CN104531542A - 一种灰树花母种快速萌发培养基及其制作方法 - Google Patents

一种灰树花母种快速萌发培养基及其制作方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种灰树花母种快速萌发培养基，包括灰树花子实体、水、橡树叶、凝固剂制备而得，另还提供一种制作方法，包括：(1)取灰树花子实体和水，混合，调节pH在6.0-8.0之间，水浴后过滤，收集滤液得到基质溶液；(2)取橡树叶并粉碎得到辅料；(3)将辅料与基质溶液按质量体积比1:20-1:50混合得到混合物；(4)添加凝固剂并混合后，调节pH至6即得。综上所述，本发明提供一种如上述制作方法制作的灰树花母种快速萌发培养基。该培养基以天然原料经适当处理制成，专用于灰树花母种的萌发，实验证实，该培养基有利于灰树花母种的生长，也有利于保持灰树花菌丝体活力，不至于长期生长在化学试剂培养基中导致退化。

Description

一种灰树花母种快速萌发培养基及其制作方法
技术领域
本发明涉及食用菌栽培领域，具体涉及一种灰树花母种快速萌发培养基以及的灰树花母种快速萌发培养基的制作方法。
背景技术
灰树花，也称舞茸，是一种营养丰富、风味浓郁而又有保健价值的食用菌。灰树花中的一个多糖组分“Fraction-D”被证实具有抗肿瘤、调节免疫等多种生物活性，因而备受学术界关注。“灰树花胶囊”(麦特消)就是一种以“Fraction-D”多糖为主要成分的药物。基于灰树花的诱人产业开发前景，我国多地从政府到民间层面都作出了相应部署，例如2013年浙江省农业厅牵头对优良灰树花品种进行了品种审定；2014年福建省尤溪成立了我国首个灰树花工厂化栽培基地。
灰树花母种培养基的制作是灰树花生产中的基础环节，直接影响灰树花母种生长质量，也级联地影响了下游各阶段菌丝体和子实体的产量、长速等农艺性状。
现行的栽培生产技术中，灰树花母种培养基的制作一般采用综合马铃薯培养基、或者市售的含蛋白胨、酵母提取物等试剂的常规营养成分培养基。这些培养基虽然能基本满足灰树花母种的生长，但是灰树花母种在这些培养基上生长长速较缓慢，而且长期继代使用，会使灰树花菌丝体习惯于易得营养的环境而逐渐产生退化。
发明内容
针对以上不足，本发明提供一种有利于灰树花母种快速萌发的培养基。
本发明通过以下方案达到上述目的：
一种灰树花母种快速萌发培养基，由灰树花子实体、水、橡树叶、凝固剂制备而得。
优选的，一种灰树花母种快速萌发培养基，所述培养基pH为6，包括基质溶液、辅料和凝固剂，所述基质溶液由灰树花子实体和水制备而得，所述辅料由橡树叶粉碎而得，凝固剂优选为琼脂粉。
进一步优选的，一种灰树花母种快速萌发培养基，所述培养基pH为6，包括基质溶液、辅料和凝固剂，所述基质溶液由灰树花子实体和水混合并水浴后过滤而得，所述辅料由橡树叶粉碎而得，所述基质溶液与辅料混合后再添加凝固剂制备得到培养基，凝固剂优选为琼脂粉。
本发明还提供一种制作上述灰树花母种快速萌发培养基的方法，包括以下步骤：
(1)配制基质溶液：取灰树花子实体和水，混合，优选按照1:10的质量体积比混合，调节pH在6.0-8.0之间，优选为6.0、或6.8、或8.0，水浴后过滤，收集滤液得到基质溶液；
(2)配制辅料：取橡树叶并粉碎，作为辅料；
(3)混合：将辅料与基质溶液按照质量体积比1:20-1:50的比例混合得到混合物，优选为1:50，进一步优选为1:20；
(4)添加凝固剂并调节pH：添加凝固剂，优选琼脂粉，并混合后，调节pH至6，得到培养基。
在一个优选的实施例中，上述水浴采用80℃水浴2h。
优选的，在一种制作上述灰树花母种快速萌发培养基的方法中，pH的调节视情况采用1N盐酸溶液或1N氢氧化钠溶液进行pH调节，例如在步骤(1)的配制基质溶液中，灰树花子实体和水按照1:10的质量体积比混合后的pH值为6.8，可以采用1N盐酸溶液调节pH为6.0，也可以采用1N氢氧化钠溶液调节pH为8.0。
在一个优选的实施例中，上述配制辅料时，取橡树叶并粉碎后，过筛，例如过60目筛，作为辅料。
在一个优选的实施例中，上述添加琼脂粉的量按照琼脂粉与混合物质量体积比1.5:100的比例添加。
优选的，上述灰树花子实体为干燥灰树花子实体，上述橡树叶为干燥橡树落叶。
优选的，上述配制基质溶液的水为二纯水，所述二纯水为超纯水。
通过上述灰树花母种快速萌发培养基的制作方法制作得到培养基以后，将培养基灭菌后并倒平板即可使用，灭菌条件可选的采用121℃、0.1MPa大气压下灭菌20min。
综上所述，本发明提供一种如上述制作方法制作的灰树花母种快速萌发培养基。该培养基以天然原料经适当处理制成，专用于灰树花母种的萌发，实验证实，该培养基有利于灰树花母种的生长，也有利于保持灰树花菌丝体活力，不至于长期生长在化学试剂培养基中导致退化。该培养基来源天然，成分简单，效果突出，值得推广使用。
附图说明
图1为效果实施例1的各培养基中菌丝体萌发情况。
图2为效果实施例1的各培养基中菌丝体菌落外观。
图3为效果实施例2的各培养基中菌丝体萌发情况。
图4为效果实施例2的各培养基中菌丝体菌落外观。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
实施例1
一种制作上述灰树花母种快速萌发培养基的方法：
(1)配制基质溶液：取灰树花子实体和水，混合，调节pH在6.0-8.0之间，，水浴后过滤，收集滤液得到基质溶液；
(2)配制辅料：取橡树叶并粉碎，作为辅料；
(3)混合：将辅料与基质溶液按照质量体积比1:20-1:50的比例混合得到混合物；
(4)添加凝固剂并调节pH：添加培养基常用的凝固剂，并混合后，调节pH至6，得到培养基。
实施例2：
一种制作上述灰树花母种快速萌发培养基的方法：
(1)配制基质溶液：取干燥灰树花子实体和二纯水，按照1:10的质量体积比混合，采用1N盐酸溶液调节pH为6.0，80℃水浴2h，过滤，收集滤液得到基质溶液；
(2)配制辅料：取干燥橡树叶并粉碎，过60目筛，作为辅料；
(3)混合：将辅料与基质溶液按照质量体积比1:50的比例混合得到混合物；
(4)添加凝固剂琼脂粉并调节pH：按照琼脂粉与混合物质量体积比1.5:100的比例添加琼脂粉，并混合后，采用1N盐酸溶液调节pH至6，得到培养基。
实施例3
一种制作上述灰树花母种快速萌发培养基的方法：
(1)配制基质溶液：取干燥灰树花子实体和二纯水，按照1:10的质量体积比混合，测定pH为6.8，不需调节，80℃水浴2h，过滤，收集滤液得到基质溶液；
(2)配制辅料：取干燥橡树叶并粉碎，过60目筛，作为辅料；
(3)混合：将辅料与基质溶液按照质量体积比1:50的比例混合得到混合物；
(4)添加凝固剂琼脂粉并调节pH：按照琼脂粉与混合物质量体积比1.5:100的比例添加琼脂粉，并混合后，采用1N盐酸溶液调节pH至6，得到培养基。
实施例4
一种制作上述灰树花母种快速萌发培养基的方法：
(1)配制基质溶液：取干燥灰树花子实体和二纯水，按照1:10的质量体积比混合，采用1N氢氧化钠溶液调节pH为8.0，80℃水浴2h，过滤，收集滤液得到基质溶液；
(2)配制辅料：取干燥橡树叶并粉碎，过60目筛，作为辅料；
(3)混合：将辅料与基质溶液按照质量体积比1:50的比例混合得到混合物；
(4)添加凝固剂琼脂粉并调节pH：按照琼脂粉与混合物质量体积比1.5:100的比例添加琼脂粉，并混合后，采用1N盐酸溶液调节pH至6，得到培养基。
实施例5
一种制作上述灰树花母种快速萌发培养基的方法：
(1)配制基质溶液：取干燥灰树花子实体和二纯水，按照1:10的质量体积比混合，采用1N盐酸溶液调节pH为6.0，80℃水浴2h，过滤，收集滤液得到基质溶液；
(2)配制辅料：取干燥橡树叶并粉碎，过60目筛，作为辅料；
(3)混合：将辅料与基质溶液按照质量体积比1:20的比例混合得到混合物；
(4)添加凝固剂琼脂粉并调节pH：按照琼脂粉与混合物质量体积比1.5:100的比例添加琼脂粉，并混合后，采用1N盐酸溶液调节pH至6，得到培养基。
实施例6
一种制作上述灰树花母种快速萌发培养基的方法：
(1)配制基质溶液：取干燥灰树花子实体和二纯水，按照1:10的质量体积比混合，测定pH为6.8，不需调节，80℃水浴2h，过滤，收集滤液得到基质溶液；
(2)配制辅料：取干燥橡树叶并粉碎，过60目筛，作为辅料；
(3)混合：将辅料与基质溶液按照质量体积比1:20的比例混合得到混合物；
(4)添加凝固剂琼脂粉并调节pH：按照琼脂粉与混合物质量体积比1.5:100的比例添加琼脂粉，并混合后，采用1N盐酸溶液调节pH至6，得到培养基。
实施例7
一种制作上述灰树花母种快速萌发培养基的方法：
(1)配制基质溶液：取干燥灰树花子实体和二纯水，按照1:10的质量体积比混合，采用1N氢氧化钠溶液调节pH为8.0，80℃水浴2h，过滤，收集滤液得到基质溶液；
(2)配制辅料：取干燥橡树叶并粉碎，过60目筛，作为辅料；
(3)混合：将辅料与基质溶液按照质量体积比1:20的比例混合得到混合物；
(4)添加凝固剂琼脂粉并调节pH：按照琼脂粉与混合物质量体积比1.5:100的比例添加琼脂粉，并混合后，采用1N盐酸溶液调节pH至6，得到培养基。
效果实施例1
本实施例采用的灰树花母种为灰树花品种Gf-3(购自福建省)；采用实施例2-7的培养基作为试验组，在图1-图2和表1中依次分别为1-6，采用市售真菌培养基作为对照组(CK)， 在图1-图2和表1中为CK；市售真菌培养基的配方为：蛋白胨5g/L、酵母浸出粉2g/L、葡萄糖20g/L、磷酸氢二钾1g/L、硫酸镁0.5g/L。
1、取市售真菌培养基并按说明配制，调节pH为6.0，并灭菌，此培养基作为对照(CK)。
2、在无菌条件下，分别取灰树花品种Gf-3菌种块接种于对照培养基和实施例2-7的培养基，接种块大小一致。
3、于25±1℃培养箱中避光培养。
4、观察接种块菌丝体萌发情况和菌丝体生长情况等；其中，菌丝体萌发情况及菌丝体菌落外观分别如图1和图2所示，菌丝体生长速度见表1。
5、结果及分析：
(1)菌丝萌发情况 
在25±1℃培养箱中避光培养培养48h后，在各个配方培养基中接种灰树花Gf-3的菌丝体的萌发情况如图1所示，每个培养基样品两个重复。
从图1中可以看出，与市售真菌培养基(CK)相比，实施例2-7(图1中的1-6)的培养基都使接种块加快萌发菌丝体。
(2)菌丝体生长速度
在培养过程中，通过每日对灰树花Gf-3菌丝体前端进行划线记录，测量菌丝日平均生长距离，即为菌丝体在各个配方培养基中的生长速度，生长速度结果见表1，每个培养基样品三个重复。
从表1可见，在实施例2-4的培养基中(1-3，即5％辅料量添加的三个pH值基质溶液的配方的培养基)，菌丝体平均长速要大于市售真菌培养基CK，并且差异显著(LSD，α＝0.05)；而在实施例5-7的培养基(4-6，即2％辅料量添加的三个pH值基质溶液的配方的培养基)中，菌丝体平均生长速度与市售真菌培养基CK无明显差异。 
表1 各培养基中菌丝体生长速度结果
(3)菌丝体菌落外观
在25±1℃培养箱中避光培养培养10d后，各个培养基的菌丝体菌落外观如图2所示，每个培养基样品两个重复。
从图2中可见，与市售真菌培养基相比，Gf-3在六种培养基中菌落形态无畸变。
效果实施例2
本实施例采用的灰树花母种为灰树花品种CZ(购自浙江省)；采用实施例2-7的培养基作为试验组，在图3-图4和表2中依次分别为1-6，采用市售真菌培养基作为对照组(CK)，在图3-图4和表2中为CK；市售真菌培养基的配方为：蛋白胨5g/L、酵母浸出粉2g/L、葡萄糖20g/L、磷酸氢二钾1g/L、硫酸镁0.5g/L。
1、取市售真菌培养基并按说明配制，调节pH为6.0，并灭菌，此培养基作为对照(CK)。
2、在无菌条件下，分别取灰树花品种CZ菌种块接种于对照培养基和实施例2-7的培养基，接种块大小一致。
3、于25±1℃培养箱中避光培养。
4、观察接种块菌丝体萌发情况和菌丝体生长情况等；其中，菌丝体萌发情况及菌丝体菌落外观分别如图3和图4所示，菌丝体生长速度见表2。
5、结果及分析：
(1)菌丝萌发情况 
在25±1℃培养箱中避光培养培养48h后，在各个配方培养基中接种灰树花CZ的菌丝体的萌发情况如图3所示，每个培养基样品两个重复。
从图3中可以看出，与市售真菌培养基(CK)相比，实施例2-7(图3中的1-6)的培养基都使接种块加快萌发菌丝体。
(2)菌丝体生长速度
在培养过程中，通过每日对灰树花CZ菌丝体前端进行划线记录，测量菌丝日平均生长距离，即为菌丝体在各个配方培养基中的生长速度，生长速度结果见表2，每个培养基样品三个重复。
从表2可见，在实施例2-4的培养基中(1-3，即5％辅料量添加的三个pH值基质溶液的配方的培养基)，菌丝体平均长速要大于市售真菌培养基CK，并且差异显著(LSD，α＝0.05)；而在实施例5-7的培养基中(4-6，即2％辅料量添加的三个pH值基质溶液的配方的培养基)，菌丝体平均生长速度与市售真菌培养基CK无明显差异。 
表2 各培养基中菌丝体生长速度结果
编号 1 2 3 CK 4 5 6
长速 3.6±0.3 3.8±0.2 3.8±0.2 3.3±0.2 4.3±0.2* 4.5±0.3* 4.0±0.2*
(mm/d)              
(3)菌丝体菌落外观
在25±1℃培养箱中避光培养培养10d后，各个培养基的菌丝体菌落外观如图4所示。每个培养基样品两个重复。
从图4中可见，与市售真菌培养基相比，CZ在六种培养基中菌落形态无畸变。
从以上结果可知，以上实施例的培养基都非常适合灰树花菌丝体的生长，可以加快灰树花菌种的接种块萌发菌丝，特别当辅料的添加量为5％时(辅料与基质溶液的质量体积比1:20的比例)，特别有利于加快灰树花菌种的菌丝生长速度。
以上所述，仅为本发明的较佳的具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种灰树花母种快速萌发培养基，其特征在于，包括灰树花子实体、水、橡树叶、凝固剂制备而得。
2.如权利要求1的一种灰树花母种快速萌发培养基，其特征在于，所述培养基pH为6，包括基质溶液、辅料和凝固剂，所述基质溶液由灰树花子实体和水制备而得，所述辅料由橡树叶粉碎而得。
3.一种如权利要求1-2所述的灰树花母种快速萌发培养基的制作方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)配制基质溶液：取灰树花子实体和水，混合，调节pH在6.0-8.0之间，水浴后过滤，收集滤液得到基质溶液；
(2)配制辅料：取橡树叶并粉碎，作为辅料；
(3)混合：将辅料与基质溶液按照质量体积比1:20-1:50的比例混合得到混合物；
(4)添加凝固剂并调节pH：添加凝固剂并混合后，调节pH至6，得到培养基。
4.如权利要求3所述的一种灰树花母种快速萌发培养基的制作方法，其特征在于，所述步骤1的pH调节为6.0，或6.8，或8.0。
5.如权利要求3所述的一种灰树花母种快速萌发培养基的制作方法，其特征在于，所述灰树花子实体和水按照1:10的质量体积比混合。
6.如权利要求3所述的一种灰树花母种快速萌发培养基的制作方法，其特征在于，所述水浴为80℃水浴2h。
7.如权利要求3所述的一种灰树花母种快速萌发培养基的制作方法，其特征在于，所述调节pH采用1N盐酸溶液或1N氢氧化钠溶液进行pH调节。
8.如权利要求3所述的一种灰树花母种快速萌发培养基的制作方法，其特征在于，所述凝固剂为琼脂粉。
9.如权利要求8所述的一种灰树花母种快速萌发培养基的制作方法，其特征在于，所述琼脂粉与混合物的混合比例为质量体积比1.5:100。
10.一种如权利要求3-9中任一权利要求所述的制作方法制作的灰树花母种快速萌发培养基。
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