CN105008355B

CN105008355B - 作为蛋白激酶抑制剂的氮杂吲哚衍生物

Info

Publication number: CN105008355B
Application number: CN201380071999.2A
Authority: CN
Inventors: G·舍韦; B·戴德-卡扎尔斯; B·福韦尔; C·博里; A·亚里
Original assignee: Oribase Pharma
Current assignee: Oribase Pharma
Priority date: 2012-12-28
Filing date: 2013-12-30
Publication date: 2017-08-04
Anticipated expiration: 2033-12-30
Also published as: HK1215578A1; TW201431858A; JP2016507509A; AR094346A1; KR20150108372A; BR112015015653A2; RU2015128606A; AU2013369243A1; US20150353540A1; WO2014102378A1; BR112015015653A8; IL239628A0; CA2896822A1; CN105008355A; US9493455B2; CL2015001818A1; FR3000494B1; FR3000494A1; EP2938613A1

Abstract

本发明涉及下式(I)的化合物和/或其药学上可接受的加成盐、溶剂化物、对映异构体、非对映异构体，及其混合物。本发明的主题因此也包括式(I)化合物的制备，其用途，特别是抑制例如许多疾病如癌症或免疫***病症中涉及的蛋白激酶的用途。

Description

作为蛋白激酶抑制剂的氮杂吲哚衍生物

技术领域

本发明涉及作为蛋白激酶抑制剂的化合物，其制备方法以及其治疗应用。

背景技术

蛋白激酶(PK)的功能障碍/反常是许多病理学的原因，包括肿瘤、免疫、神经、代谢和感染疾病。在开发用于治疗这些病症的小分子以及生物激酶抑制剂方面，引起相当大的注意。

在肿瘤生成期间，许多PK特别地会反常。因此蛋白激酶是抗癌药物的具吸引力的靶点，所述抗癌药物包括小分子抑制剂，其通常作用以阻断ATP或基质结合至酪氨酸激酶的催化功能区；以及单克隆抗体，其可特异性靶向受体酪氨酸激酶(RTK)及其配体。在实体恶性肿瘤中，单一激酶异常为疾病的唯一的原因并不常见，并且肿瘤仅依靠一种不正常活化的信号传递通路也是不太可能的。相反，多种信号传递通路紊乱。此外，即使单一分子异常，也可能具有多种的下游作用。使用同时靶向数个信号传递通路的单一分子的多靶向治疗法(MTKI＝“多靶向激酶抑制剂”)，比单一靶向治疗法更有效。单一靶向治疗法已显示出仅对一些适应症有作用，而大部分的实体瘤出现多种信号传递通路的反常。例如，血管内皮生长因子受体(VEGFR)抑制剂和血小板衍生生长因子受体(PDGFR)抑制剂的组合产生累积的抗肿瘤功效(Potapova等人,Mol Cancer Ther 5,1280–1289,2006)。

肿瘤不仅由肿瘤细胞构成。一个重要的部分是由这些细胞产生的***或间质(由***以及胞外基质构成)组成。***的例子是纤维母细胞、内皮细胞和巨噬细胞。***在癌症发生中也起到重要作用，其中其特征在于上调或诱导生长因子及其受体、黏附分子、细胞因子、趋化因子和蛋白水解酶(Hofmeister等人,Immunotherapy 57,1–17,2007；Raman等人,Cancer Letters 256,137–165,2007；Fox等人,The Lancet Oncology2,278–289,2001)。

内皮和肿瘤细胞上与酪氨酸激酶相关的受体VEGFR，因参与血管生成作用，所以在促进癌症方面起到主要作用(Cébe-Suarez等人,Cell Mol Life Sci 63,601–615,2006)。此外，由癌细胞分泌的生长因子TGF-β、PDGF以及FGF2，将正常的纤维母细胞转化成肿瘤相关的纤维母细胞，这使其受体成为激酶抑制剂抑制作用的合适的靶点(Raman等人,2007)。

并且，越来越多的证据提出EGF受体(EGFR)与HER2通路和VEGF依赖性血管生成之间的关联，并且临床前研究显示，EGFR信号传导的直接和间接血管生成作用(Pennell和Lynch,The Oncologist 14,399–411,2009)。已提出上调肿瘤促血管生成因子和EGFR非依赖性肿瘤诱导的血管生成作用，为肿瘤细胞能克服EGFR抑制作用的可能的机制。

由EGFR的活化调节的主要信号传递通路是PI3K、MAPK和Stat通路，其会增加细胞增殖、血管生成、抑制细胞凋亡以及细胞周期的进行。在大多数实体瘤如肺癌、乳腺癌、结直肠癌以及头颈癌中，EGFR是过度表达的(Cook和Figg,CA Cancer J Clin 60,222–2432010)。此外，已显示出较高的EGFR表达与转移、降低的存活率和较差的预后有关。

c-Src，一种膜相关的非受体酪氨酸激酶，参与许多重要的信号传递通路，且在细胞功能上具有多效作用。c-Src整合和调节来自多重跨膜受体相关的酪氨酸激酶的信号传导，如EGFR、PDGFR、IGF1R、VEGFR、HER2。以及，这些作用调控细胞的存活、增殖、分化、血管生成、细胞运动性、黏附性以及侵入性(Brunton和Frame,Curr Opin Pharmacol 8,427–432,2008)。在许多类型的癌症中，包括结直肠癌、胃肠癌(肝、胰、胃与食道)、乳腺癌、卵巢癌和肺癌中观察到蛋白c-Src的过度表达以及其活性增加(Yeatman,Nat Rev Cancer 4,470–480,2004)。

在癌症中，EGFR或KRAS的活化导致Ras依赖性Raf活化水平的大幅提高。因此，预期消除Raf的功能将有效治疗许多由EGFR和KRAS病变引发的癌症(Khazak等人,ExpertOpin.Ther.Targets 11,1587–1609,2007)。

在肿瘤中，除了Raf信号传导的活化之外，许多研究也暗示，Ras-Raf-MAPK信号传递通路的活化，为血管发生和血管生成中的关键步骤。这种活化作用由生长因子受体如VEGFR2、FGFR2诱导，因此抑制Raf的活化作用代表用于调控肿瘤血管生成和血管新生的合理靶点。

虽然VEGFR、PDGFR、EGFR、c-Src和Raf是肿瘤细胞和肿瘤***上的重要靶点，但其它激酶如FGFR仅作用在***中，而其它致癌基因常仅作用在肿瘤细胞中。

蛋白激酶是多样信号传递通路(包括免疫细胞)的基本组分。其基本功能使得其为有效的治疗靶点。起初预期的是，高度选择性可能是关键的；然而，随着时间的推移，开始使用“多激酶”抑制剂。此外，使用激酶抑制剂的疾病的范围，也扩大至不仅包括恶性肿瘤，还包括免疫调控疾病/炎性疾病。起初是由Src家族蛋白酪氨酸激酶调控由多链免疫识别受体发出的信号传导的第一步。免疫功能中涉及的MTKI靶向激酶为用于自身免疫疾病，如类风湿性关节炎、牛皮癣以及炎性肠道疾病的潜在药物(Kontzias等人,F1000MedicineReports 4,2012)。

之前提到的蛋白激酶也为许多其它生理学和病理学机制，如神经退化和神经保护(Chico等人,Nature Reviews Drug Discovery 8,892–909,2009)、动脉硬化、骨质疏松和骨吸收、黄斑变性、病理性纤维化、囊肿生成(人类常染色体显性多囊肾病…)的主要组分。

在WO2010/092489和相关的专利/专利申请中，我们确定了数个展现出可供这些应用的感兴趣的特性的化合物。然而，我们发现这些化合物的一些特性可通过选择性地作用在其结构的特定区域而得到提升。然而，在WO2010/092489提出申请时，并未精确地阐述这些结构对激酶的作用机制，因此无法预期我们发现的，在本申请中所公开的结构的高活性。

本发明的主题是提供具有原始骨架的新颖的多靶点激酶抑制剂，其可用于治疗与蛋白激酶的反常相关的病理学，包括肿瘤生成、人类免疫病症、炎性疾病、血栓疾病、神经退行性疾病、骨病、黄斑变性、纤维化、囊肿生成。

本发明的抑制剂可特别用于治疗许多癌症，更特别的是下列的情况：液体肿瘤，如血液学癌症(白血病)，或实体瘤，包括但不限于，鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胃癌、胰腺癌、胶质细胞肿瘤如胶质母细胞瘤和神经纤维瘤、***、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌、黑色素瘤、结直肠癌、子宫内膜癌、唾腺癌、肾癌、***癌、外阴癌、甲状腺癌、肉瘤、星状细胞瘤以及各种类型的过度增生性疾病。

发明内容

发明简述

本发明涉及下式(I)的化合物，和/或其药学上可接受的加成盐、溶剂化物、对映异构体、非对映异构体，及其混合物：

其特征在于，

-R1是C₁-C₆烷基，优选甲基、乙基或正丙基，

或者，R1是氢原子，

-X是CH₂或C＝O，

-R2是氢原子、C₁-C₆烷基或卤素，

-Y选自HNC(O)、HNC(S)、HNSO₂、HNC(O)CH₂、HNC(O)NH、HNC(S)NH、C(O)NH、C(O)NHCH₂、CH₂NHC(O)和CH₂NHC(S)，

-R3选自：

-被下列单或多取代的苯基：

-羟基，

-卤素，

-C₁-C₆烷基胺，优选二级C₁-C₆烷基胺，

-C₁-C₆烷氧基，

-C₁-C₆三氟烷氧基，优选三氟甲氧基，

-C₁-C₆烷基，优选甲基、异丙基，

-C₁-C₆三氟烷基，优选三氟甲基，

-杂芳基片段，其任选被C₁-C₆烷基、C₁-C₆三氟烷基、卤素和/或羟基取代，其中所述杂芳基片段选自二氢苯并呋喃、吲哚、苯并二氧戊环、苯并***、吡啶和优选被甲基单取代的噻唑，

-咪唑，条件为Y是HNC(S)、HNSO₂、HNC(O)CH₂、HNC(O)NH、HNC(S)NH、C(O)NHCH₂、CH₂NHC(O)、CH₂NHC(S)或C(O)NH，其中NH直接连接至R3，优选条件为Y是HNC(S)、HNSO₂、HNC(O)CH₂、HNC(O)NH、HNC(S)NH、C(O)NHCH₂、CH₂NHC(O)或CH₂NHC(S)，更优选条件为Y是HNC(S)，

-杂芳基，其优选自任选被C₁-C₆烷基、C₁-C₆三氟烷基、卤素和/或羟基取代的二氢苯并呋喃、吲哚、苯并二氧戊环、苯并***、吡啶，

-非芳香族单取代的环状基团，优选为环状C₃-C₁₀烷基，其被羟基、卤素、C₁-C₆烷基胺、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆三氟烷氧基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆三氟烷基单取代，和

