CN1853489A - 一种含有枯草芽孢杆菌的防腐保鲜剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种含有枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)CCTCCM204085的防腐保鲜剂及其用途。经鉴定枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CCTCC M204085属于典型的枯草芽孢杆菌，但与其它枯草芽孢杆菌相比，其发酵液和芽孢用于蔬菜水果的采后贮藏防腐保鲜效果更好。本发明公开了含有枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CCTCCM204085的防腐保鲜剂的可湿性粉剂、水悬浮剂、泡腾颗粒、片剂的单剂及枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CCTCC M204085芽孢与化学杀菌剂的复配制剂。

Description

一种含有枯草芽孢杆菌的防腐保鲜剂

背景技术

水果蔬菜在采摘后贮藏运输的过程中，由于微生物侵染而发生腐烂，或者由于采后自然的衰老，品质下降，甚至最终失去食用价值，这些是导致水果蔬菜收获后损失的主要原因。据统计，全世界平均年损失率为25％，发展中国家腐烂损失率则更高，达到40％～50％。目前，世界各国采用的防腐保鲜方法很多，分为物理保鲜法、化学保鲜法、薄膜保鲜法三大类，其中以化学保鲜法保鲜应用的历史最长，效果最好。托布津、苯来特、特克多、多菌灵等等是一些常用的果蔬化学防腐保鲜剂。但是，进入二十世纪九十年代以后，由于这些化学制剂对人的毒副作用愈来愈受人重视，其中大多数制剂已先后被美国环境保护局和欧盟相应机构宣布禁止使用。

1980年以来，世界各国的科学家纷纷研发能够用于果蔬防腐保鲜的生物制剂。先后有将啤酒酵母、哈茨木霉、假单胞菌、球菌和枯草芽孢杆菌用于果蔬贮藏病害防治的报道并有产品登记。国内在1990年以来先后报道了D-67-2、Bs-98、Bs-208等几株对植物真菌病原菌有拮抗作用的细菌菌株，它们主要被用于番茄、草莓的灰霉病，水稻纹枯病，芦笋茎枯病等等田间病害的防治。

水果蔬菜往往是人们直接入口的食物，每天摄入量很大，而且可能是连同果皮一起吃掉。因此为了安全起见，对它们的防腐剂和保鲜剂要求很高。枯草芽孢杆菌是可以从人与动物身上或体内分离到的有益微生物。很多试验证明了它对人类和动物的健康有帮助。早在二十世纪就有人将其生产为药片供口服，以改善胃肠消化功能。以枯草芽孢杆菌制剂作为果蔬防腐剂，从而替代多菌灵、苯来特、特克多等化学合成的杀真菌剂，对保证食品安全大有帮助。在果蔬防腐保鲜方面国内有商业开发价值的枯草芽孢杆菌菌株未见有报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种含有枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CCTCCM204085的发酵液和活芽孢的防腐保鲜剂。枯草芽孢杆菌CCTCC M204085已于2004年12月2日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)(地址在武汉大学)，保藏号为CCTCC M204085。

本发明的另一目的是提供所述防腐保鲜剂的用途，用于水果蔬菜贮藏期的保鲜防腐。

本发明的进一步目的是提供一种枯草芽孢杆菌CCTCC M204085。

发明人从土壤中分离得到的二千多个细菌菌株中筛选得到的枯草芽孢杆菌CCTCC M204085菌株。对比试验发现它在果蔬防腐保鲜的效果优于对照菌株。发明人以这个菌株为基础研究了它的生物学特性，发酵工艺，制剂配方，应用技术与方法，最终完成了本发明，形成了一类以枯草芽孢杆菌CCTCC M204085菌发酵液或芽孢为主要活性成份的果蔬防腐保鲜剂。

本发明提供了一种的防腐保鲜剂，其中含有枯草芽孢杆菌CCTCCM204085。

本发明所述的防腐保鲜剂，它是可湿性粉剂、水悬浮剂、泡腾颗粒、片剂。

可湿性粉剂各组分的重量百分比为：

菌细胞含量                5×10⁸～1×10¹⁰个CFU/g

十二烷基苯磺酸钠          0.2％～20％

木素磺酸钠/钙             0.1％～20％

硬脂酸钠                  0.1％～3％

白碳黑(膨化)              2％～10％

绢云母粉                  余量

pH                        4.0～7.0。

水悬浮剂各组分的重量百分比为：

菌细胞含量                5×10⁸～3×10⁹个CFU/g

十二烷基苯磺酸钠          0.2％～20％

Chitosan                  0.1％～10％

羧甲基纤维素钠                0％～10％

黄原胶                        0％～10％

苯甲酸钠                      0.5％～2％

水                            余量

pH                            2.0～7.0。

泡腾颗粒、片剂各组分的重量百分比为：

菌细胞含量                    5×10⁸～3×10¹⁰个CFU/g

表面活性剂                    0.5％～20％

崩解剂(酸/碱性化合物)         3％～30％

粘合剂                        2％～25％

助崩剂                        2％～15％

填充物                        余量。

本发明所述的防腐保鲜剂，其中表面活性剂选自十二烷基磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠、十二烷基苯磺酸钙、木质素磺酸钠、木质素磺酸钙、纤维素磺酸钠、茶枯粉、皂角粉中的一种或多种；崩解剂酸性化合物选自柠檬酸、酒石酸、苹果酸、己二酸、富马酸、乳酸、硼酸中的一种或多种；碱性化合物选自碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾中的一种或多种；粘合剂选自聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇(聚合数12000～20000)中的一种或多种；助崩剂选自可溶性淀粉、糊精、羧甲基纤维素钠中的一种或多种；填充剂选自硅藻土、轻质碳酸钙、绢云母粉中的一种或多种。

本发明所述的防腐保鲜剂，其特征在于，它是还含有化学杀菌剂的复配制剂。其中化学杀菌剂选自百菌清、特克多、米鲜胺、异菌脲、甲基托布津、农利灵、三环唑、多菌灵的一种或多种。

本发明进一步提供了所述防腐保鲜剂的用途，将所述防腐保鲜剂用于水果蔬菜贮藏期间的防腐保鲜，防止青霉、绿霉、灰霉、轮纹病、黑斑病、轮霉病、褐腐病、酸腐病的侵染。其中水果蔬菜优选苹果、梨、柑、桔、橙、葡萄、花椰菜、西兰花、蒜苔、韭菜、西红柿。

本发明还提供一种枯草芽孢杆菌CCTCC M204085。

本发明中枯草芽孢杆菌CCTCC M204085菌株的特征：

a、个体形态特征：枯草芽孢杆菌CCTCC M204085菌株营养体为杆状，两端椭园，大小3.0×0.8(μm)，周生鞭毛。芽孢椭园形，大小1.7×0.7(μm)，芽孢生于菌体中间，芽孢不使芽孢囊膨大。

b、菌落形态：枯草芽孢杆菌CCTCC M204085菌株在牛肉汁蛋白胨琼脂平板上培养时，单菌落明显***，菌落边缘波浪形，颜色淡黄色，质地为不透明状，不产生色素。肉汤静置培养时形成菌膜，不形成菌环，培养液不浑浊无沉淀。

c、生理生化特性：枯草芽孢杆菌CCTCC M204085菌株与枯草芽孢杆菌标准菌株对比，生理生化特征相同：H₂O₂酶反应阳性，V.P.反应阳性，硝酸盐还原阳性，明胶水解，柠檬酸钠利用，二羟基丙酮形成，酪素水解，淀粉水解，均呈阳性。D-葡萄糖、D-木糖、L-***糖、D-甘露醇利用也都为阳性。利用葡萄糖不产气。卵磷酯反应，苯丙氨酸脱氢酶反应，酪氨酸分解均呈阴性。7％NaCl浓度水溶液中可生长。最佳生长繁殖温度30℃，53℃以上不生长。枯草芽孢杆菌CCTCC M204085在V.P.培养液中生长后，培养液pH值为7.92。

d、与常见枯草芽孢杆菌的区别：枯草芽孢杆菌CCTCC M204085菌株从细菌分类学角度看，属于枯草芽孢杆菌。与已报道过的枯草芽孢杆菌比较，本菌株的特点在于它们对青霉素的高度耐药性。在青霉素浓度高达1000单位的滤纸片上点种枯草芽孢杆菌CCTCC M204085菌株并移接到牛肉汁蛋白胨琼脂平板上，该菌株可以很正常的生长繁殖形成菌苔并且对柑桔绿霉、灰霉病菌、轮纹病菌等指示菌产生抑菌圈。

枯草芽孢杆菌CCTCC M204085菌株与国内外已经筛选得到的一些可以用于水果、蔬菜防腐的酵母菌和芽孢杆菌菌株相比，有使用效果好、芽孢存活率高、发酵菌数多等优点。

生物体保藏说明

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CCTCC M204085保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：武汉大学，保藏编号：CCTCC M204085，保藏日期：2004年12月2日。

具体实施方式

枯草芽孢杆菌CCTCC M204085的防腐保鲜效果：

枯草芽孢杆菌CCTCC M204085对部分水果蔬菜的防腐保鲜扼要列表如下(见表1)

表1枯草芽孢杆菌CCTCC M204085菌株对部分水果蔬菜防腐保鲜效果

处理剂量	防效(％)(或烂果率)					果蔬品质变化
										苹果(150天)		桔子(60天)
						苹果	沙梨	橙子	花椰菜					桔子	水份(％)	总酸(％)	水份(％)	总酸(％)
	枯草芽孢杆菌CCTCC M2040851×107cfu	86.6	66.1	51.1	37.5					65.8	-3.17	-0.596	-2.90						-0.0477
TL-6*  1×107cfu						73.4	56.1	55.2	45.0					50.1	-3.70	-0.750	+0.70	-0.1146
	对照(清水)	12.5	35.1	27.5	0.8**					81.8	89.18	1.326	85.04						0.8655
Bs-208  1×108cfu						60.0	21.6	40.9	25.0					32.0	-8.70	-0.765	-6.68	-0.0764
	多菌灵+保鲜剂800mg/L	-	57.3	-	-					72.3	-	-	-0.83						-0.0918

^*.TL-6为本发明人分离筛选得到的另一个枯草芽孢杆菌菌株(发明人可提供)。

^**.为病指数值。

枯草芽孢杆菌CCTCC M204085的液体发酵工艺：

a、斜面菌种：斜面菌种培养基配方：常规的马铃薯蔗糖琼脂(马铃薯去皮切片200克已煮汁，蔗糖20克，琼脂15克，水1000ml，pH自然)。斜面菌种培养温度：28～32℃；培养时间：3天。

b、液体发酵：液体发酵培养基配方：葡萄糖0％～2％，豆饼粉0.3％～4.5％，酵母粉0.1％～1.2％，麦麸0％～2.5％，米粉0％～4％，鱼粉0％～2.5％，玉米粉0％～4％，磷酸二氢钾0.1％～0.8％，硫酸镁0.1％～0.6％，NaCl 0％～1％。消前pH7.0～7.5。液体发酵温度28℃～32℃，搅拌转速120rpm/min～350rpm/min，通气量1∶0.6～1.5，发酵周期因不同配方而变化，最短30小时，最长72小时，至芽孢囊完全形成且有30％左右芽孢脱落时放罐。

c、后处理方法：发酵液经碟片式离心机离心去水，留菌浆。将菌浆用喷雾干燥方法干燥得枯草芽孢杆菌CCTCC M204085芽孢原粉。原粉中菌量为1×1010cfu/g-3×1010cfu/g。

枯草芽孢杆菌CCTCC M204085固体发酵工艺

a、种子制备

斜面菌种的制备方法同上。

固体发酵培养基灭过菌后用液体摇瓶菌种(或种子罐发酵菌种)接种。种子发酵培养液配方为：20％马铃薯煮汁当水，加1％～3％葡萄糖，0％～0.5％NaCl，0.1％～2％蛋白胨，0％～0.8％酵母膏。

用斜面菌种制备孢子悬浮液后接种摇瓶或种子罐。发酵温度28～30℃，摇床转速200rpm/min(或发酵罐转速120rpm/min～350rpm/min，通气量0.6％～1.2％)。发酵至对数增殖中期为宜。

b、固体发酵培养基

固体发酵培养基配方为：麦麸2％～20％，豆饼粉1％～10％，玉米粉1％～10％，

葡萄糖1％～10％，磷酸二氢钾0.1％～2.0％，轻质碳酸钙0.3％～5％，大米粉0％～15％，用珍珠岩补足至100％(w/w)。水的用量为∶料∶水＝1∶1.0～1.3(w/w)。

固体发酵培养基配制完毕后用高压蒸汽灭菌，121℃，维持30分钟。

c、发酵工艺参数

接种量1％～10％(v/w)。接种后，按通风曲池法或盘架法进行发酵。发酵温度28℃～32℃(控制料温)，发酵周期48～120小时。以孢子囊完全成熟，且有30％左右芽孢脱落为判断发酵终止的标准。

d、干燥与粉碎

发酵结束后以热风风干物料，热风温度控制在55℃以下。物料干燥后先用温升较低的粉碎机粉碎至60目～80目，过筛去除较粗的麸皮等杂质。然后用气流粉碎机再粉碎，过325目筛即成。此种粉体可以作为原粉使用，原粉中含菌量为1×1010cfu/g-1×1011cfu/g。

枯草芽孢杆菌CCTCC M204085制备果蔬防腐保鲜剂

a、可湿性粉剂：

可湿性粉剂配方

十二烷基苯磺酸钠                 0.2％～20％(w/w，下同)

木素磺酸钠                       0.1％～20％

膨化白碳黑                       2％～20％

枯草芽孢杆菌CCTCC M204085原粉    5×10⁸～1×10¹⁰CFU/g

绢云母粉                         补充至100％

上述原料按比例称取，投入混合机械中，充分混匀后经过喷射式气流粉碎机，粉碎至325目过筛，包装。

b、水悬剂

枯草芽孢杆菌CCTCC M204085原粉    5×10⁸～1×10¹⁰CFU/ml

二甲苯                           0％～10％

十二烷基苯磺酸钠                 0.2％～20％

Chitosan                         0.1％～10％

羧甲基纤维素钠                   0％～10％

黄原胶                           0％～10％

苯甲酸钠                         0.5％～2％

水                               补充至100％

pH                               2.0～7.0(用稀盐酸调)

上述原料按比例称取后，投入配料池混匀，经胶体磨磨至95％过325目筛后装瓶。

c、泡腾剂(颗粒剂或片剂)

枯草芽孢杆菌CCTCC M204085原粉    5×10⁸～3×10¹⁰个CFU/g

十二烷基苯磺酸钙/钠              0.2％～20％

崩解剂(酸/碱性化合物)            3％～30％

粘合剂                           2％～25％

助崩剂                           2％～15％

填充物                           余量

上述原料混合均匀后用压片机压片或者用挤压造粒机造粒。

实施例1：枯草芽孢杆菌CCTCC M204085液体发酵并制备芽孢原粉的工艺

a、菌种准备

斜面菌种的培养基：去皮马铃薯切成的薄片200克，加水1000ml煮汁(100℃，20分钟)，去渣留汁。煮的过程中适时适量补水至煮出的汁为1000ml。加蔗糖20克，溶化。再加琼脂15克，融化琼脂(融化琼脂的过程中亦要适量补充蒸发掉的水)。pH自然。

按常规方法灭菌，做成斜面，预培养2天后，接种已活化过的枯草芽孢杆菌CCTCC M204085原种，30℃±1℃恒温培养3天。镜检95％以上的菌体都已形成芽孢时停止培养。

将上述培养好的试管斜面菌种用无菌水洗下，打散，使之成均匀的芽孢悬浮液，经75℃恒温水浴处理30分钟。将此芽孢悬液冷至室温后转接茄子瓶斜面，每支试管斜面菌种接2-3个茄子瓶斜面。30℃±1℃恒温培养12小时，再用无菌水洗下，振摇打散成菌悬液。用此菌悬液接种100L液体发酵罐。

b、发酵

液体发酵培养基为：葡萄糖2％，豆饼粉1.5％，酵母粉0.8％，麦麸1.0％，大米粉2％，玉米粉1.0％，磷酸二氢钾0.3％，硫酸镁0.3％，NaCl 0.5％。消前pH 8.0。

100L发酵罐中投料60L。121℃灭菌30分钟。冷却至30℃时接种上述菌悬液。液体发酵温度29℃±1℃，搅拌转速300rpm，通气量1∶1.2。发酵32小时左右，至芽孢囊形成率≥95％，而且有30％左右芽孢囊脱落时放罐。测得发酵原液活芽孢数为42×108cfu/ml。

c、制备原粉

发酵液放罐后用HCl在酸化罐中调pH至pH4.0，经碟片式离心机离心去水(分离因素≥8000g)，留菌浆。将菌浆中按体积加入2％(w/v)的娟云母粉(细度325目)，打浆。用喷雾干燥塔，将菌浆喷干成原粉。喷干时进口风温180℃，出口风温70℃。经检测，原粉中活芽孢数5×1010cfu/g。

实施例2、枯草芽孢杆菌CCTCC M204085固体发酵并制备原粉的工艺

a、菌种准备：同实施例1。

b、固体发酵种子准备：

固体发酵的种子在液体发酵罐中制备。其种子培养基配方为：葡萄糖2％，豆饼粉1.5％，酵母粉1％，轻质碳酸钙1％，玉米粉1.0％，KH2PO4 0.5％，MgSO40-3％，

消前pH 8.0。高压蒸汽灭菌后接准备好的菌种，接种量为每200升种子液接1个茄瓶菌种。28℃-30℃通气培养12小时，搅拌转速250rpm，风量1∶0.6逐步加大到1∶10。本实施中，发酵获得种子液200升。

c、固体发酵培养基

玉米粉8％，豆饼粉10％，麦麸20％，米粉10％，葡萄糖2％，珍珠岩50％。水与料的比为1∶1。高压蒸汽121℃，灭菌1个小时(葡萄糖单独加少量水灭菌，115℃，20分钟)。灭菌在转锅中进行，灭完后通过夹层进自来水降温至28℃。

d、接种与发酵

以上固体培养基1吨(加水后)灭菌并降温后，通过无菌管道将200升种子液和单独灭菌的葡萄糖水均匀加入转锅内的培养基物料中。边接种边转动转锅，使种子液与物料混合均匀。将接好种的物料装入发酵床，物料厚度10cm。间歇地通入无菌空气进行发酵，控制温度为28℃～30℃。发酵周期为72小时。72小时时取样镜检，在芽孢囊全部成熟并有30％左右芽孢脱落时中止发酵。本实施例发酵同步率≥96％。

e、发酵半成品干燥

用40～45℃无菌热风大风量吹发酵床上的物料，风向由下而上。经过12小时，发酵半成品风干，含水量4.9％。

f、粉碎过筛制成原粉

以锤片式粉碎机预粉碎一遍，细度达到80目。再进喷射式气流粉碎机粉碎第二遍，细度达到325目。测活芽孢数结果为6×1010cfu/g。经过细度、活芽孢数、水份含量等指标的检测，均符合企业标准要求。

实施例3、枯草芽孢杆菌CCTCC M204085果蔬保鲜剂制剂生产方法(活芽孢水悬剂生产)

按实施例1方法进行发酵，投料1000L。发酵结束后将发酵液经过HCl酸化至pH4.0，用碟片式离心机离心，得到浓稠的菌浆300升。按菌浆的体积比，加入6％的十二烷基苯磺酸钠(w/v)，1％的Chitosan(w/v)，2％羧甲基纤维素钠(w/v)，1％苯甲酸钠(w/v)，二甲苯5％(v/v)，共重345公斤。充分搅拌后检测制剂半成品中的活芽孢数，结果为110×108cfu/ml，符合企业标准要求。包装成1000ml一瓶的试验样品。

实施例4、枯草芽孢杆菌CCTCC M204085果蔬保鲜剂制剂生产方法(可湿性粉剂)

称按实施例1生产的原粉(500×108cfu/g)100公斤，加入十二烷基苯磺酸钠45kg，木素磺酸钠22.5kg，硫酸铵45.0kg，白碳黑(膨化)90kg，绢云母粉147.5kg，合计重450kg。在混合机中混合1小时，再过气流粉碎机，过325目筛。经检测，产品中活芽孢数为110×108cfu/g，符合企业标准。包装为200克/袋。

实施例5、枯草芽孢杆菌CCTCC M204085果蔬保鲜剂制剂生产方法(泡腾片剂)

取枯草芽孢杆菌CCTCC M204085芽孢原粉50公斤(500亿cfu/g)，加入十二烷基磺酸钠30公斤，可溶性淀粉17.5公斤，碳酸钠15.75公斤，碳酸氢钠13.75公斤充分混匀。再加入柠檬酸12.5公斤，富马酸2公斤，酒石酸15.75公斤，羧甲基纤维素钠25公斤，充分混匀。用绢云母粉补足至物料总重量为250公斤，再一次充分混匀。用压片机将混好的物料压片，成为每片重约2克的泡腾片剂。本实施例最后获得片剂249.2公斤，片剂内每克含活芽孢98.7亿。

实施例6、枯草芽孢杆菌CCTCC M204085与百菌清复配剂(可湿性粉)

经过室内筛选试验已证明枯草芽孢杆菌CCTCC M204085母粉(以500亿cfu/g计)与百菌清(折百计含量)下列配比具有明显的增效作用：枯草芽孢杆菌CCTCC M204085∶百菌清＝(5～1)∶(1～2)。以枯草芽孢杆菌CCTCCM204085∶百菌清＝2∶1为例。

称取枯草芽孢杆菌CCTCC M204085母粉100公斤，百菌清(折百)50公斤(或75％可湿性粉剂67公斤)，十二烷基苯磺酸钠20公斤，余量为高岭土，补齐至200公斤。经机械充分混合均匀后再用气流粉碎机粉碎至325目以上，每100克一袋，包装为成品。本实施例得到成品194公斤，成品中枯草芽孢杆菌CCTCC M204085活芽孢含量为250亿cfu/g，百菌清含量25％。使用时加水稀释500～600倍浸果3分钟左右晾干即可。

实施例7、枯草芽孢杆菌CCTCC M204085与异菌脲(扑海因)复配剂(可湿性粉)

室内筛选试验证明枯草芽孢杆菌CCTCC M204085母粉(500亿cfu/g)与异菌脲50％可湿性粉，在下列配比条件下有明显的增效作用：枯草芽孢杆菌CCTCC M204085∶异菌脲＝(10～2)∶(1～5)。以枯草芽孢杆菌CCTCCM204085∶异菌脲＝1∶1为例。

称取500亿cfu/g含量的枯草芽孢杆菌CCTCC M204085母粉100公斤，异菌脲50％可湿性粉100公斤，加十二烷基苯磺酸钠40公斤，娟云母粉补足至300公斤，经过充分混合后用气流粉碎机粉碎至325目以上。每100克一袋。本实施例获得成品290公斤，成品中含枯草芽孢杆菌CCTCC M204085活芽孢167亿cfu/g，扑海因16.7％。使用时加水稀释500倍浸果3分钟左右晾干即可。

实施例8、枯草芽孢杆菌CCTCC M204085芽孢水悬浮剂用于苹果贮藏

取枯草芽孢杆菌CCTCC M204085水悬剂0.5kg，加水25kg，稀释成2×108cfu/ml的水悬液，充分搅拌(约15分钟)之后分批将100kg红富士苹果(每批10kg)浸入枯草芽孢杆菌CCTCC M204085水悬液中，浸泡时间5分钟。捞出晾干，单果套网袋。装箱贮藏。室温下贮藏5个月，防腐效果93.1％，苹果总酸度下降率26.2％，对照化学农药为多菌灵可湿性粉剂，稀释1000倍，处理方法与枯草芽孢杆菌CCTCC M204085相同。同等贮藏条件下，防腐效果84.3％，总酸度下降31.4％。枯草芽孢杆菌CCTCC M204085处理优于化学药剂和清水对照。

实施例9、枯草芽孢杆菌CCTCC M204085可湿性粉剂用于橙子防腐保鲜

取枯草芽孢杆菌CCTCC M204085可湿性粉剂(产品中活芽孢数为110×108cfu/g)0.5Kg，加水25kg，稀释成2×108cfu/ml的枯草芽孢杆菌CCTCCM204085芽孢悬浮液，将从树上采下仅三天的新鲜橙子200kg分批浸入枯草芽孢杆菌CCTCC M204085悬液中，泡5分钟后将橙子取出晾干，用小塑料袋单果包装，然后每10公斤装一纸箱。室温下贮藏。以多菌灵为化学防腐剂对照，以清水为空白对照。两种处理的用橙子量和包装贮藏情况与枯草芽孢杆菌CCTCCM204085处理完全相同。贮藏120天后检查结果。枯草芽孢杆菌CCTCC M204085(可湿性粉剂)处理防腐效果为84.7％，多菌灵效果为86.1％，两者差异不显著，证明枯草芽孢杆菌CCTCC M204085有可能代替多菌灵用于橙子防腐保鲜。

实施例10、枯草芽孢杆菌CCTCC M204085泡腾颗粒剂用于梨子的贮藏保鲜

取实施例5制备的枯草芽孢杆菌CCTCC M204085泡腾颗粒0.5kg(产品中活芽孢数为110×108cfu/g)，加水24.5kg稀释成2.2×108cfu/ml的孢子悬浮液。将稀释好的孢子悬浮液均匀喷施在待采收的梨子表皮，风干1-2小时后开始采收。采收时轻拿轻放，不伤梨子的表面。采收后及时用薄的软纸单果包装，然后分装纸箱，每箱10公斤梨。喷施清水的处理作为空白对照，喷施0.1％多菌灵(w.p)的为标准化学药剂对照。室温条件下贮藏90天防腐效果枯草芽孢杆菌CCTCC M204085为66.1％，多菌灵为60.0％，枯草芽孢杆菌CCTCC M204085处理优于多菌灵处理。

实施例11、枯草芽孢杆菌CCTCC M204085芽孢水悬浮剂用于花椰菜防霉

取枯草芽孢杆菌CCTCC M204085水悬剂500毫升，加水24.5升，混匀后喷洒在即将采收的花椰菜的菜花表面。要求喷布得尽可能均匀。风干后马上采收菜花。每个菜花单个用软纸包装，然后存放在纸箱中，每箱5公斤。设喷清水为空白对照。温度为7℃的冷库中保藏，30天后开箱检查结果。枯草芽孢杆菌CCTCC M204085水悬剂处理防霉的效果达到78.2％(按病指数计算)。

实施例12、枯草芽孢杆菌CCTCC M204085百菌清复配剂用于桔子贮藏

取复配剂250克加水25升，混匀后用喷雾器喷到树上即将采摘的桔子表面。风干后严格按桔子采摘的技术要求进行采摘。采下的桔子单果用软纸包好后装箱，每箱5kg，以清水做空白对照。7℃冷库中保藏2个月后检查结果。二个月贮藏期中，空白对照烂果率为41.9％，枯草芽孢杆菌CCTCC M204085单剂处理烂果率17.5％，复配剂处理烂果率仅8.3％，复配剂防腐烂效果优于枯草芽孢杆菌CCTCC M204085菌的单剂。

Claims (10)

1、一种防腐保鲜剂，其中含有枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CCTCCM204085。

2、根据权利要求1所述的防腐保鲜剂，其特征在于，它是可湿性粉剂、水悬浮剂、泡腾颗粒或片剂。

3、根据权利要求2所述的防腐保鲜剂，其中可湿性粉剂各组分的重量百分比为：

菌细胞含量              5×10⁸～1×10¹⁰个CFU/g

十二烷基苯磺酸钠        0.2％～20％

木素磺酸钠/钙           0.1％～20％

硬脂酸钠                0.1％～3％

膨化白碳黑              2％～10％

绢云母粉                余量

pH                      4.0～7.0。

4、根据权利要求2所述的防腐保鲜剂，其中水悬浮剂各组分的重量百分比为：

菌细胞含量              5×10⁸～3×10⁹个CFU/g

十二烷基苯磺酸钠        0.2％～20％

Chitosan                0.1％～10％

羧甲基纤维素钠          0％～10％

黄原胶                  0％～10％

苯甲酸钠                0.5％～2％

水                      余量

pH                      2.0～7.0。

5、根据权利要求2所述的防腐保鲜剂，其中泡腾颗粒或片剂各组分的重量百分比为：

菌细胞含量                5×10⁸～3×10¹⁰个CFU/g

表面活性剂                0.5％～20％

崩解剂                    3％～30％

粘合剂                    2％～25％

助崩剂                    2％～15％

填充物                    余量

其中崩解剂为酸性化合物或碱性化合物。

6、根据权利要求5所述的防腐保鲜剂，其中表面活性剂选自十二烷基磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠、十二烷基苯磺酸钙、木质素磺酸钠、木质素磺酸钙、纤维素磺酸钠、茶枯粉、皂角粉中的一种或多种；崩解剂酸性化合物选自柠檬酸、酒石酸、苹果酸、己二酸、富马酸、乳酸、硼酸中的一种或多种；崩解剂碱性化合物选自碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾中的一种或多种；粘合剂选自聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇中的一种或多种；助崩剂选自可溶性淀粉、糊精、羧甲基纤维素钠中的一种或多种；填充剂选自硅藻土、轻质碳酸钙、绢云母粉中的一种或多种。

7、根据权利要求1所述的防腐保鲜剂，其特征在于，它还含有化学杀菌剂。

8、根据权利要求7所述的防腐保鲜剂，其中化学杀菌剂选自百菌清、特克多、米鲜胺、异菌脲、甲基托布津、农利灵、三环唑、多菌灵的一种或多种。

9、一种权利要求1-8之任一所述防腐保鲜剂的用途，其特征在于，将所述防腐保鲜剂用于水果蔬菜的防腐保鲜。

10、一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CCTCC M204085。