CN104718223A - 具有抗原结合和多价FCγ受体结合活性的分子 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及被称为斯塔都体的生物学活性蛋白质。所述斯塔都体具有产生斯塔都体多聚体的两个或更多个结构域。所述斯塔都体具有抗原结合能力和结合Fc受体(FcR)的能力，并且可用于治疗和预防疾病。

Description

具有抗原结合和多价FCγ受体结合活性的分子
相关申请的交叉引用
本申请要求于2012年8月20日提交的美国临时申请号61/691,057和于2013年3月14日提交的美国临时申请号61/785,144的优先权，所述申请的内容通过引用整体并入本文。
以电子方式提交的文本文件的描述
随本文以电子方式提交的文本文件的内容通过引用整体并入本文：序列表的计算机可读格式副本(文件名：GLIK_009_01US_310975_2048_SeqList_ST25.txt，记录日期：2013年3月12日，文件大小329千字节)。
发明领域
本发明总体上涉及免疫学、自身免疫、炎症、传染病和肿瘤免疫学领域。更具体地说，本发明涉及包含免疫球蛋白Fc结构域和Fab结构域的生物学活性生物模拟分子、包含这类生物模拟物的组合物和制备及使用这类生物模拟物的方法。
发明背景
单克隆抗体(mAb)疗法是医学中的一个重要且不断增长的部分。无论在美国或是欧洲，已批准超过30种单克隆抗体用于各种免疫疾病、传染病和癌症，且数百种正在研究中。然而，在单克隆抗体疗法开发中的一个常见问题是尽管存在Fab和FcR结合但缺乏足够效力。因为通常有必要用高剂量以便实现疗效，所以不利副作用往往与治疗性抗体相关联。此外，肿瘤和其它靶抗原的低表达或改变的表达，以及影响抗体靶标或抗体结合的下游效应的基因突变可致使抗体疗法无效。作为一个实例，单克隆抗体曲妥珠单抗是特异性对抗HER2/neu乳腺癌抗原的mAb，并且能以商品名商购获得，其已被美国食品和药物管理局批准用于治疗乳腺癌。曲妥珠单抗可能在高度表达HER2/neu的患者中有效；然而，大约90％的乳腺癌患者患有未被归类为高度表达HER2/neu的肿瘤。作为另一个实例，西妥昔单抗(特异性对抗表皮生长因子受体(EGFR)的mAb，并且能以商品名商购获得)已被美国食品和药物管理局批准用于治疗结肠癌。西妥昔单抗阻断EGFR且阻止下游KRAS蛋白依赖性肿瘤增生途径。从临床角度看，西妥昔单抗可以改良具有野生型(WT)KRAS肿瘤的患者的整体反应率以及无疾病进展存活期。不幸的是，30％-60％的结肠癌患者的肿瘤具有密码子12或13KRAS突变，且最近的临床试验表明，具有突变KRAS的患者未受益于西妥昔单抗的治疗(汇总于Allegra等,Journal of Clinical Oncology，2009年4月20日；27(12):2091-6)。因此，需要用于治疗癌症以及用于治疗自身免疫性病症和炎性疾病的新的基于类抗体的治疗剂。
由抗体所致的免疫细胞且尤其是自然杀伤(NK)细胞上的Fc受体，特别是低亲和力受体，诸如FcγRIIIa的接合和聚集导致标靶肿瘤或细胞在被称为抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的过程中活化、脱粒和溶解。也可以通过以下方式杀伤肿瘤细胞和免疫***所靶向的其它细胞：通过补体依赖性细胞毒性(CDC)，其中抗体结合补体，从而导致细胞毒性；或通过抗体与抗原在不存在NK细胞或补体的情况下直接结合所致的直接细胞毒性(DC)；或通过其它机制，诸如诱导细胞凋亡，或干扰细胞生长或过程。目前，现有技术中需要鉴别增加ADCC、CDC、DC和杀伤肿瘤细胞或其它细胞的其它机制的手段，由此增加mAb疗法的效力。具体地说，当用于细胞杀伤的补体依赖性途径是全功能途径时，CDC可以是一种用于杀伤癌细胞和其它靶细胞的有效方法。然而，由于细胞膜修复机制和诸如抑制补体途径的CD59等调节蛋白，许多细胞具有CDC抗性。例如，尽管B细胞淋巴瘤和白血病细胞上的CD20表达水平较高，但至少部分是由于补体抑制机制，患有B细胞恶性肿瘤的许多患者对用抗CD20单克隆抗体利妥昔单抗治疗无反应或具有抗性(Harjunpaa等,Scand.J.Immunol,200051；634-641)。因此，特别需要能够增加CDC的分子。
发明概述
本发明涉及包含免疫球蛋白Fc结构域、Fab结构域和多聚化结构域的生物学活性生物模拟分子；包含这类生物模拟物的组合物；和制备及使用这类生物模拟物的方法。这些生物模拟物广泛应用于治疗癌症、炎性、自身免疫性和传染病病状，其中单克隆抗体可用于或已用于临床应用中。与其Fab跟本发明的生物模拟物中所包含的Fab相同的mAb相比，本发明的生物模拟物的优点是具有更有效的抗体介导的细胞毒性、补体介导的细胞毒性和补体c1q结合。与其Fab对相同抗原具有特异性的mAb相比，本发明的生物模拟物还具有更有效的补体依赖性细胞毒性和直接细胞毒性的优点。
WO 2008/151088公开了优选在斯塔都聚体(stradomer)的情况下使用包含与一个或多个Fab结构域连接的两个或更多个Fc结构域的生物模拟分子来治疗病理学病状，包括癌症、自身免疫疾病及其它炎性病状和传染病。WO2008/151088通过引用整体并入本文。WO 2008/151088中所公开的包含Fab的分子被称为“斯塔都体(stradobody)”，且拥有单克隆抗体的Fab部分的抗原结合性质和斯塔都聚体的Fc受体结合性质。因此，这些斯塔都体同时结合、交联并活化效应细胞上的多个Fcγ受体，从而产生无法通过各个mAb或免疫球蛋白Fc骨架与各个Fcγ受体结合而实现的亲合力，即使经由Fc诱变、脱岩藻糖基化或能提高各个mAb与各个Fcγ受体之间的亲和力的其它方法加以优化。效应细胞上的Fcγ受体的多价结合在低表位表达的环境中特别重要。低表位表达导致mAb Fab结合事件过于孤立而不能在效应细胞上足够邻近处产生足够密度的Fc-Fcγ受体结合事件以引起效应细胞上的低亲和力Fcγ受体的下游活化。然而，如本文所公开，除Fab和Fc结构域之外，包括一个或多个多聚化结构域增强斯塔都体的FcγR结合活性，从而导致亲合力的缓慢解离特征以及抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、补体介导的细胞毒性(CDC)、直接细胞毒性(DC)、强补体clq结合和/或细胞毒性的其它机制。具体地说，多聚化结构域位于两个Fc结构域之间或本文所公开的斯塔都体中的Fc区的羧基端处。令人惊讶的是，包含两个特定多聚化结构域、异亮氨酸拉链和IgG2铰链的斯塔都体产生特别强的多聚化、对抗靶细胞的高细胞毒性和高的c1q结合。
Nagashima等(Journal of Bioscience and Bioengineering 111(4):391-6(2011)和Molecular Immunology 45(10):2752-63(2008))描述了如WO2008/151088所预期的具有Fc结构域的串联重复序列的连续斯塔都体，其产生的ADCC相对于源自它们的亲本单克隆抗体(即，包含相同的Fab区)有所增强。然而，由于多聚化结构域，本发明的斯塔都体导致斯塔都体同源二聚体多聚化，当与诸如Nagashima和别处所描述的那些非多聚复合物相比时，这继而增加能够同时结合FcγR的Fc结构域的数目且最终产生非常优良的结合和细胞毒性。
在一个方面，本发明涉及一种斯塔都体，其包含Fab结构域、一个或多个Fc结构域和一个或多个多聚化结构域。在另一实施方案中，所述一个或多个多聚化结构域能够使所述斯塔都体多聚化。在一个实施方案中，所述一个或多个多聚化结构域中的至少一个分隔两个或更多个Fc结构域。在另一个实施方案中，所述一个或多个多聚化结构域中的至少一个位于所述Fc区的羧基端。在一个优选实施方案中，一个或多个Fc结构域是IgG1Fc结构域。
在一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其包含Fab结构域、一个或多个Fc结构域和一个或多个多聚化结构域，其中所述一个或多个多聚化结构域能够使所述斯塔都体多聚化。在另一个实施方案中，所述多聚化结构域独立地选自异亮氨酸拉链、IgG2铰链和GPP重复序列。在另一个实施方案中，所述斯塔都体包含两个多聚化结构域。在另一实施方案中，所述两个多聚化结构域独立地选自异亮氨酸拉链、IgG2铰链和GPP重复序列。在另一实施方案中，所述两个多聚化结构域是异亮氨酸拉链和IgG2铰链。在另一实施方案中，所述两个多聚化结构域都是IgG2铰链。在另一个实施方案中，所述两个多聚化结构域都是异亮氨酸拉链。在另一个实施方案中，所述斯塔都体包含三个多聚化结构域。在另一个实施方案中，所述斯塔都体包含四个或更多个多聚化结构域。
在一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其包含Fab结构域、一个或多个Fc结构域和一个或多个多聚化结构域，其中所述一个或多个多聚化结构域能够使所述斯塔都体多聚化，且其中所述一个或多个多聚化结构域中的至少一个是异亮氨酸拉链。在另一实施方案中，所述至少一个异亮氨酸拉链是根据SEQ ID NO:32，且能够使所述斯塔都体多聚化。在另一个实施方案中，所述一个或多个多聚化结构域中的至少一个是IgG2铰链结构域。在另一实施方案中，所述至少一个IgG2铰链结构域是根据SEQ ID NO:3，且能够使所述斯塔都体多聚化。在另一个实施方案中，所述一个或多个多聚化结构域中的至少一个是GPP结构域。在另一实施方案中，所述至少一个GPP结构域包含根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列，且能够使所述斯塔都体多聚化。
在一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其包含Fab结构域、一个或多个Fc结构域和一个或多个多聚化结构域，其中所述一个或多个多聚化结构域能够使所述斯塔都体多聚化。在另一实施方案中，至少一个Fc结构域是IgG1 Fc结构域，且所述至少一个Fc结构域包含IgG1 CH2和IgG1 CH3。在另一实施方案中，所述Fc结构域包含IgG1铰链、IgG1 CH2和IgG1 CH3。在另一个实施方案中，所述斯塔都体包含多于一个Fc结构域。在另一实施方案中，所述多于一个Fc结构域各自为IgG1 Fc结构域。在另一实施方案中，所述多于一个Fc结构域各自为IgG3 Fc结构域。在另一实施方案中，所述多于一个Fc结构域各自为IgG2 Fc结构域。在另一实施方案中，所述多于一个Fc结构域各自为IgG4 Fc结构域。在另一实施方案中，所述多于一个Fc结构域由IgG1 Fc结构域和IgG2 Fc结构域、IgG3 Fc结构域或IgG4 Fc结构域构成。
在一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、第一Fc结构域、第一多聚化结构域、第二多聚化结构域和第二Fc结构域。在另一实施方案中，所述Fc结构域中至少一个是IgG1Fc结构域。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、第一Fc结构域、IgG2铰链、异亮氨酸拉链和第二Fc结构域。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、第一Fc结构域、异亮氨酸拉链、IgG2铰链和第二Fc结构域。在一个特别优选的实施方案中，所述第一Fc结构域、异亮氨酸拉链、IgG2铰链和第二Fc结构域共同包含根据SEQ ID NO:69的氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、第一Fc结构域、IgG2铰链、第二IgG2铰链和第二Fc。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、第一Fc结构域、异亮氨酸拉链、第二异亮氨酸拉链和第二Fc结构域。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、第一Fc结构域、异亮氨酸拉链和第二Fc结构域。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、第一Fc结构域、IgG2铰链和第二Fc结构域。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、第一Fc结构域、G4S结构域、IgG2铰链和第二Fc结构域。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、第一Fc结构域、IgG2铰链、G4S结构域和第二Fc结构域。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、第一Fc结构域、G4S结构域、异亮氨酸拉链、第二Fc结构域。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、第一Fc结构域、异亮氨酸拉链、G4S结构域和第二Fc结构域。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、第一Fc结构域、GPP结构域和第二Fc结构域。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、第一Fc结构域、GPP结构域、IgG2铰链和第二Fc结构域。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、第一Fc结构域、IgG2铰链、GPP结构域和第二Fc结构域。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、第一Fc结构域、GPP结构域、异亮氨酸拉链和第二Fc结构域。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、第一Fc结构域、异亮氨酸拉链、GPP结构域和第二Fc结构域。熟练技术人员将认识到可以使用其它多聚化结构域代替此处描述的多聚化结构域。
在另一实施方案中，所述第一Fc结构域和所述第二Fc结构域是IgG1Fc结构域。在另一个实施方案中，至少一个IgG1Fc结构域包含IgG1CH2和IgG1CH3。在另一实施方案中，所述IgG1Fc结构域还包含IgG1铰链。
在一个实施方案中，本发明涉及一种组合物，所述组合物包含多聚化斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、第一Fc结构域、第一多聚化结构域、第二多聚化结构域和第二Fc结构域。
在一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、单一Fc结构域、第一多聚化结构域和第二多聚化结构域。在另一实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、单一Fc结构域、异亮氨酸拉链和IgG2铰链。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、Fc结构域、IgG2铰链和异亮氨酸拉链。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、Fc结构域和IgG2铰链。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、Fc结构域、IgG2铰链和第二IgG2铰链。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、Fc结构域和异亮氨酸拉链。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、Fc结构域、异亮氨酸拉链和第二异亮氨酸拉链。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、Fc结构域、G4S结构域和IgG2铰链。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、Fc结构域、IgG2铰链和G4S结构域。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、Fc结构域、G4S结构域和异亮氨酸拉链。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、Fc结构域、异亮氨酸拉链和G4S结构域。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、Fc结构域、结构域连接和IgG2铰链。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、Fc结构域、结构域连接和异亮氨酸拉链。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、Fc结构域、IgG2铰链和结构域连接。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、Fc结构域、异亮氨酸拉链和结构域连接。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、Fc结构域和GPP结构域。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、Fc结构域、GPP结构域和IgG2铰链。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、Fc结构域、IgG2铰链和GPP结构域。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、Fc结构域、GPP结构域和异亮氨酸拉链。在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、Fc结构域、异亮氨酸拉链和GPP结构域。熟练技术人员将认识到可以使用其它多聚化结构域代替此处描述的多聚化结构域。
在另一实施方案中，所述Fc结构域是IgG1Fc结构域。在另一实施方案中，所述IgG1Fc结构域包含IgG1CH2和IgG1CH3。在另一实施方案中，所述IgG1Fc结构域还包含IgG1铰链。
在一个实施方案中，本发明涉及一种组合物，所述组合物包含多聚化斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、Fc结构域、第一多聚化结构域和第二多聚化结构域。
在另一个实施方案中，所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、两个或更多个Fc结构域和一个或多个多聚化结构域。在另一实施方案中，所述Fc结构域是IgG1Fc结构域。
在一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、第一Fc结构域、一个或多个多聚化结构域和第二Fc结构域。在另一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、第一Fc结构域和一个或多个多聚化结构域。在另一实施方案中，所述斯塔都体还在Fc区的C末端处包含一个或多个多聚化结构域。在另一实施方案中，所述Fc结构域中的一个或多个是IgG1Fc结构域。
在一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其包含Fab结构域、一个或多个Fc结构域和一个或多个多聚化结构域，其中所述一个或多个多聚化结构域能够使所述斯塔都体多聚化，且其中所述Fab结构域对EGFR具有特异性。在一个实施方案中，所述Fab结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:31具有至少80％同源性。在另一实施方案中，所述Fab结构域的氨基酸序列与SEQ IDNO:31具有至少90％同源性。在另一实施方案中，所述Fab结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:31具有至少95％同源性。在另一实施方案中，所述Fab结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:31具有至少99％同源性。在另一实施方案中，所述Fab结构域的氨基酸序列是SEQ ID NO:31。在一些实施方案中，所述一个或多个Fc结构域是IgG1Fc结构域。
在一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其中所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:33具有至少80％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:33具有至少85％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:33具有至少90％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:33具有至少95％同源性。在另一实施方案中，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:33具有至少99％同源性。在另一实施方案中，所述氨基酸序列是SEQ ID NO:33。
在一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其中所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:70具有至少80％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:70具有至少85％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:70具有至少90％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:70具有至少95％同源性。在另一实施方案中，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:70具有至少99％同源性。在另一实施方案中，所述氨基酸序列是SEQ ID NO:70。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其包含Fab结构域、一个或多个Fc结构域和一个或多个多聚化结构域，其中所述一个或多个多聚化结构域能够使所述斯塔都体多聚化，且其中所述Fab结构域对HER2/neu抗原具有特异性。在一个实施方案中，所述Fab结构域的氨基酸序列与SEQ IDNO:34具有至少80％同源性。在另一实施方案中，所述Fab结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:34具有至少90％同源性。在另一实施方案中，所述Fab结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:34具有至少95％同源性。在另一实施方案中，所述Fab结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:34具有至少99％同源性。在另一实施方案中，所述Fab结构域的氨基酸序列是SEQ ID NO:34。在一些实施方案中，所述一个或多个Fc结构域是IgG1 Fc结构域。
在一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其中所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:35具有至少80％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:35具有至少85％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:35具有至少90％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:35具有至少95％同源性。在另一实施方案中，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:35具有至少99％同源性。在另一实施方案中，所述氨基酸序列是SEQ ID NO:35。熟练技术人员应理解，斯塔都体且特别是多聚化斯塔都体可以利用对抗任何肿瘤抗原的Fab容易地产生。
在一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其中所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:91具有至少80％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:91具有至少85％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:91具有至少90％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:91具有至少95％同源性。在另一实施方案中，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:91具有至少99％同源性。在另一实施方案中，所述氨基酸序列是SEQ ID NO:91。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其包含Fab结构域、一个或多个Fc结构域和一个或多个多聚化结构域，其中所述一个或多个多聚化结构域能够使所述斯塔都体多聚化，且其中所述Fab结构域对CD20具有特异性。在一个实施方案中，所述Fab结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:36具有至少80％同源性。在另一实施方案中，所述Fab结构域的氨基酸序列与SEQID NO:36具有至少90％同源性。在另一实施方案中，所述Fab结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:36具有至少95％同源性。在另一实施方案中，所述Fab结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:36具有至少99％同源性。在另一实施方案中，所述Fab结构域的氨基酸序列是SEQ ID NO:36。在一些实施方案中，所述一个或多个Fc结构域是IgG1Fc结构域。
在一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其中所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:37具有至少80％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:37具有至少85％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:37具有至少90％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:37具有至少95％同源性。在另一实施方案中，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:37具有至少99％同源性。在另一实施方案中，所述氨基酸序列是SEQ ID NO:37。
在一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其中所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:76具有至少80％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:76具有至少85％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:76具有至少90％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:76具有至少95％同源性。在另一实施方案中，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:76具有至少99％同源性。在另一实施方案中，所述氨基酸序列是SEQ ID NO:76。