-选自以下的片段：

本发明的另一方面涉及一种制备本文所定义的化合物的方法，其特征在于，其包含至少一个下列步骤：

a)在X是CO的情况下，利用肽偶联技术，使用被NO₂基团取代的芳香族羧酸，优选通过使用碳化二亚胺或脲阳离子偶联剂，形成NH-CO键；或者如果X是CH₂，通过还原胺化反应，使用被NO₂基团取代的芳香族醛，优选在氢化硼的存在下，形成NH-CH₂键，

b)优选通过氢化反应，如，例如在钯碳存在下的催化剂氢化反应，在氢气氛下，将NO₂基团还原成NH₂。

本发明的另一方面涉及一种制备本文所定义的化合物的方法，其特征在于，所述方法优选在如上方法的步骤(a)和/或(b)之后包含下列步骤之一：

c₁)在Y是HNC(O)NH的情况下，通过将步骤b)之后获得的化合物与异氰酸酯反应形成脲，

c₂)在Y是HNC(S)NH的情况下，通过将步骤b)之后获得的化合物与异硫氰酸酯反应形成硫脲，

c₃)在Y是HNSO₂的情况下，通过将步骤b)之后获得的化合物与磺酰基卤素如磺酰氯反应形成磺酰胺，

c₄)在Y是HNCO或NHC(O)CH₂的情况下，通过使用肽偶联技术将步骤b)之后获得的化合物与羧酸或酰氯反应形成酰胺，或

c₅)在Y是HNCS的情况下，通过将步骤c₄)之后获得的化合物与劳氏试剂(Lawesson’s reagent)反应形成硫酰胺。

本发明还涉及一种本文定义的化合物，其特征在于，其是药物。

本发明还涉及一种本文所定义的化合物，其用作如下列疾病中的蛋白激酶抑制剂的用途：癌症，更特别的是液体肿瘤如血液学癌症，如白血病、慢性或急性骨髓增生性疾病；或实体瘤，如鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胃肠癌、胰腺癌、胶质细胞肿瘤如胶质母细胞瘤和神经纤维瘤、***、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌、黑色素瘤、结直肠癌、子宫内膜癌、唾腺癌、肾癌、***癌、外阴癌、甲状腺癌、肉瘤和/或星状细胞瘤以及其它激酶相关的疾病，优选免疫失调、炎性疾病、血栓疾病、神经退行性疾病、骨病、黄斑变性、纤维化、囊肿生成、过度增生性疾病。

本发明还涉及一种药物组合物，其特征在于，其含有本文所定义的化合物作为有效成分，以及药学上可接受的赋形剂。

定义

一般地，使用下列定义：

本发明中的表述“肽偶联”意指能够形成酰胺–NH-C(O)-的反应。然而在该反应中使用的技术是肽合成中常见的，即，通过活化羧酸以使胺与其反应。因此，虽然在本发明中没有肽形成，但偶联反应是从肽合成衍生而来，且直接应用于本发明的主题。

所述偶联反应可在冰冷却的温度或室温下，优选在酰化催化剂如二甲氨基吡啶(DMAP)、吡啶、N-羟苯并***(HOBt)、1-羟基-7-氮杂苯并***(HOAt)、N-羟丁二烯亚胺等的存在下，在溶剂如***、丙酮、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、DMF、四氢呋喃(THF)、乙腈、二甲基亚砜(DMSO)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)中，使用缩合试剂或任何其它偶联试剂来进行，所述缩合试剂如N,N'-二环己基碳化二亚胺(DCC)或1-乙基-3-(3'-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC)，即水溶性碳化二亚胺、O-(1H-苯并***-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)、苯并***-1-基-氧三(二甲氨基)膦六氟磷酸盐(BOP)、O-(7-氮杂苯并***-1-基)-1,2,3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)、O-苯并***-1-基-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)、O-苯并***-1-基-四甲基四氟硼酸盐(TBTU)、N-羟基-5-降冰片烯-2,3-二碳化二亚胺。

本发明中的表述“烷基”，如没有特别指出，意指具有1至6个碳原子的直链或支链饱和脂肪族基团。本发明的范围涵盖的烷基的例子为甲基、乙基、丙基、丁基、叔丁基、异丙基等。

本发明中的表述“环烷基”意指具有3至10个碳原子的环烷基。本发明的范围涵盖的环烷基的例子为环丙基、环丁基、环戊基、环己基、甲环己基等。

本发明中的表述“芳基”意指包含5至10个碳原子的环状(单-或多环)芳香族基团。本发明的范围涵盖的芳基的例子为苯基、萘基等。

本发明中的表述“杂芳基”意指包含5至10个碳原子以及1至3个杂原子(如氮、氧或硫)的环状(单-或多环)芳香族基团。本发明的范围涵盖的杂芳基的例子为吡啶、噻吩、噻唑、咪唑、吡唑、吡咯、喹啉、吲哚、哒嗪、喹喔啉、二氢苯并呋喃等。

本发明中的表述“非芳香族单取代的环状基团”意指环烷基和/或杂环基团。

本发明中的表述“杂环基团”意指包含5至10个碳原子，优选2至10个碳原子，以及1至3个杂原子(如氮、氧和硫)的饱和环状基团。本发明的范围涵盖的杂环基团的例子是吗啉、四氢呋喃等。

本发明中的表述“卤素原子”意指：氟、氯、溴或碘原子。

本发明中的表述“烷氧基”意指键合至一个氧的烷基。本发明的范围涵盖的烷氧基的例子为甲氧基、乙氧基等。

本发明中的表述“芳氧基”意指键合至一个氧原子的芳基。本发明的范围涵盖的芳氧基的例子为苯氧基等。

本发明中的表述“磺酰胺基团”意指：

本发明中的表述“N-甲基磺酰胺基团”意指：

本发明中的表述“甲磺酰胺基团”意指：

本发明中的表述“芳烷基”意指被芳基取代的烷基：

本发明中的表述“C₁-C₆烷基胺基团”意指被胺基团取代的C₁-C₆烷基：

本发明中的表述“二级C₁-C₆烷基胺基团”意指二级胺，即，其可被二个C₁-C₆烷基取代。

本发明中的表述“羟基”意指：OH。

本发明中的表述“烷氧基烷基”意指烷基，其优选被烷氧基取代：

本发明中的表述“硫烷基”意指：

本发明中的表述“脲基”为脲或硫脲的通称。

本发明中的表述“取代苯基”意指被下列单或多取代的苯基：

-卤素原子、

-硝基–(NO₂)、

-氰基(CN)、

-甲基噻唑基、

-烷氧基、

-芳氧基、

-烷基、

-磺酰胺基团、

-N-甲基磺酰胺基团、

-甲磺酰胺基团、

-杂芳基、

-羟基、

-三级胺基团、

-基团-CONH烷基、

-基团-NHCO烷基。

本发明的术语“吡啶基”意指由吡啶衍生来的基团：

本发明的术语“噻吩基”意指由噻吩衍生来的基团：

本发明的术语“噻唑基”意指由噻唑衍生来的基团：

本发明的术语“咪唑基”意指由咪唑衍生来的基团：

本发明的术语“吡唑基”意指由吡唑衍生来的基团：

本发明的术语“喹喔啉”意指：

本发明的术语“二氢苯并呋喃基”意指由二氢苯并呋喃衍生来的基团：

本发明的术语“吡咯基”意指由吡咯衍生来的基团：

本发明的术语“吲哚基”意指由吲哚衍生来的基团：

本发明的术语“哒嗪基”意指由哒嗪衍生来的基团：

本发明的术语“N-吗啉基”意指由吗啉衍生来的基团：

本发明的术语“苯并咪唑基”意指由苯并咪唑衍生来的基团：

本发明的术语“嘧啶基”意指由嘧啶衍生来的基团：

本发明中的表述“1H-吡咯[2,3-b]吡啶基”意指由1H-吡咯[2,3-b]吡啶衍生来的基团：

本发明中的表述“药物组合物”意指任何包含有效剂量的本发明化合物以及至少一种药学上可接受的赋形剂的组合物。所述赋形剂根据药物形式和所需的施用方法从本领域技术人员已知的一般赋形剂中选择。

本发明中的表述“药学上可接受的加成盐”意指根据本发明的化合物的所有药学上可接受的盐均包括在本发明的范围内，特别是弱酸和弱碱的盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、三氟乙酸盐等。

本发明中的表述“对映异构体的混合物”意指对映异构体的任何混合物。所述混合物可以是外消旋的，即50/50重量(w/w)％的各对映异构体；或非外消旋的，即对映异构体中的一者含量较多，如此对映异构体中的一者与另一者相比的重量比率介于50/50％和75/25％之间，介于75/25％和90/10％之间，或高于95％。

本发明中的表述“非对映异构体的混合物”意指任何比例的非对映异构体的任何混合物。

表述“治疗”旨在针对所有类型的动物，优选哺乳动物，更优选人类。在治疗非人类的动物的情况下，指的是兽医治疗。

优选实施方案的详细说明

产物

根据一个实施方案，本发明的化合物(I)的特征在于，

-R3选自：

-被下列单或多取代的苯基：

-羟基，

-卤素，

-C₁-C₆烷基胺，优选二级C₁-C₆烷基胺，

-C₁-C₆烷氧基，

-C₁-C₆三氟烷氧基，优选三氟甲氧基，

-C₁-C₆烷基，优选甲基、异丙基，

-C₁-C₆三氟烷基，优选三氟甲基，

-杂芳基片段，其任选被C₁-C₆烷基、C₁-C₆三氟烷基、卤素和/或羟基取

代，其中所述杂芳基片段选自二氢苯并呋喃、吲哚、苯并二氧戊环、

苯并***、吡啶或优选被甲基单取代的噻唑，和/或，

-咪唑，条件为Y是HNC(S)，

-非芳香族单取代的环状基团，优选环状C₃-C₁₀烷基，其被羟基、卤素、C₁-C₆烷基胺、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆三氟烷氧基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆三氟烷基单取代，和

-选自下列的片段：

有利地，本发明的化合物(I)特征在于，

-X是CH₂，

-R2是C₁-C₆烷基或卤素，

且R1、Y和R3如上定义。

根据一个实施方案，本发明的化合物(I)的特征在于，

-X是CH₂，

-R2是C₁-C₆烷基或卤素，和

-R3选自：

-被下列单或多取代的苯基：

-羟基，

-卤素，

-C₁-C₆烷基胺，优选二级C₁-C₆烷基胺，

-C₁-C₆烷氧基，

-C₁-C₆三氟烷氧基，优选三氟甲氧基，

-C₁-C₆烷基，优选甲基、异丙基，

-C₁-C₆三氟烷基，优选三氟甲基，

苯并***、吡啶或优选被甲基单取代的噻唑，和/或，

-咪唑，条件为Y是HNC(S)，

-选自下列的片段：

且R1和Y如上定义。

有利地，本发明的化合物(I)的特征在于，

-R1是C₁-C₆烷基，优选甲基或正丙基，

或者，R1是氢，

-X是CH₂，

-R2是甲基、氟或氯原子，优选甲基或氯原子，

-Y选自HNC(O)、HNC(O)CH₂、HNC(O)NH、HNC(S)NH、C(O)NH、C(O)NHCH₂和CH₂NHC(O)，

-R3选自：

-被C₁-C₆三氟烷基、C₁-C₆三氟烷氧基、C₁-C₆烷基、卤素或任选被CF₃和/或甲基单取代的噻唑基团单取代的苯基，

-被C₁-C₆三氟烷基、C₁-C₆烷基胺和/或羟基多取代的苯基，

-吡啶基团，其任选被C₁-C₆烷基或C₁-C₆三氟烷基取代，优选被甲基和/或三氟甲基取代，

-选自环状C₃-C₁₀烷基的非芳香族环状基团，其被C₁-C₆烷基和/或C₁-C₆三氟烷基单取代，和

-选自下列的片段：

甚至更有利地，所述化合物(I)的特征在于，

-R1是C₁-C₆烷基，优选甲基、乙基或正丙基，

或者，R1是氢原子，

-X是CH₂，

-R2是甲基，

-Y是HNC*(O)，其中C*连接至R3，和

-R3选自：

根据本发明的一个优选的实施方案，式(I)化合物明确地被定义为式(II)的化合物，和/或其药学上可接受的加成盐、对映异构体、非对映异构体，及其混合物：

其特征在于，

-R1是C₁-C₆烷基，

或者，R1是氢原子，

-X是CH₂或C＝O，

-R2是氢、C₁-C₆烷基或卤素，

-R3选自：

-由下列单或多取代的苯基：

-羟基，

-卤素，

-C₁-C₆烷基胺，优选二级C₁-C₆烷基胺，

-C₁-C₆烷氧基，

-C₁-C₆三氟烷氧基，优选三氟甲氧基，

-C₁-C₆烷基，优选甲基、异丙基，

-C₁-C₆三氟烷基，优选三氟甲基，

-杂芳基片段，其任选被C₁-C₆烷基、C₁-C₆三氟烷基、卤素和/或羟基取代，其中所述杂芳基片段选自二氢苯并呋喃、吲哚、苯并二氧戊环、苯并***、吡啶或优选被甲基单取代的噻唑，和/或

