CN105017441B - 灵芝多糖的提取方法 - Google Patents

灵芝多糖的提取方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105017441B
CN105017441B CN201510541581.4A CN201510541581A CN105017441B CN 105017441 B CN105017441 B CN 105017441B CN 201510541581 A CN201510541581 A CN 201510541581A CN 105017441 B CN105017441 B CN 105017441B
Authority
CN
China
Prior art keywords
filtrate
filtering
weight
standby
precipitation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201510541581.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105017441A (zh
Inventor
文继承
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangzhou Shengyan Fine Chemical Co., Ltd
Original Assignee
GUILIN MINGXING BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by GUILIN MINGXING BIOTECHNOLOGY Co Ltd filed Critical GUILIN MINGXING BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN201510541581.4A priority Critical patent/CN105017441B/zh
Publication of CN105017441A publication Critical patent/CN105017441A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105017441B publication Critical patent/CN105017441B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本发明公开了一种灵芝多糖的提取方法，包括以下步骤：1)将灵芝乙醇提取，取滤渣备用；2)将滤渣水提，收集滤液备用；3)将滤液浓缩浸膏，乙醇沉淀，离心得沉淀；4)将沉淀依次无水乙醇、丙酮分别洗涤，将洗涤后的沉淀用蒸馏水溶解，过截留分子量为5万的中空纤维膜，收集浓缩液，然后将浓缩液过截留分子量为8万的中空纤维膜，收集透过液离心，过滤，取滤液备用；5)往滤液加入活性炭脱色，过滤，取滤液喷雾干燥，即为灵芝多糖。本发明的灵芝多糖纯度高，色泽洁白，且抗肿瘤活性强。

Description

灵芝多糖的提取方法
技术领域
本发明属于生物提取技术领域，具体涉及灵芝多糖的提取方法。
背景技术
灵芝多糖是灵芝的重要化学成分之一，具有抗肿瘤、免疫调节、降血糖、降血脂、抗氧化和抗衰老等作用，还可作为抗肿瘤和放射治疗的有效辅助治疗药物。然而，灵芝多糖由于提取工艺落后，得到的产品呈黄褐色，这是由于灵芝多糖中色素含量较多，影响了灵芝多糖的色泽，不仅如此，杂质含量过高的灵芝多糖的抗癌活性也较差。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种灵芝多糖的提取方法，该方法得到的灵芝多糖纯度高，且抗癌活性好。
本发明提供的技术方案是灵芝多糖的提取方法，包括以下步骤：
1)将灵芝破碎，用6～12倍重量80～95v％乙醇回流提取2～3次，每次回流2～3h，过滤，取滤渣备用；
2)将滤渣用6～12倍重量的水回流提取2～3次，每次提取2～3h，过滤，收集滤液备用；
3)将滤液浓缩至60℃下相对密度为1.1～1.3的浸膏，加入乙醇沉淀，离心得沉淀；
4)将沉淀依次用2～4倍重量的无水乙醇、丙酮分别洗涤，将洗涤后的沉淀用2～4倍蒸馏水溶解，过截留分子量为5万的中空纤维膜，收集浓缩液，然后将浓缩液过截留分子量为8万的中空纤维膜，收集透过液离心，过滤，取滤液备用；
5)往滤液加入活性炭脱色，过滤，取滤液喷雾干燥，即为灵芝多糖。
步骤3)中，往浸膏中加入90～95v％的乙醇至乙醇含量为80～85v％。
步骤5)中，活性炭的添加量为滤液重量的1～3％。
步骤4)中，洗涤后的沉淀溶于蒸馏水后，先过截留分子量为5万的中空纤维膜，这样活性分子量低于5万的多糖以及低聚糖、单糖和色素均随着透过液流出，收集的浓缩液过截留分子量为8万的中空纤维膜，大分子蛋白质以及分子量高于8万的多糖被截留，收集透过液。
本发明两次过中空纤维膜，不仅可以最大程度地去除杂质和色素，以保证成品纯度和色泽，且提取得到的灵芝多糖分子量在5万～8万之间，其抗肿瘤活性比其他区间范围内的多糖活性要高。
具体实施方式
以下具体实施例对本发明作进一步阐述，但不作为对本发明的限定。
实施例1
1)将灵芝破碎，用6倍重量80v％乙醇回流提取2次，每次回流2h，过滤，取滤渣备用；
2)将滤渣用6倍重量的水回流提取2次，每次提取2h，过滤，收集滤液备用；
3)将滤液浓缩至60℃下相对密度为1.1的浸膏，往浸膏中加入90v％的乙醇至乙醇含量为80v％沉淀，离心，得到沉淀；
4)将沉淀依次用2倍重量的无水乙醇、丙酮分别洗涤，将洗涤后的沉淀用2倍蒸馏水溶解，过截留分子量为5万的中空纤维膜，收集浓缩液，然后将浓缩液过截留分子量为8万的中空纤维膜，收集透过液离心，过滤，取滤液备用；
5)往滤液加入活性炭脱色，活性炭的添加量为滤液重量的1％，过滤，取滤液喷雾干燥，即为灵芝多糖。用苯酚-硫酸法测定多糖含量为92.3％，颜色为白色。
对照组
1)将灵芝破碎，用6倍重量80v％乙醇回流提取2次，每次回流2h，过滤，取滤渣备用；
2)将滤渣用6倍重量的水回流提取2次，每次提取2h，过滤，收集滤液备用；
3)将滤液浓缩至60℃下相对密度为1.1的浸膏，往浸膏中加入90v％的乙醇至乙醇含量为80v％沉淀，离心，得到沉淀；
4)将沉淀依次用2倍重量的无水乙醇、丙酮分别洗涤，将洗涤后的沉淀用2倍蒸馏水溶解，上D303型大孔树脂，用水洗脱至流出液无色透明，收集流出液，浓缩，喷雾干燥，即为灵芝多糖。用苯酚-硫酸法测定多糖含量为88.3％，颜色为浅黄色。
实施例2
1)将灵芝破碎，用12倍重量95v％乙醇回流提取3次，每次回流3h，过滤，取滤渣备用；
2)将滤渣用12倍重量的水回流提取3次，每次提取3h，过滤，收集滤液备用；
3)将滤液浓缩至60℃下相对密度为1.3的浸膏，往浸膏中加入95v％的乙醇至乙醇含量为85v％沉淀，离心，得到沉淀；
4)将沉淀依次用4倍重量的无水乙醇、丙酮分别洗涤，将洗涤后的沉淀用4倍蒸馏水溶解，过截留分子量为5万的中空纤维膜，收集浓缩液，然后将浓缩液过截留分子量为8万的中空纤维膜，收集透过液离心，过滤，取滤液备用；
5)往滤液加入活性炭脱色，活性炭的添加量为滤液重量的3％，过滤，取滤液喷雾干燥，即为灵芝多糖。用苯酚-硫酸法测定多糖含量为91.8％，颜色为白色。
实施例3
1)将灵芝破碎，用10倍重量90v％乙醇回流提取2次，每次回流2h，过滤，取滤渣备用；
2)将滤渣用10倍重量的水回流提取2次，每次提取2h，过滤，收集滤液备用；
3)将滤液浓缩至60℃下相对密度为1.2的浸膏，往浸膏中加入95v％的乙醇至乙醇含量为85v％沉淀，离心，得到沉淀；
4)将沉淀依次用3倍重量的无水乙醇、丙酮分别洗涤，将洗涤后的沉淀用3倍蒸馏水溶解，过截留分子量为5万的中空纤维膜，收集浓缩液，然后将浓缩液过截留分子量为8万的中空纤维膜，收集透过液离心，过滤，取滤液备用；
5)往滤液加入活性炭脱色，活性炭的添加量为滤液重量的2％，过滤，取滤液喷雾干燥，即为灵芝多糖。用苯酚-硫酸法测定多糖含量为92.0％，颜色为白色。
为验证本发明的灵芝多糖的抗癌活性，现进行以下动物实验。
1、抗Lewis肺癌活性实验
取清洁级C57BL/6小鼠30只，小鼠体重18～20g，随机分为3组，每组10只，分别为实验组，阴性对照组和阳性对照组。
取生长旺盛的小鼠Lewis肺癌肿瘤细胞以常规方法制成匀浆约1～2×107cfu/ml的癌细胞悬浮液，于每只小鼠的右腋皮下接种0.2ml癌细胞悬浮液，24h后，各组开始每日口服给药一次，实验组给药实施例1的灵芝多糖，阴性对照组给药生理盐水，阳性对照组给药对照例1的灵芝多糖，给药剂量见下表1，连续给药10天。停药后次日处死所有动物，截取足趾称重并计算肿瘤抑制率。肿瘤生长抑制率按下列公式计算，抑制率(％)＝(阴性对照组瘤重-实验组/阳性对照组瘤重)/阴性对照组瘤重×100。
表1
剂量(mg/kg) 动物增重(g) 瘤重(g) 抑制率(％)
阴性对照组 1ml 3.0 2.80±0.33
阳性对照组 2000 2.9 1.78±0.07 36.42*
实验组 2000 1.8 1.16±0.16 58.57**
注：与阴性对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01。
由上表可知，采用常规方法提取的灵芝多糖对小鼠Lewis肺癌的抑制率达36.42％，而本发明提取的灵芝多糖对小鼠Lewis肺癌的抑制率高达58.57％，明显优于常规灵芝多糖。
2、抗C-26结肠癌活性实验
取清洁级C57BL/6小鼠30只，小鼠体重18～20g，随机分为3组，每组10只，分别为实验组，阴性对照组和阳性对照组。
取生长旺盛的小鼠C-26结肠癌肿瘤细胞以常规方法制成匀浆约1～2×107cfu/ml的癌细胞悬浮液，于每只小鼠的右腋皮下接种0.2ml癌细胞悬浮液，24h后，各组开始每日口服给药一次，实验组给药实施例1的灵芝多糖，阴性对照组给药生理盐水，阳性对照组给药对照例1的灵芝多糖，给药剂量见下表2，连续给药10天。停药后次日处死所有动物，截取足趾称重并计算肿瘤抑制率。肿瘤生长抑制率按下列公式计算，抑制率(％)＝(阴性对照组瘤重-实验组/阳性对照组瘤重)/阴性对照组瘤重×100。
表2
剂量(mg/kg) 动物增重(g) 瘤重(g) 抑制率(％)
阴性对照组 1ml 3.8 2.99±0.26
阳性对照组 2000 3.8 2.11±0.23 29.43**
实验组 2000 1.9 1.22±0.06 59.19**
注：与阴性对照组相比，，*p＜0.05，**p＜0.01。
由上表可知，采用常规方法提取的灵芝多糖对小鼠C-26结肠癌的抑制率达29.43％，而本发明提取的灵芝多糖对小鼠Lewis肺癌的抑制率高达59.19％，明显优于常规灵芝多糖。

Claims (3)

1.灵芝多糖的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)将灵芝破碎，用6～12倍重量80～95v％乙醇回流提取2～3次，每次回流2～3h，过滤，取滤渣备用；
2)将滤渣用6～12倍重量的水回流提取2～3次，每次提取2～3h，过滤，收集滤液备用；
3)将滤液浓缩至60℃下相对密度为1.1～1.3的浸膏，加入乙醇沉淀，离心得沉淀；
4)将沉淀依次用2～4倍重量的无水乙醇、丙酮分别洗涤，将洗涤后的沉淀用2～4倍蒸馏水溶解，过截留分子量为5万的中空纤维膜，收集浓缩液，然后将浓缩液过截留分子量为8万的中空纤维膜，收集透过液离心，过滤，取滤液备用；
5)往滤液加入活性炭脱色，过滤，取滤液喷雾干燥，即为灵芝多糖。
2.根据权利要求1所述的灵芝多糖的提取方法，其特征在于：步骤3)中，往浸膏中加入90～95v％的乙醇至乙醇含量为80～85v％。
3.根据权利要求1所述的灵芝多糖的提取方法，其特征在于：步骤5)中，活性炭的添加量为滤液重量的1～3％。
CN201510541581.4A 2015-08-31 2015-08-31 灵芝多糖的提取方法 Active CN105017441B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510541581.4A CN105017441B (zh) 2015-08-31 2015-08-31 灵芝多糖的提取方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510541581.4A CN105017441B (zh) 2015-08-31 2015-08-31 灵芝多糖的提取方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105017441A CN105017441A (zh) 2015-11-04
CN105017441B true CN105017441B (zh) 2018-01-16

Family

ID=54407779

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510541581.4A Active CN105017441B (zh) 2015-08-31 2015-08-31 灵芝多糖的提取方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105017441B (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107213173A (zh) * 2017-04-26 2017-09-29 独山县军鹏农产品有限责任公司 一种多糖含量高的灵芝的加工方法
CN107158739A (zh) * 2017-05-05 2017-09-15 独山县军鹏农产品有限责任公司 一种多糖含量高的灵芝的提取方法
CN109744383A (zh) * 2019-01-16 2019-05-14 安徽农业大学 一种饲料添加剂及其制备方法和应用
CN114272274A (zh) * 2021-12-08 2022-04-05 安徽省双辉生物科技有限公司 一种用于提高免疫力的灵芝组合物及其制备方法

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1877447B1 (en) * 2005-05-05 2016-12-21 Sensient Flavors Inc. Production of beta-glucans and mannans
CN100535016C (zh) * 2005-07-22 2009-09-02 天津市林业果树研究所 灵芝多糖的制备方法
CN101367883B (zh) * 2008-10-14 2011-06-08 宋秋兰 一种从发酵液中提取灵芝多糖的方法
CN101701041B (zh) * 2009-12-02 2011-06-08 安发（福建）生物科技有限公司 灵芝活性多糖的低温提取技术
CN104558227A (zh) * 2014-12-17 2015-04-29 方萌 一种灵芝多糖提取方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"灵芝多糖对结肠癌细胞增殖的抑制作用";郭雨桐;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》;20130115(第01期);第E057-258页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN105017441A (zh) 2015-11-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105017441B (zh) 灵芝多糖的提取方法
CN109276576B (zh) 白肉灵芝多糖在制备抗肿瘤药物中的用途
CN102417544B (zh) 一种紫阳富硒绿茶含硒多糖及其制备方法和用途
CN103768534B (zh) 一种具有抗肿瘤活性的中药组合物
CN104306410B (zh) 一种富含三萜的抗肿瘤组合物及其制备方法
CN102836188B (zh) 布渣叶总黄酮提取物及其制备方法和应用
CN100500196C (zh) 一种重楼总皂苷的制备方法
CN105001351B (zh) 香菇多糖的提取方法
CN105148258A (zh) 组合物及其应用，含有该组合物的制剂
WO2020093510A1 (zh) 一种灵芝孢子多糖的分离纯化方法
CN102552644A (zh) 大蒜总多糖的抗癌用途、制备方法及组合物
CN104042623A (zh) 一种黑根霉胞外多糖在制备治疗或预防消化道肿瘤药物中的应用
CN104013636B (zh) 瓦草五环三萜皂苷类化合物抗肿瘤的药物用途
CN101972385B (zh) 虎眼万年青总黄酮的制备方法及在抗肿瘤和抗炎止痛药物中的应用
CN105061628B (zh) 云芝多糖的提取方法
WO2018166151A1 (zh) 一种用于***的中药组合物及其制备方法和用途
CN101249121A (zh) 竹节参总皂苷的制备方法及其在治疗心肌缺血的药物中的应用
CN101348812A (zh) 一种地衣多糖及其制备方法和应用
CN105061627A (zh) 茯苓多糖的提取方法
CN105111323B (zh) 一种具有抗肿瘤活性的龙葵精制多糖的提取纯化方法
CN105017442B (zh) 人参多糖的提取方法
CN104523792B (zh) 一种富含强心苷的马利筋乳汁提取物及其制备方法与应用
CN104784252A (zh) 苦参总生物碱提取物的制备方法及其应用
CN110973632A (zh) 一种进行癌症膳食干预的膳食组合物及其制备方法
CN101245089A (zh) 一对新的人参皂苷元和其混合体的制备方法及其制剂

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20200506

Address after: No. 181, erbatou, taimuyang village, Qinyu Town, Fuding City, Ningde City, Fujian Province

Patentee after: Deng Weixiao

Address before: Yingbin Road, Xingan County Guilin 541300 the Guangxi Zhuang Autonomous Region (Guilin Lingqu chemical factory warehouse)

Patentee before: GUILIN APLANAT BOTANICAL RESOURCES Co.,Ltd.

TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20200611

Address after: 510405 floor 1-4, No. 3, xinkejia commercial road, Jiahe street, Baiyun District, Guangzhou City, Guangdong Province (self declaration)

Patentee after: Guangzhou Shengyan Fine Chemical Co., Ltd

Address before: No. 181, erbatou, taimuyang village, Qinyu Town, Fuding City, Ningde City, Fujian Province

Patentee before: Deng Weixiao