在一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其包含Fab结构域、一个或多个Fc结构域和一个或多个多聚化结构域，其中所述一个或多个多聚化结构域能够使所述斯塔都体多聚化，且其中所述Fab结构域对TNF超家族成员具有特异性。TNF超家族成员包括而不限于TNF、TNF-α、TNF-β、淋巴毒素(LT)、淋巴毒素β(LTβ)、OX40配体、CD40配体、CD95/Fas配体、CD27配体(CD70)、CD30配体、CD137/4-1BB配体、TRAIL、TRANCE/RANKL、TWEAK/Apo-3、APRIL、BAFF/Blys、LIGHT、TL1A/VEGI、GITR配体、EDA-A1和EDA-A2。在一个实施方案中，所述斯塔都体包含对TNF具有特异性的Fab结构域(即，抗TNF斯塔都体；例如，斯塔都体GB7542)。在另一个实施方案中，所述斯塔都体包含对Blys具有特异性的Fab结构域(即，抗Blys斯塔都体)。在另一个实施方案中，所述斯塔都体包含对TRAIL具有特异性的Fab结构域(即，抗TRAIL斯塔都体)。在另一个实施方案中，所述斯塔都体包含对OX40L具有特异性的Fab结构域(即，抗OX40L斯塔都体)。在另一个实施方案中，所述斯塔都体包含对4-1BB具有特异性的Fab结构域(即，抗4-1BB斯塔都体)。在另一个实施方案中，所述斯塔都体包含对APRIL具有特异性的Fab结构域(即，抗APRIL斯塔都体)。在另一个实施方案中，所述斯塔都体包含对TRANCE具有特异性的Fab结构域(即，抗TRANCE斯塔都体)。在另一个实施方案中，所述斯塔都体包含对LTβ具有特异性的Fab结构域(即，抗LTβ斯塔都体)，在另一个实施方案中，所述斯塔都体包含对CD40L具有特异性的Fab结构域(即，抗CD40L斯塔都体)。熟练技术人员应理解，斯塔都体且特别是多聚化斯塔都体可以利用对抗任何免疫细胞表面受体的Fab容易地产生。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其包含Fab结构域、一个或多个Fc结构域和一个或多个多聚化结构域，其中所述一个或多个多聚化结构域能够使所述斯塔都体多聚化，且其中所述Fab结构域对TNF具有特异性。在一个实施方案中，所述Fab结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:67具有至少80％同源性。在另一实施方案中，所述Fab结构域的氨基酸序列与SEQID NO:67具有至少90％同源性。在另一实施方案中，所述Fab结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:67具有至少95％同源性。在另一实施方案中，所述Fab结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:67具有至少99％同源性。在另一实施方案中，所述Fab结构域的氨基酸序列是SEQ ID NO:67。在一些实施方案中，所述一个或多个Fc结构域是IgG1Fc结构域。
在一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其中所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:66具有至少80％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:66具有至少85％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:66具有至少90％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:66具有至少95％同源性。在另一实施方案中，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:66具有至少99％同源性。在另一实施方案中，所述氨基酸序列是SEQ ID NO:66。熟练技术人员应理解，斯塔都体且特别是多聚化斯塔都体可以利用对抗任何细胞因子或可溶性受体的Fab容易地产生。
在一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其中所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:87具有至少80％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:87具有至少85％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:87具有至少90％同源性。在另一实施方案中，所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQ ID NO:87具有至少95％同源性。在另一实施方案中，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:87具有至少99％同源性。在另一实施方案中，所述氨基酸序列是SEQ ID NO:87。
在一个实施方案中，本发明的斯塔都体包含对IFNγ、IFNα、IFNβ、IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17或IL-23具有特异性的Fab结构域。在一个实施方案中，本发明的斯塔都体包含对细胞因子具有特异性的Fab结构域，其中所述斯塔都体可用于治疗或预防炎性疾病或自身免疫疾病。例如，在一个实施方案中，所述斯塔都体是抗IL-2、抗IL-8或抗IL-17斯塔都体。熟练技术人员应理解，斯塔都体且特别是多聚化斯塔都体可以利用对抗任何白介素或干扰素的Fab容易地产生。
在一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其中所述斯塔都体包含对抗一种或多种传染病抗原的Fab。熟练技术人员应理解，斯塔都体且特别是多聚化斯塔都体可以利用对抗任何传染病抗原的Fab容易地产生。熟练技术人员还应理解，斯塔都体且特别是多聚化斯塔都体可利用源自单克隆抗体的Fab容易地产生，所述单克隆抗体可以用于或已在临床上用于治疗或预防传染病。
例如，多聚化斯塔都体可利用源自单克隆抗体的Fab产生，所述单克隆抗体可以用于或已在临床上用于中和病毒、中和细菌或细菌毒素、阻断病毒进入宿主细胞、阻断由病原体触发的免疫抑制机制、阻断由病原体触发的免疫病理学反应或者治疗或预防传染病的其它手段。临床上用于或正在开发以供临床上用于治疗或预防传染病的示例性单克隆抗体包括但不限于帕利珠单抗和莫维珠单抗，这两者都对呼吸道合胞病毒(RSV)糖蛋白F具有特异性；用于阻断人免疫缺陷病毒(HIV)进入宿主细胞的抗CD4抗体伊巴珠单抗(ibalizumab)；用于阻断HIV进入宿主细胞的抗CCR5抗体Pro-140和CCR5mAb004；用于中和HIV的包膜糖蛋白gp120的抗gp120的抗体F105，其也被用于病毒进入；对巨细胞病毒(CMV)包膜糖蛋白H具有特异性的司韦单抗；用于中和丙型肝炎病毒(HCV)的抗磷脂酰丝氨酸抗体巴维昔单抗；尼沃单抗(nivolumab)(也称为MDX1106/BMS936558/ONO-4538)和皮地珠单抗(pidilizumab)(也称为CT-011)，这两者都对免疫细胞上的免疫抑制分子PD-1具有特异性且被用作HCV感染的免疫调节抗体；对HCV结构蛋白E2具有特异性的HCV中和抗体MBL-HCV1；对糖蛋白G具有特异性的狂犬病病毒中和抗体福拉韦单抗；ETI-204(anthim)、瑞西巴库(raxibacumab)和AVP 21D9，每一者都是对炭疽杆菌保护性抗原具有特异性的炭疽杆菌毒素中和抗体；可用于葡萄球菌属和其它细菌感染，尤其是多重抗药性感染的SAR279356和其它抗聚-N-乙酰葡糖胺(PNAG)抗体；对抗脂磷壁酸具有特异性且用于预防葡萄球菌属感染的帕吉昔单抗；对聚集因子A具有特异性并且也可用于葡萄球菌属感染的特非珠单抗(tefibazumab)；用于大肠杆菌感染的抗志贺样毒素2B抗体乌珠单抗；用于中和大肠杆菌STEC毒素Stx1和的Stx2的两种mAb(caStx1和caStx2)的混合液志贺单抗(shigamab)；艾克妥单抗(actoxumab)(抗艰难梭状芽胞杆菌肠毒素A)和贝唑妥单抗(bezlotoxumab)(抗艰难梭状芽胞杆菌肠毒素B)，其可作为两种抗体的混合液(称为MK3415A)形式一起施用；用于铜绿假单胞菌感染的抗LPS抗体帕诺库单抗；用于铜绿假单胞菌感染的抗第3型分泌***抗体KB 001；和用于新生隐球菌感染的抗荚膜多糖抗体18B7。
在一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其包含Fab结构域、一个或多个Fc结构域和一个或多个多聚化结构域，其中所述一个或多个多聚化结构域能够使所述斯塔都体多聚化，且其中所述两个或更多个Fc结构域能够结合FcγR。在另一实施方案中，所述FcγR是FcγRIIIa。在另一实施方案中，所述FcγRIIIa在效应细胞上。在另一实施方案中，所述FcγRIIIa在NK细胞上。在另一个实施方案中，所述FcγRIIIa在巨噬细胞上。在另一个实施方案中，所述FcγR是FcγRIIb。在另一实施方案中，所述FcγRIIb在B细胞上。在另一个实施方案中，所述FcγRIIb在树突状细胞上。
在另一实施方案中，所述两个或更多个Fc结构域的氨基酸序列与SEQ IDNO:2具有至少80％同源性。在另一实施方案中，所述两个或更多个Fc结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:2具有至少90％同源性。在另一实施方案中，所述两个或更多个Fc结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:2具有至少95％同源性。在另一实施方案中，所述两个或更多个Fc结构域的氨基酸序列与SEQ IDNO:2具有至少99％同源性。在另一实施方案中，所述两个或更多个Fc结构域的氨基酸序列是SEQ ID NO:2。
在一个方面，本发明涉及一种调节受试者的免疫反应的方法，其包括向所述受试者施用有效量的斯塔都体，所述斯塔都体包含Fab结构域、一个或多个Fc结构域和一个或多个多聚化结构域，其中所述一个或多个多聚化结构域能够使所述斯塔都体多聚化。
在一个实施方案中，本发明涉及治疗有需要的受试者的炎性疾病或自身免疫疾病、传染病或癌症的方法，其包括向所述受试者施用有效量的斯塔都体，所述斯塔都体包含Fab结构域、一个或多个Fc结构域和一个或多个多聚化结构域，其中所述一个或多个多聚化结构域能够使所述斯塔都体多聚化。在另一实施方案中，所述受试者患有癌症。在另一实施方案中，所述癌症选自结肠直肠癌、头颈癌、纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、***肉瘤、***内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、***癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、***状癌、***状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝细胞瘤、胆管癌、绒毛膜癌、***瘤、胚胎癌、威尔姆氏肿瘤(Wilms'tumor)、***、睾丸肿瘤、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤、黑素瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、沃尔登斯特伦巨球蛋白血症、骨髓增生异常病、重链病、神经内分泌瘤和神经鞘瘤。
在另一个实施方案中，所述受试者患有自身免疫疾病或炎性疾病。在另一实施方案中，所述自身免疫疾病或炎性疾病选自特发性血小板减少性紫癜、同种异型免疫性/自身免疫性血小板减少症、获得性免疫性血小板减少症、自身免疫性中性粒细胞减少症、自身免疫性溶血性贫血、细小病毒B19相关性红细胞再生障碍、获得性抗因子VIII自身免疫性、获得性血管性血友病、未知意义的多发性骨髓瘤和单克隆丙种球蛋白病、阿尔茨海默病、败血症、再生障碍性贫血、单纯红细胞再生障碍、戴-布二氏贫血、新生儿溶血病、免疫介导的中性粒细胞减少症、血小板输注无效、新生儿输血后紫癜、溶血***综合征、全身性血管炎、血栓性血小板减少性紫癜、埃文斯综合征、格-巴二氏综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经根神经病、副蛋白血症IgM脱髓鞘性多发性神经病、朗-爱二氏肌无力综合征、重症肌无力、多灶性运动神经病、与抗/GMl相关的下位运动神经元综合征、脱髓鞘、多发性硬化、视神经炎、僵人综合征、伴有抗Yo抗体的副肿瘤性小脑变性、副肿瘤性脑脊髓炎、伴有抗Hu抗体的感觉神经病变、癫痫、脑炎、脊髓炎、与人嗜T淋巴细胞病毒-1相关的脊髓病、自身免疫糖尿病性神经病、急性特发性自主神经机能异常性神经病、川崎病、类风湿性关节炎、费耳提氏综合征、ANCA阳性血管炎、自发多发性肌炎、皮肌炎、抗磷脂综合征、反复自发流产、***性红斑狼疮、青少年特发性关节炎、雷诺氏综合征、CREST综合征、葡萄膜炎、中毒性表皮坏死松解症、坏疽、肉芽肿、自身免疫皮肤疱病(包括寻常天疱疮、大疱性类天疱疮和落叶型天疱疮)、白斑症、链球菌性中毒性休克综合征、硬皮病、***性硬化症(包括扩散型和局限性皮肤***性硬化症)、异位性皮炎(尤其类固醇依赖性)、包涵体肌炎、坏死性筋膜炎、炎性肌病、肌炎、抗核心蛋白聚糖(BJ抗原)肌病、副肿瘤性坏死性肌病、X连锁的空泡性肌病、青霉胺诱导的多发性肌炎、动脉粥样硬化、冠状动脉病、心肌病、恶性贫血、自身免疫慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、乳糜泻、疱疹样皮炎、隐源性肝硬化、反应性关节炎、克罗恩氏病、惠普尔氏病、溃疡性结肠炎、硬化性胆管炎、移植物抗宿主病、抗体介导的移植体排斥、骨髓移植后排斥、传染病后炎症、淋巴瘤、白血病、瘤形成、哮喘、伴有抗β细胞抗体的1型糖尿病、斯耶格伦氏综合征、混合型***病、阿狄森病、伏格特-小柳-原田三氏综合征、膜增生性肾小球肾炎、肺出血肾炎综合征、格雷夫斯氏病、桥本氏甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis)、韦格纳肉芽肿病(Wegener's granulomatosis)、显微镜下多动脉炎(micropolyarterits)、丘-施二氏综合征、结节性多发性动脉炎和多***器官衰竭。
本发明还包括能有效治疗传染病的方法和组合物，所述疾病包括但不限于由细菌剂、真菌剂、寄生虫剂和病毒剂引起的那些疾病。这样的感染试剂的实例包括以下各项：葡萄球菌属、链球菌科、奈瑟氏菌科、球菌属、肠杆菌科、假单胞菌科、弧菌科、弯曲杆菌属、巴斯德菌科、博德特氏菌属、弗朗西斯氏菌属、布鲁氏菌属、军团菌科、拟杆菌科、梭菌属、棒状杆菌属、丙酸杆菌属、革兰氏阳性杆菌属、炭疽属、放线菌属、诺卡氏菌属、分支杆菌属、密螺旋体属、包柔氏螺旋体属、钩端螺旋体属、支原体属、尿素原体、立克次体属、衣原体属、其它革兰氏阳性杆菌属、其它革兰阴性杆菌属、***性霉菌、其它机会性霉菌、原生动物、线虫、吸虫、绦虫、腺病毒、疱疹病毒(包括例如单纯疱疹病毒和EB病毒以及带状疱疹病毒)、痘病毒、乳多空病毒、肝炎病毒、***状瘤病毒、正粘病毒(包括例如A型流感、B型流感和C型流感)、副粘病毒、冠状病毒、小核糖核酸病毒、呼肠孤病毒、披膜病毒、黄病毒、布尼亚病毒科、弹状病毒属、呼吸道合胞病毒，人免疫缺陷病毒和逆转录病毒。示例性的传染病包括但不限于念珠菌病、念珠菌血症、曲霉病、链球菌性肺炎、链球菌性皮肤和口咽病状、革兰氏阴性脓毒病、肺结核、单核细胞增多症、流感、由呼吸道合胞病毒引起的呼吸***疾病、疟疾、血吸虫病和锥虫病。
在另一实施方案中，经静脉内、经皮下、经口、经鼻、经腹膜内、经舌下、经颊、经皮、通过皮下或皮下植入、经十二指肠内或经肌内施用所述斯塔都体。在一个实施方案中，所述斯塔都体经静脉内施用。因为本发明的斯塔都体的效力有所增强，所以在一些实施方案中，与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比，所述斯塔都体可以用较低剂量经静脉内施用。在一个实施方案中，所述斯塔都体以约0.01mg/Kg至约1000mg/Kg(静脉内)的剂量经静脉内施用。在另一实施方案中，所述斯塔都体以约0.1mg/Kg至约100mg/Kg经静脉内施用。在另一实施方案中，所述斯塔都体以约0.5mg/Kg至约50mg/Kg经静脉内施用。在另一实施方案中，所述斯塔都体以约1mg/Kg至约25mg/Kg经静脉内施用。在另一实施方案中，所述斯塔都体以约5mg/Kg至约15mg/Kg经静脉内施用。在一个实施方案中，所述斯塔都体经皮下施用。因为本发明的斯塔都体的效力有所增强，所以在一些实施方案中，与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比，所述斯塔都体可以用较低剂量经皮下施用。在一个实施方案中，所述斯塔都体以约0.01mg/Kg至约1000mg/Kg(皮下)的剂量皮下施用。在另一实施方案中，所述斯塔都体以约0.2mg/Kg至约150mg/Kg经皮下施用。在另一实施方案中，所述斯塔都体以约0.5mg/Kg至约80mg/Kg经皮下施用。在另一实施方案中，所述斯塔都体以约2mg/Kg至约50mg/Kg经皮下施用。在另一实施方案中，所述斯塔都体以约5mg/Kg至约30mg/Kg经皮下施用。在另一实施方案中，所述斯塔都体是在单克隆抗体之前、同时或之后施用。在另一实施方案中，在单克隆抗体之前、同时或之后施用的斯塔都体所具有的Fab对抗与所述单克隆抗体相同的抗原。在另一实施方案中，在单克隆抗体之前、同时或之后施用的斯塔都体所具有的Fab对抗与所述单克隆抗体不同的抗原。
在另一实施方案中，所述斯塔都体是在施用一种或多种额外药物和/或治疗剂之前、期间或之后施用。在另一实施方案中，额外药物活性剂包含类固醇；生物性抗自身免疫药物诸如单克隆抗体、融合蛋白或抗细胞因子；非生物性抗自身免疫药物；免疫抑制剂；抗生素；和抗病毒剂；细胞因子；或能够以其它方式作为免疫调节物发挥作用的药物。在另一实施方案中，所述类固醇是***、***龙、可的松、***、莫米松、睾酮、***、氧雄龙、氟替卡松、布***、倍氯米松、沙丁胺醇或左旋沙丁胺醇。在另一实施方案中，所述斯塔都体是在施用化疗剂之前、期间或之后施用。在另一实施方案中，当一起施用时，所述斯塔都体和额外治疗剂显示治疗性协同作用。在一个实施方案中，所述斯塔都体是在施用额外治疗剂之前施用。在另一个实施方案中，所述斯塔都体是在施用额外治疗剂的同时施用。在另一个实施方案中，所述斯塔都体是在施用额外治疗剂之后施用。在一个实施方案中，所述斯塔都体是在施用危险信号之前施用。在另一个实施方案中，所述斯塔都体是在施用危险信号的同时施用。在另一个实施方案中，所述斯塔都体是在施用危险信号之后施用。
在另一个实施方案中，所述斯塔都体与物种特异性或嵌合型斯塔都体分子一起施用以治疗人、非人灵长类(例如，猴、狒狒和黑猩猩)、小鼠、大鼠、牛、马、猫、犬、猪、兔、山羊、鹿、绵羊、雪貂、沙鼠、豚鼠、仓鼠、蝙蝠、鸟类(例如，鸡、火鸡和鸭)、鱼类和爬行类。在另一个实施方案中，所述人是成人或儿童。在另一个实施方案中，施用所述斯塔都体以预防自身免疫疾病。在另一实施方案中，施用所述斯塔都体以预防伴侣动物和家畜中疫苗相关的自身免疫性病状。
在一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其中所述斯塔都体所显示的细胞杀伤与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比有所增强。在一个实施方案中，所述增强的细胞杀伤由ADCC介导。在另一实施方案中，所述斯塔都体所显示的ADCC与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少2倍。在另一个实施方案中，所述斯塔都体所显示的ADCC与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少5倍。在另一个实施方案中，所述斯塔都体所显示的ADCC与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少10倍。在另一个实施方案中，所述斯塔都体所显示的ADCC与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少20倍。在另一个实施方案中，所述增强的细胞杀伤由CDC介导。在另一实施方案中，所述斯塔都体所显示的CDC与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少2倍。在另一个实施方案中，所述斯塔都体所显示的CDC与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少5倍。在另一个实施方案中，所述斯塔都体所显示的CDC与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少10倍。在另一个实施方案中，所述斯塔都体所显示的CDC与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少20倍。在另一个实施方案中，所述增强的细胞杀伤由DC介导。在另一实施方案中，所述斯塔都体所显示的DC与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少2倍。在另一个实施方案中，所述斯塔都体所显示的DC与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少5倍。在另一个实施方案中，所述斯塔都体所显示的DC与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少10倍。在另一个实施方案中，所述斯塔都体所显示的DC与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少20倍。
在一个实施方案中，所述斯塔都体含有两个或更多个多聚化结构域，且所显示的细胞杀伤与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比有所增强。在一个实施方案中，所述细胞杀伤由ADCC介导。在另一实施方案中，具有两个或更多个多聚化结构域的斯塔都体所显示的ADCC与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比高出至少2倍。在另一个实施方案中，具有两个或更多个多聚化结构域的斯塔都体所显示的ADCC与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比高出至少5倍。在另一个实施方案中，具有两个或更多个多聚化结构域的斯塔都体所显示的ADCC与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比高出至少10倍。在另一个实施方案中，具有两个或更多个多聚化结构域的斯塔都体所显示的ADCC与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比高出至少20倍。在另一个实施方案中，所述增强的细胞杀伤由CDC介导。在另一实施方案中，具有两个或更多个多聚化结构域的斯塔都体所显示的CDC与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比高出至少2倍。在另一个实施方案中，具有两个或更多个多聚化结构域的斯塔都体所显示的CDC与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比高出至少5倍。在另一个实施方案中，具有两个或更多个多聚化结构域的斯塔都体所显示的CDC与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比高出至少10倍。在另一个实施方案中，具有两个或更多个多聚化结构域的斯塔都体所显示的CDC与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比高出至少20倍。在另一个实施方案中，所述增强的细胞杀伤由DC介导。在另一实施方案中，具有两个或更多个多聚化结构域的斯塔都体所显示的DC与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比高出至少2倍。在另一个实施方案中，具有两个或更多个多聚化结构域的斯塔都体所显示的DC与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比高出至少5倍。在另一个实施方案中，具有两个或更多个多聚化结构域的斯塔都体所显示的DC与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比高出至少10倍。在另一个实施方案中，具有两个或更多个多聚化结构域的斯塔都体所显示的DC与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比高出至少20倍。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其中所述斯塔都体所显示的对细胞增殖的抑制与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比有所增强。在一个实施方案中，所述斯塔都体对细胞增殖的抑制与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比多出至少10％。在另一个实施方案中，所述斯塔都体对细胞增殖的抑制与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比多出至少20％。在另一个实施方案中，所述斯塔都体对细胞增殖的抑制与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比多出至少50％。在另一个实施方案中，本发明涉及一种含有两个或更多个多聚化结构域的斯塔都体，且所显示的对细胞增殖的抑制与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比有所增强。在一个实施方案中，所述斯塔都体对细胞增殖的抑制与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比多出至少10％。在另一个实施方案中，所述斯塔都体对细胞增殖的抑制与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比多出至少20％。在另一个实施方案中，所述斯塔都体对细胞增殖的抑制与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比多出至少50％。
在一个实施方案中，本发明涉及一种斯塔都体，其中所述斯塔都体所显示的补体结合与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比有所增强。在另一实施方案中，所述斯塔都体所显示的补体结合与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比有所增强。在一个实施方案中，所述增强的补体结合是与Clq结合。在一个实施方案中，所述斯塔都体所显示的增强的补体结合与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少2倍。在另一个实施方案中，所述斯塔都体所显示的增强的补体结合与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少5倍。在另一个实施方案中，所述斯塔都体所显示的增强的补体结合与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少10倍。在另一个实施方案中，所述斯塔都体所显示的增强的补体结合与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比高出至少20倍。在一个实施方案中，所述增强的补体结合通过EC 50值来测量。在一个实施方案中，所述斯塔都体的补体结合EC50值与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比低至少5倍。在另一个实施方案中，所述斯塔都体的补体结合EC 50值与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比低至少10倍。在另一实施方案中，所述斯塔都体的补体结合EC 50值与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比低至少20倍。在一个实施方案中，多聚化斯塔都体所显示的补体结合相对于对相同抗原具有特异性的非多聚化斯塔都体有所增加。在另一个实施方案中，多聚化斯塔都体所显示的补体结合EC 50值相对于对相同抗原具有特异性的非多聚化斯塔都体有所减少。在另一实施方案中，所述多聚化斯塔都体的EC 50值与所述非多聚化斯塔都体相比低至少2倍。在另一个实施方案中，所述多聚化斯塔都体的EC 50值与所述非多聚化斯塔都体相比低至少5倍。
在一个实施方案中，斯塔都体所展现的补体结合水平取决于Fab而变化。因此，在一个实施方案中，具有相同的多聚化结构域和相同的Fc区但具有不同的Fab的两种斯塔都体展现不同的补体结合水平。在一个实施方案中，具有抗CD20Fab的多聚化斯塔都体所展现的补体结合与具有跟抗CD20Fab相同的多聚化结构域和相同的Fc区但具有抗TNF或抗HER2/neu Fab的多聚化斯塔都体相比显著较高。
在一个实施方案中，本发明涉及包含多聚化斯塔都体的组合物。在另一实施方案中，所述组合物包含至少2种、至少3种、至少4种、至少5种、至少6种、至少7种、至少8种、至少9种、至少10种或更多种斯塔都体。
附图简述
图1是多聚化连续斯塔都体和多聚化C末端斯塔都体和组成斯塔都体的结构单元的示意性图示。
图2是连续斯塔都体的一般结构的示意性图示。
图3是若干种连续斯塔都体的结构的示意性图示，其说明具有一个或多个所指示的多聚化结构域或连接结构域的构建体。
图4是连续斯塔都体构建体的说明。
图5是若干种多聚化C末端斯塔都体的结构的示意性图示，其说明具有一个或多个所指示的多聚化结构域的构建体。
图6是多聚化C末端斯塔都体构建体的说明。
图7是本发明的优选斯塔都体的结构的示意性图示，其包含由异亮氨酸拉链和IgG2铰链分隔的两个IgG1Fc结构域。
图8是非还原SDS-PAGE凝胶，其示出了所指示的C末端多聚化斯塔都体的多聚体的形成与未改变的抗体GB2500的比较。
图9是非还原SDS-PAGE凝胶，其示出了所指示的连续斯塔都体的多聚体的形成与未改变的抗体GB2500的比较。
图10示出了所指示的斯塔都体的ADCC与未改变的HER2/neu抗体GB2500的比较，如通过效应细胞对靶细胞比率范围内的靶细胞杀伤百分比所测量。
图11示出了所指示的斯塔都体的ADCC剂量反应与未改变的HER2/neu抗体GB2500的比较，如通过斯塔都体浓度范围内的靶细胞杀伤百分比所测量。
图12示出了代表性等离子体共振(Biacore)数据，其指示所指示的各斯塔都体或未改变的抗体GB2500与FcγRIIIa的结合或解离。
图13示出了所有测试斯塔都体或未改变的抗体GB2500的FcγRIIIa结合数据。
