CN104755488A - 使用纤维素和纤维素结合域从植物中分离并纯化蛋白质的方法 - Google Patents

使用纤维素和纤维素结合域从植物中分离并纯化蛋白质的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104755488A
CN104755488A CN201380055566.8A CN201380055566A CN104755488A CN 104755488 A CN104755488 A CN 104755488A CN 201380055566 A CN201380055566 A CN 201380055566A CN 104755488 A CN104755488 A CN 104755488A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cellulose
protein
binding domain
sodium
amorphous
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201380055566.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104755488B (zh
Inventor
黄仁焕
朴秀洪
李勇直
孙恩珠
闵庚民
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ba Yiwoaipu Co Ltd
Bioapplications Inc
Original Assignee
Ba Yiwoaipu Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ba Yiwoaipu Co Ltd filed Critical Ba Yiwoaipu Co Ltd
Publication of CN104755488A publication Critical patent/CN104755488A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104755488B publication Critical patent/CN104755488B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/30—Extraction; Separation; Purification by precipitation
    • C07K1/32—Extraction; Separation; Purification by precipitation as complexes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及一种使用不同结构的纤维素和/或其变体从植物分离蛋白质的方法，所述蛋白质含有纤维素结合域。根据本发明的蛋白质的分离方法，由于使用了高亲和性的纤维素结合域，可以快速有效地从植物体中低成本分离大量高纯度的重组蛋白，由此本发明可以应用在各种工业领域中。

