CN104072546A - 一种提取水牛果素a的方法 - Google Patents

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刘东锋
杨成东
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Abstract

本发明公开了一种提取水牛果素A的方法，其特征在于包括：以银水牛果的叶为原料，通过组织破碎、纤维素酶酶解得到酶解原料，加入闪式提取器中，进行闪式提取，过滤得到提取液，浓缩干燥，再利用高压硅胶柱层析纯化，收集水牛果素A流分，减压浓缩，乙酸乙酯重结晶得到水牛果素A。本发明的方法操作简单，适合规模化生产，且能耗低、污染小、生产周期短，是一种易于工业化的生产工艺。

Description

一种提取水牛果素A的方法
技术领域
本发明属于中药化学技术领域，涉及一种一种提取水牛果素A的方法。
背景技术
水牛果素A（Shephagenin A），分子式为C48H32O32，分子量为1120.75，结构式为：
水牛果素A是从胡颓子科(Elaeagnaceae) 银水牛果 Shepherdia argentea Nutt.叶中分离得到一种活性化合物。药理研究表明，水牛果素A具有抗HIV-1逆转录酶，IC50为0.049μM，强于阳性对照物(-)-epigallocatechin gallate(IC50为0.25μM)。
现有技术中，尚未见工业化制备水牛果素A的生产工艺报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种提取水牛果素A的方法。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种提取水牛果素A的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）以银水牛果的叶为原料，放入高速组织捣碎机，在转速为18000rpm条件下保持3-5min后，过40目筛备用；
（2）原料按照料液比1:4-6（g/ml）的比例加入乙醇水溶液后，再加入0.3-0.5%的纤维素酶，在超声功率500-700W、45-60℃条件下酶解60-90min，得到酶解原料；
（3）将酶解原料投入加入闪式提取器中，加入提取溶剂，进行闪式提取，过滤得到提取液，浓缩干燥得到粗提物；
（4）将所得粗提物用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶柱层析纯化，氯仿-甲醇溶剂***梯度洗脱，收集水牛果素A流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶；
（5）将粗晶用乙酸乙酯重结晶得到水牛果素A白色结晶。
所述步骤（2）中乙醇水溶液体积百分比为70-80%。
所述步骤（2）中提取溶剂为70-85%的乙醇溶液。
所述步骤（3）中闪式提取电压为150V，提取时间为3-5min。
所述步骤（4）中所述高压硅胶柱层析，硅胶目数为200目，耐压35MPa，柱内径为250mm，层析柱径高比为1：10。
所述步骤（4）中所述氯仿-甲醇的体积比为1:1-1:13。
本发明的有益效果是：本发明操作简单，耗时短，得率高，易规模化生产；采用高压层析柱，上样量大，生产周期短，分离度好，产品纯度高。
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式：
实施例1：
以银水牛果的叶为原料，切成1cm左右段状，放入高速组织捣碎机，在转速为18000rpm条件下保持5min后，过40目筛备用，称取1kg，按照料液比1:4（g/ml）的比例加入80%乙醇水溶液后，再加入0.5%的纤维素酶，在超声功率700W、50℃条件下酶解70min，得到酶解原料，加入闪式提取器中，加入6L80%的乙醇溶液作为提取溶剂，提取电压为150V，提取时间为3min，进行闪式提取2次，过滤得到提取液，提取液浓缩干燥后得到粗提物，用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶（硅胶目数为200目）柱层析纯化，耐压35MPa，柱内径为250mm，层析柱径高比为1：10，氯仿-甲醇按体积比为1:1、1:6、1:13梯度洗脱，收集水牛果素A流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶，粗晶用乙酸乙酯重结晶得到水牛果素A白色结晶，含量为95.8%。
实施例2：
以银水牛果的叶为原料，切成1cm左右段状，放入高速组织捣碎机，在转速为18000rpm条件下保持3min后，过40目筛备用，称取1kg，按照料液比1:6（g/ml）的比例加入70%乙醇水溶液后，再加入0.4%的纤维素酶，在超声功率700W、45℃条件下酶解90min，得到酶解原料，加入闪式提取器中，加入4.5L75%的乙醇溶液作为提取溶剂，提取电压为150V，提取时间为5min，进行闪式提取2次，过滤得到提取液，提取液浓缩干燥后得到粗提物，用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶（硅胶目数为200目）柱层析纯化，耐压35MPa，柱内径为250mm，层析柱径高比为1：10，氯仿-甲醇按体积比为1:1、1:7、1:13梯度洗脱，收集水牛果素A流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶，粗晶用乙酸乙酯重结晶得到水牛果素A白色结晶，含量为94.4%。
实施例3：
以银水牛果的叶为原料，切成1cm左右段状，放入高速组织捣碎机，在转速为18000rpm条件下保持5min后，过40目筛备用，称取1kg，按照料液比1:5（g/ml）的比例加入75%乙醇水溶液后，再加入0.5%的纤维素酶，在超声功率600W、55℃条件下酶解75min，得到酶解原料，加入闪式提取器中，加入4L70%的乙醇溶液作为提取溶剂，提取电压为150V，提取时间为4min，进行闪式提取2次，过滤得到提取液，提取液浓缩干燥后得到粗提物，用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶（硅胶目数为200目）柱层析纯化，耐压35MPa，柱内径为250mm，层析柱径高比为1：10，氯仿-甲醇按体积比为1:1、1:5、1:12梯度洗脱，收集水牛果素A流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶，粗晶用乙酸乙酯重结晶得到水牛果素A白色结晶，含量为95.4%。
实施例4：
以银水牛果的叶为原料，切成1cm左右段状，放入高速组织捣碎机，在转速为18000rpm条件下保持5min后，过40目筛备用，称取1kg，按照料液比1:6（g/ml）的比例加入75%乙醇水溶液后，再加入0.3%的纤维素酶，在超声功率500W、60℃条件下酶解60min，得到酶解原料，加入闪式提取器中，加入5L85%的乙醇溶液作为提取溶剂，提取电压为150V，提取时间为3min，进行闪式提取2次，过滤得到提取液，提取液浓缩干燥后得到粗提物，用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶（硅胶目数为200目）柱层析纯化，耐压35MPa，柱内径为250mm，层析柱径高比为1：10，氯仿-甲醇按体积比为1:1、1:7、1:13梯度洗脱，收集水牛果素A流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶，粗晶用乙酸乙酯重结晶得到水牛果素A白色结晶，含量为94.9%。

Claims (6)

1. 一种提取水牛果素A的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）以银水牛果的叶为原料，放入高速组织捣碎机，在转速为18000rpm条件下保持3-5min后，过40目筛备用；
（2）原料按照料液比1:4-6（g/ml）的比例加入乙醇水溶液后，再加入0.3-0.5%的纤维素酶，在超声功率500-700W、45-60℃条件下酶解60-90min，得到酶解原料；
（3）将酶解原料投入加入闪式提取器中，进行闪式提取，过滤得到提取液，浓缩干燥得到粗提物；
（4）将所得粗提物用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶柱层析纯化，氯仿-甲醇溶剂***梯度洗脱，收集水牛果素A流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶；
（5）将粗晶用乙酸乙酯重结晶得到水牛果素A结晶。
2. 如权利要求1所述的一种提取水牛果素A的方法，其特征在于所述步骤（2）中乙醇水溶液体积百分比为70-80%。
3. 如权利要求1所述的一种提取水牛果素A的方法，其特征在于所述步骤（2）中提取溶剂为70-85%的乙醇溶液。
4. 如权利要求1所述的一种提取水牛果素A的方法，其特征在于所述步骤（3）中闪式提取电压为150V，提取时间为3-5min。
5. 如权利要求1所述的一种提取水牛果素A的方法，其特征在于所述步骤（4）中所述高压硅胶柱层析，硅胶目数为200目，耐压35MPa，柱内径为250mm，层析柱径高比为1：10。
6. 如权利要求1所述的一种提取水牛果素A的方法，其特征在于所述步骤（4）中所述氯仿-甲醇的体积比为1:1-1:13。
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CN104833560A (zh) * 2015-04-27 2015-08-12 宁夏森淼种业生物工程有限公司 一种闪式剪切非破坏性提取枸杞叶矿质元素的方法

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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