CN104262245A - 一种6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂及其制备方法和应用 - Google Patents
一种6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104262245A CN104262245A CN201410437924.8A CN201410437924A CN104262245A CN 104262245 A CN104262245 A CN 104262245A CN 201410437924 A CN201410437924 A CN 201410437924A CN 104262245 A CN104262245 A CN 104262245A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- acid
- phenylpyridine
- bcr
- base
- abl inhibitor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D213/72—Nitrogen atoms
- C07D213/75—Amino or imino radicals, acylated by carboxylic or carbonic acids, or by sulfur or nitrogen analogues thereof, e.g. carbamates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D213/72—Nitrogen atoms
- C07D213/76—Nitrogen atoms to which a second hetero atom is attached
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Pyridine Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂及其制备方法和应用，该抑制剂的结构式为其中R1为乙酰化基团、甲磺酰化基团或特戊酰化基团，R2为单取代基或双取代基，取代基为烷基、卤素。该系列抑制剂在体外对ABL1激酶有一定的抑制作用，且能够抑制肿瘤细胞K562的增殖，可用于抗肿瘤药物的制备，尤其是CML(慢性粒细胞性白血病)药物。本发明提供的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法，具有原料易得，反应条件温和，反应过程操作简单，所用试剂便宜的优点。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，涉及一种抗肿瘤的化合物，特别涉及一种6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂及其制备方法和应用。
背景技术
慢性髓细胞性白血病(CML)是一种发生于造血干细胞的血液***性克隆增生性疾病，也是最常见的一种白血病。在西方国家，CML约占成人白血病的15-20％，在各年龄段均可发病，以中老年病例为常见。CML是由t(9；22)(q34；q11)染色体易位形成的断裂点簇集区-艾贝尔逊白血病病毒(BCR-ABL)融合基因过度表达的Bcr-Abl蛋白引起的。目前，出现了多种针对BCR-ABL为靶标的小分子抑制剂，但都存在耐药性问题，因此Bcr-Abl突变耐药性是该研究领域的一大难题，随之新型Bcr-Abl抑制剂的研究和开发就成为药学领域的热点之一。
发明内容
本发明解决的问题在于提供一种6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂及其制备方法和应用，能够应用于抗肿瘤药物的制备。
为达到上述目的，本发明是通过以下技术方案来实现的：
一种6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂，具有如下结构式：
其中，R1为酰化基团，R2为单取代基或双取代基，取代基为烷基或卤素。
所述的R1为乙酰化基团、甲磺酰化基团或特戊酰化基团。
所述的R2为单取代基时，取代基位于苯环上羧基的间位或对位；
所述的R2为双取代基时，两个取代基不同，取代位置相邻。
一种6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法，包括以下步骤：
5)2-氨基-6-溴吡啶和不同的酰氯反应得到不同的N-(6-溴吡啶-2-基)酰胺；
6)不同的N-(6-溴吡啶-2-基)酰胺和对羧基苯硼酸通过SUZUKI偶联反应得到4-[6-(酰胺)吡啶-2-基]苯甲酸；
7)含取代基的苯甲酰哌嗪的制备：含不同取代基的苯甲酸和特戊酰氯反应生成混合酸酐中间体，再和哌嗪反应得到含不同取代基的苯甲酰哌嗪；
8)不同的4-[6-(酰胺)吡啶-2-基]苯甲酸与含不同取代基的苯甲酰哌嗪通过混合酸酐方法得到6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂。
所述步骤1)的具体操作为：将2-氨基-6-溴吡啶溶于无水二氯甲烷中，加入无水三乙胺，冰浴搅拌30分钟，然后在冰浴条件下滴加酰氯的无水二氯甲烷溶液，滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜；反应结束后，用二氯甲烷稀释，洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，再经柱色谱分离，得到N-(6-溴吡啶-2-基)酰胺；
