CN105163760B

CN105163760B - 肝纤维化的预防或治疗试剂

Info

Publication number: CN105163760B
Application number: CN201380072807.XA
Authority: CN
Inventors: 小田上刚直; 小路弘行; 小原道法
Original assignee: Co Ltd's Prism Pharmacy
Current assignee: Co Ltd's Prism Pharmacy
Priority date: 2012-12-12
Filing date: 2013-12-12
Publication date: 2018-01-26
Anticipated expiration: 2033-12-12
Also published as: CN105163760A; JPWO2014092154A1; US20170266212A1; US9700569B2; US20150306115A1; EP2932977A4; WO2014092154A1; JP6303112B2; EP2932977A1; US10265331B2

Abstract

CBP/β‑连环蛋白抑制剂对于Cre/loxP/HCV‑MxCre转基因小鼠显示优良的去纤维化效果，并且可用作肝纤维化的预防或治疗试剂，所述Cre/loxP/HCV‑MxCre转基因小鼠是肝纤维化的动物实验模型。

Description

肝纤维化的预防或治疗试剂

技术领域

本发明涉及肝纤维化的预防或治疗药物。更特别地，本发明涉及含有CBP/β-连环蛋白抑制剂的肝纤维化的预防或治疗药物。

背景技术

肝纤维化是其中纤维组织的产生在修复的肝细胞的过程中受到促进的状况，所述纤维组织包含胶原和糖缀合物，被称为细胞外基质，所述肝细胞由于多种肝病症例如病毒性肝炎、酒精性肝病、自身免疫性肝病、代谢性肝病等而坏死，并且这些纤维组织随着疾病进展逐步累积。

特别地，在丙型肝炎病毒（HCV）的感染之后，容易发生持续性感染并发展慢性肝炎．慢性肝炎进展为肝纤维化，其中基质的产生超过其分解和吸收，并且纤维组织的累积继续，并逐步进展为其中肝由于纤维组织而***的肝硬化。

肝硬化是慢性肝炎的终末期症状，并且高度频繁地发展为肝细胞癌。不存在除肝移植外的根治疗法，并且迫切需要在发展为肝硬化前的治疗方法的开发，所述治疗方法包括在肝纤维化阶段中的去纤维化（defibrosis）。

专利文件1、2等公开了含有氢醌衍生物、原花色素等作为活性成分的肝纤维化抑制剂。这些已知的文件仅公开了在细胞水平上对肝纤维化的抑制作用、以及通过化学物质例如四氯化碳等诱导的急性肝硬化模型的研究，并且未进行使用显示从慢性肝炎到肝纤维化和肝硬化的缓慢且持续性进展的模型的验证，所述模型通过肝炎病毒引起。

[文件列表]

[专利文件]

专利文件1：JP-A-2009-256226

专利文件2：JP-A-2009-242374。

发明内容

本发明要解决的问题

本发明旨在提供具有优良的预防或治疗效果的肝纤维化的预防或治疗药物，特别是肝炎病毒所引起的肝纤维化的预防或治疗药物。

解决问题的手段

考虑到上文提及的问题，本发明人已对建立肝炎病毒所以引起的肝纤维化的适当动物模型进行了深入研究。结果，他们已成功建立了病毒性慢性肝炎模型小鼠，其在任意时间表达肝炎病毒蛋白质，并且发展为慢性肝炎、肝纤维化且随后为肝硬化。

使用病毒性慢性肝炎模型小鼠，他们在候选化合物中寻找肝纤维化的预防或治疗药物，并且出乎意料地发现CBP/β-连环蛋白抑制剂显示优良的肝纤维化的预防或治疗作用，从而完成了本发明。

因此，本发明的主旨如下所述。

[1]肝纤维化的预防或治疗试剂，其包含CBP/β-连环蛋白抑制剂。

[2] [1]的预防或治疗试剂，其中所述肝纤维化是肝炎病毒的感染所引起的肝纤维化。

[3] [1]的预防或治疗试剂，其中所述肝纤维化是丙型肝炎或丙型肝炎病毒的感染所引起的肝纤维化。

[4] [1]至[3]中任一项的预防或治疗试剂，其中所述CBP/β-连环蛋白抑制剂是下式（I）的化合物或其药学上可接受的盐：

其中

A是-CHR⁷-

其中

R⁷是氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的芳基烷基、任选取代的杂芳基烷基、任选取代的环烷基烷基、任选取代的杂环烷基烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烷基或任选取代的杂环烷基，

G是-NH-、-NR⁶-、-O-、-CHR⁶-或-C（R⁶）₂-，其中R⁶独立地选自任选取代的烷基、任选取代的烯基和任选取代的炔基、

R¹是任选取代的芳基烷基、任选取代的杂芳基烷基、任选取代的环烷基烷基或任选取代的杂环烷基烷基；

R²是–W²¹-W²²-Rb-R²⁰，其中W²¹是–（CO）-或–（SO₂）-；W²²是键、-O-、-NH-或任选取代的低级亚烷基；

Rb是键或任选取代的低级亚烷基；和

R²⁰是任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烷基或任选取代的杂环烷基，和

R³是任选取代的烷基、任选取代的烯基或任选取代的炔基。

[5] [4]的预防或治疗试剂，其中所述CBP/β-连环蛋白抑制剂选自：

（6S,9S）-N-苄基-6-（4-羟基苄基）-2,9-二甲基-8-（萘-1-基甲基）-4,7-二氧代八氢-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺，

