CN104687051A

CN104687051A - 一种海洋生物营养液及其制备方法

Info

Publication number: CN104687051A
Application number: CN201510124493.4A
Authority: CN
Inventors: 黎冠宇; 谭高琼; ***军
Original assignee: Beibu Bay Guangxi Hai Huang Bio Tech Ltd
Current assignee: Beibu Bay Guangxi Hai Huang Bio Tech Ltd
Priority date: 2015-03-20
Filing date: 2015-03-20
Publication date: 2015-06-10

Abstract

本发明公开了一种海洋生物营养液及其制备方法，以北部湾产新鲜大蚝、大虾和海龙提取配伍组成，本发明采用木瓜蛋白酶解，酵母菌发酵结合活性炭进行脱腥、脱色，解决了海洋生物制品特有的腥味问题；添加褐变抑制剂、复合稳定剂，解决了其在加工(酶解、杀菌和贮藏)过程中会产生的严重褐变和沉淀问题。大蚝、大虾是高蛋白低脂肪的海产品，氨基酸组成完善，其中必需氨基酸完全程度和质量比例优于牛乳和人乳。大蚝、大虾提取液与海龙提取液配伍具有补肾壮阳、增强机体免疫力、保护肝脏、降血糖、降血脂、抗疲劳、降血压等生理功能。本发明可制成具有独特风味、色泽淡黄、风味怡人，具有多种生理保健功能的系列食品。

Description

一种海洋生物营养液及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种海洋生物保健食品及其制备方法，具体说是以大蚝、大虾、海龙为原料制备的海洋生物营养液及其制备方法。

背景技术

大蚝，又称近江牡蛎，是一种常见的海洋贝类动物，属软体动物门，瓣鳃纲(Lamellibranchia)，牡蛎科(Ostreidae)，牡蛎属。大蚝肉质鲜嫩，是一种营养价值极高的滋补食品，有“海底牛奶”之称。研究表明，牡蛎肉中含有丰富的糖原、蛋白质、氨基酸、人体必需的微量元素、维生素和较多的具有重要生理活性的不饱和脂肪酸。《本草纲目》记载：“生蚝，治虚损，壮阳，解毒，补男女气血，令肌肤细嫩，防衰劳”。生蚝牡蛎提取物可以治疗多种疾病，主要成分糖原能迅速补充恢复体力，并可以提高肌体免疫力；牛黄酸它能够很好的降血脂、降血压；锌含量是天然食品中最高的，能有效的增强男性性功能；所含的多种维生素与矿物质特别是硒可以调节神经、稳定情绪；丰富的钙质，能使皮肤滑润；钾可治疗皮肤干燥及粉刺。

大虾，为甲壳亚门(Crustacea)十足目(Decapoda)游泳亚目(Natantia)动物。大虾的补益作用和药用价值均较高。据分析，每百克鲜虾肉中含水分77克，蛋白质20.6克，脂肪0.7克，钙35毫克，磷150毫克，铁0.1毫克，维生素A360国际单位，还含有维生素B1、维生素B2、维生素E、尼克酸等。祖国医学认为，虾味甘、咸，性温，有壮阳益肾、补精、通乳之功，凡是久病体虚、气短乏力、饮食不思、面黄羸瘦的人，都可将它作为滋补和疗效食品。

海龙(Syngnathus)，为海龙科动物，海龙为一常用中药材，甘、咸、温。归肝、肾经，具有温肾益精、活血散瘀、消肿止痛等疗效。海龙中含有丰富的蛋白质、肽类、氨基酸、脂肪、表皮分泌粘多糖、4-胆甾烯酮、胆甾醇、N-苯基-β-萘胺、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸等。