-咪唑，条件为Y是HNC(S)，

-杂芳基，其优选自任选被C₁-C₆烷基、C₁-C₆三氟烷基、卤素和/或羟基取代的二氢苯并呋喃、吲哚、苯并二氧戊环、苯并***、吡啶，更优选任选被甲基单取代的噻唑，

-选自下列的片段：

根据本发明的一个优选的实施方案，式(II)的化合物：

其特征在于，

-R1是甲基，

或者，R1是氢原子，

-X是CH₂，

-R2是甲基，

-Y是HNC*(O)，其中C*连接至R3，和

-R3选自：

优选R3是：

在本发明的另一个实施方案中，所有以上详述的特定的实施方案的特征也可为X由CH₂换成C＝O。

本文所公开的全部式(I)或(II)的化合物可以为其药学上可接受的加成盐、对映异构体、非对映异构体，及其混合物。

根据本发明的所有化合物可以为溶剂化形式和非溶剂化形式。

产物的合成

本发明也涉及起始于5-氨基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的本文以上化合物的制备方法。

在第一个实施方案中，根据本发明的方法示于方案1中。关键中间体胺化合物的一般合成方法实际上示于方案1中：

方案1

a)该方法包含至少一种活化剂，如2-(7-氮杂-1H-苯并***-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)，在碱如二异丙基乙胺(DIEA)、碳化二亚胺如二环己基碳化二亚胺(DCC)的存在下。

这些偶联反应是本领域技术人员所熟知的。

b)在氢化硼的存在下，5-氨基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯与各种芳香醛的还原胺化反应，获得对应的苄基胺(Wang,Dong Mei等人Journal of CombinatorialChemistry,2009,11(4),556-575)

c)在氢气氛下，在钯碳的存在下，催化氢化所得到的硝基化合物(Seela,F.,Gumbiowski,R.Heterocycles,1989,29(4),795-805)。

优选地，所述方法包含一个或数个以下方案2中更明确的步骤a)、b)、c)：

方案2

其中，R2如前定义。

优选的方法包含至少一个以下步骤：

a)利用2-(7-氮杂-1H-苯并***-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)和二异丙基乙胺(DIEA)的肽偶联，

b)在氢化硼的存在下，5-氨基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯与各种芳香醛的还原胺化反应，获得对应的苄基胺(Wang,Dong Mei等人Journal of CombinatorialChemistry,2009,11(4),556-575)，

本领域技术人员自然能够应用所有其它熟知的合成技术来获得这些类型的化合物。

在另一个实施方案中，所述方法示于方案3中。

关于本文上所公开的脲或硫脲化合物的合成方法，其中的一种方法示于方案3中：

方案3

其中，R2、R3和X如上定义，且Y是O或S。

合成脲或硫脲化合物的优选的方法因此包含至少一个步骤：

d)关键中间体胺化合物与各种异氰酸酯或硫代异氰酸酯反应。

本领域技术人员自然能够应用所有其它已知的合成技术来获得这些类型的(硫)脲化合物。

在另一个实施方案中，所述方法示于方案4中。

关于磺酰胺化合物的合成方法，其中的一种方法示于方案4中。

方案4

其中R2、R3和X如上定义。

合成磺酰胺化合物的该方法包含至少一个步骤：

e)关键中间体胺化合物与各种磺酰氯反应。

本领域技术人员自然能够应用所有其它已知的合成技术来获得这些类型的磺酰胺化合物。

在另一个实施方案中，所述方法示于方案5中。

关于酰胺化合物的合成方法，其中的二种方法示于方案5中：

方案5

其中，R2、R3和X如上定义。

方案5的方法包含至少一个步骤：

f)关键中间体胺化合物与各种酰氯或羧酸反应(Mouaddib,A.,Joseph,B.等人,Synthesis,2000,(4),549-556)。

本领域技术人员自然能够应用所有其它已知的合成技术来获得这些类型的酰胺化合物。

在另一个实施方案中，所述方法示于方案6中。

关于本文以下所公开的硫脲化合物的合成方法，其中的一种方法示于方案6中：

方案6

合成硫酰胺化合物的优选的方法因此包含至少一个步骤：

g)关键中间体酰胺化合物与劳氏试剂反应。

第六个实施方案涉及根据下列方案7、方案8、方案9和/或方案10获得的，合成非市售可得的羧酸的方法。

4-氨甲基-3-三氟甲基-苯甲酸或4-氨甲基-3-氟苯甲酸

在本发明中使用的，合成4-氨甲基-3-三氟甲基-苯甲酸或4-氨甲基-3-氟苯甲酸的方法示于方案7中：

方案7

其中NR₄R₅代表：

或

合成4-氨甲基-3-三氟甲基-苯甲酸和4-氨甲基-3-氟苯甲酸的优选的方法，包含至少一个下列步骤：

h)优选在甲醇中，有利地在酸介质中，关键的4-甲基-苯甲酸的酯化反应获得甲基酯，

i)有利地在作为自由基引发剂的偶氮二异丁腈(AIBN)的存在下，优选通过N-溴琥珀酰亚胺(NBS)进行甲基的自由基溴化反应(Sun,Yewei等人,Bioorganic&MedicinalChemistry,2008,16(19),8868-8874)，

j)通过各种一级和二级胺进行溴取代反应，

k)酯优选甲基酯的皂化反应。

本领域技术人员自然能够应用所有其它已知的合成技术来获得4-氨甲基-3-三氟甲基-苯甲酸或4-氨甲基-3-氟-苯甲酸，然而该方法优选包含数个或甚至所有的步骤g)、h)、i)和j)。

3-氨基-5-三氟甲基-苯甲酸

合成3-氨基-5-三氟甲基-苯甲酸的方法示于方案8中：

方案8

其中NR₆R₇代表：或

合成3-氨基-5-三氟甲基-苯甲酸的优选方法包含至少一个下列步骤：

l)通过各种一级和二级胺的氟取代反应，

m)将腈官能团水解为对应的羧酸。

本领域技术人员自然能够应用所有其它已知的合成技术来获得3-氨基-5-三氟甲基-苯甲酸，然而所述方法优选包含步骤l)和m)。

5-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基苯甲酸

可用于合成本发明中使用的5-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基苯甲酸的方法示于方案9中：

方案9

所述方法包含至少一个下列步骤：

n)在作为自由基引发剂的偶氮二异丁腈(AIBN)的存在下，通过N-溴琥珀酰亚胺(NBS)进行甲基的自由基溴化反应(Sun,Yewei等人,Bioorganic&Medicinal Chemistry,2008,16(19),8868-8874)，

o)通过N-甲基哌嗪的溴取代反应，

p)将腈官能团水解为对应的羧酸。

本领域技术人员自然能够应用所有其它已知的合成技术来获得5-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基苯甲酸，然而所述方法优选包含数个或甚至全部的步骤n)、o)和p)。

3-二甲氨基-5-三氟甲基-苯甲酸

可用于合成本发明中使用的3-二甲氨基-5-甲基-苯甲酸的方法示于方案10中：

方案10

所述方法包含至少一个下列步骤：

q)优选利用碘甲烷，进行酸以及胺官能团的全甲基化反应，

r)所得到的酯的皂化反应获得对应的羧酸。

本领域技术人员自然能够使用所有其它已知的合成技术，来获得3-二甲氨基-5-三氟甲基-苯甲酸，然而所述方法优选包含步骤q)和r)中的一个或两个。

另一个实施方案涉及合成根据以下方案11获得的5-{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基苯甲酰胺基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸烷基酯的方法：

方案11

优选，所述方法包含至少一个下列步骤：

s)5-{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基苯甲酰胺基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的皂化反应，获得其羧酸衍生物，

t)利用烷剂醇中的亚硫酰氯或硫酸，进行所得到的羧酸的酯化反应。

本领域技术人员自然能够使用所有其它已知的合成技术来获得5-{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基苯甲酰胺基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸烷基酯，然而所述方法优选包含步骤s)和t)的一个或两个。

另一个实施方案涉及合成根据以下方案12获得的5-(3-{[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯甲酰胺基]-甲基}-苯甲酰胺基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯或5-{3-[(3-三氟甲基-硫代苯甲酰胺基)-甲基]-苯甲酰胺基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的方法：

其中R3代表：或

方案12

优选，所述方法包含至少下列步骤：

u)3-氨甲基-苯甲酸甲酯与羧酸的肽偶联反应，

v)关键中间体酰胺化合物与劳氏试剂的反应，

w)所得到的酯的皂化反应获得对应的羧酸，

x)该主要关键羧酸化合物与5-氨基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的肽偶联反应。

另一个实施方案涉及合成根据以下方案13获得的5-[3-(3-三氟甲基-苄氨基甲酰基)-苄氨基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯或5-{3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯氨甲酰基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的方法：

其中R4代表：根据Weijun Shen等人(J.Am.Chem.Soc.,2013,135(5),pp1669–1672)中所述的程序制备的或

方案13

优选，所述方法包含至少下列步骤：

y)3-氰基-苯甲酸与胺化合物的肽偶联反应，

z)所得到的腈还原为对应的醛，

aa)关键的醛化合物与5-氨基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的还原胺化反应。

用途

本发明还涉及根据本发明的化合物作为蛋白激酶抑制剂的用途。取决于癌症类型，可为对准一种或数种激酶蛋白质。

在一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶BRAF的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶EGFR(ErbB1)的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶EGFR(ErbB1)T790ML858R的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶FGFR2的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶KDR(VEGFR2)的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶PDGFRA(PDGFRα)的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶SRC的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶ABL的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶ABL T315I的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶FGFR1的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶VEGFR1的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶PDGFRB(PDGFRβ)的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶ABL E255K的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶ABL G250E的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶ABL Y253F的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶ABL2的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶BLK的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶BMX的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶BRAF V600E的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶BTK的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶CSK的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶EPHA1的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶EPHA2的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶EPHA4的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶EPHB2的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶EPHB4的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶HER2的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶ERBB4的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶FES的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶FGR的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶FLT3的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶FMS的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶FRK的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶FYN的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶HCK的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶LCK的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶LYN的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶MAPK14的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶ERK2的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶PKCθ的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶RET的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶VEGFR3的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作蛋白激酶YES的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作A549癌细胞系增殖的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作HepG2癌细胞系增殖的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作HuCCT1癌细胞系的增殖的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作HuH6选殖株5癌细胞系增殖的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作HuH7癌细胞系增殖的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作PC-3癌细胞系增殖的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作Caki-2癌细胞系增殖的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作MDA-MB-231癌细胞系增殖的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作HT29癌细胞系增殖的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作BxPC-3癌细胞系增殖的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作H1975癌细胞系增殖的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作BaF3WT增殖的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作BaF3T315I增殖的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作BaF3G250A增殖的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作BaF3G250E增殖的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作BaF3G250A+E279N增殖的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作BaF3E255K+M351T增殖的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作HUVEC原代细胞增殖和移行的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作HRMEC原代细胞增殖和移行的抑制剂。

