CN104072546A - 一种提取水牛果素a的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提取水牛果素A的方法,其特征在于包括:以银水牛果的叶为原料,通过组织破碎、纤维素酶酶解得到酶解原料,加入闪式提取器中,进行闪式提取,过滤得到提取液,浓缩干燥,再利用高压硅胶柱层析纯化,收集水牛果素A流分,减压浓缩,乙酸乙酯重结晶得到水牛果素A。本发明的方法操作简单,适合规模化生产,且能耗低、污染小、生产周期短,是一种易于工业化的生产工艺。
Description
技术领域
本发明属于中药化学技术领域,涉及一种一种提取水牛果素A的方法。
背景技术
水牛果素A(Shephagenin A),分子式为C48H32O32,分子量为1120.75,结构式为:
水牛果素A是从胡颓子科(Elaeagnaceae) 银水牛果 Shepherdia argentea Nutt.叶中分离得到一种活性化合物。药理研究表明,水牛果素A具有抗HIV-1逆转录酶,IC50为0.049μM,强于阳性对照物(-)-epigallocatechin gallate(IC50为0.25μM)。
现有技术中,尚未见工业化制备水牛果素A的生产工艺报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种提取水牛果素A的方法。
为实现上述目的,本发明采用以下技术方案:
一种提取水牛果素A的方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)以银水牛果的叶为原料,放入高速组织捣碎机,在转速为18000rpm条件下保持3-5min后,过40目筛备用;
(2)原料按照料液比1:4-6(g/ml)的比例加入乙醇水溶液后,再加入0.3-0.5%的纤维素酶,在超声功率500-700W、45-60℃条件下酶解60-90min,得到酶解原料;
(3)将酶解原料投入加入闪式提取器中,加入提取溶剂,进行闪式提取,过滤得到提取液,浓缩干燥得到粗提物;
(4)将所得粗提物用甲醇溶解,干法上样至高压硅胶柱层析纯化,氯仿-甲醇溶剂***梯度洗脱,收集水牛果素A流分,减压浓缩,冷却析晶,得粗晶;
(5)将粗晶用乙酸乙酯重结晶得到水牛果素A白色结晶。
所述步骤(2)中乙醇水溶液体积百分比为70-80%。
所述步骤(2)中提取溶剂为70-85%的乙醇溶液。
所述步骤(3)中闪式提取电压为150V,提取时间为3-5min。
所述步骤(4)中所述高压硅胶柱层析,硅胶目数为200目,耐压35MPa,柱内径为250mm,层析柱径高比为1:10。
所述步骤(4)中所述氯仿-甲醇的体积比为1:1-1:13。
本发明的有益效果是:本发明操作简单,耗时短,得率高,易规模化生产;采用高压层析柱,上样量大,生产周期短,分离度好,产品纯度高。
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明,但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式:
实施例1:
以银水牛果的叶为原料,切成1cm左右段状,放入高速组织捣碎机,在转速为18000rpm条件下保持5min后,过40目筛备用,称取1kg,按照料液比1:4(g/ml)的比例加入80%乙醇水溶液后,再加入0.5%的纤维素酶,在超声功率700W、50℃条件下酶解70min,得到酶解原料,加入闪式提取器中,加入6L80%的乙醇溶液作为提取溶剂,提取电压为150V,提取时间为3min,进行闪式提取2次,过滤得到提取液,提取液浓缩干燥后得到粗提物,用甲醇溶解,干法上样至高压硅胶(硅胶目数为200目)柱层析纯化,耐压35MPa,柱内径为250mm,层析柱径高比为1:10,氯仿-甲醇按体积比为1:1、1:6、1:13梯度洗脱,收集水牛果素A流分,减压浓缩,冷却析晶,得粗晶,粗晶用乙酸乙酯重结晶得到水牛果素A白色结晶,含量为95.8%。
实施例2:
