合物的含量。经回归得芦丁标准曲线方程为A＝11.8735c+0.0055，线性相关系数R2＝0.9994。称取大叶藻黄酮类化合物适量并溶解，经亚硝酸钠-硝酸铝显色后，在510nm处测吸光度，带入标准曲线方程即得黄酮的浓度，经计算得到大叶藻黄酮类化合物的含量。
步骤二：大叶藻黄酮-金属络合物的制备
将步骤一所得大叶藻黄酮类化合物的粗提物用70％(V/V)乙醇溶液配制成浓度为16mg/mL的溶液，用磁力搅拌器边搅拌边加入5mg/mL的硫酸锌，设置络合反应温度为55℃，用4％NaOH溶液调pH值为9，反应30min后，收集沉淀，该沉淀即为大叶藻黄酮-金属络合物。
步骤三：大叶藻黄酮-金属络合物的解离
将步骤二所得大叶藻黄酮-金属络合物均匀分散溶解于30％(V/V)乙醇溶液中，按0.12g/g大叶藻黄酮类化合物的粗提物加入EDTA，设置解络合反应温度为65℃，振荡反应至沉淀完全溶解，冷却至室温，旋转蒸干，用甲醇溶解过滤，将滤液浓缩、干燥即得纯化后大叶藻黄酮类化合物。经测定，纯化后大叶藻黄酮类化合物的含量为58.09％。
实施例2
步骤一：大叶藻黄酮类化合物的提取
将大叶藻烘干研磨成粉并过40目筛，按1:16的料液比加入70％(V/V)的乙醇，按0.025g/g原料加入纤维素酶，调节pH为5，在45℃下反应30min，然后置于功率为250W的超声波设备中处理15min，再置于55℃条件下浸提3h。将浸提液浓缩、干燥，即得大叶藻黄酮类化合物的粗提物。
以芦丁为标准品，采用亚硝酸钠-硝酸铝显色法测定黄酮类化合物的含量。经回归得芦丁标准曲线方程为A＝11.8735c+0.0055，线性相关系数R2＝0.9994。称取大叶藻黄酮类化合物适量并溶解，经亚硝酸钠-硝酸铝显色后，在510nm处测吸光度，带入标准曲线方程即得黄酮的浓度，经计算得到大叶藻黄酮类化合物的含量。
步骤二：大叶藻黄酮-金属络合物的制备
将步骤一所得大叶藻黄酮类化合物的粗提物用70％(V/V)乙醇溶液配制成浓度为16mg/mL的溶液，用磁力搅拌器边搅拌边加入6mg/mL的乙酸锌，设置络合反应温度为55℃，用4％NaOH溶液调pH值为9.5，反应40min后，收集沉淀，该沉淀即为大叶藻黄酮-金属络合物。
以芦丁为标准品，采用亚硝酸钠-硝酸铝显色法得芦丁标准曲线方程为A＝11.8735c+0.0055，线性相关系数R2＝0.9994。称取大叶藻黄酮类化合物适量并溶解，经亚硝酸钠-硝酸铝显色后，在510nm处测吸光度，带入标准曲线方程即得黄酮的浓度，经计算得到大叶藻黄酮类化合物的含量。
步骤三：大叶藻黄酮-金属络合物的解离
将步骤二所得大叶藻黄酮-金属络合物均匀分散溶解于30％(V/V)乙醇溶液中，按0.15g/g大叶藻黄酮类化合物的粗提物加入EDTA，设置解络合反应温度为65℃，振荡反应至沉淀完全溶解，冷却至室温，旋转蒸干，用甲醇溶解过滤，将滤液浓缩、干燥即得纯化后大叶藻黄酮类化合物。经测定，纯化后大叶藻黄酮类化合物的含量为56.24％。

Claims (5)

1.一种从大叶藻中提取黄酮类化合物的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：
1)大叶藻黄酮类化合物的提取：
将大叶藻烘干研磨成粉并过40～60目筛，按1:15～1:20的料液比加入70～75％的乙醇，按0.02～0.03g/g原料比加入纤维素酶，调节pH为4.5～6.5，在45～65℃下反应25～35min，然后置于功率为200～300W的超声波设备中处理10～20min，再置于50～60℃条件下浸提3h；将浸提液浓缩、干燥，即得大叶藻黄酮类化合物的粗提物；
2)大叶藻黄酮-金属络合物的制备
将步骤1)所得大叶藻黄酮类化合物的粗提物用70～75％(V/V)乙醇溶液配制成浓度为10～18mg/mL的溶液，边搅拌边加入金属盐；调节溶液的pH值为8～10，进行络合反应，反应结束后收集沉淀，该沉淀即为大叶藻黄酮-金属络合物；
3)大叶藻黄酮-金属络合物的解离：
将步骤2)所得大叶藻黄酮-金属络合物均匀分散溶解于30～35％(V/V)乙醇溶液中，加入EDTA进行解络合反应，振荡反应至沉淀完全溶解，冷却至室温，旋转蒸干，用甲醇溶解过滤，将滤液浓缩、干燥即得纯化后大叶藻黄酮类化合物。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤2)中的金属盐为硫酸锌或乙酸锌。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤2)中络合反应温度为50～60℃。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤2)中络合反应时间为30～60min。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤3)中解络合反应温度为55～65℃。
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