在另一个实施方案中，根据本发明的化合物用作HeLa癌细胞系增殖和移行的抑制剂。

本发明的化合物以及理所当然地包含该化合物的药物组合物，可用于治疗与蛋白激酶反常相关的病理学：

-免疫病症、炎性疾病、血栓疾病、神经退行性疾病、骨病、黄斑变性、纤维化、囊肿生成、过度增生性疾病的情况，

-所有的癌症的情况，更特别地为液体肿瘤如血液学癌症，如白血病、慢性或急性骨髓增生病症；或实体瘤，如鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胃肠癌、胰腺癌、胶细胞肿瘤如胶质母细胞瘤和神经纤维瘤、***、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌、黑色素瘤、结直肠癌、子宫内膜癌、唾腺癌、肾癌、***癌、外阴癌、甲状腺癌、肉瘤和/或星状细胞瘤，

-慢性或急性骨髓增生病症的情况，诸如某些白血病，

-肝、肺、***、肾、***、胰脏和结直肠胃肠癌的情况。

有利地，本发明的化合物以及理所当然地包含这些化合物的药物组合物，可用于治疗与疾病情况中的蛋白激酶反常相关的病理学，其中所述疾病选自肝癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、***癌、白血病、肾癌、子宫内膜癌、结直肠癌、化疗抗性癌以及黄斑变性。

根据另一方面，本发明涉及一种包含根据本发明的化合物作为活性成分的药物产品。因此，根据本发明的化合物可用作治疗与蛋白激酶反常相关的病理学的药物产品：

-所有的癌症的情况，更特别地为液体肿瘤如血液学癌症，如白血病、慢性或急性骨髓增生病症；或实体瘤，如鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胃肠癌、胰腺癌、胶质细胞肿瘤如胶质母细胞瘤和神经纤维瘤、***、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌、黑色素瘤、结直肠癌、子宫内膜癌、唾腺癌、肾癌、***癌、外阴癌、甲状腺癌、肉瘤和/或星状细胞瘤，

-慢性或急性骨髓增生病症如某些白血病的情况，，

-肝、肺、***、肾、乳腺、胰腺和结直肠胃肠癌的情况。

根据本发明的组合物可用于治疗与蛋白激酶反常相关的病理学：

-免疫病症、炎性疾病、血栓疾病、神经退行性疾病、骨病、黄斑变性、纤维化、囊肿生成、过度增生性疾病的情况。

-所有的癌症的情况，更特别地为液体肿瘤如血液学癌症，如白血病、慢性或急性骨髓增生病症；或实体瘤，如鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胃肠癌、胰腺癌、胶质细胞肿瘤如胶质母细胞瘤和神经纤维瘤、***、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌、黑色素瘤、结直肠癌、子宫内膜癌、唾腺癌、肾癌、***癌、外阴癌、甲状腺癌、肉瘤和/或星状细胞瘤的情况。

-慢性或急性骨髓增生病症如某些白血病的情况，

-肝、肺、***、肾、乳腺、胰腺和结直肠胃肠癌的情况。

并且，有利地，根据本发明的化合物可用于抑制人类或动物疾病中涉及的细胞增殖和/或血管生成。

相同地，根据本发明的组合物可用于抑制人类或动物疾病中涉及的细胞增殖和/或血管生成。

本发明的另一方面涉及一种基本上安全和有效的使用根据本发明的化合物，以提供信息的体外方法(体外诊断装置或成像工具)。举例而言，所述方法使能够预测需要其的患者如呈现癌症的患者是否能够对至少一个根据本发明的化合物产生应答，所述方法包含确定所述患者的样本中至少一种蛋白激酶的蛋白的表达水平、基因修饰(扩增、突变)、活化状态或突变形式的外观，其中所述蛋白激酶选自下列激酶列表：BRAF、EGFR、FGFR2、KDR、PDGFRA、SRC、ABL、FGFR1、VEGFR1、PDGFRB(PDGFRβ)、ABL2、BLK、BMX、BTK、CSK、EPHA1、EPHA2、EPHA4、EPHB2、EPHB4、HER2、ERBB4、FES、FGR、FLT3、FMS、FRK、FYN、HCK、LCK、LYN、MAPK14、ERK2、PKCθ、RET、VEGFR3和YES。

蛋白激酶的表达水平、基因修饰(扩增、突变)、活化状态或突变形式的外观，典型地是利用一般已知的方法确定(见例如经FDA批准的医学设备的体外成像工具：http://www.fda.gov/MedicalDevices/ProductsandMedicalProcedures/In VitroDiagnostics/ucm301431.htm)，如实时PCR、免疫组织化学、ELISA、原位杂交荧光(FISH)、显色原位杂交(CISH)。

一种体外预测被施用于需要其的患者如呈现癌症的患者的至少一种根据本发明的化合物的方法，其特征在于，其包含下列步骤：

a)使所述化合物与人类组织或细胞样本接触，

b)通过例如IC50和/或通过所存在的蛋白激酶的比较活性，确定化合物对样本的活性，所述蛋白激酶选自下列激酶列表：BRAF、EGFR、EGFR T790M L858R、FGFR2、KDR、PDGFRA、SRC、ABL、ABL T315I、FGFR1、VEGFR1、PDGFRB、ABL E255K、ABL G250E、ABL Y253F、ABL2、BLK、BMX、BRAF V600E、BTK、CSK、EPHA1、EPHA2、EPHA4、EPHB2、EPHB4、HER2、ERBB4、FES、FGR、FLT3、FMS、FRK、FYN、HCK、LCK、LYN、MAPK14、ERK2、PKCθ、RET、VEGFR3和YES；

c)任选用健康的细胞，如所述患者的血液细胞或干细胞或肝细胞，进行与步骤a)相同的试验，以确定根据本发明的化合物对健康细胞的毒性(即，不会出现任何的病理学态样/特性)；

d)选择呈现最佳活性和/或实际上最低毒性的根据本发明的化合物，将其施用至需要其的患者。

用于确定蛋白激酶活性的方法是典型地已知的(如Rosen等人,J Biol Chem.,15；261(29),13754-9.1986；Ma等人,Expert Opin Drug Discov.,3(6),607–621,2008中所报道)。

附图说明

图1是表示一些化合物对A549细胞的抗增殖活性的图。

图2是表示一些化合物对HepG2细胞的抗增殖活性的图。

图3是表示一些化合物对HuCCT1细胞的抗增殖活性的图。

图4是表示一些化合物对HuH6选殖株5细胞的抗增殖活性的图。

图5是表示一些化合物对HuH7细胞的抗增殖活性的图。

图6是表示一些化合物对PC-3细胞的抗增殖活性的图。

图7是表示一些化合物对Caki-2细胞的抗增殖活性的图。

图8是表示一些化合物对MDA-MB-231细胞的抗增殖活性的图。

图9是表示一些化合物对HT29细胞的抗增殖活性的图。

图10是表示一些化合物对BxPC-3细胞的抗增殖活性的图。

图11是表示一些化合物对H1975细胞的抗增殖活性的图。

图12是表示一些化合物对BaF3BCR-ABL WT细胞的抗增殖活性的图。

图13是表示一些化合物对BaF3BCR-ABL T315I细胞的抗增殖活性的图。

图14是表示一些化合物对BaF3BCR-ABL G250A细胞的抗增殖活性的图。

图15是表示一些化合物对BaF3BCR-ABL G250E细胞的抗增殖活性的图。

图16是表示一些化合物对BaF3BCR-ABL G250A+E279N细胞的抗增殖活性的图。

图17是表示一些化合物对BaF3BCR-ABL E255K+M351T细胞的抗增殖活性的图。

图18是表示一些化合物对HUVEC细胞的抗增殖活性的图。

图19是表示肿瘤(BaF3BCR-ABL^T315l)体积(mm³)、小鼠体重随着时间(接种后的天数)减少以及实验结束时的肿瘤重量(mg)的图。

图20是表示肿瘤(HepG2)体积(mm³)、小鼠体重随着时间(接种后的天数)减少以及实验结束时的肿瘤重量(mg)的图。

图21是表示肿瘤(H1975)体积(mm³)、小鼠体重随着时间(接种后的天数)减少以及实验结束时的肿瘤重量(mg)的图。

图22是表示肿瘤(BxPC-3)体积(mm³)、小鼠体重随着时间(接种后的天数)减少以及实验结束时的肿瘤重量(mg)的图。

图23是表示化合物OR0512与B-Raf的激酶功能区的活性位点氨基酸(根据其结晶结构(PDB id＝1UWH))之间的相互作用(疏水接触、氢键和芳环铆合(aromatic staking))的概略图。

图24是表示化合物OR0512与VEGFR2的激酶功能区的活性位点氨基酸(根据其结晶结构(PDB id＝4ASD))之间的相互作用(疏水接触、氢键和芳香铆合)的概略图。

图25是表示化合物OR0512与EGFR的激酶功能区的活性位点氨基酸(根据该激酶的同源模型)之间的相互作用(疏水接触、氢键和芳香铆合)的概略图。

图26是表示化合物OR0512与FGFR2的激酶功能区的活性位点氨基酸(根据该激酶的同源模型)之间的相互作用(疏水接触、氢键和芳香铆合)的概略图。

具体实施方式

阅读以下实施例后将能够更好地了解本发明。

本发明的化合物从5-氨基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯(可从OriBasePharma公司商购获得)在多阶段合成法中获得，如果需要，可采用平行合成装置(“Synthesis 1”，Heidolph)。各种合成操作方案以及所获得的7-氮杂吲哚类化合物的理化特性详述于下。

以下列条件进行合成和分析：

-¹H和¹³C核磁共振：

仪器：Bruker Avance 400(400MHz)；Bruker Avance 300(300MHz)；BrukerDPX200(200MHz)

使用条件：室温(RT)、以百万分率(ppm)表示的化学位移、以赫兹表示耦合常数(J)、内部参考三甲基硅烷(TMS)、以小写字母(单峰s、宽单峰bs、双峰d、三重峰t、四重峰q、多重峰m)表示的信号的多重性、二甲基亚砜d₆、甲醇d₄、氯仿d₁为氘化溶剂。

-高效液相色谱法(HPLC)：

仪器：Agilent Technology 1260Infinity

使用条件：Zorbax SB-C18，2.1x 50mm，1.8μm；温度：30℃、水/乙腈/甲酸洗脱梯度(90％/10％/0.1％至0％/100％/0.1％)

-质谱分析法(MS)：

仪器：Quadripole Agilent Technologies 6120

使用条件：电喷雾(ESI)，正和/或负模式。

-称重：

仪器：Denver Instrument TP214(精密度0.1mg)

使用条件：重量称至最接近的毫克值。

-平行合成法：

仪器：Heidolph Synthesis 1(16个反应器)

使用条件：16个平行反应，室温，多效蒸发。

-在压力下的反应：

仪器：Parr 300mL高压反应器。

使用条件：在20或30bar氢气下进行氢化反应。

合成

实施例A：从OriBase Pharma公司购得的试剂开始，以3步合成5-{2-甲基-5-[3-脲基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯，

方案14表示5-{2-甲基-5-[3-脲基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的一般合成方法。

方案14–实施例A的一般合成方案

步骤1：用于制备5-(2-甲基-5-硝基-苄氨基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的一般操作方案。

将5-氨基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯(12.16g，63.7mol)和2-甲基-5-硝基苯甲醛(10.5g，63.7mol)在MeOH中的10％AcOH中搅拌2小时。然后，缓慢加入NaBH₃CN(7.9g，127.3mol)，并在氩气下搅拌该混合物48小时。蒸发溶剂并加入饱和NaHCO₃溶液直到中性。过滤形成的固体，用石油醚/EtOAc 5/5洗涤。获得棕色固体的5-(5-氨基-2-甲基苯甲硝基)-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯(17.9g，53.9mmol)。产率＝82％。ESI-MS：m/z 341([M+H]⁺)。HPLC纯度：80％

步骤2：用于制备5-(5-氨基-2-甲基-苄氨基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的一般操作方案。