Description

使用纤维素和纤维素结合域从植物中分离并纯化蛋白质的方法
技术领域
本发明涉及一种使用不同结构的纤维素和/或其变体分离含有纤维素结合域的蛋白质的方法。
背景技术
纤维素是构成细胞膜和木质部的基本成分，并且是在植物中含量约大于等于30％的一类有机化合物。纤维素是一种多糖，其化学结构由多个通过β-1,4糖苷键连接的D-葡萄糖单元组成，并且在自然状态下，分子量为数万到数十万。纤维素是白色无味固体，不溶于水、乙醇和***，对于碱具有很强的抗性。然而，纤维素在酸中或铜铵液中水解，从而产生大量的作为中间产物的纤维二糖，并最终转化为葡萄糖。由于纤维素是自然界中最丰富的天然资源之一，所以进行了许多利用纤维素的研究。
同时，分解纤维素的纤维素酶具有纤维素结合域(CBD)，并由此特异性地与纤维素结合以有效分解纤维素。研究人员已经做出了各种各样的尝试，通过使这样的纤维素结合域与靶蛋白结合来制备特异性结合纤维素的重组蛋白(韩国专利号10-0618563)。然而，这些尝试仅限于使用微生物制备重组蛋白的方法，但是使用植物的例子尚未被报道。
然而，最近，由于注意力集中在制备植物来源的重组蛋白或疫苗，迫切需要开发使用植物制备大量重组蛋白的方法，及低成本快速分离大量高纯度的重组蛋白的方法。
发明内容
技术问题
本发明的目的在于解决传统的技术问题，因此其涉及提供一种使用不同结构的纤维素和/或其变体分离含有纤维素结合域的蛋白质的方法，以快速简单地分离在植物中大量表达的蛋白质。
然而，本发明完成的技术目的并不限于上述目的，本领域普通技术人员从以下的说明中应当清楚地理解本发明的其它目的。
技术方案
本发明的一方面在于提供一种分离含有纤维素结合域的蛋白质的方法，其包括：
(a)蛋白质结合步骤，其中，混合含有蛋白质的植物提取物和纤维素；
(b)洗涤步骤，其中，除去未结合的蛋白质；和
(c)洗脱步骤，其中，洗脱与纤维素结合的蛋白质。
在本发明的一个实施方案中，纤维素可以是微晶纤维素或无定形纤维素。
在本发明的另一个实施方案中，微晶纤维素的使用量可以是植物提取物的0.5～2倍。
在本发明的还一实施方案中，无定形纤维素的使用量可以是植物提取物的0.1～0.5倍。
在本发明的还一实施方案中，无定形纤维素可以通过以下方法制备，该方法包括：(a)通过将微晶纤维素添加到40～75％的磷酸中并搅拌混合物制备无定形纤维素；并且
(b)向无定形纤维素中添加500mM～1.5M的碳酸钠。
在本发明的还一实施方案中，含有纤维素结合域的蛋白质可能含有由SEQ.ID.NO:2表示的纤维素结合域的氨基酸序列。
在本发明的还一实施方案中，在蛋白质的结合步骤中，可以使用含有10～60mM醋酸钠、10～200mM氯化钠和0.1～3mM氯化钙的缓冲液。
在本发明的还一实施方案中，在洗涤步骤中，可以使用含有10～60mM醋酸钠、10～200mM氯化钠、0.1～3mM氯化钙和0.05～0.2％的TritonX-100的缓冲液。
在本发明的还一实施方案中，在洗脱步骤中，可以使用含有pH值为7.5～10的10～60mM Tris-HCl缓冲液、10～200mM氯化钠、0.1～3mM氯化钙和1～20％纤维二糖的缓冲液。
有益效果
根据本发明的分离含有纤维素结合域的蛋白质的方法，由于纤维素作为亲和基质使用，与常规亲和基质相比，制备方法能够以低成本实现，并且在分离中使用的试剂的含量根据纤维素的种类可以降低。因此，可显著降低分离蛋白质的成本，并能够分离大量蛋白质。此外，由于使用了对于纤维素具有高亲和性的纤维素结合域，通过阻止蛋白质的非特异性结合，可以从总的植物体的提取物中快速分离高纯度蛋白，且低浓度的蛋白质也可以被分离，其中总的植物体的提取物中混合有各种蛋白质。
附图说明
图1示出了用于从植物提取物中分离和纯化蛋白质的无定形纤维素的有效制备的图示。
图2示出了使用微晶纤维素分离的蛋白质的免疫印迹的结果。
图3示出了使用无定形纤维素分离的蛋白质的免疫印迹的结果。
图4示出了使用无定形纤维素分离的蛋白质，其在SDS-PAGE中通过考马斯亮蓝染色进行鉴定。
具体实施方式
本发明提供了一种分离含有纤维素结合域的蛋白质的方法，该方法包括以下步骤：
(a)蛋白质结合步骤，其中，混合含有蛋白质的植物提取物和纤维素；
(b)洗涤步骤，其中，除去未结合的蛋白质；和
(c)洗脱步骤，其中，洗脱与纤维素结合的蛋白质。
经研究，本发明人找到了一种以低成本从植物体中快速分离大量高纯度重组蛋白的方法，完成了本发明。也就是，在本发明的一个示例性的实施方案中，值得指出的是通过使纤维素结合域(CBD)与编码靶蛋白的基因的3’端结合来制备重组载体，该纤维素结合域由SEQ.ID.NO:1的碱基序列或者SEQ.ID.NO:2的氨基酸序列组成，使用该重组载体制备了产生靶蛋白的转基因植物体，并且使用微晶纤维素(MCC)和/或无定形纤维素(AMC)分离靶蛋白(参见实施例1至3)。