（6S,9S）-2-烯丙基-N-苄基-6-（4-羟基苄基）-9-甲基-8-（萘-1-基甲基）-4,7-二氧代八氢-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺，

（6S,9S）-N-苄基-6-（4-羟基苄基）-9-甲基-8-（萘-1-基甲基）-4,7-二氧代六氢吡嗪并[2,1-c][1,2,4]噁二嗪-1（6H）-甲酰胺，

（6S,9S）-8-（（2-氨基苯并[d]噻唑-4-基）甲基）-N-苄基-6-（4-羟基苄基）-2,9-二甲基-4,7-二氧代八氢-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺，

（6S,9S）-N-苄基-6-（4-羟基苄基）-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-（喹啉-8-基甲基）八氢-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺，

（6S,9S）-2-烯丙基-N-苄基-6-（4-羟基苄基）-9-甲基-4,7-二氧代-8-（喹啉-8-基甲基）八氢-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺，

4-（（（6S,9S）-1-（苄基氨基甲酰）-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-（喹啉-8-基甲基）八氢-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸二氢酯，

4-（（（6S,9S）-1-（苄基氨基甲酰）-2,9-二甲基-8-（萘-1-基甲基）-4,7-二氧代八氢-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸二氢酯，

4-（（（6S,9S）-1-（苄基氨基甲酰）-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-（喹啉-8-基甲基）八氢-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸钠，

4-（（（6S,9S）-1-（苄基氨基甲酰）-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-（萘-8-基甲基）八氢-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸钠，

（6S,9S）-2-烯丙基-6-（4-羟基苄基）-9-甲基-4,7-二氧代-N-（（R）-1-苯乙基）-8-（喹啉-8-基甲基）八氢-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺，

（6S,9S）-2-烯丙基-6-（4-羟基苄基）-9-甲基-4,7-二氧代-N-（（S）-1-苯乙基）-8-（喹啉-8-基甲基）八氢-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺，

（6S,9S）-N-苄基-6-（4-羟基-2,6-二甲基苄基）-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-（喹啉-8-基甲基）八氢-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺，

（6S,9S）-8-（苯并[b]噻吩-3-基甲基）-N-苄基-6-（4-羟基苄基）-2,9-二甲基-4,7-二氧代八氢-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺，

（6S,9S）-8-（苯并[c][1,2,5]噻二唑-4-基甲基）-N-苄基-6-（4-羟基苄基）-2,9-二甲基-4,7-二氧代八氢-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺，

（6S,9S）-N-苄基-6-（4-羟基苄基）-8-（异喹啉-5-基甲基）-2,9-二甲基-4,7-二氧代八氢-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺，

（6S,9S）-N-苄基-8-（（5-氯噻吩并[3,2-b]吡啶-3-基）甲基）-6-（4-羟基苄基）-2,9-二甲基-4,7-二氧代八氢-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺，

（6S,9S）-N-苄基-6-（4-羟基苄基）-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-（喹喔啉-5-基甲基）八氢-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺，和

（6S,9S）-6-（4-羟基苄基）-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-（喹啉-8-基甲基）-N-（噻吩-2-基甲基）八氢-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺。

[6] [4]的预防或治疗试剂，其中所述CBP/β-连环蛋白抑制剂选自：

4-（（（6S,9S,9aS）-1-（苄基氨基甲酰）-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-（喹啉-8-基甲基）八氢-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸二氢酯，和

（6S,9S,9aS）-N-苄基-6-（4-羟基苄基）-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-（喹啉-8-基甲基）八氢-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺。