将5-(2-甲基-5-硝基-苄氨基)-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯(17.8g，53.9mmol)、甲醇(300mL)、7.2mL的HCl 12N和10％的钯碳(1.7g，10％w/w)置于填充30bar氢气的高压反应器中，搅拌48小时。在硅藻土上过滤混合物并用甲醇洗涤。蒸发溶剂，然后加入NaHCO_3(水溶液)。过滤所获得的固体，用水洗涤，获得棕色固体(14.4g，46.4mmol)。产率＝96％。¹H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.03(s,1H),8.08(d,J＝2.6Hz,1H),6.95(d,J＝2.7Hz,1H),6.90(s,1H),6.83(d,J＝8.0Hz,1H),6.57(d,J＝2.3Hz,1H),6.36(dd,J＝2.3Hz,1H),5.94(s,1H),4.77(s,2H),4.07(d,J＝5.3Hz,2H),3.83(s,4H)。ESI-MS：m/z 311([M+H]⁺)。HPLC纯度：95％。

步骤3：制备5-{2-甲基-5-[3-脲基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的一般操作方案。

向5-(5-氨基-2-甲基-苄氨基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的溶液加入异氰酸酯或异硫氰酸酯衍生物(1当量)。允许该混合物在室温下搅拌过夜。除去溶剂，并用硅胶色谱法纯化粗产物。

表1显示根据以上方案14中所述的合成法合成的各种化合物。

表1–通过实施例A获得的化合物

实施例B：1阶段合成5-[2-甲基-5-(磺酰胺基)-苄氨基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶- 2-羧酸甲酯

方案15表示从已经在实施例A中描述的氨基衍生物开始，合成5-[2-甲基-5-(磺酰胺基)-苄氨基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的一般方法。

方案15–实施例B的一般合成方案

步骤1：合成5-[2-甲基-5-(磺酰胺基)-苄氨基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯

将20μL三甲胺(1.1当量)加至5-(5-氨基-2-甲基-苄氨基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯(40mg，0.13mmol)的2mL无水DMF***液中。然后滴加磺酰氯衍生物(1.2当量)的2mL无水DMF***液。于0℃搅拌反应混合物30分钟，且在室温搅拌过夜。蒸发DMF，然后加入饱和的NaHCO₃溶液。过滤所获得的固体，用水洗涤，获得黄色固体。

表2显示根据以上所述的合成方案15合成的化合物。

表2–通过实施例B获得的化合物

实施例C：1阶段合成5-{2-甲基-5-[3-酰胺基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶- 2-羧酸甲酯

方案16表示1个步骤合成5-{2-甲基-5-[3-酰胺基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的一般方法。该步骤包含5-(5-氨基-2-甲基-苄氨基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯与酰氯或羧酸反应。

方案16-实施例C的一般合成方案

选项1：通过酰氯的反应，合成5-{2-甲基-5-[3-酰胺基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2, 3-b]吡啶-2-羧酸甲酯

将55μL的三甲胺(3当量)和1.5当量的酰氯加至5-(5-氨基-2-甲基-苄氨基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯(40mg，0.13mmol)的无水DMF溶液中。于室温搅拌反应混合物过夜。蒸发DMF；将固体吸收于乙酸乙酯中。用饱和NaHCO₃溶液洗涤有机层，经Na₂SO₄干燥，且减压下蒸发，获得黄色固体状物。

表3显示根据上述合成方案16，用选项1合成的化合物(即，酰氯的反应)。

表3–通过实施例C利用酰氯获得的化合物

选项2：通过羧酸的反应合成5-{2-甲基-5-[3-酰胺基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3- b]吡啶-2-羧酸甲酯

该合成反应中涉及的所有羧酸均不是市售可得的。首先描述这些所需的羧酸的合成方法：

4-氨甲基-3-取代的苯甲酸的合成

方案17表示合成4-氨甲基-3-取代的苯甲酸的一般方法。

方案17

酯化反应的一般程序：

搅拌含有H₂SO₄(0.260mL，4.8mmol)的甲醇(50mL)中的4-甲基-3-取代的苯甲酸(24mmol)，并加热至回流持续一夜。蒸发甲醇，在pH＝7用EtOAc萃取产物。

4-甲基-3-三氟甲基-苯甲酸甲酯

产率＝95％。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ8.25(s,1H),8.04(dd,J＝1.2,8.0,1H),7.33(d,J＝8.0,1H),3.91(s,3H),2.51(d,J＝1.5,3H)。

4-甲基-3-氟基-苯甲酸甲酯

产率＝83％(4.0g)，HPLC:98％，ESI-MS:[M+H]⁺＝169Da。

溴化反应的一般程序：

搅拌含有NBS(3.9g，22mmol)的CCl₄(40mL)中的4-甲基-3-取代的苯甲酸甲酯(18.3mmol)和含有25％水的过氧化苯甲酰(0.55g，1.7mmole)，然后加热至回流持续6小时。蒸发溶剂，加入K₂CO₃水溶液，用EtOAc萃取产物以获得淡黄色固体。

4-(溴甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯

产率＝140％(粗产物)。

4-(溴甲基)-3-氟苯甲酸甲酯

产率＝定量(5.9g)，ESI-MS:[M+H]⁺＝247Da。

在溴甲基上亲核取代的一般程序：

搅拌含有K₂CO₃(1.5当量)的乙腈(5mL)中的4-(溴甲基)-3-取代的苯甲酸甲酯(200mg)和胺衍生物(1.05当量)，且在氩气下加热至回流过夜。蒸发乙腈，并加入水(30mL)，用AcOEt萃取产物。用水洗涤有机层，干燥、过滤并浓缩。通过硅胶色谱法进行进一步的纯化，获得所预期的产物。

4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯甲酸甲酯：

产率＝54％(1.75g)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ8.28(s,1H),8.16(d,J＝8.1,1H),7.91(d,J＝8.1,1H),3.93(s,3H),3.70(s,2H),2.53(s,8H),2.32(s,3H)。ESI-MS：[M+H]⁺＝317Da。

3-氟基-4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-苯甲酸甲酯：

产率＝49％(1.48g)。HPLC：88％，ESI-MS：[M+H]⁺＝267Da。

4-(4-甲氧羰基-2-三氟甲基-苄基)-哌嗪-1-羧酸叔丁酯

产率：56％(1.89g)。HPLC：97％。ESI-MS：[M+H]⁺＝403Da。

4-吗啉-4-基甲基-3-三氟甲基-苯甲酸甲酯

产率：23％(343mg)。HPLC：95％。ESI-MS：[M+H]⁺＝305Da。

4-(4-羟基-哌啶-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯甲酸甲酯

产率：39％(84mg)。ESI-MS：[M+H]⁺＝318.1Da。

4-{[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙氨基]-甲基}-3-三氟甲基-苯甲酸甲酯

产率：20％(50mg)。ESI-MS：[M+H]⁺＝360.1Da。

4-(4-甲基-咪唑-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯甲酸甲酯

产率：44％(90mg)。HPLC：87％ESI-MS：[M+H]⁺＝299Da。

4-(3-二甲氨基-吡咯烷-1-基甲基)-3-氟-苯甲酸甲酯

产率：60％(2g)。HPLC：85％ESI-MS：[M+H]⁺＝281Da。

皂化反应的一般程序：

将酯衍生物溶解于THF(0.8mol/L)中，并加入LiOH(3当量)的水溶液。将混合物加热至回流持续4小时。蒸发THF，并于pH＝12用EtOAc萃取杂质。用NaCl_(固体)饱和水层，并用HCl6N酸化直到pH＝3。用丁-1-醇萃取产物。蒸发丁-1-醇，并用EtOAc洗涤所获得的固体以除去盐和杂质。获得白色固体。

4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯甲酸：

产率＝100％(1.21g)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.44(m,1H),8.19(s,1H),8.18(m,1H),7.93(m,1H),3.79(s,2H),2.75(s,3H)。ESI-MS：[M+H]⁺＝303Da。

3-氟基-4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-苯甲酸：

产率＝65％(0.91g)。HPLC：>99％，ESI-MS：[M+H]⁺＝253Da。

4-(4-羧基-2-三氟甲基-苄基)-哌嗪-1-羧酸

产率：57％(265mg)。HPLC：97％ESI-MS：[M+H]⁺＝389Da。

4-吗啉-4-基甲基-3-三氟甲基-苯甲酸

产率：35％(114mg)。ESI-MS：[M+H]⁺＝290Da。

4-(4-羟基-哌啶-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯甲酸

产率：94％(128mg)。ESI-MS：[M+H]⁺＝304.1Da。

4-{[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙氨基]-甲基}-3-三氟甲基-苯甲酸

产率：95％(176mg)。ESI-MS：[M+H]⁺＝346.1Da。

4-(4-甲基-咪唑-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯甲酸

产率：99％(224mg)。ESI-MS：[M+H]⁺＝285Da。

4-(3-二甲氨基-吡咯烷-1-基甲基)-3-氟基-苯甲酸

产率：36％(687mg)。ESI-MS：[M+H]⁺＝267Da。

3-氨甲基-5-三氟甲基-苯甲酸的合成

方案18表示合成[3-氨基]-5-三氟甲基-苯甲酸的一般方法。

方案18

亲核取代反应的一般程序：

于145℃，搅拌3-氟-5-三氟甲基-苯甲腈(1当量)和对应的胺(3当量)在DMA中的溶液3小时。加入NaCl_(水溶液)。将产物吸收于乙酸乙酯中。用水洗涤有机层二次，然后经Na₂SO₄干燥，并减压下蒸发，得到黄色固体。

3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-苯甲腈

产率：定量。HPLC:94％ESI-MS：[M+H]⁺＝270Da。

3-(1H-吡唑-3-基氨基)-5-三氟甲基-苯甲腈

产率：83％。HPLC:92％ESI-MS：[M+H]⁺＝253Da。

腈的水解反应的一般程序：

向腈衍生物的二氧六环(0.13M)溶液中加入H₂O中的NaOH(10当量，1g/L)。回流下加热混合物过夜。蒸发二氧六环后，用AcOEt洗涤水层，然后用HCl 2N酸化，用AcOEt萃取。经Na₂SO₄干燥有机层，过滤并浓缩。

3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酸

产率：60％。HPLC：100％。ESI-MS：[M+H]⁺＝289Da。

3-(1H-吡唑-3-基氨基)-5-三氟甲基-苯甲酸

黄色固体。产率：76％(85mg)。HPLC:100％。ESI-MS：[M+H]⁺＝272Da。

3-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯甲酸的合成

方案19表示从3-甲基-5-三氟甲基-苯甲腈开始，3步合成3-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯甲酸的一般方法。

方案19

3-溴甲基-5-三氟甲基-苯甲腈

搅拌含有AIBN(0.017当量)的MeCN(0.42mol/L，1当量)中的3-甲基-5-三氟甲基-苯甲腈，并在氩气下于85℃加热。每15分钟加入0.25当量的NBS和0.005当量的AIBN，加6次(每次的添加在50℃进行，然后再于85℃加热混合物)。添加后，搅拌混合物并保持在85℃持续2小时。减压下蒸发MeCN，并用Et₂O洗涤固体，而溴化物衍生物在滤液中。减压下蒸发Et₂O，以得到粉红色固体。直接将粗产物用于下一步。产率：没有测定。HPLC纯度：没有测定。ESI-MS：[M+H]⁺＝264Da。

3-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯甲腈

搅拌含有K₂CO₃(2,5当量)的MeCN(0.17mol/L，1当量)中的3-溴甲基-5-三氟甲基-苯甲腈和甲基哌嗪(1,5当量)，并在氩气下回流下加热过夜。加入水。将产物吸收于乙酸乙酯中。用Na₂SO₄干燥有机层，并在减压下蒸发。将粗产物直接用于下一步。粗产率：21％。