大蚝、大虾、海龙因其含有特殊氨基酸和多种微量元素，不仅具有很高的食用价值，而且具有独特的药用保健功能。

近10年来，纵观国内外上市产品，国内亦有一些大蚝制品面世，如：海王集团生产的“海王金牡蛎”、新疆世丹药业有限公司研制的阿胶牡蛎口服液、武汉源晨生物科技有限公司的牡蛎杞草片、广州市广聚生物科技有限公司的硒金牡蛎锌片、南宁翌真生物制品有限公司生产的牡蛎生态片等，但都是以单一牡蛎提取物为原料，也未公开说明有效清除海洋生物制品所特有腥味及如何有效预防蛋白食品久置褐变、沉淀等问题。此外欧美、日本等发达国家也在研究开发牡蛎等海洋生物及其功能活性成分，但更多的还处于实验室阶段，尚未充分发挥社会经济价值。针对于海产品上述问题，传统方法是利用酸、碱对生物蛋白进行水解，由于其安全性差、产物功效丧失显著、营养成分损失等问题，现已逐渐被生物蛋白酶技术所取代。海产品经过酶解反应，生成目标功能活性多肽或氨基酸的同时，部分水解产物为分子末端含疏水性氨基酸的多肽或苦味肽，导致水解产物呈现苦味或腥味，影响了产品的风味。开发出由多种海洋生物组合成的产品，并能有效清除海洋生物制品特有腥味，有效预防久置褐变、沉淀等问题，必将受到市场青睐，也将促进海洋生物制品的开发向良性发展。

目前，未曾有对大蚝、大虾、海龙提取物联合应用的***研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以大蚝、大虾、海龙为原料制备的海洋生物营养液及其制备方法。

一种海洋生物营养液的制备方法，包括如下步骤：

1)取新鲜大蚝软体、大虾肉体，清洗，加入纯净水，匀浆；

2)将步骤1)得到的匀浆液采用木瓜蛋白酶酶解；

3)将步骤2)得到的酶解液进行酶灭活，加入酵母发酵；

4)将步骤3)得到的发酵液通过活性炭脱色，过滤，收集滤液；

5)向步骤4)得到滤液中添加褐变抑制剂和复合稳定剂，混匀，离心得到大蚝、大虾提取液；

6)取干制后的海龙，粉碎，混合均匀置于渗漉筒内，向筒内加入食用乙醇，静置后渗漉，收集渗漉液，过滤，滤液回收乙醇，脱除乙醇后的渗漉液浓缩、静置沉淀、过滤得到海龙渗滤液Ⅰ；

7)加纯净水入步骤6)含药渣的渗漉筒，静置后渗漉，收集得到渗漉液Ⅱ；

8)对步骤7)得到的药渣采用木瓜蛋白酶酶解，酶解结束后，酶灭活，过滤，得到渗漉液Ⅲ；

9)合并海龙渗滤液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，浓缩，加入蒸馏水低温沉淀，取上清液过滤后得到海龙提取液；

10)将步骤5)得到的大蚝、大虾提取液和步骤9)得到的海龙提取液混合，灭菌得到；

所述褐变抑制剂为竹叶黄酮0.03-0.08％(w/v)、中性植酸钠0.03-0.08％(w/v)；

所述复合稳定剂为黄原胶0.15-0.25％(w/v)、果胶0.25-0.35％(w/v)、CMC(羧甲基纤维素)0.10-0.20％(w/v)。

本发明所述的大蚝、大虾、海龙优选产自北部湾。

所述的木瓜蛋白酶酶解优选酶解温度40℃、酶解时间2h、pH7、酶添加量0.4％(w/v)。

步骤1)中所述的大蚝软体是指大蚝去壳后得到的肉质部分，大虾肉体是指大虾去除虾头、虾脚、外皮得到的肉质部分；

步骤1)中所述的大蚝软体、大虾肉体优选按照1：0.5-1的重量比混合，加入的纯净水优选原料重量的2-3倍。

步骤3)中所述的发酵，优选发酵温度25℃、发酵时间60min、酵母添加量1.0％(w/v)。

步骤4)中所述的活性炭脱色，优选处理温度35℃、处理时间50min、添加量1.5％(w/v)。

步骤5)中所述的离心优选3000rpm、15min。

步骤6)所述的渗漉优选95％(v/v)的食用乙醇，静置为16-30h，优选24h，当乙醇流量为每公斤药料每分钟3-7毫升时，收集到重量为药料总重量2.5-4倍的渗漉液后停止渗漉。

步骤7)所述的静置为1-3h，优选2h，当收集到重量为药料总重两倍的渗漉液Ⅱ后停止渗漉。

步骤9)所述的浓缩优选在常压下控制温度为100℃进行浓缩，浓缩至重量为药料总重量的1/4时再加三倍量蒸馏水，在4℃以下冷房中冷却沉淀24小时。

步骤10)所述的大蚝、大虾提取液和海龙提取液优选按照1：0.25-1的重量比混合。

本发明还涉及采用上述制备方法得到的海洋生物营养液，为了获得适宜的口感，得到的海洋生物营养液还加入辅料(山梨酸、蜂蜜、蔗糖等)进行调配，以调配出适合食用的稠度、味道等，也可以和药用赋形剂或食品添加剂混合，制备成口服剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、冲剂等任何一种剂型。

和现有技术相比，本发明的优点在于：

1、本发明首次将新鲜大蚝和大虾混合进行活性提取，并能有效清除大蚝、大虾特有腥味，有效预防久置褐变、沉淀，延长保质期。

2、海龙中的磷脂类成分脂溶性高，用高浓度的食用乙醇(95％)才能提出，而蛋白类成分具有水溶性，水提取得率较高。本发明对海龙用水、醇两种溶剂先后进行提取，提取后的海龙药渣恰好可以作为一种很好的鱼蛋白水解底物，对海龙药渣进行酶解，可获取水解氨基酸及多肽，对名贵药材海龙综合利用，提高了有效成分的得率。将大蚝和大虾活性组合物与海龙提取物配伍研究，获得具有补肾壮阳、增强免疫力、护肝、活血、降血压调血脂功效的海洋生物营养液。

3、本发明提供了一种联合脱腥，防止沉淀的处理方法：采用木瓜蛋白酶解和酵母发酵法，对大蚝、大虾酶解液进行脱腥处理；然后采用活性炭进行进一步脱色，可以有效脱除海产品腥味，改善酶解液色泽；添加褐变抑制剂，优化色泽；添加复合稳定剂，解决了其在酶解、杀菌和贮藏过程中产生的沉淀问题。

具体实施方式

下面以实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于这些实施例。

实施例1

一种海洋生物营养液的制备方法，包括如下步骤：

1)取新鲜北部湾大蚝软体100g、北部湾大虾肉体50g，清洗，加入纯净水300mL，组织匀浆机充分匀浆；

2)将步骤1)得到的匀浆液采用木瓜蛋白酶酶解，酶解温度40℃、酶解时间2h、pH7、酶添加量0.4％(w/v)；

3)将步骤2)得到的酶解液，70℃下加热20分钟进行酶灭活，加入酵母发酵，发酵温度25℃、发酵时间60min、酵母添加量1.0％(w/v)；

4)将步骤3)得到的发酵液通过活性炭脱色，处理温度35℃、处理时间50min、添加量1.5％(w/v)，过滤，收集滤液；

5)向步骤4)得到滤液中添加褐变抑制剂和复合稳定剂，混匀，离心3000rpmX15min，得到大蚝、大虾提取液，褐变抑制剂为竹叶黄酮0.03％(w/v)、中性植酸钠0.08％(w/v)，复合稳定剂为黄原胶0.15％(w/v)、果胶0.35％(w/v)、CMC 0.10％(w/v)；

6)取干制后的北部湾海龙，粉碎，混合均匀置于渗漉筒内，向筒内加入95％(v/v)食用乙醇，静置16h，渗漉，当乙醇流量为每公斤药料每分钟3-7毫升时，收集到重量为药料总重量4倍的渗漉液后停止渗漉，收集渗漉液，过滤，滤液回收乙醇，脱除乙醇后的渗漉液浓缩、静置沉淀30h、过滤得到海龙渗滤液Ⅰ；

7)加纯净水入步骤6)含药渣的渗漉筒，静置1h，渗漉，当收集到重量为药料总重两倍的渗漉液Ⅱ后停止渗漉，收集得到渗漉液Ⅱ；

8)对步骤7)得到的药渣采用木瓜蛋白酶酶解，酶解温度40℃、酶解时间2h、pH7、酶添加量0.4％(w/v)，酶解结束后，70℃下加热20分钟进行酶灭活，过滤，得到渗漉液Ⅲ；

9)合并海龙渗滤液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，置入夹层锅内，常压下煮沸后用文火控制温度为100℃进行浓缩，浓缩至重量为药料总重量的1/4时再加三倍量蒸馏水，在4℃冷房中冷却沉淀24小时后，取上层清液用抽滤机过滤澄清，即制成海龙提取液；

10)将步骤5)得到的大蚝、大虾提取液和步骤9)得到的海龙提取液按照1：1的重量比混合，加入1％蔗糖(w/w)，加入1％柠檬酸(w/w)，拌匀，灭菌得到。

实施例2

一种海洋生物营养液的制备方法，包括如下步骤：

1)取新鲜北部湾大蚝软体100g、北部湾大虾肉体100g，清洗，加入纯净水600mL，组织匀浆机充分匀浆；

2)将步骤1)得到的匀浆液采用木瓜蛋白酶酶解，酶解温度40℃、酶解时间2h、pH7、酶添加量0.4％(w/v)，；

5)向步骤4)得到滤液中添加褐变抑制剂和复合稳定剂，混匀，离心3000rpmX15min，得到大蚝、大虾提取液，褐变抑制剂为竹叶黄酮0.08％(w/v)、中性植酸钠0.03％(w/v)，复合稳定剂为黄原胶0.25％(w/v)、果胶0.25％(w/v)、CMC 0.20％(w/v)；

6)取干制后的北部湾海龙，粉碎，混合均匀置于渗漉筒内，向筒内加入95％(v/v)食用乙醇，静置30h，渗漉，当乙醇流量为每公斤药料每分钟3-7毫升时，收集到重量为药料总重量2.5倍的渗漉液后停止渗漉，收集渗漉液，过滤，滤液回收乙醇，脱除乙醇后的渗漉液浓缩、静置沉淀16h、过滤得到海龙渗滤液Ⅰ；

7)加纯净水入步骤6)含药渣的渗漉筒，静置3h，渗漉，当收集到重量为药料总重两倍的渗漉液Ⅱ后停止渗漉，收集得到渗漉液Ⅱ；

10)将步骤5)得到的大蚝、大虾提取液和步骤9)得到的海龙提取液按照1：0.5的重量比混合，称取25％(w/w)白糖，煮成85％的单糖浆，加入15％(w/w)配方量蜂蜜混匀后用抽滤机过滤澄清,再将此糖浆与合成液搅拌均匀，最后加入占药料总重量1.2‰的山梨酸，用蒸馏水将药液比重调至1.29，用文火煮沸15分钟即完成产品的制作。经检验合格后分装、封口、灭菌、贴标签、包装、入库。

实施例3

一种海洋生物营养液的制备方法，包括如下步骤：

1)取新鲜北部湾大蚝软体100g、北部湾大虾肉体50g，清洗，加入纯净水400mL，组织匀浆机充分匀浆；

5)向步骤4)得到滤液中添加褐变抑制剂和复合稳定剂，混匀，离心3000rpmX15min，得到大蚝、大虾提取液，褐变抑制剂为竹叶黄酮0.06％(w/v)、中性植酸钠0.05％(w/v)，复合稳定剂为黄原胶0.20％(w/v)、果胶0.30％(w/v)、CMC 0.15％(w/v)；

6)取干制后的北部湾海龙，粉碎，混合均匀置于渗漉筒内，向筒内加入95％(v/v)食用乙醇，静置24h，渗漉，当乙醇流量为每公斤药料每分钟3-7毫升时，收集到重量为药料总重量3.0倍的渗漉液后停止渗漉，收集渗漉液，过滤，滤液回收乙醇，脱除乙醇后的渗漉液浓缩、静置沉淀24h、过滤得到海龙渗滤液Ⅰ；

7)加纯净水入步骤6)含药渣的渗漉筒，静置2h，渗漉，当收集到重量为药料总重两倍的渗漉液Ⅱ后停止渗漉，收集得到渗漉液Ⅱ；

10)将步骤5)得到的大蚝、大虾提取液和步骤9)得到的海龙提取液按照1：0.25的重量比混合，灭菌得到。

实验例：体内药效实验(补肾壮阳、增强免疫力、护肝、活血、降脂、降压)

药效实验一：对Wistar大鼠补肾壮阳的影响

1、试验药品

以实施例3制成的海洋生物营养液。

2、动物

Wistar大鼠，SPF级，雄性，体重200-250g。

3、方法：选体重在200-220g的Wistar雄性大鼠40只，随机分为5组，每组8只，即正常组、肾阳虚模型组、海洋生物营养液高、中、低剂量组，除了正常组外，其它4组造去势模型，在5％的水合氯醛(0.056ml·kg^-1)麻醉下行双侧睾丸切除术，术后肌肉注射青霉素4万U，连续注射3d以抗感染。高、中、低剂量分别按照海洋生物营养液(10.0、5.0、1.0g·kg^-1)灌胃，正常组、肾阳虚模型组仅灌服同体积的蒸馏水(0.1ml·kg^-1)。

3.1、***潜伏期的测定

于最后1次给药后1h，将电刺激仪的刺激电极置于大鼠***部位(一电极放于尿道外口，另一电极置于***根部)，用棉签蘸生理盐水湿润大鼠***根部，以增强其导电性。给予局部电刺激，电压6V，频率20Hz，波宽5ms，以秒表记录从刺激开始至******时间(***潜伏期)。

3.2、血清睾酮水平的测定

大鼠称质量后，腹腔注射5％水合氯醛，0.56ml·kg^-1，麻醉大鼠，断尾取血1.5ml左右，待血液凝固后2000rap·min^-1，离心15min，分离血清，-20℃低温保存备用。使用倍克曼公司生产的全自动化学发光免疫分析仪(DXI-800)及其配套试剂，在试剂定标周期和质控范围内用全自动免疫分析仪，按照仪器操作程序检测大鼠血清睾酮水平。

4、数据处理

实验数据以(X±s)表示，数据统计用SPSS11.0软件进行，组间对照采用one wayanova进行。

注：**与正常组相比P<0.01，*与模型组相比P<0.05

5、结果与讨论

去势大鼠模型动物实验结果表明，与正常对照组比,模型组大鼠******潜伏期显著延长说明造模成功。海洋生物营养液各剂量组与去势模型组比较能显著缩短去势大鼠******潜伏期,提高去势大鼠***对外部刺激的兴奋性,显著增加去势大鼠血清睾酮水平,且有一定的量效关系。

药效实验二：对小鼠免疫功能的影响

1、试验药品

以实施例3制成的海洋生物营养液。

2、动物

昆明种小鼠，雄性，体重22-25克。

3、方法

药物设三个组合物剂量组，另设空白对照组和海洋生物活性组合液组、海龙渗漉液组、海洋生物营养液组。灌胃给药，容量均为0.2ml/10g体重。每日一次，连续14天。于末次给药后1小时后，动物尾静脉注射0.1印度墨水，1分钟和5分钟用毛细玻璃管经眼后静脉丛取血，每次0.02毫升。将血液加入盛有2毫升0.1％碳酸钠溶液的试管内，摇匀，在分光光度计680nm波长处记录光密度(OD值)。按公式K＝(OD1-OD5)/(T5-T1)计算K值，来表示小鼠的吞噬率。

4、数据处理

与空白对照组比较*，P＜0.05；**，P＜0.01

5、结果与讨论

小鼠碳廓清实验结果见下表。从表中可见，组合物可增加吞噬率，增强单核细胞的吞噬功能，增强非特异免疫功能。

药效实验三：对DEN诱导SD大鼠肝癌的影响

1、试验药品

以实施例3制成的海洋生物营养液。

2、动物

SD大鼠，雄性，体重200-250g。

3、方法

雄性SD大鼠90只随机分为二乙基亚硝胺(diethylinitrosamine，DEN)组，正常对照组，海洋生物营养液组。DEN组和海洋生物营养液组给予0.2％DEN溶液灌胃，按体重10mg·kg^-1给药，每周5次，至14周，海洋生物营养液组同时灌胃(ig)给予海洋生物营养液溶剂，每日1次，直至14周。空白对照组和DEN模型组分别给予等容量的生理盐水。在实验的第16周结束时麻醉后处死动物。动物采用3％水合氯醛麻醉后剖开腹腔，剪取整个肝脏常规10％甲醛溶液固定，石蜡包埋，4-6μm连续切片，VG染色，免疫组化染色，光镜下观察对DEN诱导的大鼠肝癌的发生率和多样性的影响。

4、数据处理

实验数据以表示，数据统计用SPSS11.0软件进行，组间对照采用one wayanova进行。

注：与正常对照组比较，P**<0.01，与DEN组比较，P*<0.05。

5、结果与讨论

16周时，DEN诱导的大鼠肝细胞癌的发生率为100％，多样性为(3.62±2.13)。护肝片降低了大鼠肝细胞癌的发生率(P＜0.05)和多样性(P＜0.05)。

药效实验四：对降血压降血脂的影响

1、试验药品

以实施例3制成的海洋生物营养液。

2、动物

原发性高血压大鼠(spontaneously hyperten-sive rat，SHR)，30只，19周龄，雄性，(350±20)g。

方法

将30只SHR随机分为5组，每组6只，分别为海洋生物营养液低、中、高剂量组(1，5，10g·kg^-1)、卡托普利组(20mg·kg^-1)和阴性对照组。各组分别灌胃给予相应药物，阴性对照组灌胃给予生理盐水。长期给药实验：每天定时给药，持续4周，每隔1周测量大鼠血压及心率，同时记录体重的变化。

4、数据处理

实验数据以均值±标准差表示,给药前后血压变化采用单因素t-检验方法,实验组间采用单因素方差分析进行比较,采用SPSS软件进行数据统计分析。

与阴性对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

5、结果与讨论

经过4周的长期给药实验，SHR血压的变化情况如表2所示。持续给予海洋生物营养液的各剂量组和卡托普利组的血压值与阴性对照组相比、与给药前相比，均有显著的下降趋势。且各剂量组在服用后第1、2、3、4周时测量的血压值间差异不显著，均保持在较低的血压值水平。这说明持续服用海洋生物营养液不仅可降低SHR的血压值，而且血压可保持在稳定水平。

Claims

1.一种海洋生物营养液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)取新鲜大蚝软体、大虾肉体，清洗，加入纯净水，匀浆；

2)将步骤1)得到的匀浆液采用木瓜蛋白酶酶解；

3)将步骤2)得到的酶解液进行酶灭活，加入酵母发酵；

4)将步骤3)得到的发酵液通过活性炭脱色，过滤，收集滤液；

所述褐变抑制剂为竹叶黄酮0.03-0.08％、中性植酸钠0.03-0.08％；

所述复合稳定剂为黄原胶0.15-0.25％、果胶0.25-0.35％、CMC0.10-0.20％。

2.根据权利要求1所述的一种海洋生物营养液的制备方法，其特征在于：所述的大蚝、大虾、海龙产自北部湾。

3.根据权利要求1所述的一种海洋生物营养液的制备方法，其特征在于：步骤1)中所述的大蚝软体、大虾肉体按照1：0.5-1的重量比混合，加入的纯净水为原料重量的2-3倍。

4.根据权利要求1所述的一种海洋生物营养液的制备方法，其特征在于：步骤10)所述的大蚝、大虾提取液和海龙提取液按照1：0.25-1的重量比混合。

5.权利要求1-4中任一项所述方法得到的海洋生物营养液。