CN104447785A - 一种小钻中长南五味子素d的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种小钻中长南五味子素D的提取方法，包括如下步骤：萃取，将小钻溶解后进行萃取，并将萃取产物与硅胶混合，得第一产物；将所述第一产物上硅胶柱，用氯仿和丙酮的混合液对所述第一产物洗脱，得第一洗脱产物；将第一洗脱产物进行薄层层析，在紫外光下观察显色，合并相同样，依次与长南五味子素D的标样对比，找出并提取含有长南五味子素D的粗样，得第一粗样；将第一粗样上反相硅胶柱，用甲醇溶液对所述第一粗样洗脱，得含有所述长南五味子素D的第二洗脱产物，对所述第二洗脱产物进行纯化既得所述长南五味子素D。通过梯度洗脱长南五味子素D，能有效提高柱效，提高了长南五味子素D的分离能力，最后得高纯度的长南五味子素D。
Description
技术领域
本发明涉及化合物的提取领域，尤其涉及一种瑶药小钻中长南五味子素D的提取方法。
背景技术
瑶药小钻来源于五味子科南五味子，属植物长梗南五味子的根和茎。主要分布于我国南部，如云南、四川、浙江、福建、广东、广西等地。小钻味甘、苦、辛，性温。属风打相兼药。健脾补肾，理气活血，祛风通络，消肿止痛。小钻为广西瑶医习用药材，用于治疗产后浮肿、经闭腹痛、疝气痛、肾虚腰痛、胃痛、头风痛、风湿性关节炎、跌打损伤和骨折等。但迄今基本没有小钻对照品长南五味子素D的提取制备与纯化的方法。
发明内容
本发明的目的在于根据小钻中含有长南五味子素D，提供一种小钻中长南五味子素D的提取方法。
本发明提供的技术方案为：
一种小钻中长南五味子素D的提取方法，包括如下步骤：
步骤一：萃取，将小钻溶解后进行萃取，并将萃取产物与硅胶混合，得第一产物；
步骤二：将所述第一产物上硅胶柱，用氯仿和丙酮的混合液对所述第一产物洗脱，得第一洗脱产物；
步骤三：将第一洗脱产物进行薄层层析，在紫外光下观察显色，合并相同样，依次与长南五味子素D的标样对比，找出并提取含有长南五味子素D的粗样，得第一粗样；
步骤四：将第一粗样上反相硅胶柱，用甲醇溶液对所述第一粗样洗脱，得含有所述长南五味子素D的第二洗脱产物，对所述第二洗脱产物进行纯化既得所述长南五味子素D。
优选的是，所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述第二洗脱产物的纯化方法为：
将所述第二洗脱产物继续进行薄层层析，在荧光下观察显色，将相同斑点的样品合并，并标记，得多组标记样；将多组标记样与长南五味子素D的标样对比，找出并提取含有长南五味子素D的样品，若样品在荧光下观察有其它杂质，则继续重复薄层层析步骤至样品中无杂质，将无杂质的样品进行重结晶，即得所述长南五味子素D。
优选的是，所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤一中小钻的溶解，将小钻研磨成40-80目的粉末，之后将小钻粉末与乙醇按1∶8-1∶12的比例混合，浸泡5-9天后将混合物蒸发至无醇味。
优选的是，所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤一中萃取剂为乙酸乙酯；硅胶为100-200目。
优选的是，所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤二中硅胶柱中的硅胶为200-300目，所述洗脱为梯度洗脱，氯仿和丙酮的配比依次为100∶1、20∶1、10∶1、5∶1、1∶1。
优选的是，所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤三中薄层层析包括：将所述第一洗脱产物分成多份，每份400-600ml，用甲醇对所述第一洗脱样进行萃取，将萃取样在硅胶下点板，在紫外光下观察，分样，依次与长南五味子素D的标样对比，找出含有长南五味子素D的样品，得第一粗样。
优选的是，所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤四中洗脱为梯度洗脱，甲醇溶液的质量分数依次为70％、80％和100％。
优选的是，所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述第二洗脱产物的薄层层析包括：将所述第二洗脱产物分成多份，每份40-60ml，用甲醇对第二洗脱产物萃取，将萃取物用质量比为2∶1-4∶1的石油醚和乙酸乙酯的混合物点板，在荧光下观察，分样，找出含有长南五味子素D的样品。
本发明具有以下有益效果：一方面，本发明提取的长南五味子素D可以很好的治疗骨科疾病，如促进骨折愈合，治疗骨折引发的感染等，疗效好，组方简单，可降低使用者的经济负担。另一方面，采用萃取和洗脱的方法来提取小钻中的长南五味子素D，萃取具有提取效率高，使长南五味子素D的提取更充分，小钻具有热稳定性好的优点，因此对温度的敏感度不高，利用醇来萃取操作简单；通过梯度洗脱长南五味子素D，能有效提高柱效，改善检测器的灵敏度，缩短了分析样品的周期，提高了长南五味子素D的分离能力，最后得到的长南五味子素D的纯度可达到98.5％以上。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
一种小钻中长南五味子素D的提取方法，包括如下步骤：
步骤一：萃取，将小钻溶解后进行萃取，并将萃取产物与硅胶混合，得第一产物；
步骤二：将所述第一产物上硅胶柱，用氯仿和丙酮的混合液对所述第一产物洗脱，得第一洗脱产物；
步骤三：将第一洗脱产物进行薄层层析，在紫外光下观察显色，合并相同样，依次与长南五味子素D的标样对比，找出并提取含有长南五味子素D的粗样，得第一粗样；
步骤四：将第一粗样上反相硅胶柱，用甲醇溶液对所述第一粗样洗脱，得含有所述长南五味子素D的第二洗脱产物，对所述第二洗脱产物进行纯化既得所述长南五味子素D。
所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述第二洗脱产物的纯化方法为：
将所述第二洗脱产物继续进行薄层层析，在荧光下观察显色，将相同斑点的样品合并，并标记，得多组标记样；将多组标记样与长南五味子素D的标样对比，找出并提取含有长南五味子素D的样品，若样品在荧光下观察有其它杂质，则继续重复薄层层析步骤至样品中无杂质，将无杂质的样品进行重结晶，即得所述长南五味子素D。
所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤一中小钻的溶解，将小钻研磨成40-80目的粉末，之后将小钻粉末与乙醇按1∶8-1∶12的比例混合，浸泡5-9天后将混合物蒸发至无醇味。
所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤一中萃取剂为乙酸乙酯；硅胶为100-200目。
所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤二中硅胶柱中的硅胶为200-300目，所述洗脱为梯度洗脱，氯仿和丙酮的配比依次为100∶1、20∶1、10∶1、5∶1、1∶1。
所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤三中薄层层析包括：将所述第一洗脱产物分成多份，每份400-600ml，用甲醇对所述第一洗脱样进行萃取，将萃取样在硅胶下点板，在紫外光下观察，分样，依次与长南五味子素D的标样对比，找出含有长南五味子素D的样品，得第一粗样。
所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤四中洗脱为梯度洗脱，甲醇溶液的质量分数依次为70％、80％和100％。
所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述第二洗脱产物的薄层层析包括：将所述第二洗脱产物分成多份，每份40-60ml，用甲醇对第二洗脱产物萃取，将萃取物用质量比为2∶1-4∶1的石油醚和乙酸乙酯的混合物点板，在荧光下观察，分样，找出含有长南五味子素D的样品。
实施例1：
一种小钻中长南五味子素D的提取方法，包括如下步骤：
步骤一：萃取，将小钻溶解后进行萃取，并将萃取产物与硅胶混合，得第一产物；
步骤二：将所述第一产物上硅胶柱，用氯仿和丙酮的混合液对所述第一产物洗脱，得第一洗脱产物；
步骤三：将第一洗脱产物薄层层析，在紫外光下观察显色，合并相同样，依次与长南五味子素D的标样对比，找出并提取含有长南五味子素D的粗样，得第一粗样；
步骤四：将第一粗样上反相硅胶柱，用甲醇溶液对所述第一粗样洗脱，得含有所述长南五味子素D的第二洗脱产物，对所述第二洗脱产物进行纯化既得所述长南五味子素D。
所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述第二洗脱产物的纯化方法为：
将所述第二洗脱产物继续进行薄层层析，在荧光下观察显色，将相同斑点的样品合并，并标记，得多组标记样；将多组标记样与长南五味子素D的标样对比，找出并提取含有长南五味子素D的样品，若样品在荧光下观察有其它杂质，则继续重复薄层层析步骤至样品中无杂质，将无杂质的样品进行重结晶，即得所述长南五味子素D。
所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤一中小钻的溶解，将小钻研磨成60目的粉末，之后将小钻粉末与乙醇按1∶10的比例混合，浸泡7天后将混合物蒸发至无醇味。
所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤一中萃取剂为乙酸乙酯；硅胶为150目。
所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤二中硅胶柱中的硅胶为200-300目，所述洗脱为梯度洗脱，氯仿和丙酮的配比依次为100∶1、20∶1、10∶1、5∶1、1∶1。
所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤三中薄层层析包括：将所述第一洗脱产物分成多份，每份500ml，用甲醇对所述第一洗脱样进行萃取，将萃取样在硅胶下点板，在紫外光下观察，分样，依次与长南五味子素D的标样对比，找出含有长南五味子素D的样品，得第一粗样。
所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述步骤四中洗脱为梯度洗脱，甲醇溶液的质量分数依次为70％、80％和100％。
所述小钻中长南五味子素D的提取方法中，所述第二洗脱产物的薄层层析包括：将所述第二洗脱产物分成多份，每份50ml，用甲醇对第二洗脱产物萃取，将萃取物用质量比为3∶1的石油醚和乙酸乙酯的混合物点板，在荧光下观察，分样，找出含有长南五味子素D的样品。
下面通过对提取物长南五味子素D的样品鉴定及纯度检查来进一步验证小钻中的提取物。
实验一：提取物长南五味子素D的鉴定，将实施例1得到的提取物长南五味子素D置于氚代氯仿中，进行核磁共振检测其结果见表1。
表1提取物长南五味子素D在氚代氯仿中氢和碳的数据
如表1可知，从提取物长南五味子素D的样品在1H-NMR(600MHz)和13C-NMR(150MHz)中的数据可知，提取物为长南五味子素D。
实验二：提取物长南五味子素D的纯度测试
取实施例1得到的长南五味子素，加入到高效液相色谱中，其中色谱柱采用迪马C18，流动相中其中一相为乙腈，另一相为磷酸水，对长南五味子素D梯度洗脱，检测到波长为254nm，柱温为30℃，流速为0.8mL/min，利用面积归一化法计算长南五味子素D的纯度大于98.5％。本发明为提取小钻中长南五味子素D提供了新的思路。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。
Claims (8)
1.一种小钻中长南五味子素D的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一：萃取，将小钻溶解后进行萃取，并将萃取产物与硅胶混合，得第一产物；
步骤二：将所述第一产物上硅胶柱，用氯仿和丙酮的混合液对所述第一产物洗脱，得第一洗脱产物；
步骤三：将第一洗脱产物进行薄层层析，在紫外光下观察显色，合并相同样，依次与长南五味子素D的标样对比，找出并提取含有长南五味子素D的粗样，得第一粗样；
步骤四：将第一粗样上反相硅胶柱，用甲醇溶液对所述第一粗样洗脱，得含有所述长南五味子素D的第二洗脱产物，对所述第二洗脱产物进行纯化既得所述长南五味子素D。
2.如权利要求1所述的小钻中长南五味子素D的提取方法，其特征在于，所述第二洗脱产物的纯化方法为：
将所述第二洗脱产物继续进行薄层层析，在荧光下观察显色，将相同斑点的样品合并，并标记，得多组标记样；将多组标记样与长南五味子素D的标样对比，找出并提取含有长南五味子素D的样品，若样品在荧光下观察有其它杂质，则继续重复薄层层析步骤至样品中无杂质，将无杂质的样品进行重结晶，即得所述长南五味子素D。
3.如权利要求1所述的小钻中长南五味子素D的提取方法，其特征在于，所述步骤一中小钻的溶解，将小钻研磨成40-80目的粉末，之后将小钻粉末与乙醇按1∶8-1∶12的比例混合，浸泡5-9天后将混合物蒸发至无醇味。
4.如权利要求1所述的小钻中长南五味子素D的提取方法，其特征在于，所述步骤一中萃取剂为乙酸乙酯；硅胶为100-200目。
5.如权利要求1所述的小钻中长南五味子素D的提取方法，其特征在于，所述步骤二中硅胶柱中的硅胶为200-300目，所述洗脱为梯度洗脱，氯仿和丙酮的配比依次为100∶1、20∶1、10∶1、5∶1、1∶1。
6.如权利要求1所述的小钻中长南五味子素D的提取方法，其特征在于，所述步骤三中薄层层析包括：将所述第一洗脱产物分成多份，每份400-600ml，用甲醇对所述第一洗脱样进行萃取，将萃取样在硅胶下点板，在紫外光下观察，分样，依次与长南五味子素D的标样对比，找出含有长南五味子素D的样品，得第一粗样。
7.如权利要求1所述的小钻中长南五味子素D的提取方法，其特征在于，所述步骤四中洗脱为梯度洗脱，甲醇溶液的质量分数依次为70％、80％和100％。
8.如权利要求2所述的小钻中长南五味子素D的提取方法，其特征在于，所述第二洗脱产物的薄层层析包括：将所述第二洗脱产物分成多份，每份40-60ml，用甲醇对第二洗脱产物萃取，将萃取物用质量比为2∶1-4∶1的石油醚和乙酸乙酯的混合物点板，在荧光下观察，分样，找出含有长南五味子素D的样品。
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Citations (3)
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| JPS6330410A (ja) * | 1986-07-23 | 1988-02-09 | Tsumura Juntendo Inc | 抗潰瘍剤 |
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2014
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Patent Citations (3)
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| CN105125535B (zh) * | 2015-09-28 | 2017-10-20 | 中国人民解放军第二军医大学 | 五味子丙素在制备改善糖皮质激素性骨质疏松症药物中的应用 |
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| CN106496181B (zh) * | 2016-09-21 | 2019-01-11 | 广西壮族自治区药用植物园 | 瑶药小钻中长南五味子素e的提取方法 |
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