3-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯甲酸

向3-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯甲腈的二氧六环(0.13M)溶液中加入H₂O中的NaOH(10当量，1g/L)。回流下加热混合物过夜。减压下蒸发二氧六环，并过滤在H₂O中的沉淀物，用H₂O洗涤。回收滤液，然后除去水，以得到白色固体。用MeOH洗涤，并回收滤液，减压下浓缩。在40g的硅胶上，用含有1％NEt₃的CH₂Cl₂至含有1％NEt₃的MeOH纯化粗产物。减压下浓缩回收的部分，用石油醚/AcOEt(1/1)的混合物洗涤获得的固体。产率：83％。HPLC纯度：100％。ESI-MS：[M+H]⁺＝303Da。

3-二甲氨基-5-三氟甲基-苯甲酸的合成

合成3-二甲氨基-5-甲基-苯甲酸的一般方法以2步骤示于方案20中：

方案20

3-二甲氨基-5-三氟甲基-苯甲酸甲酯

将K₂CO₃(400mg，3当量)和碘甲烷(0.6mL，7当量)加至3-氨基-5-三氟甲基-苯甲酸(200mg，0.96mmol)的乙腈(8mL)溶液中。回流下加热反应混合物2天。溶剂蒸发后得到230mg的粗产物3-二甲氨基-5-三氟甲基-苯甲酸甲酯，其未经进一步纯化而使用。

LC/MS：97％，[M+H]⁺＝248.1Da。

3-二甲氨基-5-三氟甲基-苯甲酸

向于3-二甲氨基-5-三氟甲基-苯甲酸甲酯(240mg)的THF(2mL)溶液中加入LiOH(3当量)的水(2ml)溶液。回流下搅拌混合物4小时。然后蒸发THF；加入更多的水，并用HCl 2N酸化。用AcOEt萃取产物，经Na₂SO₄干燥并浓缩，以得到白色固体。

产率：82％(183mg)，LC/MS：90％，[M+H]⁺＝234Da。

用于制备5-{2-甲基-5-[3-酰胺基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的一般操作方案

将酸衍生物溶解于含有DIEA(5当量)和HATU(2当量)的无水DMF(0.06mol/L)中。15分钟后，缓慢加入5-{2-甲基-5-[3-氨基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯，于室温搅拌混合物12小时。蒸发DMF，并加入饱和NaHCO₃溶液。用EtOAc萃取产物、干燥、过滤并蒸发，以获得暗色混合物。通过用MeOH或EtOAc洗涤或通过二氧化硅柱纯化后，获得呈淡黄色或橙色粉末状的预期产物。

表4显示根据以上所述合成方案16，使用选项2(即，羧酸的反应)合成的化合物。

表4–通过实施例C使用羧酸获得的化合物

实施例D：从由OriBase Pharma公司购得的试剂开始，3阶段合成5-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯甲酰胺基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯

方案21表示以3步合成5-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯甲酰胺基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的一般方法。

方案21–实施例D的一般合成方案

步骤1：制备5-(3-硝基-苄氨基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的一般操作方案

在MeOH和AcOH(10％)的混合物中搅拌5-氨基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯(100mg)和硝基苯甲醛衍生物(1当量)2小时。然后缓慢加入NaBH₃CN(2当量)，并在氩气下，于室温搅拌混合物过夜。蒸发溶剂，并加入NaHCO₃的饱和溶液直至中性。用EtOAc萃取水层。经Na₂SO₄干燥有机层，过滤并浓缩，得到预期的产物。

5-(2-氯基-5-硝基-苄氨基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯

黄色粉末。产率：85％(158mg)。HPLC：80％。MS：361(M+1)。

5-(2-氟基-5-硝基-苄氨基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯

黄色固体。产率：74％(800mg)。HPLC：>99％。MS：345(M+1)。

5-(3-硝基-4-甲基-苄氨基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯

黄色固体。产率：86％(152mg)。HPLC：85％。MS：341(M+1)。

5-(3-硝基-苄氨基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯

棕色粉末。产率：87％(443mg)。HPLC：94％。MS：327(M+1)。

步骤2：制备5-(3-氨基-苄氨基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的一般操作方案

将5-(硝基-苄氨基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯衍生物(200mg)、甲醇(150mL)和10％钯碳(10％w/w)置于填充有30bar氢气的高压反应器中，搅拌48小时。在硅藻土上过滤混合物，用甲醇洗涤。蒸发溶剂，以得到预期的产物。

5-(5-氨基-3-氯-苄氨基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯

黄色粉末。产率：99％(183mg)。HPLC：77％。MS：331(M+1)。

5-(5-氨基-3-氟-苄氨基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯

棕色粉末。产率：43％(311mg)。HPLC：93％。MS：315(M+1)。

5-(3-氨基-4-甲基-苄氨基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯

黄色粉末。产率：90％(240mg)。HPLC：85％。MS：311(M+1)。

5-(3-氨基-苄氨基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯

灰白色粉末。产率：87％(351mg)。HPLC:99％。MS：297(M+1)。

步骤3：制备5-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯甲酰胺基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的一般操作方案

将4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯甲酸溶解于含有DIEA(5当量)和HATU(2当量)的无水DMF(0.06mol/L)中。15分钟后，缓慢加入胺衍生物，并于室温搅拌混合物12小时。蒸发DMF，并加入NaHCO_3(水溶液)。用EtOAc萃取产物，干燥，过滤并蒸发，以获得深色混合物。通过用MeOH或EtOAc洗涤或者通过硅胶柱纯化后，获得呈淡黄色或橙色橙色粉末的预期产物。

表5显示根据以上所述的合成方案21合成的化合物。

表5–通过实施例D获得的化合物

实施例E：从由OriBase Pharma公司购得的试剂开始，3阶段合成5-{2-甲基-5-[3-酰胺基]-苯甲酰胺基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯

方案22表示合成5-{2-甲基-5-[3-酰胺基]-苯甲酰胺基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的一般方法。

方案22–实施例E的一般合成方案

步骤1：制备5-(2-甲基-5-硝基-苯甲酰胺基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的一般操作方案。

将5-氨基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯(5.74g，30mmol)、2-甲基-5-硝苄基酸(5.44g，30mmol)、HATU(11.42g，30mmol)、DIEA(26mL，150mmol)溶解于无水DMF(300L)中，于室温搅拌48小时。蒸发DMF，加入NaHCO_3(水溶液)，产生沉淀并过滤，用水和石油醚/Et₂O洗涤。获得预期的产物(9.94g，28mmol)。产率＝93％。¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.53(s,2H),8.37(d,J＝2.5,1H),8.26(dd,J＝2.5,8.4,1H),7.63(d,J＝8.5,1H),7.16(s,1H),3.86(s,3H),3.17(s,1H),2.54(s,3H)。ESI-MS：m/z 355([M+H]⁺)。HPLC纯度：95％。

步骤2：制备5-(5-氨基-2-甲基-苯甲酰胺基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的一般操作方案。

将5-(2-甲基-5-硝基-苄氨基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯(9.8g，27.7mmol)、甲醇(300mL)以及10％钯碳(0.95g，10％w/w)置于填充30bar氢气的高压反应器中，并搅拌24小时。在硅藻土上过滤混合物，并用甲醇洗涤。蒸发溶剂，以获得棕色固体(7.35g，22.7mmol)。产率＝81％。¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.29(s,1H),8.55(s,2H),7.15(s,1H),6.94(d,J＝8.2,1H),6.71(d,J＝2.3,1H),6.60(m,1H),5.08(s,2H),3.86(s,3H),2.21(s,3H)。ESI-MS：m/z 325([M+H]⁺)。HPLC纯度：95％。

步骤3：制备5-{2-甲基-5-[3-酰胺基]-苯甲酰胺基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2- 羧酸甲酯的一般操作方案

将酸衍生物溶解于含有DIEA(5当量)和HATU(2当量)的无水DMF(0.06mol/L)中。15分钟后，缓慢加入5-{2-甲基-5-[3-氨基]-苯甲酰胺基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯，并于室温搅拌混合物12小时。蒸发DMF，加入NaHCO_3(水溶液)。用EtOAc萃取产物，干燥，过滤并蒸发，以获得暗色混合物。通过用MeOH或EtOAc洗涤或者通过硅胶柱纯化后，获得呈淡黄色或橙色粉末状的预期产物。

表6显示根据以上所述合成方案20合成的化合物。

表6–通过实施例E获得的化合物

实施例F：合成5-{2-甲基-5-[5-硫代苯甲酰胺基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯

合成5-{2-甲基-5-[5-硫代苯甲酰胺基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的一般方法示于方案23中。

方案23–实施例F的一般合成方案

从酰胺衍生物合成硫酰胺的一般程序：

于130℃，加热5-{2-甲基-5-[5-苯甲酰胺基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯(100mg)和劳氏试剂(方案23中的“LR”)(1.8当量)在5mL氯苯中的混悬液2小时。蒸发溶剂，通过硅胶色谱法(水+1％TFA/乙腈+1％TFA)纯化残留物。蒸发溶剂后，将残留物溶于水中，用NaHCO₃碱化至pH 7-8，并用AcOEt萃取。然后经Na₂SO₄干燥有机层，并除去溶剂，以得到黄色固体。

表7–通过实施例F获得的化合物

实施例G：合成5-{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯甲酰胺基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸丙酯

合成5-{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯甲酰胺基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸丙或乙酯的一般方法示于方案24的2个步骤中。

方案24–实施例G的一般合成方案

步骤1：合成5-{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯甲酰胺基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸(OR0623)

于65℃，加热5-{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯甲酰胺基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯(580mg)和氢氧化钾(5当量)在水(3mL)和甲醇(3mL)中的混悬液18小时。蒸发甲醇，并利用HCl 6N将pH中和至pH 7。蒸发溶剂后，用硅胶色谱法(水/乙腈)纯化粗产物残留物，得到棕色固体。

产率：54％(305mg)

¹H NMR(300MHz,DMSO)δ11.24(s,1H),10.39(s,1H),8.22-8.15(m,2H),7.94(d,J＝2.5,1H),7.87(d,J＝8.0,1H),7.71-7.64(m,2H),7.18(d,J＝8.8,1H),6.95(d,J＝2.3,1H),6.54(s,1H),5.94–5.73(m,1H),4.21(s,2H),3.65(s,2H),2.46-2.24(m,11H),2.16(s,3H)。

HPLC：100％；MS：581(M+1)

步骤2(选项1)：合成5-{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯甲酰胺基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸丙酯(OR0697)

向5-{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯甲酰胺基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸(80mg)在3.5mL丙醇中的悬浮液中，加入亚硫酰氯(3当量)。于100℃加热混合物过夜。蒸发溶剂，通过硅胶色谱法(乙腈+1％TFA)纯化粗产物残留物。蒸发溶剂后，将残留物溶解于水中，用NaHCO₃碱化直至pH 9，并用AcOEt萃取。然后经Na₂SO₄干燥有机层，除去溶剂，得到棕色固体。

产率：44％(32mg)

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm)11.98(s,1H),10.33(s,1H),8.20(s,1H),8.20(s,1H),8.15(d,J＝8.1,1H),8.10(d,J＝2.5,1H),7.88(d,J＝8.1,1H),7..71–7.63(m,2H),7.01(d,J＝2.5,1H),6.90(d,J＝2.1,1H),6.03(t,J＝5.4,1H),4.26–4.18(m,4H),3.66(s,2H),2.48–2.38(m,8H),2.34(s,3H),2.18(s,3H),0.97(t,3H)

HPLC：96％；MS:623.3(M+1)

步骤2(选项2)：合成5-{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯甲酰胺基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸乙酯(OR1082)

向5-{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯甲酰胺基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸(90mg)在4mL乙醇中的混悬液中，加入硫酸95％(0.5当量)。在回流下加热混合物6小时。蒸发溶剂后，通过硅胶色谱法(乙腈+1％TFA)纯化粗产物残留物。蒸发溶剂后，将残留物溶解于水中，用NaHCO₃碱化至pH 9，并用AcOEt萃取。然后通过Na₂SO₄干燥有机层，除去溶剂，得到黄色固体。

产率：37％(35mg)

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm)1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.99(s,1H),10.34(s,1H),8.20-8.14(m,2H),8.09(d,J＝2.6,1H),7.87(d,J＝8.1,1H),7.66(d,J＝9.5,2H),7.19(d,J＝8.1,1H),6.99(d,J＝2.5,1H),6.88(d,J＝2.0,1H),6.05(t,J＝5.4,1H),4.29(q,J＝7.1,2H),4.23(d,J＝5.4,2H),3.65(s,2H),2.46–2.33(m,3H),2.30(s,3H),2.15(s,3H),1.30(t,J＝7.1,3H).