所述步骤2)的具体操作为：将N-(6-溴吡啶-2-基)酰胺、对羧基苯硼酸、四三苯基膦钯及碳酸铯溶于乙腈和水的混合溶液中，升温至90℃反应48小时，反应完后抽滤，滤液冷却至室温后用盐酸调节pH值至析出固体，过滤，得4-[6-(酰胺)吡啶-2-基]苯甲酸。
所述步骤3)的具体操作为：将含不同取代基的苯甲酸溶于无水二氯甲烷中，加入三乙胺和特戊酰氯，在室温下搅拌至澄清，然后反应4小时，得混合酸酐中间体；反应完后，一次性加入哌嗪的无水乙醇溶液，在室温下反应过夜，反应结束后，加浓盐酸，然后用二氯甲烷萃取，弃去二氯甲烷相，水相用氢氧化钠调至碱性，再用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，得含不同取代基的苯甲酰哌嗪；
所述步骤4)的具体操作为：将4-[6-(酰胺)吡啶-2-基]苯甲酸和4-甲基吗啉依次加入到无水二氯甲烷中，在冰浴条件下，滴加氯甲酸异丁酯的二氯甲烷溶液，在0℃下反应30～40min；反应完后，在冰浴条件下，滴加含不同取代基的苯甲酰哌嗪和4-甲基吗啉的二氯甲烷溶液，滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜，反应结束后，加入二氯甲烷稀释，洗涤，然后有机相用无水硫酸铵干燥，再经柱色谱分离纯化，得6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂。
所述的对羧基苯硼酸的制备步骤为：对溴甲苯通过格式反应制备格式试剂，格式试剂与硼酸三甲酯反应得到对甲基苯硼酸酯，对甲基苯硼酸酯水解得到对甲基苯硼酸，对甲基苯硼酸氧化得到对羧基苯硼酸。
对羧基苯硼酸的制备步骤具体为：将Mg条和碘加入反应瓶中，用氮气保护，在加热条件下加入对甲溴苯的无水THF溶液，进行回流反应，反应完后冷却至室温，将反应装置转移到低温反应仪中，加入硼酸三甲酯的无水THF溶液，室温反应，之后加入HCl溶液进行水解，反应完全后，旋除THF，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，抽滤，滤液旋除溶剂，用无水乙醇重结晶得对甲基苯硼酸；将对甲基苯硼酸在冰浴条件下溶于1mol/L的NaOH溶液中，之后滴加到KMnO4、四丁基溴化铵的水溶液中，滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜，再加入少量乙醇淬灭，然后抽滤，滤液用浓盐酸调节pH值至析出固体，得对羧基苯硼酸。
所述的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂在制备Bcr-Abl抑制剂药物中的应用。
所述的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。
所述的抗肿瘤药物为治疗白血病的药物。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂，是新型的具有抗Bcr-Abl激酶活性的化合物，在体外对Bcr-Abl激酶具有良好的抑制活性。Bcr-Abl激酶在细胞信号转导和转化中发挥重要作用，它通过磷酸化和活化一系列下游底物，促使CML成熟粒细胞无限增生。Bcr-Abl在正常细胞中不表达，是治疗CML的理想靶标。Bcr-Abl抑制剂通过抑制Bcr-Abl激酶活性可达到治疗CML的目的。实验结果表明本发明所制备的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂能够有效地抑制Bcr-Abl的活性并抑制肿瘤细胞的生长和增殖，说明所制备的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂可用于制备Bcr-Abl抑制剂药物和抗肿瘤药物。
本发明提供的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法，具有原料易得，反应条件温和，反应过程操作简单，所用试剂便宜的优点。
附图说明
图1为6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂的合成路线图；
其中化合物1为对溴甲苯，化合物2为对溴甲苯的格式试剂，化合物3为对甲基苯硼酸；化合物为4为对羧基苯硼酸，化合物5为2-氨基-6-溴吡啶，化合物6为不同的N-(6-溴吡啶-2-基)酰胺，化合物7为4-[6-(酰胺)吡啶-2-基]苯甲酸，化合物8为不同取代基的苯甲酸，化合物9为不同取代基的苯甲酸特戊酸酐中间体，化合物10为不同取代基的苯甲酰哌嗪，化合物LP1-LP9为目标化合物即6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂。
图中标注的具体为：
(a).Mg,I2,THF,回流,N2；(b)B(OMe)3,THF,-20℃；(c).NaOH(1M),KMnO4,TBAB,H2O；(d)acetyl chloride or methanesulfonyl chloride or pivaloyl chloride,triethylamine,DCM,0℃→r.t.；(e)Pd(Pph3)4,Cs2CO3,CH3CN/H2O(V:V＝3:2),90℃；(f)pivaloyl chloride,TEA,DCM,r.t.30min；(g)ethanol,r.t.；(h)ClCOO-iBu,NMM,DCM,0℃；Mono-acylated piperazine,NMM,DCM,0℃→r.t.
