CN104497076A - 一种高纯栀子苷的制备纯化方法 - Google Patents

Abstract

一种高纯栀子苷的制备纯化方法，即一种以茜草科植物栀子的未成熟果实为原料，采用醇提、浓缩、过滤、大孔树脂纯化、重结晶精制工艺提取制备高纯栀子苷的方法。该方法具体如下：采集7月中旬至8月初的未成熟栀子青果，粉碎、烘干，用70~80%乙醇常温浸泡提取3次，每次1h，合并提取液，减压浓缩至无醇味，浓缩液用硅藻土过滤，滤液上大孔吸附树脂吸附，先用水洗去极性杂质，再用20%乙醇洗脱栀子苷，收集20%乙醇洗脱液，减压浓缩、烘干，得栀子苷粗品，纯度可达80%以上，粗品经无水乙醇重结晶进一步纯化，最终可制得纯度大于95%的高纯栀子苷产品。该方法简单、生产成本低、产品纯度高，对环境无污染,具有一定的优势，适合工业化生产。

Description

一种高纯栀子苷的制备纯化方法

技术领域

本发明涉及一种高纯栀子苷的制备纯化方法，特别是以茜草科植物栀子的未成熟果实为原料，采用醇提、浓缩、过滤、大孔树脂纯化、重结晶精制工艺提取制备高纯栀子苷的方法，属于天然产物提取分离纯化领域。

背景技术

药食两用传统中药栀子为茜草科植物栀子（Gardenia jasminoides Ellis）的干燥成熟果实，性味苦寒，入心、肝、肺、胃、三焦经，具有泻火除烦、清热利湿、凉血解毒、消肿止痛等功效，常用于热病虚烦不眠、黄疸、淋病、消渴、目赤、咽痛、吐血、血痢疫病、扭伤肿痛等症。栀子的有效活性成分为环烯醚萜类化合物，包括栀子苷、羟异栀子苷、京尼平苷酸、京尼平-1-β-龙胆二糖苷等，其中含量最高的为栀子苷，中国药典（2010版，一部）中即以栀子苷为栀子药材的标志性成分。现代药理学研究表明，栀子苷具有对肝脏、胰腺细胞的保护作用，可以促进胆汁分泌，以及具有降糖、降压、解热、抗菌、抗炎、镇痛、抗氧化、抗肿瘤、抗细胞凋亡及神经保护等作用。栀子苷也是生产天然色素栀子蓝的重要原料。

研究发现，栀子果实在成熟过程中栀子黄色素的含量逐渐累积，而栀子苷含量逐渐降低，未变黄的栀子青果中栀子苷含量高于成熟的栀子。我们调查研究也发现，江西的栀子在每年7月中旬至8月初果实基本发育至成熟时大小，8月中旬以后进入成熟期开始变黄，至10月下旬变红，成熟期间果实的粒重和水分没有较大变化。现有栀子苷的生产都是采用传统工艺，以成熟的栀子果实为原料，提取完色素后再从苷水中纯化栀子苷，工艺复杂，由于成熟果实中色素含量较高，杂质不容易去除，栀子苷很难结晶，用传统工艺生产的栀子苷纯度偏低，杂质较多，直接影响进一步生产的栀子蓝的品质。如果以未变黄的栀子青果为原料，因原料中不含栀子黄色素，杂质较少，可直接提取和纯化栀子苷，工艺简单，制得的栀子苷产品纯度高，成本低廉，可解决后续生产栀子蓝的品质问题，比传统工艺有明显优势。

发明内容    

本发明的目的是提出一种高纯栀子苷的制备纯化方法，即一种采用醇提、浓缩、过滤、大孔树脂纯化、重结晶精制的工艺，从茜草科植物栀子的未成熟果实中提取制备高纯度栀子苷的方法。

本发明的具体方法如下：

（1）   提取：采集7月中旬至8月初的未成熟栀子青果，粉碎成粗粉，烘干。取栀子青果干粉，用10~12倍原料量（W/W）的70~80%乙醇水溶液浸泡提取三次，每次1小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，用硅藻土过滤澄清，得栀子青果醇提浓缩液。

（2）   大孔树脂纯化：将上述过滤澄清的栀子青果醇提浓缩液上D101大孔树脂柱吸附，控制流速为每小时1~2倍柱体积量，跟踪检测流出液的UV-vis吸收曲线，当流出液在238nm处出现明显栀子苷吸收峰时停止上样。先用约4倍柱体积量（W/W）的纯水洗杂，再用20%乙醇洗脱栀子苷，检测乙醇洗脱液的UV-vis吸收曲线，至没有明显栀子苷吸收峰时停止洗脱。最后用50~95%乙醇和水活化再生树脂柱，用于下次上样纯化。

（3）   浓缩干燥：收集20%乙醇洗脱液，减压浓缩、真空干燥得栀子苷粗品，HPLC法检测其中栀子苷含量，纯度达80%以上。

（4）   重结晶精制：将上述栀子苷粗品用2~3倍量（W/W）无水乙醇于50~60℃加热溶解，趁热过滤，滤液冷却后于4~5℃静置析晶，待析晶完全，滤出白色晶体，用少量无水乙醇淋洗，真空干燥，粉碎，得纯度大于95%的栀子苷粉末产品。

本发明一种高纯栀子苷的制备纯化方法的有益效果是：以未变黄的栀子青果为原料，因原料中不含栀子黄色素，杂质较少，可直接提取和纯化栀子苷，方法简单，生产成本低，制得的栀子苷产品纯度高，可解决后续生产栀子蓝的品质问题，比传统工艺有明显优势；对环境无污染，适合工业化生产。

附图说明  

图1栀子苷的结构图。

图2栀子苷理化特征数据表。

具体实施方式

实例1

提取：采集7月中旬至8月初的未成熟栀子青果，粉碎成粗粉，烘干。取栀子青果果粉50 g，室温下用74%乙醇浸泡提取三次，每次大约200 g乙醇，每次浸泡提取1小时。合并乙醇提取液，减压浓缩至无醇味，用硅藻土过滤澄清，得栀子青果醇提浓缩液。

大孔树脂纯化：使用一根装有50g预处理好的D101大孔吸附树脂的柱子，将上述醇提浓缩液上样吸附，控制流速1.0~1.5 mL/min，跟踪检测流出液的UV-vis吸收曲线，当流出液在238nm处出现明显栀子苷吸收峰时停止上样。用约200 g纯水洗杂，洗脱液弃去。再用20%乙醇洗脱栀子苷，跟踪检测乙醇洗脱液的UV-vis吸收曲线，至没有明显栀子苷吸收峰时停止洗脱，收集20%乙醇洗脱液大约250g。用50~95%乙醇和水活化再生树脂柱，用于下次上样纯化。

浓缩干燥：收集的20%乙醇洗脱液减压浓缩，真空干燥得栀子苷粗品，HPLC法检测粗品栀子苷含量，纯度为82.2%。

重结晶精制：将上述栀子苷粗品1.0 g，加入2.0 g无水乙醇，于60℃加热使其完全溶解，趁热过滤，滤液冷却至室温，于4℃冰箱静置，待析晶完全，滤出白色晶体，用少量无水乙醇淋洗，真空干燥，碾碎，得白色栀子苷粉末产品0.62 g，用HPLC法检测栀子苷含量为98.1%。

实例2

提取：采集7月中旬至8月初的未成熟栀子青果，粉碎成粗粉，烘干。取栀子青果果粉200 g，室温下用70%乙醇浸泡提取三次，每次700~800 g乙醇，浸泡提取1小时。合并乙醇提取液，减压浓缩至无醇味，用硅藻土过滤澄清，得栀子青果醇提浓缩液。

大孔树脂纯化：使用一根装有200 g预处理好的D101大孔吸附树脂的柱子，将上述醇提浓缩液上样吸附，控制流速为4~5 mL/min，跟踪检测流出液的UV-vis吸收曲线，当流出液在238nm处出现明显栀子苷吸收峰时停止上样。用约800 g纯水洗杂，洗脱液弃去。再用20%乙醇洗脱栀子苷，跟踪检测乙醇洗脱液的UV-vis吸收曲线，至没有明显栀子苷吸收峰时停止洗脱，收集20%乙醇洗脱液大约800 g。用50~95%乙醇和水活化再生树脂柱，用于下次上样纯化。

浓缩干燥：收集的20%乙醇洗脱液减压浓缩，真空干燥得栀子苷粗品，HPLC法检测粗品栀子苷含量，纯度为84.3%。

重结晶精制：将上述栀子苷粗品约5.0 g，加入12.0 g无水乙醇，于60℃加热使其完全溶解，趁热过滤，滤液冷却至室温，于4℃冰箱静置，待析晶完全，滤出白色晶体，用少量无水乙醇淋洗，真空干燥，粉碎，得白色栀子苷产品2.66 g，用HPLC法检测栀子苷含量为97.4%。

实例3

提取：采集7月中旬至8月初的未成熟栀子青果，粉碎成粗粉，烘干。取栀子青果果粉1 kg，室温下用80%乙醇浸泡提取三次，每次大约4 kg乙醇，浸泡提取1小时。合并乙醇提取液，减压浓缩至无醇味，用硅藻土过滤澄清，得栀子青果醇提浓缩液。

大孔树脂纯化：使用一根装有500 g预处理好的D101大孔吸附树脂的柱子，将上述醇提浓缩液上样吸附，控制流速为10~12 mL/min，跟踪检测流出液的UV-vis吸收曲线，当流出液在238nm处出现明显栀子苷吸收峰时停止上样。用约4 kg纯水洗杂，洗脱液弃去。再用20%乙醇洗脱栀子苷，跟踪检测乙醇洗脱液的UV-vis吸收曲线，至没有明显栀子苷吸收峰时停止洗脱，收集20%乙醇洗脱液大约2 kg。用50~95%乙醇和水活化再生树脂柱，用于下次上样纯化。

浓缩干燥：收集的20%乙醇洗脱液减压浓缩，真空干燥得栀子苷粗品，HPLC法检测粗品栀子苷含量，纯度为85.5%。

重结晶精制：将上述栀子苷粗品约10.0 g，加入20.0 g无水乙醇，于55℃加热使其完全溶解，趁热过滤，滤液冷却至室温，于4℃冰箱静置，待析晶完全，过滤，得白色晶体，用少量无水乙醇淋洗，真空干燥，粉碎，得白色栀子苷产品6.17 g，用HPLC法检测栀子苷含量为98.6%。

Claims (8)

1.一种高纯栀子苷的制备纯化方法，其特征在于所述的方法包括如下步骤：

（1）原料：采集7月中旬至8月初的未成熟栀子青果，粉碎成粗粉，烘干；

（2）提取：用10~12倍原料量（W/W）的70~80%乙醇水溶液浸泡提取三次，每次1小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，用硅藻土过滤澄清，得栀子青果醇提浓缩液；

（3）大孔树脂纯化：将上述过滤澄清的栀子青果醇提浓缩液上D101大孔树脂柱吸附，控制流速为每小时1~2倍柱体积量，跟踪检测流出液的UV-vis吸收曲线，当流出液在238nm处出现明显栀子苷吸收峰时停止上样。先用约4倍柱体积量（W/W）的纯水洗杂，再用20%乙醇洗脱栀子苷，检测乙醇洗脱液的UV-vis吸收曲线，至没有明显栀子苷吸收峰时停止洗脱。最后用50~95%乙醇和水活化再生树脂柱，用于下次上样纯化；

（4）浓缩干燥：收集20%乙醇洗脱液，减压浓缩、真空干燥得栀子苷粗品，HPLC法检测其中栀子苷含量，纯度达80%以上；

（5）重结晶精制：将上述栀子苷粗品用2~3倍量（W/W）无水乙醇于50~60℃加热溶解，趁热过滤，滤液冷却后于4~5℃静置析晶，待析晶完全，滤出白色晶体，用少量无水乙醇淋洗，真空干燥，粉碎，得纯度大于95%的栀子苷粉末产品。

2. 根据权利要求1所述一种高纯栀子苷的制备纯化方法，其特征在于原料为生长至7-8月份的未成熟栀子果实，果皮颜色为青色，果仁未变黄。

3. 根据权利要求1所述一种高纯栀子苷的制备纯化方法，其特征在于提取溶剂为70~80%乙醇，用量为原料的10~12倍量（W/W）。

4.根据权利要求1所述一种高纯栀子苷的制备纯化方法，其特征在于纯化所用大孔树脂为D101或同类型大孔吸附树脂。

5.根据权利要求1所述一种高纯栀子苷的制备纯化方法，其特征在于纯化时上样终点为树脂柱流出液检出栀子苷。

6.根据权利要求1所述一种高纯栀子苷的制备纯化方法，其特征在于纯化时用水洗脱杂质，水的用量不少于4倍树脂量。

7.根据权利要求1所述一种高纯栀子苷的制备纯化方法，其特征在于纯化时用20%乙醇洗脱栀子苷。

8.根据权利要求1所述一种高纯栀子苷的制备纯化方法，其特征在于纯化时用无水乙醇为重结晶溶剂，用量为栀子苷粗品的2~3倍量。