CN104982516A - 一种柑桔的绿色生态保鲜方法及保鲜剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种柑桔的绿色生态保鲜方法及保鲜剂，属于采后果蔬保鲜领域。首先筛选贮藏用果；浸没于含聚氨丙基双胍的溶液1-2min消毒处理；将消毒处理后的柑桔果实，浸没于含枯草芽孢杆菌R31的生物保鲜液中处理1-2min；用聚乙烯袋对果进行单果包装。利用本方法保鲜柑桔，可达到柑桔的绿色生态保鲜目的，在保证与化学杀菌剂相当效果，即降低柑桔的腐烂率、保持果实品质并延长保鲜期，保证果实商品价值提高保鲜商品市场竞争力的同时避免了使用化学杀菌药剂保鲜，减少残留，降低食品安全风险，减小化学杀菌剂使用，减少对生态、环境的影响，健康绿色、生态环保。本方法易于工业化生产及推广应用，具有良好的市场推广前景。
Description
技术领域
本发明属于采后果蔬保鲜领域，涉及柑桔保鲜，特别涉及一种柑桔的绿色生态保鲜方法及保鲜剂。
背景技术
柑桔是我国的第二大水果，产量大，分布广，采后腐烂问题严重，影响着柑桔产业健康发展。柑桔采后腐烂是因病理性病害和生理性病害引起。生理性病害有冷害、油胞病、褐斑病、水肿病以及干疤等病害。病理性病害主要包括青霉病、绿霉病、黑腐病、蒂腐病(包括褐蒂腐和黑蒂腐)、酸腐病和炭疽病等。
目前采后柑桔贮藏保鲜手段，以化学杀菌剂保鲜为主，主要成份有咪鲜胺、抑霉唑、百可得、噻菌灵等，技术还停留于化学杀菌保鲜阶段。这些成份本身也是采前果树栽培期的常用药物，常年使用，产生抗性、防效下降；再作为采后保鲜用药，残留量是个问题；保鲜后柑桔的安全性较难保证，存在食品安全隐患；使用后排出的废水影响生态、环境。
柑桔保鲜行业，也有在清洗阶段加入次氯酸钠用作消毒的做法，如中国专利申请号：201410242839.6公开的技术方案中提到利用次氯酸钠进行消毒处理。次氯酸钠不稳定，见光易分解，有氯气味，冷藏库内使用，会影响室内空气质量；有致敏作用，经常用手接触，手掌大量出汗，指甲变薄，毛发脱落等不利影响，对于消毒过程中，人体可能经常接触消毒液的环境中，次氯酸钠不是一个好的选择。
聚氨丙基双胍是双胍类物质的一种，分子式：(C5H14N6)X，是一种高效广谱安全的防霉防菌物质。物质稳定，阳离子高聚物的特性，使其可选择性的吸附于致病微生物表面，作用于细胞膜，破坏膜及细胞结构。研究表明聚氨丙基双胍属于实际无毒级，阳离子聚氨丙基双胍还有净化水体作用，3-4ppm的聚氨丙基双胍对水生生物是绝对安全的，对环境无污染，能自然或被生物分解，当高度稀释后可被微生物消化分解代谢。国内外资料报道，聚氨丙基双胍主要应用于化妆品、医药、食品加工的表面消毒，另有专利申请号201010542279.8将双胍类物质用于柑桔病害防治。公开了0.05％～0.6％聚六亚甲基双胍盐酸盐与0.05％～0.2％咪唑类杀菌剂、苯并咪唑类杀菌剂复配的保鲜剂，即与咪唑类杀菌剂、苯并咪唑类杀菌剂复配，技术还是停留于化学杀菌保鲜阶段，不可避免的存在化学杀菌剂保鲜不利之处。
枯草芽胞杆菌普遍存在于土壤、果蔬与植物的表面及组织内，对环境无污染，对人与动物无毒、无害。关于枯草芽胞杆菌在病害防治的可行性、研究及应用的相关报道较多，特别是用于植物种植过程中病害防控的研究，产业化的相关产品(如武汉天惠的“禾清水乡(1000亿孢子/克枯草芽孢杆菌”)；在水果采后保鲜应用的报道如詹喜、史凤玉等、杨振等、赵妍等的研究，主要涉及枯草芽胞杆菌对采后水果病害的防治效果、对水果的保鲜即品质保持作用、生防机理的研究，特别是在香蕉、梨、葡萄、番茄的采后保鲜，表明了枯草芽胞杆菌属菌用于采后水果病害防治及保鲜的可行性。
中国发明专利CN 101870959 B进一步利用枯草芽孢杆菌发酵得到的发酵液离心后去上清液得湿菌体，湿菌体与等重量的氯化钙混合均匀，烘干至粉末状，得到干粉菌剂，每克干粉菌剂有1×1011个芽孢，用于梨轮纹病、葡萄灰霉病、西瓜枯萎病。涉及了原粉(干粉菌剂)的生产，但原粉直接使用存在如下问题：㈠稀释时，在水中溶解性较差；㈡稀释后，菌未保护，受外界环境条件影响较大，如光的作用等，影响菌保鲜效果的发挥；㈢原粉的粘着性差，不利于菌粉作物及水果表面，降低菌在作物及水果表面的有效含量，降低保鲜效果。
综合以上柑桔贮藏保鲜行业技术现状，从有效减少果实采后损失、减少化学杀菌使用量，提高了保鲜水果的食品安全性，解决药物残留问题，改变柑桔保鲜的行业现状，开展了柑桔绿色生态保鲜方法的探索。
因此，提供一种可有效降低柑桔的腐烂率、保持果实品质并延长保鲜期，绿色、安全、环保的柑桔病害防治、贮藏保鲜的方法及保鲜剂就成为该技术领域急需解决的技术难题。
发明内容
本发明的第一个目的在于提供一种可有效降低柑桔的腐烂率、保持果实品质并延长保鲜期，绿色、安全、环保的柑桔病害防治、贮藏保鲜的方法。
本发明的上述发明目的是通过以下技术方案达到的：
一种柑桔的绿色生态保鲜方法，其步骤如下：
(1)筛选贮藏用果：选择无机械伤害、无病虫害、无腐烂的柑桔果实，作为保鲜贮藏用果，清洗待用；
(2)消毒处理：将步骤(1)所得待用的柑桔果实，浸没于聚氨丙基双胍消毒防腐溶液处理1-2分钟，以清除新鲜柑桔果实表面残留污物、表面致病微生物、作用于部分潜伏致病菌，沥干备用；