如上所述，本发明人认识到使用纤维素，靶蛋白能够容易地从植物体中洗脱，该植物体表达含有纤维素结合域的靶蛋白。
因此，本发明可以提供一种分离含有纤维素结合域的蛋白质的方法。
更特别地，在本发明中，纤维素可以是微晶纤维素或无定形纤维素。此处，微晶纤维素的使用量可以是植物提取物的0.5～2倍，优选地，与植物提取物的使用量相同。无定形纤维素的使用量可以是植物提取物的0.1～0.5倍，但是本发明不限于此，上述使用量可以根据条件，例如，靶蛋白的表达程度进行调整。
此外，可以通过将微晶纤维素添加到40～75％的磷酸中并搅拌混合物制备无定形纤维素，并向无定形纤维素中添加500mM～1.5M的碳酸钠，但本发明不限于此。
在本发明中，含有纤维素结合域的靶蛋白可以是由SEQ.ID.NO:2表示的纤维素结合域的氨基酸序列或与上述氨基酸序列具有基本上相同活性的序列组成的重组蛋白。
此处，“基本上相同活性”意味着纤维素结合域的活性，并且可包括氨基酸序列变体，其功能上与原始的序列相同，但是含有取代、缺失或添加的部分。
在根据本发明的分离含有纤维素结合域的蛋白质的方法中，可以使用含有10～60mM醋酸钠(NaOAC)、10～200mM氯化钠(NaCl)和0.1～3mM氯化钙(CaCl2)的缓冲液进行蛋白质结合步骤，优选地，缓冲液含有50mM醋酸钠、50mM氯化钠和1mM氯化钙。
此外，可以使用含有10～60mM醋酸钠(NaOAC)、10～200mM氯化钠(NaCl)、0.1～3mM氯化钙(CaCl2)和0.05～0.2％的Triton X-100的缓冲液进行洗涤步骤，优选地，缓冲液含有50mM醋酸钠、50mM氯化钠、1mM氯化钙和0.1％Triton X-100。
此外，此处可以使用含有pH值为7.5～10的10～60mM Tris-HCl缓冲液、10～200mM的氯化钠(NaCl)、0.1～3mM的氯化钙(CaCl2)和1～20％纤维二糖的缓冲液进行洗脱步骤，优选地，缓冲液含有pH值为8.8的50mM的Tris-HCl缓冲液、50mM氯化钠、1mM氯化钙和1％纤维二糖。
本文使用的术语“靶蛋白(或蛋白质)”是指一种根据本发明的由基因工程的方法制备的蛋白质，但本发明不特定地限于一种蛋白质。靶蛋白可以包括能够用在商业应用中并需要大量制备的蛋白质。
下文中，为了帮助理解本发明，将对示例性的实施例进行描述。然而，简单地提供了示例性的实施方案使得本发明更容易被理解，但是本发明的范围不限于以下示例性的实施例。
具体实施例
实施例1.转基因植物体的制备
为了制备表达靶蛋白的转基因植物体，通过使纤维素结合域(CBD)结合到编码靶蛋白(猪霍乱病毒糖蛋白gp55)的基因的3'端，将基因***到植物表达载体pCAMBIA 1300中制备重组载体，该纤维素结合域由SEQ.ID.NO:1的碱基序列或者SEQ.ID.NO:2的氨基酸序列组成，将载体转化到根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA-4404菌株中。此外，通过使用农杆菌(Agrobacterium)菌株转化拟南芥(Arabidopsisthaliana)生态型Col-1制备产生靶蛋白的转基因植物体，并且筛选产生靶基因的转基因植物体，所述靶基因与纤维素结合域稳定结合。
实施例2.使用微晶纤维素分离蛋白质
为了使用微晶纤维素(MCC)分离蛋白质，通过向蒸馏水中加入2.5g的微晶纤维素进行水合作用，将微晶纤维素水合物过柱以除去水分。此外，将通过实施例1的方法制备的转基因植物体种植在土壤中，并使其生长大约3周，从而获得除了根以外的植物体，然后将与微晶纤维素的量相同的2.5g的植物体放入研钵中，并使用液氮粉碎。当粉碎的植物体转移到新的管中后，加入提取缓冲液并混合，浓度为每克植物体5ml提取缓冲液，加入0.5X蛋白酶抑制剂，然后通过涡旋混合。此外，植物体通过超声处理10分钟使其均匀化，通过神奇滤布(miracloth)除去碎屑得到植物匀浆。将获得的植物匀浆加入到含有微晶纤维素的柱中，使微晶纤维素与植物匀浆混合，从而纤维素结合域结合到微晶纤维素上，植物匀浆以100μl/min的速率添加至柱体。之后，使用15ml的含有0.1％Triton X-100的洗涤缓冲液[50mM NaOAC(pH 5.2)、50mM NaCl、1mMCaCl2]进行第一次洗涤，使用不含Triton X-100的洗涤缓冲液进行第二次洗涤。通过以200μl/min的速率加入洗脱缓冲液[50mM Tris-HCl(pH 8.8)、50mM NaCl、1mM CaCl2、1％纤维二糖]进行蛋白质的分离。当分离蛋白质时，注意不要使微晶纤维素变干。通过考马斯亮蓝染色鉴定分离的蛋白质，使用与纤维素结合域结合的抗体进行免疫印迹。结果如图2所示。
