CN105017307A

CN105017307A - 一种制备高纯天然L-α-甘油磷脂酰胆碱的方法

Info

Publication number: CN105017307A
Application number: CN201510443689.XA
Authority: CN
Inventors: 王志强; 王继文; 李津; 鞠加林
Original assignee: SHENYANG TIANFENG BIOLOGICAL PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: SHENYANG TIANFENG BIOLOGICAL PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2015-07-22
Filing date: 2015-07-22
Publication date: 2015-11-04

Abstract

本发明公开了一种制备高纯天然L-α-甘油磷脂酰胆碱（L-α-GPC）的方法，属于磷脂类产品的深加工技术领域。包括如下制备步骤：以碱解反应液为原料，直接进行氧化铝柱层析，再应用阳离子交换树脂柱层析去除剩余的胆碱和盐等其它杂质，所得层析液进行活性炭吸附脱色、浓缩，得终产品。所得产品经高效液相色谱-蒸发光检测器检测，纯度可以达到99.0%以上，符合医药及保健品的纯度要求。本发明为L-α-甘油磷脂酰胆碱的分离纯化提供了一种新的生产工艺方法，也增加了氧化铝柱层析在磷脂深加工领域的应用，并能保障L-α-甘油磷脂酰胆碱作为原料药和保健食品的安全性。

Description

一种制备高纯天然L-α-甘油磷脂酰胆碱的方法

技术领域

本发明涉及药物化学、分离纯化、保健食品技术领域，特别是涉及一种制备高纯天然L-α-甘油磷脂酰胆碱(L-α-GPC)的方法。

背景技术

L-α-甘油磷脂酰胆碱是天然磷脂中的磷脂酰胆碱去除1位和2位碳上的脂肪链所得的脱酰基产物，是动植物体内天然存在的活性物质，具有重要的生理活性，可应用于保健食品、药品、化妆品等领域。在医药领域中，甘油磷脂酰胆碱对神经功能性疾病，特别对老年痴呆症患者具有明显的治疗作用。

目前，国内有多名学者对L-α-甘油磷脂酰胆碱的分离纯化进行了研究，其分离纯化方法包括浸提法、沉淀结晶法、离子交换树脂柱层析法、硅胶柱层析法等。如专利CN102516292和CN102964377中所采用的分离纯化方法，GPC待分离样品先用低碳醇溶解，然后再向此低碳醇溶液中加入非极性有机溶剂沉淀GPC，应用此种方法得到的GPC产品的纯度低，无法到达市场对此产品纯度的要求。专利CN102875592和CN103172659中所采用的分离纯化方法，是使GPC待分离样品依次过阳离子交换树脂和阴离子交换树脂，此种方法用有机溶剂少，但对原料中磷脂酰胆碱的纯度要求严格，只能用高纯度的磷脂酰胆碱为原料，如果采用低纯度的大豆粉末磷脂为原料，所制得的甘油磷脂酰胆碱往往纯度不能达到98％以上。专利CN102093410采用使碱解液先进行硅胶柱层析分离，然后再进行阳离子交换树脂柱层析分离，此方法可以得到高含量的L-α-甘油磷脂酰胆碱产品，但在进行硅胶柱层析时，洗脱剂可以溶解部分硅胶进入GPC样品中，后续操作很难去除此硅胶杂质。

发明内容

为了克服以上现有技术的不足，本发明提供了一种制备高纯天然L-α-甘油磷脂酰胆碱的方法，解决了在分离纯化过程中纯度不够、原料要求高、新引进杂质无法去除等缺点。

本发明所采用的技术方案是：此方法采用大豆粉末磷脂为初始原料，经过甲醇钠碱降解，中性氧化铝柱层析去除碱解液中的甘油磷脂酰乙醇胺、乙醇胺、甘油磷脂酰肌醇、肌醇、甘油磷脂酸等杂质，再应用阳离子交换树脂去除中性油脂、脂肪酸、胆碱等其它杂质，最后用活性炭吸附脱色，浓缩，得最终产品。

包括如下步骤：

碱解反应：大豆粉末磷脂(或浓缩磷脂以及其它所含磷脂酰胆碱PC纯度大于20％mg/mg的大豆磷脂产品)加入甲醇于40±2℃搅拌溶解25±5min，加入磷脂原料5±0.5％(mg/mg)的甲醇钠于40±2℃搅拌反应4±0.2h，反应后用冰乙酸调节药液pH值为6.0±0.5，过0.45μm滤膜，滤液于50±2℃浓缩至干基比为40±3％(mg/mg)。

氧化铝柱层析：中性氧化铝加入低碳醇水溶液搅拌至无气泡，倒入层析柱中，静置过夜，上样，用低碳醇水溶液进行层析分离，TLC检测，合并GPC馏分，浓缩。氧化铝用量的计算以碱解反应液中所含的干物质质量计算，碱解反应液干物质质量:中性氧化铝质量＝1:10至1:15(g/g)。

所述的中性氧化铝目数为80-160目或200-300目均可。

所述的低碳醇为甲醇、乙醇。

所述的低碳醇水溶液中水的体积:低碳醇水溶液总体积＝1％至5％(ml/ml)。

离子交换柱层析：预处理好的阳离子交换树脂用甲醇浸泡过夜，倒入层析柱中，上样，先用低碳醇洗涤油脂类杂质，再用纯化水洗脱GPC，收集GPC馏分。

所述的阳离子交换树脂为硫酸H⁺型离子交换树脂，优选D001大孔离子交换树脂。

所述的低碳醇为甲醇、乙醇。

活性炭脱色：离子交换树脂洗脱所得GPC馏分升温至58-62℃，加入活性炭搅拌吸附，过0.22μm滤膜去除活性炭，滤液于50±2℃浓缩至干基比为85-90％(mg/mg)，得终产品。

所述的活性炭为木质来源活性炭、矿物质来源活性炭。

本发明利用中性氧化铝柱层析法分离纯化大豆粉末磷脂的碱解反应液制备L-α-甘油磷脂酰胆碱，原料廉价、工艺简单、杂质去除完全、无新增杂质，纯度高，且易于实现工业化生产。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进一步说明。应该说明的是，本发明的实施例所描述的制备方法仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明所描述思路下，对本发明制备方法的简单改进都属于本发明包含的范围。

实施例1

取大豆粉末磷脂400g，加入2000ml无水甲醇于40℃搅拌25min，加入20g甲醇钠，于40℃搅拌反应4h。反应后用冰乙酸调药液pH值为6.0，降温至25℃，过0.45μm滤膜，滤液浓缩至干基比为40％。

取80-160目中性氧化铝960g，加入含水1％的甲醇1440ml，搅拌至无气泡，装柱，静置过夜。上样，用1％的甲醇作为洗脱液洗脱，收集第0.5至2.0倍柱体积GPC馏分，浓缩。

取D001大孔离子交换树脂体积为800ml，用无水甲醇浸泡过夜，次日装柱，上样，用无水甲醇洗涤4倍柱体积，再用纯化水洗脱，收集纯化水洗脱的第0.5至1.5倍柱体积GPC馏分，合并混匀。

将过离子交换树脂所得的GPC水溶液升温至60℃，加入40g针剂活性炭767，于60℃搅拌吸附2h，过0.22μm滤膜去除活性炭，滤液浓缩至干基比为87％，得产品16.1g。

高效液相色谱蒸发光外标法检测此样品的GPC含量为99.2％，收率为4.0％。

实施例2

取大豆粉末磷脂400g，加入2000ml无水甲醇于40℃搅拌30min，加入20g甲醇钠，于40℃搅拌反应6h。反应后用冰乙酸调药液pH值为5.2，降温至25℃，过0.45μm滤膜，滤液于45-55℃浓缩至干基比为41％。

取80-160目中性氧化铝920g，加入含水5％的乙醇1380ml，搅拌至无气泡，装柱，静置过夜。上样，用5％的乙醇作为洗脱液洗脱，收集第0.5至2.1倍柱体积GPC馏分，浓缩。

取D001大孔离子交换树脂体积为1000ml，用无水甲醇浸泡过夜，次日装柱，上样，用无水甲醇洗涤4倍柱体积，再用纯化水洗脱，收集纯化水洗脱的第0.5至1.5倍柱体积GPC馏分，合并混匀。

将过离子交换树脂所得的GPC水溶液升温至60℃，加入40g针剂活性炭767，于60℃搅拌吸附2h，过0.22μm滤膜去除活性炭，滤液浓缩至干基比为89％，得产品15.5g。

高效液相色谱蒸发光外标法检测此样品的GPC含量为99.5％，收率为3.9％。

实施例3

取大豆粉末磷脂400g，加入2000ml无水甲醇于40℃搅拌30min，加入20g甲醇钠，于40℃搅拌反应6h。反应后调药液pH值为5.0，降温至25℃，过0.45μm滤膜，滤液于45-55℃浓缩至干基比为38％。

取200-300目中性氧化铝640g，加入含水2％的甲醇960ml，搅拌至无气泡，装柱，静置过夜。上样，用2％的甲醇作为洗脱液洗脱，收集第0.6至2.1倍柱体积GPC馏分，浓缩。

将过离子交换树脂所得的GPC水溶液升温至60℃，加入40g针剂活性炭767，于60℃搅拌吸附2h，过0.22μm滤膜去除活性炭，滤液浓缩至干基比为86％，得产品16.5g。

高效液相色谱蒸发光外标法检测此样品的GPC含量为99.4％，收率为4.1％。

实施例4

取大豆粉末磷脂400g，加入2000ml无水甲醇于40℃搅拌30min，加入20g甲醇钠，于40℃搅拌反应6h。反应后调药液pH值为5.0，降温至25℃，过0.45μm滤膜，滤液于45-55℃浓缩至干基比为36％。

取200-300目中性氧化铝620g，加入含水4％的乙醇930ml，搅拌至无气泡，装柱，静置过夜。上样，用4％的乙醇作为洗脱液洗脱，收集第0.7至2.3倍柱体积GPC馏分，浓缩。

将过离子交换树脂所得的GPC水溶液升温至60℃，加入40g针剂活性炭767，于60℃搅拌吸附2h，过0.22μm滤膜去除活性炭，滤液浓缩至干基比为86％，得产品16.9g。

高效液相色谱蒸发光外标法检测此样品的GPC含量为99.6％，收率为4.2％。

Claims

1.一种制备高纯天然L-α-甘油磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，包括如下工艺步骤：

以大豆粉末磷脂为初始原料，利用甲醇钠为反应试剂制备碱解反应液，过0.45μm滤膜，浓缩；称量中性氧化铝，加入低碳醇水溶液搅拌至无气泡、装柱，上样，合并GPC馏分，浓缩；量取阳离子交换树脂，加入低碳醇搅拌至无气泡、装柱，上样，先用低碳醇洗脱，再用纯化水洗脱，合并GPC馏分；活性炭吸附脱色，过0.22μm滤膜、浓缩，即得。

2.根据权利要求1所述的制备高纯天然L-α-甘油磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，氧化铝用量的计算以碱解反应液中干物质质量计算，碱解反应液干物质质量:中性氧化铝质量=1:10至1:15（g/g）。

3.根据权利要求1所述的制备高纯天然L-α-甘油磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，所述的低碳醇为甲醇、乙醇。

4.根据权利要求1至3任何一项所述的制备高纯天然L-α-甘油磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，中性氧化铝层析填料为80-160目、200-300目。

5.根据权利要求1至4任何一项所述的制备高纯天然L-α-甘油磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，所述的低碳醇水溶液中水的体积:低碳醇水溶液总体积=1%至5%（ml/ml）。

6.根据权利要求1至5任何一项所述的制备高纯天然L-α-甘油磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，所述的阳离子交换树脂为硫酸H⁺型离子交换树脂。

7.根据权利要求1至6任何一项所述的制备高纯天然L-α-甘油磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，所述的活性炭为木质来源活性炭、矿物质来源活性炭。

8.根据权利要求1-7任何一项所述的制备高纯天然L-α-甘油磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，所述的大豆粉末磷脂还可以为浓缩磷脂或其它所含磷脂酰胆碱PC纯度大于20% mg/mg的大豆磷脂产品。