[7] CBP/β-连环蛋白抑制剂，其用于肝纤维化的预防或治疗。

[8] [7]的抑制剂，其中所述肝纤维化是肝炎病毒的感染所引起的。

[9] [7]的抑制剂，其中所述肝纤维化是丙型肝炎或丙型肝炎病毒的感染所引起的。

[10]预防或治疗肝纤维化的方法，其包括给哺乳动物施用有效量的CBP/β-连环蛋白抑制剂。

[11] [10]的方法，其中所述肝纤维化是肝炎病毒的感染所引起的。

[12] [10]的方法，其中所述肝纤维化是丙型肝炎或丙型肝炎病毒的感染所引起的。

[13] CBP/β-连环蛋白抑制剂在肝纤维化的预防或治疗试剂的制造中的用途。

[14] [13]的用途，其中所述肝纤维化是肝炎病毒的感染所引起的。

[15] [13]的用途，其中所述肝纤维化是丙型肝炎或丙型肝炎病毒的感染所引起的。

发明效果

根据本发明，可以提供具有优良的预防或治疗效果的肝纤维化的预防或治疗药物。

附图说明

图1显示了肝纤维化模型小鼠（Cre/loxP/HCV-MxCreTg小鼠）的制备和CBP/β-连环蛋白抑制剂施用的时间表（实施例1和2）。

图2显示了当CBP/β-连环蛋白抑制剂施用于肝纤维化模型小鼠（Cre/loxP/HCV-MxCreTg小鼠）时的肝组织学染色（苏木精-伊红染色）。

图3显示了当CBP/β-连环蛋白抑制剂施用于肝纤维化模型小鼠（Cre/loxP/HCV-MxCreTg小鼠）时的肝组织学染色（银染色）。

图4显示了当CBP/β-连环蛋白抑制剂施用于肝纤维化模型小鼠（Cre/loxP/HCV-MxCreTg小鼠）时的肝组织学染色（偶氮卡红染色）。

具体实施方式

本发明提供了包含CBP/β-连环蛋白抑制剂的肝纤维化的预防或治疗试剂。本发明在下文更详细地加以说明。

（术语说明）

除非另有说明，否则说明书和权利要求中使用的下述术语应具有下述含义用于本申请的目的。

除非另有说明，否则“低级”意指构成给定基团（radical）的碳原子数目为一至六（优选一至四）。

除非另有说明，否则“任选取代的”意指给定基团可以仅由利用可用原子价的氢取代基组成，或可以进一步包含利用可用原子价的一个或更多个非氢取代基。一般而言，非氢取代基可以是能够与给定基团的原子结合的任何取代基，所述给定基团指定为被取代的。取代基的例子包括但不限于：-R⁸、-OH、-OR⁸、-OC（O）R⁸、-OC（O）OR⁸、-COOH、-COOR⁸、-CONH₂,-CONHR⁸、-CONR⁸R⁴、-NH₂、-NHR⁸、-NR⁸R⁴、-SH、-SR⁸、-SO₂R⁸、-SO₂NH₂、-SO₂NHR⁸、-SO₂NR⁸R⁴ -SO₃H、-SOR⁸、-NHC（NH₂）（=NH）、-NHC（NHR⁸）（=NR⁴）、-OP（=O）（OH）₂、-OP（=O）（ONa）₂、-OP（=O）（OR⁸）₂、-OP（=O）（OR⁸）（OH）、-OP（=O）（OH）-O-P（=O）（OH）₂、-OP（=O）（ONa）-O-OP（=O）（ONa）₂、-CN、-NO₂和卤素，其中R⁸和R⁴独立地选自直链或支链、环状或非环状、取代或未取代的烷基链、芳基和芳基烷基部分。另外，取代基可以被保护基保护，或自身可以是保护基。

“卤素”意指氟、氯、溴或碘。

“卤代”意指氟代、氯代、溴代或碘代。

“烷基”意指具有碳原子链的直链或支链的饱和脂肪族基团。通常使用C_X-Y烷基，其中X和Y指示链中的碳原子数目。链中的碳原子数目优选为1至10，更优选1至6，进一步优选1至4。烷基的非排他性例子包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、叔戊基、己基、异己基等。

“烯基”意指直链或支链的含有至少一个碳-碳双键的碳链。通常使用C_X-Y烯基，其中X和Y指示链中的碳原子数目。链中的碳原子数目优选为2至10，更优选2至6，进一步优选2至4。烯基的非排他性例子包括次乙基（乙烯基）、烯丙基、异丙烯基、2-甲基烯丙基、1-戊烯基、己烯基、庚烯基、1-丙烯基、2-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基等。

“炔基”意指直链或支链的含有至少一个碳-碳叁键的碳链。通常使用C_X-Y炔基，其中X和Y指示链中的碳原子数目。链中的碳原子数目优选为2至10，更优选2至6，进一步优选2至4。炔基的非排他性例子包括乙炔基、炔丙基、3-甲基-1-戊炔基、2-庚炔基等。

除非另有说明，否则“亚烷基”意指直链或支链的饱和脂肪族多价碳链。通常使用C_X-Y亚烷基，其中X和Y指示链中的碳原子数目。链中的碳原子数目优选为1至10，更优选1至6，进一步优选1至4。亚烷基的非排他性例子包括亚甲基（-CH₂-）、亚乙基（-CH₂CH₂-）、甲基亚甲基（-CH（CH₃）-）、1,2-亚丙基（-CH₂CH（CH₃）-）、1,3-亚丙基（-CH₂CH₂CH₂-）、1,2-亚丁基（-CH₂CH（CH₂CH₃）-）、1,3-亚丁基（-CH₂CH₂CH（CH₃）-）、1,4-亚丁基（-CH₂CH₂CH₂CH₂-）、2-甲基四亚甲基（-CH₂CH（CH₃）CH₂CH₂-）、五亚甲基（-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂-）、1,2,3-丙三基、1,3,3-丙三基等。

“氧基”意指基团-O-。应当指出该氧基可以进一步被各种取代基取代，以形成不同氧基基团，包括羟基、烷氧基、芳基氧基、杂芳基氧基等。

“硫基”意指基团-S-。应当指出该硫基可以进一步被各种取代基取代，以形成不同硫基基团，包括巯基、烷基硫基、芳基硫基、杂芳基硫基等。

“亚硫酰基”意指基团-SO-。应当指出该亚硫酰基可以进一步被各种取代基取代，以形成不同亚硫酰基基团，包括烷基亚硫酰基、芳基亚硫酰基、杂芳基亚硫酰基等。

“磺酰基”意指基团–SO₂-。应当指出该磺酰基可以进一步被各种取代基取代，以形成不同磺酰基基团，包括烷基磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基磺酰基等。

“烷氧基”意指具有进一步的烷基取代基的氧部分。通常使用C_X-Y烷氧基，其中X和Y指示链中的碳原子数目。链中的碳原子数目优选为1至10，更优选1至6，进一步优选1至4。烷氧基的非排他性例子包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、仲丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、异戊氧基、新戊氧基、叔戊氧基、己氧基、异己氧基等。