HPLC：96％；MS：609(M+1)

实施例H：合成5-[3-(苯甲酰胺基-甲基)-苄氨基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯和5-[3-(硫代苯甲酰胺基-甲基)-苄氨基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯

用于合成5-[3-(苯甲酰胺基-甲基)-苄氨基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯和5-[3-(硫代苯甲酰胺基-甲基)-苄氨基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的一般方法示于方案25的3或4个步骤中。

方案25–实施例H的一般合成方案

步骤1：制备3-(苯甲酰胺基-甲基)-苯甲酸甲酯的一般操作方案

将3-氨甲基-苯甲酸甲酯盐酸盐(1当量)、HOBt(1.2当量)、DIEA(1.2当量)和EDCI.HCl(1.2当量)溶解于干燥DMF(0.17M)中，并于室温氩气下搅拌30分钟。加入胺衍生物(1当量)，于室温搅拌混合物过夜。蒸发DMF，并加入饱和NaHCO₃溶液。用EtOAc萃取产物，经Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发。在硅胶色谱法上纯化粗产物，蒸发溶剂后得到预期的产物。

3-[(3-三氟甲基-苯甲酰胺基)-甲基]-苯甲酸甲酯

白色粉末。产率：45％(528mg)。HPLC：93％。MS：338(M+1)。

3-{[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯甲酰胺基]-甲基}-苯甲酸甲酯

黑色粉末。产率：定量(1.55g)。HPLC:91％。MS：450(M+1)。

步骤2：合成3-[(3-三氟甲基-硫代苯甲酰胺基)-甲基]-苯甲酸甲酯

于110℃，加热3-[(3-三氟甲基-苯甲酰胺基)-甲基]-苯甲酸甲酯(528mg)和劳氏试剂(方案23中的“LR”)(1.8当量)在26mL甲苯中的混悬液3小时。蒸发溶剂，向粗产物中加入饱和NaHCO₃溶液。用EtOAc萃取产物，经Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发。在硅胶色谱法上纯化粗产物油状物，蒸发溶剂后，得到预期的产物。

黄色油状物。产率：94％(518mg)。HPLC：>99％。MS：354(M+1)。

步骤3：皂化甲酯的一般操作方案

将甲酯(1当量)悬浮于溶剂(THF/水或MeOH/水_1/1)的混合物中。加入碱性基(LiOH或KOH，3当量)，并在回流下加热混合物直至反应完全(TLC控制)。蒸发有机溶剂，中和混合物，并用有机溶剂萃取产物。

3-[(3-三氟甲基-硫代苯甲酰胺基)-甲基]-苯甲酸

黄色粉末。产率：88％(438mg)。HPLC：98％。MS：340(M+1)。

3-{[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯甲酰胺基]-甲基}-苯甲酸

产率：54％(792mg)。HPLC：93％。MS：436(M+1)。

步骤4：似肽偶联反应的一般操作方案

将酸衍生物和HATU(2当量)溶解于无水DMF(0.1-0.2mol/L)中。30分钟后，加入5-氨基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯(1当量)和DIEA(3-4当量)，于室温搅拌混合物过夜。蒸发DMF，并加入饱和NaHCO₃溶液。用EtOAc萃取产物，经Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发。在反相(H₂O 1％TFA/MeCN 1％TFA 100/0，0/100)上纯化粗产物。蒸发MeCN。将产物悬浮于H₂O中，并用饱和NaHCO₃溶液碱化直至pH＝8-9。用AcOEt萃取水层三次。蒸发有机层，得到最终化合物。

表8-通过实施例H获得的产物

实施例I：从3-氰基-苯甲酸开始，3阶段合成5-{3-(苯氨甲酰基)-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯。

方案26表示合成5-{3-(苯氨甲酰基)-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的一般方法

方案26–实施例I的一般合成方案

步骤1：制备3-氰基-苯甲酰胺化合物的一般操作方案

在氩气下，将3-氰基-苯甲酸(1.2当量)、胺衍生物(1当量)、HOBt(1.2当量)、DIEA(1.2当量)和EDCI.HCl(1.2当量)溶解于干燥DMF(0.15M)中。于室温搅拌该混合物过夜。蒸发DMF，并加入饱和NaHCO₃溶液。用EtOAc萃取产物，经Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发。在反相(H₂O1％TFA/MeCN 1％TFA 100/0，0/100)上纯化粗产物。蒸发MeCN。将产物悬浮于H₂O中，并用饱和NaHCO₃溶液碱化直至pH＝8-9。用AcOEt萃取水层三次。蒸发有机层，得到最终化合物。

3-氰基-N-(3-三氟甲基-苄基苄基)-苯甲酰胺

白色粉末。产率：76％(334mg)。HPLC：>99％。MS：305(M+1)。

3-氰基-N-吡啶-3-基-苯甲酰胺

棕色粉末。产率：47％(563mg)。HPLC：>99％。MS：224(M+1)。

3-氰基-N-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-苯甲酰胺

黄色油状物。产率：22％(52mg)。HPLC：92％。MS：403(M+1)。

步骤2：制备3-甲酰基-苯甲酰胺化合物的一般操作方案

在氩气下，将3-氰基-苯甲酰胺中间体(1当量)溶解于吡啶/水/乙酸(2/1/1；0.01M)的混合物中。加入水中的雷尼镍(～0.03vol)，并在大气压力、氢气氛下，于室温搅拌混合物过夜。然后，经硅藻土床过滤混合物，并用甲醇洗涤。蒸发溶剂。加入饱和NaHCO₃溶液。用EtOAc萃取产物，经Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发，得到最终化合物。

3-甲酰基-N-(3-三氟甲基-苄基)-苯甲酰胺

黄色油状物。产率：79％(40mg)。HPLC：89％。MS：308(M+1)。

3-甲酰基-N-吡啶-3-基-苯甲酰胺

黄色油状物。产率：66％(166mg)。HPLC：>99％。MS：227(M+1)。

3-甲酰基-N-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-苯甲酰胺

黄色油状物。产率：57％(30mg)。HPLC：75％。MS：406(M+1)。

步骤3：制备5-{3-(苯氨甲酰基)-苄氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯的一般操作方案

将5-氨基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯(1当量)和3-甲酰基-苯甲酰胺化合物(1.1当量)在MeOH/AcOH(10/1；0.06M)的混合物中搅拌2小时。然后，缓慢加入NaBH₃CN(1.2当量)，在氩气下，于室温搅拌混合物过夜。通过加入饱和NaHCO₃溶液直至中和淬灭反应。蒸发MeOH和乙酸。过滤粗产物并用水和Et₂O洗涤，然后在反相(H₂O 1％TFA/MeCN 1％TFA100/0，0/100)上纯化。蒸发MeCN。使产物悬浮于H₂O中，并用饱和NaHCO₃溶液碱化直至pH＝8-9。用AcOEt萃取水层三次。经Na₂SO₄干燥有机层，过滤并浓缩，得到预期的产物。

表9-通过实施例I获得的化合物

生物试验

材料和方法：

1)体外激酶分析(表B1至B13)

通过Invitrogen使用技术评估化合物对包括BRAF、EGFR(ErbB1)、EGFR(ErbB1)T790M L858R、FGFR2、KDR(VEGFR2)、PDGFRA(PDGFRα)、SRC以及其它的数种激酶的抑制活性。简言之，生化分析法采用荧光基础，酶偶联形式，并以磷酸化和非磷酸化的肽对蛋白水解性裂解的不同敏感度为基础。用二种荧光团标记肽底物—每一端一种—其建立起FRET对。使用放射性量测法定量反应进程，所述放射性量测法计算供体荧光团在400nm激发后，供体发射与受者发射的比率(发射比率)。

在孔中，在1％DMSO(最终)中筛选化合物。对于10个点的滴定，从起始浓度开始，进行3倍连续稀释。在适当的激酶缓冲液中，将所有的肽/激酶混合物稀释成2X工作浓度。在激酶缓冲液(50mM HEPES pH 7.5，0.01％BRIJ-35，10mM MgCl₂，1mM EGTA)中，将所有的ATP溶液稀释至4X工作浓度。预先使用分析法测定ATP Km表观(ATP Km apparent)。

在100nM浓度孵育各化合物(除了对于测试针对ABL和ABL T315I的活性，在10μM的浓度孵育化合物)，表B1至B12总结所获得的结果，其显示化合物的抑制能力。还使用相同的分析法考察OR0512的抑制活性，并且将在100nM的OR0512浓度活性被抑制超过50％的激酶列于表B13中。

2)体外细胞增殖分析(表B14至B33)

将癌细胞系(5x10³细胞/孔)或HUVEC(1x10⁴细胞/孔)或HRMEC(1x10⁴细胞/孔)分配于96孔板中，用逐步提高的浓度(10nM至3μM)一式二份孵育化合物72小时。使用MTT(3[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基溴化四唑)测量细胞增殖。利用Graph-Pad软件(GraphPadSoftware，La Jolla,CA,USA)的Prism 5.0，从S型剂量-反应曲线计算EC50值，该值被归一化为DMSO-处理的对照孔(0％)和1％SDS对照孔(100％)。

3)体内研究(表B34)

制备数种异体移植的小鼠模型：

1)通过在无胸腺的雄性裸鼠(HSD，6-7周龄)的右侧腹中，皮下植入Ba/F3T315I细胞(无菌PBS中1x10⁸细胞/mL)，引发伊马替尼耐药性白血病。当肿瘤体积达到大约50mm³时，随机分配小鼠为单独载体处理组或OR0512处理组(每组五只小鼠)。用载体(DMSO)或OR0512(40mg/kg，一天四次；经口，连续11天)处理小鼠。

2)在无胸腺的雄性裸鼠(HSD，6-7周龄)的右侧腹中，皮下植入BxPC-3细胞(无菌PBS中1x10⁷细胞/mL)，引发人类胰腺癌模型。当肿瘤体积达到大约100mm³时，随机分配小鼠为单独载体处理组或OR0512处理组(每组五只小鼠)。用载体(DMSO)或OR0512(20mg/kg一天四次；经口，连续32天)处理小鼠。

3)在无胸腺的雄性裸鼠(HSD，6-7周龄)的右侧腹中，皮下植入HepG2细胞(无菌PBS中1x10⁷细胞/mL)，引发人类肝细胞癌模型。当肿瘤体积达到大约100mm³时，随机分配小鼠为单独载体处理组或OR0512处理组(每组五只小鼠)。用载体(DMSO)或OR0512(20mg/kg一天四次；经口，连续15天)处理小鼠。

4)在无胸腺的雄性裸鼠(HSD，6-7周龄)的右侧腹中，皮下植入H1975细胞(无菌PBS中1x10⁷细胞/mL)，引发带有EGFR突变的人类NSCLC。当肿瘤体积达到大约100mm³时，随机分配小鼠为单独载体处理组或OR0512处理组(每组五只小鼠)。用载体(DMSO)或OR0512(20mg/kg一天四次；经口，连续22天)处理小鼠。