具体实施方式
本发明提供一种具抗肿瘤活性的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂，这类抑制剂在体外体现出Bcr-Abl激酶抑制活性，能够应用于抗肿瘤药物的制备。
下面结合附图和实施例对本发明做详细的说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
本发明提供的具有抗肿瘤活性的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂，其化学结构式为：
其中，R1为酰化基团，R2为单取代基或双取代基，取代基为烷基或卤素。
进一步的，所述的R1为乙酰化基团、甲磺酰化基团或特戊酰化基团。
所述的R2为单取代基时，取代基位于苯环上羧基的间位或对位；
所述的R2为双取代基时，两个取代基不同，取代位置相邻。
下面结合图1中所示的合成路线和具体的合成实例来详细说明6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法和活性筛选。
实施例1
该抑制剂的结构式中，R1为乙酰化基团，R2为间三氟甲基，通过以下步骤制备：
1) 对羧基苯硼酸(化合物4)的制备
在250ml的双颈瓶中加入处理过的Mg条(2.15g，90mmol)，2粒碘，氮气保护，抽真空3次。加热条件下用注射器缓慢加入化合物对甲溴苯(化合物1,60mmol)的无水THF溶液，反应引发后处于回流状态，继续加入剩余溶液，加完后回流反应5小时，得到对溴甲苯的格式试剂(化合物2)，冷却至室温后，将反应装置转移到低温反应仪中，温度调节至-20℃，5分钟后用注射器加入硼酸三甲酯(9.36g，90mmol)的无水THF溶液，加完后室温反应3小时，之后加入100ml 2mol/L的HCl溶液进行水解反应，TLC检测反应。反应完全后，减压旋除THF，水相用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，用水，饱和食盐水洗至中性，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压旋除溶剂，无水乙醇重结晶得对甲基苯硼酸(化合物3)4.66g，产率57％。
将对甲基苯硼酸(化合物3，4.66g，34.26mmol)在冰浴条件下溶于1mol/L的NaOH溶液(103ml)。待溶解后，在冰浴条件下，将上述溶液滴加到KMnO4(16.24g，102.79mmol)、四丁基溴化铵(0.34g)的水(340ml)溶液中。滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜。反应结束后，加入少量乙醇淬灭，抽滤，滤液用浓盐酸调至pH＝2，析出固体，得对羧基苯硼酸(化合物4)5.69g。
2) N-(6-溴吡啶-2-基)乙酰胺(化合物6)的制备
将2-氨基-6-溴吡啶(化合物5，5.19g，30mmol)溶于100ml无水二氯甲烷中，加入20ml无水三乙胺，冰浴搅拌30分钟。冰浴条件下滴加乙酰氯(60mmol，4.24ml)的无水二氯甲烷(40ml)溶液。滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜。反应结束后，用二氯甲烷稀释，水洗(30ml×3)，碳酸氢钠溶液洗(30ml×3)，饱和氯化钠溶液洗(30ml)，然后用无水硫酸钠干燥。再经柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)，得产品5.64g，产率88％。
3) N-(6-溴吡啶-2-基)乙酰胺(化合物6)和对羧基苯硼酸(化合物4)通过SUZUKI偶联反应得到4-[6-(乙酰氨基)吡啶-2-基]苯甲酸(化合物7)
在250ml反应瓶中，加入对羧基苯硼酸(化合物4，2.49g，15mmol)，N-(6-溴吡啶-2-基)乙酰胺(化合物6，3.22g，15mmol)，四三苯基膦钯(0.9g，0.75mmol)，无水碳酸铯(19.5g，60mmol)，之后加入乙腈/水(V:V＝3:2)160ml。N2保护，油浴升至90℃反应48h。反应结束后，趁热抽滤，滤液用6mol/L盐酸调至pH＝4，析出固体，抽滤，滤饼为4-[6-(乙酰氨基)吡啶-2-基]苯甲酸(化合物7)3.76g，产率78％。
4) 间三氟甲基苯甲酸(化合物8)和哌嗪通过混合酸酐法得到1-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪(化合物10)
将间三氟甲基苯甲酸(20mmol，3.80g)溶于80ml无水二氯甲烷中，加入三乙胺(4.6ml，30mmol)和特戊酰氯(2.42ml，20mmol)，室温搅拌至澄清，反应4小时，得到混合酸酐中间体(化合物9)。
反应完后，将哌嗪(3.44g，40mmol)的无水乙醇(80ml)溶液一次性加入，室温反应过夜。反应结束后，加浓盐酸4ml，用二氯甲烷(30ml×2)萃取，弃去二氯甲烷相。水相用氢氧化钠8g调至pH为碱性，用乙酸乙酯萃取(50ml×3)，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，得1-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪(化合物10)4.13g，产率80％。
5) 4-[6-(乙酰氨基)吡啶-2-基]苯甲酸(化合物7)和1-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪(化合物10)通过混合酸酐法得到目标化合物LP1
在100ml反应瓶中，将4-[6-(乙酰氨基)吡啶-2-基]苯甲酸(化合物7，1.02g，4.0mmol)、4-甲基吗啉(1.3ml，12mmol)依次加入到15ml无水二氯甲烷中。在冰浴条件下，将氯甲酸异丁酯(0.8ml，6mmol)的二氯甲烷(8ml)溶液缓慢滴加到上述溶液中，在0℃下反应30分钟。反应完后，在冰浴条件下，将1-[3-(三氟甲基)苯甲酰基](化合物10，6mmol)和4-甲基吗啉(1.3ml，12mmol)的二氯甲烷溶液(10ml)加入到上述反应体系中。滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜。反应结束后，加入二氯甲烷(20ml)稀释，水洗(10mL×2)，饱和碳酸钠溶液洗(10mL×3)，饱和氯化钠溶液洗(10mL)。有机相用无水硫酸铵干燥，再经柱色谱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:3)，得目标化合物LP10.53g，产率27％。
所得化合物的结构如下所示：
其理化性质为：Mp 214-216℃,EI-MS(m/z):496([M]+)。
氢谱核磁共振数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝8.16(d,J＝8.1Hz,2H),8.06(d,J＝8.1Hz,1H),7.87(dd,J＝15.7,7.6Hz,2H),7.80(s,1H),7.76(d,J＝7.4Hz,1H),7.71(d,J＝7.3Hz,2H),7.56(d,J＝7.1Hz,2H),3.37-3.71(m,8H),2.14(s,3H).
