CN104887713A - 一种生精补肾、提高性功能的牡蛎活性提取物制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种生精补肾、提高性功能的牡蛎活性提取物制备方法，具有生精强肾、改善和提高性功能。该组合物以牡蛎提取物为主要活性成分，配以淫羊藿、黄芪、党参、枸杞子、山茱萸、熟地黄、远志、泽泻、甘草、茯苓而成。采用特殊脱苦技术，木瓜蛋白酶解、活性炭联合酵母菌发酵脱腥，β-环糊精包埋联合海藻糖进行二次脱苦、硅藻土脱色、竹叶黄酮联合中性植酸钠再进行色泽优化，复合调味剂(葡萄糖+低聚果糖+木糖醇)优化口感，工艺先进，配方科学合理，营养成分完善，腥味较小，风味天然，具有生精强肾、抗疲劳、改善性功能、增强机体免疫力，可用于辅助性治疗肾阳虚或肾阴虚引起的阳萎、遗精、早泄等症。

Description

一种生精补肾、提高性功能的牡蛎活性提取物制备方法

技术领域

本发明涉及一种海洋生物保健食品的制备方法，具体说是一种生精补肾、提高性功能的牡蛎活性提取物制备方法。

背景技术

牡蛎(oyster)，俗称大蚝，牡蛎肉味鲜美，营养丰富，有“海中牛奶”之称，是我国首批列为药食同源的保健疗效食品之一，含有丰富的蛋白质、维生素、微量元素、以及复合磷脂、牛磺酸、磷酸肌醇、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)等活性成分，其所含的必需氨基酸完全程度和质量比例优于牛乳和人乳，《本草纲目》记载：牡蛎肉“多食之，补肾壮阳，并能治虚，解丹毒”。《汤液本草》谓：“牡蛎，为软坚之剂，本肾经血分之药也”，对男性有生精强肾作用，可辅助性治疗肾阳虚或肾阴虚以及因***过少而引起的男性***等症。

目前大部分牡蛎主要是直接食用，功能性牡蛎产品还比较少，上市的产品如：海王集团的“海王金牡蛎”用于保护胃粘膜，保护肝细胞、广东珠海海洋滋补食品公司的牡蛎全营养片(EXT)用于软坚散结、化痰润燥，“金牡蛎”用于辅助治疗肝炎，大多关注了牡蛎的护肝、提高免疫力、降血脂等生理功能开发研究，而牡蛎用于生精强壮，改善男性性能高的独特功能报道不多，但由于现代社会生活节凑加快，压力大，导致众多人群出现不同程度的性功能障碍，特别是中年男性出现的腰膝无力、阳萎、遗精、早泄等现象，日趋普遍，市面上所谓补肾***物品种不多，疗效好的更少，许多还需与化药联用，大多出现了副作用，如脸色潮红，血管扩张，头昏脑胀等，甚至还会加重性功能障碍。

中医认为肾为先天之本，肾阳虚则腰膝酸软，阳痿早泄，小便不利，原因虽然众多，其基本病机多因先天禀赋不足，后天房事过度，或少年***，长期精神紧张，思虑过度，情志郁结，为肝、肾、心、脾受损，气血阴阳亏虚，阴络失荣，或肝郁湿阻，经络失畅，导致宗筋不用而成。肾藏精，主生殖，开窍与二阴，脾之经筋皆聚与阴器，肾虚精亏，脾气虚弱，则应以补肾助阳，健脾益气为主。因此如何将药食同源的牡蛎与中药经合理配伍制成一种风味独特，氨基酸组成完善，营养价值高且腥味较小、易于被消费者所接受，应用于生精强肾、改善和提高男性性功能的牡蛎活性提取组合物具有诱人的发展前景。

发明内容

本发明旨在解决上述问题，提供一种工艺先进，腥味小，风味自然、营养成分完全，含量高牡蛎活性提取组合物制备方法，得到的牡蛎活性提取组合物具有填精固真功效，可用于辅助性治疗肾阳虚或肾阴虚引起的腰酸、阳萎、遗精、早泄，改善男性性功能，安全副作用小。

一种生精补肾、提高性功能的牡蛎活性提取物制备方法，包括如下步骤：

1)牡蛎脱苦处理：向新鲜牡蛎软体加入1倍重量0.5％Na₂CO₃溶液，浸泡，过滤，用2-3倍重量纯净水，反复冲洗过滤后的牡蛎软体部分；

2)匀浆、酶解：向步骤1)得到的牡蛎软体中加入2倍重量的纯净水，制成匀浆，调节pH6-7，加入木瓜蛋白酶酶解，酶解结束，灭酶；重复以上酶解步骤2-3次，合并酶解液，冷却，离心；

3)牡蛎酶解液脱腥：先用活性炭对步骤2)得到的酶解液进行第一次脱腥，再用酵母进行第二次脱腥；

4)牡蛎酶解液二次脱苦：对步骤3)得到的脱腥酶解液添加β-环糊精进行包埋脱苦；

5)脱色：加入硅藻土脱色，过滤；

6)浓缩：将步骤5)得到的过滤液浓缩；

7)调配：将步骤6)得到的浓缩液与中药提取液按比例混合，搅拌均匀，添加混合褐变抑制剂、复合调味剂，混合调配、过滤、分装、灭菌得成品；

所述的中药提取液通过以下步骤得到：将以下重量份的淫羊藿5-10份、黄芪3-8份、党参3-5份、山茱萸3-8份、熟地黄1-3份、枸杞子3-8份、远志5-8份、泽泻3-5份、甘草3-8份、茯苓1-5份，混合后，加入相当于中药原料重量8-10倍的纯净水回流提取，每次1小时，提取两次，合并提取液，微波辐射提取液10min，功率500W，马上进行低温贮藏6-8h，温度0-4℃，过滤，离心，得上清液；

所述的混合褐变抑制剂为竹叶黄酮0.08％(w/v)、中性植酸钠0.05％(w/v)、黄原胶0.2％(w/v)、果胶0.2％(w/v)；

所述的复合调味剂是将葡萄糖：低聚果糖：木糖醇按重量比计为2:3:1混合得到，添加量为2-5％(w/v)。

本发明步骤1)所述的浸泡，优选15-20min。

步骤2)所述的酶解，优选按重量加入木瓜蛋白酶的量为800-1000U/g，酶解温度50℃，酶解时间4h，加热至90-100℃，灭酶10min，离心优选3500r/min、10min。

步骤3)所述的脱腥，优选活性炭添加量为2.0％(w/v)，温度50℃，反应时间30min；酵母脱腥，酵母粉添加量1.5％(w/v)，温度30℃，发酵时间20min。

步骤4)所述的二次脱苦，优选添加β-环糊精3％(w/v)，室温下搅拌15min，充分混合。

步骤5)所述的硅藻土脱色，优选硅藻土添加量3％(w/v)，控制温度70℃，处理1-2h。

步骤6)所述的浓缩优选浓缩至水分约为20％，产品呈淡黄色膏状。

步骤7)所述的浓缩液与中药提取液按比例混合优选按照15-20:80-85的重量比混合。

本发明还涉及采用上述制备方法得到的牡蛎活性提取组合物。本发明以牡蛎为主要原料，采用现代生物酶解技术以及脱苦脱色技术，克服了海产品所特有的腥苦味，久置褐变等问题，再辅以淫羊藿、黄芪、党参、枸杞子、山茱萸、熟地黄、远志、泽泻、甘草、茯苓等中药，再添加了复合型调味剂进行调配，制成营养丰富、颜色天然、口感风味怡人，可用于男性生精强壮、改善和提高性功能，安全有效，无副作用。