图14描绘了所指示的斯塔都体的Biacore结合(RU)与ADCC活性之间的相关性。ADCC活性呈现为各斯塔都体相对于GB2500的倍数差异平均值。
图15示出了在Mono Q柱上通过离子交换色谱法纯化斯塔都体构建体的结果。泳道SB是未分级的斯塔都体；通过非变性凝胶(左图)来分析洗脱色谱图(右图)上的峰1、2和3。
图16示出了非还原(上图)和还原(下图)SDS-PAGE凝胶，其示出了所指示的连续斯塔都体的多聚体的形成与未改变的抗体GB2500的比较。
图17示出了亲本抗体GB2500或所指示的连续斯塔都体与FcγRIIIa的结合。在3333-208nM范围内的浓度下测试GB2500(在HEK或CHO细胞中生长)。在200-12.5nM范围内的浓度下测试连续斯塔都体GB2524、GB2538、GB2540、GB2542、GB2554和GB2555。
图18是涉及用斯塔都体或其相应单克隆抗体处理人PBMC-SCID(hu-PBMC SCID)小鼠的研究的实验流程图的示意图。
图19示出了在经PBS、GB4500、GB4563或GB4542处理的hu-PMBC SCID小鼠中人IgM的血清水平随时间变化。
图20示出了在经PBS、GB4500、GB4563或GB4542处理的hu-PBMC SCID小鼠中外周血中的人B细胞数目随时间变化。
图21示出了经PBS、GB4500、GB4563或GB4542处理的hu-PBMC SCID小鼠的脾中的人B细胞的数目。
图22示出了在所指示的抗体或斯塔都体浓度(μg/mL)下由GB4500或GB4542介导的细胞增殖的抑制百分比。使用T检验计算GB4500对比GB4542的统计学显著性；*p<0.05，**P<0.005。
图23示出了在所指示的抗体或斯塔都体pmol/mL下由GB4500或GB4542介导的细胞增殖的抑制百分比。
图24示出了在所指示的抗体或斯塔都体浓度(μg/mL)下由GB4500、GB4596或GB4542介导的补体依赖性细胞毒性百分比。
图25示出了在所指示的抗体或斯塔都体pmol/mL下由GB4500或GB4542介导的补体依赖性细胞毒性百分比。
图26示出了在小鼠Raji-SCID淋巴瘤模型中在肿瘤内注射PBS、GB4500或GB4542(有或无CpG)之后的平均肿瘤体积随时间变化。
图27示出了在小鼠Raji-SCID淋巴瘤模型中在肿瘤内注射PBS、GB4500或GB4542(有或无CpG)之后的中位肿瘤体积随时间变化。
图28示出了补体Clq与抗体GB2500、斯塔都体GB2542、抗体GB7500、斯塔都体GB7542、抗体GB4500和斯塔都体GB4542的结合，如通过在所指示的斯塔都体或抗体浓度下的吸光度(450nm)来测量。
图29示出了补体Clq对抗体GB2500、斯塔都体GB2542、抗体GB7500、斯塔都体GB7542、抗体GB4500和斯塔都体GB4542的结合的EC50值。
图30示出了与抗体GB2500和斯塔都体GB2542、GB2554及GB2555的补体Clq结合。GB2542是多聚化斯塔都体，且GB2554和GB2555是不含任何多聚化结构域的线性斯塔都体。
图31示出了补体Clq对抗体GB2500、多聚化斯塔都体GB2542和非多聚化斯塔都体GB2554和GB2555的结合的EC50值。
发明详述
用于本文中所描述的具有FcR结合能力的抗原结合复合物的理性分子设计的方法包括以重组和/或生物化学方式产生免疫活性生物模拟物，令人惊讶的是，所述免疫活性生物模拟物在诱导细胞毒性(包括抗体介导的细胞毒性、补体依赖性细胞毒性、直接细胞毒性和其它细胞毒性机制)方面与对相同抗原具有特异性的mAb相比更有效。所述复合物具有治疗例如癌症、自身免疫疾病和炎性疾病以及传染病的用途。下文详细描述各实施方案连同具体的示例性实施方案。
如本文中所使用，在权利要求和/或本说明书中与术语“包含”联合使用时，词“一个”或“一种”的用途可以意指“一个/种”，但是它还符合以下意思：“一个/种或多个/种”、“至少一个/种”和“一个/种或多于一个/种”。
如本文中所使用，术语“生物模拟物”、“生物模拟分子”、“生物模拟化合物”和相关的术语是指模拟另一种复合物(诸如汇集的人静脉用免疫球蛋白(“hIVIG”)、单克隆抗体或抗体的Fc或Fab片段)的功能的人造复合物。“生物活性”生物模拟物是拥有与其天然存在的对应物相同或相似的生物学活性的复合物。“天然存在的”意指在生物中正常找到的分子或其部分。天然存在还意指基本上天然存在。“免疫活性”生物模拟物是展现与天然存在的免疫活性分子相同或相似的免疫活性的生物模拟物，诸如抗体、细胞因子、白介素和本领域中已知的其它免疫分子。在优选实施方案中，本发明的生物模拟物是如本文中所限定的斯塔都体。
“同源的”意指在给定的核酸或氨基酸序列的整个序列范围内的同一性。例如，“80％同源”意指给定的序列与要求保护的序列共有约80％同一性并且可以包括***、缺失、置换和移码。本领域普通技术人员将理解，可以进行序列比对以便考虑***和缺失，以确定整个序列长度范围内的同一性。
本发明的免疫活性生物模拟物能够结合一个或多个抗原。在一些实施方案中，本发明的免疫活性生物模拟物能够结合两种不同的抗原，这类似于双特异性抗体。在其它实施方案中，本发明的免疫活性生物模拟物能够结合多于两种不同的抗原。本发明的生物模拟物还拥有IgG Fc结构域的一种或多种免疫调节活性并且至少具有能够结合FcRn、DC-SIGN、SIGN-R1和/或FcγR(包括FcγRI、FcγRII、FcγRIII和FcγRIV)的第一Fc结构域。在一些实施方案中，本发明的生物模拟物拥有能够结合FcRn、DC-SIGN、SIGN-R1和/或FcγR(包括FcγRI、FcγRII、FcγRIII和FcγRIV)的第二Fc结构域。因此，在多聚化时，免疫活性生物模拟物含有至少两个二聚体结构，各二聚体结构能够结合一个或多个抗原，并且能够结合FcRn、DC-SIGN、SIGN-R1和/或和FcγR中的一个或多个。
以下段落在结构和功能方面限定本发明生物模拟物的结构单元且随后限定生物模拟物本身。然而，首先有帮助的是提到，如上文所指示，本发明的各生物模拟物具有至少两个Fc结构域和至少一个Fab结构域。至少，Fc结构域是二聚体多肽(或较大多肽的二聚体区域)，其包含缔合以形成功能性Fcγ受体结合位点的两条肽链或臂(单体)。因此，本文中讨论的各个Fc片段和Fc结构域的功能形式通常以二聚体(或多聚体)形式存在。本文中讨论的各个片段和结构域的单体是必须与第二链或臂缔合以形成功能性二聚体结构的单链或臂。
Fc区和Fab区
“Fc片段”是用来描述在免疫球蛋白羧基末端常规存在的蛋白质区域或蛋白质折叠结构的技术术语。Fc片段由抗体重链的羧基末端部分组成。Fc片段中的每条链具有约220-265个氨基酸长度并且这些链经常通过二硫键连接。Fc片段经常含有一个或多个独立的结构折叠或功能性亚结构域。具体地说，Fc片段涵盖Fc结构域，在本文中定义为可结合Fcγ受体的最小结构。分离的Fc片段由发生二聚化的两个Fc片段单体(例如，抗体重链的两个羧基末端部分；本文中进一步限定)构成。当两个Fc片段单体缔合时，所得Fc片段具有Fcγ受体结合活性。
“Fab片段”是用于描述含有抗体的抗原结合结构域的蛋白质区域或蛋白质折叠结构的技术术语。Fab片段由重链与轻链构成，且长度在约200-250个氨基酸之间。在一些实施方案中，Fab片段由亲本抗体的可变区和CH1区构成。Fab片段可以通过使用酶消化(例如木瓜蛋白酶消化)从单克隆抗体的Fc片段中分离，这种方法是一种不完整和不完善的方法(参见Mihaesco C和Seligmann M.Papain Digestion Fragments Of Human IgM Globulins.Journal ofExperimental Medicine,第127卷,431-453(1968))。Fab片段和Fc片段一起构成全抗体，这里意指完整抗体。
“Fc局部片段”是包含小于抗体的整个Fc片段，却仍保留与Fc片段具有相同活性(包括Fcγ受体结合活性)的足够结构的结构域。因此，取决于源自其中的Fc局部结构域的抗体的同种型，Fc局部片段可以缺少部分或全部的铰链区、部分或全部的CH2结构域、部分或全部的CH3结构域和/或部分或全部的CH4结构域。Fc局部片段的实例包括了包含IgG3的上铰链区、核心铰链区和下铰链区外加CH2结构域的分子(Tan,LK,Shopes,RJ,Oi,VT和Morrison,SL,Influence of the hinge region on complement activation,CIq binding,andsegmental flexibility in chimeric human immunoglobulins,Proc Natl Acad SciUSA.1990年1月；87(1):162-166)。因此，在这个实例中，Fc局部片段缺少在IgG3的Fc片段中存在的CH3结构域。Fc局部片段的另一个实例包括了包含IgG1的CH2和CH3结构域的分子。在这个实例中，Fc局部片段缺乏IgG1中存在的铰链结构域。Fc局部片段由两个Fc局部片段单体构成。如本文中进一步限定，当两个这样的Fc局部片段单体缔合时，所得Fc局部片段具有Fcγ受体结合活性。
术语“Fab结构域”描述了可结合抗原的最小区域(在较大多肽的情况下)或最小蛋白质折叠结构(在分离的蛋白质的情况下)。Fab结构域是Fab片段中允许所述分子与抗原结合的最小结合区。“Fab结构域”与“Fab”在本文中可互换使用。
如本文中所使用，“Fc结构域”描述了可结合Fc受体(FcR)或被Fc受体结合的最小区域(在较大多肽的情况下)或最小蛋白质折叠结构(在分离的蛋白质的情况下)。在Fc片段和Fc局部片段中，Fc结构域是允许所述分子与Fc受体结合的最小结合区。尽管Fc结构域可以限于由Fc受体结合的分离的同源二聚体多肽，但是还将清楚的是，Fc结构域可以是Fc片段的部分或全部以及Fc局部片段的部分或全部。当本发明中使用术语“Fc结构域”时，它将由熟练技术人员视为意指多于一个Fc结构域。Fc结构域由两个Fc结构域单体构成。如本文中进一步限定，当两个这样的Fc结构域单体缔合时，所得Fc结构域具有Fc受体结合活性。因此，Fc结构域是可结合Fc受体的二聚体结构。
如本文中所使用，“Fc局部结构域”描述了Fc结构域的一部分。Fc局部结构域包括不同的免疫球蛋白类别和亚类的各个重链恒定区结构域(例如，CH1、CH2、CH3和CH4结构域)和铰链区。因此，本发明的人Fc局部结构域包括IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE的CH1结构域；IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE的CH2结构域；IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE的CH3结构域；IgM和IgE的CH4结构域和IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE的铰链区。其它物种中相应的Fc局部结构域将取决于这个物种中存在的免疫球蛋白和其命名。在一个优选实施方案中，本发明的Fc局部结构域包括IgG1的CH1、CH2和铰链结构域。在另一个优选实施方案中，本发明的Fc局部结构域包括IgG1的CH1、CH2及铰链结构域和IgG2的铰链结构域。本发明的Fc局部结构域还可包含这些结构域和铰链中的多于一个的组合。然而，本发明的各个Fc局部结构域及其组合缺乏结合FcγR的能力。因此，Fc局部结构域及其组合包含小于Fc的结构域。Fc局部结构域可以连接在一起以形成具有Fcγ受体结合活性的肽，因此形成Fc结构域。在本发明中，将Fc局部结构域与Fc结构域一起用作结构单元以产生如本文中所限定的本发明的生物模拟物。各Fc局部结构域由两个Fc局部结构域单体构成。当两个这样的Fc局部结构域单体缔合时，形成Fc局部结构域。
如上文所指示，Fc片段、Fc局部片段、Fc结构域和Fc局部结构域各自是二聚体蛋白质或结构域。因此，这些分子各自由可缔合以形成二聚体蛋白质或结构域的两个单体构成。尽管上文讨论了同源二聚体形式的特征和活性，如下讨论单体肽。
如本文中所使用，“Fc片段单体”是在与另一个Fc片段单体缔合时包含Fc片段的单链蛋白质。所述Fc片段单体因此是抗体重链之一的羧基末端部分，其补足全抗体的Fc片段(例如，包括IgG的铰链区、CH2结构域和CH3结构域的重链连续部分)。在一个实施方案中，Fc片段单体至少包含一条铰链区链(铰链区单体)、一条CH2结构域链(CH2结构域单体)和一条CH3结构域链(CH3结构域单体)，它们连续地连接以形成肽。在另一个实施方案中，Fc片段单体至少包含一条铰链区链、一条CH2结构域链、一条CH3结构域链和一条CH4结构域链(CH4结构域单体)，它们连续地连接以形成肽。在一个实施方案中，CH2、CH3和铰链结构域来自于不同的同种型。在具体实施方案中，Fc片段单体含有IgG2铰链结构域和IgG1CH2及CH3结构域。
如本文中所使用，“Fc结构域单体”描述了单链蛋白质，与另一个Fc结构域单体缔合时，所述单链蛋白质包含可以与Fcγ受体结合的Fc结构域。两个Fc结构域单体的缔合产生一个Fc结构域。单独的Fc结构域单体(仅包含Fc结构域的一侧)不能结合Fcγ受体。
如本文中所使用，“Fc局部结构域单体”描述了与另一个Fc局部结构域单体缔合时包含Fc局部结构域的单链蛋白质。两个Fc局部结构域单体的缔合产生一个Fc局部结构域。
斯塔都聚体
本发明的斯塔都体由斯塔都体和Fab结构域构成。在一个实施方案中，本发明的斯塔都体由多聚化斯塔都聚体和Fab结构域构成。斯塔都聚体是能够结合两个或更多个Fc受体，优选地两个或更多个Fcγ受体，且更优选地显示相对于Fc结构域得以显著改善的结合并且最优选地显示亲合力的缓慢解离特征的生物模拟化合物。在一个实施方案中，本发明的斯塔都体用来结合诸如NK细胞的效应细胞和诸如不成熟树突状细胞和巨噬细胞的单核细胞源性细胞上的FcRn、DC-SIGN、SIGN-R1和/或Fcγ受体。在另一个实施方案中，本发明的斯塔都体用于结合B细胞上的FcγRIIb受体。在一个实施方案中，Fcγ受体是低亲和力Fcγ受体，诸如FcγIIIa。先前已在美国专利申请公开号2010/0239633和PCT公开号WO 2012/016073中描述了物理斯塔都聚体构象，这两个文献都通过引用整体并入本文。
“连续斯塔都聚体”是由当缔合时形成能够结合两个或更多个Fcγ受体的两个或更多个Fc结构域的两个线性斯塔都聚体单体构成的二聚多肽。连续斯塔都聚体优选地具有2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个或更多个Fc结构域以及Fc局部结构域。Fc结构域和/或Fc局部结构域可通过如本文中进一步限定的结构域连接来连接。
如将显而易见，上文讨论的Fc片段、Fc局部片段、Fc结构域和Fc局部结构域用于多种斯塔都聚体构象的构建中。也如上文讨论，正是各个Fc结构域单体和Fc局部结构域单体进行自缔合以形成作为包含本文中所描述的斯塔都体的斯塔都聚体的二聚体结构。此外，斯塔都聚体与Fab结构域缔合以形成本发明的斯塔都体。
如本文中所使用，术语“斯塔都聚体单体”或“斯塔都聚体单元”是指单一的连续肽分子，其中与至少第二个斯塔都聚体单体缔合时，所述肽分子形成包含至少两个Fc结构域的多肽。斯塔都聚体单体可以通过斯塔都聚体单体间连接进行缔合以形成斯塔都聚体，或它们可以通过经由共价键和非共价键进行的自组装来形成斯塔都聚体。
与另一个斯塔都聚体单体缔合以形成斯塔都聚体时，斯塔都聚体单体可以具有形成一个、二个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个或更多个Fc结构域的氨基酸序列。与另一个斯塔都聚体单体缔合以形成斯塔都聚体时，斯塔都聚体单体还可以具有形成一个、二个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个或更多个Fc局部结构域的氨基酸序列。
将在斯塔都聚体的背景下形成Fc结构域和Fc局部结构域的斯塔都聚体单体的区域可以简单地从斯塔都聚体单体分子的连续区域的羧基末端至氨基末端布置。具体Fc结构域单体和Fc局部结构域单体的布置允许在两个斯塔都聚体单体缔合后形成两个功能性Fc结构域。
Fc结构域可以由其结合FcRn、DC-SIGN、SIGN-R1和/或Fcγ受体的能力在功能上限定。本发明复合物与同族典型Fc受体(包括FcγIIIa、FcγRIIb和/或SIGN-R1)结合的亲和力和/或亲合力比人IgG1Fc对照高得多。可选地，由于IgG1Fc的297位上的点突变，相对于Fc典型受体，本发明复合物优先结合新生儿受体FcRn。因此，Fc结构域的具体氨基酸序列将基于构成Fc结构域的Fc局部结构域而变化。然而，在本发明的一个实施方案中，Fc结构域包含免疫球蛋白分子的铰链区和CH2结构域。在进一步优选实施方案中，Fc结构域包含免疫球蛋白分子的铰链区、CH2结构域和CH3结构域。在另一实施方案中，Fc结构域包含免疫球蛋白分子的铰链区、CH2结构域、CH3结构域和CH4结构域。在另一个实施方案中，Fc结构域包含免疫球蛋白分子的铰链区、CH2结构域和CH4结构域。在进一步优选实施方案中，Fc结构域包含CH2结构域和CH3结构域。在一个优选实施方案中，Fc结构域含有IgG1的铰链、CH2结构域和CH3结构域(SEQ ID NO:2)。在另一个优选实施方案中，Fc结构域含有IgG1的CH2结构域和CH3结构域(SEQ ID NO:19)。
结构域连接
如上文所指示，“结构域连接”是包含本发明的斯塔都体的各个斯塔都聚体单体的Fc结构域单体和/或Fc局部结构域单体的之间的肽连接。结构域连接可以是1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或更多个氨基酸。在呈其天然序列形式的Fc局部结构域单体之间不存在结构域连接。即，在使用Fc结构域单体的天然连接的连续部分，诸如IgG的铰链区、CH2结构域和CH3结构域的情况下，这些Fc局部结构域单体包含连续序列且在这些元件之间不需要结构域连接。相比之下，例如，当两个或更多个Fc结构域单体或局部Fc结构域单体以非天然存在的方式连接以形成各个斯塔都聚体单体时，可以使用结构域连接。一个实例是在两个铰链/CH2/CH3肽之间连接，从而产生斯塔都聚体的各个斯塔都聚体单体，其包含：铰链/CH2/CH3/L/铰链/CH2/CH3，其中“L”是结构域连接。在所描述的各种情况下，结构域连接可以是接合抗体Fc结构域单体中的铰链与CH结构域的重链的天然存在的部分之一。可选地，结构域连接可以是在各个斯塔都聚体单体的Fc结构域单体和局部Fc结构域单体之间提供所需间隔和柔性且允许各个斯塔都聚体单体彼此配对以形成组成本发明的斯塔都体的斯塔都聚体的任何其它氨基酸序列。示例性结构域连接是GS连接子序列。GS连接子序列可以包含1个、2个、3个、4个或更多个GGGGS重复序列。优选地，GS连接子序列包含3个(G3S)或4个(G4S)GGGGS重复序列。
在一些实施方案中，各免疫活性生物模拟化合物将优选地在斯塔都体的各斯塔都聚体单体中含有至少一个结构域连接，这将用于将免疫活性生物模拟物的Fc结构域维持在受限的空间区域内并且将通过例如借助共结合于免疫活性生物模拟物内的Fc结构域而使FcγR聚集来促进FcγR活化活性。优选地，结构域连接将允许与IgG分子的铰链结构域所提供的相同或更大程度的构象可变性。所有上述连接在本领域中都是众所周知的。
斯塔都聚体单体间连接
本发明的生物模拟化合物中存在的独立连接是在构成本发明斯塔都体的两个或更多个独立斯塔都聚体单体之间出现的“斯塔都聚体单体间连接”。尽管结构域连接是起到使构成生物模拟化合物的各个斯塔都聚体单体的Fc结构域单体和局部Fc结构域单体彼此连接作用的短氨基酸序列，但是斯塔都聚体单体间连接起到接合构成生物模拟化合物的两个或更多个独立斯塔都聚体单体的作用。斯塔都聚体单体间连接可以是能够使各个斯塔都聚体单体稳定缔合的任何连接。在一些实施方案中，斯塔都聚体单体间连接可以是斯塔都聚体单体之间的共价连接。可选地，斯塔都聚体单体之间的斯塔都聚体单体间连接可以借助直接化学交联形成。在优选实施方案中，斯塔都聚体单体结构利用Fc结构域单体之间的天然自组装性质来产生包含本发明的斯塔都体的自组装斯塔都聚体。熟练技术人员将理解，斯塔都聚体单体间连接允许两个或更多个独立斯塔都体单体形成包含本多聚化斯塔都体发明的斯塔都体生物模拟化合物，且所得复合物能够使多于一个FcγR交联。
如上文讨论，在优选实施方案中，形成斯塔都聚体的斯塔都聚体单体间连接是由斯塔都聚体单体的自组装产生的连接。在一个实施方案中，构成斯塔都聚体的两个斯塔都聚体单体是相同的肽，从而构成斯塔都聚体的两个独立斯塔都聚体单体在序列上是相同的。然而，熟练技术人员将理解其它实施方案包括其中氨基酸序列上彼此不同的斯塔都聚体单体的斯塔都聚体。
两个斯塔都聚体单体可以例如通过平行对齐形成斯塔都聚体，从而在斯塔都聚体单体中的相同的Fc局部结构域单体之间发生配对。然而，本发明也包括其中配对在不相同的Fc局部结构域单体之间发生的实施方案和其中配对在斯塔都聚体单体的相同的Fc局部结构域单体之间发生，但是这两个斯塔都聚体单体的比对偏移的实施方案。
多聚化结构域
多聚化结构域可以包含引起二聚体蛋白质进一步多聚化的肽序列。如本文中所使用的“多聚化”是指多个(即，两个或更多个)独立斯塔都体同源二聚体连接或结合在一起。例如，当至少一个斯塔都体同源二聚体(即，至少一个包含一个或多个Fc结构域和一个或多个Fab结构域的同源二聚多肽)经由多聚化结构域连接于至少一个其它斯塔都体同源二聚体时，斯塔都体发生多聚化。肽多聚化结构域的实例包括IgG2铰链、异亮氨酸拉链、胶原蛋白甘氨酸-脯氨酸-脯氨酸重复序列(“GPP”)和锌指结构。在本领域中充分描述了糖基化对肽多聚化的影响(例如，Role of Carbohydrate in Multimeric Structure ofFactor VIII/V on Willebrand Factor Protein.Harvey R.Gralnick,Sybil B.Williams和Margaret E.Rick.Proceedings of the National Academy of Sciencesof the United States of America,第80卷,第9期,[Part 1:Biological Sciences](1983年5月1日),第2771-2774页；Multimerization and collagen binding ofvitronectin is modulated by its glycosylation.Kimie Asanuma,Fumio Arisaka和Haruko Ogawa.International Congress Series第1223卷,2001年12月,第97-101页)。
在一个优选实施方案中，多聚化结构域是IgG2铰链。如本领域中已知，人IgG2的铰链区可以形成共价二聚体(Yoo,E.M.等,J.Immunol.170,3134-3138(2003)；Salfeld Nature Biotech.25,1369-1372(2007))。IgG2的二聚体形成可能借助IgG2铰链结构通过C-C键介导(Yoo等,2003)，表明单独的铰链结构可以介导二聚体形成。然而，人血清中存在的IgG2二聚体的量是有限的。不存在IgG2的多聚化超越同源二聚体的二聚体的定量证据。(Yoo等,2003)。即，没有发现天然IgG2在人血清中形成更高阶多聚体。
人IgG2铰链单体的氨基酸序列如下：ERKCCVECPPCP(SEQ ID NO:3)。SEQ ID NO:3中的4个半胱氨酸的任一个的突变都可能与大幅度削弱斯塔都体的多聚化相关。存在IgG2铰链单体的两个C-X-X-C部分。因此，本发明的斯塔都体可以包含IgG2铰链单体的完整12个氨基酸序列，或任意一个或两个的四氨基酸核心，连同Fc结构域单体。尽管核心结构的X-X可以是任何氨基酸，但在优选实施方案中，X-X序列是V-E或P-P。熟练技术人员将理解，IgG2铰链区单体可以由除核心的四个氨基酸结构之外的铰链区序列的任意部分组成，所述部分包括IgG2铰链区序列的全部和IgG2CH2和CH3结构域单体序列的一些或全部。不受理论约束，一个斯塔都体同源二聚体的IgG2铰链多聚化结构域可以通过与另一个斯塔都体同源二聚体的任何部分相互作用而形成多聚体。即，一个斯塔都体同源二聚体的IgG2铰链可以通过结合另一个斯塔都体同源二聚体的IgG2铰链进行多聚化，从而形成同源二聚体的二聚体或更高阶多聚体，同时相对于天然IgG1Fc，保留增加的与Fc受体的功能性结合。可选地，一个斯塔都体同源二聚体的IgG2铰链结构域可以结合另一个斯塔都体同源二聚体的IgG1铰链，从而形成同源二聚体的二聚体或更高阶多聚体，同时相对于天然IgG1Fc，保留增加的与Fc受体的功能性结合。还可能的是，一个斯塔都体同源二聚体的IgG2铰链结构域与IgG1Fc结构域的另一个部分(即，另一个斯塔都体同源二聚体的CH2结构域或CH3结构域)结合以形成同源二聚体的二聚体或更高阶多聚体，同时相对于天然IgG1Fc，保留增加的与Fc受体的功能性结合。
在另一个优选实施方案中，亮氨酸拉链可以用作多聚化结构域。在另一个优选实施方案中，异亮氨酸拉链可以用作多聚化结构域。已知亮氨酸拉链和异亮氨酸拉链(卷曲螺旋结构域)促进蛋白质二聚体、三聚体和四聚体的形成(Harbury等,Science 262:1401-1407(1993)；O'Shea等,Science 243:538(1989))。
尽管熟练技术人员将理解，可以使用不同类型的亮氨酸拉链和异亮氨酸拉链，但在一个实施方案中，使用来自如所描述那样经修饰的GCN4转录调节物的异亮氨酸拉链(Morris等,Mol.Immunol.44:3112-3121(2007)；Harbury等,Science 262:1401-1407(1993))：GGGSIKQIEDKIEEILSKIYHIENEIARIKKLIGERGHGGG(SEQ ID NO:5)。在另一个实施方案中，所使用的异亮氨酸拉链的序列是：GGGSIKQIEDKIEEILSKIYHIENEIARIKKLIGERGHDI(SEQ ID NO:32)。这些异亮氨酸拉链序列仅是可以用于Fc结构域单体多聚化的若干种可能序列中的两种。尽管可以使用SEQ ID NO:5或32中所示出的整个序列，但是序列中加下划线的部分代表了可用于本发明的斯塔都体中的异亮氨酸拉链的核心序列。因此，构成本发明的斯塔都体的斯塔都聚体单体可以包含异亮氨酸拉链的完整氨基酸序列，或28个氨基酸核心，连同一个或多个Fc结构域单体。熟练技术人员还将理解，除核心28个氨基酸结构之外，异亮氨酸拉链可以由拉链的任何部分组成，并且因此可以由多于28个氨基酸但是小于SEQ ID NO:5或32的整个序列的氨基酸组成。
在另一个优选实施方案中，GPP重复序列可以用作多聚化结构域。GPP是存在于人胶原蛋白中的引起胶原蛋白:蛋白质结合的氨基酸序列。尽管熟练技术人员将理解，不同类型的GPP重复序列可以用作多聚化结构域，但在优选实施方案中，使用如所描述那样的甘氨酸-脯氨酸-脯氨酸重复序列(Fan等,FASEB Journal 3796第22卷2008)：(SEQ ID NO:26)。这种甘氨酸-脯氨酸-脯氨酸重复序列仅是可用于使斯塔都体多聚化的若干种可能序列之一。尽管可以使用SEQ ID NO:26中所示出的整个序列，但是不同长度的重复序列也有可能可用来使Fc结构域单体多聚化。同样，还可以对GPP重复序列内的含有不同氨基酸的重复序列进行置换。
斯塔都体
本发明涉及斯塔都体及制备和使用斯塔都体的方法。如本文中所使用，“斯塔都体”是指包含两个或更多个与一个或多个Fab结构域连接的Fc结构域的分子。因此，借助于这样的Fab结构域和Fc结构域，斯塔都体具有抗原结合能力和Fcγ受体结合活性。在一些实施方案中，Fcγ受体活性可能是由于能够结合并交联等于或大于天然结构全抗体的Fc部分的FcγR。所述斯塔都体的Fab部分可包含重链和轻链。可变重链和轻链可以独立地来自于任何相容的免疫球蛋白，诸如IgA1、IgA2、IgM、IgD、IgE、IgG1、IgG2、IgG3或IgG4，并且可以来自于相同或不同的Ig同种型，但优选来自于相同的Ig同种型。轻链κ或λ也可以来自于不同的Ig同种型。在一些实施方案中，斯塔都体，如斯塔都聚体，可以结合两个或更多个FcγR且调节免疫功能。在一个实施方案中，本发明的斯塔都体包含Fab结构域、一个或多个Fc结构域和一个或多个多聚化结构域，其中所述一个或多个多聚化结构域中的至少一个分隔两个或更多个Fc结构域，或位于Fc区的羧基端。术语“Fc区”在本文中用于指包含Fc结构域、结构域连接和多聚化结构域的斯塔都体区域。因此，Fc区是不包含Fab结构域的斯塔都体区域。上文描述了多聚化结构域，并且其为已知会在其天然存在的蛋白质中引起蛋白质多聚化的氨基酸序列。在一个实施方案中，多聚化结构域可以是IgG铰链、异亮氨酸拉链或其组合。在具体实施方案中，斯塔都体由Fab、第一Fc结构域、异亮氨酸拉链、IgG2铰链和第二Fc结构域构成。Fab包含在天然免疫球蛋白结构中存在的重链和轻链。
本发明的斯塔都体可分类为连续斯塔都体或C末端斯塔都体。这些斯塔都体的一般结构示于图1中。本发明的连续斯塔都体和C末端斯塔都体优选包含Fab结构域；一个或多个Fc结构域；和一个或多个多聚化结构域。例如，本发明的连续斯塔都体和C末端斯塔都体优选包含Fab结构域；1个、2个、3个、4个或5个Fc结构域；和1个、2个、3个、4个或5个多聚化结构域。在一些实施方案中，本发明的连续斯塔都体和C末端斯塔都体还包含一个或多个间隔区或柔性连接子。连续斯塔都体优选包含2个或更多个Fc结构域。例如，连续斯塔都体优选包含2个、3个、4个、5个或6个Fc结构域。
连续斯塔都体被设计成通过在嵌合重链中并入两个或更多个Fc结构域而同时结合并交联多个低亲和力FcγR。Fc结构域由一个或多个不同的或相同的多聚化结构域、间隔区和/或柔性连接子分隔。连续斯塔都体可以是多聚化连续斯塔都体或非多聚化连续斯塔都体。多聚化连续斯塔都体包含至少一个与多聚体的形成相关的多聚化结构域。上文描述了多聚化结构域且其包括IgG2铰链、异亮氨酸拉链、胶原蛋白GPP和锌指结构。非多聚化连续斯塔都体可以不包含多聚化结构域，但可以包含一个或多个结构域连接，诸如G4S连接子。在一些实施方案中，多聚化连续斯塔都体包含一个或多个多聚化结构域和一个或多个结构域连接。连续斯塔都体的一般结构示于图2中。包含一个或多个所指示的多聚化结构域和/或连接子结构域的示例性连续斯塔都体构建体的更具体结构(ILZ是指异亮氨酸拉链；2H是指IgG2铰链；且G4S是指氨基酸序列Gly4Ser)示于图3中。包含对EGFR具有特异性的Fab区的连续斯塔都体构建体示于下表1中。包含对HER2/neu具有特异性的Fab区或对CD20具有特异性的Fab区的连续斯塔都体构建体示于图4和下表1中。
