CN102630943A - 一种螺旋藻γ-亚麻酸提取物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有高抗氧化活性和抗血小板聚集活性的螺旋藻γ-亚麻酸提取物及其制备方法。本发明以螺旋藻粉末为原料，采用超声波破碎、有机溶剂浸提、真空抽滤、真空浓缩、真空冷冻干燥、气相色谱测定，最终得到粉末状的螺旋藻γ-亚麻酸提取物。提取得到的产物通过DPPH自由基清除实验，脂质氧化抑制实验和血小板聚集抑制实验，表明螺旋藻γ-亚麻酸提取物具有明显的抗氧化和抗血小板聚集活性，并最终证明本提取方法是一种从螺旋藻中提取γ-亚麻酸的经济有效方式，且可应用于保健食品开发领域。

Description

一种螺旋藻γ-亚麻酸提取物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种具有高抗氧化活性和抗血小板聚集活性的螺旋藻γ-亚麻酸提取物及其制备方法，属于现代食品加工和生物技术领域。

背景技术

γ-亚麻酸被誉为“21世纪功能性食品的主角”，是人体中不可缺少的一种多不饱和脂肪酸。γ-亚麻酸作为各组织生物膜的结构材料，也是人体合成***素的前体物质，具有抗脂质氧化、抗动脉粥样硬化、降低血清胆固醇浓度、增强免疫功能等多种重要的生理活性功能。

最近研究发现，被***粮农组织推荐的“21世纪最理想的食品”——螺旋藻是迄今发现的自养生物中唯一含有丰富的γ-亚麻酸的生物，含量高达11970mg/kg藻粉，占藻体脂肪酸类的20％-30％，其γ-亚麻酸含量可占其脂肪酸的8％-25％左右。而在γ-亚麻酸的主要提取来源月见草油中，γ-亚麻酸含量只在7％-10％。由此可见，螺旋藻是γ-亚麻酸非常有前途的来源，但未得到充分重视，国际上也只有少量研究。

目前国内对于螺旋藻γ-亚麻酸提取物制备的专利尚无记录，相关文献研究提到的提取方法主要集中在超临界二氧化碳萃取技术，尿素包合法等。但前者对设备要求高，且提取率并没有显著提高；后者有尿素残留，易形成可疑致癌物氨基甲酸乙酯，对于直接用于食品和保健品不太理想。因此，本发明选用安全易挥发的乙醇为有机提取溶剂，发明了一种安全有效、经济易操作的提取方式；同时通过研究γ-亚麻酸的体外活性，为螺旋藻来源的保健品的研发提供支持。

发明内容

本发明的目的是开发一种经济易操作，适合工业化生产的γ-亚麻酸的工艺流程，以弥补目前市场上对于螺旋藻γ-亚麻酸提取物制备的空白，从而深度开发我国丰富的螺旋藻资源，为营养保健品的研发提供技术支持。

为实现上述目的，本发明由以下步骤组成：

步骤一：将藻粉和乙醇按照1∶12～18(w/v)的比例混合，在0～40℃水中利用超声波进行细胞破碎，功率为400W，破碎时间为10～15min。如果时间较长，可采用分阶段破碎，每次5min，以防局部温度过高对内容物产生破坏；

步骤二：破碎后的藻粉-乙醇悬浮液继续恒温振荡提取，提取温度可在60～70℃间进行调节，提取时间为90～150min，注意避光；

步骤三：经溶剂浸提后的混合物先真空抽滤，得到的澄清液再利用真空浓缩除去多余溶剂；

步骤四：浓缩得到的提取物经真空冷冻干燥，可得到粉末状的螺旋藻γ-亚麻酸提取物，便于储藏和再利用；通过气象色谱定量分析后，得到提取效率(GLA/干重)可大于8.1g/kg(wt％)。

用此方法得到的螺旋藻γ-亚麻酸提取物，通过体外DPPH自由基清除实验、脂质氧化抑制实验和血小板聚集抑制实验验证其生物活性，证实具有良好的体外抗氧化和抗血小板聚集功效，可应用于保健食品开发领域。

附图说明

下面对附图进行简要说明。

图1是提取工艺图。

图2是γ-亚麻酸提取物的气相色谱图。横轴代表保留时间，纵轴代表峰面积。

图3是γ-亚麻酸对由ADP诱导的血小板聚集的抑制效果图，横轴表示GLA浓度(g/L)，纵轴表示抑制率(％)。

具体实施方式

以下结合附图和具体实施例对本发明作进一步的详细描述，但并不限制本发明的范围。

实施例1：

将5g干燥的螺旋藻粉，与60mL乙醇充分混合，先在冰水浴中利用超声波进行细胞破碎，功率为400W，破碎时间为10min。经破碎后的藻粉-乙醇悬浮液，继续在恒温水浴中避光浸提，保持温度70℃，振荡90min，转速150r/min。浸提得到的γ-亚麻酸提取物混合溶液，首先经过真空抽滤滤去残渣，澄清液转移至旋转蒸发仪(175Mbar，40℃)进行真空浓缩，从而除去多余溶剂。经浓缩得到的提取物再通过真空冷冻干燥，最终可得到白色粉末状的螺旋藻γ-亚麻酸提取物。

取10mL纯提取物用浓硫酸-甲醇(1∶9，v/v)在70℃恒温水浴中甲酯化10min，冷却后加入1mL正己烷及用蒸馏水定容，混匀后静置分层，取上层液体用于气相色谱检测，并根据标准曲线计算相应含量，得到提取效率(GLA/干重)可大于8.3g/kg(wt％)。

实施例2：

将20Kg干燥的螺旋藻粉，与250L乙醇充分混合，首先在0～40℃的水浴中利用超声波进行细胞破碎，功率为400W，破碎时间为20min(分四个阶段破碎，每次5min)。经破碎后的藻粉-乙醇悬浮液，继续恒温避光浸提，保持温度70℃，振荡90min，转速150r/min。浸提得到的γ-亚麻酸提取物混合溶液，首先经过真空抽滤滤去残渣，澄清液转移至双效低温真空浓缩罐中进行真空浓缩，从而除去多余溶剂。经浓缩得到的提取物再通过真空冷冻干燥，最终可得到白色粉末状的螺旋藻γ-亚麻酸提取物。

取10mL纯提取物用浓硫酸-甲醇(1∶9，v/v)在70℃恒温水浴中甲酯化10min，冷却后加入1mL正己烷及用蒸馏水定容，混匀后静置分层，取上层液体用于气相色谱检测，并根据标准曲线计算相应含量，得到提取效率(GLA/干重)可大于8.7g/kg(wt％)。

实施例3：

实施例1中的提取物，分别进行DPPH自由基清除实验，脂质氧化抑制实验和血小板聚集抑制实验。

DPPH自由基清除实验：将50μL不同浓度样品加入5mL 0.004％DPPH(甲醇溶解)，室温30min后在517nm下测定吸光度值，选取Vc作为阳性对照。得到结果如表1。

脂质氧化抑制实验：卵磷脂用于为Fe²⁺介导的氧化反应提供脂质体系，与硫代巴比妥酸在535nm处测定吸光度值GLA提取物加入反应环境中，若表现出抗氧化活性，相应吸光率随浓度而呈线性变化。得到结果如表2。

血小板聚集抑制实验：将新鲜猪血离心后分别制取富血小板血浆(PRP)和乏血小板血浆(PPP)。用ADP诱导凝血，加入5μL不同浓度的γ-亚麻酸提取物，即得到不同时间点(60s、180s、300s)血小板凝聚情况及3min内的凝聚曲线。得到结果如表或图3。

结果(表1、表2、附图3)表明由步骤一进行的γ-亚麻酸提取物具有良好的体外抗氧化活性，且在脂质环境中更加突出；同时提取物也表现出明显的抑制血小板聚集的活性。

表1γ-亚麻酸与VC对DPPH自由基的清除效果

表2γ-亚麻酸与VC对由Fe²⁺诱导的脂质氧化反应的抑制效果

Claims (3)

1.一种具有高抗氧化活性和抗血小板聚集活性的螺旋藻γ-亚麻酸提取物及其制备方法。

2.一种含有如权利要求1所述的螺旋藻γ-亚麻酸提取物的制备方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

步骤一：将藻粉和乙醇按照1∶12～18(w/v)的比例混合，在0～40℃水中利用超声波进行细胞破碎，功率为400W，破碎时间为10～15min。如果时间较长，可采用分阶段破碎，每次5min，以防局部温度过高对内容物产生破坏；

步骤二：破碎后的藻粉乙醇悬浮液继续恒温振荡提取，提取温度可在60～70℃间进行调节，提取时间为90～150min，注意避光；

步骤三：经溶剂浸提后的混合物先真空抽滤，得到的澄清液再利用真空浓缩除去多余溶剂，保持压强175Mbar，温度40℃；

步骤四：除去溶剂的提取物经真空冷冻干燥，可得到粉末状的螺旋藻γ-亚麻酸提取物，便于储藏和再加工；经气相色谱进行定量测定，得到提取效率(GLA/干重)可大于8.1g/kg(wt％)。

3.如权利要求1所述的螺旋藻γ-亚麻酸提取物在相关功能食品和营养保健食品中的应用，其特征在于所述提取物具有明显的抗氧化活性和抗血小板聚集的活性。 

Images