“杂原子”是指并非碳原子和氢原子的原子。杂原子的具体例子包括但不限于氮、氧和硫。

“芳基”意指单环或多环（例如二环、三环）基团，其中每个环是芳香族的，或当与一个或多个环稠合时，形成芳环。通常使用C_X-Y芳基，其中X和Y指示环集合（ring assembly）中的碳原子数目。环中的碳原子数目优选为6至14，更优选6至10。芳基的非排他性例子包括苯基、萘基、茚基、薁基、联苯基、芴基、蒽基、非那烯基（phenalenyl）等。

“杂芳基”意指单环或多环芳香族基团，其中至少一个环原子是杂原子，并且剩余环原子是碳。通常使用“X-Y元杂芳基”，其中X和Y指示环集合中的碳原子和杂原子数目。环中的碳原子和杂原子数目优选为5至14，更优选5至10。单环杂芳基包括但不限于具有五或六个环原子的环状芳香族基团，其中至少一个环原子是杂原子，并且剩余环原子是碳。氮原子可以任选是季铵化的，并且硫原子可以是任选氧化的。本发明的单环杂芳基的非排他性例子包括但不限于衍生自下述的那些：呋喃、咪唑、异噻唑、异噁唑、噁二唑、噁唑、1,2,3-噁二唑、吡嗪、吡唑、哒嗪、吡啶、嘧啶、吡咯、噻唑、1,3,4-噻二唑、***和四唑。“杂芳基”还包括但不限于二环或三环的环，其中杂芳环稠合至独立地选自下述的一个或两个环：芳环、环烷基环、以及另一个单环杂芳基或杂环烷基环。二环或三环杂芳基的非排他性例子包括但不限于衍生自下述的那些：苯并呋喃（例如苯并[b]呋喃）、苯并噻吩（例如苯并[b]噻吩）、苯并咪唑、苯并三嗪（例如苯并[e][1,2,4]三嗪、苯并[d][1,2,3]三嗪）、吡啶并嘧啶（例如吡啶并[4,3-d]嘧啶、吡啶并[3,4-d]嘧啶、吡啶并[3,2-d]嘧啶、吡啶并[2,3-d]嘧啶）、吡啶并吡嗪（例如吡啶并[3,4-b]吡嗪、吡啶并[2,3-b]吡嗪）、吡啶并哒嗪（例如吡啶并[2,3-c]哒嗪、吡啶并[3,4-c]哒嗪、吡啶并[4,3-c]哒嗪、吡啶并[3,2-c]哒嗪）、吡啶并三嗪（例如吡啶并[2,3-d][1,2,3]三嗪、吡啶并[3,4-d][1,2,3]三嗪、吡啶并[4,3-d][1,2,3]三嗪、吡啶并[3,2-d][1,2,3]三嗪、吡啶并[3,4-e][1,2,4]三嗪、吡啶并[3,2-e] [1,2,4]三嗪）、苯并噻二唑（例如苯并[c] [1,2,5]噻二唑）、呋喃并吡啶（例如呋喃并[3,2-b]吡啶、呋喃并[3,2-c]吡啶、呋喃并[2,3-c]吡啶、呋喃并[2,3-b]吡啶）、噁唑并吡啶（例如噁唑并[4,5-b]吡啶、噁唑并[4,5-c]吡啶、噁唑并[5,4-c]吡啶、噁唑并[5,4-b]吡啶）、噻唑并吡啶（例如噻唑并[4,5-b]吡啶、噻唑并[4,5-c]吡啶、噻唑并[5,4-c]吡啶、噻唑并[5,4-b]吡啶）、咪唑并吡啶（例如咪唑并[1,2-a]吡啶、咪唑并[4,5-c]吡啶、咪唑并[1,5-a]吡啶）、喹唑啉、噻吩并吡啶（例如噻吩并[2,3-c]吡啶、噻吩并[3,2-b]吡啶、噻吩并[2,3-b]吡啶）、吲哚嗪、喹啉、异喹啉、酞嗪、喹喔啉、噌啉、萘啶、喹嗪、吲哚、异吲哚、吲唑、二氢吲哚、苯并噁唑、苯并吡唑、苯并噻唑、吡唑并吡啶（例如吡唑并[1,5-a]吡啶）、咪唑并嘧啶（例如咪唑并[1,2-a]嘧啶、咪唑并[1,2-c]嘧啶、咪唑并[1,5-a]嘧啶、咪唑并[1,5-c]嘧啶）、吡咯并吡啶（例如吡咯并[2,3-b]吡啶、吡咯并[2,3-c]吡啶、吡咯并[3,2-c]吡啶、吡咯并[3,2-b]吡啶）、吡咯并嘧啶（例如吡咯并[2,3-d]嘧啶、吡咯并[3,2-d]嘧啶、吡咯并[1,2-c]嘧啶、吡咯并[1,2-a]嘧啶）、吡咯并吡嗪（例如吡咯并[2,3-b]吡嗪、吡咯并[1,2-a]吡嗪）、吡咯并哒嗪（例如吡咯并[1,2-b]哒嗪）、***并吡啶（例如***并[1,5-a]吡啶）、蝶啶、嘌呤、咔唑、吖啶、permidine、1,10-菲咯啉、吩噁噻、吩噁嗪、吩噻嗪、吩嗪等。该二环或三环杂芳环可通过杂芳基自身或者它与之稠合的芳基、环烷基或杂环烷基而附着至亲本分子。

“环烷基”意指非芳香族的饱和或部分不饱和的单环、稠合二环或桥连多环的环基团。通常使用C_X-Y环烷基，其中X和Y指示环集合中的碳原子数目。环中的碳原子数目优选为3至10，更优选3至8。环烷基的非排他性例子包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基、2,5-环己二烯基、二环[2.2.2]辛基、金刚烷-1-基、十氢萘基、二环[2.2.1]庚-1-基等。

“杂环烷基”意指如本申请中定义的环烷基，条件是构成环的原子中的一个或多个是独立地选自N、O或S的杂原子。通常使用C_X-Y杂环烷基，其中X和Y指示环集合中的碳原子和杂原子数目。环中的碳原子和杂原子数目优选为3至10，更优选3至8。杂环烷基的非排他性例子包括哌啶基、4-吗啉基、4-哌嗪基、吡咯烷基、全氢吡咯烷基、1,3-二噁烷基、1,4-二噁烷基等。

此外，上述定义可以应用于其中上述取代基所连接的基团。例如，“芳基烷基”意指由芳基取代的直链或支链烷基，例如苄基、1-苯乙基、2-苯乙基、3-苯丙基、1-萘甲基、2-萘甲基等。

如本文使用的，“稠环”指多个环的集合，其中当两个环共有的环原子彼此直接结合时，所述环键合至另一个环。共有稠环的非排他性例子包括十氢萘、萘、蒽、菲、吲哚、呋喃、苯并呋喃、喹啉等。具有稠环***的化合物可以是饱和的、部分饱和的或芳香族的。

如本文使用的，“桥环”指与另一个环键合以形成具有二环结构的化合物的环，其中两个环共有的环原子不彼此直接结合。具有桥环的常见化合物的非排他性例子包括金刚烷（adamantine）、冰片、降莰烷、7-氧杂双环[2.2.1]庚烷等。

“受保护的衍生物”意指化合物的衍生物，其中一个或多个反应位点被保护基封闭。合适的保护基的广泛列表可以在T.W. Greene，Protecting Groups in Organic Synthesis，第3版，John Wiley & Sons，Inc. 1999中找到。

“异构体”意指具有相同分子式但在其原子的键合性质或顺序不同或者其原子在空间中的排列不同的任何化合物。其原子在空间中的排列不同的异构体被称为“立体异构体”。并非彼此的镜像的立体异构体被称为“非对映体”，并且其为不能重合的镜像的立体异构体被称为“对映体”或有时称为“光学异构体”。与四个不相同的取代基键合的碳原子被称为“手性中心”。具有一个手性中心的化合物具有两种相反手性的对映体形式。两种对映体形式的混合物被称为“外消旋混合物”。具有超过一个手性中心的化合物具有2^n-1个对映体对，其中n是手性中心数目。具有超过一个手性中心的化合物可以作为个别非对映体或作为非对映体的混合物（称为“非对映体混合物”）存在。当存在一个手性中心时，立体异构体的特征可以在于该手性中心的绝对构型。绝对构型指附着至手性中心的取代基的空间排列。对映体的特征在于其手性中心的绝对构型，并且通过Cahn、Ingold和Prelog的R-和S-顺序规则加以描述。关于立体化学命名法的惯例、用于立体化学的确定和立体异构体的分离的方法是本领域众所周知的（例如参见“Advanced Organic Chemistry”，第4版，March，Jerry，John Wiley & Sons，New York，1992）。

“动物”包括人、非人哺乳动物（例如小鼠、大鼠、仓鼠、犬、猫、兔、牛、马、绵羊、山羊、猪、猴、鹿等）和非哺乳动物（例如鸟等）。

“药学上可接受的”意指可用于制备药物组合物的那种，其一般是安全无毒的以及并非生物学也不是其他方面不期望的，并且包括对于兽医学用途以及人药学用途可接受的那种。

“药学上可接受的盐”或“盐”意指本发明的化合物的盐，其是如上定义的药学上可接受的，并且具有所需药理学活性。此类盐包括由无机酸形成的酸加成盐，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；或由有机酸形成的酸加成盐，所述有机酸例如乙酸、丙酸、己酸、庚酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、邻（4-羟基苯甲酰基）苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、对氯苯磺酸、2-萘磺酸、对甲苯磺酸酸、樟脑磺酸、4-甲基二环[2.2.2]辛-2-烯-1-甲酸、葡庚糖酸、4,4'-亚甲基双（3-羟基-2-烯-1-甲酸）、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羟基萘酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸等。药学上可接受的盐还包括碱加成盐，当存在的酸性质子能够与无机或有机碱反应时，可以形成所述碱加成盐。可接受的无机碱包括氢氧化钠、碳酸钠、氢氧化钾、氢氧化铝和氢氧化钙。可接受的有机碱包括乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等。

关于本文提供的所有定义，应当指出所述定义在可以包括超出指定那些的进一步取代基的含义中应解释为开放性的。

（肝纤维化）

肝纤维化是其中纤维组织的产生在修复的肝细胞的过程中受到促进的状况，所述纤维组织包含胶原和糖缀合物，被称为细胞外基质，所述肝细胞由于多种肝病症，例如病毒性肝炎、酒精性肝病、自身免疫性肝病、代谢性肝病等而坏死，并且这些纤维组织随着炎症进展逐步累积。