C末端多聚化斯塔都体被设计成通过在Fc区的C末端并入一个或多个多聚化结构域而同时结合并交联多个低亲和力FcγR且借此促进形成能够同时与多个Fc受体相互作用的斯塔都体复合体。C末端斯塔都体的示例性结构示于图5中。包含抗EGFR Fab的C末端多聚化斯塔都体示于图6和下表1中。包含抗CD20Fab的C末端多聚化斯塔都体构建体也示于图6和下表1中。在C末端斯塔都体中，重链的Fc区在C末端侧具有一个或多个不同的或相同的多聚化结构域、间隔区或柔性连接子。所示出的C末端斯塔都体还包括含有多聚化结构域和纯化标签的构建体。
表1.未改变的单克隆抗体和斯塔都体构建体
熟练技术人员将认识到，上文描述的具体斯塔都体是示例性的，并且可能存在具有各种结构和斯塔都聚体及斯塔都聚体结构单元的组合的连续斯塔都体，例如，包含一个或多个多聚化结构域和两个或更多个Fc结构域的连续多聚化C末端斯塔都体。连续多聚化C末端斯塔都体可以包含处于两个Fc结构域之间的一个或多个多聚化结构域和处于Fc区C末端上的一个或多个多聚化结构域。
斯塔都体将拥有Fab部分的抗原结合性质和以上描述的斯塔都聚体性质。这样的组合将用于以高于全抗体的Fc骨架可以实现的比率结合、交联和活化效应细胞上的Fcγ受体，特别是在低表位表达环境中(例如，90％的乳腺癌患者的肿瘤未分类为HER2/neu高表达者)，从而在更高百分比的患者中诱导ADCC、CDC和/或DC。如上文所指示，可以向斯塔都聚体添加一个或多个抗原结合Fab结构域以形成斯塔都体。
我们惊讶地发现，具有处于两个Fc结构域之间(例如，分别对应于SEQ IDNo 35、33、37和66的GB2542、GB3542、GB4542和GB7542)或位于Fc区羧基端上(例如分别对应于SEQ ID No 91、70、76和87的GB2547、GB3547、GB4547和GB7547)的一个或多个多聚化结构域的斯塔都体与亲本mAb和无多聚化结构域或有一个或多个位于Fc区N末端上的多聚化结构域的斯塔都体相比不仅展现出优良的多聚化，而且还展现出优良的结合和优良的细胞毒性，包括ADCC、CDC、DC和细胞毒性的其它机制。具体地说，包含异亮氨酸拉链和IgG2铰链的斯塔都体产生特别强的ADCC、CDC和DC以及特别强的c1q结合。出乎意料的是，当这两个多聚化结构域位于两个Fc结构域之间时，多聚化、与FcγR的结合以及ADCC、CDC和DC结果以及c1q结合特别强劲。
我们惊讶地发现，相对于构成所述斯塔都体的单独的斯塔都聚体而言，Fab的存在可以显著改变所得斯塔都体的多聚化能力。更具体地说，具有N末端多聚化结构域的斯塔都聚体可以很好地多聚化并且很好地发挥作用，但如WO 2008/151088中所公开的由相同斯塔都聚体构成的斯塔都体可能较差地发生多聚化或完全不发生多聚化。相反地，具有一个或多个多聚化结构域的连续斯塔都体或具有一个或多个C末端多聚化结构域的斯塔都体有可能比构成这样的斯塔都体的斯塔都聚体更好地多聚化。
在一些实施方案中，本发明的斯塔都体还包含危险信号或损坏信号。在一些实施方案中，本发明的斯塔都体是与危险信号或损坏信号同时或在相同治疗周期中施用给患者。Pradeu和Cooper(Front Immunol.3:Article 287,1-9(2012)最近已经回顾了这样的危险信号或损坏信号。在一个实施方案中，可包含在本发明的斯塔都体内或与其一起施用的危险信号或损坏信号包括内源信号，包括CD40-L、TNF-α、IL-1β、IFNα、细胞内核苷酸ATP或UTP、未甲基化长CpG序列、热休克蛋白、反应性氧中间体、血管活性肠肽、金属蛋白酶-9、硫酸类肝素的降解产物、透明质酸的小分解产物、LDL衍生的磷脂或LOX-1。在另一个实施方案中，可包含在本发明的斯塔都体内或与其一起施用的危险信号或损坏信号包括尿酸、高迁移率族蛋白1、炎性体(含有模式识别受体的多蛋白复合体)、IL-1α；S100蛋白；肝癌衍生生长因子、IL-1α；高浓度的腺苷5'-三磷酸酶、β-D-吡喃葡萄糖基神经酰胺、IL-33、诸如金纳米颗粒的纳米颗粒或F-肌动蛋白。在一个特别优选的实施方案中，本发明的斯塔都体包含处于所述斯塔都体的羧基端处的肽危险信号或损坏信号，包括血管活性肠肽、金属蛋白酶-9、热休克蛋白、高迁移率族蛋白1、S-100、IL-1a、肝癌衍生生长因子、与这些肽具有至少70％氨基酸序列相似性的肽以及是这些肽的片段的肽。
在一些实施方案中，本发明的斯塔都体包含对EGFR具有特异性的Fab。在一些实施方案中，EGFR特异性Fab源自于单克隆抗体西妥昔单抗。在一些实施方案中，所述Fab与SEQ ID NO:31具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源性。
在一些实施方案中，本发明的斯塔都体包含对HER2/neu具有特异性的Fab。在其它实施方案中，所述斯塔都体包含源自于抗HER2/neu单克隆抗体曲妥珠单抗的Fab。在一些实施方案中，所述Fab与SEQ ID NO 34具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源性。
在一些实施方案中，本发明的斯塔都体包含对CD20具有特异性的Fab。在其它实施方案中，所述斯塔都体包含源自于抗CD20单克隆抗体利妥昔单抗的Fab。在一些实施方案中，所述Fab与SEQ ID NO 36具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源性。
在一些实施方案中，本发明的斯塔都体包含对TNF具有特异性的Fab。在其它实施方案中，所述斯塔都体包含源自于抗TNF单克隆抗体阿达木单抗的Fab。在一些实施方案中，所述Fab与SEQ ID NO 67具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源性。
在一些实施方案中，本发明的斯塔都体包含多于一个Fab。在另一实施方案中，所述多于一个Fab各自对不同的抗原具有特异性。例如，斯塔都体可包含对以下具有特异性的Fab：EGFR和HER2/neu；CD3和CD19；CD3和CD20；CD3和癌胚抗原；CD3和EGFR；以及其组合。
在某些实施方案中，斯塔都体从氨基到羧基末端包含Fab结构域、第一IgG1CH2、第一IgG1CH3、异亮氨酸拉链、IgG2铰链、第二IgG1CH2和第二IgG1CH3(图7)。
在具体实施方案中，本发明的斯塔都体包含根据SEQ ID NO:1的前导氨基酸序列、根据SEQ ID NO:31的EGFR特异性可变区和CH2区氨基酸序列、根据SEQ ID NO:2的IgG1Fc结构域、根据SEQ ID NO:32的异亮氨酸拉链和根据SEQ ID NO:3的IgG2铰链。
在另一个实施方案中，整个斯塔都体的氨基酸序列是根据SEQ ID NO:33(表2中的构建体GB3542)。在一个实施方案中，所述斯塔都体与SEQ ID NO:33具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源性。
在另一个实施方案中，整个斯塔都体的氨基酸序列是根据SEQ ID NO:35(表2中的构建体GB2542)。在一个实施方案中，所述斯塔都体与SEQ ID NO:35具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源性。
在另一个实施方案中，整个斯塔都体的氨基酸序列是根据SEQ ID NO:37(表2中的构建体GB4542)。在一个实施方案中，所述斯塔都体与SEQ ID NO:37具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源性。
在另一个实施方案中，整个斯塔都体的氨基酸序列是根据SEQ ID NO:66(表2中的构建体GB7542)。在一个实施方案中，所述斯塔都体与SEQ ID NO:66具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源性。
表2.斯塔都体构建体GB2542、GB3542、GB4542和GB7542以及构建体GB2542、GB3542、GB4542和GB7542的组分的氨基酸序列
应理解，本文中所公开的斯塔都体可以源自于多种物种中的任一种。实际上，在本发明的任一个生物模拟分子中的Fc结构域或Fc局部结构域可以源自于多于一个(例如，来自两个、三个、四个、五个或更多个)物种的免疫球蛋白。然而，它们将更常见地源自于单一物种。另外，应了解，本文中所公开的任何方法(例如，治疗方法)可以适用于任何物种。通常，适用于目的物种的生物模拟物的组分将全部源自该物种。然而，也可以使用其中全部组分来自不同物种或来自多于一个物种(包括或不包括相关方法适用的物种)的生物模拟物。
就免疫球蛋白亚类以及源自它们的生物体方面，可以独立地选择包含本发明的斯塔都体的Fc结构域和Fc局部结构域的特定CH1、CH2、CH3和CH4结构域和铰链区。因此，本文中所公开的斯塔都体可以包含独立地来自诸如人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA1、IgD、IgE和IgM、小鼠IgG2a或犬IgGa或IgGb的多个免疫球蛋白类型的Fc结构域和局部Fc结构域。优选地，对于人用治疗剂，本发明的Fc结构域具有人IgG1同种型。类似地，各Fc结构域和局部Fc结构域可以源自于多个物种，优选地是哺乳动物物种，包括非人灵长类(例如，猴、狒狒和黑猩猩)、人、鼠、家鼠、牛科动物、马科动物、猫科动物、犬科动物、猪科动物、兔、山羊、鹿、绵羊、雪貂、沙鼠、豚鼠、仓鼠、蝙蝠、鸟类(例如，鸡、火鸡和鸭)、鱼类和爬行类，以产生物种特异性或嵌合斯塔都体分子。
Fab可以是由人恒定区和非人可变区(诸如来自于小鼠、大鼠、兔、猴或山羊抗体的可变区)构成的嵌合结构。本领域的普通技术人员将能够使用目前可用的和在科学文献中针对这样的结构所描述的方法制备各种Fab嵌合结构以便并入斯塔都体中。也可以对各个Fab结构域、Fc结构域和局部Fc结构域进行人源化。因此，可以设计类似于“人源化”单克隆抗体的“人源化”斯塔都体。
本领域技术人员将认识到，不同的Fc结构域和局部Fc结构域将提供不同类型的功能性。例如，FcγR特异性结合IgG免疫球蛋白且不良好地结合其它类别的免疫球蛋白。因此，意图设计具有多个Fcγ受体结合能力的斯塔都体，本领域技术人员将设计斯塔都聚体Fc结构域，其至少并入IgG的充分表征的Fcγ受体结合序列，包括在下部IgG铰链区和/或IgG CH2及CH3结构域中的那些序列。本领域普通技术人员还将理解多种有害结果可能与特定Ig结构域的使用相关，诸如与IgA输注相关的过敏反应。本文中所公开的生物模拟物通常应当设计成避免这样的作用，虽然在特定环境下，这样的作用可能是合乎需要的。
本发明还涵盖了包含Fc结构域和Fc局部结构域的斯塔都体，所述Fc结构域和Fc局部结构域具有与Fc结构域或Fc局部结构域的天然存在的氨基酸序列不同的氨基酸。用于包括在本发明生物模拟化合物中的优选Fc结构域对全Fcγ受体或FcγR的可溶性胞外结构域部分具有可测量的特异性结合亲和力。众多Fc结构域和Fc结构域单体的一级氨基酸序列和X射线结晶学结构是本领域可获得的。参见例如Woof JM,Burton DR.Human antibody-Fc receptorinteractions illuminated by crystal structures.Nat Rev Immunol.2004年2月；4(2):89-99。具有Fcγ受体结合能力的代表性Fc结构域包括来自人IgG1的Fc结构域(SEQ ID NO:2)。已经对这些天然序列进行了广泛的结构-功能分析，包括对功能性序列的位点定向诱变定位。基于先前的这些结构-功能研究和可用的结晶学数据，本领域技术人员可以设计功能性Fc结构域序列变体，同时保留Fc结构域的FcγR受体结合能力。例如，可以添加半胱氨酸残基以增强单体之间的硫化键合作用或可以缺失半胱氨酸残基以改变构成斯塔都体同源二聚体的斯塔都聚体同源二聚体之间的相互作用。
另外，本发明涵盖了包含Fab结构域的斯塔都体，所述Fab结构域具有与源自其中的Fab结构域的抗体的氨基酸序列不同的氨基酸。用于包括在本发明的生物模拟化合物中的Fab结构域对特定抗原具有可测量的特异性结合亲和力。优选地，该生物模拟化合物所具有的结合亲和力大于相应未改变的抗体的结合亲和力。
氨基酸变化可能减少、增加或不改变斯塔都体对Fcγ受体或抗原的结合亲和力。优选地，这样的氨基酸变化将是保守性氨基酸置换，然而，这样的变化包括缺失、添加和其它置换。保守性氨基酸置换通常包括以下各组内的变化：甘氨酸和丙氨酸；缬氨酸、异亮氨酸和亮氨酸；天冬氨酸和谷氨酸；天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸和苏氨酸；赖氨酸、组氨酸和精氨酸；以及苯丙氨酸和酪氨酸。另外，氨基酸变化可以增强多聚强度，例如通过添加半胱氨酸残基。
氨基酸变化可以是天然存在的，或可以例如通过位点定向诱变引入。氨基酸变化可以在Fc结构域或Fab结构域内的任何位置出现，只要Fc结构域保留其受体结合功能和生物学活性且Fab结构域保留其抗原结合功能和生物学活性。在一个优选实施方案中，多态性或突变导致增强的受体/抗原结合作用和/或增强的多聚化或生物学功能。对于Fc结构域，多态性/突变优选地在氨基酸位置233-435中的一个或多个位置上出现，所述位置编号是根据如Kabat等,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版Public HealthService,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)中的EU索引。这些氨基酸位置中的具体多态性/突变在本领域中是熟知的并且可以例如在Shields等,(2001)“High Resolution Mapping of the Binding Site on HumanIgG1for FcγRI,FcγRII,FcγRIII and FcRn and Design of IgG1Variants withImproved Binding to the FcγR”,J.Biol.Chem.,276(9):6591-6601中找到，所述文献通过引用整体并入本文。
从上文中，应了解，本发明的斯塔都体包括如下斯塔都体：(a)仅具有天然存在的Fab和Fc结构域；(b)具有天然存在的Fab和Fc结构域与氨基酸序列有所改变的Fab和Fc结构域的混合物；和(c)仅具有氨基酸序列有所改变的Fab和Fc结构域。全部要求是，含有改变的氨基酸序列的斯塔都体所具有的抗原和FcγR受体结合能力是包含具有天然存在的序列的Fab和Fc结构域的相应斯塔都体的至少25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％或甚至更多。
本发明的斯塔都体中出现的前述Fcγ受体和抗原结合位点可以通过基因工程在序列上改变，以便可预测地获得相对于天然序列具有改变的结合能力和亲和力的结合位点。例如，可以改变特定残基，以减少生物模拟化合物与FcγRIIb的Fc结构域结合同时增加与FcγRIIIa的结合或反之亦然，或减少生物模拟化合物与FcγRIIb的Fc结构域结合同时增加与FcRn的结合或反之亦然。针对人IgG Fcγ受体结合序列的基于广泛诱变的结构-功能分析的一个实例是Robert L.Shields等,High Resolution Mapping of the Binding Site on HumanIgGl for FcγRI,FcγRII,FcγRIII,and FcRn and Design of IgGl Variants withImproved Binding to the FcγR.J.Biol.Chem.,2001年2月；276:6591-6604。已经对鼠IgG Fc(mIgG Fc)进行了类似的研究。基于天然IgG Fc结构域跨物种的结构同源性和一级序列同源性，本领域技术人员可以将人IgG Fc和小鼠IgGFc的广泛结构-功能知识转换成本发明的生物模拟化合物中所有天然Fcγ受体结合位点序列的理性诱变，以便设计出具有特定Fcγ受体特异性和结合亲和力的结合位点。
除氨基酸序列组成之外，已知Fc结构域的糖含量也在Fc结构域结构和与FcγR的结合相互作用方面起重要作用。参见例如Robert L.Shields等,Lack ofFucose on Human IgGl N-Linked Oligosaccharide Improves Binding to HumanFcγRIII and Antibody-dependent Cellular Toxicity.J.Biol.Chem.,2002年7月；277:26733-26740(doi:10.1074/jbc.M202069200)；Ann Wright和Sherie L.Morrison.Effect of C2-Associated Carbohydrate Structure on Ig EffectorFunction:Studies with Chimeric Mouse-Human IgGl Antibodies inGlycosylation Mutants of Chinese Hamster Ovary Cells.J.Immunol,1998年4月；160:3393-3402。类似地，已知抗体的岩藻糖基化程度在抗原结合和ADCC方面起作用。参见例如Yamane-Ohnuki和Satoh,Production of therapeuticantibodies with controlled fucosylation.Mabs.2009年5月-6月；1(3):230-236。可以使用例如特定蛋白质表达***(包括特定细胞系)或体外酶修饰来控制糖含量。在一些实施方案中，对斯塔都体进行脱岩藻糖基化。已知脱岩藻糖基化能提高IgG1Fc对FcγRIIIa的亲和力。因此，本发明包括具有获得所述结构域的全抗体的天然糖含量的斯塔都体，以及具有改变的糖含量的那些斯塔都体复合物。在另一个实施方案中，使用经修饰的细胞系来产生优选的糖基化模式。在另一个实施方案中，使用酶化学糖基化来产生优选的糖基化模式，包括利用非天然的糖。在另一个实施方案中，与相同斯塔都体的同源二聚体组分相比，斯塔都体的多聚体组分以不同的糖基化模式为特征。在一个优选实施方案中，斯塔都体富含多聚体，所述多聚体包含增强Fc受体结合的糖基化模式。
添加至Fc局部结构域、多聚化区域的多肽链或糖基化变化可以在Fc结构域中产生构象变化，从而引起Fc结构域对Fcγ受体的结合增强。因此，似乎非常小地改变多肽也可以产生能够增强多个Fcγ受体或FcRn受体的结合的斯塔都体或结合多个Fcγ受体或FcRn受体的能力降低的斯塔都体。
熟练技术人员将进一步认识到，用于本发明实施方案中的Fc结构域和Fc局部结构域不需要是全长形式。即，本发明涵盖使用从构成本发明的斯塔都体的特定Fc结构域单体和Fc局部结构域单体的氨基末端、羧基末端或中部缺乏氨基酸的Fc结构域单体和Fc局部结构域单体。
例如，已经描述了Fcγ受体的人IgG免疫球蛋白上的结合位点(例如Radaev,S.,Sun,P.,2001.Recognition of Immunoglobulins by FcγReceptors.MolecularImmunology 38,1073-1083；Shields,R.L.等,2001.High Resolution Mappingof the Binding Site on Human IgGl for FcγRI,FcγRII,FcγRIII,and FcRn andDesign of IgGl Variants with Improved Binding to the FcγR.J.Biol.Chem.276(9),6591-6604)。基于该知识，可以从这些免疫球蛋白的Fc结构域中移除氨基酸并且确定对Fc结构域与受体之间的结合相互作用的影响。因此，本发明涵盖IgG Fc结构域，其具有至少约90％涵盖如Radaev,S.,Sun,P.,2001中所定义的下铰链和CH2的位置233至338的氨基酸。
本发明的IgG免疫球蛋白的Fc局部结构域可包括全部或部分铰链区、全部或部分CH2结构域和全部或部分CH3结构域。
由Fc局部结构域单体构建仅具有部分铰链区、部分CH2结构域或部分CH3结构域的IgG Fc局部结构域。因此，本发明包括源自于铰链区的N末端或铰链区的C末端的IgG铰链区单体。它们因此可以含有例如5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个、50个、51个、52个、53个、54个、55个、56个、57个、58个、59个、60个、61个或62个(对于IgG1，直至15个；对于IgG2，直至12个；对于IgG3，直至62个；对于IgG4，直至12个)铰链区的氨基酸。
本发明也包括源自于CH2结构域的N末端或CH2结构域的C末端的IgGCH2结构域单体。它们因此可以含有例如5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个、50个、51个、52个、53个、54个、55个、56个、57个、58个、59个、60个、61个、62个、63个、64个、65个、66个、67个、68个、69个、70个、71个、72个、73个、74个、75个、76个、77个、78个、79个、80个、81个、82个、83个、84个、85个、86个、87个、88个、89个、90个、91个、92个、93个、94个、95个、96个、97个、98个、99个、100个、101个、102个、103个、104个、105个、106个、107个、108个、109个或110个(对于IgG1和IgG3，直至110个；对于IgG2和IgG4，直至109个)CH2结构域的氨基酸。
本发明还包括源自CH3结构域的N末端或CH3结构域的C末端的IgGCH3结构域单体。它们因此可以含有例如5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个、50个、51个、52个、53个、54个、55个、56个、57个、58个、59个、60个、61个、62个、63个、64个、65个、66个、67个、68个、69个、70个、71个、72个、73个、74个、75个、76个、77个、78个、79个、80个、81个、82个、83个、84个、85个、86个、87个、88个、89个、90个、91个、92个、93个、94个、95个、96个、97个、98个、99个、100个、101个、102个、103个、104个、105个、106个或107个(对于IgG1和IgG3，直至106个；对于IgG2和IgG4，直至107个)CH3结构域的氨基酸。
如本文中所使用的术语“分离的”多肽或肽指没有天然存在的对应物或已经从天然伴随之的组分中(例如，在组织如胰组织、肝组织、脾组织、卵巢组织、睾丸组织、肌肉组织、关节组织、神经组织、胃肠道组织或乳腺组织或肿瘤组织(例如，乳腺癌组织)或体液如血液、血清或尿中)分离或纯化的多肽或肽。通常，当多肽或肽按干重不含至少70％与其天然结合的蛋白质和其它天然存在的有机分子时，将它视为“分离的”。优选地，本发明的多肽(或肽)制备物按干重计分别占本发明多肽(肽)的至少80％，更优选地至少90％且最优选地至少99％。由于化学合成的多肽或肽天然地与天然情况下伴随它的组分分隔，所以合成多肽或肽是“分离的”。
本发明的分离多肽(或肽)可以例如通过从天然来源(例如，从组织或体液)中提取；通过表达编码该多肽或肽的重组核酸；或通过化学合成来获得。在与天然衍生所述多肽或肽的来源不同的细胞***中产生的多肽或肽是“分离的”，因为它必然将不含天然伴随它的组分。可以通过任何适当的方法(例如柱色谱、聚丙烯酰胺凝胶电泳或HPLC分析)测量分离度或纯度。
药物组合物
将借助任何常见的途径、经口、肠胃外地或局部施用本文中所描述的斯塔都体组合物。示例性途径包括但不限于经口、经鼻、颊部、经直肠、经***、经眼、皮下、肌内、腹膜内、静脉内、动脉内、肿瘤内、脊髓、鞘内、关节内、动脉内、蛛网膜下、舌下、口腔粘膜、支气管、淋巴液、子宫内、皮下、肿瘤内、整合于可植入器械(如缝线)上或可植入器械(如可植入聚合物)内、硬膜内、皮质内或皮肤途径。这样的组合物正常将作为如本文中所描述的药学上可接受的组合物施用。在一个优选实施方案中，所述分离的斯塔都体经静脉内或皮下施用。
如本文中所使用的术语“药学上可接受的载体”包括任何和全部溶剂、分散介质、包衣、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。用于药学活性物质的这样的介质和试剂的用途在本领域中是熟知的。除非任何常规介质或试剂与本发明的载体或细胞不相容，否则预期将其用于治疗性组合物中。补充性活性成分也可以并入组合物中。
本发明的斯塔都体组合物可以按中性或盐形式配制。药学上可接受的盐包括与诸如氢氯酸或磷酸等无机酸或诸如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等有机酸形成的酸加成盐(用蛋白质的游离氨基形成的)。用游离羧基形成的盐也可以源自诸如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙或氢氧化铁的无机碱和诸如异丙胺、三甲胺、组氨酸、普鲁卡因等的有机碱。
通过以下方式制备无菌可注射溶液剂：根据需要将斯塔都体以所要求的量与上文列举的多种其它成分一起并入适当的溶剂中，随后过滤灭菌。通常，通过将多种灭菌活性成分并入含有碱性分散介质和来自上文所列举那些成分的所需其它成分的无菌媒剂中来制备分散体。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥技术和冷冻干燥技术，由此产生活性成分外加来自其先前无菌过滤溶液的任何额外所需成分的粉末。
此外，一个实施方案是适于经口施用的斯塔都体组合物并且在有或无惰性稀释剂的药学上可接受的载体中提供。载体应当是可吸收或可食用的并且包括液体、半固体(即糊膏)或固体载体。除非任何常规介质、试剂、稀释剂或载体有害于接受者或有害于其中所含的斯塔都体制备物的治疗有效性，否则其在用于实施本发明方法的可经口施用的斯塔都体组合物中使用是适当的。载体或稀释剂的实例包括脂肪、油、水、盐水溶液、脂质、脂质体、树脂、粘合剂、填料等或其组合。如本文所用的术语「经口施用」包括口服、颊部、肠内或胃内施用。
在一个实施方案中，斯塔都体组合物与载体是以任何便利且实用的方式，即通过溶解、混悬、乳化、混合、包囊化、微包囊化、吸收等进行组合。这样的程序对于本领域技术人员是常规的。
在具体实施方案中，将呈粉末形式的斯塔都体组合物与半固体或固体载体充分地组合或混合。混合可以按任何便利的方式(如碾磨)来进行。还可以在混合过程中添加稳定剂，以便保护组合物免于在经过胃时丧失治疗活性，即在胃中变性。用于可经口施用的组合物中的稳定剂的实例包括缓冲液、针对胃酸分泌的拮抗剂、诸如甘氨酸和赖氨酸的氨基酸、诸如葡萄糖、甘露糖、半乳糖、果糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、山梨醇、甘露醇等糖、蛋白水解酶抑制剂等。更优选地，对于经口施用的组合物，稳定剂也可以包括针对胃酸分泌的拮抗剂。
此外，与半固体或固体载体组合的用于经口施用的斯塔都体组合物还可以进一步配制成硬壳或软壳明胶胶囊剂、片剂或丸剂。更优选地，明胶胶囊剂、片剂或丸剂包覆有肠衣。肠衣防止组合物在pH为酸性的胃或上肠道中变性。参见例如美国专利号5,629,001。在抵达小肠后，此处碱性pH值溶解包衣并且允许组合物释放以便与肠道细胞(例如，Peyer结M细胞)相互作用。
在另一个实施方案中，将呈粉末形式的斯塔都体组合物与产生纳米颗粒的材料充分地组合或混合，从而包囊免疫活性生物模拟物或与免疫活性生物模拟物连接。各纳米颗粒将具有小于或等于100微米的尺寸。纳米颗粒可以具有允许胃肠道吸收免疫活性生物模拟物的粘膜粘附性质，否则所述免疫活性生物模拟物将不是可口服生物利用的。
在另一个实施方案中，将粉末状组合物与有或无稳定剂的液体载体(即，诸如水或盐水溶液)组合。
可以使用的具体斯塔都体制剂是免疫活性生物模拟物蛋白质在不含钾的基于磷酸盐的低渗缓冲液中的溶液，其中缓冲液的组成如下：6mM一水合磷酸二氢钠、9mM七水合磷酸氢二钠、50mM氯化钠，pH 7.0.+/-0.1。免疫活性生物模拟物蛋白质在低渗缓冲液中的浓度范围可以是10微克/ml至100微克/ml。这种制剂可以经由任何施用途径施用，例如但不限于静脉内施用。
此外，与半固体载体组合的用于局部施用的斯塔都体组合物还可以进一步配制成乳膏剂或凝胶油膏剂。用于形成凝胶油膏剂的优选载体是凝胶聚合物。用来制备本发明的凝胶组合物的优选聚合物包括但不限于卡波普、羧甲基纤维素和普卢兰尼克聚合物(pluronic polymer)。具体地说，将粉末状斯塔都体组合物与含有浓度在0.5％与5％重量/体积之间的诸如卡波普980的聚合剂的水凝胶组合，以便施用于皮肤以治疗皮肤上或皮肤下的疾病。如本文中所使用的术语“局部施用”包括施用至皮肤、表皮、皮下或粘膜表面。
此外，斯塔都体组合物可以配制成聚合物用于皮下或真皮下植入。用于药物输注的可植入聚合物的优选制剂是一般被认为安全的药剂并且可以例如包括交联葡聚糖(Samantha Hart,Master of Science Thesis,“Elution ofAntibiotics from a Novel Cross-Linked Dextran Gel:Quantification”VirginiaPolytechnic Institute and State University,2009年6月8日)、葡聚糖-酪胺(Jin等,(2010)Tissue Eng.Part A.16(8):2429-40)、葡聚糖-聚乙二醇(Jukes等,(2010)Tissue Eng.Part A.,16(2):565-73)或葡聚糖-戊二醛(Brondsted等,(1998)J.Controlled Release,53:7-13)。本领域技术人员将知道，可以形成许多相似的聚合物和水凝胶，从而并入在聚合物或水凝胶内部固定的斯塔都体并且控制孔径至所需的直径。