实施例2
该抑制剂的结构式中，R1为甲磺酰化基团，R2为4-氯-3-三氟甲基，通过以下步骤制备：
步骤1) 与实施例1中步骤1)相同，即由对溴甲苯(化合物1)制备对羧基苯硼酸(化合物4)。
2) N-(6-溴吡啶-2-基)甲磺酰胺(化合物6)的制备
将2-氨基-6-溴吡啶(化合物5，5.19g，30mmol)溶于100ml无水二氯甲烷中，加入20ml无水三乙胺，冰浴搅拌30分钟。冰浴条件下滴加甲磺酰氯(60mmol，4.64ml)的无水二氯甲烷(40ml)溶液。滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜。反应结束后，用二氯甲烷稀释，水洗(30ml×3)，碳酸氢钠溶液洗(30ml×3)，饱和氯化钠溶液洗(30ml)，无水硫酸钠干燥。再经柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯＝1：7)，得产品6.40g，产率85％。
3) N-(6-溴吡啶-2-基)甲磺酰胺(化合物6)和对羧基苯硼酸(化合物4)通过SUZUKI偶联反应得到4-{6-[(甲基磺酰基)氨基]吡啶-2-基}苯甲酸(化合物7)
在250ml反应瓶中，加入对羧基苯硼酸(化合物4，2.49g，15mmol)，N-(6-溴吡啶-2-基)甲磺酰胺(化合物6，3.76g，15mmol)，四三苯基膦钯(0.9g，0.75mmol)，无水碳酸铯(19.5g，60mmol)，之后加入乙腈/水(V:V＝3:2)160ml。N2保护，油浴升至90℃反应48h。反应结束后，趁热抽滤，滤液用6mol/L盐酸调至pH＝4，析出固体，抽滤，滤饼为4-{6-[(甲基磺酰基)氨基]吡啶-2-基}苯甲酸(化合物7)2.76g，产率63％。
4) 4-氯-3-三氟甲基苯甲酸(化合物8)和哌嗪通过混合酸酐法得到1-[4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪(化合物10)
将4-氯-3-三氟甲基苯甲酸(20mmol，4.49g)溶于80ml无水二氯甲烷中，加入三乙胺(4.6ml，30mmol)和特戊酰氯(2.42ml，20mmol)，室温搅拌至澄清，反应4小时，得到混合酸酐中间体(化合物9)。
反应完后，将哌嗪(3.44g，40mmol)的无水乙醇(80ml)溶液一次性加入，室温反应过夜。反应结束后，加浓盐酸4ml，用二氯甲烷(30ml×2)萃取，弃去二氯甲烷相。水相用氢氧化钠8g调至pH为碱性，用乙酸乙酯萃取(50ml×3)，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，得1-[4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪(化合物10)4.68g，产率80％。
5) 4-{6-[(甲基磺酰基)氨基]吡啶-2-基}苯甲酸(化合物7)和1-[4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪(化合物10)通过混合酸酐法得到目标化合物LP5
在100ml反应瓶中，将4-{6-[(甲基磺酰基)氨基]吡啶-2-基}苯甲酸(化合物7，1.17g，4.0mmol)、4-甲基吗啉(1.3ml，12mmol)依次加入到15ml无水二氯甲烷中。在冰浴条件下，将氯甲酸异丁酯(0.8ml，6mmol)的二氯甲烷(8ml)溶液缓慢滴加到上述溶液中，在0℃下反应40分钟。
反应完后，在冰浴条件下，将1-[4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪(化合物10，6mmol)和4-甲基吗啉(1.3ml，12mmol)的二氯甲烷溶液(10ml)加入到上述反应体系中。滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜。反应结束后，加入二氯甲烷(20ml)稀释，水洗(10mL×2)，饱和碳酸钠溶液洗(10mL×3)，饱和氯化钠溶液洗(10mL)。有机相用无水硫酸铵干燥，再经柱色谱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1：7)，得目标化合物LP50.36g，产率16％。
所得化合物的结构如下所示：
其理化性质为：Mp 120-122℃,EI-MS(m/z):566([M]+)。
氢谱核磁共振数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝8.13(d,J＝8.0Hz,2H),7.91(s,1H),7.84(d,J＝7.9Hz,2H),7.78(s,1H),7.68(d,J＝7.6Hz,1H),7.56(d,J＝7.6Hz,2H),6.92(d,J＝8.1Hz,1H),3.44(s,3H),3.79–3.39(m,8H).
