CN104663731B

CN104663731B - 一种杀菌组合物及其应用

Info

Publication number: CN104663731B
Application number: CN201510064450.1A
Authority: CN
Inventors: 冉隆贤; 申红妙; 李正楠; 李会平; 郭金堂
Original assignee: Heibei Agricultural University
Current assignee: Heibei Agricultural University
Priority date: 2015-02-09
Filing date: 2015-02-09
Publication date: 2017-11-10
Anticipated expiration: 2035-02-09
Also published as: CN104663731A

Abstract

本发明提供了一种杀菌组合物，所述杀菌组合物含有荧光假单胞杆菌和粉红粘帚霉厚垣孢子，所述荧光假单胞杆菌和粉红粘帚霉厚垣孢子的质量比为1000:1～1:1000。本发明提供的杀菌组合物通过将荧光假单胞杆菌与粉红粘帚霉厚垣孢子的组合，在防治单轴霉引起的霜霉病害中显示出明显的协同作用，且降低了现有植物病原菌对化学药剂潜在抗药性风险；荧光假单胞杆菌与粉红粘帚霉厚垣孢子组合具有明显的协同作用，同时又减少了药剂用药量，更环保，从而使该组合物可以广泛应用于防治由单轴霉引起的霜霉病害。

Description

一种杀菌组合物及其应用

技术领域

本发明涉及微生物防治领域，具体地说，涉及一种杀菌组合物及其应用。

背景技术

植物病害一直严重地威胁着农业生产。人类防治植物病害可以追溯到几千年前，过去使用的多为植物源或无机化学农药。20世纪40年代初期，有机合成农药大量产生，有效地控制了病害，但抗药性、环境污染和人类健康受到威胁，即3R(Resistance,Residue,Resurgence)问题的出现引起了人们的广泛关注，于是生物防治的研究开发应用被提到了议事日程上来，并得到各国政府的重视。从植物病害防治的角度来讲，生物防治就是利用生物及其代谢产物控制病原体从而达到防治植物病害的方法。它的实质就是利用生物种间关系、种内关系，调节有害生物种群密度，即生物群防治生物群。植物病害生物防治主要有如下模式：真菌防治真菌病害、细菌防治真菌病害、细菌防治细菌病害、病毒噬菌体防治细菌病害、真菌防治线虫病害、细菌防治线虫病害和病毒弱毒株防治病毒病害等。

荧光假单胞杆菌，是根际促生细菌中研究较多的一种细菌，其拮抗病菌的机理涉及营养竞争、生态位排斥、产生抗生素、水解酶等，诱导植物产生***抗性，抑制病原菌孢子萌发、消解菌丝、阻隔病菌侵染等方式，减少植物病害的发生。

粉红粘帚霉，是一种真菌，能释放一种特殊的挥发物。这种真菌，它生活在植物细胞之间，以纤维素为底物，能排出一种强烈的气体，后被证实是一种气体抗生素，能杀死其他真菌。概括起来，具备以下优良性状，生防潜力巨大：①具有广泛的环境适应性，可利用各种简单或复杂的碳源和氮源，甚至还有转化和降解一些有害或持久存在的污染物的能力；②产生多样的拮抗作用(主要包括竞争作用、重寄生作用、产生抗生物质和溶菌酶类)；③具有广谱的寄生性。其生长周期内可以产生3种繁殖体，即菌丝体、厚垣孢子和分生孢子。目前生产上常用的粘帚霉菌剂多为活分生孢子和菌丝混合制剂。因为生物农药制剂要求具有一定的货架期，而影响菌剂保质期的主要因素是菌体类型。菌丝在自然条件下容易失水导致死亡，而其分生孢子虽然产孢量大，但存活期也较短；显然，分生孢子和菌丝这两种菌体类型都难以满足粘帚霉作为生物农药制剂的要求。厚垣孢子作为抵抗不良环境而休眠的生存结构，具有更容易大规模生产、存活时间长、容易贮藏、施用和商品化及货架寿命长等优点，能满足作为生物农药的要求，增殖比分生孢子更好，并且萌发率也更高。因此，本研究采用粘帚霉厚垣孢子进行复配对商品化生产具有重要的实践意义。

葡萄霜霉病是一种由卵菌纲单轴霉属霜霉菌引起的一种世界性卵菌病害。葡萄霜霉病在大多数葡萄种植品种上均有发生并影响葡萄生产和产量。由于该病害流行特点，在雨水较多的年份产量损失可高达100％。葡萄霜霉病在中国的绝大多数地区均有不同程度的发生。据调查，2010年中国葡萄霜霉病发病率在一些地区高达70％。目前葡萄霜霉病防治主要以化学药剂防治为主。常用药剂有甲霜灵、霜脲氰、嘧菌酯、氟吡菌胺等，病菌对这些药剂已经存在抗药性或者抗性风险较高。

因此，目前亟需稳定性好、药效明显且持效期长、并能够延缓病原物抗药性产生和发展的时间，以及更为环保的杀菌组合物。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种杀菌组合物及其应用。

为了实现本发明目的，本发明首先提供一种杀菌组合物，所述杀菌组合物含有荧光假单胞杆菌和粉红粘帚霉厚垣孢子，所述荧光假单胞杆菌和粉红粘帚霉厚垣孢子的质量比为1000:1～1:1000。

作为优选，所述荧光假单胞杆菌和粉红粘帚霉厚垣孢子的质量比为100:1～1:100。

更为优选，所述荧光假单胞杆菌和粉红粘帚霉厚垣孢子的质量比为30:1～1:30。

最为优选，所述荧光假单胞杆菌和粉红粘帚霉厚垣孢子的质量比为10:1～1:10。

进一步地，所述荧光假单胞杆菌中活孢子数为0.1亿/克～10000亿/克，优选为1亿/克～5000亿/克，最优选为2000亿/克。

进一步地，所述粉红粘帚霉厚垣孢子中活孢子数为0.1亿/克～10亿/克，优选为0.5亿/克～5亿/克，最优选为1亿/克。

本发明还提供了一种含有前述杀菌组合物的杀菌制剂。

作为优选，所述制剂为可湿性粉剂或水乳剂。

进一步地，所述制剂为向前述杀菌组合物中加入助剂并调节pH值到5～7后，配成可湿性粉剂和水乳剂。其中，所述粉红粘帚霉厚垣孢子和荧光假单胞杆菌均采用原粉。助剂可以选用湿润剂、分散剂、填料、粘结剂、崩解剂等中的一种或几种。

本发明还进一步提供了前述杀菌组合物和前述杀菌制剂在防治单轴霉引起的植物病害中的应用。

本发明的有益效果在于：

本发明提供的杀菌组合物通过将荧光假单胞杆菌与粉红粘帚霉厚垣孢子的组合，发现二者在防治单轴霉引起的霜霉病害中显示出明显的协同作用，且降低了现有植物病原菌对化学药剂潜在抗药性风险；荧光假单胞杆菌与粉红粘帚霉厚垣孢子组合具有明显的协同作用，同时又减少了药剂用药量，更环保，从而使该组合物可以广泛应用于防治由单轴霉引起的霜霉病害。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

本发明使用的助剂包括分散剂、乳化剂、崩解剂、抗冻剂、增稠剂、润湿剂等，其作用在于使杀菌组合物在制剂中稳定并发挥药效，其均为农药制剂中常用或允许使用的已知物质。

实施例1杀菌组合物及其对葡萄霜霉病的抑制作用

荧光假单胞杆菌(所采用的荧光假单胞杆菌中活孢子数为2000亿/克)和粉红粘帚霉厚垣孢子(所采用的粉红粘帚霉厚垣孢子中活孢子数为1亿/克)复配对葡萄霜霉病菌的室内毒力测定及配比筛选。

试验采用葡萄霜霉病菌(Plasmopara viticola)为测试对象。试验方法参考《中华人民共和国农业行业标准NY/T1156.3-2006》。

首先按照两药剂各组份质量比设置其系列配比10:1、5:1、1:1、1:5、1:10，稀释3000倍。试验靶标菌采自保定市满城县。采集刚形成淡黄色病斑的初期病叶，带回实验室用自来水冲洗，叶背向上置于有保湿滤纸的培养皿内，18℃保湿黑暗培养24h促使新鲜孢子囊产生。用毛笔刷洗孢子囊，并制成浓度约为2×10⁷个/mL孢子囊悬浮液。

葡萄供试品种“巨峰”，取新梢顶端第1～3展开叶为供试叶片。以叶盘漂浮法进行测定。

分别在直径9cm的无菌培养皿中加不同浓度药液20mL，对照加等量蒸馏水。用打孔器将葡萄叶片打成直径1.5cm的叶盘，每皿15片叶盘漂浮于不同浓度药液中，叶背向上，每处理重复3次。药剂处理24h后，每个叶盘用移液枪接种20μL孢子囊悬浮液。接种后置18±1℃，12h黑暗/光照条件下培养7d。7d后调查病情指数。

葡萄霜霉病病情指数分级标准：

0级：叶片无病斑

1级：病斑面积占整个叶片面积的5％以下；

3级：病斑面积占整个叶片面积的6-10％；

5级：病斑面积占整个叶片面积的11-25％；

7级：病斑面积占整个叶片面积的26-50％；

9级：病斑面积占整个叶片面积的50％以上。

利用DPSv6.55软件进行统计并对抑制率做邓肯Duncan分级显著差异性(p0.05)分析。具体测定结果见表1。

表1 荧光假单胞杆菌和粉红粘帚霉厚垣孢子组合对葡萄霜霉病的抑制作用

处理	发病率％	抑制率％	显著分析
				A:荧光假单胞杆菌	9.06	52.94	c
B:粉红粘帚霉厚垣孢子	7.55	60.78	b
				A:B＝10:1	3.02	84.31	ab
A:B＝5:1	1.62	91.58	a
				A:B＝1:1	1.54	92.00	a
A:B＝1:5	1.90	90.13	a
				A:B＝1:10	2.08	89.19	a
CK	19.25	—

测定结果表明：荧光假单胞杆菌(组份一)和粉红粘帚霉厚垣孢子(组份二)以质量比为10:1～1:10混用，对葡萄霜霉病菌均有较好的抑制效果，两者结合具有显著的增效作用。

实施例2 22％可湿性粉剂

实施例3 33％可湿性粉剂

实施例4 60％可湿性粉剂

实施例5 80％可湿性粉剂

实施例6 24％水乳剂

实施例7 26％水乳剂

实施例8 55％水乳剂

实验例1 药效试验1

将荧光假单胞杆菌(2000亿活孢子/克)和粉红粘帚霉厚垣孢子(1亿活孢子/克)1:1(质量比)的比例配成22％可湿性粉剂，喷雾，应用于防治葡萄霜霉病，单独将荧光假单胞杆菌和粉红粘帚霉厚垣孢子配成上述可湿性粉剂(实验室自行配制)作对比，发病前开始喷药，共用药3次，间隔期为7d。最后1次喷药后7d和15d分别调查各处理发病情况和防治效果。结果见表2。

表2 22％荧光假单胞杆菌·粉红粘帚霉厚垣孢子可湿性粉剂对葡萄霜霉病的防效

实验例2 药效试验2

将荧光假单胞杆菌(2000亿活孢子/克)和粉红粘帚霉厚垣孢子(1亿活孢子/克)30:3(质量比)的比例配成33％可湿性粉剂，喷雾，应用于防治葡萄霜霉病，单独将荧光假单胞杆菌和粉红粘帚霉厚垣孢子配成可湿性粉剂(实验室自行配制)作对比，发病前开始喷药共用药3次，间隔期为7d。最后1次喷药后7d和15d分别调查各处理发病情况和防治效果。结果见表3。

表3 33％荧光假单胞杆菌·粉红粘帚霉厚垣孢子可湿性粉剂对葡萄霜霉病的防效

实验例3 药效试验3

将荧光假单胞杆菌(2000亿活孢子/克)和粉红粘帚霉厚垣孢子10:70(1亿活孢子/克)(质量比)的比例配成80％可湿性粉剂，喷雾，应用于防治葡萄霜霉病，单独将荧光假单胞杆菌和粉红粘帚霉厚垣孢子配成可湿性粉剂(实验室自行配制)作对比，发病前开始喷药共用药3次，间隔期为7d。最后1次喷药后7d和15d分别调查各处理发病情况和防治效果。结果见表4。

表4 80％荧光假单胞杆菌·粉红粘帚霉厚垣孢子可湿性粉剂对葡萄霜霉病的防效

实验例4 药效试验4

将荧光假单胞杆菌(2000亿活孢子/克)和粉红粘帚霉厚垣孢子(1亿活孢子/克)1:1(质量比)的比例配成24％水乳剂，喷雾，应用于防治葡萄霜霉病，单独将荧光假单胞杆菌配成可湿性粉剂和粉红粘帚霉厚垣孢子配成水乳剂(实验室自行配制)作对比，发病前开始喷药共用药3次，间隔期为7d。最后1次喷药后7d和15d分别调查各处理发病情况和防治效果。结果见表5。

表5 24％荧光假单胞杆菌·粉红粘帚霉厚垣孢子水乳剂对葡萄霜霉病的防效

实验例5 药效试验5

将荧光假单胞杆菌(2000亿活孢子/克)和粉红粘帚霉厚垣孢子40:15(1亿活孢子/克)(质量比)的比例配成55％水乳剂，喷雾，应用于防治葡萄霜霉病，单独将荧光假单胞杆菌配成可湿性粉剂和粉红粘帚霉厚垣孢子配成水乳剂(实验室自行配制)作对比，发病前开始喷药共用药3次，间隔期为7d。最后1次喷药后7d和15d分别调查各处理发病情况和防治效果。结果见表6。

表6 55％荧光假单胞杆菌·粉红粘帚霉厚垣孢子水乳剂对葡萄霜霉病的防效

试验结果表明，荧光假单胞杆菌和粉红粘帚霉厚垣孢子组合物，明显提高了对葡萄霜霉病害的防治效果，药效持效期变长，对作物安全性好，是防治葡萄霜霉病的理想药剂。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims

1.一种杀菌组合物，其特征在于，所述杀菌组合物含有荧光假单胞杆菌和粉红粘帚霉厚垣孢子，所述荧光假单胞杆菌和粉红粘帚霉厚垣孢子的质量比为10:1～1:10。

2.根据权利要求1所述的杀菌组合物，其特征在于，所述荧光假单胞杆菌中活孢子数为0.1亿/克～10000亿/克。

3.根据权利要求2所述的杀菌组合物，其特征在于，所述荧光假单胞杆菌中活孢子数为1亿/克～5000亿/克。

4.根据权利要求3所述的杀菌组合物，其特征在于，所述荧光假单胞杆菌中活孢子数为2000亿/克。

5.根据权利要求1所述的杀菌组合物，其特征在于，所述粉红粘帚霉厚垣孢子中活孢子数为0.1亿/克～10亿/克。

6.根据权利要求5所述的杀菌组合物，其特征在于，所述粉红粘帚霉厚垣孢子中活孢子数为0.5亿/克～5亿/克。

7.根据权利要求6所述的杀菌组合物，其特征在于，所述粉红粘帚霉厚垣孢子中活孢子数为1亿/克。

8.一种杀菌制剂，其特征在于，含有权利要求1-7任一项所述的杀菌组合物。

9.根据权利要求8所述的杀菌制剂，其特征在于，所述制剂为可湿性粉剂或水乳剂。

10.根据权利要求8或9所述的杀菌制剂，其特征在于，所述制剂为向权利要求1-6任一项所述的杀菌组合物中加入助剂，并调节pH值为5～7，即得。

11.权利要求1-7任一项所述的杀菌组合物或权利要求8-10任一项所述的杀菌制剂在防治单轴霉引起的植物病害中的应用。