虽然引起肝纤维化的肝病症并无具体限制，但可以提及病毒性肝炎、酒精性肝病、自身免疫性肝病、药物诱导的肝病、代谢性肝病（脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、血色素沉着病）等。成为本发明的预防或治疗中的靶的肝纤维化优选为病毒性肝炎所引起的肝纤维化。

病毒性肝炎的致病病毒并无具体限制，并且可以提及甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒等。在这些中，其中肝纤维化经由丙型肝炎病毒所引起的丙型肝炎发展的实施方案是优选的。

“肝纤维化的治疗”意指肝纤维化的病理状态的完全治愈，以及症状进展或恶化的抑制，以预防病理状态的进展，尽管它可能不是完全治愈，或者部分或完全病理状态的改善，以导向治愈方向。

“肝纤维化的预防”意指肝纤维化的病理状态发作的预防、抑制或延迟。

“用于肝纤维化治疗的有效量”意指当施用于动物以治疗肝纤维化时，足以实现肝纤维化的此类治疗的量。

“用于肝纤维化预防的有效量”意指当施用于动物以预防肝纤维化时，足以实现肝纤维化的此类预防的量。

（CBP/β-连环蛋白抑制剂）

β-连环蛋白充当Wnt信号转导的介质，与转录因子Tcf/Lef（T细胞因子/淋巴细胞增强因子）结合，促进与Wnt信号转导相关的多种基因（细胞周期蛋白D1、c-Myc等）的表达，并且控制细胞生长和分化（He等人，1998 Science 281 1509-1512：Kolligs等人，1999Mol. Cell. Biol. 19，5696-5706：Crawford等人，1999，Oncogene 18，2883-2891：Shtutman等人，1999，Proc. Natl. Acad. Sci. USA.，11，5522-5527：Tetsu和McCormick，1999 Nature，398，422-426）。

CBP（环状AMP反应元件结合蛋白（CREB）结合蛋白）直接在CREB结合结构域中与β-连环蛋白相互作用，并且促进Tcf/Lef的转录活化（Ken-Ichi Takemaru和Randall T.Moon，2000 J. Cell. Biol.，149，2，249-254）。

CBP/β-连环蛋白抑制剂并无具体限制，只要它抑制CBP和β-连环蛋白的相互作用，并且其中它抑制β-连环蛋白和CBP的结合，并且因此抑制通过β-连环蛋白复合物的基因表达的实施方案是优选的。

虽然CBP/β-连环蛋白抑制可以通过本身已知的结合测定（放射结合测定等）、报道分子测定法等进行测量，但它可以优选通过WO 2009/148192中所述的报道分子测定法经由测量Wnt信号转导的基因表达加以证实。

虽然本发明的CBP/β-连环蛋白抑制剂并无具体限制，只要它是如上定义的，但例如可以提及与CBP和/或β-连环蛋白具有亲和力的抗体（多克隆抗体、单克隆抗体），WO2003/031448、WO 2004/093828、WO 2005/116032、WO 2009/148192、WO 2010/044485、WO2010/128685、WO 2012/115286等中所述的化合物，其药学上可接受的盐等。

作为本发明的CBP/β-连环蛋白抑制剂的优选实施方案，可以提及具有下式（I）的化合物或其药学上可接受的盐。

其中

A是-CHR⁷-

其中

G是-NH-、-NR⁶-、-O-、-CHR⁶-或-C（R⁶）₂-，其中R⁶独立地选自任选取代的烷基、任选取代的烯基和任选取代的炔基，

Rb是键或任选取代的低级亚烷基；和

R³是任选取代的烷基、任选取代的烯基或任选取代的炔基。

式（I）的化合物可以根据WO 2009/148192中所述的方法进行制造。

在上述式（I）中，具有下述取代基的实施方案是更优选的。

具有式（I）的化合物或其药学上可接受的盐，其中

A是-CHR⁷-

其中

R⁷是任选取代的芳基烷基、任选取代的杂芳基烷基、任选取代的环烷基烷基或任选取代的杂环烷基烷基；

G是-NH-、-NR⁶-或-O-

其中

R⁶是低级烷基或低级烯基；

R¹是-Ra-R¹⁰

其中

Ra是任选取代的低级亚烷基，和

R¹⁰是任选取代的二环稠合芳基或任选取代的二环稠合杂芳基；

R²是-（CO）-NH-Rb-R²⁰

其中

Rb是键或任选取代的低级亚烷基，和

R²⁰是任选取代的芳基或任选取代的杂芳基；和

R³是C_1-4烷基。

在上述式（I）中，具有下述取代基的实施方案是进一步优选的。

具有式（I）的化合物或其药学上可接受的盐，其中

A是-CHR⁷-

其中

R⁷是任选被羟基或C_1-4烷基取代的芳基烷基；

G是-NH-、-NR⁶-或-O-

其中

R⁶是C_1-4烷基或C_2-4烯基；

R¹是-Ra-R¹⁰

其中

Ra是C_1-4亚烷基，和

R¹⁰是任选被卤素或氨基取代的二环稠合芳基或二环稠合杂芳基；

R²是-（CO）-NH-Rb-R²⁰

其中

Rb是键或C_1-4亚烷基，和

R²⁰是芳基或杂芳基；和

R³是C_1-4烷基。

本发明的CBP/β-连环蛋白抑制剂的特别优选的例子包括下述化合物。

本发明的CBP/β-连环蛋白抑制剂的最优选实施方案是

4-（（（6S,9S,9aS）-1-（苄基氨基甲酰）-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-（喹啉-8-基甲基）八氢-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸二氢酯，或

（肝纤维化模型小鼠）

通过使经由Cre/loxP***引入HCV基因的转基因（Cre/loxP/HCV-Tg）小鼠和能够表达IFN可诱导Cre的转基因（Mx-Cre-Tg）小鼠交配，本发明人产生了能够在任意时间转换HCV基因的表达的转基因小鼠（Cre/loxP/HCV-MxCreTg小鼠），作为能够精确地评估人中的慢性丙型肝炎的动物模型。当聚肌苷酸-聚胞苷酸（聚（I:C））施用于该Tg小鼠时，IFNα可诱导Cre酶被表达，这将夹在loxP序列之间的新霉素抗性基因环出（loops out），由此可以在任意时间表达HCV蛋白质。即，因为建立了转换表达***，所以HCV基因的表达在发育阶段不再发生，并且成功产生了类似于HCV感染的免疫反应状态。

通过给模型小鼠施用聚（I:C）表达的肝中的HCV蛋白质并未完全消除，并且证实共600天或更久的持续表达。形态学上观察到肝细胞肿胀、脂肪变性、糖原变性、肝细胞索紊乱、纤维化、肝细胞癌和淋巴瘤等。

因此，Cre/loxP/HCV-MxCre Tg小鼠是能够精确地评估从丙型肝炎到肝纤维化、肝硬化和肝癌的病理状态的病理学模型。

（含有CBP/β-连环蛋白抑制剂的药物制剂）

本发明的CBP/β-连环蛋白抑制剂可以作为通过常规方法配制的药物制剂（例如注射液、胶囊剂、片剂、粉末剂、颗粒剂等），施用于人或动物（例如哺乳动物，例如小鼠、大鼠、仓鼠、兔、猫、犬、牛、绵羊、猴等）。例如，它优选以约0.01 – 1000 mg/kg（体重）/天、优选约0.1 – 500 mg/kg（体重）/天的活性成分量的给药量，以一份或数份施用。取决于症状、年龄等，其给药量、施用方法和施用频率可以适当地加以改变。例如，对于配制成注射剂，可以使用载体例如蒸馏水、盐水等，并且对于配制成胶囊剂、片剂、粉末剂、颗粒剂，可以使用赋形剂例如淀粉、乳糖、蔗糖、碳酸钙等，粘合剂例如淀粉糊、***树胶、明胶、海藻酸钠、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素等，润滑剂例如硬脂酸镁、滑石等，崩解剂例如淀粉、琼脂、结晶纤维素、碳酸钙、碳酸氢钠、海藻酸钠等。制剂中的活性成分的含量可以在1 - 99重量%之间改变。例如，片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉末剂等剂型优选含有5 - 80重量%的活性成分，并且注射剂优选含有1 - 10重量%的活性成分。

虽然施用方法并无具体限制，但可以提及口服施用、静脉内施用、静脉内持续施用、腹腔内施用等。

此外，其中填充有本发明的药物组合物的渗透压泵被例如皮下包埋用于以持续方式施用的实施方案是优选的。

实施例

本发明通过参考实施例在下文中更详细地加以说明，所述实施例不应以任何方式解释为限制性的。

[实施例1]肝纤维化模型小鼠的产生

从患有慢性活动性肝炎的患者（#R6）中收集的血样克隆R6CN2 HCV cDNA（nt 294-3435）和全基因组HCV cDNA（nt 1-9611）。根据已知文件（Proc. Natl. Acad. Sci. USA，90：6037-6041）中报告的方法测量血样的感染。使R6CN2HCV和R6CN5HCV转基因小鼠与Mx1-Cre转基因小鼠（购自Jackson Laboratory）杂交，以产生R6CN2HCV-MxCre转基因小鼠和R6CN5HCV-MxCre转基因小鼠，其分别命名为CN2-29^（+/-）/MxCre^（+/-）小鼠和RzCN5-15^（+/-）/MxCre^（+/-）小鼠。

通过聚肌苷酸-聚胞苷酸[聚（I:C）]（购自GE Healthcare UK Ltd.（Buckinghamshire，英国））的腹腔内注射诱导Cre在这些小鼠肝中的表达。即，在从出生经过2个月后，以48小时间隔3次腹腔内注射300 μL聚（I:C）溶液（1 mg/mL磷酸缓冲盐水[PBS]）。通过进行聚（I:C）施用操作一次，可以在几乎所有肝细胞中诱导HCV基因表达。该表达持续不少于600天，并且可以建立显示从慢性肝炎到肝纤维化的肝纤维化动物模型。

所有动物护理和实验操作均根据由Tokyo Metropolitan Institute of MedicalScience Subcommittee on Laboratory Animal Care建立的指导进行。

[实施例2] CBP/β-连环蛋白抑制剂的治疗效果

将CBP/β-连环蛋白抑制剂腹腔内施用于实施例1中获得的CN2-29^（+/-）/MxCre^（+/-）小鼠，并且通过从模型小鼠中收集的肝组织的组织学染色，来检查CBP/β-连环蛋白抑制剂对肝纤维化是否具有治疗效果。

（1）CBP/β-连环蛋白抑制剂的制备和施用

将CBP/β-连环蛋白抑制剂溶解于商购可得的PBS（pH 7.6），并且用氢氧化钠水溶液将pH再次调整至7.6，以给出40 mg/ml CBP/β-连环蛋白抑制剂溶液。将该溶液（250 μl）填充到渗透压泵（ALZET微型渗透泵型号2006）中，并且皮下嵌入小鼠背部，由此CBP/β-连环蛋白抑制剂以持续方式以0.15 μl/小时施用42天。对于对照组，将商购可得的PBS（pH7.6）类似地填充到渗透压泵中，并且通过同样皮下嵌入小鼠背部作为媒介物施用。模型产生和CBP/β-连环蛋白抑制剂施用的时间表显示于图1中。

该实施例中使用的CBP/β-连环蛋白抑制剂在下文描述：

4-（（（6S,9S）-1-（苄基氨基甲酰）-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-（喹啉-8-基甲基）八氢-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸二氢酯（下文简称为“CBP/β-连环蛋白抑制化合物”）。

CBP/β-连环蛋白抑制化合物是WO 2009/148192的实施例I-7中描述的化合物，并且可以通过该文件中所述的方法进行合成。CBP/β-连环蛋白抑制化合物的CBP/β-连环蛋白抑制作用已通过该文件中所述的报道分子测定法加以证实。

（2）组织学染色

在从（1）的CBP/β-连环蛋白抑制化合物施用第42天时进行尸体解剖，取出肝且进行组织学搜索。

关于染色，通过苏木精-伊红染色（HE染色）来染色且观察组织的整个图像，并且通过银染色和偶氮卡红染色来染色且观察纤维。

苏木精-伊红染色是最基础和重要的用于病理学组织的一般染色方法，并且旨在光学显微镜水平上掌握组织结构的整个图像。使用苏木精和伊红的各自染色溶液，如下进行不同颜色的染色。

利用苏木精的青灰色至淡蓝色：细胞核、钙质部分、软骨组织、细菌、粘液。

利用伊红的红色至暗红色：细胞质、间质组织、各种纤维、红细胞、角质细胞。

银染色旨在染色网状纤维，其为结合组织纤维之一。

偶氮卡红染色是将胶原纤维（深蓝色）和肌纤维（蓝色）染成不同颜色的染色方法。

具体方法如下所述。

将组织样品用4%多聚甲醛的PBS溶液固定，在石蜡中包埋且切片（厚度4 μm）。对所获得的切片实施苏木精-伊红染色（HE）、银染色和偶氮卡红染色。

苏木精-伊红染色根据组织病理学染色手册（Kiyoyuki Takahashi，Igaku-Shoin）中所述的方法进行。

银染色根据组织病理学染色手册（Kiyoyuki Takahashi，Igaku-Shoin）中所述的方法进行。

偶氮卡红染色根据组织病理学染色手册（Kiyoyuki Takahashi，Igaku-Shoin）中所述的方法进行。

结果显示于图2（HE染色）、图3（银染色）和图4（偶氮卡红染色）中。

CBP/β-连环蛋白抑制化合物通过施用42天改善慢性丙型肝炎模型小鼠（Cre/loxP/HCV-MxCre Tg小鼠）的肝小叶结构，因此显示去纤维化作用（图2、图3、图4）。

使由于慢性肝炎而异常生长且没有肝细胞索结构的肝组织正常化，从而通过施用CBP/β-连环蛋白抑制化合物获得索样形式（图2）。

由于慢性肝炎，肝纤维化受到促进，并且网状纤维通过银浸渍得到强染色（图3，左）。通过CBP/β-连环蛋白抑制化合物的施用，网状纤维的染色减弱且正常化（图3，右）。

类似地，通过CBP/β-连环蛋白抑制化合物的施用，由于慢性肝炎促进的肝纤维化和胶原纤维通过偶氮卡红染色的强染色正常化，并且染色减弱（图4）。

根据上文结果，明确的是CBP/β-连环蛋白抑制剂对慢性肝炎、肝纤维化或肝硬化具有去纤维化作用。

工业适用性

CBP/β-连环蛋白抑制剂可用作肝纤维化的预防和/或治疗试剂。

本申请基于在日本提交的专利申请号2012-270987，其内容在本文中完全涵盖。

尽管本发明已通过参考本发明的优选实施方案得到呈现或描述，然而，本领域普通技术人员应当理解可以对形式和细节作出多种修饰，而不背离如所附权利要求中所示的本发明范围。说明书中指出或引用的所有专利、专利公开及其他公开在此整体引入作为参考。

Claims

1.选自下述的CBP/β-连环蛋白抑制剂在制备肝纤维化的预防或治疗试剂中的用途：

2.根据权利要求1的用途，其中所述肝纤维化是肝炎病毒的感染所引起的肝纤维化。

3.根据权利要求1的用途，其中所述肝纤维化是丙型肝炎或丙型肝炎病毒的感染所引起的肝纤维化。

4.根据权利要求1的用途，其中所述肝纤维化发展为肝硬化。