以银水牛果的叶为原料,切成1cm左右段状,放入高速组织捣碎机,在转速为18000rpm条件下保持3min后,过40目筛备用,称取1kg,按照料液比1:6(g/ml)的比例加入70%乙醇水溶液后,再加入0.4%的纤维素酶,在超声功率700W、45℃条件下酶解90min,得到酶解原料,加入闪式提取器中,加入4.5L75%的乙醇溶液作为提取溶剂,提取电压为150V,提取时间为5min,进行闪式提取2次,过滤得到提取液,提取液浓缩干燥后得到粗提物,用甲醇溶解,干法上样至高压硅胶(硅胶目数为200目)柱层析纯化,耐压35MPa,柱内径为250mm,层析柱径高比为1:10,氯仿-甲醇按体积比为1:1、1:7、1:13梯度洗脱,收集水牛果素A流分,减压浓缩,冷却析晶,得粗晶,粗晶用乙酸乙酯重结晶得到水牛果素A白色结晶,含量为94.4%。
实施例3:
以银水牛果的叶为原料,切成1cm左右段状,放入高速组织捣碎机,在转速为18000rpm条件下保持5min后,过40目筛备用,称取1kg,按照料液比1:5(g/ml)的比例加入75%乙醇水溶液后,再加入0.5%的纤维素酶,在超声功率600W、55℃条件下酶解75min,得到酶解原料,加入闪式提取器中,加入4L70%的乙醇溶液作为提取溶剂,提取电压为150V,提取时间为4min,进行闪式提取2次,过滤得到提取液,提取液浓缩干燥后得到粗提物,用甲醇溶解,干法上样至高压硅胶(硅胶目数为200目)柱层析纯化,耐压35MPa,柱内径为250mm,层析柱径高比为1:10,氯仿-甲醇按体积比为1:1、1:5、1:12梯度洗脱,收集水牛果素A流分,减压浓缩,冷却析晶,得粗晶,粗晶用乙酸乙酯重结晶得到水牛果素A白色结晶,含量为95.4%。
实施例4:
以银水牛果的叶为原料,切成1cm左右段状,放入高速组织捣碎机,在转速为18000rpm条件下保持5min后,过40目筛备用,称取1kg,按照料液比1:6(g/ml)的比例加入75%乙醇水溶液后,再加入0.3%的纤维素酶,在超声功率500W、60℃条件下酶解60min,得到酶解原料,加入闪式提取器中,加入5L85%的乙醇溶液作为提取溶剂,提取电压为150V,提取时间为3min,进行闪式提取2次,过滤得到提取液,提取液浓缩干燥后得到粗提物,用甲醇溶解,干法上样至高压硅胶(硅胶目数为200目)柱层析纯化,耐压35MPa,柱内径为250mm,层析柱径高比为1:10,氯仿-甲醇按体积比为1:1、1:7、1:13梯度洗脱,收集水牛果素A流分,减压浓缩,冷却析晶,得粗晶,粗晶用乙酸乙酯重结晶得到水牛果素A白色结晶,含量为94.9%。
Claims (6)
1. 一种提取水牛果素A的方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)以银水牛果的叶为原料,放入高速组织捣碎机,在转速为18000rpm条件下保持3-5min后,过40目筛备用;
(2)原料按照料液比1:4-6(g/ml)的比例加入乙醇水溶液后,再加入0.3-0.5%的纤维素酶,在超声功率500-700W、45-60℃条件下酶解60-90min,得到酶解原料;
(3)将酶解原料投入加入闪式提取器中,进行闪式提取,过滤得到提取液,浓缩干燥得到粗提物;
(4)将所得粗提物用甲醇溶解,干法上样至高压硅胶柱层析纯化,氯仿-甲醇溶剂***梯度洗脱,收集水牛果素A流分,减压浓缩,冷却析晶,得粗晶;
(5)将粗晶用乙酸乙酯重结晶得到水牛果素A结晶。
2. 如权利要求1所述的一种提取水牛果素A的方法,其特征在于所述步骤(2)中乙醇水溶液体积百分比为70-80%。
3. 如权利要求1所述的一种提取水牛果素A的方法,其特征在于所述步骤(2)中提取溶剂为70-85%的乙醇溶液。
4. 如权利要求1所述的一种提取水牛果素A的方法,其特征在于所述步骤(3)中闪式提取电压为150V,提取时间为3-5min。
5. 如权利要求1所述的一种提取水牛果素A的方法,其特征在于所述步骤(4)中所述高压硅胶柱层析,硅胶目数为200目,耐压35MPa,柱内径为250mm,层析柱径高比为1:10。
6. 如权利要求1所述的一种提取水牛果素A的方法,其特征在于所述步骤(4)中所述氯仿-甲醇的体积比为1:1-1:13。
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