实施例3
该抑制剂的结构式中，R1为特戊酰化基团，R2为对叔丁基，通过以下步骤制备：
步骤1) 与实施例1中步骤1)相同，即由对溴甲苯(化合物1)制备对羧基苯硼酸(化合物4)。
2) N-(6-溴吡啶-2-基)-2,2-二甲基丙酰胺(化合物6)的制备
将2-氨基-6-溴吡啶(化合物5，5.19g，30mmol)溶于100ml无水二氯甲烷中，加入20ml无水三乙胺，冰浴搅拌30分钟。冰浴条件下滴加特戊酰氯(60mmol，7.39ml)的无水二氯甲烷(40ml)溶液。滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜。反应结束后，用二氯甲烷稀释，水洗(30ml×3)，碳酸氢钠溶液洗(30ml×3)，饱和氯化钠溶液洗(30ml)，然后用无水硫酸钠干燥。再经柱色谱分离(石油醚)，得产品6.93g，产率90％。
3) N-(6-溴吡啶-2-基)-2,2-二甲基丙酰胺(化合物6)和对羧基苯硼酸(化合物4)通过SUZUKI偶联反应得到4-{6-[(2,2-二甲基丙酰基)氨基]吡啶-2-基}苯甲酸(化合物7)
在250ml反应瓶中，加入对羧基苯硼酸(化合物4，2.49g，15mmol)，N-(6-溴吡啶-2-基)-2,2-二甲基丙酰胺(化合物6，3.85g，15mmol)，四三苯基膦钯(0.9g，0.75mmol)，无水碳酸铯(19.5g，60mmol)，之后加入乙腈/水(V:V＝3:2)160ml。N2保护，油浴升至90℃反应48h。反应结束后，趁热抽滤，滤液用6mol/L盐酸调至pH＝4，析出固体，抽滤，滤饼为4-{6-[(2,2-二甲基丙酰基)氨基]吡啶-2-基}苯甲酸(化合物7)3.49g，产率78％。
4) 对叔丁基苯甲酸(化合物8)和哌嗪通过混合酸酐法得到1-(4-叔丁基苯甲酰基)哌嗪(化合物10)
将对叔丁基苯甲酸(20mmol，3.56g)溶于80ml无水二氯甲烷中，加入三乙胺(4.6ml，30mmol)和特戊酰氯(2.42ml，20mmol)，室温搅拌至澄清，反应4小时，得到混合酸酐中间体(化合物9)。
反应完后，将哌嗪(3.44g，40mmol)的无水乙醇(80ml)溶液一次性加入，室温反应过夜。反应结束后，加浓盐酸4ml，用二氯甲烷(30ml×2)萃取，弃去二氯甲烷相。水相用氢氧化钠8g调至pH为碱性，用乙酸乙酯萃取(50ml×3)，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，得1-(4-叔丁基苯甲酰基)哌嗪(化合物10)4.09g，产率83％。
5) 4-{6-[(2,2-二甲基丙酰基)氨基]吡啶-2-基}苯甲酸(化合物7)和1-(4-叔丁基苯甲酰基)哌嗪(化合物10)通过混合酸酐法得到目标化合物LP9
在100ml反应瓶中，将4-{6-[(2,2-二甲基丙酰基)氨基]吡啶-2-基}苯甲酸(化合物7，1.19g，4.0mmol)、4-甲基吗啉(1.3ml，12mmol)依次加入到15ml无水二氯甲烷中。在冰浴条件下，将氯甲酸异丁酯(0.8ml，6mmol)的二氯甲烷(8ml)溶液缓慢滴加到上述溶液中，在0℃下反应35分钟。
反应完后，在冰浴条件下，将1-(4-叔丁基苯甲酰基)哌嗪(化合物10，6mmol)和4-甲基吗啉(1.3ml，12mmol)的二氯甲烷溶液(10ml)加入到上述反应体系中。滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜。反应结束后，加入二氯甲烷(20ml)稀释，水洗(10mL×2)，饱和碳酸钠溶液洗(10mL×3)，饱和氯化钠溶液洗(10mL)。有机相用无水硫酸铵干燥，再经柱色谱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)，得目标化合物LP90.59g，产率28％。
所得化合物的结构如下所示：
其理化性质为：Mp 237-240℃,EI-MS(m/z):526([M]+)。
氢谱核磁共振数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝8.20(d,J＝7.9Hz,2H),8.03(d,J＝8.2Hz,1H),7.89(t,J＝8.0Hz,1H),7.73(d,J＝7.6Hz,1H),7.55(d,J＝8.1Hz,2H),7.48(d,J＝7.8Hz,2H),7.38(d,J＝8.2Hz,2H),3.78–3.42(m,8H),1.30(s,9H),1.28(s,9H).
下面测定本发明提供的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂对Bcr-Abl酪氨酸激酶的抑制活性。
测定方法具体如下：
激酶ABL1和底物Abltide购自Signal-Chem公司，选用Promega公司的ADP-GlobTM Kinase Assays检测试剂盒检测目标化合物的抑酶活性，操作方法按照试剂盒说明进行。
将ATP(1mM)用buffer(2×)(Tris 80mM,MgCl220mM,BSA 0.2mg/mL,DTT2mM)稀释80倍配制成ATP(125μM)的buffer(2×)溶液；将125μM的ATP溶液和Abltide溶液体积1:1混合配制成ATP(62.5μM)-Abltide(0.5μg/μl)的混合溶液备用；ABL1激酶溶液用buffer(1×)(Tris 40mM,MgCl210mM,BSA0.1mg/mL,DTT 1mM)稀释100倍配制成ABL1(10ng/μl)的buffer(1×)溶液备用；
将目标化合物(LP1～LP9)和阳性对照药(Imatinib)用buffer(1×)分别配制成1.5×10-5mol/L，1.5×10-6mol/L，1.5×10-7mol/L，1.5×10-8，1.5×10-9，1.5×10-10mol/L浓度梯度的样品溶液，于384孔板上每孔依次加入2μLATP-Abltide的混合溶液，1μL样品溶液，2μL酶溶液；空白孔加3μL缓冲液和2μLATP-Abltide的混合溶液；对照孔加2μL ATP-Abltide的混合溶液，1μL缓冲液，2μL酶溶液，加毕，30℃下孵育60min；加入ADP-Glo试剂5μL，在25℃下孵育40min；加入Kinase detection试剂，再在25℃下孵育30min。采用PerkinElmer多功能酶标仪的化学发光模块测定每孔的发光值，计算抑制剂对ABL1的抑制率和IC50。
本发明提供的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂的结构式为：
本发明提供的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂对Bcr-Abl酪氨酸激酶抑制活性结果，如表1所示。
表1抑制剂对Bcr-Abl酪氨酸激酶的抑制活性结果(IC50)
结果显示6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂对Bcr-Abl激酶具有较强的抑制活性，Bcr-Abl激酶在细胞信号转导和转化中发挥重要作用，它通过磷酸化和活化一系列下游底物，促使CML成熟粒细胞无限增生，Bcr-Abl在正常细胞中不表达，是治疗CML的理想靶标。Bcr-Abl抑制剂通过抑制Bcr-Abl激酶活性可达到治疗CML的目的。
下面测定本发明提供的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂对肿瘤细胞的生长抑制活性。
采用MTT法检验6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂对肿瘤细胞的生长抑制活性：
本发明提供的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂具有抗肿瘤作用，对肿瘤细胞有体外抑制增殖活性，在人白血病细胞(K562细胞)中具有抑制肿瘤细胞的增殖活性，可以用于对白血病的治疗。
取对数生长期的人白血病细胞(K562细胞)，用RPMI1640培养基稀释成104个/mL的细胞溶液，平行接种于96孔培养板中(2000个/孔)，每孔接种体积为200μL，37℃、5％CO2培养箱中培养12h；
每孔加入不同浓度的待测化合物20μL，使孔中化合物的终浓度为：1.5×10-7mol/L，1.5×10-6mol/L，1.5×10-5mol/L，1.5×10-4mol/L，每个浓度设3个复孔，阴性对照加细胞不加化合物，设6个复孔，尼罗替尼为阳性对照，继续培养48h；
每孔加入MTT(5mg/mL)10μL，使孔中MTT的终浓度0.5mg/mL，37℃培养箱孵育4h，小心吸弃上清，每孔加DMSO150μL，振荡15min，酶联免疫检测仪测量各孔490nm处的紫外吸收值(OD值)，然后计算细胞抑制率，并根据抑制率求出IC50值；
细胞抑制率的计算公式为：
抑制率％＝(对照孔平均OD值-用药组平均OD值)/对照孔平均OD值×100％
检测结果显示：与阴性对照组相比，6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂对上述肿瘤细胞具有不同程度的体外抑制作用。
本发明提供的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂对肿瘤细胞的抑制结果如表2所示。
表2抑制剂对K562的抑制活性结果IC50(μM)
结果显示本发明所制备的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂能够抑制肿瘤细胞的生长，说明6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂对肿瘤细胞的增殖抑制效果良好，可应用于抗肿瘤药物的制备。
Claims (10)
1.一种6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂，其特征在于，具有如下结构式：
其中，R1为酰化基团，R2为单取代基或双取代基，取代基为烷基或卤素。
2.如权利要求1所述的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂，其特征在于，所述的R1为乙酰化基团、甲磺酰化基团或特戊酰化基团。
3.如权利要求1或2所述的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂，其特征在于，所述的R2为单取代基时，取代基位于苯环上羧基的间位或对位；
所述的R2为双取代基时，两个取代基不同，取代位置相邻。