如图2所示，确定分离了具有靶蛋白大小(660kDa)的蛋白质，其上结合有纤维素结合域。此外，证实了在洗涤步骤(W1至W3)中，与纤维素结合的蛋白质很少被洗脱，但是在洗脱步骤中(E1至E3)，在第三次洗脱中，蛋白质仍然被分离了。
实施例3.使用无定形纤维素分离蛋白质
<3-1>无定形纤维素的制备
为了使用无定形纤维素(AMC)分离蛋白质，使用磷酸在4℃处理微晶纤维素改变纤维素的结晶型。首先，通过使微晶纤维素与5％、10％、40％和80％的磷酸反应制备无定形纤维素，每个反应进行30分钟，并且使用显微镜观察制备的无定形纤维素。结果如图1所示。
如图1所示，可以确定在使用80％的磷酸处理制备的无定形纤维素中，当用磷酸处理后，晶体结构消失，同样可以确定的是，当无定形纤维素填充柱时，加入蒸馏水，蒸馏水没有渗透无定形纤维素。同样可以确定的是，在用40％的磷酸处理无定形纤维素30分钟时，晶体结构消失。根据上述结果，可以确定的是，当40％或更多，或80％或更多磷酸作为处理剂使用时，制备了合适的无定形纤维素，并且用于分离蛋白质。基于此，在以下的实施例中，通过调整磷酸的终浓度使其达到60％来制备无定形纤维素。
将2g的微晶纤维素加入到6ml的蒸馏水中，并搅拌2～3分钟，缓慢加入磷酸，至终浓度达到60％，搅拌至完全混合，并额外搅拌30分钟。将搅拌的溶液分别置于两个不同的管中，向每个管中加入20ml的蒸馏水，与溶液混合，获得的溶液离心(14,000rpm，4℃，10分钟)去上清。向结晶的纤维素中加入2ml的1M Na2CO3，通过涡旋混合，并离心(14,000rpm，4℃，10分钟)，获得的混合液再次去上清，进行以上过程两次以完全去掉上清液，将1ml的1M碳酸钠和20ml蒸馏水加入到纤维素中并通过涡旋混合。此外，再次加入蒸馏水以调整蒸馏水的量，使终体积达到200ml，并在4℃下储存。确定的是该方法制备的无定形纤维素具有稳定的pH 6～9。
<3-2>使用无定形纤维素分离蛋白质
为了使用由实施例3-1描述的方法制备的无定形纤维素(AMC)分离蛋白质，将柱体填充0.5g(50ml)的无定形纤维素。此外，将通过与实施例2中描述的相同的方法制备的植物匀浆以100μl/min的速率加入到填充有无定形纤维素的柱中，并充分混合。之后，以1ml/min的速率加入含有0.1％Triton X-100的4ml的洗涤缓冲液[50mM NaOAC(pH 5.2)、50mM NaCl、1mM CaCl2]，以进行第一次洗涤，通过加入不含TritonX-100的洗涤缓冲液进行第二次洗涤。此外，通过以200μl/min的速率加入洗脱缓冲液[50mM Tris-HCl(pH 8.8)、50mM NaCl、1mM CaCl21％纤维二糖]分离蛋白质。在蛋白质的分离过程中，注意不要干燥无定形纤维素。通过使用与纤维素结合域结合的抗体进行免疫印迹鉴定分离的蛋白质。结果如图3所示。此外，通过考马斯亮蓝染色在SDS-page上鉴定分离的蛋白质。结果如图4所示。
如图3和4所示，确定分离了具有靶蛋白大小(660kDa)的蛋白质，其上结合有纤维素结合域，与当使用微晶纤维素分离的蛋白质的结果一样。此外，在洗涤步骤(W1至W3)中，与纤维素结合的蛋白质很少被洗脱，在洗脱步骤(E1至E2)中，在第一次洗脱中，大量蛋白质被分离，并且洗脱的蛋白质的量在第二次洗脱中降低。根据结果，可以确定的是当使用无定形纤维素时可以缩短洗脱时间。
因此，根据本发明的使用纤维素分离蛋白质的方法，当使用无定形纤维素时，蛋白质的量几乎与使用微晶纤维素时相同，使用无定形纤维素时，洗涤缓冲液和洗脱缓冲液的体积量降低1/5，大约比常规使用量少1/5，最后，分离蛋白质的时间缩短1/5。这意味着，当分离大量蛋白质时，由于降低了此处使用的样本的数量并缩短了分离时间，可以最大化的提高工作效率。
上述说明用于解释本发明，本领域技术人员应当理解的是不改变本发明的技术精神或实质性的特点，本发明可以容易地被修改为不同的类型。因此，应当理解的是上述实施例在所有方面都是示例性的而非限制性实施例。
根据本发明的蛋白质的分离方法，可以以低成本快速有效地从植物体中分离大量高纯度的重组蛋白，由此本发明可以应用在各种工业领域中。
<110>    巴伊沃爱普有限公司
 
