CN104957034A

CN104957034A - 一种抑瘤功能茶树良种的选育方法

Info

Publication number: CN104957034A
Application number: CN201510414307.0A
Authority: CN
Inventors: 郑金贵; 林金科; 杨江帆; 陈团生; 廖素凤; 刘江洪; 林用松; 凃良剑; 黄学敏; 梁建斌; 吴亮宇; 陈源; 林文磊; 陈荣冰
Original assignee: Fujian Agriculture and Forestry University
Current assignee: FUJIAN CHUNLUN GROUP Co.,Ltd.
Priority date: 2015-07-15
Filing date: 2015-07-15
Publication date: 2015-10-07
Anticipated expiration: 2035-07-15
Also published as: WO2017008597A1; US20180071354A1; CN104957034B

Abstract

本发明属于茶树种质资源领域，具体涉及一种抑瘤功能茶树良种的选育方法。该方法采用地理远缘杂交，杂交后代测定茶树鲜叶干物重中生物活性成分的含量，筛选具备茶树基本活性成分含量的基础上，总儿茶素含量≥22%，其中EGCG含量≥12%，儿茶素C含量≥2%，ECG含量≥3.5%；咖啡因含量≥4.5%的种质，即为抑瘤功能茶树良种。以该良种生产的茶叶即为抑瘤功能茶。该茶叶在体外能高效抑制肝癌、卵巢癌、***、肺癌、脑星形胶质母细胞瘤、乳腺导管癌、***癌、白血病癌、胃癌、结肠癌、皮肤鳞状细胞癌和胰腺癌等13种人源肿瘤细胞的生长，在动物体内对人肝癌细胞移植瘤具有高效抑制生长的作用。

Description

一种抑瘤功能茶树良种的选育方法

技术领域

本发明属于茶树种质资源领域，具体涉及一种抑瘤功能茶树良种的选育方法。

背景技术

现代科学研究表明，茶叶具有抗氧化、抗肿瘤、抗衰老、抗病毒、抗菌、降血压、降血脂以及降血糖等药理功能和保健功能。茶叶含有机化合物400种以上，无机矿物质15种以上，其中主要的抗肿瘤功能成分有茶多酚及其氧化产物、咖啡因、茶色素和茶氨酸等。

茶多酚的主要成分是儿茶素，儿茶素由若干单体组成，以酯型儿茶素中的表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）的含量较多，约占儿茶素总量的75%，其药理活性也最强。酯型儿茶素可以抑制癌细胞生长，诱导癌细胞分化和凋亡，具有很强的抗癌作用（陈宗懋，2003；Jankun et al., 1997; Tan et al.，2000）。EGCG是抑制乳腺癌、胃癌、胰腺癌、***癌、结肠癌以及黑色素瘤最有效的儿茶素单体（KAVURMA MM, et al., 2005; CHEN D, et al., 2008)，可通过多种途径防止肿瘤的发生和转移（Lambert J D,et al.,2005; Tachibana H, et al.,2004; Shimizu M,et al.,2005）。而ECG在抑制人体病毒侵染、清除脂质自由基方面作用显著。Ravindranath等发现ECG对转移性***癌( DU154) 、中等分化、低分化上皮卵巢癌( HH450 和HH639) 等生殖器官来源的恶性肿瘤的抑制作用较EGCG 显著（MAZIGHI M，et al., 2004）。EGCG、ECG 均能以时间依赖和浓度依赖的方式抑制BEL-7402 细胞生长，并诱导细胞凋亡，EGCG 对人肝癌细胞BEL-7402 细胞的抑制作用较ECG 强（黄莉霞，2013）。公开号为CN1732917A的发明专利公开了一种含 EGCG、ECG、EGC、EC、TFG的抗肿瘤茶叶活性单体组合物，其抗癌活性比单体好。该组合物是茶叶的水提取物或醇提取物的中未经纯化的混合物提取物，按其公开的组合份量组配。专利公开号为CN1757408A的发明专利申请公开了一种防治癌症和肿瘤的绿茶药物及其制备方法与应用，其原料由绿茶茶粉（绿茶为云南大叶、金萱、黄金桂、英红九号中的一种或几种的混合物）、绿茶提取物和分离的单体EGCG、ECG、EGC、EC、TFC等调配而成，对癌细胞的作用能力比单体EGCG强。但以上专利提到的儿茶素单体纯合物均需从茶叶原料中提取纯化再重新配比组合，工艺复杂，价格昂贵，化学方法提取纯化的单体可能存在少量化学残留，大大限制了这些组合物在抗癌方面的应用，而且上述专利的实施例都是体外细胞实验，与体内的抗癌效果存在差异。

咖啡因(caffeine, 1,3,7-trimethyixanthine)同属茶叶中重要的功能性成分，具有提神醒脑、抗氧化、抗癌、抗肥胖、抗菌、抗忧郁、止痛以及利尿等作用。咖啡因能促进UVB辐射诱导人永生化表皮细胞系(HaCaT细胞)细胞凋亡，以确保不可逆损伤细胞和潜在癌细胞的清除功能（雷霞，2011）。韩国专家李昌隽在《Cancer Research》发表论文指出从普通咖啡和绿茶中提取的咖啡因可以有选择地阻止三磷酸肌醇受体活动，从而抑制神经胶质细胞肿瘤生长（李昌隽，2011）。咖啡因是近年来发现的肿瘤化疗增强剂, 可强化抗癌药杀死细胞的作用，与化疗物质顺铂（万双林，2003）、紫杉醇（孙超，2009）、氨甲喋呤（孙刚，2008）和***（王艳萍，2001）等有很好的协同作用。

韩驰（1989）等公开了海南红茶、海南绿茶、福建花茶、福建铁观音和杭州绿茶这5种茶类对甲基苄基亚硝胺（NMBzA)致大鼠食道肿瘤的影响，发现各饮茶组饮茶量一致时，各种茶叶之间的抑瘤效果不同，以福建铁观音和福建花茶效果最好，而海南红茶和绿茶较差，并提出“似乎同一产地的茶作用相似”、“与茶叶的生长环境关系较为密切”。马丽英（1993）等公开了杭州炒青（茶多酚含量18.47%）、福建花茶（茶多酚21.71%）及福建铁观音（茶多酚10.90%）3种茶类具有一定的抗氧化性，福建花茶的茶多酚含量高，抗氧化作用较强。实际上，福建花茶成分复杂，能做花茶的茶树品种比较多，可窨茶的花源也不尽相同，可能是茉莉花、也可能是其他茶用香花。以上研究没有指明具体的茶树品种，也没有具体的活性成分及类型和数量。罗一帆（2006）等用不同品种茶叶对体外癌细胞的抗癌活性进行了研究，结果表明，在控制茶多酚用量一致的条件下，其各种儿茶素的含量却不同，4个品种茶叶的超氧阴离子自由基(O^-2)的清除率(SCR)、诱导凋亡效应和对癌细胞增殖与生长的抑制能力的大小为英红九号>云大>小叶>台茶，说明茶叶品种不同，其化学成分、儿茶素的组成与配比差异较大，这是决定其抗癌作用的物质基础。但未见指出具体成分及其配比，该研究是体外癌细胞实验的结果，未见体内试验结果。

另外，现有专利中茶叶大都以中药制剂成分中的一种用于治疗癌症。如公开号为CN1158698A的中国发明专利涉及一种包括茶叶和枸杞、金银花、茉莉、菊花、红花、甘草及人参等的保健茶。

茶叶抗肿瘤涉及体外抗肿瘤和体内抗肿瘤两方面。体外抗肿瘤研究是茶水与培养基共培养癌细胞，茶水与靶细胞直接接触，再检测其抗肿瘤作用，该环境与体内有较大差异；动物体内的抗肿瘤研究是茶水经动物饮用后经若干代谢途径才能到达靶器官而起到杀死癌细胞或诱导癌细胞凋亡作用，所以本发明采用体外方法先初筛，再进行体内试验，以体内抗肿瘤效果为主要依据。

综上所述，国内外未见能在体外和动物体内高效抑制肿瘤的茶树良种(优良种质、优良品系、优良品种）的选育方法及其茶叶中必须含有的活性成分的种类及其数量的专利和公开资料。

发明内容

本发明在于提供一种抑瘤功能茶树良种的选育方法。

本发明采取的技术方案如下：

本发明的一种抑瘤功能茶树良种的选育方法，采用地理远缘杂交，杂交后代测定茶树鲜叶干物重中生物活性成分的含量，筛选具备茶树基本活性成分含量的基础上，总儿茶素含量≥22%，其中EGCG含量≥12%，儿茶素C含量≥2%，ECG含量≥3.5%；咖啡因含量≥4.5%的种质，即为抑瘤功能茶树良种。

所述选育方法具体包括以下步骤：

1）选择海拔300米以下，相对湿度达90%以上的茶园，所述茶园比普通茶园每年每公顷增施硫酸钾550-650Kg、过磷酸钙300-400Kg以及绿肥钝叶决明（Cassia obtusifolia L.）鲜茎叶8500-9500Kg；

2）引进、种植茶多酚含量占茶叶干重25%以上的地理远缘品种及其杂交后代的株系（如：云南——公弄茶、亥公茶、冰岛大叶茶、勐库大叶茶、云抗10号、宝红茶；福建——八仙、梅占、迎春、春兰、1005、DC-1、HLG-2、MLC-3；湖北——鄂茶5号；湖南——湘红茶1号；广东——乐昌白毛尖、红茵、英红九号；广西——横县小叶种；海南——海南大叶茶等），并测定以下五个指标：总儿茶素含量≥22%、 EGCG含量≥12%、儿茶素C含量≥2%、ECG含量≥3.5%、咖啡因含量≥4.5%，从中筛选出至少达到以上1个指标且父母本指标互补的品种或品系作为地理远缘杂交制种亲本，其中母本达到的指标数≥父本达到的指标数，父本母本毗邻种植，采用人工授粉或蜜蜂传粉，进行简单杂交或多父本杂交；

4）茶果成熟后播种育苗，待苗高20-30cm去除顶芽，在11月份至翌年2月份时将植株高达35cm以上的苗木按品种逐一单株移栽定植；

5) 茶苗科学栽培三年后逐季、逐一单株测定其茶树鲜叶干物重中生物活性成分的含量，在具备茶树基本活性成分含量的基础上，总儿茶素含量≥22%，其中EGCG含量≥12%，儿茶素C含量≥2%，ECG含量≥3.5%；咖啡因含量≥4.5%；按以上指标连续测定三年，若同一单株同一茶季连续三年都达到以上指标，则该单株立即扦插育苗、繁殖，即为抑瘤功能茶树良种。

在儿茶素单体中EGCG抗癌活性最强（李伟，2006）；ECG不仅可抑制多种化学致癌物诱致的突变，还能够抑制一些混合致癌物的致突变作用；C可以通过血液循环进入全身；咖啡因具有抗氧化、抗肿瘤的功能，可以增强抗癌药物杀死癌细胞的功能。该抑瘤功能茶叶的儿茶素总量，特别是其中EGCG、ECG、C的含量以及咖啡因的含量都显著高于普通茶叶，以上各天然活性成分配比科学，形成协同高效的抗肿瘤功能。

本发明还保护了由所述的选育方法得到的抑瘤功能茶，其中所述抑瘤功能茶由所述抑瘤功能茶树良种在生物活性成分的含量达到指标的茶季按一芽一心标准采摘，并进行杀青、烘干，得到抑瘤功能茶。

以及，所述的抑瘤功能茶在制备抗肿瘤药物或保健品中的应用。优选地，所述肿瘤包括肝癌、卵巢癌、***、肺癌、脑星形胶质母细胞瘤、乳腺导管癌、***癌、白血病癌、胃癌、结肠癌、皮肤鳞状细胞癌和胰腺癌。

发明人通过试验证明，抑瘤功能茶对人肝癌HepG2细胞株、人卵巢癌SK-OV-3细胞株、人***Hela细胞株、人肺癌A549细胞株、人脑星形胶质母细胞瘤U-87MG细胞株、人乳腺导管癌BT-474细胞株、人***癌PC-3细胞株、人白血病癌HL-60细胞株、人胃癌SMMC-7721细胞株、人结肠癌HCT-116细胞株、人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株、人白血病癌K562细胞株和人胰腺癌PANC-1细胞株均有体外抗肿瘤作用；特别地，对动物体内的人肝癌细胞移植瘤具有显著的抑制生长作用。无论在体外抗人源癌细胞或动物体内抗肿瘤方面，该茶叶都能体现高效的的抗肿瘤效果，且重复性较好。与现有技术相比，本发明具有如下显著特点：

1、高效抑制肿瘤：本发明的茶叶在体外和动物体内具有高效抑制肿瘤效果，在体外对13种人源癌细胞和对移植动物体内的人肝癌细胞都具有高效抑制癌细胞生长的功能。在现有的专利和公开资料中未见体内抑瘤的效果与化疗物相当、显著高于普通茶叶的抑瘤功能茶及其良种的选育方法。

2、应用方面，既经济又简单易行：本发明的产品是单一良种（品种、品系）制成的茶叶，只需筛选或选育并种植该茶树良种（品系、品种），就可获得具备茶树各种基本活性成分，特别是其中儿茶素总量、EGCG、ECG、C、咖啡因的含量都很高，而且这些组分搭配科学、具有协同作用的茶叶产品，不需与任何其他中药或食品组配，也不需从含量低的大量普通茶叶中分离纯化单体再组配，既经济又简单易行。

3、绿色、纯天然的产品：本发明的茶叶属于纯天然的产品，符合现代人群的要求。该产品不需与任何化学药品或添加剂组配，也不存在化学方法分离纯化单体时残存的化学药物。

具体实施方式

为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，而不是为了限制本发明的范围。

实施例1

实验材料：抑瘤功能茶-1，其选育方法：以福建茶多酚含量高的自然杂交后代品系“DC-1”（四种成分含量达标——EGCG、C、咖啡因和儿茶素总量）为母本，以“八仙”（ECG达标）和地理远缘杂交后代品系“1005”（EGCG和ECG达标），这2个品系为父本进行多父本授粉，茶果成熟后播种育苗，待苗高25cm去除顶芽，在11月份至翌年2月份时将植株高达35cm的苗木按母本品种逐一单株移栽定植；茶苗科学栽培三年后逐季、逐一单株测定其茶树鲜叶干物重中生物活性成分的含量：在具备茶树基本活性成分含量（茶叶干重中：茶多酚20%以上，茶多糖1%-2%，茶氨酸1%-2%，茶黄素1%-5.9%，叶黄素0.14%-0.80%，叶酸0.0005%-0.0007%，胡萝卜素0.06%，维生素C含量 0.6mg/g-2.5mg/g，Se 含量0.001 mg/g。以上成分含量的测定均采用国标法：GB/T8313-2008《茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法》、《蒽酮-硫酸法测定茶多糖的含量》、GB/T 8314-2002《茶游离氨基酸总量测定》、GB/T 30483-2013《茶叶中茶黄素的测定-高效液相色谱法》、《高效液相色谱法测定叶黄素的含量》、GB/T 5009.211-2008《食品中叶酸的测定》、GB/T 5009.83-2003 《食品中胡萝卜素的测定》、GB/T 6195-86《水果、蔬菜维生素C含量测定法（2,6-二氯靛酚滴定法）》、GB/T 21729-2008《茶叶中硒含量的检测方法》）的基础上，总儿茶素含量≥22%，其中EGCG含量≥12%，儿茶素C含量≥2%，ECG含量≥3.5%；咖啡因含量≥4.5%（以上成分含量的测定采用国标法：GB/T8313-2008《茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法》），按以上方法连续筛选三年，选育出五种成分均达到或超过指标的“抑瘤功能茶-1”茶树品种。按一芽一心标准采摘，并进行杀青、烘干，得到“抑瘤功能茶-1”。

实施例2

选育方法同实施例1，不同的是选择总儿茶素含量、 EGCG含量、儿茶素C含量、ECG含量达标的品种为母本，儿茶素C含量、ECG含量、咖啡因含量达标的品种为父本, 选育出五种成分均达到指标的“抑瘤功能茶-2”。

实施例3：体外抗肿瘤实验

实验材料：实施例1得到的“抑瘤功能茶-1”；普通茶叶，由福建农林大学农产品品质研究所提供。2种茶叶的咖啡因和儿茶素及其单体含量如表1-1。

表1-1 咖啡因和儿茶素及其单体含量（%）

其他药品：顺铂水针剂，科鼎 (Faulding)公司生产；表柔比星，辉瑞制药(无锡)有限公司生产；依托泊苷，齐鲁制药有限公司生产；5-氟尿嘧啶注射剂，上海旭东海普药业有限公司生产；吉非替尼，Astra Zeneca UK Limited(英国)生产；格列卫，Novartis Pharma Stein AG（诺华制药公司）生产；EGCG单体(纯度95%)，购自Sigma公司。

细胞株：人肝癌HepG2细胞株、人卵巢癌SK-OV-3细胞株、人***Hela细胞株、人肺癌A549细胞株、人脑星形胶质母细胞瘤U-87MG细胞株、人乳腺导管癌BT-474细胞株、人***癌PC-3细胞株、人白血病癌HL-60细胞株、人胃癌SMMC-7721细胞株、人结肠癌HCT-116细胞株、人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株、人白血病癌K562细胞株和人胰腺癌PANC-1细胞株，购于中科院上海细胞生物研究所。

培养基的配制：

抑瘤功能茶-1和普通茶叶的茶水配制：茶叶磨成细粉，加入沸水冲泡后，过滤取上清，用灭菌水配成100mg/mL的原液，0.22μm微孔滤膜抽滤除菌，再用完全培养基稀释，终浓度为0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.001563、0.000781ug/ml。

EGCG单体的配制：EGCG单体(纯度95%)，用磷酸盐缓冲液溶解，配成5mg/ml，0.22μm微孔滤膜抽滤除菌，再用完全培养基稀释，终浓度为640、320、160、80、40、20、10、5、2.5ug/ml；

阳性对照药物的配制：

实验方法：将各种人源癌细胞培养在相应的培养基中，内含青霉素100 ug/ml，链霉素100ug/ml，于37℃，100%相对湿度，5%CO₂培养箱中传代培养。取对数生长期、汇合率约达到80%的贴壁癌细胞，用0.3%胰酶0.6 ml消化，调整细胞密度为1.0×10⁴个/mL，每孔100μL 接种于96 孔板中（含1000个肿瘤细胞），100 %相对湿度，5% CO₂培养箱中孵育24小时后，给药组加入含有不同浓度药物的完全培养基，每孔100ul，设6-10个剂量组，每组设置6个复孔；对照组以含有等体积溶剂的培养基代替待测化合物；阳性对照组以各种肿瘤相关的化疗物为阳性对照药。细胞置37℃，100%相对湿度，5%CO₂温箱中孵育48h后弃去培养液，加入含10% CCK-8（Cell Counting Kit-8，Dojindo公司）的完全培养基置于37 ℃培养箱中孵育2-4小时。轻轻震荡后在Spectra Max M5 Microplate Reader 酶标仪上测定450nm波长处的吸光度，以650nm 处吸光度作为参比，按下式计算肿瘤细胞抑制率并按Bliss公式计算半数抑制浓度IC50。

肿瘤细胞生长抑制率％＝[(A_c-A_s)/(A_c-A_b)]×100% A_s: 样品的OA (细胞 +CCK-8+待测化合物)

A_c: 阴性对照的OA (细胞+CCK-8+PBS)

A_b: 阳性对照的OA (培养基+CCK-8+PBS)

实验结果：

根据不同药物浓度及对细胞的抑制率进行计算处理，实验得出抑瘤功能茶-1、普通茶叶、EGCG单体以及阳性对照物体外对不同肿瘤细胞株的增殖抑制作用，实验结果见表1-2到1-8。

判断标准：植物粗提物的IC50<30ug/ml，则认为在体外对肿瘤细胞有杀伤活性。

表1-2抑瘤功能茶-1和普通茶叶、5-氟尿嘧啶对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制率

从表1-2中结果可看出，与空白对照组比较，抑瘤功能茶-1体外能显著抑制人肝癌HepG2细胞的增殖（IC50=0.0094 ug/ml），且呈剂量效应。抑瘤功能茶-1 0.05ug/ml剂量对HepG2肝癌细胞增殖的抑制率最高，为83.23%，其效果强于普通茶叶（抑制率最高为75.29%），与肿瘤化疗物5-氟尿嘧啶（剂量为1.25ug/ml时，抑制率最高为89.13%）相当。

表1-3抑瘤功能茶-1和普通茶叶对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制率

表1-4抑瘤功能茶-1和EGCG单体、5-氟尿嘧啶对人癌细胞增殖的抑制率

表1-5 抑瘤功能茶-1和EGCG单体、顺铂对人癌细胞增殖的抑制率

表1-6 抑瘤功能茶-1和EGCG单体、5-氟尿嘧啶对人癌细胞增殖的抑制率

表1-7 抑瘤功能茶-1和EGCG单体、依托泊苷对人白血病癌细胞HL-60增殖的抑制率

表1-8抑瘤功能茶-1和格列卫对人白血病癌K562细胞增殖的抑制率

表1-9 抑瘤功能茶-1和吉非替尼对人胰腺癌PANC-1细胞增殖的抑制率

采用体外（CCK法）对抑瘤功能茶-1进行抗肿瘤效果研究，结果显示：抑瘤功能茶-1对人肝癌HepG2细胞株、人卵巢癌SK-OV-3细胞株、人***Hela细胞株、人肺癌A549细胞株、人脑星形胶质母细胞瘤U-87MG细胞株、人乳腺导管癌BT-474细胞株、人***癌PC-3细胞株、人白血病癌HL-60细胞株、人胃癌SMMC-7721细胞株、人结肠癌HCT-116细胞株、人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株、人白血病癌K562细胞株和人胰腺癌PANC-1细胞株等13株肿瘤细胞的增殖有显著的抑制作用，并且有量效关系。结果表明，该茶叶在体外抗人源癌细胞方面具有高效的抗肿瘤效果，其效果高于EGCG单体，与肿瘤化疗物的抑瘤效果相当。

结论：该茶叶在体外能显著抑制肝癌、卵巢癌、***、肺癌、脑星形胶质母细胞瘤、乳腺导管癌、***癌、白血病癌、胃癌、结肠癌、皮肤鳞状细胞癌和胰腺癌等13种人源肿瘤细胞的生长，其效果高于普通茶叶和EGCG单体，与相应化疗物的抑瘤效果相当。

实施例 4

对人HepG2肝癌细胞裸鼠移植瘤抑制作用的研究

实验材料：同实施例1。

阳性对照药：5-氟尿嘧啶注射剂，上海旭东海普药业有限公司生产。

实验动物：BALB/c-nu/nu 裸鼠，上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，许可证号：SCXK(沪2012-0002)。

细胞株：人肝癌HepG2细胞株，购于中科院上海细胞生物研究所。

实验方法

模型制备：选用雄性BALB/c裸鼠，6～8 周龄，体质量18～22g。培养HepG2人肝癌细胞，当细胞融合度达97%时弃掉培养基，采用胰酶消化法消化细胞，将细胞吹打脱壁后吸入离心管内离心，弃上清液，0.4%台盼蓝染色显示活细胞比率在97%以上，加入PBS液，制成细胞浓度为1×10⁷/mL的细胞悬液，于裸小鼠腋后方皮下注入0.2ml。接种14天后，裸小鼠皮肤表面开始出现1cm³大小的移植瘤，造模成功。

实验分组及抑制肿瘤实验：将上述造模成功后的裸鼠，随机分为3组：模型组、抑瘤功能茶-1组、5-氟尿嘧啶组（或者普通茶叶组），每组动物10-12只。按表2-1中剂量灌胃给药，连续实验35天，停药24小时后，处死动物，剥离肿瘤，称重，计算药物对肿瘤生长的抑制率。疗效采用瘤重抑制率(%) 来评价，评价标准：肿瘤生长抑制率<40%为无效；肿瘤生长抑制率≥ 40%，并经统计学处理P<0.05 为有效。

瘤重抑制率(%)＝(模型组肿瘤质量－实验组肿瘤质量)/模型组瘤质量×100%

实验结果：

实验结果见表2-1、2-2、2-3。

表2-1 抑瘤功能茶-1和5-氟尿嘧啶对人肝癌HepG2细胞裸鼠移植瘤的抑制作用

注：与模型对照组比较，不同小写字母表示差异有统计学意义P＜0.05；不同大写字母表示差异有统计学意义P＜0.01。

由表2-1可看出，经小鼠体内抑瘤试验，结果表明，抑瘤功能茶-1的肿瘤抑制率为84.11%，化疗物（5-氟尿嘧啶）的肿瘤抑制率为80.84%，生物统计没有显著性差异，说明抑瘤功能茶-1与化疗物5-氟尿嘧啶的抑瘤制率相当。

表2-2 抑瘤功能茶-1和5-氟尿嘧啶对人肝癌HepG2细胞裸鼠移植瘤的抑制作用

由表2-2可看出，经小鼠体内抑瘤试验，结果表明，抑瘤功能茶-1的肿瘤抑制率为68.36%，高于化疗物（5-氟尿嘧啶）的肿瘤抑制率（48.96%），差异达到1%的显著水平，说明抑瘤功能茶-1的抑瘤率高于化疗物5-氟尿嘧啶。

表2-3 抑瘤功能茶-1和普通茶叶对人肝癌HepG2细胞裸鼠移植瘤的抑制作用

由表2-3可看出，抑瘤功能茶-1在HepG2人肝癌细胞裸鼠移植瘤模型体内的肿瘤抑制率为63.60%，高于普通茶叶的肿瘤抑制率（18.14%），差异达到1%的显著水平。

结论：本发明的抑瘤功能茶-1与普通茶叶、EGCG单体、化疗物5-氟尿嘧啶等相比，无论在体外抗人源癌细胞或动物体内抗肿瘤方面，该茶叶都能体现高效的的抗肿瘤效果，且重复性较好。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims

1.一种抑瘤功能茶树良种的选育方法，其特征在于：所述选育方法采用地理远缘杂交，杂交后代测定茶树鲜叶干物重中生物活性成分的含量，筛选具备茶树基本活性成分含量的基础上，总儿茶素含量≥22%，其中EGCG含量≥12%，儿茶素C含量≥2%，ECG含量≥3.5%；咖啡因含量≥4.5%的种质，即为抑瘤功能茶树良种。

2.根据权利要求1所述的抑瘤功能茶树良种的选育方法，其特征在于：所述选育方法具体包括以下步骤：

2）引进、种植茶多酚含量占茶树鲜叶干物重25%以上的地理远缘品种及其杂交后代的株系，并测定以下五个指标：总儿茶素含量≥22%、 EGCG含量≥12%、儿茶素C含量≥2%、ECG含量≥3.5%、咖啡因含量≥4.5%，从中筛选出至少达到以上1个指标且父母本指标互补的品种或品系作为地理远缘杂交亲本，其中母本达到的指标数≥父本达到的指标数，父本母本毗邻种植，采用人工授粉或蜜蜂传粉，进行简单杂交或多父本杂交；

3.如权利要求1或2所述的选育方法得到的抑瘤功能茶，其特征在于：所述抑瘤功能茶由所述抑瘤功能茶树良种在生物活性成分的含量达到指标的茶季采制。

4.如权利要求3所述的抑瘤功能茶在制备抗肿瘤药物或保健品中的应用。

5.根据权利要求4所述的抑瘤功能茶的应用，其特征在于：所述肿瘤包括肝癌、卵巢癌、***、肺癌、脑星形胶质母细胞瘤、乳腺导管癌、***癌、白血病癌、胃癌、结肠癌、皮肤鳞状细胞癌和胰腺癌。