为了获得适宜的口感，得到的牡蛎活性提取组合物还加入辅料(山梨酸、蜂蜜、蔗糖、香精等)进行调配，以调配出适合食用的稠度、味道等，也可以和药用赋形剂或食品添加剂混合，制备成口服剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、冲剂等任何一种剂型。

和现有技术相比，本发明的优点在于：

1、本发明将新鲜牡蛎软体添加Na₂CO₃溶液进行浸泡，既可以保存内脏完整，又可将牡蛎的苦味去除，保留鲜味，加水匀浆，加木瓜蛋白酶将牡蛎中的蛋白质水解成小肽，提高了生物活性肽含量，减少了原料损失。

2、本发明采用了活性炭对腥臭物质的吸附作用，其次利用酵母与酶相结合，将异味物质(醛、酮等大分子)作为底物转化为无苦、无腥物质；此外酵母还与部分腥味物质结合成大分子物质聚集除去，且酵母的添加量对提取物的口感有显著影响，本发明还对酵母添加量进行了优化，得到最佳的酵母发酵工艺，从而达到脱腥的目的。

3、由于牡蛎水解过程会产生疏水性苦味肽，利用β-环糊精结构中存在一个立体疏水空腔，依据分子大小的匹配，以及范德华力、疏水作用力与苦味肽形成包合物，减少苦味肽的数量来缓解苦味，进行二次脱苦，与复合调味剂协同，口感更佳。

4、本发明中药组方中以牡蛎为君药，补肾助阳、补精髓、收敛固涩、益气生津，以淫羊藿、黄芪、党参、枸杞子为臣药，补脾益气，山茱萸、熟地黄、远志为佐药，阴阳并举，气血双补，共达补肾助阳，泽泻、甘草、茯苓为使药，协同共奏，达到阴阳相合，补而不燥，益肾固精、潜阳补阴的功效。

5、本发明采用微波辐射和低温贮藏中药提取液，可以有效减少中药提取物的苦涩味，再配合复合调味剂，有效掩盖中药提取液的苦涩味，风味自然；针对水制品在加工(酶解、杀菌和贮藏)过程中会产生严重的褐变，影响产品外观并导致品质下降的问题，采用竹叶黄酮联合中性植酸钠抑制褐变。

具体实施方式

下面以实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于这些实施例。

实施例1

一种生精补肾、提高性功能的牡蛎活性提取物制备方法，包括如下步骤：

1)牡蛎脱苦处理：将新鲜牡蛎放入1倍重量0.5％Na₂CO₃溶液，浸泡15min，过滤，去除Na₂CO₃溶液，加入3倍重量纯净水，反复冲洗过滤后的牡蛎软体部分；

2)匀浆、酶解：向步骤1)得到的牡蛎软体中加入2倍重量的纯净水，用组织捣碎机捣成匀浆，调节pH6，加入木瓜蛋白酶酶解，按重量加入木瓜蛋白酶800U/g，酶解温度50℃，酶解时间4h，加热至90℃，灭酶活10min；重复以上酶解步骤2次，合并酶解液，冷却，离心，3500r/min、10min；

3)牡蛎酶解液脱腥：先用活性炭对步骤2)得到的酶解液进行第一次脱腥，活性炭添加量为2.0％，温度50℃，反应时间30min；再用酵母进行第二次脱腥，酵母添加量1.5％，温度30℃，发酵时间20min；

4)牡蛎酶解液二次脱苦：对步骤3)得到的脱腥酶解液添加3％β-环糊精进行包埋脱苦，室温下搅拌15min，充分混合；

5)脱色：加入3％硅藻土脱色，控制温度70℃，脱色处理1h，过滤；

6)浓缩：将步骤5)得到的过滤液采用真空旋转蒸发进行浓缩，浓缩至至水分约为20％，产品呈淡黄色膏状；

7)调配：中药提取液通过以下步骤得到：将以下重量份的淫羊藿5份、黄芪8份、党参3份、山茱萸8份、熟地黄1份、枸杞子8份、远志5份、泽泻5份、甘草3份、茯苓5份，混合后，加入相当于中药原料重量8-10倍的纯净水回流提取，每次1小时，提取两次，合并提取液，微波辐射提取液10min，功率500W，马上进行低温贮藏6-8h，温度0-4℃，过滤，离心，3500r/min、10min，得上清液；

将步骤6)得到的浓缩液与中药提取液按15:85混合，搅拌均匀，添加竹叶黄酮0.08％、中性植酸钠0.05％、黄原胶0.2％、果胶0.2％组成的混合褐变抑制剂，再添加2％由葡萄糖：低聚果糖：木糖醇按重量比计为2:3:1混合得到复合调味剂，混合调配、过滤、分装、灭菌得成品。

实施例2

一种生精补肾、提高性功能的牡蛎活性提取物制备方法，包括如下步骤：

1)牡蛎脱苦处理：将新鲜牡蛎放入1倍重量0.5％Na₂CO₃溶液，浸泡15min，过滤，去除Na₂CO₃溶液，加入2倍重量纯净水，反复冲洗过滤后的牡蛎软体部分；

2)匀浆、酶解：向步骤1)得到的牡蛎软体中加入2倍重量的纯净水，用组织捣碎机捣成匀浆，调节pH7，加入木瓜蛋白酶酶解，按重量加入木瓜蛋白酶1000U/g，酶解温度50℃，酶解时间4h，加热至100℃，灭酶活10min；重复以上酶解步骤3次，合并酶解液，冷却，离心，3500r/min、10min；

3)牡蛎酶解液脱腥：先用活性炭对步骤2)得到的酶解液进行第一次脱腥，活性炭添加量为2.0％，温度50℃，反应时间30min；再用酵母进行第二次脱腥，酵母添加量1.5％，温度30℃，发酵时间20min；

4)牡蛎酶解液二次脱苦：对步骤3)得到的脱腥酶解液添加3％β-环糊精进行包埋脱苦，室温下搅拌15min，充分混合；

5)脱色：加入3％硅藻土脱色，控制温度70℃，脱色处理2h，过滤；

6)浓缩：将步骤5)得到的过滤液采用真空旋转蒸发进行浓缩，浓缩至至水分约为20％，产品呈淡黄色膏状；

7)调配：中药提取液通过以下步骤得到：将以下重量份的淫羊藿10份、黄芪3份、党参5份、山茱萸3份、熟地黄3份、枸杞子3份、远志8份、泽泻3份、甘草8份、茯苓1份，混合后，加入相当于中药原料重量8-10倍的纯净水回流提取，每次1小时，提取两次，合并提取液，微波辐射提取液10min，功率500W，马上进行低温贮藏6-8h，温度0-4℃，过滤，离心，3500r/min、10min，得上清液；

将步骤6)得到的浓缩液与中药提取液按20:80混合，搅拌均匀，添加竹叶黄酮0.08％、中性植酸钠0.05％、黄原胶0.2％、果胶0.2％组成的混合褐变抑制剂，再添加5％由葡萄糖：低聚果糖：木糖醇按重量比计为2:3:1混合得到复合调味剂，混合调配、过滤、分装、灭菌得成品。

实验例：药效学实验

药效实验1：对Wistar大鼠生精强肾的影响

1、试验药品

实施例1制成的牡蛎活性提取组合物。

2、动物

Wistar大鼠，SPF级，雄性，体重200-250g。

3、实验方法：

选体重在200-220g的Wistar雄性大鼠40只，随机分为5组，每组8只，即正常组、肾阳虚模型组、海洋生物营养液高、中、低剂量组，除了正常组外，其它4组造去势模型，5％的水合氯醛(0.5mL/100g)麻醉下行双侧睾丸切除术，术后肌肉注射青霉素4万U，连续注射3d以抗感染。高、中、低剂量分别按照牡蛎活性提取组合物(10.0、5.0、1.0g·kg^-1)灌胃，正常组、肾阳虚模型组仅灌服同体积的蒸馏水(0.1mL/Kg)。

3.1血清睾酮水平的测定

大鼠称质量后，腹腔注射5％水合氯醛(0.5mL/100g)，麻醉大鼠，断尾取血1.5mL左右，待血液凝固后2000rap·min^-1，离心15min，分离血清，-20℃低温保存备用。使用倍克曼公司生产的全自动化学发光免疫分析仪(DXI-800)及其配套试剂，在试剂定标周期和质控范围内用全自动免疫分析仪，按照仪器操作程序检测大鼠血清睾酮水平。

3.2***潜伏期的测定

于最后1次给药后1h，将电刺激仪的刺激电极置于大鼠***部位(一电极放于尿道外口，另一电极置于***根部)，用棉签蘸生理盐水湿润大鼠***根部，以增强其导电性。给予局部电刺激，电压6V，频率20Hz，波宽5ms，以秒表记录从刺激开始至******时间(***潜伏期)。

4、数据处理

实验数据以(X±s)表示，数据统计用SPSS11.0软件进行，组间对照采用one way anova进行。

注：**与正常组相比P<0.01，*与模型组相比P<0.05

5、结果与讨论

去势大鼠模型动物实验结果表明，与正常对照组比，模型组大鼠******潜伏期显著延长说明造模成功，而牡蛎活性提取组合物各剂量组均能不同程度地提高去势大鼠血清睾酮水平，与去势模型组比较能显著缩短去势大鼠******潜伏期，提高去势大鼠***对外部刺激的兴奋性，表明本发明牡蛎活性提取组合物具有生精强肾功效。

药效实验2：对雄性大鼠性功能的影响

1、试验样品

实施例1制成的牡蛎活性提取组合物。

2、动物

Wistar大鼠，SPF级，雌雄各半，体重180-250g

3、方法

准备雌性Wistar大鼠(180±20g)：实验前48小时皮下注射苯甲酸***注射液20μg/只，4小时前再次经皮下注射***注射液500μg/只，以***。

另准备雄性Wistar大鼠48只，按编号随机分为5组，设为空白对照组(蒸馏水)，阳性对照组，本发明实施例1、2制成的牡蛎活性提取组合物高、中、低剂量组(10.0、5.0、1.0g·kg^-1)，灌胃给药，每日给药1次，连续给药10天。各组末次给药后24小时将雄性大鼠单独放入笼中5分钟，使其适应新环境，然后每笼放入一只雌鼠，开始记录下列指标：(1)、自雌鼠投入至雄鼠第一次扑捉雌鼠的时间为扑捉潜伏期；(2)自雌鼠投入至雄鼠发生第一次***的时间为交配潜伏期；(3)记录20分钟内雄鼠扑捉雌鼠次数及***次数；(4)计算20分钟内各组发生扑捉及***的动物数，扑捉率及***率。

4、结果与讨论

牡蛎活性提取组合物各剂量组均有一定程度的提高雄性大鼠性功能的作用，扑捉潜伏期和交配潜伏期明显缩短，扑捉次数和***次数增多。表明本发明牡蛎活性提取组合物可改善和提高性能高的作用。

药效试验3：毒性试验

1、试验样品

实施例1、2制成的牡蛎活性提取组合物。

2、动物

昆明种小鼠，雌雄各半，体重为18-22g。

3、实验方法

取本发明实施例1、2制备的牡蛎活性提取组合物对小鼠按1.0mL/100g体重，每天2次，观察连续给药15周，停药3周后小鼠毛发、行为、大小便、体重、脏器重量、血象、肝肾功能、血糖、血脂等指标。

4、结果与讨论

结果表明：本发明牡蛎活性提取组合物对小鼠的毛发、行为、大小便、体重、脏器重量、血象、肝肾功能、血糖、血脂等指标均无明显影响，脏器肉眼没有发现异样变化和组织学检查结果表明，连续给药15周，停药3周后，小鼠各脏器均无明显改变。表明本发明牡蛎活性提取组合物对小鼠长期用药后毒性小，停药后也没有异样反应，安全。

Claims (8)

1.一种生精补肾、提高性功能的牡蛎活性提取物制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)牡蛎脱苦处理：向新鲜牡蛎软体加入1倍重量0.5％Na₂CO₃溶液，浸泡，过滤，用2-3倍重量纯净水，反复冲洗过滤后的牡蛎软体部分；

2)匀浆、酶解：向步骤1)得到的牡蛎软体中加入2倍重量的纯净水，制成匀浆，调节pH6-7，加入木瓜蛋白酶酶解，酶解结束，灭酶；重复以上酶解步骤2-3次，合并酶解液，冷却，离心；

3)牡蛎酶解液脱腥：先用活性炭对步骤2)得到的酶解液进行第一次脱腥，再用酵母进行第二次脱腥；

4)牡蛎酶解液二次脱苦：对步骤3)得到的脱腥酶解液添加β-环糊精进行包埋脱苦；

5)脱色：加入硅藻土脱色，过滤；

6)浓缩：将步骤5)得到的过滤液浓缩；

7)调配：将步骤6)得到的浓缩液与中药提取液按比例混合，搅拌均匀，添加混合褐变抑制剂、复合调味剂，混合调配、过滤、分装、灭菌得成品；

所述的中药提取液通过以下步骤得到：将以下重量份的淫羊藿5-10份、黄芪3-8份、党参3-5份、山茱萸3-8份、熟地黄1-3份、枸杞子3-8份、远志5-8份、泽泻3-5份、甘草3-8份、茯苓1-5份，混合后，加入相当于中药原料重量8-10倍的纯净水回流提取，每次1小时，提取两次，合并提取液，微波辐射提取液10min，功率500W，马上进行低温贮藏6-8h，温度0-4℃，过滤，离心，得上清液；

所述的混合褐变抑制剂为竹叶黄酮0.08％、中性植酸钠0.05％、黄原胶0.2％、果胶0.2％；

所述的复合调味剂是将葡萄糖：低聚果糖：木糖醇按重量比计为2:3:1混合得到，添加量为2-5％。

2.根据权利要求1所述的一种生精补肾、提高性功能的牡蛎活性提取物制备方法，其特征在于：步骤2)所述的酶解，按重量加入木瓜蛋白酶的量为800-1000U/g，酶解温度50℃，酶解时间4h。

3.根据权利要求1所述的一种生精补肾、提高性功能的牡蛎活性提取物制备方法，其特征在于：步骤3)所述的脱腥，活性炭添加量为2.0％，温度50℃，反应时间30min；酵母脱腥，酵母粉添加量1.5％，温度30℃，发酵时间20min。

4.根据权利要求1所述的一种生精补肾、提高性功能的牡蛎活性提取物制备方法，其特征在于：步骤4)所述的二次脱苦，添加β-环糊精3％，室温下搅拌15min，充分混合。

5.根据权利要求1所述的一种生精补肾、提高性功能的牡蛎活性提取物制备方法，其特征在于：步骤5)所述的硅藻土脱色，硅藻土添加量3％，控制温度70℃，处理1-2h。

6.根据权利要求1所述的一种生精补肾、提高性功能的牡蛎活性提取物制备方法，其特征在于：步骤6)所述的浓缩，浓缩至至水分为20％，产品呈淡黄色膏状。

7.根据权利要求1所述的一种生精补肾、提高性功能的牡蛎活性提取物制备方法，其特征在于：步骤7)所述的浓缩液与中药提取液按比例混合，按照15-20:80-85的重量比混合。

8.权利要求1-7中任一项所述方法得到的牡蛎活性提取组合物。