<120>    使用纤维素和纤维素结合域从植物中分离并纯化蛋白质的方法
 
<130>    DFP15KR2383
 
<150>    KR 10-2012-0110897
<151>    2012-10-05
 
<160>    2
 
<170>    KopatentIn 2.0
 
<210>    1
<211>    426
<212>    DNA
<213>    梭状芽孢杆菌（Clostridium stercorarium）-纤维素结合域（CBD）氨基酸序列
 
<400>    1
cgaagttcac cagtgcctgc acctggtgat aacacaagag acgcatattc tatcattcag         60
 
gccgaggatt atgacagcag ttatggtccc aaccttcaaa tctttagctt accaggtggt        120
 
ggcagcgcca ttggctatat tgaaaatggt tattccacta cctataaaaa tattgatttt        180
 
ggtgacggcg caacgtccgt aacagcaaga gtagctaccc agaatgctac taccattcag        240
 
gtaagattgg gaagtccatc gggtacatta cttggaacaa tttacgtggg gtccacagga        300
 
agctttgata cttataggga tgtatccgct accattagta atactgcggg tgtaaaagat        360
 
attgttcttg tattctcagg tcctgttaat gttgactggt ttgtattctc aaaatcagga        420
 
acttct                                                                   426
  
<210>    2
<211>    142
<212>    PRT
<213>   梭状芽孢杆菌（Clostridium stercorarium）-纤维素结合域（CBD）氨基酸序列
 
<400>    2
Arg Ser Ser Pro Val Pro Ala Pro Gly Asp Asn Thr Arg Asp Ala Tyr
  1               5                  10                  15
 
Ser Ile Ile Gln Ala Glu Asp Tyr Asp Ser Ser Tyr Gly Pro Asn Leu
             20                  25                  30
 
Gln Ile Phe Ser Leu Pro Gly Gly Gly Ser Ala Ile Gly Tyr Ile Glu
         35                  40                  45
 
Asn Gly Tyr Ser Thr Thr Tyr Lys Asn Ile Asp Phe Gly Asp Gly Ala
     50                  55                  60
 
Thr Ser Val Thr Ala Arg Val Ala Thr Gln Asn Ala Thr Thr Ile Gln
 65                  70                  75                  80
 
Val Arg Leu Gly Ser Pro Ser Gly Thr Leu Leu Gly Thr Ile Tyr Val
                 85                  90                  95
 
Gly Ser Thr Gly Ser Phe Asp Thr Tyr Arg Asp Val Ser Ala Thr Ile
            100                 105                 110
 
Ser Asn Thr Ala Gly Val Lys Asp Ile Val Leu Val Phe Ser Gly Pro
        115                 120                 125
 
Val Asn Val Asp Trp Phe Val Phe Ser Lys Ser Gly Thr Ser
    130                 135                 140  
 

Claims (9)

1. 一种分离含有纤维素结合域的蛋白质的方法，包括：
(a) 蛋白质结合步骤，其中，混合含有蛋白质的植物提取物和纤维素；
(b) 洗涤步骤，其中，除去未结合的蛋白质；和
(c) 洗脱步骤，其中，洗脱与纤维素结合的蛋白质。
2. 根据权利要求1所述的方法，其中所述纤维素包括微晶纤维素或无定形纤维素。
3. 根据权利要求2所述的方法，其中所述微晶纤维素的使用量是植物提取物使用量的0.5~2倍。
4. 根据权利要求2所述的方法，其中所述无定形纤维素的使用量是植物提取物使用量的0.1 ~0.5倍。
5. 根据权利要求2所述的方法，其中所述无定形纤维素通过以下方法制备，所述方法包括：
(a) 通过将微晶纤维素加入到40~75%的磷酸中并搅拌混合物制备无定形纤维素；和
(b) 向无定形纤维素中加入500 mM~1.5 M的碳酸钠(Na2CO3)。
6. 根据权利要求1所述的方法，其中含有纤维素结合域的蛋白质是重组蛋白，所述重组蛋白由SEQ. ID. NO: 2表示的纤维素结合域的氨基酸序列组成。
7. 根据权利要求1所述的方法，其中，使用含有10~60 mM醋酸钠、10~ 200 mM氯化钠和0.1~3 mM氯化钙的缓冲液进行所述蛋白质结合步骤。
8. 根据权利要求1所述的方法，其中，使用含有10~60 mM醋酸钠、10~200 mM氯化钠、0.1~3 mM氯化钙和0.05~0.2 %的Triton X-100的缓冲液进行所述洗涤步骤。
9. 根据权利要求1所述的方法，其中，使用含有pH 值为7.5~10的10~60 mM Tris-HCl 缓冲液、10~200 mM氯化钠、0.1~3 mM 氯化钙和1~ 20 % 纤维二糖的缓冲液进行所述洗脱步骤。
CN201380055566.8A 2012-10-05 2013-09-25 使用纤维素和纤维素结合域从植物中分离并纯化蛋白质的方法 Active CN104755488B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2012-0110897 2012-10-05
KR1020120110897A KR101507207B1 (ko) 2012-10-05 2012-10-05 식물에서 셀룰로오즈와 셀룰로오즈 결합 도메인을 사용하여 단백질을 분리정제하는 방법
PCT/KR2013/008599 WO2014054865A1 (ko) 2012-10-05 2013-09-25 식물에서 셀룰로오즈와 셀룰로오즈 결합 도메인을 사용하여 단백질을 분리정제하는 방법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104755488A true CN104755488A (zh) 2015-07-01
CN104755488B CN104755488B (zh) 2018-05-15

Family

ID=50435168

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201380055566.8A Active CN104755488B (zh) 2012-10-05 2013-09-25 使用纤维素和纤维素结合域从植物中分离并纯化蛋白质的方法

Country Status (5)

Country Link
US (1) US9512173B2 (zh)
EP (1) EP2905287B1 (zh)
KR (1) KR101507207B1 (zh)
CN (1) CN104755488B (zh)
WO (1) WO2014054865A1 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106884030A (zh) * 2015-12-16 2017-06-23 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 提高含纤维素结合域的融合蛋白的发酵产量的方法
CN110709518A (zh) * 2017-05-11 2020-01-17 巴伊沃爱普有限公司 携带纤维素结合域的重组载体和用该载体分离并纯化蛋白质的方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1125452A (zh) * 1993-04-14 1996-06-26 加州大学评议会 纤维素结合区域
WO2005023981A2 (en) * 2003-09-09 2005-03-17 Zephyr Proteomix Ltd. Libraries of chimeric cellulose binding proteins and methods of use thereof
WO2007146944A2 (en) * 2006-06-16 2007-12-21 Syngenta Participations Ag Catalytically inactive proteins and method for recovery of enzymes from plant-derived materials
CN101899463A (zh) * 2010-07-05 2010-12-01 山东大学 一种带有纤维素吸附域的β-半乳糖苷酶及其应用

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4058411A (en) * 1976-08-30 1977-11-15 General Electric Company Decrystallization of cellulose
AU2002230784A1 (en) * 2000-11-10 2002-05-21 Xencor Novel thermostable alkaliphilic xylanase
US7834161B2 (en) * 2003-08-27 2010-11-16 Orf Liftaekni Hf. Process for proteolytic cleavage and purification of recombinant proteins produced in plants
KR100618563B1 (ko) 2003-10-29 2006-08-31 한국생명공학연구원 셀룰로오스 결합 도메인을 이용한 효모에서 재조합단백질의 제조방법
ES2348843B1 (es) 2009-05-14 2011-10-07 Blanver Farmoquimica Ltda. Procedimiento para la preparacion de celulosa microcristalina.

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1125452A (zh) * 1993-04-14 1996-06-26 加州大学评议会 纤维素结合区域
WO2005023981A2 (en) * 2003-09-09 2005-03-17 Zephyr Proteomix Ltd. Libraries of chimeric cellulose binding proteins and methods of use thereof
WO2007146944A2 (en) * 2006-06-16 2007-12-21 Syngenta Participations Ag Catalytically inactive proteins and method for recovery of enzymes from plant-derived materials
CN101899463A (zh) * 2010-07-05 2010-12-01 山东大学 一种带有纤维素吸附域的β-半乳糖苷酶及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BLUM DL等: "AAM56313.1", 《GENBANK》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106884030A (zh) * 2015-12-16 2017-06-23 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 提高含纤维素结合域的融合蛋白的发酵产量的方法
CN110709518A (zh) * 2017-05-11 2020-01-17 巴伊沃爱普有限公司 携带纤维素结合域的重组载体和用该载体分离并纯化蛋白质的方法
CN110709518B (zh) * 2017-05-11 2023-08-15 巴伊沃爱普有限公司 携带纤维素结合域的重组载体和用该载体分离并纯化蛋白质的方法

Also Published As

Publication number Publication date
US20150274772A1 (en) 2015-10-01
WO2014054865A1 (ko) 2014-04-10
EP2905287A4 (en) 2016-03-09
US9512173B2 (en) 2016-12-06
KR101507207B1 (ko) 2015-03-31
KR20140044656A (ko) 2014-04-15
EP2905287B1 (en) 2019-05-22
EP2905287A1 (en) 2015-08-12
CN104755488B (zh) 2018-05-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110709518B (zh) 携带纤维素结合域的重组载体和用该载体分离并纯化蛋白质的方法
Ralet et al. Xylans provide the structural driving force for mucilage adhesion to the Arabidopsis seed coat
CN105985968A (zh) 改进的广谱核酸内切酶及其工业生产方法
CN109439642A (zh) 糖苷水解酶家族61蛋白基因及其蛋白和制备方法
CN108690854B (zh) 一种利用化学-酶法生产l-草铵膦的方法
TW201617360A (zh) 用於純化蛋白質之方法及試劑
CN104755488A (zh) 使用纤维素和纤维素结合域从植物中分离并纯化蛋白质的方法
CN109280672A (zh) 重组纤维素内切酶基因及其蛋白和蛋白制备方法
JP6592500B2 (ja) フィダキソマイシンの精製方法
Freitas et al. Bare silica as an alternative matrix for affinity purification/immobilization of His-tagged proteins
AU690604B2 (en) Plant arabinogalactan protein (AGP) genes
EP4143331A2 (en) Fusion polypeptides for target peptide production
CN107119058B (zh) 一种ms2衣壳蛋白融合表达方法及其应用
AU2004269198A1 (en) A process for proteolytic cleavage and purification of recombinant proteins produced in plants
CN108570118B (zh) 一种胎盘样硫酸软骨素a或其衍生物的亲和层析纯化方法
Chen et al. Identification and characterization of four nicotianamine synthase genes in Sedum alfredii Hance
CN104946705A (zh) 一种连续化生产c-di-AMP的方法
KR102010061B1 (ko) 신규한 셀룰로오스 결합 도메인의 염기서열, 이를 포함하는 재조합 벡터 및 이를 활용한 단백질 분리정제 방법
Tan et al. Cellulose and its application in biomolecules purification
CN107723311A (zh) 一种与植物种子粒重相关的TaCKX2‑3D蛋白及其编码基因与应用
CN106566819B (zh) 一种低温嗜盐α—淀粉酶的基因克隆、表达及分离纯化方法
CN111218464A (zh) 一种海带甘露糖醛酸c5-异构酶的基因及其应用
CN101191131A (zh) 提莫菲维小麦高分子量谷蛋白Gy7*基因及其应用
CN111269922A (zh) 一种用于提高β-胡萝卜素含量的基因及其编码的蛋白和应用
CN103667293A (zh) 一种克隆山核桃中CcPIP启动子序列的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant