CN104784252A - 苦参总生物碱提取物的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种苦参总生物碱提取物的制备方法及其应用,属于中药制药技术领域。本发明以苦参总生物碱的含量为指标,提取出的总生物碱含量高、纯度高、稳定性高,提取过程能耗低、所用试剂和材料可再生、循环再利用,且对环境相对友好,制备工艺经济、简单、极具产业化潜力,适合于绿色工业化生产,制备出的总生物碱提取物质量稳定可控、药效显著。具有显著的抗菌消炎、抗病毒、抗肿瘤、杀虫、升白细胞、免疫调节、扩张血管、降低血脂、镇静、镇痛、解热、平喘等功能,可用于相应药物的制备,易于推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种苦参总生物碱提取物的制备方法及其应用,属于中药制药技术领域。
背景技术
苦参为豆科槐属植物苦参(Sophora flavescens Ait.)的干燥根,现代临床药理研究表明,其主要化学成分及药效物质基础——生物碱,是一类具有重要生物活性的天然产物,其主要成分有氧化苦参碱、苦参碱、槐果碱、槐定碱等多种生物碱,以氧化苦参碱和苦参碱含量最高。苦参总生物碱具有抗菌消炎、抗病毒、抗肿瘤、杀虫,升白细胞、免疫调节、扩张血管、降低血脂、镇静、镇痛、解热、平喘、抗心律失常、抗缺氧、利尿等药理作用。
抗病毒作用:苦参总生物碱能够进入细胞内影响病毒的生物合成,主要表现为抑制病毒蛋白质的合成。临床上可用于治疗病毒性肝炎、病毒性心肌炎、病毒性角膜炎等。
抗菌消炎作用:苦参碱和氧化苦参碱均可有效抑制IgE及其特异性抗原引起的肥大细胞释放组织胺、白三烯等介质。临床上可用于治疗急性菌痢、扁桃体炎、乳腺炎、***、***炎、支气管炎、荨麻疹、湿疹、急性肾炎、***、***炎、鼻炎及皮炎等。
杀虫作用:苦参总生物碱提取物可作为广谱的植物源性杀虫抗菌剂应用于天然农药的生产,其具有强烈的触杀和胃杀的作用和较强的渗透性,害虫不易产生抗药性。据一药三效的作用,即杀虫、抑菌、增产三重功效。具有无残留、无不良刺激气味、不影响农产品的质量、品味、安全性高等特点。主要应用于蔬菜,茶叶,果树,烟草等一些农作物的杀虫。目前市场上以苦参碱制剂对蔬菜刺吸式口器昆虫蚜虫,鳞翅目昆虫菜青虫、茶毛虫、小菜蛾,以及茶小绿叶蝉等均有理想防效。另外对于动物体内寄生虫也有良好的杀灭作用,如对阿米巴原虫、贾第虫、毛滴虫均有杀灭作用,可以减轻寄生虫对培养的哺乳动物细胞毒性作用,还能延迟该寄生虫导致的皮下脓肿的发展,可用于治愈毛虫病、蛲虫病等。
抗肿瘤作用:苦参总生物碱提取物对肿瘤细胞具有选择性杀伤作用,通过改变细胞核酸的分子序列抑制肿瘤的生长。除了抑制肿瘤细胞增殖,促进其良性分化和凋亡,抑制肿瘤转移之外,还有抑制肿瘤新生血管形成、减轻致肿瘤炎症和抑制肿瘤耐药性、减低化疗不良作用、增强肿瘤宿主免疫功能、肿瘤预防性化疗等多个方面。可用于肝癌、胃癌、肠癌、肺癌、性激素依赖性癌症,如子宫癌、卵巢癌、***癌、乳腺癌等癌症的治疗。
此外,苦参碱还具有镇静、镇痛、解热、降温、利尿、抗过敏、耐缺氧、平喘作用。
并且,苦参总生物碱提取物,是多种生物碱的混合天然产物,多以苦参碱为结构代表,属于四环喹诺里西啶类化合物,分子骨架可看成两个噻嗪啶的稠合体,包括氧化苦参碱、苦参碱、槐果碱、槐定碱等等,一起应用会产生协同作用。
然而苦参中药材或者饮片受地域生态环境、加工及储备等因素的影响,导致苦参内在质量不稳定,因此将起到具有上述功效的成分——生物碱提取出来,以生物碱提取物的形式进行施药,用药剂量更精准,药物品质及含量更稳定,药效更确切。
发明内容
本发明的目的之一是克服现有技术的缺陷和不足,提供一种绿色、对环境相对友好、极具产业化潜力的苦参总生物碱提取物的制备方法,其总生物碱提取率高、纯度高、稳定性高,提取过程能耗低、所用试剂和材料可再生。
本发明的目的之二是提供苦参总生物碱有效部位提取物在抗菌消炎、抗病毒、抗肿瘤、杀虫、升白细胞、免疫调节、扩张血管、降低血脂、镇静、镇痛、解热、平喘等多方面的药用用途。
本发明解决其技术问题所采用技术方案是:
一种苦参总生物碱提取物的制备方法,包括如下步骤:
(1)提取:
第一步:粉碎:取净选好的苦参根药材干燥后,粉碎成中粉,粒度为65目~85目;
第二步:浸润:以pH=2~3的HCl水溶液浸润12h,浸润溶剂量与苦参中粉量的体积比为2:1;
第三步:渗漉:以3~5ml/(kg·min)的流速渗漉提取,收集6~10倍料液比的提取液。
(2)分离
第四步:等电点法除杂:以pH梯度沉淀法去除蛋白质、鞣质和多糖杂质:将提取液酸碱度调为pH=3,静置1h后以离心机2000r/min离心2min取上清液,调节提取液pH=4,静置1h后2000r/min离心2min取上清液,以此类推,直至调节提取液pH=14,静置1h后以2000r/min离心2min,得到较为清澈的提取液;
第五步:还原提取液:每100g苦参为原料的苦参中粉通过上述步骤所得提取液,在 pH=2~3的条件下每100g苦参原料在此步加入0.20g~0.25g亚硫酸钠,充分溶解后,静置 2.5~3.0h;
第六步:上柱吸附:以大孔树脂进一步分离生物碱,去除其他杂质:上柱液pH调为11~12,上柱量为10mg生物碱/mL树脂,NaCl浓度为2~3mol·L-1,上柱流速=1.5~2BV/h;
第七步:洗脱解吸附:以60%~70%乙醇(pH=2~3)作为洗脱液,解吸流速为1~2BV/h,收集洗脱液至无生物碱反应。
(3)纯化
第八步:所得洗脱液经减压浓缩后,以氯仿进行4段萃取,所得萃取液经减压浓缩,真空干燥,得到苦参总生物碱提取物。
经定性定量分析检测:本发明方法中得到的苦参总生物碱提取物中,苦参总生物碱的质量含量以苦参碱、槐果碱和槐定碱含量之和计,为95%以上,可见,通过本发明方法,可分离制得高含量的苦参总生物碱提取物。
另外,现代研究证实,苦参生物碱提取物具有显著的抗菌消炎;抗病毒;抗肿瘤;杀虫;升白细胞、免疫调节;扩张血管、降低血脂;镇静、镇痛、解热;平喘等功能,由本发明方法制备的苦参总生物碱提取物可用于制备抗病毒类药物(如治疗病毒性肝炎、病毒性心肌炎、病毒性角膜炎等病症的药物)、抗菌消炎类药物(如治疗急性菌痢、扁桃体炎、乳腺炎、***、***炎、支气管炎、荨麻疹、湿疹、急性肾炎、***、***炎、鼻炎及皮炎等病症的药物)、抗菌消炎类日用品(如洗手液、妇科洗液、卫生巾、湿巾、纸尿裤等);杀虫类药物(如农业杀虫抗菌剂、动物杀虫药、驱虫药等);抗肿瘤类药物(如治疗肝癌、胃癌、肠癌、肺癌、子宫癌、卵巢癌、***癌、乳腺癌等的药物);此外还有升白、免疫调节类药物;扩张血管、降低血脂类药物;镇静、镇痛、解热、降温类中枢神经药物;抗过敏、平喘类药物等。可制成片剂、散剂、颗粒剂、丸剂、液体制剂、胶囊剂、外用膏剂、栓剂、注射剂,胶剂、膜剂等临床接收的药物剂型,具有广泛的药用开发价值。
本发明的有益效果是:本发明提供了总生物碱提取率高、纯度高、稳定性高、质量可控、药效显著的苦参总生物碱提取物;所述的苦参总生物碱提取物中,总生物碱含量达98%以上。
本发明所述的制备方法中采用树脂进行生物碱与其他成分的分离,所用试剂和材料均可再生,循环再利用,其工艺简单,成本低廉,适合于绿色工业化生产,所得提取物具有显著的抗菌消炎、抗病毒、杀虫、抗肿瘤、升白细胞、免疫调节、扩张血管、降低血脂、镇静、镇痛、解热、平喘等功能,可用于相应药物的制备,易于推广应用。
本发明为研究和开发利用苦参总生物碱提取物提供便捷途径,为苦参生物碱单体分离提供廉价原料,为苦参碱及其衍生物的全合成及结构修饰研究奠定基础,为以苦参碱为先导化合物开发新药提供经济的前体药物。
具体实施方式
通过下面给出的本发明的具体实施例可以进一步清楚地了解本发明,但它们不构成对本发明的任何限制,任何在本发明权利要求范围内所做的有限次的修改,仍在本发明的权利要求保护范围之内。
实施例1
一种苦参总生物碱提取物的制备方法是:
将净选好的苦参根药材干燥后,粉碎成中粉,粒度为65目~85目,以pH=2.0的HCl水溶液浸润12h,浸润溶剂量与苦参中粉量的体积比为2:1;以3ml/(kg·min)的流速渗漉提取,收集8倍料液比的提取液。
将提取液酸碱度调为pH=3,静置1h后以离心机2000r/min离心2min取上清液,调节提取液pH=4,静置1h后2000r/min离心2min取上清液,以此类推,直至调节提取液pH=14,静置1h后以2000r/min离心2min,得到较为清澈的提取液;然后在 pH=2的条件下加入0.20g亚硫酸钠,充分溶解后,静置2.5h。
经过上柱吸附前处理后,以大孔树脂进一步分离生物碱,将上柱液pH调为11,添加NaCl,使其浓度为2mol·L-1,上柱流速调节为1.5mol·L-1进行上柱吸附。
以pH=2浓度为60%的乙醇作为洗脱液,解吸流速调节为1BV/h,收集洗脱液至无生物碱反应。所得洗脱液经减压浓缩后,以氯仿进行4段萃取,所得萃取液经减压浓缩,真空干燥,得到苦参总生物碱提取物。所得苦参总生物碱提取物得率结果见表1所示。其中:n=3,X±SD。
表1 实例一苦参总生物碱定量分析表(n=3,X±SD)
经高效液相色谱法(HPLC)法定性定量分析验证,可确定本发明方法中得到的苦参总提取物中总生物碱的质量含量,以苦参碱、槐果碱和槐定碱的质量含量之和计为656.99mg±1.04mg,得率为81.11%±0.13%,纯度为98.59%±0.16%。
实施例2
一种苦参总生物碱提取物的制备方法是:
将净选好的苦参根药材干燥后,粉碎成中粉,粒度为65目~85目,以pH=2.5的HCl水溶液浸润12h,浸润溶剂量与苦参中粉量的体积比为2:1;以3ml/(kg·min)的流速渗漉提取,收集9倍料液比的提取液。
将提取液酸碱度调为pH=3,静置1h后以离心机2000r/min离心2min取上清液,调节提取液pH=4,静置1h后2000r/min离心2min取上清液,以此类推,直至调节提取液pH=14,静置1h后以2000r/min离心2min,得到较为清澈的提取液;然后在 pH=2.5的条件下加入0.24g亚硫酸钠,充分溶解后,静置2.5h。
经过上柱吸附前处理后,以大孔树脂进一步分离生物碱,将上柱液pH调为11.5,添加NaCl,使其浓度为2mol·L-1,上柱流速调节为1.5mol·L-1进行上柱吸附。
以pH=2.5浓度为65%的乙醇作为洗脱液,解吸流速调节为1.5BV/h,收集洗脱液至无生物碱反应。所得洗脱液经减压浓缩后,以氯仿进行4段萃取,所得萃取液经减压浓缩,真空干燥,得到苦参总生物碱提取物。所得苦参总生物碱提取物得率结果见表2所示。
表2 实例二苦参总生物碱定量分析表(n=3,X±SD)
经高效液相色谱法(HPLC)法定性定量分析验证,可确定本发明方法中得到的苦参总提取物中总生物碱的质量含量,以苦参碱、槐果碱和槐定碱的质量含量之和计为660.64mg±0.57mg,得率为81.56%±0.05%,纯度为98.90%±0.17%。
实施例3
一种苦参总生物碱提取物的制备方法是:
将净选好的苦参根药材干燥后,粉碎成中粉,粒度为65目~85目,以pH=3的HCl水溶液浸润12h,浸润溶剂量与苦参中粉量的体积比为2:1;以3ml/(kg·min)的流速渗漉提取,收集10倍料液比的提取液。
将提取液酸碱度调为pH=3,静置1h后以离心机2000r/min离心2min取上清液,调节提取液pH=4,静置1h后2000r/min离心2min取上清液,以此类推,直至调节提取液pH=14,静置1h后以2000r/min离心2min,得到较为清澈的提取液;然后在pH=3的条件下加入0.22g亚硫酸钠,充分溶解后,静置3h。
经过上柱吸附前处理后,以大孔树脂进一步分离生物碱,将上柱液酸碱度调节为pH=12,添加NaCl,使其浓度为3mol·L-1,上柱流速调节为2mol·L-1进行上柱吸附。
以pH=3浓度为70%的乙醇作为洗脱液,解吸流速调节为2BV/h,收集洗脱液至无生物碱反应。所得洗脱液经减压浓缩后,以氯仿进行4段萃取,所得萃取液经减压浓缩,真空干燥,得到苦参总生物碱提取物。所得苦参总生物碱提取物得率结果见表2所示。其中:n=3,X±SD。
表3 实例三苦参总生物碱定量分析表(n=3,X±SD)
经高效液相色谱法(HPLC)法定性定量分析验证,可确定本发明方法中得到的苦参总提取物中总生物碱的质量含量,以苦参碱、槐果碱和槐定碱的质量含量之和计为665.60mg±0.69mg,得率为82.17%±0.14%,纯度为99.54%±0.13%。
Claims (10)
1.一种苦参总生物碱提取物的制备方法,其特征在于:包括如下步骤:
(1)提取:
取净选好的苦参根药材干燥后,粉碎成中粉,粒度为65目~85目,以pH=2~3的HCl水溶液浸润12h,浸润溶剂量与苦参中粉量的体积比为2:1;以3~5ml/(kg·min)的流速渗漉提取,收集6~10倍料液比的提取液;
(2)分离:
将提取液酸碱度调为pH=3,静置1h后以离心机2000r/min离心2min取上清液,调节提取液pH=4,静置1h后2000r/min离心2min取上清液,以此类推,直至调节提取液pH=14,静置1h后以2000r/min离心2min,得到较为清澈的提取液;然后在 pH2~3的条件下加入 0.20g~0.25g亚硫酸钠,充分溶解后,静置2.5~3.0h;
经过上柱吸附前处理后,以大孔树脂进一步分离生物碱,将上柱液调为pH=11~12,上柱量控制在10mg生物碱/mL树脂,添加NaCl,使其浓度为2~3mol·L-1,上柱流速调节为1~2BV/h进行上柱吸附;
以pH=2~3,浓度为60%~70%的乙醇作为洗脱液,解吸流速调节为1~2BV/h,收集洗脱液至无生物碱反应;
(3)纯化
由步骤(2)所得洗脱液经减压浓缩后,以氯仿进行4段萃取,所得萃取液经减压浓缩,真空干燥,得到苦参总生物碱提取物。
2.根据权利要求1所述的一种苦参总生物碱提取物的制备方法,其特征在于:所述步骤(1)中,所用酸浸液pH为2~3。
3.根据权利要求1所述的一种苦参总生物碱提取物的制备方法,其特征在于:所述步骤(1)中,渗漉流速为3~5ml/(kg·min)。
4.根据权利要求1所述的一种苦参总生物碱提取物的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)中,加入亚硫酸钠前,将渗漉液pH调节为pH=2~3。
5.根据权利要求1所述的一种苦参总生物碱提取物的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)中,加入亚硫酸钠的量为:每100g苦参中粉原料则在此步添加0.20g~0.25g亚硫酸钠。
6.根据权利要求1所述的一种苦参总生物碱提取物的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)中,加入亚硫酸钠后充分溶解静置的时间控制在2.5~3.0h。
7.根据权利要求1所述的一种苦参总生物碱提取物的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)中,上柱液调节pH为11~12,所述上柱量控制在10mg生物碱/mL树脂。
8.根据权利要求1所述的一种苦参总生物碱提取物的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)中,上柱液中添加NaCl,其浓度为2~3mol·L-1 ,所述上柱流速调节为1~2BV/h,洗脱流速为1~2BV/h。
9.根据权利要求1所述的一种苦参总生物碱提取物的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)中,洗脱液为(pH=2~3)浓度为60%~70%的酸醇。
10.一种苦参总生物碱提取物的应用,其特征在于:苦参总生物碱提取物应用于制备抗菌消炎、抗病毒、抗肿瘤、杀虫、升白细胞、免疫调节、扩张血管、降低血脂、镇静、镇痛、解热、平喘功能的药物中,相应药物按照常规工艺在制备临床可接受的剂型,包括片剂、散剂、颗粒剂、丸剂、液体制剂、胶囊剂、外用膏剂、栓剂、注射剂、胶剂,膜剂中的应用。
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