每周用游标卡尺以mm³为单位测定肿瘤体积三次，并使用以下方程式计算：肿瘤体积(mm³)＝长(mm)x宽(mm)x宽(mm)x1/2。一周测量体重三次，且每日观察小鼠以监视压力迹象，以检测可能的毒性。使用单因素ANOVA进行统计学比较。用Prism5.0b(GraphPadSoftware)，通过单因素ANOVA的Bonferroni事后检验分析数据。肿瘤生长抑制(TGI)被计算为，OR0512处理组的研究结束时的肿瘤生长与单独载体处理组的肿瘤生长相比减少的百分比。

生物学结果：

体外激酶分析法揭示数个激酶抑制分子结构。超过20个化合物能够抑制至少4种测试的激酶(由于在100nM浓度时抑制百分比超过50％，因此预期对这些激酶的每一个，IC50应小于100nM，但ABL以及ABL T315I除外，其IC50预期小于10μM)。应注意，这些化合物对代表不同和远缘激酶家族的激酶(丝氨酸/苏氨酸或酪氨酸激酶)展现出抑制活性，这些激酶参与简介部分中叙述的肿瘤进展的多重通路(血管生成、移动、转移、肿瘤生长)。这些化合物是广谱多重靶点激酶抑制剂。

在模仿血管生成过程的恶性癌细胞系或原代内皮细胞上评估化合物的抗增殖强度。测定对应于抑制细胞生长水平50％的化合物浓度的EC50。所获得的结果示于表B14至B233。

在这些实验中，我们认为EC50高于3μM的化合物对测试的细胞类型无活性。具有1μM和3μM之间EC50的化合物被视为有活性，如索拉非尼(Sorafenib)(其目前市售用于治疗肝细胞癌)在本文的4种肝癌细胞系(HepG2、HuH7、HuCCT1和HuH6选殖株5)上呈现1μM和3μM之间的EC50。

数个化合物在各试验细胞类型中是细胞生长的高强度抑制剂。除了OR0616外的所有试验化合物对HUVEC展现抗血管生成特性。当用化合物处理时，肝母细胞癌和胆管癌的癌细胞系(HuCCT1和HuH6选殖株5)生长的降低小于其它细胞类型。对于所有其它癌细胞系，数个化合物高度抑制细胞生长。总之，这些结果表明，本发明的化合物能够阻断肿瘤生长的至少二个通路(表皮细胞增殖和血管生成)。

在携带肿瘤的异体移植小鼠中的体内试验，OR0512显著地引起人类胰腺癌、人类NSCLC(具有突变形式的EGFR)、人类肝细胞癌模型中的肿瘤生长降低，并且表达突变的Bcr-Abl T315I蛋白的伊马替尼耐药性CML模型中的肿瘤生长稍微降低。

表B1–体外激酶分析。使用浓度100μM的ATP，孵育100nM的各化合物。活性以激酶的抑制作用与对照相比的％表示。

表B2–体外激酶分析。使用ATP Km表观浓度，孵育100nM的各化合物。活性以激酶的抑制作用与对照相比的％表示。

表B3–体外激酶分析。使用ATP Km表观浓度，孵育100nM的各化合物。活性以激酶的抑制作用与对照相比的％表示。

表B4–体外激酶分析。使用ATP Km表观浓度，孵育100nM的各化合物。活性以激酶的抑制作用与对照相比的％表示。

表B5–体外激酶分析。使用ATP Km表观浓度，孵育100nM的各化合物。活性以激酶的抑制作用对照相比的％表示。

表B6–体外激酶分析。使用ATP Km表观浓度，孵育100nM的各化合物。活性以激酶的抑制作用与对照相比的％表示。

表B7–体外激酶分析。使用ATP Km表观浓度，孵育100nM的各化合物。活性以激酶的抑制作用与对照相比的％表示。

表B8–体外激酶分析。使用ATP Km表观浓度，孵育10μM的各化合物。活性以激酶的抑制作用与对照相比的％表示。

表B9–体外激酶分析。使用ATP Km表观浓度，孵育10μM的各化合物。活性以激酶的抑制作用与对照相比的％表示。

表B10–体外激酶分析。使用ATP Km表观浓度，孵育100nM的各化合物。活性以激酶的抑制作用与对照相比的％表示。

表B 11–体外激酶分析。使用ATP Km表观浓度，孵育100nM的各化合物。活性以激酶的抑制作用与对照相比的％表示。

表B12–体外激酶分析。使用ATP Km表观浓度，孵育100nM的各化合物。活性以激酶的抑制作用与对照相比的％表示。

表B13–通过体外激酶分析获得的被OR0512抑制的激酶列表。使用ATP Km表观浓度孵育100nM的OR0512。表中列出的激酶是被OR0512抑制的激酶(与对照组比，激酶的抑制％>50％)。

表B 14–本发明的化合物对数种癌细胞系和原代内皮细胞的抗增殖活性。

表B 15–本发明的化合物对数种癌细胞系和原代内皮细胞的抗增殖活性。

表B 16–本发明的化合物对数种癌细胞系和原代内皮细胞的抗增殖活性。

表B17–本发明的化合物对数种癌细胞系和原代内皮细胞的抗增殖活性。

表B 18–本发明的化合物对数种癌细胞系和原代内皮细胞的抗增殖活性。

表B 19–本发明的化合物对数种癌细胞系和原代内皮细胞的抗增殖活性。

表B20–本发明的化合物对数种癌细胞系和原代内皮细胞的抗增殖活性。

表B21–本发明的化合物对数种癌细胞系和原代内皮细胞的抗增殖活性。

表B22–本发明的化合物对数种癌细胞系和原代内皮细胞的抗增殖活性。

表B23–本发明的化合物对数种癌细胞系和原代内皮细胞的抗增殖活性。

表B24–本发明的化合物对数种癌细胞系和原代内皮细胞的抗增殖活性。

表B25–本发明的化合物对数种癌细胞系和原代内皮细胞的抗增殖活性。

表B26–本发明的化合物对数种癌细胞系和原代内皮细胞的抗增殖活性。

表B27–本发明的化合物对数种癌细胞系和原代内皮细胞的抗增殖活性。

表B28–本发明的化合物对数种癌细胞系和原代内皮细胞的抗增殖活性。

表B29–本发明的化合物对数种癌细胞系和原代内皮细胞的抗增殖活性。

表B30–本发明的化合物对数种癌细胞系和原代内皮细胞的抗增殖活性。

表B31–本发明的化合物对数种癌细胞系和原代内皮细胞的抗增殖活性。

表B32–本发明的化合物对数种癌细胞系和原代内皮细胞的抗增殖活性。

表B33–本发明的化合物对数种癌细胞系和原代内皮细胞的抗增殖活性。

表B34–在四种癌症小鼠模型中OR0512的抗肿瘤活性(肿瘤生长抑制–TGI)。小鼠组(n＝5)每天口服单独载体(DMSO)或化合物OR0512。**P<0.05对载体处理组。

Claims

1.下式(I)的化合物，

其特征在于，

-R1是C₁-C₆烷基，

-X是CH₂或C＝O，

-R2是氢原子、烷基或卤素原子，

-Y选自HNC(O)、HNC(S)、HNC(O)CH₂、HNC(O)NH、HNC(S)NH、C(O)NH、C(O)NHCH₂、CH₂NHC(O)和CH₂NHC(S)，和

-R3选自：

-被下列单或多取代的苯基：

-羟基，

-卤素，

-C₁-C₆烷基胺，

-C₁-C₆烷氧基，

-C₁-C₆三氟烷氧基，

-C₁-C₆烷基，

-C₁-C₆三氟烷基，

-杂芳基片段，其任选被C₁-C₆烷基、C₁-C₆三氟烷基、卤素和/或羟基取代，其中所述杂芳基片段选自二氢苯并呋喃、吲哚、苯并二氧戊环、苯并***、吡啶或噻唑，

-咪唑，条件为Y是HNC(S)、HNSO₂、HNC(O)CH₂、HNC(O)NH、HNC(S)NH、C(O)NHCH₂、CH₂NHC(O)、CH₂NHC(S)或C(O)NH，其中NH直接连接至R3，

-含有5至10个碳原子和1至3个选自N、O和S的杂原子的杂芳基，其任选被C₁-C₆烷基、C₁-C₆三氟烷基、卤素和/或羟基取代，

-环状C₃-C₁₀烷基或含有5至10个碳原子和1至3个选自N、O和S的杂原子的饱和环状基团，其被羟基、卤素原子、C₁-C₆烷基胺、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆三氟烷氧基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆三氟烷基单取代，和

-选自以下的片段：

或其药学上可接受的加成盐。

2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，

-X是CH₂，和

-R2是烷基或卤素。

3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，

-R1是C₁-C₆烷基，

-X是CH₂，

-R2是甲基或氯原子，

-R3选自：

-被下列单取代的苯基：C₁-C₆三氟烷基、C₁-C₆三氟烷氧基、C₁-C₆烷基、卤素、或任选被CF₃和/或甲基单取代的噻唑基团，

-被C₁-C₆三氟烷基、C₁-C₆烷基胺、和/或羟基多取代的苯基，

-吡啶基团，其任选被C₁-C₆烷基或C₁-C₆三氟烷基取代，

-被C₁-C₆烷基和/或C₁-C₆三氟烷基单取代的环状C₃-C₁₀烷基，和

-选自以下的片段：

4.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，

-R1是C₁-C₆烷基，

-X是CH₂，

-R2是甲基，

-Y是HNC*(O)，其中C*连接至R3，和

-R3选自：

5.根据权利要求1所述的化合物，其具有通式(II)：

其特征在于，

-R1是甲基，

-X是CH₂，

-R2是甲基，

-Y是HNC*(O)，其中C*连接至R3，和

-R3选自：

6.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，X是C＝O且R2是烷基或卤素。

7.一种制备根据权利要求1-6任一项所述的化合物的方法，其特征在于，其包含至少一个下列步骤：

a.在X是CO的情况下，利用肽偶联技术，使用被NO₂基团取代的芳香族羧酸，形成NH-CO键；或者如果X是CH₂，通过还原胺化反应，使用被NO₂基团取代的芳香族醛，形成NH-CH₂键，

b.将NO₂基团还原成NH₂。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法包含下列步骤之一：

c₄)在Y是HNCO的情况下，通过将步骤b)之后获得的化合物与活化的羧酸反应形成酰胺，或

c₅)在Y是HNCS的情况下，通过将步骤c₄)之后获得的化合物与劳氏试剂反应形成硫酰胺，和

d)任选皂化所获得的产物。

9.一种药物组合物，其特征在于，其含有根据权利要求1至6任一项所述的化合物作为活性成分，以及药学上可接受的赋形剂。

10.根据权利要求1-6任一项所述的化合物或根据权利要求9所述的药物组合物在制备用于抑制人类或动物疾病中涉及的细胞增殖和/或血管生成的药物中的用途。

11.根据权利要求1-6任一项所述的化合物或根据权利要求9所述的药物组合物在制备用于抑制疾病中的蛋白激酶的药物中的用途。

12.根据权利要求11所述的用途，其中所述疾病选自肝癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、***癌、白血病、肾癌、子宫内膜癌、结直肠癌、化疗抗性癌、黄斑变性。

13.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，

-R1是C₁-C₆烷基，

-X是C＝O，

-R2是甲基，

-Y是HNC*(O)，其中C*连接至R3，和

-R3选自：

14.根据权利要求11所述的用途，其中所述疾病选自癌症、免疫失调、炎性疾病、血栓疾病、神经退行性疾病、骨病、黄斑变性、纤维化、囊肿生成、过度增生性疾病。