当配制时，以与剂量制剂相容的方式且以治疗有效量施用溶液，以便改善或纠正症状。制剂是以诸如可摄取溶液剂、药物释放胶囊剂等多种剂型容易地施用。取决于正在接受治疗的患者的状况，剂量可以存在一定的变化。在任何情况下，负责施用的人可以决定各个受试者的适当剂量。此外，对于人施用，制备物满足如FDA生物制品评价和研究中心标准所要求的无菌性、总体安全性和纯度标准。
施用途径将天然地随正在治疗的疾病的位置和本质而变化，并且可以包括例如皮内、经皮、皮下、肠胃外、经鼻、静脉内、肌内、皮下、透皮(percutaneous)、气管内、腹膜内、肿瘤内、灌注、灌洗、直接注射和经口施用。
如本文中所使用的术语“肠胃外施用”包括其中所述复合物在不涉及经肠吸收的情况下被吸收至受试者中的任何施用形式。本发明中所使用的示例性肠胃外施用包括但不限于肌内、静脉内、腹膜内、肿瘤内、眼球内、经鼻或关节内施用。
另外，本发明的斯塔都体可以任选地在另一种药剂之前、期间或之后施用。
下文是如所指示的用于具体示例性疾病的多种药物制剂类别和优选施用途径的具体实例：
颊部或舌下可溶性片剂：心绞痛、结节性多发性动脉炎。
静脉内：特发性血小板减少性紫癜、包涵体肌炎、副蛋白血症IgM脱髓鞘性多发性神经病、坏死性筋膜炎、天疱疮、坏疽、皮肌炎、肉芽肿、淋巴瘤、败血症、再生障碍性贫血、多***器官衰竭、未知意义的多发性骨髓瘤和单克隆丙种球蛋白病、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经根神经病、炎性肌病、血栓性血小板减少性紫癜、肌炎、贫血、瘤形成、溶血性贫血、脑炎、脊髓炎、尤其与人嗜T淋巴细胞病毒1相关的脊髓病、白血病、多发性硬化和视神经炎、哮喘、表皮坏死松解症、朗-爱二氏肌无力综合征、重症肌无力、神经病、葡萄膜炎、格-巴二氏综合征、移植物抗宿主病、僵人综合征、伴有抗Yo抗体的副肿瘤性小脑变性、伴有抗Hu抗体的副肿瘤性脑脊髓炎和感觉神经病、全身性血管炎、***性红斑狼疮、自身免疫糖尿病性神经病、急性特发性自主神经机能异常性神经病、伏格特-小柳-原田三氏综合征、多灶性运动神经病、与抗/GMl相关的下位运动神经元综合征、脱髓鞘、膜增生性肾小球肾炎、心肌病、川崎病、类风湿性关节炎和埃文斯综合征IM-ITP、CIDP、MS、皮肌炎、重症肌无力、肌营养不良。如本文中所使用的术语“静脉内施用”包括经由静脉内注射或输注递送本发明的复合物或组合物至全身循环的所有技术。
皮肤凝胶剂、洗剂、乳膏剂或贴剂：白斑症、带状疱疹、痤疮、唇炎银屑病。
直肠栓剂、凝胶剂或输注剂：溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、痔疮炎症。
作为包囊化或具有肠衣的丸剂、药锭剂口服：克罗恩氏病、乳糜泻、肠激惹综合征、炎性肝病、巴氏食道症。
皮质内：癫痫、阿尔茨海默病、多发性硬化、帕金森病、亨廷顿病。
腹内输注或植入：子宫内膜异位症。
***内凝胶或栓剂：细菌性、滴虫性或真菌性***炎。
医疗器械：涂覆在冠状动脉支架、假体关节上。
本文中所描述的斯塔都体可以每天、每周、每两周或每月至少一次或可能不那么频繁地施用。可以使用双阶段剂量方案，其中第一剂量阶段占第二剂量阶段的约0.1％至约300％。因为本发明的斯塔都体的效力有所增强，所以在一些实施方案中，与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比，所述斯塔都体可以用较低剂量经静脉内施用。有效斯塔都体剂量通常为Fab与所述斯塔都体相同的有效单克隆抗体的约1％至约500％，更优选地为有效单克隆抗体剂量的约50％至约100％。在临床癌症治疗中的有效单克隆抗体剂量可变化。对于Her-2/neu单克隆抗体，所述剂量通常在每7-21天施用约2mg/Kg至约4mg/Kg范围内。对于EGFR单克隆抗体，所述剂量通常在每7-21天施用约250-400mg/平方米，即约5mg/Kg-25mg/Kg范围内。
在一个实施方案中，所述斯塔都体以约0.01mg/Kg至约1000mg/Kg(静脉内)的剂量经静脉内施用。在另一实施方案中，所述斯塔都体以约0.1mg/Kg至约100mg/Kg经静脉内施用。在另一实施方案中，所述斯塔都体以约0.5mg/Kg至约50mg/Kg经静脉内施用。在另一实施方案中，所述斯塔都体以约1mg/Kg至约25mg/Kg经静脉内施用。在另一实施方案中，所述斯塔都体以约5mg/Kg至约15mg/Kg经静脉内施用。在一个实施方案中，所述斯塔都体经皮下施用。因为本发明的斯塔都体的效力有所增强，所以在一些实施方案中，与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比，所述斯塔都体可以用较低剂量经皮下施用。在一个实施方案中，所述斯塔都体以约0.01mg/Kg至约1000mg/Kg(皮下)的剂量皮下施用。在另一实施方案中，所述斯塔都体以约0.2mg/Kg至约150mg/Kg经皮下施用。在另一实施方案中，所述斯塔都体以约0.5mg/Kg至约80mg/Kg经皮下施用。在另一实施方案中，所述斯塔都体以约2mg/Kg至约50mg/Kg经皮下施用。在另一实施方案中，所述斯塔都体以约5mg/Kg至约30mg/Kg经皮下施用。
斯塔都体的治疗应用
基于理性设计和体外及体内验证，本发明的斯塔都体将充当用于治疗癌症和用于在多种其它背景(诸如用于自身免疫疾病和炎性疾病以及感染的生物免疫疗法)下调节免疫功能的重要生物药物。适合与本文中所描述的免疫活性生物模拟物一起用于治疗的医学病状包括其中单克隆抗体可用于或已经用于临床上的癌症或炎性疾病病状。
此外，将会受益于用斯塔都体治疗的具有炎性组分的示例性医学病状包括肌萎缩侧索硬化、亨廷顿病、阿尔茨海默病、帕金森病、动脉粥样化、心肌梗死、中风、乙型肝炎、丙型肝炎、人免疫缺陷病毒相关炎症、脑白质肾上腺萎缩症和癫痫性病症，尤其认为与后病毒性脑炎相关的那些病症，包括拉斯穆森综合征(Rasmussen Syndrome)、韦斯特综合征和伦-格综合征(Lennox-Gastaut syndrome)。
使用本文中所描述的经分离斯塔都体的一般治疗方法是向患有疾病或病状的受试者施用治疗有效量的经分离的免疫活性生物模拟物以实现治疗。在一些实施方案中，疾病或病状可以宽泛地归类为存在细胞因子网络不平衡的炎性疾病、由致病性自身抗体或自身侵入性T细胞介导的自身免疫紊乱或者慢性复发性疾病或过程的急性期或慢性期。
“免疫调节活性”、“调节免疫反应”、“调节免疫***”和“免疫调节”意指通过改变一个或多个免疫细胞的活性、能力和相对数目而改变免疫***，包括某个细胞类型成熟为其细胞类型或成熟为其它细胞类型。例如，对不成熟的单核细胞的免疫调节可以产生更成熟的单核细胞、树突状细胞、巨噬细胞或破骨细胞的更大群体，所述细胞均源自于不成熟的单核细胞。作为另一个实例，对记忆B细胞的免疫调节可以导致某些记忆B细胞的选择性凋亡，伴随特定抗体的产量下降。作为另一个实例，对NK细胞的免疫调节可以导致抗体依赖性细胞毒性增强。作为另一个实例，免疫调节活性可以导致具有否则可能不以高水平表达的表型的细胞群体增加，如CD8β+/CD11c+细胞。作为另一个实例，免疫调节活性可以导致在自身免疫疾病中常见升高的促炎细胞因子或细胞因子(诸如IL-6和IL-8)降低。作为另一个实例，免疫调节活性可以导致NKT细胞活化和随后的TGF-β的分泌及切割。例如，免疫细胞受体可以由免疫活性生物模拟物结合并且活化胞内信号传导以诱导多种免疫细胞变化，单独地称为“活化性免疫调节”。阻断免疫细胞受体以防止受体活化也涵盖在“免疫调节”内并且可以单独地称为“抑制性免疫调节”。
如本文中所使用的术语“治疗”是指向受试者施用治疗有效量的本发明斯塔都体，使得所述受试者在疾病或病状或者所述疾病或病状的症状方面有所改善。改善是对疾病或病状或者所述疾病或病状的症状的任何改善或纠正。改善是可观察或可测量的改善，或可以是对受试者总体健康感的改善。因此，本领域技术人员认识到，治疗可以改善疾病状态，但可以不是疾病的完全治愈。具体地说，受试者中的改善可以包括以下一项或多项：炎症减少；炎性实验室标记(如C-反应蛋白)降低；自身免疫性降低，如以下一项或多项佐证：自身免疫标记(如自身抗体)或血小板计数、白细胞计数或红细胞计数的改善、皮疹或紫癜减少、虚弱、麻木或刺痛减少、高血糖症患者中葡萄糖水平增加、关节疼痛、炎症、肿胀或降解减少、绞痛和腹泻频率和容量下降、心绞痛减少、组织炎症减少或发作频率降低；癌症肿瘤负荷降低、至肿瘤进展的时间增加、癌疼痛减少、存活增加或生活质量改善；或延迟骨质疏松症进展或改善骨质疏松症。
如本文中所使用的术语“治疗有效量”或“有效量”是指产生可改善或纠正疾病或病状的症状的量。
如本文中所使用，“预防”可意指完全阻止疾病的症状、延迟疾病症状的发作或减轻随后形成的疾病症状的严重性。
在本文中，术语“受试者”可与术语“患者”互换使用，且被视为意指根据本文中所描述的方法向其施用本发明的斯塔都体的任何哺乳动物受试者。在具体实施方案中，本公开的方法用于治疗人受试者。本公开的方法还可以用于治疗非人灵长类(例如，猴、狒狒和黑猩猩)、小鼠、大鼠、牛、马、猫、犬、猪、兔、山羊、鹿、绵羊、雪貂、沙鼠、豚鼠、仓鼠、蝙蝠、鸟类(例如，鸡、火鸡和鸭)、鱼类和爬行类。
具体地说，本发明的斯塔都体可以用来治疗以下病状，包括但不限于充血性心力衰竭(CHF)、血管炎、酒渣鼻、痤疮、湿疹、心肌炎和心肌的其它病状、***性红斑狼疮、糖尿病、脊椎病、滑膜成纤维细胞瘤和骨髓间充质细胞瘤；骨量丢失；佩吉特病、破骨细胞瘤；肥大性骨形成；多发性骨髓瘤；乳腺癌；废用性骨质减少；营养不良、牙周病、高歇氏病、郎罕氏细胞组织细胞增多症、脊髓损伤、急性脓毒性关节炎、骨软化症、库欣综合征、单骨型骨纤维发育不良、多骨型骨纤维发育不良、牙周重建及骨折、肉瘤样病；溶骨性骨癌、肺癌、肾癌和直肠癌；骨转移、骨疼痛防治及体液性恶性高血钙症、强直性脊柱炎和其它脊椎关节病；移植排斥、病毒性感染、血液肿瘤和肿瘤样病状，例如，霍奇金淋巴瘤；非霍奇金淋巴瘤(伯基特淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤/慢性淋巴细胞白血病、蕈样真菌病、套细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、弥漫大B细胞性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、多毛细胞白血病和淋巴浆细胞样白血病)、淋巴细胞前体细胞的肿瘤，包括B-细胞急性淋巴性白血病/淋巴瘤和T-细胞急性淋巴性白血病/淋巴瘤、胸腺瘤、成熟T细胞和NK细胞的肿瘤，包括外周T-细胞白血病、成人T-细胞白血病/T-细胞淋巴瘤和大颗粒淋巴细胞白血病、郎罕氏细胞组织细胞增多症、髓样肿瘤如急性髓性白血病、包括伴成熟的AML、无分化的AML、急性早幼粒细胞白血病、急性粒-单核细胞白血病和急性单核细胞性白血病、骨髓增生异常综合征和慢性骨髓增生病、包括慢性髓性白血病、中枢神经郎罕氏细胞***肿瘤，例如，脑肿瘤(胶质瘤、神经母细胞瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、室管膜瘤和视网膜母细胞瘤)、实体瘤(鼻咽癌、基底细胞癌、胰腺癌、胆管癌、卡波西肉瘤、睾丸癌、子宫癌、***癌或***、卵巢癌、原发性肝癌或子宫内膜癌、血管***肿瘤(血管肉瘤和血管外皮细胞瘤)或其它癌症。
本发明的斯塔都体可以用于治疗自身免疫疾病。如本文中所使用的术语“自身免疫疾病”是指多于80种疾病和病状的可变组。在全部这些疾病和病状中，基础性问题是身体的免疫***攻击身体本身。自身免疫疾病侵袭身体的全部主要***，包括***、神经、肌肉、内分泌***、皮肤、血液和呼吸***及胃肠***。自身免疫疾病包括例如***性红斑狼疮、类风湿性关节炎、多发性硬化、重症肌无力和1型糖尿病。
使用本发明的组合物和方法可治疗的疾病或病状可以是血液免疫学过程，包括但不限于特发性血小板减少性紫癜、同种异型免疫性/自身免疫性血小板减少症、获得性免疫性血小板减少症、自身免疫性中性粒细胞减少症、自身免疫性溶血性贫血、细小病毒B19相关性红细胞再生障碍、获得性抗因子VIII自身免疫性、获得性血管性血友病、未知意义的多发性骨髓瘤和单克隆丙种球蛋白病、败血症、再生障碍性贫血、单纯红细胞再生障碍、戴-布二氏贫血、新生儿溶血病、免疫介导的中性粒细胞减少症、血小板输注无效、新生儿输血后紫癜、溶血***综合征、全身性血管炎、血栓性血小板减少性紫癜或埃文斯综合征。
所述疾病或病状也可以是神经免疫学过程，包括但不限于格-巴二氏综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经根神经病、副蛋白血症IgM脱髓鞘性多发性神经病、朗-爱二氏肌无力综合征、重症肌无力、多灶性运动神经病、与抗/GMl相关的下位运动神经元综合征、脱髓鞘、多发性硬化和视神经炎、僵人综合征、伴有抗Yo抗体的副肿瘤性小脑变性、副肿瘤性脑脊髓炎、伴有抗Hu抗体的感觉神经病、癫痫、脑炎、脊髓炎、与人嗜T淋巴细胞病毒-1相关的脊髓病、自身免疫糖尿病性神经病、阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病或急性特发性自主神经机能异常性神经病。
所述疾病或病状也可以是风湿性疾病过程，包括但不限于川崎病、类风湿性关节炎、费耳提氏综合征、ANCA阳性血管炎、自发多发性肌炎、皮肌炎、抗磷脂综合征、反复自发流产、***性红斑狼疮、青少年特发性关节炎、雷诺氏综合征、CREST综合征或葡萄膜炎。
所述疾病或病状也可以是皮肤免疫学疾病过程，包括但不限于中毒性表皮坏死松解症、坏疽、肉芽肿、自身免疫皮肤疱病(包括寻常天疱疮、大疱性类天疱疮、落叶型天疱疮)、白斑症、链球菌性中毒性休克综合征、硬皮病、***性硬化症(包括扩散型和局限性皮肤***性硬化症)或异位性皮炎(尤其类固醇依赖性)。
所述疾病或病状也可以是骨骼肌免疫学疾病过程，包括但不限于包涵体肌炎、坏死性筋膜炎、炎性肌病、肌炎、抗核心蛋白聚糖(BJ抗原)肌病、副肿瘤性坏死性肌病、X连锁的空泡性肌病、青霉胺诱导的多发性肌炎、动脉粥样硬化、冠状动脉病或心肌病。
所述疾病或病状也可以是胃肠道免疫学疾病过程，包括但不限于恶性贫血、自身免疫慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、乳糜泻、疱疹样皮炎、隐源性肝硬化、反应性关节炎、克罗恩氏病、惠普尔氏病、溃疡性结肠炎或硬化性胆管炎。
所述疾病或病状也可以移植物抗宿主病、抗体介导的移植体排斥、骨髓移植后排斥、传染病后炎症、淋巴瘤、白血病、瘤形成、哮喘、伴有抗β细胞抗体的1型糖尿病、斯耶格伦氏综合征、混合型***病、阿狄森病、伏格特-小柳-原田三氏综合征、膜增生性肾小球肾炎、肺出血肾炎综合征、格雷夫斯氏病、桥本氏甲状腺炎、韦格纳肉芽肿病、显微镜下多动脉炎、丘-施二氏综合征、结节性多发性动脉炎或多***器官衰竭。
除具有用于治疗免疫病症的临床效用之外，斯塔都体还在传染病、癌症和炎性疾病治疗中具有治疗性用途。所述斯塔都体可以基本上使用以下用于任何相应治疗性抗体的已知方案。所述斯塔都体通常将经过设计以便在癌症中增强单克隆抗体对效应细胞显示的效应(诸如ADCC)或在自身免疫疾病中减少单核细胞和DC成熟同时减少细胞因子的释放，且由此使对抗癌症的免疫反应相对于使用例如斯塔都体的Fab部分的来源单克隆抗体时将会出现的免疫反应有所增强。
传染病包括但不限于由细菌药剂、真菌药剂、寄生虫药剂和病毒药剂引起的那些疾病。这样的感染试剂的实例包括以下各项：葡萄球菌属、链球菌科、奈瑟氏菌科、球菌属、肠杆菌科、假单胞菌科、弧菌科、弯曲杆菌属、巴斯德菌科、博德特氏菌属、弗朗西斯氏菌属、布鲁氏菌属、军团菌科、拟杆菌科、梭菌属、棒状杆菌属、丙酸杆菌属、革兰氏阳性杆菌属、炭疽属、放线菌属、诺卡氏菌属、分支杆菌属、密螺旋体属、包柔氏螺旋体属、钩端螺旋体属、支原体属、尿素原体、立克次体属、衣原体属、其它革兰氏阳性杆菌属、其它革兰阴性杆菌属、***性霉菌、其它机会性霉菌、原生动物、线虫、吸虫、绦虫、腺病毒、疱疹病毒(包括例如单纯疱疹病毒和EB病毒以及带状疱疹病毒)、痘病毒、乳多空病毒、肝炎病毒、***状瘤病毒、正粘病毒(包括例如A型流感、B型流感和C型流感)、副粘病毒、冠状病毒、小核糖核酸病毒、呼肠孤病毒、披膜病毒、黄病毒、布尼亚病毒科、弹状病毒属、呼吸道合胞病毒，人免疫缺陷病毒和逆转录病毒。示例性的传染病包括但不限于念珠菌病、念珠菌血症、曲霉病、链球菌性肺炎、链球菌性皮肤和口咽病状、革兰氏阴性脓毒病、肺结核、单核细胞增多症、流感、由呼吸道合胞病毒引起的呼吸***疾病、疟疾、血吸虫病和锥虫病。
“癌症”在本文中是指或描述哺乳动物中通常以失调的细胞生长为特征的生理状况。癌症的实例包括但不限于癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤(包括脂肪肉瘤、成骨肉瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、***肉瘤、***内皮肉瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、纤维肉瘤、粘液肉瘤、软骨肉瘤)、破骨细胞瘤、神经内分泌肿瘤、间皮瘤、脊索瘤、滑膜瘤、神经鞘瘤、脑膜瘤、腺癌、黑素瘤、白血病或淋巴样恶性病。这样的癌症的更具体实例包括鳞状细胞癌(例如，上皮鳞状细胞癌)、肺癌包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状癌、小细胞肺癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌或胃部癌症，包括胃肠癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、***、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾脏或肾癌、***癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、***癌、***癌、睾丸癌、食管癌、胆管肿瘤、尤因氏瘤、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、***状癌、***状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝瘤、胆管癌、绒毛膜癌、***瘤、胚胎性癌、维尔姆斯肿瘤、睾丸肿瘤、肺癌、膀胱癌、上皮癌、胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、少突胶质细胞瘤、脑膜瘤、黑色素瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、沃尔登斯特伦巨球蛋白血症、骨髓增生异常病、重链病、神经内分泌肿瘤、神经鞘瘤和其他癌、头颈癌、髓样肿瘤如急性髓性白血病、包括伴成熟的AML、无分化的AML、急性早幼粒细胞白血病、急性粒-单核细胞白血病和急性单核细胞性白血病、骨髓增生异常综合征和慢性骨髓增生病、包括慢性髓性白血病、中枢神经***肿瘤，例如，脑肿瘤(胶质瘤、神经母细胞瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、室管膜瘤和视网膜母细胞瘤)、实体瘤(鼻咽癌、基底细胞癌、胰腺癌、胆管癌、卡波西肉瘤、睾丸癌、子宫癌、***癌或***、卵巢癌、原发性肝癌或子宫内膜癌、血管***肿瘤(血管肉瘤和血管外皮细胞瘤)、血液肿瘤和肿瘤样病状，例如，霍奇金淋巴瘤；非霍奇金淋巴瘤(伯基特淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤/慢性淋巴细胞白血病、蕈样真菌病、套细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、弥漫大B细胞性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、多毛细胞白血病和淋巴浆细胞样白血病)、淋巴细胞前体细胞的肿瘤，包括B-细胞急性淋巴性白血病/淋巴瘤和T-细胞急性淋巴性白血病/淋巴瘤、胸腺瘤、成熟T细胞和NK细胞的肿瘤，包括外周T-细胞白血病、成人T-细胞白血病/T-细胞淋巴瘤和大颗粒淋巴细胞白血病、溶骨性骨癌和骨转移。
抗体包含可由其设计斯塔都体的Fab结构域。示例性单克隆抗体包括但不限于：3F8、8H9、阿巴伏单抗(abagovomab)、阿昔单抗(abciximab)、阿达木单抗、阿德木单抗(adecatumumab)、阿非莫单抗(afelimomab)、阿夫土珠单抗(afutuzumab)、培化阿珠单抗(alacizumab pegol)、ALD518、阿仑单抗(alemtuzumab)、喷替酸阿妥莫单抗(altumomab pentetate)、阿麦妥昔单抗(amatuximab)、麻安莫单抗(anatumomab mafenatox)、安芦珠单抗(anrukinzumab)(IMA-638)、阿泊珠单抗(apolizumab)、阿西莫单抗(arcitumomab)、阿塞珠单抗(aselizumab)、阿替奴单抗(atinumab)、阿特利珠单抗(atlizumab)(托珠单抗)、阿托木单抗(atorolimumab)、巴匹珠单抗(bapineuzumab)、巴利昔单抗(basiliximab)、巴维昔单抗(bavituximab)、贝妥莫单抗(bectumomab)、贝利木单抗(belimumab)、贝那利珠单抗(benralizumab)、柏替莫单抗(bertilimumab)、贝索单抗(besilesomab)、贝伐单抗、比西单抗(biciromab)、比伐珠单抗美登素(bivatuzumab mertansine)、兰妥莫单抗(blinatumomab)、布索珠单抗(blosozumab)、贝伦妥单抗-维多汀(brentuximabvedotin)、布雷奴单抗(briakinumab)、贝洛达卢单抗(brodalumab)、卡那单抗(canakinumab)、美坎珠单抗(cantuzumab mertansine)、拉坎妥珠单抗(cantuzumab ravtansine)、卡罗单抗喷地肽(capromab pendetide)、卡芦单抗(carlumab)、卡妥索单抗(catumaxomab)、CC49、西利珠单抗(cedelizumab)、培化舍珠单抗(certolizumab pegol)、西妥昔单抗、Ch.14.18、泊西他珠单抗(citatuzumab bogatox)、西妥木单抗(cixutumumab)、克立昔单抗(clenoliximab)、克伐珠单抗(clivatuzumab tetraxetan)、可那木单抗(conatumumab)、克雷內治单抗(crenezumab)、CR6261、达西珠单抗(dacetuzumab)、达昔单抗(daclizumab)、达洛珠单抗(dalotuzumab)、达拉珠单抗(daratumumab)、地诺单抗(denosumab)、地莫单抗(detumomab)、阿托度单抗(dorlimomab aritox)、屈兹妥单抗(drozitumab)、依美昔单抗(ecromeximab)、依库珠单抗(eculizumab)、埃巴单抗(edobacomab)、依决洛单抗(edrecolomab)、依法利珠单抗(efalizumab)、依夫单抗(efungumab)、依洛珠单抗(elotuzumab)、艾西莫单抗(elsilimomab)、恩那珠单抗(enavatuzumab)、培恩莫单抗(enlimomab pegol)、依诺凯珠单抗(enokizumab)、恩司昔单抗(ensituximab)、西依匹莫单抗(epitumomab cituxetan)、依帕珠单抗(epratuzumab)、厄利珠单抗(erlizumab)、厄马索单抗(ertumaxomab)、埃达珠单抗(etaracizumab)、埃屈珠单抗(etrolizumab)、艾维单抗(exbivirumab)、法索单抗(fanolesomab)、法拉莫单抗(faralimomab)、法乐特珠单抗(farletuzumab)、FBTA05、非维珠单抗(felvizumab)、非扎奴单抗(fezakinumab)、非拉珠单抗(ficlatuzumab)、芬妥木单抗(figitumumab)、夫兰珠单抗(flanvotumab)、芳妥珠单抗(fontolizumab)、福拉卢单抗(foralumab)、福拉韦单抗(foravirumab)、夫苏木单抗(fresolimumab)、福兰奴单抗(fulranumab)、加利昔单抗(galiximab)、盖尼塔单抗(ganitumab)、甘特如单抗(gantenerumab)、加维莫单抗(gavilimomab)、吉妥珠单抗奥佐米星(Gemtuzumab ozogamicin)、吉沃珠单抗(gevokizumab)、吉瑞昔单抗(girentuximab)、格莱木单抗-维多汀(glembatumumab vedotin)、戈利木单抗(golimumab)、戈利昔单抗(gomiliximab)、GS6624、伊巴珠单抗(ibalizumab)、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)、艾芦库单抗(icrucumab)、伊戈伏单抗(igovomab)、英西单抗(imciromab)、拉英达西单抗(indatuximabravtansine)、英夫利昔单抗(infliximab)、英妥木单抗(intetumumab)、伊诺莫单抗(inolimomab)、伊珠单抗奥佐米星(inotuzumab ozogamicin)、伊匹木单抗(ipilimumab)、伊妥木单抗(iratumumab)、伊立珠单抗(itolizumab)、伊赛珠单抗(ixekizumab)、凯利昔单抗(keliximab)、拉贝珠单抗(labetuzumab)、来金珠单抗(lebrikizumab)、来马索单抗(lemalesomab)、乐地单抗(lerdelimumab)、来沙木单抗(lexatumumab)、利韦单抗(libivirumab)、林妥珠单抗(lintuzumab)、罗佛珠单抗-美登素(lorvotuzumab mertansine)、鲁卡木单抗(lucatumumab)、鲁昔单抗(lumiliximab)、马帕木单抗(mapatumumab)、马司莫单抗(maslimomab)、马威利姆单抗(mavrilimumab)、马妥珠单抗(matuzumab)、美泊利单抗(mepolizumab)、美替木单抗(metelimumab)、米拉珠单抗(milatuzumab)、明瑞莫单抗(minretumomab)、米妥莫单抗(mitumomab)、莫加珠单抗(mogamulizumab)、莫罗木单抗(morolimumab)、莫他珠单抗(motavizumab)、帕莫妥单抗(moxetumomab pasudotox)、莫罗单抗-CD3(muromonab-CD3)、他那可单抗(nacolomab tafenatox)、那美卢单抗(namilumab)、他那莫单抗(naptumomab estafenatox)、那那珠单抗(narnatumab)、那他珠单抗(natalizumab)、奈巴库单抗(nebacumab)、奈昔木单抗(necitumumab)、奈瑞莫单抗(nerelimomab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、巯诺莫单抗(nofetumomabmerpentan)、奥瑞珠单抗(ocrelizumab)、奥度莫单抗(odulimomab)、奥法木单抗(ofatumumab)、奥拉珠单抗(olaratumab)、奥洛珠单抗(olokizumab)、奥马珠单抗(omalizumab)、奥那珠单抗(onartuzumab)、莫奥珠单抗(oportuzumabmonatox)、奥戈伏单抗(oregovomab)、奥昔珠单抗(otelixizumab)、奥克卢单抗(oxelumab)、奥拉珠单抗(ozoralizumab)、帕昔单抗(pagibaximab)、帕利珠单抗(palivizumab)、帕尼单抗(panitumumab)、帕诺库单抗(panobacumab)、帕考珠单抗(pascolizumab)、帕特珠单抗(pateclizumab)、培妥木单抗(pemtumomab)、培妥珠单抗(pertuzumab)、培克珠单抗(pexelizumab)、平妥单抗(pintumomab)、泊奈珠单抗(ponezumab)、普立昔单抗(priliximab)、普立木单抗(pritumumab)、PRO 140、雷妥莫单抗(racotumomab)、雷德珠单抗(radretumab)、雷韦单抗(rafivirumab)、雷莫芦单抗(ramucirumab)、雷尼珠单抗(ranibizumab)、雷昔库单抗(raxibacumab)、瑞加韦单抗(regavirumab)、瑞利珠单抗(reslizumab)、利妥木单抗(rilotumumab)、利妥昔单抗(rituximab)、罗妥木单抗(robatumumab)、罗勒度单抗(roledumab)、罗莫珠单抗(romosozumab)、罗利珠单抗(rontalizumab)、罗维珠单抗(rovelizumab)、鲁利珠单抗(ruplizumab)、奥马珠单抗(samalizumab)、沙利卢单抗(sarilumab)、沙妥莫单抗喷地肽(satumomab pendetide)、司库奴单抗(secukinumab)、司韦单抗(sevirumab)、西罗珠单抗(sibrotuzumab)、西法木单抗(sifalimumab)、西妥昔单抗(siltuximab)、西利珠单抗(siplizumab)、西鲁库单抗(sirukumab)、索拉珠单抗(solanezumab)、松昔珠单抗(sonepcizumab)、松妥珠单抗(sontuzumab)、司他芦单抗(stamulumab)、硫索单抗(sulesomab)、苏维珠单抗(suvizumab)、他巴芦单抗(tabalumab)、他珠单抗(tacatuzumab tetraxetan)、他度珠单抗(tadocizumab)、他利珠单抗(talizumab)、他尼珠单抗(tanezumab)、帕他普莫单抗(taplitumomab paptox)、特非珠单抗(tefibazumab)、阿替莫单抗(telimomabaritox)、替妥莫单抗(tenatumomab)、替奈昔单抗(teneliximab)、替利珠单抗(teplizumab)、替妥木单抗(teprotumumab)、TGN1412、替西木单抗(ticilimumab)(曲美木单抗(tremelimumab))、替加珠单抗(tigatuzumab)、TNX-650、托珠单抗(tocilizumab)(＝阿利珠单抗(atlizumab))、托利珠单抗(toralizumab)、托西莫单抗(tositumomab)、曲洛奴抗(tralokinumab)、曲妥珠单抗、TRBS07、曲加珠单抗(tregalizumab)、曲利木单抗(tremelimumab)、西莫白介素单抗(tucotuzumab celmoleukin)、妥韦单抗(tuvirumab)、优妥昔单抗(ublituximab)、乌瑞鲁单抗(urelumab)、乌珠单抗(urtoxazumab)、优特克单抗(ustekinumab)、伐利昔单抗(vapaliximab)、伐特珠单抗(vatelizumba)、维多珠单抗(vedolizumab)、维妥珠单抗(veltuzumab)、维帕莫单抗(vepalimomab)、维森库单抗(vesencumab)、维西珠单抗(visilizumab)、伏洛昔单抗(volociximab)、伏妥莫单抗(votumumab)、扎妥木单抗(zalutumumab)、扎木单抗(zanolimumab)、齐拉木单抗(ziralimumab)和阿佐莫单抗(zolimomab aritox)。
本发明的斯塔都体可以对细胞因子具有特异性。例如，本发明的斯塔都体可以对干扰素(诸如IFNγ、IFNα或IFNβ)、IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17或IL-23具有特异性。在一个实施方案中，本发明的斯塔都体对细胞因子具有特异性，并且可用于治疗或预防一种或多种炎性疾病或自身免疫疾病。例如，在一个实施方案中，所述斯塔都体是抗IL-2、抗IL-8或抗IL-17斯塔都体。
如本文中所使用的术语“自身免疫疾病”是指多于80种慢性疾病的可变组。在全部这些疾病中，基础性问题是身体的免疫***攻击身体本身。自身免疫疾病侵袭身体的全部主要***，包括***、神经、肌肉、内分泌***、皮肤、血液和呼吸***及胃肠***。
所述自身免疫疾病或病状可以是血液免疫学过程，包括但不限于特发性血小板减少性紫癜、同种异型免疫性/自身免疫性血小板减少症、获得性免疫性血小板减少症、自身免疫性中性粒细胞减少症、自身免疫性溶血性贫血、细小病毒B19相关性红细胞再生障碍、获得性抗因子VIII自身免疫性、获得性血管性血友病、未知意义的多发性骨髓瘤和单克隆丙种球蛋白病、败血症、再生障碍性贫血、单纯红细胞再生障碍、戴-布二氏贫血、新生儿溶血病、免疫介导的中性粒细胞减少症、血小板输注无效、新生儿输血后紫癜、溶血***综合征、全身性血管炎、血栓性血小板减少性紫癜或埃文斯综合征。
所述自身免疫疾病或病状可以是神经免疫学过程，包括但不限于格-巴二氏综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经根神经病、副蛋白血症IgM脱髓鞘性多发性神经病、朗-爱二氏肌无力综合征、重症肌无力、多灶性运动神经病、与抗/GMl相关的下位运动神经元综合征、脱髓鞘、多发性硬化和视神经炎、僵人综合征、伴有抗Yo抗体的副肿瘤性小脑变性、副肿瘤性脑脊髓炎、伴有抗Hu抗体的感觉神经病、癫痫、脑炎、脊髓炎、与人嗜T淋巴细胞病毒-1相关的脊髓病、自身免疫糖尿病性神经病或急性特发性自主神经机能异常性神经病。
所述自身免疫疾病或病状可以是风湿性疾病过程，包括但不限于川崎病、类风湿性关节炎、费耳提氏综合征、ANCA阳性血管炎、自发多发性肌炎、皮肌炎、抗磷脂综合征、反复自发流产、***性红斑狼疮、青少年特发性关节炎、雷诺氏综合征、CREST综合征或葡萄膜炎。
所述自身免疫疾病或病状可以是皮肤免疫学疾病过程，包括但不限于中毒性表皮坏死松解症、坏疽、肉芽肿、自身免疫皮肤疱病(包括寻常天疱疮、大疱性类天疱疮和落叶型天疱疮)、白斑症、链球菌性中毒性休克综合征、硬皮病、***性硬化症(包括扩散型和局限性皮肤***性硬化症)或异位性皮炎(尤其类固醇依赖性)。
所述自身免疫疾病或病状可以是骨骼肌免疫学疾病过程，包括但不限于包涵体肌炎、坏死性筋膜炎、炎性肌病、肌炎、抗核心蛋白聚糖(BJ抗原)肌病、副肿瘤性坏死性肌病、X连锁的空泡性肌病、青霉胺诱导的多发性肌炎、动脉粥样硬化、冠状动脉病或心肌病。
所述自身免疫疾病或病状可以是胃肠道免疫学疾病过程，包括但不限于恶性贫血、自身免疫慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、乳糜泻、疱疹样皮炎、隐源性肝硬化、反应性关节炎、克罗恩氏病、惠普尔氏病、溃疡性结肠炎或硬化性胆管炎。
所述自身免疫疾病或病状可以移植物抗宿主病、抗体介导的移植体排斥、骨髓移植后排斥、传染病后炎症、淋巴瘤、白血病、瘤形成、哮喘、伴有抗β细胞抗体的1型糖尿病、斯耶格伦氏综合征、混合型***病、阿狄森病、伏格特-小柳-原田三氏综合征、膜增生性肾小球肾炎、肺出血肾炎综合征、格雷夫斯氏病、桥本氏甲状腺炎、韦格纳肉芽肿病、显微镜下多动脉炎、丘-施二氏综合征、结节性多发性动脉炎或多***器官衰竭。
在另一个实施方案中，本文中所描述述的斯塔都体可以在起动灌注***中使用，在所述***中将血液从患者抽出并且引入返回患者之前与斯塔都体短暂接触约一个半小时至约三小时的时间。在这种形式的细胞疗法中，患者自身的效应细胞暴露于离体固定在基质上的斯塔都体，以便通过使效应细胞暴露于斯塔都体来调节效应细胞。随后将包含经过调节的效应细胞的血液输回至患者中。这样的起动灌注***可能具有许多临床应用和治疗应用。
本文中所公开的斯塔都体也可以轻易地用来在多种背景下改变免疫***反应，以影响免疫反应概况的特定变化。改变或调节受试者的免疫反应是指增加、减少或改变免疫反应的比率或组分。例如，可以根据需要，通过用设计成与FcγR相互作用的斯塔都体靶向这些受体的适当组合来增加或减少细胞因子产生或分泌水平。还可以增加或减少抗体产生；可以改变两种或更多种细胞因子或免疫细胞受体的比率；或可以引起额外类型的细胞因子或抗体产生。免疫反应也可以是表达FcγR的免疫细胞的效应子功能，包括与未经过本文中所公开的免疫活性生物模拟物调节的免疫反应相比有所增加或减少的单核细胞吞噬潜能、增加或减少的破骨细胞功能，抗原呈递细胞(例如树突状细胞)的增加或减少的抗原呈递作用、增加或减少的NK细胞功能、增加或减少的B细胞功能。
在一个优选实施方案中，患有癌症或自身免疫疾病或炎性疾病或传染病的受试者改变他们的免疫反应，包括向受试者施用治疗有效量的本文中所描述的斯塔都体的步骤，其中治疗有效量的斯塔都体改变了受试者的免疫反应。理想地，这种介入治疗了受试者中的疾病或病状。改变的免疫反应可以是增加或减少的反应并且可以涉及改变的细胞因子水平，包括以下细胞因子中任一种的水平：IL-6、IL-10、IL-8、IL-23、IL-7、IL-4、IL-12、IL-13、IL-17、TNF-α和IFN-α。在一个优选实施方案中，Il-6或IL-8应答于疗法而减少。在一个特别优选的实施方案中，IL-6和IL-8持续应答于疗法而减少。然而本发明不受所描述的生物模拟物的任何具体作用机制限制。改变的免疫反应可以是受试者中改变的自身抗体水平。改变的免疫反应可以是受试者中改变的自身侵入性T-细胞水平。
例如，减少自身免疫疾病中TNF-α产生的量可以具有治疗作用。这种情况的实际应用是临床上证明可治疗斑块状银屑病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎和强直性脊柱炎的抗TNF-α抗体疗法(例如，)。这些自身免疫疾病具有不同的病因学，但是共有与炎症和免疫细胞活性相关的疾病过程的关键免疫组分。设计成减少TNF-α产生的斯塔都体将同样在这些疾病和许多其它自身免疫疾病中有效。改变的免疫反应概况还可以是直接或间接调节，以便在受试者中实现抗体(例如靶向受试者自身组织的自身抗体)产生减少或改变的自身侵入性T-细胞水平。例如，多发性硬化是可以通过干扰素β疗法治疗的涉及自身反应性T-细胞的自身免疫紊乱。参见例如Zafranskaya M等,Interferon-beta therapy reduces CD4+and CD8+T-cell reactivity in multiple sclerosis,Immunology 2007年5月；121(1):29-39-Epub 2006年12月18日。设计成减少自身反应性T-细胞水平的斯塔都体将同样在多发性硬化中有效并且可以用于涉及自身反应性T-细胞的其他自身免疫疾病中。
本文中所描述的斯塔都体可以用来调节来自免疫细胞(包括树突状细胞、巨噬细胞、破骨细胞、单核细胞或NK细胞)的共刺激分子的表达，或用来抑制这些相同的免疫细胞的分化、成熟或细胞因子分泌(包括白介素-12(IL-12))或用来增加细胞因子分泌(包括白介素-10(IL-10)或白介素-6(IL-6))。熟练技术人员还可以通过使免疫细胞暴露于免疫活性生物模拟物并测量对免疫细胞功能的调节来验证免疫活性生物模拟物的效力，其中所述免疫细胞是树突状细胞、巨噬细胞、破骨细胞或单核细胞。在一个实施方案中，免疫细胞是暴露于免疫活性生物模拟物体外，并且还包括确定细胞表面受体或细胞因子产生的量的步骤，其中细胞表面受体或细胞因子产生的量的变化指示对免疫细胞功能的调节。在另一个实施方案中，免疫细胞是在自身免疫型疾病的模型动物中体内暴露于免疫活性生物模拟物，还包括评估自身免疫疾病的改善程度的步骤。本文中所描述的斯塔都体可用于调节来自B细胞的共刺激分子的表达。
本发明的方法可以适用于任何动物物种，并且由其产生Fc试剂的IgG衍生部分的IgG分子可以来自任何动物物种。自然，相关动物物种是其中存在IgG或IgG样分子的那些。通常，适用于所述方法的物种和从其中产生Fc试剂的IgG衍生部分的IgG分子的物种是相同的。然而，它们未必是相同的。相关动物物种优选地是哺乳动物并且这些哺乳动物包括而不限于人、非人灵长类(例如，猴、狒狒和黑猩猩)、马、牛类动物(例如，公牛、母牛或阉牛)、猪、山羊、绵羊、犬、猫、兔、沙鼠、仓鼠、大鼠和小鼠。非哺乳动物物种例如包括鸟类(例如，鸡、火鸡和鸭)和鱼。
本文中所公开的斯塔都体具有许多其它应用和用途。
实施例
实施例1.HER2/neu特异性斯塔都体的产生和纯化
从Blue Heron Biotechnology(Bothell，WA)获得编码曲妥珠单抗可变区和CH1区的合成DNA构建体，并且通过PCR与含有人IgG1铰链、CH2区和CH3区的相应Fc区融合，以产生编码全长曲妥珠单抗抗体重链的阅读框。将cDNA克隆到表达载体pOptiVec(Invitrogen)中以便在哺乳动物细胞中表达。同时，获得了含有曲妥珠单抗轻链的类似合成构建体，并且克隆到载体pcDNA3.3(Invitrogen)中。通过重叠PCR，使用曲妥珠单抗重链作为模板，利用编码多聚化结构域和连接子区的引物来产生斯塔都体重链构建体。通过TA克隆将PCR产物克隆到pOptiVec表达载体中，以产生斯塔都体表达构建体。在TA克隆之后，通过对完整编码框以及周围序列进行测序来证实所有构建体。对于斯塔都体蛋白表达，通过无内毒素质粒纯化试剂盒(Macherey Nagel)和通过瞬时蛋白质表达在293-T HEK或CHO细胞中产生的蛋白质进行大规模DNA质粒分离。通过共转染重链和轻链DNA构建体来表达斯塔都体蛋白。将斯塔都体蛋白通过FPLC在AKTAxpress上使用蛋白G亲和力色谱加以纯化，随后在HiPrep脱盐柱(GE life sciences)上进行脱盐。斯塔都体构建体示于表3中。
为了观察斯塔都体多聚体的形成，通过非还原SDS-PAGE凝胶分析经过纯化的斯塔都体。分子量相对于未改变的抗体GB2500较高的谱带指示若干个构建体中的多聚体形成。如图8中所示，相对于未改变的蛋白质，若干个C末端斯塔都体展现了较高分子量谱带。具体地说，在分析构建体GB2547后检测若干个高分子量谱带。还测试了连续斯塔都体构建体。如图9中所示，相对于未改变的抗体GB2500，若干个连续斯塔都体构建体，特别是多聚化连续斯塔都体GB2542，展现了较高分子量谱带。
以类似的方式产生、纯化并且分析了对抗除HER2/neu以外的靶标的其它斯塔都体。这些其它斯塔都体包括对抗EGFR的GB3500系列，对抗CD20的GB4500系列和对抗TNF的GB7500系列。
实施例2.HER2/neu特异性斯塔都体的细胞毒性和结合活性
测定若干个斯塔都体的抗体依赖性细胞毒性，与未改变的抗体GB2500相比较。以低HER2/neu表达肿瘤细胞系MDA-MB-231作为靶细胞系，对作为效应细胞的新鲜分离的NK细胞进行ADCC测定。用Cr-51对MDA-MB-231细胞进行放射性标记，随后用以下五种解决方案之一进行一小时孵育：仅培养基、含有非结合人IgG1的培养基、含有单克隆抗体GB2500的培养基和含有欲测试的斯塔都体的培养基。然后用新鲜分离的人NK细胞以不同的NK对肿瘤细胞比率涂布细胞后维持四小时，并且由细胞形成沉淀之后释放至培养基中的游离Cr-51的量确定杀伤量。
测试来自总计18种蛋白质中每一种的一至四批独立表达且经过纯化的蛋白质，包括GB2500。所测试的效应细胞对靶细胞比率是50:1、25:1、12.5:1和6.5:1。在NK产率允许的情况下，使用100:1的比率。图10示出了ADCC数据的代表性实例，显示相对于GB2500，用GB2542观察到的ADCC在效应细胞对靶细胞的范围内有所增加。图10还示出了两个不同的独立地经纯化的GB2500批次的变化性。
关于所有12种抗HER2/neu斯塔都体和GB2500的汇总的ADCC数据示于表3中。表3中的各行代表经纯化和测试的斯塔都体批次(例如，产生并测试四批GB2542)。将数据表示为在所指示的效应细胞对靶细胞比率下从所指示的供体分离的NK细胞的杀伤百分比。
这项研究的结果示出，令人惊讶地，即使新型斯塔都体和曲妥珠单抗抗体GB2500共有相同的Fab，若干个斯塔都体在ADCC反应方面显著更有效。GB2542在ADCC测定中特别有效。这个特定实验中的ADCC反应的等级次序如下：GB2542(具有两个多聚化结构域的多聚化连续斯塔都体)>GB2547(具有两个多聚化结构域的多聚化C末端斯塔都体)>GB2550(具有一个多聚化结构域的多聚化C末端斯塔都体)>GB2500>人同位素对照和培养基对照。
表3.汇总的HER/2-neu特异性斯塔都体ADCC数据。
除效应细胞对靶细胞比率反应ADCC之外，还对斯塔都体浓度反应ADCC进行分析。在从0.4变化至4000ng/mL的斯塔都体和HER2/neu抗体浓度下进行ADCC测定，以评估斯塔都体的剂量反应。对于这些实验，保持NK细胞对MDA-MB-231靶细胞比率恒定在25:1。该项研究的结果示于图11中。浓度依赖性分析证实相对于曲妥珠单抗抗体(GB2500)，斯塔都体(特别是GB2542)的ADCC活性有所增加。基于该实验，估计在ADCC测定中多聚化连续斯塔都体GB2542的效能比GB2500高出2-log多，尽管事实上这两种分子共有相同的Fab。
如使用Biacore 3000***通过等离子体共振所测量，评估斯塔都体与GB2500相比的结合强度。在10mM乙酸钠pH 5.0中将重组人FcγRIIIa稀释到3ug/ml且手动固定到CM5芯片的流动单元上。用HBS-EP(0.01M HEPES pH7.4、0.15M NaCl、1mM EDTA、0.005％表面活性剂P20)将斯塔都体或GB2500稀释至1μM且如下灌注在固定的人FcγRIIIa上。在活化流动单元后，将3ug/ml蛋白质以1μl增量、以5μl/min的流速注入，直到达到400RU(共振单位)。然后用1M乙醇胺阻断流动单位。另一个流动单元用作空白对照。通常，以20μl/min的流速注入20μl经过稀释的样品。在20μL/min下利用运行缓冲液HBS-EP通过延长洗涤来进行流动单元的再生。
结合数据的实例示于图12中。示出了亲本抗体GB2500、高结合剂/高ADCC斯塔都体GB2542(多聚化连续)和GB2547(多聚化C末端)以及低结合剂/低ADCC斯塔都体GB2554(非多聚化连续)的结合曲线。作为比较，包括基于小鼠Fc的抗体MB2500的结合曲线作为非/低结合剂的一个实例。图13中指示了结合强度的等级次序。若干个斯塔都体所具有的RU最大值高于GB2500。另外，GB2542在该测定中具有最高的RU最大值和最慢的解离速率。
接下来，对ADCC活性与通过Biacore测量的结合之间的相关性进行评价。ADCC活性计算为相对于单克隆抗体GB2500的ADCC活性的倍数差异。当在针对相同供体的相同实验中测量两批GB2500时，使用平均ADCC来计算ADCC的平均倍数差异。将结合测量为RU最大值且将数据示于图14中。对于若干个斯塔都体，ADCC的平均倍数增加高于亲本抗体(GB2500＝1)。尽管该数据集在一定程度上受数量限制且观察到ADCC活性有一定变化，但结合与ADCC活性之间似乎有总体相关性。重要地是，对于若干个高ADCC的/高结合斯塔都体，包括GB2542(具有两个多聚化结构域的多聚化连续)、GB2524(具有一个多聚化结构域和一个连接子的多聚化连续)、GB2547(具有两个多聚化结构域的多聚化C末端)和GB2540(具有一个多聚化结构域的多聚化连续)，在非变性凝胶上很容易观察到更高阶形式，表明了多聚体形成、受体结合和ADCC活性之间的相关性。
总体来说，本研究的结果指示了跟与所测试的所有斯塔都体共有相同Fab的单克隆抗体GB2500相比，若干个斯塔都体构建体展现出较高的ADCC和较强的结合活性。展现最高ADCC和最强结合活性的斯塔都体构建体是GB2542，其包含位于两个Fc结构域之间的异亮氨酸拉链多聚化结构域和IgG2铰链多聚化结构域。另外，通过等离子体共振测量的结合与ADCC活性之间存在显著程度的相关性。
以类似方式评估对抗除HER2/neu以外的靶标的其它斯塔都体的细胞毒性和结合。这些其它斯塔都体包括对抗EGFR的GB3500系列，对抗CD20的GB4500系列和对抗TNF的GB7500系列。
实施例3.斯塔都体的进一步纯化
为了确定是否可以成功地分离斯塔都体多聚体和单体，在Mono Q柱上通过离子交换色谱法纯化GB2054。
图15中所示的研究结果显示可以从单体分离更高阶多聚体。不容易在未分级峰(泳道SB)中鉴别出多聚体峰，但在离子交换之后容易检测到。不希望受理论约束，认为斯塔都体多聚体的纯化将增加该复合物的效力。
实施例4.具有多聚化结构域的斯塔都体的多聚和FcγRIIIa结合有所增强
为了更严格地评估连续斯塔都体复合物的多聚化，使用灵敏的SDS-PAGE凝胶法来比较斯塔都体构建体与彼此和与HER2单克隆抗体构建体GB2500的多聚化。将4％-12％凝胶用于非还原型SDS-PAGE，且将12％凝胶用于还原型SDS-PAGE。将所有样品以2μg加样且在150V下运行约2.3小时，随后进行考马斯染色。
如图16中所示，对照mAb GB2500(泳道1)和在两个IgG1Fc区之间具有非多聚化连接子的非多聚化连续斯塔都体构建体GB2555(泳道7)并未多聚化。类似地，在两个IgG1Fc区之间具有G4S连接子结构域的非多聚化连续斯塔都体构建体GB2554(泳道6)展现极少的多聚化。对于在两个IgG1Fc区之间分别具有异亮氨酸拉链或IgG2铰链多聚化结构域的多聚化连续斯塔都体构建体GB2538(泳道3)和GB2540(泳道4)，一些多聚化是显而易见的。多聚化连续斯塔都体构建体GB2524(泳道2)具有处于两个IgG1Fc区之间的G4S连接子结构域和IgG2铰链多聚化结构域，但多聚化很差。与GB2538、GB2540和GB2524的多聚化程度较低相反，在两个IgG1Fc区之间具有异亮氨酸拉链和IgG2铰链的多聚化连续斯塔都体构建体GB2542展现出大量的多聚化(泳道5)。
为了分析GB2500亲本抗体的结合和各连续斯塔都体构建体与FcγRIIIa的结合，进行了结合分析，其中将经纯化的FcγRIIIa-His以10μg/ml加样到ForteBio anti-penta-His传感器(目录号18-5077)上。将GB2500(在HEK细胞中产生)、GB2524、GB2538、GB2540、GB2542、GB2554或GB2555与受体一起在1×动力学缓冲液(ForteBio,目录号18-5032)中孵育以测量结合速率(Kon)，且稍后将传感器尖端转移至结合缓冲液以测量解离速率(Kdis)。在3333-208nM范围内的浓度下测试GB2500抗体，且在200–12.5nM范围内的浓度下测试斯塔都体。使用ForteBio分析软件由结合速率和解离速率计算KD。如表4和图17中所示，多聚化连续斯塔都体GB2542和GB2538展现出最低的KD，且因此具有最佳的结合能力。
表4.动力学结合数据汇总
KD Kon Kon+/- Kdis Kdis+/- R最大值 R2 X2
GB2500 2.75E-07 6.74E+04 3.02E+03 1.84E-02 1.28E-03 1.335 0.984 0.2903
GB2524 3.94E-09 2.38E+05 4.08E+03 9.36E-04 2.54E-05 1.1079 0.997 0.1058
GB2538 1.23E-10 2.21E+05 8.04E+03 2.71E-05 4.37E-05 1.666 0.989 0.3945
GB2540 5.11E-09 1.79E+05 4.09E+03 9.16E-04 2.73E-05 1.127 0.997 0.1335
GB2542 1.49E-10 2.28E+05 8.77E+03 3.39E-05 4.65E-05 1.362 0.987 0.3185
GB2554 4.38E-09 3.99E+05 1.34E+04 1.74E-03 6.00E-05 0.6158 0.988 0.1848
GB2555 3.14E-09 1.95E-05 2.27E+03 6.12E-04 1.82E-05 0.793 0.998 0.0296
在相同CHO瞬时转染***中产生所有化合物。
来自对抗除Her2/neu以外的靶标的其它斯塔都体的结合数据是类似的。这些其它斯塔都体包括对抗EGFR的GB3500系列，对抗CD20的GB4500系列和对抗TNF的GB7500系列。
研究结果证实，与对照mAb和所测试的所有其它连续斯塔都体构建体相比，GB2542展现出优良的多聚化，如上文所报道。另外，GB2542和GB2538展现出与FcγRIIIa的最强劲结合。总之，示出GB2542的优良多聚化和FcγRIIIa结合能力的数据支持上文关于用GB2542所观察到的优良ADCC所呈现的数据。
实施例5.在体内小鼠模型中，多聚化斯塔都体减少外周血中的血清IgM和B细胞。
在第0周将严重综合性免疫缺陷(SCID)小鼠经腹膜内注射5×107个人外周血单核细胞(PBMC)。在第2周至第10周，将小鼠经腹膜内注射PBS、GB4500(10 nM，每周一次)、GB4563(1.7 nM，每周一次)或GB4542(1.4 nM，每周一次)。GB4500是每周注射三次，而PBS、GB4563和GB4542各自是每周注射一次。因此，斯塔都体不仅相对于单克隆抗体以较低频率施用，而且还以较低摩尔剂量给予。摩尔浓度是基于由非还原型SDS-PAGE估计的分子量。在第1周、第2周、第3周、第5周、第7周、第9周、第10周、第12周、第16周和第20周收集与人PBMC的过继转移相关的血样，并评价B细胞数目和血清人IgM。在研究终点(即，在第21周)，对小鼠施以安乐死且收集脾并评价B细胞数目。实验流程图示意性地示于图18中。
通过ELISA评价经PBS、GB4500、GB4563或GB4542处理的小鼠的血清中的人IgM。斯塔都体GB4563和GB4542在降低人IgM水平方面与单克隆抗体GB4500同样有效(图19)。
通过流式细胞术评价从经PBS、GB4500、GB4563或GB4542处理的小鼠收集的每毫升外周血的人B细胞数目。斯塔都体GB4563和GB4542至少在减少外周血中的人B细胞方面与单克隆抗体GB4500同样有效(图20)。
在研究结束时，对小鼠施以安乐死且通过流式细胞术对脾中的B细胞进行计数。斯塔都体GB4563在减少脾中所存在的人B细胞数目方面与单克隆抗体GB4500同样有效。斯塔都体GB4542在减少脾中所存在的人B细胞数目方面比单克隆抗体GB4500更有效(图21)。
研究结果示出，尽管事实上斯塔都体GB4563和GB4542与单克隆抗体GB4500相比以较低剂量施用，但所述斯塔都体至少在降低血清人IgM水平和减少人B细胞数目方面同样有效。另外，抗CD20斯塔都体GB4542所诱导的B细胞去除比相应的抗CD20单克隆抗体GB4500更好。
实施例6.多聚化斯塔都体抑制B细胞淋巴瘤细胞系的增殖
在各种浓度的人IgG(阴性对照)、单克隆抗体GB4500或斯塔都体GB4542存在下将B细胞淋巴瘤细胞(达乌迪(Daudi)、拉莫斯(Ramos)、454B和924B细胞系)培养3天。将0.5μci 3H-TdR添加到该培养物，并在16小时后以校正的每分钟计数(CCPM)测量3H-TdR的并入。使用下式计算对细胞增殖的抑制：(1-实验条件CCPM/未处理CCPM)×100％。研究结果示于图22和图23中，其代表3个独立实验。在所有B淋巴细胞细胞系中，在所有浓度下，如以μg/mL(图22)或摩尔(图23)所测量，GB4542至少在直接抑制细胞增殖方面与GB4500同样有效。在μg/mL浓度范围内和pmol/mL范围内(图22和23)，GB4542在直接抑制拉莫斯细胞、454B细胞和924B细胞方面显著更有效。
研究结果示出，抗CD20斯塔都体GB4542介导的对B细胞淋巴瘤细胞系增殖的抑制与相应的抗CD20单克隆抗体GB4500相比有所增强。
实施例7.多聚化斯塔都体介导B细胞淋巴瘤细胞系的CDC
在各种浓度的人IgG(阴性对照)、单克隆抗体GB4500或斯塔都体GB4542或GB4596存在下且在存在或不存在兔补体的情况下将B细胞淋巴瘤细胞(达乌迪、拉莫斯、454B和924B细胞系)培养1小时。通过对膜联蛋白V/7-AAD染色的流式细胞术分析来测量细胞毒性程度。研究结果示于图24和图25中，其代表2个独立实验。如以μg/mL(图24)或以摩尔(图25)测量，在所有浓度下，斯塔都体GB4596在CDC方面与单克隆抗体GB4500同样有效。引人注目的是，如以μg/mL(图24)或以摩尔(图25)测量，在所有测试浓度下，斯塔都体GB4542比单克隆抗体GB4500更有效。
研究结果指示了在抗CD20斯塔都体GB4542存在下，B细胞淋巴瘤细胞系展现出的对CDC的易感性与其相应的抗CD20单克隆抗体GB4500相比有所增加。这些效应在比传统单克隆抗体浓度低至少一个对数级的斯塔都体浓度下发生。
总之，数据示出，当与相应的单克隆抗体相比时，斯塔都体诱导等效或优良的ADCC、CDC、DC并抑制B淋巴瘤细胞系的增殖。即使当斯塔都体的测试浓度相对于所述单克隆抗体的浓度较低时，斯塔都体也存在优良活性。这些结果指示了本发明的斯塔都体提供优于传统单克隆抗体或其它抗原结合分子的治疗益处。
实施例8.多聚化斯塔都体使体内小鼠模型中的平均肿瘤体积减小
进行研究以评估相对于共有相同的Fab的抗CD20单克隆抗体，CD20特异性斯塔都体展现体内肿瘤细胞杀伤的程度。在第0天将严重综合性免疫缺陷(SCID)小鼠经皮下注射5×107个Raji细胞。在第10天，肿瘤体积达到100mm3，且开始CD20特异性斯塔都体(GB4542)或单克隆抗体(GB4500)处理。在有CpG(每次注射100μg)或无CpG(PBS)的情况下通过肿瘤内注射每天4次施用等摩尔的GB4542(13.5mg/kg)或GB4500(10mg/kg)。对照小鼠接受单独的PBS或接受具有CpG的PBS。每1-3天测量肿瘤尺寸。肿瘤尺寸计算为宽度2×长度/2。当肿瘤体积达到2000m3时，对小鼠施以安乐死。
研究结果示于图26和图27中。在整个研究中(即，到至少第23天)，对于具有CpG的GB4542组和具有CpG的GB4500组，平均肿瘤体积(图26)和中值肿瘤体积(图27)保持在基线水平或接近基线水平。在不存在CpG的情况下用GB4500处理所产生的肿瘤体积是PBS组在施以安乐死之前对PBS组进行测量的最后一个时间点(图26和图27的第18天)时的约一半。此外，在不存在CpG的情况下用GB4500处理产生与第18天的PBS/CpG组相比相等的平均肿瘤体积(图26)和中值肿瘤体积(图27)，以及相对于最后一个时间点(第23天)的PBS/CpG组，仅略微较低的平均肿瘤体积(图26)或约一半的中值肿瘤体积(图27)。相比之下，在不存在CpG的情况下用GB4542处理导致截至第23天的平均肿瘤体积以及中值肿瘤体积相对于单独用GB4500处理的小鼠中的肿瘤体积显著减少(分别见图26和图27)。因此，研究结果显示，就平均体内肿瘤体积而言，相对于相应的单克隆抗体，GB4542展现出优良结果。
实施例9.斯塔都体使关节炎的体内小鼠模型中的炎症减轻
采用胶原蛋白诱导的关节炎(CIA)小鼠模型来确定斯塔都体在抑制与小鼠II型胶原蛋白关节炎相关的炎症、血管翳形成、软骨破坏和骨吸收方面的效力。
在研究第0天和研究第21天用异氟烷麻醉雄性小鼠且经皮内施用150μL含牛II型胶原蛋白的弗氏完全佐剂(补充结核分枝杆菌，4mg/mL；Difco)。在这个模型中，在研究第18-35天出现关节炎发作。使用以下临床记分量表来监测小鼠的临床病兆：
0＝正常
1＝1个后爪或前爪关节受到影响或最小程度的扩散型红斑和肿胀
2＝2个后爪或前爪关节受到影响或轻度扩散型红斑和肿胀
3＝3个后爪或前爪关节受到影响或中度扩散型红斑和肿胀
4＝显著扩散型红斑和肿胀，或4个指关节受到影响
5＝严重扩散型红斑和整个爪子严重肿胀，指爪不能弯曲
一组小鼠(n＝4)是天然的(即，未施用胶原蛋白)。在胶原蛋白施用之后将所有其它组的小鼠随机分组以便以下表5中所指示的剂量接受静脉内注射PBS、GB7500(抗TNF单克隆抗体)、GB7542(抗TNF多聚化斯塔都体)、GB4500(抗CD20单克隆抗体)或GB4542(抗CD20多聚化斯塔都体)。
表5.胶原蛋白诱导的关节炎研究中的小鼠组
在至少一个爪子中明显确定肿胀之后将小鼠随机分成五个处理组之一(即，临床得分至少为1；在临床得分为1下分级的动物的第一天指定为关节炎第1天)。
在随机分组之后开始用PBS、GB7500、GB7542、GB4500或GB4542处理且持续10天。在关节炎第1天、第3天、第5天、第7天、第9天和第11天确定体重；且在关节炎第1天至第11天每天确定爪子得分。例如使用抗胶原蛋白ELISA测定在不同的研究天数收集血浆、血清和全血以测量药物动力学和/或抗胶原蛋白反应。在关节炎第11天对动物进行剖检。收集组织(包括关节)且进行组织学分析。
通过确定关节炎日的给药曲线下面积(AUC)来分析爪子得分的临床数据。对于AUC计算，将各小鼠的每天平均得分输入到Microsoft Excel中并且计算疾病发作后的治疗日至终止日之间的面积。确定各组的平均值并且使用以下公式计算关节炎对照的抑制％：
抑制％＝A-B/A×100
A＝疾病对照的平均值–正常的平均值
B＝经处理的平均值–正常的平均值
使用斯氏t检验(Student’s t-test)或曼-惠特尼U检验(Mann-Whitney Utest)(非参数)分析数据。如果适当的话，则使用单向方差分析(单向ANOVA)或克-瓦二氏检验(非参数)进一步分析所有组的数据以及仅适当的多个原始(未转化)数据。关于数据的正态性和方差齐性，统计检验做出了某些假设，且如果测试结果违反这些假设，则可能需要进一步分析。所有测试的显著性将设定在p≤0.05。
研究结果将显示，相对于与斯塔都体共有相同的Fab的单克隆抗体，斯塔都体提供优良的CIA治疗。具体地说，该研究将示出，相对于抗CD20单克隆抗体或抗TNF单克隆抗体，用多聚化抗CD20斯塔都体和多聚化抗TNF斯塔都体治疗分别产生减缓了CIA的形成和/或进展。该研究将示出，用斯塔都体治疗CIA优于相应的单克隆抗体，尽管事实上该斯塔都体及其相应的单克隆抗体共有相同的Fab。
实施例10.相对于相应的单克隆抗体或共有相同Fab的非多聚化斯塔都体，多聚化斯塔都体展现出优良的C1q补体结合。
进行补体结合测定以比较三种多聚化斯塔都体相对于与所述多聚化斯塔都体具有相同Fab的相应单克隆抗体的Clq结合。
在4℃下用含1μg/mL补体组分C1q人血清(Sigma目录号：C1740-0.5MG)的PBS以100μL体积将ELISA板涂布过夜。用含有0.05％吐温的磷酸盐缓冲盐水(PBS)将板洗涤3次。在室温下使用含有1％BSA和0.05％吐温溶液的PBS阻断非特异性结合保持2小时。然后在室温下将经过涂布的孔与各种浓度的测试化合物孵育2小时。用含有0.05％吐温的PBS将板洗涤3次，且在室温下与作为检测试剂的1:5000生物素化小鼠抗人IgG1(目录号555869，BDBiosciences)和链霉亲和素-HRP(目录号：7100-05，SouthernBiotech)孵育1小时。将孔洗涤3次，且用标准TMB ELISA检测法检测，并且在450nm下读取吸光度。
测试GB4542和共有相同Fab的相应mAb(GB4500)、GB7542和共有相同Fab的相应mAb(GB7500)以及GB2542和共有相同Fab的相应mAb(GB2500)的补体Clq结合。令人惊讶的是，所有三种测试的多聚化抗体(GB4542、GB7442和GB2542)相对于其相应的mAb都展现出呈指数级升高的补体Clq结合(图28)。具体地说，GB4542展现出极高的补体Clq结合水平。GB4542、GB7542和GB2542各自共有相同的多聚化结构域和Fc区，且区别仅在于各自具有不同的Fab。因此，出乎意料的是，多聚化斯塔都体上的Fab影响补体Clq结合水平。
使用商购获得的软件GraphPad prism 5利用曲线拟合对数据进行对数转换，且计算各测试分子的EC50(ug/ml)。EC50是半数最大有效浓度，并且是指给出半数最大反应的分子浓度。引人注目的是，各斯塔都体的EC50比相应抗体的EC50低10-20倍(图29)。具体地说，斯塔都体GB7542的EC50是8.69，而相应mAb GB7500的EC50是202.0；斯塔都体GB4542的EC50是3.25，而相应mAb GB4500的EC50是34.5；且斯塔都体GB2542的EC50是11.0，而相应mAb GB2500的EC50由于此分子展现出极低Clq结合水平而无法确定(图29)。因此，得到半数最大补体结合反应所需的斯塔都体浓度比具有相同Fab的单克隆抗体实现半数最大补体结合反应所需的浓度低至少10-20倍。另外，得到半数最大补体结合反应所需的斯塔都体浓度受斯塔都体的Fab影响，而不仅仅是多聚区和Fc区。进行其它补体结合测定以评估非多聚化斯塔都体相对于其多聚对应物或共有相同Fab的相应单克隆抗体的补体Clq结合能力。为了评估补体Clq结合，如上文描述使用GB2500、GB2542和线性非多聚化斯塔都体GB2554和GB2555进行补体测定，所有四者共有相同的抗Her2/neu Fab。非多聚化斯塔都体GB2554和GB2555各自相对于单克隆抗体GB2500展现出优良的补体Clq结合(图30)；然而，多聚化斯塔都体GB2542展现出了与任一种非多聚化斯塔都体相比都更优良的补体Clq结合(图30)。此外，多聚化斯塔都体GB2542的EC50值比GB2554和GB2555的EC50值低2.5-7.0倍。具体地说，GB2542的补体Clq结合的EC50值是3.83，而GB2554和GB2555的补体Clq结合的EC50值分别是26.4和9.45(图31)。
研究结果指示了出乎意料地，多聚化斯塔都体相对于共有相同Fab的相应单克隆抗体展现出显著优良的补体结合。结果还指示了尽管非多聚化斯塔都体相对于共有相同Fab的相应单克隆抗体展现出优良的补体结合，但多聚化斯塔都体相对于共有相同Fab的非多聚化斯塔都体展现出更优良的补体结合。最后，研究示出，多聚化斯塔都体上的Fab显着影响Clq结合的量。
本申请通篇所引用的所有文献、专利、专利申请、公布、产品描述和方案都出于所有目的而通过引用整体并入本文。
本说明书中所说明和论述的实施方案仅意在教导本领域技术人员诸位发明人已知的制备和使用本发明的最佳方式。如本领域技术人员所了解，根据上述教导，有可能在不偏离本发明的情况下对本发明的上述实施例进行修改和变化。因此，应理解，在权利要求及其等效物的范围内，本发明可不同于如具体描述加以实施。

Claims (148)

1.一种斯塔都体，其包含Fab结构域；一个或多个Fc结构域；和一个或多个多聚化结构域，其中所述一个或多个多聚化结构域能够使所述斯塔都体多聚化。
2.如权利要求1所述的斯塔都体，其包含两个Fc结构域且其中所述一个或多个多聚化结构域分隔所述两个Fc结构域。
3.如权利要求1所述的斯塔都体，其中所述一个或多个多聚化结构域中的至少一个位于所述Fc区的羧基端。
4.如权利要求1所述的斯塔都体，其中所述一个或多个多聚化结构域独立地选自异亮氨酸拉链、IgG2铰链和GPP重复序列。
5.如权利要求1所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体包含至少一个IgG2铰链结构域，其中所述IgG2铰链结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:3具有至少80％同源性，且其中所述IgG2铰链能够使所述斯塔都体多聚化。
6.如权利要求1所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体包含至少一个异亮氨酸拉链，其中所述至少一个异亮氨酸拉链的氨基酸序列与SEQ ID NO:32具有至少80％同源性，且其中所述异亮氨酸拉链能够使所述斯塔都体多聚化。
7.如权利要求1所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体包含两个多聚化结构域。
8.如权利要求7所述的斯塔都体，其中所述两个多聚化结构域是异亮氨酸拉链和IgG2铰链。
9.如权利要求8所述的斯塔都体，其中所述两个多聚化结构域分隔两个Fc结构域。
10.如权利要求8所述的斯塔都体，其中所述两个多聚化结构域中位于所述Fc区的羧基端。
11.如权利要求1所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体包含三个多聚化结构域。
12.如权利要求1所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体包含四个多聚化结构域。
13.如权利要求1所述的斯塔都体，其中所述至少一个Fc结构域是IgG1 Fc结构域。
14.如权利要求13所述的斯塔都体，其中所述IgG1 Fc结构域包含IgG1铰链、IgG1 CH2和IgG1 CH3。
15.如权利要求1所述的斯塔都体，其中所述一个或多个Fc结构域中的至少一个包含IgG2铰链。
16.如权利要求15所述的斯塔都体，其中所述Fc结构域包含IgG2铰链、IgG1CH2和IgG1 CH3。
17.如权利要求13所述的斯塔都体，其中至少一个IgG1 Fc结构域的所述氨基酸序列与SEQ ID NO:2具有至少80％同源性。
18.如权利要求2所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)第一Fc结构域；
(c)异亮氨酸拉链；
(d)IgG2铰链；和
(e)第二Fc结构域。
19.如权利要求2所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)第一Fc结构域；
(c)IgG2铰链；
(d)异亮氨酸拉链；和
(e)第二Fc结构域。
20.如权利要求2所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)第一Fc结构域；
(c)异亮氨酸拉链；和
(e)第二Fc结构域。
21.如权利要求2所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)第一Fc结构域；
(c)IgG2铰链；和
(e)第二Fc结构域。
22.如权利要求2所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)第一Fc结构域；
(c)G4S结构域；
(d)IgG2铰链；和
(e)第二Fc结构域。
23.如权利要求2所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)第一Fc结构域；
(c)IgG2铰链；
(d)G4S结构域；和
(e)第二Fc结构域。
24.如权利要求2所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)第一Fc结构域；
(c)G4S结构域；
(d)异亮氨酸拉链；和
(e)第二Fc结构域。
25.如权利要求2所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)第一Fc结构域；
(c)异亮氨酸拉链；
(d)G4S结构域；和
(e)第二Fc结构域。
26.如权利要求2所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)第一Fc结构域；
(c)GPP结构域；和
(d)第二Fc结构域。
27.如权利要求2所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)第一Fc结构域；
(c)GPP结构域；
(d)IgG2铰链；和
(e)第二Fc结构域。
28.如权利要求2所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)第一Fc结构域；
(c)IgG2铰链；
(d)GPP结构域；和
(e)第二Fc结构域。
29.如权利要求2所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)第一Fc结构域；
(c)GPP结构域；
(d)异亮氨酸拉链；和
(e)第二Fc结构域。
30.如权利要求2所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)第一Fc结构域；
(c)异亮氨酸拉链；
(d)GPP结构域；和
(e)第二Fc结构域。
31.如权利要求18至30中任一项所述的斯塔都体，其中所述第一Fc结构域和所述第二Fc结构域是IgG1 Fc结构域。
32.如权利要求18所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQID NO:33具有至少80％同源性。
33.如权利要求18所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQID NO:35具有至少80％同源性。
34.如权利要求18所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体的氨基酸序列与SEQID NO:37具有至少80％同源性。
35.如权利要求3所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)Fc结构域；
(c)异亮氨酸拉链；和
(d)IgG2铰链。
36.如权利要求3所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)Fc结构域；
(c)IgG2铰链；和
(d)异亮氨酸拉链。
37.如权利要求3所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)Fc结构域；和
(c)IgG2铰链。
38.如权利要求3所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)Fc结构域；和
(c)异亮氨酸拉链。
39.如权利要求3所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)Fc结构域；
(c)G4S结构域；和
(d)IgG2铰链。
40.如权利要求3所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)Fc结构域；
(c)G4S结构域；和
(d)异亮氨酸拉链。
41.如权利要求3所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)Fc结构域；
(d)IgG2铰链；和
(d)结构域连接。
42.如权利要求3所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)Fc结构域；
(c)结构域连接；和
(d)IgG2铰链。
43.如权利要求3所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(c)Fc结构域；
(d)异亮氨酸拉链；和
(e)结构域连接。
44.如权利要求3所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(c)Fc结构域；
(d)结构域连接；和
(e)异亮氨酸拉链。
45.如权利要求3所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)Fc结构域；和
(c)GPP结构域。
46.如权利要求3所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)Fc结构域；
(c)GPP结构域；和
(d)IgG2铰链。
47.如权利要求3所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)Fc结构域；
(c)IgG2铰链；和
(d)GPP结构域。
48.如权利要求3所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)Fc结构域；
(c)GPP结构域；和
(d)异亮氨酸拉链。
49.如权利要求3所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体从氨基到羧基末端包含：
(a)Fab结构域；
(b)Fc结构域；
(c)异亮氨酸拉链；和
(d)GPP结构域。
50.如权利要求35-49中任一项所述的斯塔都体，其中所述Fc结构域是IgG1Fc结构域。
51.如权利要求50所述的斯塔都体，其中所述IgG1 Fc结构域包含IgG1铰链、IgG1 CH2和IgG1 CH3。
52.如权利要求35-49中任一项所述的斯塔都体，其中所述Fc结构域包含IgG2铰链。
53.如权利要求52所述的斯塔都体，其中所述Fc结构域包含IgG2铰链、IgG1CH2和IgG1 CH3。
54.如权利要求1所述的斯塔都体，其中所述Fab结构域对EGFR具有特异性。
55.如权利要求54所述的斯塔都体，其中所述Fab结构域的氨基酸序列与SEQID NO:31具有至少80％同源性。
56.如权利要求1所述的斯塔都体，其中所述Fab结构域对HER2/neu具有特异性。
57.如权利要求56所述的斯塔都体，其中所述Fab结构域的氨基酸序列与SEQID NO:34具有至少80％同源性。
58.如权利要求1所述的斯塔都体，其中所述Fab结构域对CD20具有特异性。
59.如权利要求58所述的斯塔都体，其中所述Fab结构域的氨基酸序列与SEQID NO:36具有至少80％同源性。
60.如权利要求1所述的斯塔都体，其中所述两个或更多个Fc结构域能够结合FcγR。
61.如权利要求60所述的斯塔都体，其中所述FcγR是FcγRIIIa。
62.一种调节受试者的免疫反应的方法，其包括向所述受试者施用有效量的如权利要求1所述的斯塔都体。
63.一种治疗有需要的受试者的炎性疾病、自身免疫疾病、传染病或癌症的方法，其包括向所述受试者施用有效量的如权利要求1所述的斯塔都体。
64.如权利要求62或63所述的方法，其中所述受试者是人。
65.如权利要求62或63所述的方法，其中所述斯塔都体经静脉内、经皮下、经口、经鼻、经腹膜内、经舌下、经颊、经皮、通过皮下或皮下植入或经肌内施用于所述受试者。
66.如权利要求65所述的方法，其中所述斯塔都体以约0.5mg/Kg至约50mg/Kg的剂量经静脉内施用。
67.如权利要求63所述的方法，其中所述受试者患有癌症。
68.如权利要求67所述的方法，其中所述癌症选自结肠直肠癌、头颈癌、纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、***肉瘤、***内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、***癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、***状癌、***状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝细胞瘤、胆管癌、绒毛膜癌、***瘤、胚胎癌、威尔姆氏肿瘤、***、睾丸肿瘤、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤、黑素瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、沃尔登斯特伦巨球蛋白血症、骨髓增生异常病、重链病、神经内分泌瘤和神经鞘瘤。
69.如权利要求63所述的方法，其中所述受试者患有自身免疫疾病或炎性疾病，且其中所述自身免疫疾病或炎性疾病选自特发性血小板减少性紫癜、格-巴二氏综合症、重症肌无力、多发性硬化、视神经炎、川崎病、类风湿性关节炎、***性红斑狼疮、异位性皮炎、动脉粥样硬化、冠状动脉病、心肌病、反应性关节炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、移植物抗宿主病和1型糖尿病。
70.如权利要求63所述的方法，其中所述受试者患有传染病，且其中所述传染病选自念珠菌病，念珠菌血症，曲霉病，链球菌性肺炎，链球菌性皮肤和口咽病状，革兰氏阴性脓毒病，肺结核，单核细胞增多症，流感，由呼吸道合胞病毒、人免疫缺陷病毒引起的呼吸***疾病，乙型肝炎，丙型肝炎，疟疾，血吸虫病，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌疾病、耐万古霉素肠球菌疾病、耐碳青霉烯型和产碳青霉烯酶型肠杆菌科疾病，分枝杆菌病和锥虫病。
71.如权利要求62或63所述的方法，其中所述斯塔都体是在施用一种或多种额外药物和/或治疗剂之前、期间或之后施用。
72.如权利要求2所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体所显示的细胞毒性与在除分隔两个或更多个Fc结构域以外的位置上含有一个或多个多聚化结构域的斯塔都体相比有所增强。
73.如权利要求3所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体所显示的细胞毒性与在除所述IgG1 Fc区的羧基端以外的位置上含有一个或多个多聚化结构域的斯塔都体相比有所增强。
74.如权利要求7所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体所显示的细胞杀伤与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比有所增强。
75.如权利要求8所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体所显示的细胞杀伤与含有两个多聚化结构域的斯塔都体相比有所增强，所述两个多聚化结构域不是异亮氨酸拉链和IgG2铰链。
76.如权利要求72或73所述的斯塔都体，其中所述细胞杀伤由ADCC介导。
77.如权利要求72或73所述的斯塔都体，其中所述细胞杀伤由CDC介导。
78.如权利要求72或73所述的斯塔都体，其中所述细胞杀伤由DC介导。
79.一种斯塔都体，其包含Fab结构域；两个或更多个Fc结构域；和两个多聚化结构域，其中所述两个多聚化结构域分隔所述两个或更多个Fc结构域，其中所述斯塔都体所显示的细胞杀伤与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比有所增强。
80.如权利要求79所述的斯塔都体，其中所述两个或更多个Fc结构域中的至少一个是IgG1 Fc结构域。
81.一种斯塔都体，其包含Fab结构域；一个或多个Fc结构域；和两个多聚化结构域，其中所述两个多聚化结构域位于Fc区的羧基端上，且其中所述斯塔都体所显示的细胞杀伤与含有一个多聚化结构域的斯塔都体相比有所增强。
82.如权利要求81所述的斯塔都体，其中所述一个或多个Fc结构域中的至少一个是IgG1 Fc结构域。
83.如权利要求79或81所述的斯塔都体，其中所述两个多聚化结构域是异亮氨酸拉链和IgG2铰链。
84.如权利要求1所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体所显示的细胞杀伤与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比有所增强。
85.如权利要求84所述的斯塔都体，其中所述细胞杀伤由ADCC介导。
86.如权利要求84所述的斯塔都体，其中所述细胞杀伤由CDC介导。
87.如权利要求84所述的斯塔都体，其中所述细胞杀伤由DC介导。
88.如权利要求1所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体所显示的对细胞增殖的抑制与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比有所增强。
89.如权利要求1所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体还包含一个或多个危险信号。
90.如权利要求1所述的斯塔都体，其中所述危险信号选自CD40-L、TNF-α、IL-1β、IFN-α、细胞内核苷酸ATP或UTP、未甲基化长CpG序列、热休克蛋白、反应性氧中间体、血管活性肠肽、金属蛋白酶9、硫酸类肝素的降解产物、透明质酸的小分解产物、LDL衍生的磷脂、LOX-1、尿酸、高迁移率族蛋白1、炎性体、IL-1α；S100蛋白；肝癌衍生生长因子、IL-1α；高浓度的腺苷5'-三磷酸酶、β-D-吡喃葡萄糖基神经酰胺、IL-33、诸如金纳米颗粒的纳米颗粒和F-肌动蛋白。
91.如权利要求62或63所述的方法，其包括施用如权利要求89所述的斯塔都体。
92.如权利要求62或63所述的方法，其还包括在治疗之前、期间或之后施用包含危险信号的额外斯塔都体。
93.如权利要求18所述的斯塔都体，其中所述Fab结构域对EGFR具有特异性。
94.如权利要求93所述的斯塔都体，其中所述Fab的氨基酸序列与SEQ ID NO:31具有至少80％同源性。
95.如权利要求18所述的斯塔都体，其中所述Fab结构域对Her2/neu具有特异性。
96.如权利要求95所述的斯塔都体，其中所述Fab的氨基酸序列与SEQ ID NO:34具有至少80％同源性。
97.如权利要求18所述的斯塔都体，其中所述Fab结构域对CD20具有特异性。
98.如权利要求97所述的斯塔都体，其中所述Fab的氨基酸序列与SEQ ID NO:36具有至少80％同源性。
99.如权利要求35所述的斯塔都体，其中所述Fab结构域对EGFR具有特异性。
100.如权利要求99所述的斯塔都体，其中所述Fab的氨基酸序列与SEQ IDNO:31具有至少80％同源性。
101.如权利要求35所述的斯塔都体，其中所述Fab结构域对Her2/neu具有特异性。
102.如权利要求101所述的斯塔都体，其中所述Fab的氨基酸序列与SEQ IDNO:34具有至少80％同源性。
103.如权利要求35所述的斯塔都体，其中所述Fab结构域对CD20具有特异性。
104.如权利要求103所述的斯塔都体，其中所述Fab的氨基酸序列与SEQ IDNO:36具有至少80％同源性。
105.一种斯塔都体，其具有与SEQ ID NO:35具有至少80％同源性的氨基酸序列。
106.如权利要求105所述的斯塔都体，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO:35具有至少95％同源性。
107.如权利要求106所述的斯塔都体，其中所述氨基酸序列是SEQ ID NO:35。
108.一种斯塔都体，其具有与SEQ ID NO:33具有至少80％同源性的氨基酸序列。
109.如权利要求108所述的斯塔都体，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO:33具有至少95％同源性。
110.如权利要求109所述的斯塔都体，其中所述氨基酸序列是SEQ ID NO:33。
111.一种斯塔都体，其具有与SEQ ID NO:37具有至少80％同源性的氨基酸序列。
112.如权利要求111所述的斯塔都体，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO:37具有至少95％同源性。
113.如权利要求112所述的斯塔都体，其中所述氨基酸序列是SEQ ID NO:37。
114.一种斯塔都体，其具有与SEQ ID NO:66具有至少80％同源性的氨基酸序列。
115.如权利要求114所述的斯塔都体，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO:66具有至少95％同源性。
116.如权利要求115所述的斯塔都体，其中所述氨基酸序列是SEQ ID NO:66。
117.一种斯塔都体，其具有与SEQ ID NO:91具有至少80％同源性的氨基酸序列。
118.如权利要求117所述的斯塔都体，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO:91具有至少95％同源性。
119.如权利要求118所述的斯塔都体，其中所述氨基酸序列是SEQ ID NO:91。
120.一种斯塔都体，其具有与SEQ ID NO:70具有至少80％同源性的氨基酸序列。
121.如权利要求120所述的斯塔都体，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO:70具有至少95％同源性。
122.如权利要求121所述的斯塔都体，其中所述氨基酸序列是SEQ ID NO:70。
123.一种斯塔都体，其具有与SEQ ID NO:76具有至少80％同源性的氨基酸序列。
124.如权利要求123所述的斯塔都体，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO:76具有至少95％同源性。
125.如权利要求124所述的斯塔都体，其中所述氨基酸序列是SEQ ID NO:76。
126.一种斯塔都体，其具有与SEQ ID NO:87具有至少80％同源性的氨基酸序列。
127.如权利要求126所述的斯塔都体，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO:87具有至少95％同源性。
128.如权利要求127所述的斯塔都体，其中所述氨基酸序列是SEQ ID NO:87。
129.如权利要求1所述的斯塔都体，其中所述Fab结构域对TNF超家族成员具有特异性。
130.如权利要求129所述的斯塔都体，其中所述TNF超家族成员选自TNF、淋巴毒素(LT)、淋巴毒素β(LTβ)、OX40配体、CD40配体、CD95、CD27配体、CD30配体、4-1BB配体、TRAIL、TRANCE、TWEAK、APRIL、Blys、LIGHT、TL1A、GITR配体、EDA-A1和EDA-A2。
131.如权利要求130所述的斯塔都体，其中所述TNF超家族成员是TNF。
132.如权利要求131所述的斯塔都体，其中所述Fab结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:67具有至少80％同源性。
133.如权利要求18所述的斯塔都体，其中所述Fab结构域对TNF具有特异性。
134.如权利要求133所述的斯塔都体，其中所述Fab的氨基酸序列与SEQ IDNO:67具有至少80％同源性。
135.如权利要求35所述的斯塔都体，其中所述Fab结构域对TNF具有特异性。
136.如权利要求135所述的斯塔都体，其中所述Fab的氨基酸序列与SEQ IDNO:67具有至少80％同源性。
137.如权利要求1所述的斯塔都体，其中所述Fab结构域对细胞因子具有特异性。
138.如权利要求137所述的斯塔都体，其中所述细胞因子选自IL-2、IL-8和IL-17。
139.如权利要求1所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体所显示的补体结合与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比有所增强。
140.如权利要求1所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体所显示的补体结合与具有相同Fab的单克隆抗体相比有所增强。
141.如权利要求139或140所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体的补体结合EC50值与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比低至少10倍。
142.如权利要求139或140所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体的补体结合EC50值与对相同抗原具有特异性的单克隆抗体相比低至少20倍。
143.如权利要求1所述的斯塔都体，其中所述斯塔都体展现细胞杀伤，且其中细胞杀伤的量取决于所述Fab而变化。
144.如权利要求143所述的斯塔都体，其中所述细胞杀伤由ADCC介导。
145.如权利要求143所述的斯塔都体，其中所述细胞杀伤由CDC介导。
146.如权利要求143所述的斯塔都体，其中所述细胞杀伤由DC介导。
147.一种组合物，其包含多聚化斯塔都体，其中所述斯塔都体选自如权利要求18-30中任一项所述的斯塔都体。
148.如权利要求147所述的组合物，其包含至少2种、至少3种、至少4种、至少5种或至少6种斯塔都体。
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RU (1) RU2015109591A (zh)
WO (1) WO2014031646A2 (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105647946A (zh) * 2016-03-18 2016-06-08 苏州康元生物科技有限公司 一种基于FcγRⅢa的嵌合基因及其用途
CN106554968A (zh) * 2015-09-29 2017-04-05 中国农业科学院上海兽医研究所 日本血吸虫重组蛋白及其制备方法和应用
CN109312000A (zh) * 2016-03-30 2019-02-05 Ab生物科学有限公司 重组静脉内免疫球蛋白(rIVIG)组合物及其生产和使用方法
CN113101364A (zh) * 2018-05-29 2021-07-13 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种自免疫抑制剂的开发和应用
CN114146056A (zh) * 2015-07-29 2022-03-08 纳米提克斯有限责任公司 用于清除可溶性生物分子的模块化组合物及其相关方法

Families Citing this family (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2009013004A (es) 2007-06-01 2010-01-20 Univ Maryland Agentes de union al receptor de la region constante fc de inmunoglobulina.
TWI588157B (zh) 2010-07-28 2017-06-21 吉林尼克公司 產生依序多聚體化免疫球蛋白ｆｃ組合物之天然人類蛋白質片段之融合蛋白
US9683044B2 (en) * 2012-08-20 2017-06-20 Gliknik Inc. Molecules with antigen binding and polyvalent FC gamma receptor binding activity
KR20160130463A (ko) 2014-03-05 2016-11-11 유씨비 바이오파마 에스피알엘 다량체 Fc 단백질
IL286367B2 (en) 2014-05-02 2023-03-01 Momenta Pharmaceuticals Inc Compositions and methods relating to engineered fc constructs
US20180282424A1 (en) * 2014-11-06 2018-10-04 Gliknik Inc. Molecules with bimodal activity depleting target at low dose and increasing immunosuppression at higher dose
ES2736106T3 (es) * 2015-03-10 2019-12-26 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos que se pueden conjugar mediante la transglutaminasa y conjugados producidos a partir de ellos
EP3325011B3 (en) * 2015-07-24 2023-03-15 Gliknik Inc. Fusion proteins of human protein fragments to create orderly multimerized immunoglobulin fc compositions with enhanced complement binding
WO2017151971A2 (en) * 2016-03-02 2017-09-08 Momenta Pharmaceuticals, Inc. METHODS RELATED TO ENGINEERED Fc CONSTRUCTS
SG10202011624SA (en) * 2016-05-23 2021-01-28 Momenta Pharmaceuticals Inc Compositions and methods related to engineered fc constructs
CA3026420A1 (en) 2016-06-07 2017-12-14 Gliknik Inc. Cysteine-optimized stradomers
KR20190070977A (ko) 2016-11-01 2019-06-21 젠맵 비. 브이 폴리펩티드 변이체 및 그의 용도
KR20190095929A (ko) 2016-12-09 2019-08-16 글리크닉 인코포레이티드 다합체화 스트라도머인 gl-2045의 제조 최적화
EP3551227A4 (en) 2016-12-09 2020-07-29 Gliknik Inc. METHOD FOR TREATING INFLAMMABLE DISEASES WITH MULTI-VALUE FC COMPOUNDS
EP3565588A4 (en) 2017-01-06 2020-12-16 Momenta Pharmaceuticals, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS RELATING TO MODIFIED FC CONSTRUCTIONS
JP2020506208A (ja) 2017-02-10 2020-02-27 ゲンマブ ビー．ブイ． ポリペプチドバリアントおよびそれらの使用
WO2019094574A1 (en) * 2017-11-09 2019-05-16 Medimmune, Llc Bispecific fusion polypeptides and methods of use thereof
US20210107988A1 (en) 2018-01-24 2021-04-15 Genmab B.V. Polypeptide variants and uses thereof
KR20210008380A (ko) 2018-05-03 2021-01-21 젠맵 비. 브이 항체 변이체 조합물 및 그의 용도
MA52951A (fr) 2018-06-22 2021-04-28 Genmab Holding B V Anticorps anti-cd37 et anticorps anti-cd20, compositions et méthodes d'utilisation de ceux-ci
JP2021530992A (ja) * 2018-07-11 2021-11-18 モメンタ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 改変されたＦｃ抗原結合ドメイン構築体に関する組成物および方法
KR20210042326A (ko) * 2018-07-11 2021-04-19 모멘타 파머슈티컬스 인코포레이티드 조작된 Fc-항원 결합 도메인 작제물에 관련된 조성물 및 방법
WO2020012038A1 (en) 2018-07-13 2020-01-16 Genmab A/S Trogocytosis-mediated therapy using cd38 antibodies
US20200017600A1 (en) 2018-07-13 2020-01-16 Genmab A/S Variants of cd38 antibody and uses thereof
MA55881A (fr) 2019-05-09 2022-03-16 Genmab Bv Schémas posologiques pour une combinaison d'anticorps anti-dr5 destinés à être utilisés dans le traitement du cancer
EP4055046A1 (en) 2019-11-06 2022-09-14 Genmab B.V. Antibody variant combinations and uses thereof
IL294453A (en) 2020-01-16 2022-09-01 Genmab As Formulations of cd38 antibodies and uses thereof
EP4185388A1 (en) 2020-07-23 2023-05-31 Genmab B.V. A combination of anti-dr5 antibodies and an immunomodulatory imide drug for use in treating multiple myeloma
EP4221742A1 (en) 2020-10-02 2023-08-09 Genmab A/S Antibodies capable of binding to ror2 and bispecific antibodies binding to ror2 and cd3
US20230109496A1 (en) 2021-09-06 2023-04-06 Genmab B.V. Antibodies capable of binding to cd27, variants thereof and uses thereof
WO2023218051A1 (en) 2022-05-12 2023-11-16 Genmab A/S Binding agents capable of binding to cd27 in combination therapy
WO2023218046A1 (en) 2022-05-12 2023-11-16 Genmab A/S Binding agents capable of binding to cd27 in combination therapy

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090304715A1 (en) * 2006-03-03 2009-12-10 Tokyo University Of Science Modified antibodies with enhanced biological activities
CN101835802A (zh) * 2007-06-01 2010-09-15 马里兰大学巴尔的摩分校 免疫球蛋白恒定区Fc受体结合剂
WO2012016073A2 (en) * 2010-07-28 2012-02-02 Gliknik Inc. Fusion proteins of natural human protein fragments to create orderly multimerized immunoglobulin fc compositions

Family Cites Families (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6004781A (en) 1988-01-22 1999-12-21 The General Hospital Corporation Nucleic acid encoding Ig-CD4 fusion proteins
GB8824869D0 (en) 1988-10-24 1988-11-30 Stevenson G T Synthetic antibody
US5681566A (en) 1988-10-24 1997-10-28 3I Research Exploitation Limited Antibody conjugates with two or more covalently linked FC regions
CA2153661A1 (en) 1993-01-12 1994-07-21 Anthony George Gristina Methods and compositions for the direct concentrated delivery of passive immunity
US5877396A (en) 1993-04-23 1999-03-02 Sloan Kettering Institute For Cancer Research Mice mutant for functional Fc receptors and method of treating autoimmune diseases
US6750334B1 (en) 1996-02-02 2004-06-15 Repligen Corporation CTLA4-immunoglobulin fusion proteins having modified effector functions and uses therefor
CA2331607A1 (en) 1998-05-06 1999-11-11 Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education Reversal of proinflammatory response by ligating the macrophage fc.gamma.ri receptor
JP2002522063A (ja) 1998-08-17 2002-07-23 アブジェニックス インコーポレイテッド 増加した血清半減期を有する改変された分子の生成
US7087411B2 (en) 1999-06-08 2006-08-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Fusion protein capable of binding VEGF
DE60127933T2 (de) 2000-01-03 2008-02-07 Mark L. Merion Station Tykocinski Chimäre proteine und anwendungen
EP1349569B1 (en) 2001-01-12 2007-04-18 Becton Dickinson and Company Intrinsically fluorescent, self-multimerizing mhc fusion proteins and complexes thereof
WO2002072608A2 (en) 2001-03-09 2002-09-19 University Of Chicago POLYMERIC IMMUNOGLOBULIN FUSION PROTEINS THAT TARGET LOW-AFFINITY FCηRECEPTORS
AU2002315052A1 (en) 2001-05-15 2002-11-25 Emory University Polynucleotides and polypeptides relating to the modulation of sirp alpha-cd47
US20040110226A1 (en) 2002-03-01 2004-06-10 Xencor Antibody optimization
WO2006061650A2 (en) 2004-12-10 2006-06-15 Trigen Gmbh Methods, products and uses involving platelets and/or the vasculature
WO2003105898A1 (en) 2002-06-14 2003-12-24 Centocor, Inc. Modified "s" antibodies
WO2004085478A2 (en) 2003-03-26 2004-10-07 Apogenix Gmbh Improved fc fusion proteins
AU2004257142A1 (en) 2003-05-30 2005-01-27 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Antibodies and fusion proteins that include engineered constant regions
WO2005005604A2 (en) 2003-06-30 2005-01-20 Centocor, Inc. Engineered anti-target immunoglobulin derived proteins, compositions, methods and uses
PL2256134T3 (pl) 2003-11-13 2014-06-30 Hanmi Science Co Ltd Fragment Fc Ig do nośnika leku i sposób jego wytwarzania
EP1697520A2 (en) 2003-12-22 2006-09-06 Xencor, Inc. Fc polypeptides with novel fc ligand binding sites
WO2005089503A2 (en) 2004-03-19 2005-09-29 Progenics Pharmaceuticals, Inc. Cd4-igg2 formulations
EP1768717A2 (en) 2004-07-19 2007-04-04 Elutex Ltd. Modified conductive surfaces having active substances attached thereto
US7524487B2 (en) 2005-04-19 2009-04-28 University Of Maryland Compositions and methods for modulating interleukin-10
EP2161336B2 (en) 2005-05-09 2017-03-29 ONO Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1(PD-1) and methods for treating cancer using anti-PD-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
US8008453B2 (en) 2005-08-12 2011-08-30 Amgen Inc. Modified Fc molecules
US7666622B2 (en) 2005-10-19 2010-02-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Monomeric self-associating fusion polypeptides and therapeutic uses thereof
JP2009531022A (ja) 2006-02-17 2009-09-03 ラパポート ファミリー インスティテュート フォー リサーチ イン ザ メディカル サイエンシーズ Ｃｃｒ５／ｃｃｒ５リガンド関連疾患を治療するための分子およびその使用方法
AT503889B1 (de) 2006-07-05 2011-12-15 Star Biotechnologische Forschungs Und Entwicklungsges M B H F Multivalente immunglobuline
GB0614780D0 (en) 2006-07-25 2006-09-06 Ucb Sa Biological products
WO2008131242A1 (en) 2007-04-18 2008-10-30 Zymogenetics, Inc. Single chain fc, methods of making and methods of treatment
PT2662448T (pt) 2007-05-11 2017-03-29 Alexion Pharma Inc Fosfatase alcalina dirigida ao osso, kits e métodos para a utilização da mesma
NZ581395A (en) 2007-05-14 2012-08-31 Biogen Idec Inc Single-chain fc (scfc) regions, binding polypeptides comprising same, and methods related thereto
DK2176298T3 (en) 2007-05-30 2018-02-12 Xencor Inc Methods and compositions for inhibiting CD32B-expressing cells
KR101759460B1 (ko) * 2007-09-21 2017-07-18 더 리전트 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 표적화된 인터페론이 강력한 아폽토시스 및 항-종양 활성을 발휘함
US20100143353A1 (en) 2008-12-04 2010-06-10 Mosser David M POLYPEPTIDES COMPRISING Fc FRAGMENTS OF IMMUNOGLOBULIN G (lgG) AND METHODS OF USING THE SAME
MX2012005527A (es) 2009-11-13 2012-08-08 Grifols Therapeutics Inc Preparaciones que contienen el factor de von willebrand (fvw) procedimientos, kits y aplicaciones relacionados con las mismas.
CN107441480A (zh) 2010-06-30 2017-12-08 卡姆普根有限公司 多肽及其作为用于治疗多发性硬化、类风湿性关节炎以及其他自身免疫病症的药物的用途
US20140370012A1 (en) 2012-01-27 2014-12-18 Gliknik Inc. Fusion proteins comprising igg2 hinge domains
US9683044B2 (en) * 2012-08-20 2017-06-20 Gliknik Inc. Molecules with antigen binding and polyvalent FC gamma receptor binding activity

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090304715A1 (en) * 2006-03-03 2009-12-10 Tokyo University Of Science Modified antibodies with enhanced biological activities
CN101835802A (zh) * 2007-06-01 2010-09-15 马里兰大学巴尔的摩分校 免疫球蛋白恒定区Fc受体结合剂
WO2012016073A2 (en) * 2010-07-28 2012-02-02 Gliknik Inc. Fusion proteins of natural human protein fragments to create orderly multimerized immunoglobulin fc compositions
WO2012016073A3 (en) * 2010-07-28 2012-08-09 Gliknik Inc. Fusion proteins of natural human protein fragments to create orderly multimerized immunoglobulin fc compositions

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114146056A (zh) * 2015-07-29 2022-03-08 纳米提克斯有限责任公司 用于清除可溶性生物分子的模块化组合物及其相关方法
CN106554968A (zh) * 2015-09-29 2017-04-05 中国农业科学院上海兽医研究所 日本血吸虫重组蛋白及其制备方法和应用
CN105647946A (zh) * 2016-03-18 2016-06-08 苏州康元生物科技有限公司 一种基于FcγRⅢa的嵌合基因及其用途
CN105647946B (zh) * 2016-03-18 2019-09-20 江苏普瑞康生物医药科技有限公司 一种基于FcγRⅢa的嵌合基因及其用途
CN109312000A (zh) * 2016-03-30 2019-02-05 Ab生物科学有限公司 重组静脉内免疫球蛋白(rIVIG)组合物及其生产和使用方法
US11304994B2 (en) 2016-03-30 2022-04-19 Ab Biosciences, Inc. Recombinant intravenous immunoglobulin (rIVIG) compositions and methods for their production and use
US11801286B2 (en) 2016-03-30 2023-10-31 Ab Biosciences, Inc. Recombinant intravenous immunoglobulin (RIVIG) compositions and methods for their production and use
CN113101364A (zh) * 2018-05-29 2021-07-13 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种自免疫抑制剂的开发和应用
CN113101364B (zh) * 2018-05-29 2023-12-01 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种自免疫抑制剂的开发和应用

Also Published As

Publication number Publication date
US9683044B2 (en) 2017-06-20
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IL237307A0 (en) 2015-04-30
WO2014031646A3 (en) 2014-05-01
JP2015527366A (ja) 2015-09-17
CA2882296A1 (en) 2014-02-27
US20140072582A1 (en) 2014-03-13
US20180094061A1 (en) 2018-04-05

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Pelletier et al. Passive monoclonal and polyclonal antibody therapies
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