4.权利要求1-3中任意一项所述的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)2-氨基-6-溴吡啶和不同的酰氯反应得到不同的N-(6-溴吡啶-2-基)酰胺；
2)不同的N-(6-溴吡啶-2-基)酰胺和对羧基苯硼酸通过SUZUKI偶联反应得到4-[6-(酰胺)吡啶-2-基]苯甲酸；
3)含取代基的苯甲酰哌嗪的制备：含不同取代基的苯甲酸和特戊酰氯反应生成混合酸酐中间体，再和哌嗪反应得到含不同取代基的苯甲酰哌嗪；
4)不同的4-[6-(酰胺)吡啶-2-基]苯甲酸与含不同取代基的苯甲酰哌嗪通过混合酸酐方法得到6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂。
5.根据权利要求4所述的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤1)的具体操作为：将2-氨基-6-溴吡啶溶于无水二氯甲烷中，加入无水三乙胺，冰浴搅拌30分钟，然后在冰浴条件下滴加酰氯的无水二氯甲烷溶液，滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜；反应结束后，用二氯甲烷稀释，洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，再经柱色谱分离，得到N-(6-溴吡啶-2-基)酰胺；
所述步骤2)的具体操作为：将N-(6-溴吡啶-2-基)酰胺、对羧基苯硼酸、四三苯基膦钯及碳酸铯溶于乙腈和水的混合溶液中，升温至90℃反应48小时，反应完后抽滤，滤液冷却至室温后用盐酸调节pH值至析出固体，过滤，得4-[6-(酰胺)吡啶-2-基]苯甲酸。
6.根据权利要求4所述的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤3)的具体操作为：将含不同取代基的苯甲酸溶于无水二氯甲烷中，加入三乙胺和特戊酰氯，在室温下搅拌至澄清，然后反应4小时，得混合酸酐中间体；反应完后，一次性加入哌嗪的无水乙醇溶液，在室温下反应过夜，反应结束后，加浓盐酸，然后用二氯甲烷萃取，弃去二氯甲烷相，水相用氢氧化钠调至碱性，再用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，得含不同取代基的苯甲酰哌嗪；
所述步骤4)的具体操作为：将4-[6-(酰胺)吡啶-2-基]苯甲酸和4-甲基吗啉依次加入到无水二氯甲烷中，在冰浴条件下，滴加氯甲酸异丁酯的二氯甲烷溶液，在0℃下反应30～40min；反应完后，在冰浴条件下，滴加含不同取代基的苯甲酰哌嗪和4-甲基吗啉的二氯甲烷溶液，滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜，反应结束后，加入二氯甲烷稀释，洗涤，然后有机相用无水硫酸铵干燥，再经柱色谱分离纯化，得6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂。
7.根据权利要求4所述的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法，其特征在于，所述的对羧基苯硼酸的制备步骤为：对溴甲苯通过格式反应制备格式试剂，格式试剂与硼酸三甲酯反应得到对甲基苯硼酸酯，对甲基苯硼酸酯水解得到对甲基苯硼酸，对甲基苯硼酸氧化得到对羧基苯硼酸。
8.权利要求1-3中任意一项所述的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂在制备Bcr-Abl抑制剂药物中的应用。
9.权利要求1-3中任意一项所述的6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于：所述的抗肿瘤药物为治疗白血病的药物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410437924.8A CN104262245B (zh) | 2014-08-29 | 2014-08-29 | 一种6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410437924.8A CN104262245B (zh) | 2014-08-29 | 2014-08-29 | 一种6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂及其制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104262245A true CN104262245A (zh) | 2015-01-07 |
| CN104262245B CN104262245B (zh) | 2016-06-29 |
Family
ID=52153863
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410437924.8A Expired - Fee Related CN104262245B (zh) | 2014-08-29 | 2014-08-29 | 一种6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104262245B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109796439A (zh) * | 2019-01-18 | 2019-05-24 | 西安交通大学 | 一种羟脯氨酸类肽衍生物及其制备方法和应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101732383A (zh) * | 2009-12-11 | 2010-06-16 | 暨南大学 | 一种鹅不食草总倍半萜内酯提取物及其制备方法和应用 |
| WO2013009827A1 (en) * | 2011-07-13 | 2013-01-17 | Tempero Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treatment |
| CN103980152A (zh) * | 2014-05-30 | 2014-08-13 | 西安交通大学 | 具有抗肿瘤活性的苯甲酰胺化合物及其制备方法和应用 |
-
2014
- 2014-08-29 CN CN201410437924.8A patent/CN104262245B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101732383A (zh) * | 2009-12-11 | 2010-06-16 | 暨南大学 | 一种鹅不食草总倍半萜内酯提取物及其制备方法和应用 |
| WO2013009827A1 (en) * | 2011-07-13 | 2013-01-17 | Tempero Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treatment |
| CN103980152A (zh) * | 2014-05-30 | 2014-08-13 | 西安交通大学 | 具有抗肿瘤活性的苯甲酰胺化合物及其制备方法和应用 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109796439A (zh) * | 2019-01-18 | 2019-05-24 | 西安交通大学 | 一种羟脯氨酸类肽衍生物及其制备方法和应用 |
| CN109796439B (zh) * | 2019-01-18 | 2020-05-19 | 西安交通大学 | 一种羟脯氨酸类肽衍生物及其制备方法和应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104262245B (zh) | 2016-06-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7026196B2 (ja) | Ｒｅｔの阻害剤 | |
| CN105263326B (zh) | 甲基/氟-吡啶基-甲氧基取代的吡啶酮-吡啶基化合物及氟-嘧啶基-甲氧基取代的吡啶酮-吡啶基化合物 | |
| CN103249721B (zh) | 作为ttx-s阻滞剂的芳胺衍生物 | |
| CN108727307A (zh) | 化合物及其使用方法 | |
| CN105153026B (zh) | 含联芳基酰胺结构的索拉非尼衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN105732615A (zh) | Cdk激酶抑制剂 | |
| CN104817493A (zh) | 一种芳杂环酰胺取代的二芳基脲化合物及其制备方法和应用 | |
| Shan et al. | Expanding the structural diversity of diarylureas as multi-target tyrosine kinase inhibitors | |
| CN106146412B (zh) | 喹唑啉衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN106243044A (zh) | 含卤代丙烯酰胺侧链的嘧啶类衍生物及制备和应用 | |
| CN111704603B (zh) | 一种抗肿瘤化合物及其应用 | |
| CN104262263B (zh) | 一种N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂及其制备方法和应用 | |
| CN104262245A (zh) | 一种6-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl抑制剂及其制备方法和应用 | |
| CN104262262B (zh) | 一种N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂及其制备方法和应用 | |
| CN107001317A (zh) | 高选择性取代嘧啶类pi3k抑制剂 | |
| CN105418615A (zh) | 苯甲酰胺衍生物及制备和应用 | |
| CN104693123A (zh) | 一种1h-吲唑-3-氨基联苯类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN104262244A (zh) | 一种5-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl 抑制剂及其制备方法和应用 | |
| CN102066328A (zh) | 亚氨基吡啶衍生物及其用途 | |
| CN104262244B (zh) | 一种5-苯基吡啶-2-胺类Bcr-Abl 抑制剂及其制备方法和应用 | |
| CN107935995A (zh) | 一种新型2‑苯胺基嘧啶衍生物及其在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN105541792B (zh) | 多环类pi3k抑制剂 | |
| CN110845476B (zh) | 一种高选择性csf1r抑制剂、其制备方法和在药学上的应用 | |
| CN109761957B (zh) | 一种含有羟脯氨酸的化合物及其制备方法和应用 | |
| CN104262246A (zh) | 一种5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl 抑制剂及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20160629 Termination date: 20190829 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |