CN104530209B

CN104530209B - 中华大蟾蜍抗菌肽bg‑cath37、bg‑cath(5‑37)及其编码基因和应用

Info

Publication number: CN104530209B
Application number: CN201410778613.8A
Authority: CN
Inventors: 高媛媛; 孙同毅; 李文辉
Original assignee: Weifang Medical University
Current assignee: Weifang Medical University
Priority date: 2014-12-17
Filing date: 2014-12-17
Publication date: 2017-08-25
Anticipated expiration: 2034-12-17
Also published as: CN104530209A

Abstract

本发明提供了中华大蟾蜍抗菌肽BG‑CATH37、BG‑CATH(5‑37)及其编码基因和应用，所述抗菌肽BG‑CATH37具有序列表SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，中华大蟾蜍抗菌肽BG‑CATH3(37)、BG‑CATH(5‑37)具有显著的抑菌、抗肿瘤作用，且具有结构简单、人工合成方便特点。它可以应用于抑菌、抗肿瘤的药物的制备，用于人和动物的治疗。

Description

中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH37、BG-CATH(5-37)及其编码基因和应用

技术领域

本发明属生物医学领域，具体涉及中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH37、BG-CATH(5-37)及其编码基因和应用。

背景技术

中华大蟾蜍为无尾两栖类蟾蜍属动物，广泛分布于我国大部分地区，是传统中药蟾酥和蟾皮的主要基源动物，有具有解毒散结、消积利水、杀虫消疳的功效。从中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor 的干燥皮提取精制而成的水溶性制剂-华蟾素，目前广泛应用于多种中晚期肿瘤，如原发性肝癌、胃癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌等。

国内外学者发现两栖动物皮及其分泌物含有丰富的抗菌肽，这类多肽通常含有10~50个氨基酸残基，成熟的多肽来源于前体蛋白的水解，大多数抗菌肽由于富含碱性氨基酸而带净正电荷。抗菌肽具有很多优点：消炎、抗感染、抗真菌、抗肿瘤、促进伤口愈合等作用，这些功能使抗菌肽可能成为良好应用前景的临床候选药物。

发明内容

本发明的目的是提供了中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH37、BG-CATH(5-37)及其编码基因和应用，所述抗菌肽BG-CATH37具有显著的抑菌和抗肿瘤作用，其还具有结构简单、合成成本低和抗菌谱系广等优点。

为了实现本发明的目的，本发明提供了如下技术方案予以实现：

中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH37，其具有SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。

中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH(5-37)，其具有SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。

含有所述的中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH37的蛋白前体，其具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

所述的中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH37的蛋白前体的编码基因，其具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。

所述的中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH37的蛋白前体的编码基因，使用T7启动子序列和SP6启动子序列筛选获得所述编码基因，

所述T7启动子序列为5’-TAATACGACTCTATAGGGA-3’；

所述SP6启动子序列5’-CATACGATTTAGGTGACACTATAG-3’。

本发明还提供了所述的中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH37在制备用于抑菌和抗肿瘤的药物中的应用。

本发明还提供了所述的中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH(5-37)在制备用于抑菌、抗肿瘤的药物中的应用。所述抗菌肽BG-CATH(5-37)对嗜水气单胞菌抑制效果最好。

与现有技术相比，本发明的优点和技术效果是：本发明在中华大蟾蜍毒液腺cDNA文库中获得了具有广谱抗菌活性的抗菌肽BG-CATH37，并将本发明的中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH37全序列氨基酸序列经蛋白质数据库进行搜寻比较，未发现有任何相同成熟肽，所述抗菌肽BG-CATH37具有创新性。

本发明通过实验证明两栖动物来源的中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH37具有显著的抑菌和抗肿瘤的作用，尤其是对临床耐药肿瘤细胞有很好的抑制作用，且应用范围广泛，与其它来源的抗菌多肽相比，该组抗菌肽具有结构简单、人工合成方便、抗菌谱系广等有益特点。可以应用于抗微生物感染和抗肿瘤的药物的制备，用于人和动物的治疗。具有良好的市场应用前景。

附图说明

图1是本发明中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH37的cDNA及其蛋白质序列，其中斜体加框序列为中华大蟾蜍抗菌肽的成熟序列。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明的技术方案做进一步详细的说明。

实施例 1

一、中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH37的基因克隆

1、总RNA 的提取

将中华大蟾蜍放于玻璃烧杯中，加入几滴***，收集毒液腺分泌物（也可以直接使用收集好的毒液腺分泌物），立即放入液氮中。称重后取20mg分泌物于液氮中研磨至粉末状。加入10ml总RNA提取缓冲液（Trizol溶液，美国GIBCO/BRL产品），于20ml玻璃匀浆器中匀浆30分钟。然后加入等体积的酚/氯仿溶液，剧烈混匀。室温放置10分钟后，4 °C, 12000rpm离心10分钟，弃沉淀，上清液加入等体积的异丙醇，室温放置10分钟。4 °C, 12000 rpm离心10分钟，沉淀用75%乙醇洗一次，晾干，管底沉淀物即为总RNA。

2、mRNA 的分离

采用美国Promega公司的mRNA分离纯化试剂盒。取中华大蟾蜍毒腺总RNA 500μg溶于500 μl经DEPC处理然后高压灭菌的水中，放入65 °C水浴10分钟。加入3μl的Oligo（dT）探针和13 μl 20×SSC溶液，混匀，放置室温冷却，称为A液。磁珠（SA-PMP）的洗涤：将磁珠（随mRNA分离纯化试剂盒）轻轻混匀，至磁力架吸附30 秒，弃上清，加0.5×SSC 0.3 ml，至磁力架吸附30秒，最后加0.1 ml 0.5×SSC悬浮，称为 B液。将A液加入B液中，室温放置10 分钟，至磁力架吸附30 秒，弃上清，用0.1×SSC洗涤4次。然后弃上清，加0.1 ml DEPC水悬浮，至磁力架吸附30 秒，将上清移至新的试管中，加入0.15 ml DEPC 水重新悬浮, 至磁力架吸附30 秒，将上清移至上述试管, 则上清中为纯化的mRNA。加入1/10 体积的3M 乙酸钠, pH5.2, 等体积异戊醇, 于-70 °C放置30 分钟, 然后于4 °C, 12000 rpm离心10分钟, 弃上清，沉淀溶于10 μl DEPC水中。

3、cDNA文库构建。

采用美国GIBCO/BRL 公司SuperScriptTM质粒 cDNA 文库构建试剂盒。

3.1、cDNA第一链合成（mRNA反转录）：于1.5 ml试管中加入2.0 μl NotI引物和7 μl mRNA，3 μl DEPC水，70 °C保温10分钟，立即放入冰浴冷却，然后加入4 μl 5×第一链合成缓冲液，2 μl 0.1M DTT，1 μl 10mM dNTP混合物，再加入1μl SuperScript II反转录酶，于 42 °C保温1小时后放入冰浴。

3.2、cDNA第二链合成：在第一链合成试管中加入：95 μl DEPC水，30 μl 5×第二链合成缓冲液，3 μl 10mM dNTP混合物，1μl大肠杆菌DNA连接酶，4μl大肠杆菌DNA多聚酶I，1μl大肠杆菌RNA 酶，反应总体积150 μl，混匀后于16 °C保温2小时；加入2 μl T4 DNA多聚酶继续保温5 分钟。

3.3、DNA的抽提和乙醇沉淀：加入等体积酚/氯仿/异戊醇（25/24/1）混合物抽提，12000 rpm 离心 5 分钟，取180 μl上层溶液转移到干净的试管中，加入70 μl 7.5M乙酸铵，0.5 ml无水乙醇，12000 rpm离心20分钟，弃上清，沉淀用75% 乙醇洗一次，晾干。

3.4、Sal I adapter 的连接：上述沉淀溶于25 μl DEPC水中，加入10 μl 5×T4DNA连接酶缓冲液，10 μl SalI adapter，5 μl T4 DNA连接酶，反应总体积50μl，于16 °C保温16小时。重复上述DNA的抽提和乙醇沉淀过程，沉淀溶解于41 μl DEPC水中。

3.5、Not I 酶水解：于cDNA 溶液中加入5 μl React 3缓冲液，4 μl NotI酶，反应体积50 μl，于37 °C保温2小时。重复上述DNA的抽提和乙醇沉淀过程，沉淀溶解于100 μlTEN缓冲液中。

3.6、DNA 分级分离：将cDNA样品过柱（试剂盒中含有）后，去除小于300bp 核苷酸的cDNA，cDNA大于300 bp的组分合并，体积为200 μl，加入5 μl酵母tRNA，100 μl 7.5 M乙醇胺，0.6 ml无水乙醇，12000 rpm离心20分钟，弃上清，沉淀用75%乙醇洗一次，晾干，沉淀溶于20 μl TEN缓冲液中。

3.7、合成的cDNA连接到pSPORT 1质粒：取10 μl溶解于TEN缓冲液中的cDNA，加入4 μl 5×T4 DNA连接酶缓冲液，1 μl pSPORT 1质粒（Not I-Sal I酶水解，50 ng），4 μlDEPC水，1 μl T4 DNA连接酶，反应体积20μl，室温3小时。

3.8、大肠杆菌HB101感受态细胞的制备：挑取单个HB101菌落，接种于3ml不含氨苄青霉素的LB 培养基中，37 °C 培养过夜，次日取上述菌液按比例1：100再接种于50ml LB培养液中，37 °C振荡2小时，待菌液在540 nm 的OD值为0.4 时，4 °C，2000rpm离心8分钟，弃上清，沉淀用0.1 M CaCl₂ 重悬，再以2000 rpm离心 8分钟，弃上清，沉淀以适量0.1 MCaCl₂ 重悬，分装后置冰浴内备用。

3.9、连接产物的转化：取上述连接产物5 μl加入100 μl感受态细胞，冰浴60分钟，42 °C热休克60秒，再置冰浴5分钟，加入无氨苄青霉素的SOC培养基0.9 ml，37 °C振荡培养1小时，取200 μl涂布于含氨苄青霉素的LB平皿上（15cm直径）。37 °C培养16小时，每个LB平皿用5 ml LB液体培养基洗涤菌落，加10%的甘油于液氮保存的所构建中华大蟾蜍毒腺cDNA文库大约含1.8×10⁵个克隆。

4、中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH37的基因克隆。

采用cDNA文库构建质粒pSPORT 1的通用引物T7启动子序列(5’-TAATACGACTCTATAGGGA-3’) (SEQ ID No:5)以及SP6启动子序列(5’-CATACGATTTAGGTGACACTATAG-3’) (SEQ ID No:6)鉴定每个克隆的***片段大小。通过对2000多个***片段 >400 bp的克隆的测序，结合核酸及蛋白质的序列比较，得到了中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH37的编码基因，如图1所示，其cDNA自5’端至3‘端序列为(SEQ ID NO:1)：

AGTGGAGTGCGGAGAGGACATTTCCTCTAAGACAGGCCAAGATGAGGAGCTGGTGGCTGTCTCTGCTGCTCGTCTCTGCTGTCACATTACACGGCTGTCTCTCTGACACTGCAGAGCCTGAGGTCCAAGATGGAAGATCTGTAGGAGATGTCATCGACCTCTACAACCAGAGGGAGGGGGTCACATACTTATATAAATCCCTGGACCAGCTGCCCCCTGTTCCAATGGAGGAAGATGAAAATCCGAACAGAAGAGGCTTTATCATTAAAGAGACGGTGTGCCTCAAATCCGAGAATCCTGATTTAACCCAGTGTGATTTCAAGCCCGACGGAGATGTGAAGATCTGTTCTCTGGATTTGGATGATGAGGATCCTGAGGACATAATGTGCACCAGTCTGAACAAGGAGGTTCGTGTGAAGCGGTCCAGCAGAAGACCATGCAGGGGGAGGTCCTGCGGGCCGCGGCTAAGAGGAGGTTATACTCTTATCGGCAGACCCGTTAAAAACCAAAACAGACCTAAGTACATGTGGGTGTAAAGATCTGCAGTCAACAGTAGAACGAGATCTGAGATTGAGGCTTATGACAAGCACATTACCGTTATAAGCTTTACTAGTTATTATTATGAGGTGCGAGGTGGCACATTGCGAATACCTCCTTACTTCTTCTGACCTCTCCCATCTTCACTCTAATCCCCGGAGGAGAGATTTCAGGAGTTTCAGCTTGCTATGAGATCAGCCATGTTCTGTCTGTGGAACGTTCTGAATGGATACAATGTTACAAATAAACGTAGCAACAAATAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA

SEQ ID NO:1的核苷酸序列编码的抗菌肽前体蛋白氨基酸序列为(SEQ ID NO:2)：MRSWWLSLLLVSAVTLHGCLSDTAEPEVQDGRSVGDVIDLYNQREGVTYLYKSLDQLPPVPMEEDENPNRRGFIIKETVCLKSENPDLTQCDFKPDGDVKICSLDLDDEDPEDIMCTSLNKEVRVKRSSRRPCRGRSCGPRLRGGYTLIGRPVKNQNRPKYMWV。

从上述前体蛋白的序列分析，根据目前对抗菌肽成熟肽加工位点的知识和抗菌肽结构理论，该短肽有两种切割方式。大部分两栖类抗菌多肽在正常pH环境下带净正电荷，分子结构中含有多个赖氨酸（K）或者精氨酸(R)，第一种蛋白切割方式，Leu25-Trp42为中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH37的成熟序列(SEQ ID NO:3，SSRRPCRGRSCGPRLRGGYTLIGRPVKNQNRPKYMWV)。抗菌肽BG-CATH37由37个氨基酸组成，理论pI值为12.00，分子量Mw 4302.08Da。

第二种切割方式，Pro29-Trp42为中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH（5-37)的成熟序列(SEQ ID NO:4，PCRGRSCGPRLRGGYTLIGRPVKNQNRPKYMWV)。抗菌肽BG-CATH3(5-37)由33个氨基酸组成，理论 pI值为12.00，分子量Mw 3815.54Da。

实施例2、中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH37、BG-CATH（5-37)的制备

1、根据编码中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH37、BG-CATH（5-37)的核酸序列推导出成熟抗菌肽的氨基酸序列。分别用全自动多肽合成仪合成它们对应的全序列。通过HPLC反相C18柱层析脱盐、纯化。

2、分子量测定采用快原子轰击质谱法(Fast atom bombardment massspectrometry, FAB-MS)，以甘油：间硝基苄醇：二甲亚砜 (1:1:1, V:V:V，体积比)为底物，Cs^＋作为轰击粒子，电流为1 μA，发射电压为25 Kv。

3、纯化的中华大蟾蜍抗菌肽用高效液相色谱HPLC方法鉴定其纯度，分子量测定采用快原子轰击质谱法，用全自动氨基酸测序仪测定氨基酸序列结构。

所合成中华大蟾蜍抗菌肽的名称以及氨基酸序列如下所示：

BG-CATH37（SEQ ID NO:3）：SSRRPCRGRSCGPRLRGGYTLIGRPVKNQNRPKYMWV；

BG-CATH（5-37) （SEQ ID NO:4）：PCRGRSCGPRLRGGYTLIGRPVKNQNRPKYMWV。

实施例3

取待测菌株大肠杆菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923、、绿脓杆菌以及嗜水气单胞菌先过夜培养，然后接种到新鲜的LB培养基中，37℃、60转/分钟培养培养4-5小时，检测OD600≈1，然后4000g离心5分钟，用灭菌的去离子水清洗并替换LB培养基。最后稀释到大约10^5cfu/ml的细菌浓度。随后在干净的96孔板中，每孔加入50ul上述的细菌浓度的菌液和50ul不同浓度的样品或空白对照的混合液，用于检测的样品不同浓度梯度。1mg/ml的头孢作为阳性对照，阴性为灭菌的去离子水。然后37℃作用3小时。随后加入100ul新鲜的LB培养基，37℃培养14-16小时，然后酶标仪检测OD600来估计最低抑制率（MIC）或接入到LB琼脂平板上，37℃培养14-16小时，来估计最低抑制率（MIC）。

表1 待测菌株的最低抑制浓度（MIC）

MIC(ug/ml)	大肠杆菌	金黄色葡萄球菌	绿脓杆菌	嗜水气单胞菌
					BG-CATH(5-37)	>200	>200	200	12.5
BG-CATH37	>200	>200	200	40

如表1所示，BG-CATH(5-37)对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、嗜水气单胞菌的最低抑制浓度（MIC）分别为：>200 ug/ml，>200 ug/ml，200 ug/ml，12.5 ug/ml。BG-CATH(5-37)对嗜水气单胞菌抑制效果最好。BG-CATH37对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、嗜水气单胞菌的最低抑制浓度（MIC）分别为：>200 ug/ml，>200 ug/ml，200 ug/ml，40ug/ml。说明所述BG-CATH37和BG-CATH(5-37)对上述菌类具有良好的抑菌效果。

实施例4

人类结肠癌细胞株 (LoVo)、人结肠癌细胞株（HCT116）、人乳腺癌细胞（MCF-7）、人膀胱癌细（EJ）、膀胱癌细胞（T24）、人***癌细胞(PC-3)培养在F12培养基(DMEM/F12培养基+10%FBS+1%左氧氟沙星)中，并处于37℃、5%的CO₂的培养箱中。然后在96孔细胞培养板中，100ul大约10⁴-10⁵的细胞量接种到每个孔中，培养大约20小时。随后用100ul含不同浓度的样品或空白的无血清和双抗的培养基替换原有培养基。培养24小时后，每孔加入10ul的MTT。培养4小时后，弃去原有培养基，每孔加入150ulDMSO/孔，摇床低速振荡10分钟之后，用酶标仪检测OD570nm。抑制率/% =(对照组OD值-实验组OD值）/对照组OD值×100%，具体实验结果如表2所示。

表2 抗菌肽对人类癌细胞的治疗效果实验

抑制率（%）	LoVo	HCT116	MCF-7	PC-3	EJ	T24
							BG-CATH(5-37) (100ug/ml)	8.14	33.58	-8.19	24.51	-37.92	2.39
BG-CATH37 (100ug/ml)	22.55	48.31	10.15	43.62	4.68	31.90

综上所述，本发明通过系列实验获得了中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH37，BG-CATH(5-37)，并通过抗肿瘤实验证明其对肿瘤细胞有显著抑制作用，而且应用范围广泛，可以应用于肝癌细胞、乳腺癌细胞和脑神经瘤细胞等，效果显著，可以应用于抗肿瘤药物的制备。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 潍坊医学院

<120> 中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH37、BG-CATH(5-37)及其编码基因和应用

<130>

<160> 6

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 818

<212> DNA

<213> 中华大蟾蜍

<400> 1

agtggagtgc ggagaggaca tttcctctaa gacaggccaa gatgaggagc tggtggctgt 60

ctctgctgct cgtctctgct gtcacattac acggctgtct ctctgacact gcagagcctg 120

aggtccaaga tggaagatct gtaggagatg tcatcgacct ctacaaccag agggaggggg 180

tcacatactt atataaatcc ctggaccagc tgccccctgt tccaatggag gaagatgaaa 240

atccgaacag aagaggcttt atcattaaag agacggtgtg cctcaaatcc gagaatcctg 300

atttaaccca gtgtgatttc aagcccgacg gagatgtgaa gatctgttct ctggatttgg 360

atgatgagga tcctgaggac ataatgtgca ccagtctgaa caaggaggtt cgtgtgaagc 420

ggtccagcag aagaccatgc agggggaggt cctgcgggcc gcggctaaga ggaggttata 480

ctcttatcgg cagacccgtt aaaaaccaaa acagacctaa gtacatgtgg gtgtaaagat 540

ctgcagtcaa cagtagaacg agatctgaga ttgaggctta tgacaagcac attaccgtta 600

taagctttac tagttattat tatgaggtgc gaggtggcac attgcgaata cctccttact 660

tcttctgacc tctcccatct tcactctaat ccccggagga gagatttcag gagtttcagc 720

ttgctatgag atcagccatg ttctgtctgt ggaacgttct gaatggatac aatgttacaa 780

ataaacgtag caacaaataa aaaaaaaaaa aaaaaaaa 818

<210> 2

<211> 164

<212> PRT

<213> 中华大蟾蜍

<400> 2

Met Arg Ser Trp Trp Leu Ser Leu Leu Leu Val Ser Ala Val Thr Leu

1 5 10 15

His Gly Cys Leu Ser Asp Thr Ala Glu Pro Glu Val Gln Asp Gly Arg

20 25 30

Ser Val Gly Asp Val Ile Asp Leu Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Val Thr

35 40 45

Tyr Leu Tyr Lys Ser Leu Asp Gln Leu Pro Pro Val Pro Met Glu Glu

50 55 60

Asp Glu Asn Pro Asn Arg Arg Gly Phe Ile Ile Lys Glu Thr Val Cys

65 70 75 80

Leu Lys Ser Glu Asn Pro Asp Leu Thr Gln Cys Asp Phe Lys Pro Asp

85 90 95

Gly Asp Val Lys Ile Cys Ser Leu Asp Leu Asp Asp Glu Asp Pro Glu

100 105 110

Asp Ile Met Cys Thr Ser Leu Asn Lys Glu Val Arg Val Lys Arg Ser

115 120 125

Ser Arg Arg Pro Cys Arg Gly Arg Ser Cys Gly Pro Arg Leu Arg Gly

130 135 140

Gly Tyr Thr Leu Ile Gly Arg Pro Val Lys Asn Gln Asn Arg Pro Lys

145 150 155 160

Tyr Met Trp Val

<210> 3

<211> 37

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 3

Ser Ser Arg Arg Pro Cys Arg Gly Arg Ser Cys Gly Pro Arg Leu Arg

1 5 10 15

Gly Gly Tyr Thr Leu Ile Gly Arg Pro Val Lys Asn Gln Asn Arg Pro

20 25 30

Lys Tyr Met Trp Val

35

<210> 4

<211> 33

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 4

Pro Cys Arg Gly Arg Ser Cys Gly Pro Arg Leu Arg Gly Gly Tyr Thr

1 5 10 15

Leu Ile Gly Arg Pro Val Lys Asn Gln Asn Arg Pro Lys Tyr Met Trp

20 25 30

Val

<210> 5

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

taatacgact ctataggga 19

<210> 6

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

catacgattt aggtgacact atag 24

Claims

1.中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH37，其氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。

2.中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH(5-37)，其氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。

3.含有权利要求1所述的中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH37的蛋白前体，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

4.权利要求3所述的蛋白前体的编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

5.根据权利要求4所述的编码基因，其特征在于：使用T7启动子序列和SP6启动子序列筛选获得所述编码基因，

所述T7启动子序列为5’-TAATACGACTCTATAGGGA-3’；

所述SP6启动子序列5’-CATACGATTTAGGTGACACTATAG-3’。

6.权利要求1所述的中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH37在制备用于抑菌、抗肿瘤的药物中的应用。

7.权利要求2所述的中华大蟾蜍抗菌肽BG-CATH(5-37)在制备用于抑菌、抗肿瘤的药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述菌为嗜水气单胞菌。