CN104958319A - 具有卵巢早衰及围绝经期综合征治疗作用的间充质干细胞及其细胞因子制剂及其制备方法 - Google Patents
具有卵巢早衰及围绝经期综合征治疗作用的间充质干细胞及其细胞因子制剂及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104958319A CN104958319A CN201510291547.6A CN201510291547A CN104958319A CN 104958319 A CN104958319 A CN 104958319A CN 201510291547 A CN201510291547 A CN 201510291547A CN 104958319 A CN104958319 A CN 104958319A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- stem cell
- cytokine
- umbilical cord
- preparation
- placenta
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明属于生物医药领域,具体公开了一种具有卵巢早衰及围绝经期综合征治疗作用的间充质干细胞及其细胞因子制剂及其制备方法。该制剂由脐带或胎盘间充质干细胞及其细胞因子和用于承载所述脐带或胎盘间充质干细胞及其细胞因子并具有缓释和抗炎作用的透明质酸盐组成,经靶向注射到子宫内膜卵巢局部缓释吸收,可达到修复卵巢子宫内膜的疗效,促进功能性***,治疗卵巢早衰,缓解围绝经期的各种症状。与现有的静脉回输及介入路径相比,该制剂及其使用方法避免了静脉输注的不良反应,避免了介入治疗所带来的腹部及局部创伤,可有效防止病人因治疗所带来的副作用和损伤,因此,该制剂更安全有效,实用性强,易于推广,具有巨大的应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域,涉及间充质干细胞在再生医学领域的转化应用,具体涉及具有卵巢早衰及围绝经期综合征治疗作用的间充质干细胞及其细胞因子制剂及其制备方法。
背景技术
卵巢早衰,是指已建立规律月经的妇女,40 岁以前,由于卵巢功能衰退而出现持续性闭经和性器官萎缩,常有***水平的上升和***的下降,40岁前卵巢早衰的发病率约为 1%~3%,而 30 岁内的发病率约为 0.1%。 临床表现伴有不同程度的潮热多汗、失眠 多梦、烦躁易怒、心悸、疲乏、情绪紧张、***干涩、性功能低下、***不育、提前闭经等绝经前后症状,使患者未老先衰,如果得不到及时的调整和治疗,可导致骨质疏松、心脑血管疾病等慢性病的出现,直接影响女性生活质量,严重影响女性的正常工作,同时给其身心健康和夫妻生活带来极大痛苦。
围绝经期综合征出现的根本的原因是由于生理性或病理性或手术而引起的卵巢功能衰竭。卵巢功能一旦衰竭或被切除和破坏,卵巢分泌的***就会减少。女性全身有多种***受体,分布在几乎女性全身所有的组织和器官,接受***的控制和支配,一旦***减少,就会引发器官和组织的退行性变化,出现一系列的症状。由此可见,卵巢早衰会引发围绝经期综合征,治疗卵巢早衰可以同时有利于治疗围绝经期综合征。 卵巢早衰,其病因迄今尚不清楚,所以对该病的研究已成为国内外生殖发育界的热点和难点。目前,国内外研究多认为卵巢早衰与遗传、免疫、代谢以及医源性等因素有关。 已有研究资料显示染色体突变,促卵泡生成素 ( FSH) 促*** (LH) 及其受体变异,代谢异常,药物作用,放化疗损伤,病毒感染,免疫性以及其他高危因素如吸烟、抑郁等因素可能是其原因,这些因素或使卵巢先天性***数目减少,或使其卵泡闭锁加速,或被直接破坏,使卵泡过早衰竭,对于卵巢早衰的治疗现代医学一般采用激素替代治疗法。 但卵巢早衰治疗比较困难,西医临床上采用激素替代疗法,需要在大夫的指导下使用雌孕激素;研究表明该***和孕激素治疗的时候,有一定的作用,可以改善症状,但对卵巢功能的恢复并不理想,同时停药之后症状重新出现,使卵巢处于依赖状态,有导致卵巢功能更差的可能,也就是说激素替代疗法仅仅起到了治标的作用,而且这种方法副作用大,长期使用外源性激素有导致子宫内膜癌变的危险,并增加冠心病以及胆囊病的发病率。因此,该激素治疗的效果不理想,同时存在安全隐患。
近年来,随着基因治疗和干细胞技术的发展,采用干细胞技术来代替激素的疗法愈来愈被关注;目前,存在有采用静脉回输间充质干细胞/细胞因子,或采用经腹部有创介入腹腔镜下卵巢原位注射间充质干细胞/细胞因子的方法治疗卵巢早衰,取得一定的疗效,但是该疗效不是很理想,有效率低,具体表现在:
首先,静脉回输间充质干细胞容易粘附成团,未经过滤输入易造成肺静脉栓塞,表现为呼吸急促、紫绀、躁动和惊厥等,也有造成心脑血管卒中偏瘫的案例;
其次,虽然间充质干细胞是低免疫原性,不表达或低表达II类抗原,但多次静脉输入间充质干细胞,仍有一定比例产生白细胞抗体,与输入细胞的量/次成正比,抗原抗体反应可导致低热、疲乏、呼吸窘迫等反应,静脉输入细胞或因子,归巢的量有限,也一定程度影响了疗效。
介入疗法一般要在腹部开口,腹腔镜下介入导管到血管或病变局部,一次性介入疗效有限,多次介入反复给患者带来医源性创伤,不能接受,不易普及。
因此,到目前为止,还没有确切有效的方法能恢复卵巢的功能,所以卵巢早衰病因复杂、治疗难度较大,现代医学迄今尚未取得突破进展。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种具有卵巢早衰及围绝经期综合征治疗作用的间充质干细胞及其细胞因子制剂,解决了目前的卵巢早衰和围绝经期综合征治疗用药物吸收率低、疗效有限 及使用时造成的创伤大的问题。
本发明的另一个目的是提供上述具有卵巢早衰及围绝经期综合征治疗作用的间充质干细胞及其细胞因子制剂的制备方法。
为了实现上述目的,本发明采用的技术方案是:
一种具有卵巢早衰及围绝经期综合征治疗作用的间充质干细胞及其细胞因子制剂,是由脐带或胎盘间充质干细胞及其细胞因子和用于承载所述脐带或胎盘间充质干细胞及其细胞因子的透明质酸盐组成的混悬液;该透明质酸盐无免疫原性,广泛存在于人体***中,有一定的抗炎作用和药物缓释作用,无细胞毒性;
所述脐带或胎盘间充质干细胞及其细胞因子与透明质酸盐的体积比为1:1~3;
所述脐带或胎盘间充质干细胞的终浓度为0.5×107~5×107个/ml,所述透明质酸盐的终浓度为0.01~0.1%。
在上述技术方案中,所述透明质酸盐的分子量为30~300万道尔顿。
在上述技术方案中,所述脐带或胎盘间充质干细胞及其细胞因子是人的传代培养8代以内的异体脐带或胎盘间充质干细胞及其细胞因子;更优选的是,所述间充质干细胞及其细胞因子是来源于检测合格的健康产妇的胎盘或新生儿的脐带,将所述胎盘或脐带经组织培养法培养获得原代间充质干细胞,再将原代间充质干细胞无血清培养至8代以内,收集间充质干细胞及其细胞因子,冻存待用;其中,采用胎盘或脐带作为间充质干细胞及其细胞因子的来源,是因脐带的增殖能力更强,胎盘分泌细胞因子的能力更强。
上述具有卵巢早衰及围绝经期综合征治疗作用的间充质干细胞及其细胞因子制剂,包括:
制备脐带或胎盘间充质干细胞及其细胞因子;
将所述脐带或胎盘间充质干细胞及其细胞因子与透明质酸盐按照所述比例混匀,制得;所述脐带或胎盘间充质干细胞的终浓度为0.5×107~5×107个/ml,所述透明质酸盐的终浓度为0.01~0.1%。
在上述技术方案中,所述脐带或胎盘间充质干细胞的制备方法为:
脐带来源的间充质干细胞的制备:取志愿、健康合格、产后24~72小时的冷藏新生儿脐带,浸泡消毒后,剪切成3~4cm的小段,用止血钳去除每段脐带中的血管(一根静脉两根动脉),将脐带组织块与组织皮面分离,浸泡清洗后,将脐带组织块煎成3~4mm3的块状,浸泡清洗,2000rpm离心3min,弃上清,将得到的脐带组织按0.5g/瓶的质量浓度接种到T175培养瓶中,再在培养瓶中加入DMEM培养基和10%胎牛血清,摇匀, 于37℃、5%CO2培养箱中培养,培养至第5天和第8天时分别换培养液,2周后,当细胞融合度达到40~80%时,加入胰酶首次消化传代,换用无血清培养基,收集第3~8代间充质干细胞,冻存备用。
胎盘来源的间充质干细胞的制备:取志愿、健康合格、产后24~72小时的冷藏胎盘,用止血钳剥离覆盖在胎盘绒毛板表面的羊膜组织后,再用精细剪从胎盘上剪取足量的胎盘绒毛膜组织块,清洗后,用组织镊剔除上述胎盘绒毛膜组织块上的血管组织和滋养层组织,再次清洗后,用弯窄头精细剪将剔除后的胎盘绒毛膜组织块煎成3~5mm3大小的组织块,2000rpm离心5min,弃上清,将得到的胎盘绒毛膜组织按1g/瓶的质量浓度接种到T175培养瓶中,再在培养瓶中加入DMEM培养基和10%胎牛血清,摇匀,于37℃、5%CO2培养箱中培养,5天后首次换液,2周后,当细胞融合度达到40%~80%时传代,换用无血清培养基,收集3~8代间充质干细胞,冻存备用。
在上述技术方案中,所述脐带或胎盘间充质干细胞的细胞因子的制备方法为:
将脐带或胎盘间充质干细胞传至第3~8代后,加入胰酶消化再次传代,待细胞融合度到达60%~70%时,采用1%~10%O2低氧培养,或者换培养液撤去胎牛血清饥饿培养,72小时后收集培养基上清,限外过滤除去小分子物质后,冻存待用。
在上述技术方案中,所述间充质干细胞及其细胞因子制剂为用于局部靶向注射的间充质干细胞及其细胞因子制剂;在本发明的技术方案中,该间充质干细胞及其细胞因子制剂的使用方法为局部靶向注射;
在上述技术方案中,更为优选的靶向注射部位为子宫阔韧带,间充质干细胞及其细胞因子制剂经***侧穹窿进入子宫阔韧带,该制剂可以再子宫阔韧带内经缓释吸收到达卵巢和子宫内膜发挥效用。
在上述技术方案中,所述局部靶向注射部位不限于子宫阔韧带,根据个体需要,还可以靶向注射到卵巢、***或其它生殖器官及其附件。
本发明制剂的工作过程为:通过局部靶向注射的方式注射脐带或胎盘间充质干细胞及其细胞因子制剂后,该制剂可以在靶向注射部位进行缓释,再通过局部血液循环吸收到达子宫卵巢部位发挥功效;间充质干细胞可分泌上百种细胞因子,包括血管内皮细胞生长因子、转化生长因子、纤维细胞生长因子、上皮细胞生长因子、胰岛素生长因子、血小板衍生生长因子、趋化因子、白介素以及免疫调节因子等,它们均对组织的内源性修复起着强大的作用;透明质酸盐根据其本身的特性,其在给定的浓度范围内对细胞无毒性,其作为人体***中广泛存在的物质,本身也具有一定的抗炎作用。因此,可以看出,该制剂及使用该制剂对于卵巢早衰及围绝经期综合征的治疗基本上没有创伤,也不易产生抗体,采用透明质酸盐作为缓释载体,在该载体的缓释作用下,对该制剂的吸收更持久,疗效更好。
本发明的制剂具有以下有益效果:本发明使用8代以内的脐带或胎盘间充质干细胞及其分泌的细胞因子,与一定比例的透明质酸盐相配合制成混悬液,再将该混悬液通过局部靶向注射的方式注射到病灶所在区域,通过局部缓释的方式进行吸收,可达到有效修复卵巢子宫内膜的疗效,促进功能性***,有效治疗卵巢早衰,缓解围绝经期的各种症状;与现有的静脉回输及介入路径相比,该制剂及其使用方法避免了静脉输注的不良反应,如细胞栓塞及免疫反应等,避免了介入治疗所带来的腹部及局部创伤,可有效防止病人因治疗所带来的副作用和损伤,因此,该制剂更安全有效,实用性强,易于推广,具有巨大的应用价值。
具体实施方式
为使本申请的目的、技术方案和优点更加清楚,以下结合具体实施例,对本申请作进一步地详细说明。
实施例1
本实施例的具有卵巢早衰及围绝经期综合征治疗作用的间充质干细胞及其细胞因子制剂是由胎盘间充质干细胞及其细胞因子与透明质酸盐按照1:1的比例混合制成的混悬液;在该混悬液中,胎盘间充质干细胞的终浓度为1×107个/ml,透明质酸盐的终浓度为质量分数为0.01%,透明质酸盐的分子量为100万道尔顿。
其中,上述胎盘间充质干细胞是由以下方法制备得到:
取志愿、健康合格、产后24~72小时的冷藏胎盘,用止血钳剥离胎盘上的羊膜组织后,再用精细剪从胎盘上剪取足量的胎盘绒毛膜组织块,清洗后,用组织镊剔除上述胎盘绒毛膜组织块上的血管组织和滋养层组织,再次清洗后,用弯窄头精细剪将剔除后的胎盘绒毛膜组织块剪碎成3~5mm3的组织块,2000rpm离心5min,弃上清,将得到的胎盘绒毛膜组织按1g/瓶的质量浓度接种到T175培养瓶中,再在上述培养瓶中加入DMEM培养基和10%胎牛血清,于37℃、5%CO2培养箱中培养,5天后首次换液,2周后,当细胞融合度达到40%~80%时传代,用0.25%胰酶首次消化传代,换用无血清培养基,收集3~8代间充质干细胞,冻存备用。
上述胎盘间充质干细胞的细胞因子是由以下方法制备得到:
将上述胎盘间充质干细胞传至第3代后,加入胰酶消化再次传代,待细胞融合度到达60%~70%时,采用5%O2低氧培养,72小时后收集培养基上清,限外滤过,除去小分子物质后,除菌分装,冻存待用。
实施例2
本实施例的具有卵巢早衰及围绝经期综合征治疗作用的间充质干细胞及其细胞因子制剂是由脐带间充质干细胞及其细胞因子与透明质酸盐按照1:3的比例混合制成的混悬液;在该混悬液中,脐带间充质干细胞的终浓度为5×107个/ml,透明质酸盐的终浓度为质量分数为0.02%,透明质酸盐的分子量为150万道尔顿。
其中,上述脐带间充质干细胞是由以下方法制备得到:
取志愿、健康合格、产后24~72小时的冷藏新生儿脐带,浸泡消毒后,剪切至长为3~4cm的小段,用止血钳去除每段脐带中的血管(一根静脉两根动脉),将脐带组织块与组织皮面分离,浸泡清洗后,将脐带组织块煎成3~4mm3的块状,2000rpm/min离心3min,弃上清,将得到的脐带组织按0.5g/瓶的质量浓度接种到T175培养瓶中,再上述培养瓶中加入DMEM培养基和10%胎牛血清,摇匀,于37℃、5%CO2培养箱中培养,培养至第5天和第8天时分别换培养液,2周后,加入胰酶消化传代,当细胞融合度达到40~80%时,换用无血清培养基,收集第3~第8代间充质干细胞,冻存备用。
上述脐带间充质干细胞的细胞因子是由以下方法制备得到:
将上述脐带间充质干细胞传至第5代后,加入胰酶消化再次传代,待细胞融合度到达60%~70%时,采用3%O2低氧培养, 72小时后,收集培养基上清,限外滤过除去小分子物质后,除菌分装,冻存待用。
检测上述制备得到的脐带间充质干细胞的细胞因子的含量,检测结果如下:
表1多种生长因子的检测结果
注:VEGF:血管内皮细胞生长因子; TGF:转化生长因子; EGF:上皮细胞生长因子;
PDGF:血小板衍生生长因子。
通过上述的检测,可以看出,脐带间充质干细胞在低氧培养的条件下, TGF和EGF细胞因子分泌的浓度显著增加。
实施例3
用实施例1制得的间充质干细胞细胞因子制剂治疗围绝经期综合症
患者:李**、女、49岁,症状:***干涩、松弛、***明显下降,睡眠差、已停经1年,并患有“霉菌性***炎”,反复发作。
患者特点:1、中年女性、G3P2(顺2);2、停月经9个月;3、想改善***干涩、松弛、***差等症状。
妇检情况:.外阴干涩、松弛、两侧小***色素沉着;***松弛约3指,***包裹力和吸力较差;子宫后位,正常大小、活动、偏硬触痛、双侧附件未触及明显异。
辅助检查:白带化验:清洁度Ⅱ;HBsAg:(—)、HBeAg:(—)、HIV:(—)、HCV:(—)、TP:(—) ,B超、心电图检查无异常。
诊断:1、围绝经期综合症;2、女性生殖功能衰退。
治疗方案:采用实施例1制得的间充质干细胞细胞因子制剂治疗一疗程,靶向注射3次,疗效观察期6个月。
具体方法:将实施例1制得的细胞因子制剂靶向注射至子宫阔韧带部位,每次6ml~10ml,间隔1个月,共3次;该制剂在局部经缓释吸收到达卵巢和子宫附件等发挥功效。
疗效观察:第一次治疗后的效果:***干涩、松弛、***下降、睡眠差和精神状态明显改善,已绝经1年于治疗后一个月复潮,经量和颜色同前,正常,霉菌性***炎未再复发。
第二次治疗后效果:***干涩、松弛、***下降症状改善明显,睡眠差和精神状态完全改善,并且B超发现:子宫内膜5CM(双层),实质回声均匀,双侧附件区未发现团块回声。
第三次治疗后效果:***干涩、松弛、***下降症状明显改善,睡眠差和精神状态完全改善;治疗6个月后,***干涩、松弛持续改善,自述***下降睡眠等症状持续改善。
实施例4
实施例2制得的间充质干细胞及其细胞因子制剂的一般药理学试验
1、急性毒性试验
实施例2制得的间充质干细胞及其细胞因子制剂对小鼠进行静脉单次给药的急性毒性试验
目的:阐明受试细胞急性毒性的剂量~反应关系与中毒特征;求出受试细胞对试验小鼠的半数致死剂量以及最大耐受量,以评估受试细胞的安全性。
结论:实施例2制得的间充质干细胞及其细胞因子制剂在进行急性毒性试验时,当注射剂量大于最大耐受量时,动物出现呼吸急促、心跳加速、喘息或紫绀等现象,除上述症状外,无其它副作用;通过试验,确定间充质干细胞及其细胞因子制剂的LD50是1.632×108个/kg,MTD为1.25×108个/kg。
2、长期毒性试验
对大鼠进行连续多次重复静脉注射不同剂量的间充质干细胞及其细胞因子制剂试验,观察受试动物的毒性反应,及受试细胞长期毒性反应情况,最终确定无毒反应剂量,为拟定人用安全剂量提供参考。
结论:在长期毒性试验中,整个试验过程中没有出现大鼠中途死亡的现象。
3、致瘤性试验
①材料
采用1~2周龄的小鼠;
药物:a、间充质干细胞及其细胞因子制剂,其中含有干细胞3×107个/ml,透明质酸钠0.04%;b、生理盐水;c、Hela细胞混悬液,含有Hela细胞3×107个/ml。
②方法
取60只小鼠随机分成2组,每组20只;三个组每天尾静脉给药一次,每次计量为1ul/kg;实验组的注射药物为间充质干细胞及其细胞因子制剂,空白组注射生理盐水,对照组注射Hela细胞组;连续注射90天。
③实验结果
实验组和空白组在注射1~90天内未出现肿瘤,对照组在注射4天后明显出现肿瘤,在注射90天后,出现较大的肿瘤。本实验说明本发明的间充质干细胞混悬液无潜在的致瘤性。
通过上述对间充质干细胞及其细胞因子制剂所进行的药理学试验可以看出,该制剂在使用过程中,安全性好,无毒副作用,无致瘤性。
实施例5
实施例1制得的间充质干细胞及其细胞因子制剂的动物的有效性实验
一、卵巢早衰小鼠模型的建立:
1.1 化学诱导卵巢早衰模型:
取成熟雌性小鼠60只,随机分为对照组和实验组,每组各30只。实验组:腹腔注射环磷酰胺首次50 mg/kg;对照组:腹腔注射同体积生理盐水平行操作;连续注射15天(后14天每天10mg)后观察两组小鼠的卵巢组织学形态和功能的变化。
二、卵巢早衰小鼠模型的评价指标:
2.1动情周期观察:
每日早晨取对照组和卵巢早衰模型组小鼠的***脱落细胞及宫颈黏液做涂片,置显微镜下观察,分别用宫颈黏液结晶法、***脱落细胞形态检查法或者***脱落角化细胞计数法来确定对照组和模型组小鼠的动情周期。
2.2血清***水平检测:
采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定对照组和卵巢早衰模型小鼠的血清***(E2)、卵泡***(FSH)、黄体生成激素(LH)的水平变化。
2.3卵巢卵泡数量检测:
小鼠卵巢用甲醛固定,石蜡包埋,常规切片后HE染色,在光镜下观察卵巢的组织形态学改变,并比较对照组和卵巢早衰模型组小鼠卵巢未闭锁卵泡数目来评价卵巢的功能。
三、间充质干细胞递送方式:
卵巢间隙原位注射:
四、结果
正常对照组: 可见正常的动情周期;
模型对照组:小鼠动情周期紊乱,血清FSH浓度升高,E2浓度降低,卵泡数目减少,卵巢间质纤维化;
移植对照组:约40%~50%小鼠在间充质干细胞移植后15天~30天内恢复动情周期,E2水平高于模型组,FSH浓度降低;40天~60天,各级卵泡数目较之模型组增高。
五、结论
卵巢间隙原位注射对化学诱导的小鼠卵巢早衰有明显的治愈效果。
Claims (9)
1.一种具有卵巢早衰及围绝经期综合征治疗作用的间充质干细胞及其细胞因子制剂,由脐带或胎盘间充质干细胞及其细胞因子和用于承载所述脐带或胎盘间充质干细胞及其细胞因子并具有缓释和抗炎作用的透明质酸盐组成;
所述脐带或胎盘间充质干细胞及其细胞因子与透明质酸盐的体积比为1:1~3;
所述脐带或胎盘间充质干细胞的终浓度为0.5×107~5×107个/ml,所述透明质酸盐的终浓度为0.01~0.1%。
2.根据权利要求1所述的间充质干细胞及其细胞因子制剂,其特征是,所述透明质酸盐的分子量为30~300万道尔顿。
3.根据权利要求1所述的间充质干细胞及其细胞因子制剂,其特征是,所述脐带或胎盘间充质干细胞及其细胞因子是人的传代培养8代以内的异体脐带或胎盘间充质干细胞及其细胞因子。
4.权利要求1所述的间充质干细胞及其细胞因子制剂的制备方法,其特征是,包括:
制备脐带或胎盘间充质干细胞及其细胞因子;
将所述脐带或胎盘间充质干细胞及其细胞因子与透明质酸盐按照所述比例混匀,制得;所述脐带或胎盘间充质干细胞的终浓度为0.5×107~5×107个/ml,所述透明质酸盐的终浓度为0.01~0.1%。
5.根据权利要求4所述的间充质干细胞及其细胞因子制剂的制备方法,其特征是,所述脐带间充质干细胞的制备方法为:
取健康合格、产后24~72小时的冷藏新生儿脐带,浸泡消毒后,剪切至长为3~4cm的小段,去除所述每段脐带中的血管,将脐带组织块与组织皮面分离;然后将所述脐带组织块剪切至3~4mm3的块状,2000rpm/min离心3min,弃上清,将得到的脐带组织按0.5g/瓶的质量浓度接种到T175培养瓶中,在所述培养瓶中加入DMEM培养基和10%胎牛血清,摇匀,于37℃、5%CO2培养箱中培养,培养至第5天和第8天时分别换培养液,2周后,当细胞融合度达到40~80%时,用0.25%胰酶首次消化传代,换用无血清培养基,收集第3~8代间充质干细胞,冻存备用。
6.根据权利要求4所述的间充质干细胞及其细胞因子制剂的制备方法,其特征是,所述胎盘间充质干细胞的制备方法为:
取健康合格、产后24~72小时的冷藏胎盘,剥离所述胎盘上的羊膜组织后,剪取位于胎盘上的胎盘绒毛膜组织块,剔除所述胎盘绒毛膜组织块上的血管组织和滋养层组织,清洗,然后剪成3~5mm3的组织块,2000rpm离心5min,弃上清,将得到的胎盘绒毛膜组织按1g/瓶的质量浓度接种到T175培养瓶中,在所述培养瓶中加入DMEM培养基和10%胎牛血清,于37℃、5%CO2培养箱中培养,5天后首次换培养液,2周后,当细胞融合度达到40%~80%时传代,换用无血清培养基,收集第3~8代间充质干细胞,冻存备用。
7.根据权利要求4所述的间充质干细胞及其细胞因子制剂的制备方法,其特征是,所述脐带或胎盘间充质干细胞的细胞因子的制备方法为:
将制得的脐带或胎盘间充质干细胞传至第3~8代后,加入胰酶消化再次传代,待细胞融合度达到60~70%时,采用1%~10%O2低氧培养,或换培养液,去除胎牛血清饥饿培养,72小时后收集培养基上清,限外过滤除去小分子物质后,冻存待用。
8.根据权利要求1所述的具有卵巢早衰及围绝经期综合征治疗作用的间充质细胞及其细胞因子制剂,其特征是,所述间充质干细胞及其细胞因子制剂为用于局部靶向注射的间充质干细胞及其细胞因子制剂。
9.根据权利要求8所述的具有卵巢早衰及围绝经期综合征治疗作用的间充质细胞及其细胞因子制剂,其特征是,所述局部靶向注射的部位为子宫阔韧带、卵巢***生殖器官及附件部位。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510291547.6A CN104958319A (zh) | 2015-06-01 | 2015-06-01 | 具有卵巢早衰及围绝经期综合征治疗作用的间充质干细胞及其细胞因子制剂及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510291547.6A CN104958319A (zh) | 2015-06-01 | 2015-06-01 | 具有卵巢早衰及围绝经期综合征治疗作用的间充质干细胞及其细胞因子制剂及其制备方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104958319A true CN104958319A (zh) | 2015-10-07 |
Family
ID=54212525
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510291547.6A Pending CN104958319A (zh) | 2015-06-01 | 2015-06-01 | 具有卵巢早衰及围绝经期综合征治疗作用的间充质干细胞及其细胞因子制剂及其制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN104958319A (zh) |
Cited By (25)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106244532A (zh) * | 2016-09-08 | 2016-12-21 | 石家庄融和生物科技有限责任公司 | 人源脐带间充质干细胞的制备方法 |
CN106730013A (zh) * | 2016-12-06 | 2017-05-31 | 徐妍 | 用于预防***及子宫内膜损伤修复的细胞制剂及其制备方法 |
CN106963781A (zh) * | 2017-05-17 | 2017-07-21 | 天津普瑞赛尔生物科技有限公司 | 用于小型宠物的含高浓度人间充质干细胞分泌物的修复注射液及其制备方法 |
CN107174590A (zh) * | 2017-05-17 | 2017-09-19 | 天津普瑞赛尔生物科技有限公司 | 用于小型宠物的含高浓度间人充质干细胞提取物的修复喷雾剂及其制备方法 |
CN107184604A (zh) * | 2017-05-17 | 2017-09-22 | 天津普瑞赛尔生物科技有限公司 | 一种高浓度人间充质干细胞提取物及其制备方法 |
CN107376024A (zh) * | 2017-06-29 | 2017-11-24 | 成都清科生物科技有限公司 | 一种用于治疗女性压力性尿失禁的注射制剂及注射方法 |
CN107412266A (zh) * | 2017-05-17 | 2017-12-01 | 天津普瑞赛尔生物科技有限公司 | 含人间充质干细胞分泌物的小型宠物滴眼液及其制备方法 |
CN108148758A (zh) * | 2016-12-05 | 2018-06-12 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种绒毛外滋养细胞纳米颗粒暴露的体外模型建立方法 |
CN108192861A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-06-22 | 重庆斯德姆生物技术有限公司 | 一种应用于绝经期综合征的间充质干细胞的制备方法 |
CN108310014A (zh) * | 2018-03-16 | 2018-07-24 | 吉林省太阳鸟再生医学工程有限责任公司 | 一种干细胞制剂及其制备方法与在制备防治肺损伤的药物中的应用 |
CN108815190A (zh) * | 2018-09-27 | 2018-11-16 | 天津欣普赛尔生物医药科技有限公司 | 一种用于治疗卵巢早衰的制剂及制备方法 |
CN109010368A (zh) * | 2018-08-01 | 2018-12-18 | 徐妍 | 治疗女运动员三联征和修复卵巢的细胞制剂及其制备方法 |
CN109481466A (zh) * | 2018-12-21 | 2019-03-19 | 博雅干细胞科技有限公司 | 使用胎盘间充质干细胞治疗卵巢早衰的方法和细胞制剂 |
CN109652366A (zh) * | 2018-12-21 | 2019-04-19 | 博雅干细胞科技有限公司 | 用于治疗卵巢早衰的胎盘间充质干细胞制剂 |
CN110151789A (zh) * | 2018-02-11 | 2019-08-23 | 中国科学院遗传与发育生物学研究所 | 一种用于治疗卵巢早衰的产品 |
CN110257491A (zh) * | 2019-06-14 | 2019-09-20 | 山东大学 | 一种小鼠卵巢干细胞移植及追踪的方法 |
CN110638834A (zh) * | 2019-10-29 | 2020-01-03 | 陕西中鸿科瑞再生医学研究院有限公司 | 一种用于改善卵巢早衰的干细胞外泌体复合制剂及其应用 |
CN111643526A (zh) * | 2020-07-14 | 2020-09-11 | 贵州金元泰生物科技有限公司 | 一种用于延缓卵巢衰老及防治老年痴呆和抑郁的间充质干细胞制剂 |
CN112353817A (zh) * | 2020-11-30 | 2021-02-12 | 湖南科诺康美生命科技有限公司 | 一种用于治疗女性***松弛综合征的药剂配方 |
CN112494519A (zh) * | 2020-12-16 | 2021-03-16 | 广州杜德生物科技有限公司 | 一种基于卵巢靶向的干细胞组合物的干细胞制剂 |
CN113209279A (zh) * | 2021-05-14 | 2021-08-06 | 山东大学 | 用于保护原始卵泡的组合物、应用及间充质干细胞功能评价方法 |
CN114177203A (zh) * | 2021-12-27 | 2022-03-15 | 博雅干细胞科技有限公司 | 脐带血浓缩细胞治疗卵巢早衰的细胞治疗剂 |
CN115212312A (zh) * | 2022-06-20 | 2022-10-21 | 广州惠善医疗技术有限公司 | 间充质干细胞或其细胞萃取物联合免疫调节剂在制备预防或治疗卵巢早衰药物中的应用 |
CN115518075A (zh) * | 2022-10-26 | 2022-12-27 | 博雅干细胞科技有限公司 | 细胞组合物及其医疗用途 |
CN118161597A (zh) * | 2024-05-11 | 2024-06-11 | 北京益华生物科技有限公司 | 一种***松弛修复组合物及其制备方法和应用 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101785853A (zh) * | 2010-03-24 | 2010-07-28 | 晏泽 | 间充质干细胞生物除皱剂及其制备方法 |
WO2011088365A1 (en) * | 2010-01-14 | 2011-07-21 | Organogenesis, Inc. | Bioengineered tissue constructs and methods for producing and using thereof |
CN102614548A (zh) * | 2012-04-23 | 2012-08-01 | 任生 | 一种用于整形美容治疗的干细胞生物制剂 |
CN103816184A (zh) * | 2014-02-14 | 2014-05-28 | 中国福利会国际和平妇幼保健院 | 皮肤来源间充质干细胞在制备促进卵巢功能修复药物中的应用 |
-
2015
- 2015-06-01 CN CN201510291547.6A patent/CN104958319A/zh active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2011088365A1 (en) * | 2010-01-14 | 2011-07-21 | Organogenesis, Inc. | Bioengineered tissue constructs and methods for producing and using thereof |
CN102892880A (zh) * | 2010-01-14 | 2013-01-23 | 奥加诺吉尼西斯公司 | 生物工程化组织构建物及其制备和使用方法 |
CN101785853A (zh) * | 2010-03-24 | 2010-07-28 | 晏泽 | 间充质干细胞生物除皱剂及其制备方法 |
CN102614548A (zh) * | 2012-04-23 | 2012-08-01 | 任生 | 一种用于整形美容治疗的干细胞生物制剂 |
CN103816184A (zh) * | 2014-02-14 | 2014-05-28 | 中国福利会国际和平妇幼保健院 | 皮肤来源间充质干细胞在制备促进卵巢功能修复药物中的应用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
俞凌: "人脐带间充质干细胞治疗卵巢早衰的初步实验研究", 《万方数据知识服务平台(博士学位论文)》 * |
朱少芳: "人脐带间充质干细胞移植改善化疗损伤卵巢功能的实验研究", 《万方数据知识服务平台(博士学位论文)》 * |
Cited By (31)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106244532A (zh) * | 2016-09-08 | 2016-12-21 | 石家庄融和生物科技有限责任公司 | 人源脐带间充质干细胞的制备方法 |
CN108148758B (zh) * | 2016-12-05 | 2021-09-17 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种绒毛外滋养细胞纳米颗粒暴露的体外模型建立方法 |
CN108148758A (zh) * | 2016-12-05 | 2018-06-12 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种绒毛外滋养细胞纳米颗粒暴露的体外模型建立方法 |
CN106730013A (zh) * | 2016-12-06 | 2017-05-31 | 徐妍 | 用于预防***及子宫内膜损伤修复的细胞制剂及其制备方法 |
CN106963781A (zh) * | 2017-05-17 | 2017-07-21 | 天津普瑞赛尔生物科技有限公司 | 用于小型宠物的含高浓度人间充质干细胞分泌物的修复注射液及其制备方法 |
CN107174590A (zh) * | 2017-05-17 | 2017-09-19 | 天津普瑞赛尔生物科技有限公司 | 用于小型宠物的含高浓度间人充质干细胞提取物的修复喷雾剂及其制备方法 |
CN107184604A (zh) * | 2017-05-17 | 2017-09-22 | 天津普瑞赛尔生物科技有限公司 | 一种高浓度人间充质干细胞提取物及其制备方法 |
CN107412266A (zh) * | 2017-05-17 | 2017-12-01 | 天津普瑞赛尔生物科技有限公司 | 含人间充质干细胞分泌物的小型宠物滴眼液及其制备方法 |
CN107376024B (zh) * | 2017-06-29 | 2021-03-16 | 成都清科生物科技有限公司 | 一种用于治疗女性压力性尿失禁的注射制剂及注射方法 |
CN107376024A (zh) * | 2017-06-29 | 2017-11-24 | 成都清科生物科技有限公司 | 一种用于治疗女性压力性尿失禁的注射制剂及注射方法 |
CN108192861A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-06-22 | 重庆斯德姆生物技术有限公司 | 一种应用于绝经期综合征的间充质干细胞的制备方法 |
CN110151789A (zh) * | 2018-02-11 | 2019-08-23 | 中国科学院遗传与发育生物学研究所 | 一种用于治疗卵巢早衰的产品 |
CN110151789B (zh) * | 2018-02-11 | 2021-02-26 | 中国科学院遗传与发育生物学研究所 | 一种用于治疗卵巢早衰的产品 |
CN108310014A (zh) * | 2018-03-16 | 2018-07-24 | 吉林省太阳鸟再生医学工程有限责任公司 | 一种干细胞制剂及其制备方法与在制备防治肺损伤的药物中的应用 |
CN109010368A (zh) * | 2018-08-01 | 2018-12-18 | 徐妍 | 治疗女运动员三联征和修复卵巢的细胞制剂及其制备方法 |
CN109010368B (zh) * | 2018-08-01 | 2021-09-03 | 徐妍 | 用于治疗“女运动员三联征”和修复女运动员卵巢功能的细胞制剂及其制备方法 |
CN108815190A (zh) * | 2018-09-27 | 2018-11-16 | 天津欣普赛尔生物医药科技有限公司 | 一种用于治疗卵巢早衰的制剂及制备方法 |
CN109652366A (zh) * | 2018-12-21 | 2019-04-19 | 博雅干细胞科技有限公司 | 用于治疗卵巢早衰的胎盘间充质干细胞制剂 |
CN109481466A (zh) * | 2018-12-21 | 2019-03-19 | 博雅干细胞科技有限公司 | 使用胎盘间充质干细胞治疗卵巢早衰的方法和细胞制剂 |
CN110257491A (zh) * | 2019-06-14 | 2019-09-20 | 山东大学 | 一种小鼠卵巢干细胞移植及追踪的方法 |
CN110638834A (zh) * | 2019-10-29 | 2020-01-03 | 陕西中鸿科瑞再生医学研究院有限公司 | 一种用于改善卵巢早衰的干细胞外泌体复合制剂及其应用 |
CN111643526A (zh) * | 2020-07-14 | 2020-09-11 | 贵州金元泰生物科技有限公司 | 一种用于延缓卵巢衰老及防治老年痴呆和抑郁的间充质干细胞制剂 |
CN112353817A (zh) * | 2020-11-30 | 2021-02-12 | 湖南科诺康美生命科技有限公司 | 一种用于治疗女性***松弛综合征的药剂配方 |
CN112494519A (zh) * | 2020-12-16 | 2021-03-16 | 广州杜德生物科技有限公司 | 一种基于卵巢靶向的干细胞组合物的干细胞制剂 |
CN113209279A (zh) * | 2021-05-14 | 2021-08-06 | 山东大学 | 用于保护原始卵泡的组合物、应用及间充质干细胞功能评价方法 |
CN114177203A (zh) * | 2021-12-27 | 2022-03-15 | 博雅干细胞科技有限公司 | 脐带血浓缩细胞治疗卵巢早衰的细胞治疗剂 |
CN114177203B (zh) * | 2021-12-27 | 2024-02-13 | 博雅干细胞科技有限公司 | 脐带血浓缩细胞治疗卵巢早衰的细胞治疗剂 |
CN115212312A (zh) * | 2022-06-20 | 2022-10-21 | 广州惠善医疗技术有限公司 | 间充质干细胞或其细胞萃取物联合免疫调节剂在制备预防或治疗卵巢早衰药物中的应用 |
CN115518075A (zh) * | 2022-10-26 | 2022-12-27 | 博雅干细胞科技有限公司 | 细胞组合物及其医疗用途 |
CN115518075B (zh) * | 2022-10-26 | 2024-05-10 | 博雅干细胞科技有限公司 | 细胞组合物及其医疗用途 |
CN118161597A (zh) * | 2024-05-11 | 2024-06-11 | 北京益华生物科技有限公司 | 一种***松弛修复组合物及其制备方法和应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104958319A (zh) | 具有卵巢早衰及围绝经期综合征治疗作用的间充质干细胞及其细胞因子制剂及其制备方法 | |
EA014435B1 (ru) | Кондиционированная композиция крови и способ ее получения | |
KR20070122315A (ko) | 자가 진피 세포 및 히알루론산을 함유하는 주사용 인체연조직 충전제 조성물 | |
CN108992662A (zh) | 一种含间充质干细胞因子的***喷雾及其制备方法 | |
CN107073041A (zh) | 糖尿病性皮肤溃疡治疗的多功能性干细胞 | |
Zhu et al. | Preliminary study on the mechanism of acupoint injection of bonemarrow mesenchymal stem cells in improving blood flow in the rat of hind limb ischemia | |
CN109731002B (zh) | 白酒草皂苷r用于制备造血干细胞动员剂的应用 | |
CN112451544A (zh) | 用于改善薄型子宫内膜的组合物及其制备方法、应用 | |
WO2020228743A1 (zh) | 干细胞和细胞因子的组合及其在改善***活力的用途 | |
CN107951904B (zh) | 一种脂肪间充质干细胞药物及其制备方法和应用 | |
CN108619169A (zh) | 一种治疗缺血性脑卒中的间充质干细胞注射液及制备方法 | |
WO2020030091A1 (zh) | 用于治疗组织坏死或改善心脏功能的药物 | |
CN102229911B (zh) | Sca-1+/CD34-子宫干细胞及其分离方法 | |
CN110772534A (zh) | 多系分化持续应激细胞在制备抗炎药物中的应用 | |
WO2021249402A1 (zh) | 无细胞脂肪提取液对巨噬细胞极化调节与疾病治疗的作用 | |
KR20140041263A (ko) | 말초혈액 단핵세포를 유효성분으로 포함하는 예방 또는 치료용 약제학적 조성물 | |
CN103655615A (zh) | 一种人干细胞组合物在制备用于治疗卵巢早衰或子宫疾病的药物中的用途 | |
CN109010368B (zh) | 用于治疗“女运动员三联征”和修复女运动员卵巢功能的细胞制剂及其制备方法 | |
Aynehchi et al. | Transplantation of interscapular brown adipose tissue in rats | |
CN114732833B (zh) | 一种含有prp的干细胞生物制剂及其应用 | |
CN116920069B (zh) | 一种中药提取液及其在促进脐带干细胞分泌vegf中的应用 | |
CN105106431A (zh) | 治疗奶牛卵巢静止和持久黄体***症的中药灌注剂及其制备方法 | |
CN106421758A (zh) | 一种干细胞制剂及其制备方法和应用 | |
CN107510838A (zh) | 一种细胞制剂及其制备方法和应用 | |
CN101066410B (zh) | 用于治疗妇科慢性***的中药制剂及其制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |