CN102688261A - 一种凤尾草提取物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种凤尾草提取物,该提取物由凤尾草属植物提取获得,其中主要含有黄酮类成份,包括芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖-4′-O-α-L-鼠李糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷等成分。本发明同时公开了所述凤尾草提取物的制备方法,主要特征在于该提取物物由凤尾草属植物经乙醇提取、水沉处理、大孔树脂柱精制等工序处理获得,其中所述大孔树脂优选弱极性大孔树脂。本发明同时公开了该凤尾草提取物在药品和食品方面的用途,主要特征在于该提取物具有抗炎作用,尤其具有抗***炎或抑制***增生作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种凤尾草提取物,本发明同时涉及该提取物的制备方法和用途。
背景技术
凤尾草(Pteris multifida Poir.)为凤尾蕨科凤尾草属植物,又名山鸡尾、井口边草、铁脚鸡等,生于阴湿岩壁及墙垣、石缝处,在全世界温带地区广泛分布。中国传统医学认为凤尾草性寒味微苦,具有消肿解毒、清热利湿、凉血止血之功效,主治痢疾、泄泻、淋浊、带下、黄疸、扁桃体炎、腮腺炎、乳腺炎、吐血、衄血、尿血、便血及外伤出血等症,临床应用于治疗传染性肝炎、急性细菌性痢疾等疾病。现代化学研究其主要成份为黄酮类、蕨素类倍半萜、贝壳杉烷型二萜等,从凤尾草中已发现的黄酮类成份包括芹菜素、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-3′-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖-4′-O-α-L-鼠李糖苷、木犀草素、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷等[孙海燕等.中药凤尾草的研究进展.中国兽医寄生虫病2007,15(3):422-6]。其它凤尾草同属植物功效和化学成份相似,如凤尾蕨(Pteris cretica var.nervosa)、半凤尾蕨(Pteris dispar)、半边旗(Pteris semipinnata)等,详参《中华本草》卷二,上海科技出版社,1999:115-126。
凤尾草是我国特色民间草药,相关文献集中在我国。朱大元、向贵等(从凤尾草中分离洋芹子素衍生物及它们的用途,申请号CN200510024554.6)公开了凤尾草中的洋芹子素-4′-α-L-鼠李糖苷、洋芹子素-4′-α-L-鼠李糖-7-β-D-葡萄苷、木犀草素、棕榈酸和山嵛酸对体外培养的***细胞增殖有抑制作用,可用于治疗***肥大和***炎药物中;该发明所述洋芹子素衍生物的制备方法主要采用20-40%乙醇提取、大孔树脂或聚酰胺柱精制、不同浓度乙醇-水梯度洗脱的工艺路线,并进一步采用硅胶、凝胶柱层析获得所述单体成份;但该发明未涉及凤尾草总黄酮的含量和成份组成。刘建群等[大孔树脂对凤尾草水部位总黄酮的富集作用研究.江西中医学院学报2009,21(4):49-51.]采用70%乙醇提取凤尾草,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后分部位萃取后,得水部位,利用LSA40大孔树脂对凤尾草中水部位的总黄酮进行富集,总黄酮含量为27%。夏玉叶等(凤尾草总黄酮的新应用,专利号CN200610027926.5)公开了一种凤尾草总黄酮在制备防治缺血性疾病药物中的新应用,该发明所述总黄酮采用70%乙醇提取、石油醚脱脂后水液经大孔树脂精制等步骤获得。黄运凤、刘国凌[大孔树脂对凤尾草黄酮吸附分离特性研究的影响.贵州农业科学,2010,38(6):57-59.]对4种大孔吸附树脂HPD100、HPD600、HPD700、HPD722和AB-8进行比较,结果表明,HPD700树脂较适宜于凤尾草黄酮的提纯,经纯化后凤尾草黄酮纯度可达51.8%。张树祥等(一种凤尾草黄酮类化合物的提取方法,申请号CN200810101749.X)公开了一种提取凤尾草药材中黄酮类化合物的方法,凤尾草药材经乙醇提取、石油醚脱脂后,用乙酸乙酯-正丁醇混合溶剂***萃取富集黄酮类化合物,所得萃取物膏经碱溶酸沉,即得黄酮类化合物,纯度可达60%以上。现有凤尾草总黄酮的大孔树脂制备技术中,优化工艺的总黄酮纯度为51.8%,一般均采用有机溶剂脱脂处理,但该法不适于工业化生产使用。另一方面,现有技术对产品中凤尾草总黄酮的成份组成并不确定,因而实际生产中难以获得组成稳定、工艺可控性好的产品。
本发明人在临床实践中,调研发现苏州、太仓等地民间有使用凤尾草单味草药治疗***增生、***炎的经验,因而在1999-2006年期间首次进行了临床验证[薛波新等.凤尾草颗粒剂治疗良性***增生症的临床疗效评价.中国中西医结合杂志2008,28(5):456-458;单玉喜等.单味中药凤尾草颗粒剂治疗慢性***炎(ⅢA型)87例.中医杂志,49(6):549.]。经中国科学院上海药物研究所研究,发现从凤尾草中得到的芹菜素-4′-O-鼠李糖苷、芹菜素-7-O-葡萄糖-4′-O-鼠李糖苷、山嵛酸等成份对培养的***细胞增殖有强的抑制作用,有望发展成治疗***增生和***炎新药[秦波,朱大元,向贵等.凤尾草的化学成分及其对体外大鼠***上皮细胞的抑制效应.中国天然药物2006,10(6):428-431.]。本发明内容是前期研究基础上的后续发现。
发明内容
本发明的目的是提供一种组成成份稳定、工艺和质量可控的凤尾草提取物。
本发明的另一目的是提供该提取物在抗炎作用的食品或药品中的应用。
本发明提供的制备凤尾草提取物的方法包括以下工艺步骤:
(1)选取凤尾草属植物药材,采用水或乙醇-水混合溶媒进行提取,浓缩为浓缩液,加适量水稀释,一定方式下静置6-24小时,过滤,得凤尾草溶液;
(2)由(1)所得凤尾草溶液,采用预处理好的大孔树脂进行吸附,先用水洗,再用乙醇-水混合溶媒按10-30%、50-95%乙醇梯度洗脱,收集50-95%乙醇洗脱部位洗脱液,浓缩,干燥,即得。
所述工艺步骤(1)中药材选用凤尾草属植物全草,其中优选凤尾草或具有相似总黄酮组成的同属植物。提取溶媒可采用常规的水或乙醇—水(50-75%)混合溶媒提取,提取液合并,常法浓缩得浓缩液,再加适量水稀释,过滤,得凤尾草溶液。为进一步提高提取液中总黄酮含量,可优选采用一次水沉处理,即浓缩液再加入适量水(为按药材干重计的1-5倍,优选1-3倍),室温或冷藏条件下静置6-24小时(优选8-16小时),再过滤,得凤尾草溶液。
所述工艺步骤(2)中,所述大孔树脂优选非极性或弱极性大孔树脂,更优选弱极性大孔树脂。大孔树脂柱梯度洗脱时更优选按10-30%、60-75%乙醇梯度洗脱并收集60-75%乙醇洗脱部位洗脱液获得凤尾草提取物。所述提取物中主要含有黄酮类成份,其中主要成份芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖-4′-O-α-L-鼠李糖苷和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的总含量大于20%。该提取物中还含有木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-3′-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素、木犀草素等成份中的至少一种以上。采用亚硝酸钠-氯化铝比色法、芦丁对照,测得所述提取物中总黄酮含量平均为58%。
本发明通过凤尾草提取物工艺研究,采用优选大孔树脂进行选择性梯度洗脱,结合水沉处理工序,获得提取物中总黄酮含量大于55%;同时明确了该提取物中主要的两种指标性成份及其总含量,为其质量控制提供了参考依据。该生产工艺降低了纯化成本,容易实现工业化生产,并且对环境无污染。
本发明同时对该提取物的抗炎、抗***炎和抑制前连腺增生作用进行了考察。研究结果:(1)二甲苯致小鼠急性耳肿胀试验结果表明,所述提取物灌药给药(500mg/kg)具有一定的抗炎作用;(2)百白破疫苗致小鼠***炎试验表明,凤尾草醇提物组(12g生药/kg)、凤尾草提取物组(300mg/kg、150mg/kg)原***炎性组织中浸润的淋巴细胞、浆细胞均减少,表明凤尾草提取物具有抗***炎作用;(3)丙酸睾酮致小鼠***增生试验表明,凤尾草醇提物组(12g生药/kg)、凤尾草提取物组(300mg/kg、150mg/kg)、保列治对照组给药30天后病理切片观察***增生缓解。结果表明,所述提取物具有较好的抗炎活性、抗***炎和抗前连腺增生作用,可以根据使用需要应用于不同的功能食品和药品中。
本发明内容是通过大量实验研究、进行工艺优化分析完成的,以下述具体实施例进行说明。
附图说明
附图为凤尾草提取物的液相色谱图(检测波长340nm)。图中,色谱峰1、2(保留时间分别为11.7、12.8分钟)依次为木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖-4′-O-α-L-鼠李糖苷。
具体实施方式
本发明所述的凤尾草提取物是按如下实施例所表示的方法制造,所涉及到的方法是本领域的技术人员能够掌握和运用的技术手段。但以下实施例不得理解为任何意义上的对本发明权利要求的限制。
实施例1:凤尾草提取物的制备
本课题组对凤尾草总黄酮的大孔树脂精制工艺进行了***研究,研究内容包括静态吸附法、动态吸附法评价筛选不同树脂种类,对优选的AB-8树脂进行了吸附等温线、饱和吸附泄漏曲线、上样浓度、梯度洗脱条件、流速、柱径高比等优化考察,获得凤尾草总黄酮有效部位。主要工艺过程如下:
凤尾草药材20kg,用70%乙醇回流提取二次,每次1.5小时,合并提取液,减压浓缩至20L,加入20L水静置过夜,过滤,溶液上样于已处理好的AB-8树脂柱内,分别用水、20%乙醇、70%、95%乙醇各3BV进行梯度洗脱,70%乙醇洗脱部位经减压浓缩、干燥,获得凤尾草提取物(PM-F1)黄色粉末160.0g,得率0.8%。
HPLC法测定PM-F1中指标成份含量:采用木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(1)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖-4′-O-α-L-鼠李糖苷(2)自制对照品,测定原料中指标成份含量。色谱条件:20%乙腈-(0.1%乙酸-水)为流动相等度洗脱,检测波长340nm,柱温30℃。分析结果:测得PM-F1中化合物1、2的含量分别为9.8%、12.5%,二者总和22.3%。
比色法测定组合物中总黄酮含量:精密称取干燥至恒重的芦丁对照品约5.0mg,甲醇定容至25.0mL。分别移取上述溶液0、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8、2.1mL,置于10mL容量瓶中,加水补至5mL,加5%亚硝酸钠0.3mL,静置6分钟;加10%硝酸铝0.3mL,静置6分钟;加4%氢氧化钠2mL,加水定容至10mL,15分钟后于500nm处测溶液吸光度A。以A与芦丁含量进行线性回归,所得方程为A=1.07m+0.0095(r2=0.9995),线性范围0.129-0.903μg。取测试品适量,以芦丁为对照,测定试样中总黄酮含量为56.1%。
凤尾草提取物样品的HPLC图谱参见附图。
实验例1:凤尾草提取物的抗炎作用试验
取20-25g小鼠40只,分为凤尾草醇提物(12g生药/kg)、凤尾草提取物(300mg/kg)组、对照组和模型组四组,预灌药一周。最后一次灌药2小时后,用二甲苯25微升均匀涂于小鼠右耳,半小时后处死小鼠,用直径6mm打孔器,取小鼠的左右耳相同部位,用分析天平称重。取下的右耳减去左耳重量为肿胀度,计算对照组和给药组的均值与标准差,t检验比较组间差异显著性。按下式求出肿胀抑制率:
肿胀抑制率(%)=[1-给药组平均肿胀度/模型组平均肿胀度]×100%
结果:凤尾草醇提物(12g生药/kg)、凤尾草提取物(300mg/kg)对二甲苯所致小鼠耳廓急性炎症的肿胀抑制率分别为57.8、51.3(%),二组间比较无明显差异(P<0.5),表明二者均有一定的抑制作用。
实验例2:凤尾草提取物的抗***炎作用试验
选择体重20~25g雄性小鼠90只,随机分为正常组、模型组、凤尾草醇提物组(12g生药/kg)、凤尾草提取物组(300mg/kg、150mg/kg)、生理盐水对照组共6组,正常对照组皮下注射油酸乙酯5ml/kg/d,其余小鼠全部腹腔注射百白破疫苗0.1ml,多点皮内注射大鼠***蛋白提纯液和完全弗氏佐剂(比例为1∶1的混悬液)0.4ml,分别于0、30d进行2次注射。连续给药30天后,处死各组小鼠,检查***病理变化情况。
结果:造模后30天的小鼠产生不同程度的慢性炎症的病理表现;凤尾草醇提物组(12g生药/kg)、凤尾草提取物组(300mg/kg、150mg/kg)原***炎性组织中浸润的淋巴细胞、浆细胞均减少,表明凤尾草提取物具有抗***炎作用。
实验例3:凤尾草提取物的抑制***增生作用试验
选择体重20~25g雄性小鼠105只,随机分为正常组、模型组、凤尾草醇提物组(12g生药/kg)、凤尾草提取物组(300mg/kg、150mg/kg)、保列治对照组和生理盐水对照组共7组,正常对照组皮下注射油酸乙酯5ml/kg/d,其余小鼠全部皮下注射丙酸睾酮5mg/kg/d,连续给药21天后,处死对照组及丙睾模型组小鼠,检查***增生情况;给药组分别继续灌胃生理盐水、凤尾草制剂及保列治连续30天,每天1次,最后一次给药24h后,剖检各小鼠的***组织病变情况。
结果:正常对照组病理切片观察***组织,腺上皮为单层柱状,单核,椭圆形,位于基底部;腺腔大小基本一致,腔内无或有少许分泌物。模型组腺上皮渐变为高柱状,细胞排列紧密,部分腺上皮呈***状增生,个别细胞可见2~3个椭圆形核。腺腔密集,大小不一,腔明显扩大,腔内分泌物显著增加,***增生显著。凤尾草醇提物组(12g生药/kg)、凤尾草提取物组(300mg/kg、150mg/kg)、保列治对照组给药30天后病理切片观察***增生缓解。
Claims (10)
1.一种凤尾草提取物,其特征在于该提取物中含有芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖-4′-O-α-L-鼠李糖苷和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷,所述凤尾草提取物的制备方法如下:
(1)选取凤尾草属植物药材,采用水或乙醇-水混合溶媒进行提取,浓缩为浓缩液,加适量水稀释,一定方式下静置6-24小时,过滤,得凤尾草溶液;
(2)由(1)所得凤尾草溶液,采用预处理好的大孔树脂进行吸附,先用水洗,再用乙醇-水混合溶媒按10-30%、50-95%乙醇梯度洗脱,收集50-95%乙醇洗脱部位洗脱液,浓缩,干燥,即得。
2.根据权利要求1所述凤尾草提取物的制备方法,其特征在于其制备方法步骤(1)中所选取凤尾草属植物为凤尾草(Pteris multifida)。
3.根据权利要求1所述凤尾草提取物的制备方法,其特征在于其制备方法步骤(1)中所加适量水为按药材干重计的1-5倍,所述静置方式为室温或冷藏,静置时间优选8-16小时。
4.根据权利要求1所述凤尾草提取物的制备方法,其特征在于其制备方法步骤(2)中所述大孔树脂优选弱极性大孔树脂,所述乙醇-水混合溶媒优选按15-25%、60-75%乙醇梯度洗脱。
5.根据权利要求1至4所述凤尾草提取物,其特征在于该提取物中含有芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖-4′-O-α-L-鼠李糖苷和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷,二者总含量大于20%。
6.根据权利要求5所述凤尾草提取物,其特征在于该提取物中还含有木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-3′-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素、木犀草素等成份中的至少一种以上。所述提取物中总黄酮含量大于50%。
7.根据权利要求1所述凤尾草提取物在食品和药品中的应用。
8.根据权利要求7所述凤尾草提取物在食品和药品中的应用,特征在于该组合物具有抗炎作用。
9.根据权利要求7所述凤尾草提取物在食品和药品中的应用,特征在于该组合物具有抗***炎作用。
10.根据权利要求7所述凤尾草提取物在食品和药品中的应用,特征在于该组合物具有抑制***增生作用。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20120926 |