(3)生物保鲜处理：将步骤(2)所得消毒处理后的柑桔果实，浸没于含枯草芽孢杆菌R31的生物保鲜液处理1-2分钟，处理后置于筐中，置于消毒库房通风凉干；
(4)包装处理：步骤(3)处理后的柑桔果实放置3-5天后挑出机械伤腐烂果，并用聚乙烯袋单果包装，装筐后于适宜条件贮藏，如常温贮藏或冷藏或通风库贮藏。
所述步骤(2)中所述聚氨丙基双胍消毒防腐溶液由珠海真绿色技术有限公司生产的40重量％的聚氨丙基双胍水剂产品，按500倍～1000倍数稀释而成。
所述的40重量％的聚氨丙基双胍水剂的具体配方为(重量比)：聚氨丙基双胍40％、乙二醇4％、余量水。
所述步骤(3)中所述含枯草芽孢杆菌R31的生物保鲜液由含枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂，按200倍～800倍倍数稀释而成。
本发明的第二个发明目的是提供一种含枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂。
本发明的上述发明目的是通过以下技术方案达到的：
1、枯草芽孢杆菌R31原粉的制备方法，包括如下步骤：
(1)活化菌种
活化枯草芽孢杆菌R31菌株(枯草芽孢杆菌R31，其特征是“专利CN 101760438B所述的一株广谱抗真菌植物内生枯草芽胞杆菌及其应用”中专利菌株“枯草芽孢杆菌R31”)，待枯草芽孢杆菌R31菌株在NA固体培养基上的菌落乳白色，菌落细小圆形，表面光滑粘稠，无明显凸起，部分褶皱；
(2)一级种子液的制备
用NA液体培养基作为一级种子培养基，选取NA固体培养基上的单菌落，接种于一级种子摇瓶中，将一级种子摇瓶在35℃、200r/min下培养9小时，得到一级种子液；
(3)二级种子液的制备
种子罐中的培养基仍为NA液体培养基，121℃下，灭菌20min，将一级种子液接入种子罐中培养，培养结束时得到二级种子液；
(4)枯草芽孢杆菌R31发酵
将步骤(3)所得枯草芽孢杆菌R31的二级种子液，按照接种量为1％接入发酵罐中，在发酵培养基下培养，得到发酵菌液(主要为芽孢)；
(5)枯草芽孢杆菌R31菌原粉生产
步骤(4)所得的发酵菌液经碟片离心机浓缩后，加入轻质碳酸钙，使浓缩发酵菌液与轻质碳酸钙的重量比为100:3，得到液固混合物，将该液固混合物搅拌35min后，利用输料泵将液固混合物送入离心式喷雾塔中干燥，得到枯草芽孢杆菌R31菌原粉。
所述步骤(1)中所述NA培养基配方(g/L)：蛋白胨5g，牛肉膏3g，葡萄糖2.5g，琼脂15g，溶剂为水，1000mL，pH7.2，液体培养基中不加1.5％琼脂；
所述步骤(3)中所述种子罐的接种量为1％(V/V)；培养条件为：通气比1：1，搅拌转速为200r/min，培养温度35℃，罐压0.05Mpa，培养11小时；所述二级种子液的活菌含量为2-6×108cfu/mL，OD值大于0.85；
所述步骤(4)中所述发酵培养基的配方(重量百分比)：玉米淀粉2％，豆粕粉1.5％，酵母膏0.8％，氯化钠0.25％，硫酸镁0.4％，磷酸氢二钾0.3％，pH7.2，121℃灭菌30min；培养条件为：通气比为1：0.7，搅拌转速为200r/min、罐压0.05MPa、培养温度35℃、培养时间为48h，发酵过程中根据泡沫情况加消泡剂；下罐时间以取样镜检芽孢90％以上释放为准，发酵液中枯草芽孢杆菌R31菌原粉的活芽孢含量为40～60×108cfu/mL；
所述步骤(5)中所述离心式喷雾塔的干燥条件为：进风口温度为180-200℃，出风口温度为80-85℃，菌原粉中含水量小于5％(W/W)，活芽孢含量大于2000×108cfu/g。
2、一种含枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂，其产品剂型为可湿性粉剂或油悬浮剂。
一种含枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂可湿性粉剂的制备，其步骤如下：
(1)称取枯草芽孢杆菌R31原粉，壳寡糖，润湿剂，分散剂，一定量的载体，在高速万能粉碎机中混合粉碎1.5小时；
(2)在步骤(1)基础上，加入稳定剂，并补足载体，继续粉碎1小时，得含枯草芽孢杆菌R31活芽孢的可湿性粉剂。
所得含枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂可湿性粉剂的组分和配比如下：
所述的润湿剂、分散剂、稳定剂、载体为常用表面活性剂。
所述的润湿剂为脂肪醇聚氧乙烯醚、拉开粉、月桂醇聚氧乙烯基醚硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、十二烷基苯磺酸钙、月桂醇硫酸钠和月桂醇聚氧乙烯醚磺酸钠中的一种或几种任意比例的混合。
所述的分散剂为扩散剂MF、木质素磺酸盐、萘磺酸钠甲醛缩合物(NN0)、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和聚乙烯醇中的一种或几种任意比例的混合。
所述的稳定剂为蔗糖、氯化钠、山梨酸钾和抗坏血酸中的一种或几种任意比例的混合。
所述的载体如轻质碳酸钙、高岭土和硅藻土中的一种或几种任意比例的混合。
一种含枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂油悬浮剂的制备，其步骤如下：
(1)称取定量的枯草芽孢杆菌R31原粉，壳寡糖，部分载体，乳化剂，在混合釜中混合搅拌2小时；
(2)往步骤(1)搅拌2小时后的混合釜中加入稳定剂，并补足载体至100％，继续搅拌0.5小时，即可形成稳定的含枯草芽孢杆菌R31活芽孢的油悬浮剂。
所得含枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂油悬浮剂的组分和配比如下：
所述的浮化剂稳定剂、载体为常用表面活性剂或化学成分。
所述的乳化剂为聚氧乙烯山梨醇酐单棕榈酸酯(吐温40)、聚氧乙烯山梨醇酐单硬脂酸酯(吐温60)、聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯(吐温80)、脂肪醇聚氧乙烯醚、油醇聚氧乙烯醚和聚乙二醇脂肪酸酯中的一种或几种任意比例的混合。
所述的稳定剂为山梨酸钾、苯甲酸钠、氯化钠、蔗糖和乙酸钠中一种或几种任意比例的混合。
所述的载体如大豆油、菜籽油、环氧大豆油和玉米油等的一种或几种任意比例的混合。
本发明具有下列优点和效果：
本发明是一种柑桔绿色、生态的保鲜方法，所用消毒、生物保鲜剂都是实际无毒的物质，对人、动物和环境无毒、安全，在保证对柑桔采后整体保鲜效果同时，提高了保鲜水果的食品安全性，解决药物残留问题，减少化学杀菌药剂使用，改变柑桔保鲜的行业现状；减小废水对生态、环境的影响，处理后的水还有利于土壤病害防治、净化水质，不污染环境，环保、生态；确保本发明的柑桔绿色生态保鲜方法达到食品安全、环境友好、绿色生态的目的。
本发明的柑桔绿色、生态的保鲜方法，具明显特征：一定浓度的聚氨丙基双胍对柑桔贮藏病害具广谱抑菌性，能有效清除果实表面微生物，对表面及伤口的微生物起清毒、除菌作用，并可部分作用于潜伏浸染的病菌，减少病害的发生，但对生理品质调控作用较弱，贮藏后期生理易劣变，病害控制欠佳。枯草芽孢杆菌R31是已有专利菌株(专利号：200910214430.2)，具广谱抗病原真菌活性的菌株，实验表明了对柑桔侵染病害的有效性，菌的诱导抗病性及次生代谢产物可有效调节柑桔采后生理，提高果实抗病性，延缓生理衰老，保持贮藏品质，保证贮藏及货架期，但生物防菌剂防治效果还有待进一步提升，受贮藏环境影响大。
本发明方法充分利用两者间的互补作用，利用消毒将大部分病菌最大程度的清除，再利用生物菌剂控制余下的致病菌，诱导抗病性、生理调节作用，提高果实抗病性，延缓生理衰老，保持贮藏品质。同时利用生物菌次生代谢物及菌本身的作用降解少量的聚氨丙基双胍，减少化学物质在果面的残留。故利用本发明方法贮藏柑桔可有效降低柑桔的腐烂率、保持果实品质并延长保鲜期，保证果实商品价值，食品的安全、绿色特性，提高保鲜商品市场竞争力。
下面通过具体实施方式对本发明做进一步说明，但并不意味着对本发明保护范围的限制。
具体实施方式
对照例1
为实验观察贮藏条件以常温为主：20-25℃，相对湿度(RH)75-90％条件下贮藏。
选择无机械伤害、无病虫害、无腐烂的沙糖橘，作为保鲜贮藏用果，清洗待用。
(1)保鲜处理：将待用的沙糖橘，浸没于25％咪鲜胺的500倍稀释溶液处理1min，处理后放置于消毒后的空置房，开窗通风。
(2)包装处理：5天后挑出机械伤腐烂果，并用厚度为0.03mm的聚乙烯袋单果包装，装筐置于20-25℃，相对湿度(RH)75-90％条件下贮藏，观察发病腐烂情况，每处理180个果实。发病率/％＝(发病果数/检查总果数)×100、商品率/％＝[(检查总果数－发病果数－生理病等劣质果)/检查总果数]×100
(3)结果：见表1。
所述的25％咪鲜胺乳油，由珠海真绿色技术有限公司生产。
实施例1
(1)筛选贮藏用果：选择无机械伤害、无病虫害、无腐烂的沙糖橘，作为保鲜贮藏用果，清洗待用；
(2)清洗消毒处理：将待用的沙糖橘，浸没于40重量％聚氨丙基双胍的500倍稀释溶液处理2分钟，清除新鲜果实表面残留污物、表面致病微生物、作用于部分潜伏致病菌，沥干备用；
(3)生物保鲜处理：将消毒处理后的沙糖橘，浸没于70％枯草芽孢杆菌R31生物保鲜剂的200倍稀释溶液处理1分钟，处理后放置于消毒后的空置房，开窗通风；
(4)包装处理：3天后挑出机械伤腐烂果，并用厚度为0.03mm的聚乙烯袋单果包装，装筐置于20-25℃，相对湿度(RH)75-90％条件下贮藏，观察发病腐烂情况，每处理180个果实。发病率/％＝(发病果数/检查总果数)×100、商品率/％＝[(检查总果数－发病果数－生理病等劣质果)/检查总果数]×100
(5)结果：见表1。
所述的40％聚氨丙基双胍水剂的配方(重量比)：聚氨丙基双胍40％、乙二醇4％、余量水。
所述的70％枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂，是每克含1.4×1011cfu的枯草芽孢杆菌R31芽孢的微生物菌剂产品。
1、枯草芽孢杆菌R31原粉的制备方法，包括如下步骤：
(1)、活化菌种
活化枯草芽孢杆菌R31菌株(枯草芽孢杆菌R31，其特征是“专利CN 101760438B所述的一株广谱抗真菌植物内生枯草芽胞杆菌及其应用”中专利菌株“枯草芽孢杆菌R31”)，待枯草芽孢杆菌R31菌株在NA固体培养基上的菌落乳白色，菌落细小圆形，表面光滑粘稠，无明显凸起，部分褶皱；
(2)、一级种子液的制备
用NA液体培养基作为一级种子培养基，选取NA固体培养基上的单菌落，接种于一级种子摇瓶中，将一级种子摇瓶在35℃、200r/min下培养9小时，得到一级种子液；
(3)、二级种子液的制备
种子罐中的培养基仍为NA液体培养基，121℃下，灭菌20min，将一级种子液接入种子罐中培养，培养结束时得到二级种子液；
(4)、枯草芽孢杆菌R31发酵
将步骤(3)所得枯草芽孢杆菌R31的二级种子液，按照接种量为1％接入发酵罐中，在发酵培养基下培养，得到发酵菌液(主要为芽孢)；
(5)、枯草芽孢杆菌R31菌原粉生产
步骤(4)所得的发酵菌液经碟片离心机浓缩后，加入轻质碳酸钙，使浓缩发酵菌液与轻质碳酸钙的重量比为100:3，得到液固混合物，将该液固混合物搅拌35min后，利用输料泵将液固混合物送入离心式喷雾塔中干燥，得到枯草芽孢杆菌R31菌原粉。
所述步骤(1)中所述NA培养基配方(g/L)：蛋白胨5g，牛肉膏3g，葡萄糖2.5g，琼脂15g，溶剂为水，1000mL，pH7.2，液体培养基中不加1.5％琼脂；
所述步骤(3)中所述种子罐的接种量为1％(V/V)；培养条件为：通气比1：1，搅拌转速为200r/min，培养温度35℃，罐压0.05Mpa，培养11小时；所述二级种子液的活菌含量为2-6×108cfu/mL，OD值大于0.85；
所述步骤(4)中所述发酵培养基的配方(重量百分比)：玉米淀粉2％，豆粕粉1.5％，酵母膏0.8％，氯化钠0.25％，硫酸镁0.4％，磷酸氢二钾0.3％，pH7.2，121℃灭菌30min；培养条件为：通气比为1：0.7，搅拌转速为200r/min、罐压0.05MPa、培养温度35℃、培养时间为48h，发酵过程中根据泡沫情况加消泡剂；下罐时间以取样镜检芽孢90％以上释放为准，发酵液中枯草芽孢杆菌R31菌原粉的活芽孢含量为40～60×108cfu/mL；
所述步骤(5)中所述离心式喷雾塔的干燥条件为：进风口温度为180-200℃，出风口温度为80-85℃，菌原粉中含水量小于5％(W/W)，活芽孢含量大于2000×108cfu/g。
一种含枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂可湿性粉剂的制备，其步骤如下：
(1)按比例称取枯草芽孢杆菌R31原粉，壳寡糖，如十二烷基苯磺酸钙，木质素磺酸盐，扩散剂(MF)，在高速万能粉碎机中混合粉碎1.5小时；
(2)在步骤(1)基础上，加入蔗糖，抗坏血酸，并补足轻质碳酸钙，继续粉碎1小时，得含枯草芽孢杆菌R31活芽孢的微生物可湿性粉剂。
其组成和配比如下：
(1)称取枯草芽孢杆菌R31原粉70克，壳寡糖10克，十二烷基苯磺酸钙2克，木质素磺酸盐2.5克，扩散剂MF 2克，在高速万能粉碎机中混合粉碎1.5小时；
(2)在步骤(1)基础上，加入蔗糖1克，抗坏血酸2克，并补足轻质碳酸钙10.5克，继续粉碎1小时，得含枯草芽孢杆菌R31活芽孢的微生物可湿性粉剂。
对照例2
(1)筛选贮藏用果：选择无机械伤害、无病虫害、无腐烂的沙糖橘，作为保鲜贮藏用果，清洗待用；
(2)清洗消毒处理：将待用的沙糖橘，浸没于40重量％聚氨丙基双胍的500倍稀释溶液处理2分钟，清除新鲜果实表面残留污物、表面致病微生物、作用于部分潜伏致病菌，沥干，通风；
(3)包装处理：3天后挑出机械伤腐烂果，并用厚度为0.03mm的聚乙烯袋单果包装，装筐置于20-25℃，相对湿度(RH)75-90％条件下贮藏，观察发病腐烂情况，每处理180个果实。发病率/％＝(发病果数/检查总果数)×100、商品率/％＝[(检查总果数－发病果数－生理病等劣质果)/检查总果数]×100
(4)结果：见表1。
所述的40％聚氨丙基双胍水剂的配方(重量比)：聚氨丙基双胍40％、乙二醇4％、余量水。
对照例3
(1)筛选贮藏用果：选择无机械伤害、无病虫害、无腐烂的沙糖橘，作为保鲜贮藏用果，清洗待用；
(2)生物保鲜处理：将待用的沙糖橘，浸没于70％枯草芽孢杆菌R31保鲜剂的200倍稀释溶液处理1分钟，处理后放置于消毒后的空置房，开窗通风；
(3)包装处理：3天后挑出机械伤腐烂果，并用厚度为0.03mm的聚乙烯袋单果包装，装筐置于20-25℃，相对湿度(RH)75-90％条件下贮藏，观察发病腐烂情况，每处理180个果实。发病率/％＝(发病果数/检查总果数)×100、商品率/％＝[(检查总果数－发病果数－生理病等劣质果)/检查总果数]×100
(4)结果：见表1。
所述的70％枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂，是每克含1.4×1011cfu的枯草芽孢杆菌R31芽孢的微生物菌剂产品。
具体是通过以下技术方案达到的：以总重量100克为例，其组成和配比如下：
(1)称取枯草芽孢杆菌R31原粉70克，壳寡糖10克，十二烷基苯磺酸钙2克，木质素磺酸盐2.5克，扩散剂MF 2克，在高速万能粉碎机中混合粉碎1.5小时；
(2)在步骤(1)基础上，加入蔗糖1克，抗坏血酸2克，并补足轻质碳酸钙10.5克，继续粉碎1小时，得含枯草芽孢杆菌R31活芽孢的微生物可湿性粉剂。
实施例2
(1)筛选贮藏用果：选择无机械伤害、无病虫害、无腐烂的沙糖橘，作为保鲜贮藏用果，清洗待用；
(2)清洗消毒处理：将待用的沙糖橘，浸没于40％聚氨丙基双胍的1000倍稀释溶液处理1-2分钟，清除新鲜果实表面残留污物、表面致病微生物、作用于部分潜伏致病菌，沥干备用；
(3)生物保鲜处理：将消毒处理后的沙糖橘，浸没于10％枯草芽孢杆菌R31生物保鲜剂的1000倍稀释溶液处理1分钟，处理后放置于消毒后的空置房，开窗通风；
(4)包装处理：5天后挑出机械伤腐烂果，并用厚度为0.03mm的聚乙烯袋单果包装，装筐置于20-25℃，相对湿度(RH)75-90％条件下贮藏，观察发病腐烂情况，每处理180个果实。发病率/％＝(发病果数/检查总果数)×100、商品率/％＝[(检查总果数－发病果数－生理病等劣质果)/检查总果数]×100
(5)结果：见表1。
所述的40％聚氨丙基双胍水剂的配方(重量比)：聚氨丙基双胍40％、乙二醇4％、余量水。
所述的10％枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂，是每克含2×1010cfu的枯草芽孢杆菌R31芽孢的微生物菌剂产品。
本发明的10％枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂的配方如下：
枯草芽孢杆菌R31原粉(制备方法与实施例1相同)10克
(1)称取枯草芽孢杆菌R31原粉10克，壳寡糖10克，脂肪醇聚氧乙烯醚4克，拉开粉2克，聚乙烯吡咯烷酮3克，高速万能粉碎机中混合粉碎1.5小时；
(2)在步骤(1)基础上，加入氯化钠1克，并补足轻质碳酸钙70克，继续粉碎1小时，得含枯草芽孢杆菌R31活芽孢的微生物可湿性粉剂。
对照例4
(1)筛选贮藏用果：选择无机械伤害、无病虫害、无腐烂的沙糖橘，作为保鲜贮藏用果，清洗待用；
(2)清洗消毒处理：将待用的沙糖橘，浸没于40％聚氨丙基双胍的1000倍稀释溶液处理1-2min，清除新鲜果实表面残留污物、表面致病微生物、作用于部分潜伏致病菌，沥干、通风；
(3)包装处理：5天后挑出机械伤腐烂果，并用厚度为0.03mm的聚乙烯袋单果包装，装筐置于20-25℃，相对湿度(RH)75-90％条件下贮藏，观察发病腐烂情况，每处理180个果实。发病率/％＝(发病果数/检查总果数)×100、商品率/％＝[(检查总果数－发病果数－生理病等劣质果)/检查总果数]×100
(4)结果：见表1。
所述的40％聚氨丙基双胍水剂的配方(重量比)：聚氨丙基双胍40％、乙二醇4％、余量水。
对照例5
(1)筛选贮藏用果：选择无机械伤害、无病虫害、无腐烂的沙糖橘，作为保鲜贮藏用果，清洗待用；
(2)生物保鲜处理：将待用的沙糖橘，浸没于10％枯草芽孢杆菌R31生物保鲜剂的1000倍稀释溶液处理1min，处理后放置于消毒后的空置房，开窗通风；
(3)包装处理：5天后挑出机械伤腐烂果，并用厚度为0.03mm的聚乙烯袋单果包装，装筐置于20-25℃，相对湿度(RH)75-90％条件下贮藏，观察发病腐烂情况，每处理180个果实。发病率/％＝(发病果数/检查总果数)×100、商品率/％＝[(检查总果数－发病果数－生理病等劣质果)/检查总果数]×100
(4)结果：见表1。
所述的10％枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂，是每克含2×1010cfu的枯草芽孢杆菌R31芽孢的微生物菌剂产品。
本发明的10％枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂的配方如下：
(1)称取枯草芽孢杆菌R31原粉10克，壳寡糖70克，脂肪醇聚氧乙烯醚4克，拉开粉2克，聚乙烯吡咯烷酮3克，高速万能粉碎机中混合粉碎1.5小时；
(2)在步骤(1)基础上，加入氯化钠1克，并补足轻质碳酸钙10克，继续粉碎1小时，得含枯草芽孢杆菌R31活芽孢的微生物可湿性粉剂。
实施例3
(1)筛选贮藏用果：选择无机械伤害、无病虫害、无腐烂的沙糖橘，作为保鲜贮藏用果，清洗待用；
(2)清洗消毒处理：将待用的沙糖橘，浸没于40％聚氨丙基双胍的800倍稀释溶液处理1min，清除新鲜果实表面残留污物、表面致病微生物、作用于部分潜伏致病菌，沥干备用；
(3)生物保鲜处理：将消毒处理后的沙糖橘，浸没于50％枯草芽孢杆菌R31生物保鲜剂的800倍稀释溶液处理1min，处理后放置于消毒后的空置房，开窗通风；
(4)包装处理：5天后挑出机械伤腐烂果，并用厚度为0.03mm的聚乙烯袋单果包装，装筐置于20-25℃，相对湿度(RH)75-90％条件下贮藏，观察发病腐烂情况，每处理180个果实。发病率/％＝(发病果数/检查总果数)×100、商品率/％＝[(检查总果数－发病果数－生理病等劣质果)/检查总果数]×100
(5)结果：见表1。
所述的40％聚氨丙基双胍水剂的配方(重量比)：聚氨丙基双胍40％、乙二醇4％、余量水。
所述的50％枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂，是每克含1×1011cfu的枯草芽孢杆菌R31芽孢的微生物菌剂产品。
本发明的50％枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂的组成和配比如下：
(1)称取枯草芽孢杆菌R31原粉50克，壳寡糖25克，十二烷基苯磺酸钠4克，NN01克，木质素磺酸盐2克，高速万能粉碎机中混合粉碎2小时；
(2)在步骤(1)基础上，加入山梨酸钾1克，并补足高岭土16.5克，继续粉碎1小时，得含枯草芽孢杆菌R31活芽孢的微生物可湿性粉剂。
对照例6
(1)筛选贮藏用果：选择无机械伤害、无病虫害、无腐烂的沙糖橘，作为保鲜贮藏用果，清洗待用；
(2)清洗消毒处理：将待用的沙糖橘，浸没于40％聚氨丙基双胍的800倍稀释溶液处理1min，清除新鲜果实表面残留污物、表面致病微生物、作用于部分潜伏致病菌，沥干、通风；
(3)包装处理：5天后挑出机械伤腐烂果，并用厚度为0.03mm的聚乙烯袋单果包装，装筐置于20-25℃，相对湿度(RH)75-90％条件下贮藏，观察发病腐烂情况，每处理180个果实。发病率/％＝(发病果数/检查总果数)×100、商品率/％＝[(检查总果数－发病果数－生理病等劣质果)/检查总果数]×100
(4)结果：见表1。
所述的40％聚氨丙基双胍水剂的配方(重量比)：聚氨丙基双胍40％、乙二醇4％、余量水。
对照例7
(1)筛选贮藏用果：选择无机械伤害、无病虫害、无腐烂的沙糖橘，作为保鲜贮藏用果，清洗待用；
(2)生物保鲜处理：将待用的沙糖橘，浸没于25％枯草芽孢杆菌R31保鲜剂的800倍稀释溶液处理1min，处理后放置于消毒后的空置房，开窗通风；
(3)包装处理：5天后挑出机械伤腐烂果，并用厚度为0.03mm的聚乙烯袋单果包装，装筐置于20-25℃，相对湿度(RH)75-90％条件下贮藏，观察发病腐烂情况，每处理180个果实。发病率/％＝(发病果数/检查总果数)×100、商品率/％＝[(检查总果数－发病果数－生理病等劣质果)/检查总果数]×100
(4)结果：见表1。
所述的50％枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂，是每克含1×1011cfu的枯草芽孢杆菌R31芽孢的微生物菌剂产品。
本发明的50％枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂的组成和配比如下：
(1)称取枯草芽孢杆菌R31原粉50克，壳寡糖25克，十二烷基苯磺酸钠4克，NN01克，木质素磺酸盐2克，高速万能粉碎机中混合粉碎2小时；
(2)在步骤(1)基础上，加入山梨酸钾1克，并补足高岭土16.5克，继续粉碎1小时，得含枯草芽孢杆菌R31活芽孢的微生物可湿性粉剂。
实施例4
(1)筛选贮藏用果：选择无机械伤害、无病虫害、无腐烂的沙糖橘，作为保鲜贮藏用果，清洗待用；
(2)清洗消毒处理：将待用的沙糖橘，浸没于40％聚氨丙基双胍的600倍稀释溶液处理1min，清除新鲜果实表面残留污物、表面致病微生物、作用于部分潜伏致病菌，沥干备用；
(3)生物保鲜处理：将消毒处理后的沙糖橘，浸没于30％枯草芽孢杆菌R31生物保鲜剂的600倍稀释溶液处理1min，处理后放置于消毒后的空置房，开窗通风；
(4)包装处理：5天后挑出机械伤腐烂果，并用厚度为0.03mm的聚乙烯袋单果包装，装筐置于20-25℃，相对湿度(RH)75-90％条件下贮藏，观察发病腐烂情况，每处理180个果实。发病率/％＝(发病果数/检查总果数)×100、商品率/％＝[(检查总果数－发病果数－生理病等劣质果)/检查总果数]×100
(5)结果：见表1。
所述的40％聚氨丙基双胍水剂的配方(重量比)：聚氨丙基双胍40％、乙二醇4％、余量水。
所述的30％枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂，是每克含6×1010cfu的枯草芽孢杆菌R31芽孢的微生物菌剂产品。
本发明的30％枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂的组成和配比如下：
(1)称取枯草芽孢杆菌R31原粉30克，壳寡糖15克，大豆油20克，脂肪醇聚氧乙烯醚12克，聚乙二醇脂肪酸酯8克，在混合釜中混合搅拌2小时；
(2)往步骤(1)搅拌2小时后的混合釜中加入苯甲酸钠1克，氯化钠3克，蔗糖0.5克，并补足大豆油至100％，继续搅拌0.5小时，即可形成稳定的含枯草芽孢杆菌R31活芽孢的油悬浮剂。
对照例8
(1)筛选贮藏用果：选择无机械伤害、无病虫害、无腐烂的沙糖橘，作为保鲜贮藏用果，清洗待用；
(2)清洗消毒处理：将待用的沙糖橘，浸没于40％聚氨丙基双胍的600倍稀释溶液处理1min，清除新鲜果实表面残留污物、表面致病微生物、作用于部分潜伏致病菌，沥干、通风；
(3)包装处理：5天后挑出机械伤腐烂果，并用厚度为0.03mm的聚乙烯袋单果包装，装筐置于20-25℃，相对湿度(RH)75-90％条件下贮藏，观察发病腐烂情况，每处理180个果实。发病率/％＝(发病果数/检查总果数)×100、商品率/％＝[(检查总果数－发病果数－生理病等劣质果)/检查总果数]×100
(4)结果：见表1。
所述的40％聚氨丙基双胍水剂的配方(重量比)：聚氨丙基双胍40％、乙二醇4％、余量水。
对照例9
(1)筛选贮藏用果：选择无机械伤害、无病虫害、无腐烂的沙糖橘，作为保鲜贮藏用果，清洗待用；
(2)生物保鲜处理：将待用的沙糖橘，浸没于30％枯草芽孢杆菌R31保鲜剂的600倍稀释溶液处理1min，处理后放置于消毒后的空置房，开窗通风；
(3)包装处理：5天后挑出机械伤腐烂果，并用厚度为0.03mm的聚乙烯袋单果包装，装筐置于20-25℃，相对湿度(RH)75-90％条件下贮藏，观察发病腐烂情况，每处理180个果实。发病率/％＝(发病果数/检查总果数)×100、商品率/％＝[(检查总果数－发病果数－生理病等劣质果)/检查总果数]×100
(4)结果：见表1。
所述的30％枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂，是每克含6×1010cfu的枯草芽孢杆菌R31芽孢的微生物菌剂产品。
本发明的30％枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂的组成和配比如下：
(1)称取枯草芽孢杆菌R31原粉30克，壳寡糖15克，大豆油20克，脂肪醇聚氧乙烯醚12克，聚乙二醇脂肪酸酯8克，在混合釜中混合搅拌2小时；
(2)往步骤(1)搅拌2小时后的混合釜中加入苯甲酸钠1克，氯化钠3克，蔗糖0.5克，并补足大豆油至100％，继续搅拌0.5小时，即可形成稳定的含枯草芽孢杆菌R31活芽孢的油悬浮剂。
实施例5
(1)筛选贮藏用果：选择无机械伤害、无病虫害、无腐烂的沙糖橘，作为保鲜贮藏用果，清洗待用；
(2)清洗消毒处理：将待用的沙糖橘，浸没于40％聚氨丙基双胍的1000倍稀释溶液处理1min，清除新鲜果实表面残留污物、表面致病微生物、作用于部分潜伏致病菌，沥干备用；
(3)生物保鲜处理：将消毒处理后的沙糖橘，浸没于15％枯草芽孢杆菌R31生物保鲜剂的300倍稀释溶液处理2min，处理后放置于消毒后的空置房，开窗通风；
(4)包装处理：5天后挑出机械伤腐烂果，并用厚度为0.03mm的聚乙烯袋单果包装，装筐置于20-25℃，相对湿度(RH)75-90％条件下贮藏，观察发病腐烂情况，每处理180个果实。发病率/％＝(发病果数/检查总果数)×100、商品率/％＝[(检查总果数－发病果数－生理病等劣质果)/检查总果数]×100
(5)结果：见表1。
所述的40％聚氨丙基双胍水剂的配方(重量比)：聚氨丙基双胍40％、乙二醇4％、余量水。
所述的15％枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂，是每克含3×1010cfu的枯草芽孢杆菌R31芽孢的微生物菌剂产品。
本发明15％枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂的组成和配比如下：
(1)称取枯草芽孢杆菌R31原粉15克，壳寡糖30克，菜籽油20克，油醇聚氧乙烯醚9克，聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯(吐温80)10克，在混合釜中混合搅拌2小时；
(2)往步骤(1)搅拌2小时后的混合釜中加入山梨酸钾1.5克，乙酸钠2克，蔗糖1克，并补足菜籽油至100％，继续搅拌0.5小时，即可形成稳定的含枯草芽孢杆菌R31活芽孢的油悬浮剂。
对照例10
(1)筛选贮藏用果：选择无机械伤害、无病虫害、无腐烂的沙糖橘，作为保鲜贮藏用果，清洗待用；
(2)清洗消毒处理：将待用的沙糖橘，浸没于40％聚氨丙基双胍的1000倍稀释溶液处理1min，清除新鲜果实表面残留污物、表面致病微生物、作用于部分潜伏致病菌，沥干、通风；
(3)包装处理：5天后挑出机械伤腐烂果，并用厚度为0.03mm的聚乙烯袋单果包装，装筐置于20-25℃，相对湿度(RH)75-90％条件下贮藏，观察发病腐烂情况，每处理180个果实。发病率/％＝(发病果数/检查总果数)×100、商品率/％＝[(检查总果数－发病果数－生理病等劣质果)/检查总果数]×100
(4)结果：见表1。
所述的40％聚氨丙基双胍水剂的配方(重量比)：聚氨丙基双胍40％、乙二醇4％、余量水。
对照例11
(1)筛选贮藏用果：选择无机械伤害、无病虫害、无腐烂的沙糖橘，作为保鲜贮藏用果，清洗待用；
(2)生物保鲜处理：将待用的沙糖橘，浸没于15％枯草芽孢杆菌R31保鲜剂的300倍稀释溶液处理2min，处理后放置于消毒后的空置房，开窗通风；
(3)包装处理：5天后挑出机械伤腐烂果，并用厚度为0.03mm的聚乙烯袋单果包装，装筐置于20-25℃，相对湿度(RH)75-90％条件下贮藏，观察发病腐烂情况，每处理180个果实。发病率/％＝(发病果数/检查总果数)×100、商品率/％＝[(检查总果数－发病果数－生理病等劣质果)/检查总果数]×100
(4)结果：见表1。
所述的15％枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂，是每克含3×1010cfu的枯草芽孢杆菌R31芽孢的微生物菌剂产品。
本发明15％枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂的组成和配比如下：
(1)称取枯草芽孢杆菌R31原粉15克，壳寡糖30克，菜籽油20克，油醇聚氧乙烯醚9克，聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯(吐温80)10克，在混合釜中混合搅拌2小时；
(2)往步骤(1)搅拌2小时后的混合釜中加入山梨酸钾1.5克，乙酸钠2克，蔗糖1克，并补足菜籽油至100％，继续搅拌0.5小时，即可形成稳定的含枯草芽孢杆菌R31活芽孢的油悬浮剂。
不同实施例对沙糖桔腐烂率及商品率的影响见下表1。
表1保鲜处理对沙糖桔腐烂率及商品率的影响
室温20-25℃，相对湿度(RH)75-90％条件下贮藏30天，各处理组的沙糖桔腐烂及商品率情况如表1所述。从结果可知：本发明的柑桔绿色生态保鲜方法可有效的减少沙糖桔腐烂率，提高商品率，与化学杀菌剂咪鲜胺(对照例1)的效果相当甚至更好的效果；但一种柑桔绿色生态保鲜方法，消毒处理与生物保鲜处理是相辅相成的有机整体，只有同时使用情况下，才能保证能与化学杀菌剂相近的效果，而无论消毒处理还是生物保鲜处理，单独使用都不能有效保证沙糖桔贮藏期内的商品率。
Claims (10)
1.一种柑桔的绿色生态保鲜方法，其步骤如下：
(1)筛选贮藏用果：选择无机械伤害、无病虫害、无腐烂的柑桔果实，作为保鲜贮藏用果，清洗待用；
(2)消毒处理：将步骤(1)所得待用的柑桔果实，浸没于聚氨丙基双胍消毒防腐溶液处理1-2分钟，以清除新鲜柑桔果实表面残留污物、表面致病微生物、作用于部分潜伏致病菌，沥干备用；
(3)生物保鲜处理：将步骤(2)消毒处理后的柑桔果实，浸没于含枯草芽孢杆菌R31的生物保鲜液处理1-2分钟，处理后置于筐中，置于消毒库房通风凉干；
(4)包装处理：将步骤(3)处理后的柑桔果实放置3-5天后挑出机械伤腐烂果，并用聚乙烯袋单果包装，装筐后于适宜条件贮藏。
2.根据权利要求1所述的柑桔的绿色生态保鲜方法，其特征在于：所述步骤(2)中所述聚氨丙基双胍消毒防腐溶液通过40重量％的聚氨丙基双胍水剂产品，按500倍～1000倍数稀释而成。
3.根据权利要求2所述的柑桔的绿色生态保鲜方法，其特征在于：所述的40重量％的聚氨丙基双胍水剂的配方为：聚氨丙基双胍40％、乙二醇4％、余量水。
4.根据权利要求1所述的柑桔的绿色生态保鲜方法，其特征在于：所述步骤(3)中所述含枯草芽孢杆菌R31的生物保鲜液由含枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂，按200倍～800倍倍数稀释而成，所述的含枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂为可湿性粉剂或油悬浮剂。
5.一种柑桔的绿色生态保鲜剂，其特征在于：所述的保鲜剂为含枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂可湿性粉剂，其组分和配比如下：
6.根据权利要求5所述的柑桔的绿色生态保鲜剂，其特征在于：含枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂可湿性粉剂的制备步骤如下：
(1)称取枯草芽孢杆菌R31原粉，壳寡糖，润湿剂、分散剂，一定量的载体，在粉碎机中混合粉碎；
(2)在步骤(1)基础上，加入稳定剂，并补足载体，继续粉碎，得含枯草芽孢杆菌R31活芽孢的可湿性粉剂。
7.根据权利要求5或6所述的柑桔的绿色生态保鲜剂，其特征在于：所述的润湿剂为脂肪醇聚氧乙烯醚、拉开粉、月桂醇聚氧乙烯基醚硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、十二烷基苯磺酸钙、月桂醇硫酸钠和月桂醇聚氧乙烯醚磺酸钠中的一种或几种任意比例的混合；
所述的分散剂为扩散剂MF、木质素磺酸盐、萘磺酸钠甲醛缩合物、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和聚乙烯醇的一种或几种任意比例的混合；
所述的稳定剂为蔗糖、氯化钠、山梨酸钾和抗坏血酸中的一种或几种任意比例的混合；
所述的载体为轻质碳酸钙、高岭土和硅藻土中的一种或几种任意比例的混合。
8.一种柑桔的绿色生态保鲜剂，其特征在于：所述的保鲜剂为含枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂油悬浮剂，它的组分和配比如下：
9.根据权利要求8所述的柑桔的绿色生态保鲜剂，其特征在于：所述含枯草芽孢杆菌R31的柑桔生物保鲜剂油悬浮剂的制备步骤如下：
(1)称取定量的枯草芽孢杆菌R31原粉，壳寡糖，载体，乳化剂，在混合釜中混合搅拌；
(2)往步骤(1)搅拌后的混合釜中加入稳定剂，并补足载体至100％，继续搅拌，形成稳定的含枯草芽孢杆菌R31活芽孢的油悬浮剂。
10.根据权利要求9所述的柑桔的绿色生态保鲜剂，其特征在于：所述的乳化剂为聚氧乙烯山梨醇酐单棕榈酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐单硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯、脂肪醇聚氧乙烯醚、油醇聚氧乙烯醚和聚乙二醇脂肪酸酯中的一种或几种任意比例的混合；所述的稳定剂为山梨酸钾、苯甲酸钠、氯化钠、蔗糖和乙酸钠中一种或几种任意比例的混合；所述的载体为大豆油、菜籽油、环氧大豆油和玉米油中的一种或几种任意比例的混合。
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