CN104049081B - 针对梅毒抗体的血清学方法和诊断测试 - Google Patents
针对梅毒抗体的血清学方法和诊断测试 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104049081B CN104049081B CN201410090394.4A CN201410090394A CN104049081B CN 104049081 B CN104049081 B CN 104049081B CN 201410090394 A CN201410090394 A CN 201410090394A CN 104049081 B CN104049081 B CN 104049081B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cholesterol
- cuorin
- lecithin
- test
- container
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/571—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses for venereal disease, e.g. syphilis, gonorrhoea
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/535—Production of labelled immunochemicals with enzyme label or co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or enzyme substrates
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
针对梅毒感染的非密螺旋体诊断测试,其包括:开始时,使胆固醇溶解于有机溶剂并进一步使该溶解的胆固醇在含有心磷脂和卵磷脂的乙醇溶液中稀释,允许容器中蒸发一定体积的抗原溶液,用缓冲盐水漂洗所述经被覆的容器,通过用溶解于缓冲盐水的惰性蛋白质外覆所述抗原覆层来使所述抗原覆层稳定,轻轻倒出所述外覆溶液,空气干燥所述容器,并将所述容器密封在有干燥剂的气密袋中,提供梅毒感染测试的经酶标记的共轭物成分,所述共轭物成分被配制成与所述胆固醇、心磷脂和卵磷脂VDRL抗原的脂质性质相适应,提供样品稀释物,所述样品稀释物被配制成与所述VDRL抗原的脂质性质相适应,并且提供洗涤液,所述洗涤液被配制成与所述VDRL抗原的脂质性质相适应。
Description
相关申请的交叉引用
本申请根据35U.S.C.§119的规定,要求2013年3月13日提交的共同在审美国临时专利申请第61/778,544号的优先权;所述在先申请通过引用全文纳入本文。
关于联邦资助研究或开发的声明
不适用。
发明领域
本发明属于医药测试领域。本公开内容涉及针对梅毒抗体的血清学方法和诊断测试。
发明背景
梅毒是通过螺旋细菌苍白密螺旋体苍白亚种(treponemapallidumsubspeciespallidum)引起的性传播感染疾病。传播的主要途径是通过性接触;其还可在怀孕过程中或生产时母婴传播,导致先天梅毒。由相关苍白密螺旋体(treponemapallidum)引起的其它人类疾病包括雅司病(极细(pertenue)亚种)、品他病(品他(carateum)亚种)和非性病性梅毒(地方(endemicum)亚种)。
梅毒的征兆和症状视其所在的四个阶段(第一阶段、第二阶段、潜伏阶段和第三阶段)而不同。第一阶段通常以单一下疳(无痛痒的硬性皮肤溃疡)呈现,第二阶段梅毒伴有常见涉及手掌和脚底的皮疹扩散,潜伏阶段梅毒没有或几乎没有症状,而第三阶段梅毒伴有梅毒瘤、神经学或心脏症状。然而,其因常见非典型表现而被称为“大模仿者(thegreatimitator)”。诊断常通过血液测试进行;然而,还可使用暗视场显微镜检测该细菌。梅毒可通过以下方式进行有效治疗:采用抗生素,尤其是优选肌肉内给予青霉素G(就神经梅毒而言,静脉内给予),或采用头孢三嗪,就具有严重青霉素过敏症的那些人而言采取口服强力霉素(doxycycline)或阿奇霉素(azithromycin)的方式。
据信在1999年,梅毒已在世界范围内感染了1200万人,而多于90%的病例处于发展中国家。其感染率因1940年代推广使用青霉素而显著降低之后,从世纪之交以来在许多国家中有所增长,常与人免疫缺陷病毒(HIV)结合。这部分归因于不安全的男-男性行为、***增加、***和保护措施使用的减少。
如上所述,梅毒诊断常通过血液测试。目前有两种用于诊断和治疗梅毒感染的血清学测试:密螺旋体测试,其使用从致病剂苍白密螺旋体(treponemapallidum)制备的抗原;非密螺旋体测试,其使用不直接源自所述致病剂的抗原。
佐治亚州亚特兰大的疾病控制中心(CDC)建议梅毒筛选和治疗评估首选使用非密螺旋体测试来进行,因为据信非密螺旋体测试更加灵敏。在这种测试中,可能有假阳性。CDC还建议用密螺旋体测试来验证阳性筛选测试结果。注意到,可采用非密螺旋体测试来进行治疗后监测和再感染检测。目前常用的非密螺旋体测试有两种:性病研究实验室(VDRL)测试和快速血浆反应素(RPR)测试。
所述VDRL测试是用于评估治疗反应的针对梅毒的非密螺旋体血清学筛选,以检测CNS参与,并协助诊断先天梅毒。所述测试的基础是,使由梅毒患者产生的抗体(IgG、IgM或IgA)与由心磷脂、胆固醇和卵磷脂组成的配混物反应。所述测试通过使所述患者的血清与上述配混物混合来进行。阳性血清导致“絮凝”。简言之,所述VDRL测试是定性的、主观的、需要使用显微镜观察读出结果的手动凝结测试。更具体地,将所述患者的抗体样品在测试管中混合,或在显微镜载玻片上混合。医师需要观察该测试管或载玻片,并基于该医师自身的经验和训练来确定所观测到的现象是否指示达到足以判定结果为阳性的程度的絮凝。定量测试结果需要对所述测试样品进行一系列稀释,并且测试多个稀释物。因此,所述VDRL测试工作强度大,且无法自动化。已知在强阳性样品情况中,在VDRL测试中因前区效应或“钩”效应而出现假阴性。所述RPR测试是颗粒凝集测试。所述RPR测试还是定性的、主观的、可通过观察读出的手动测试。所述RPR测试使用心磷脂、胆固醇和卵磷脂的胶态悬浮液,其与碳微颗粒混合。因此,RPR测试使用与VDRL测试所用相同的抗原,但在RPR测试中,所述抗原已与碳颗粒结合以允许不需要显微镜的絮凝反应显像。将该混合物置于卡片的测试区域,从而所述医师能够基于视觉可测的碳颗粒聚集而读取结果。与VDRL测试类似,RPR测试是定量测试,其中需要对测试样品进行一系列稀释并测试多个稀释物来获得结果。因此,所述RPR测试工作强度大,且无法自动化。类似地,因为前区效应而出现假阴性。图1是RPR测试卡片的照片。左侧(9号圆圈)的阳性测试结果中显示碳颗粒聚集。相反,该卡片的右侧测试区域(10号圆圈)没有出现聚集,指示阴性结果。
有三种成分构成VDRL抗原:心磷脂;胆固醇;和卵磷脂。这些成分本质上是脂质。由此,其不溶于水性溶液。因此,在经典VDRL测试中,所述三种成分的抗原复合物作为胶态悬浮液使用。其必须在所述测试即将进行之前在非常小心控制的条件下制备。因为其本身缺乏稳定性,所述胶态悬浮液必须当天制备供于即刻使用。因为本身的不稳定性质,无法长时间地保存处于胶态悬浮液中的混合抗原。若能提供稳定且保存期限长、灵敏且具特异性的非密螺旋体梅毒筛选与治疗测试评估将是有利的。
VDRL测试和RPR测试本身都不能自动化。若能提供能够自动化的梅毒筛选与治疗测试评估将是有利的。
需要克服如上所述的现有技术***、设计和方法的这些问题。
发明内容
本发明提供针对梅毒抗体的血清学方法和诊断测试,所述血清学方法和诊断测试克服上文所述已知的该常见类型的装置和方法的缺陷,能够自动化,并且所述测试物的保存期限长。
本发明的针对梅毒抗体的血清学方法和诊断测试结合非密螺旋体VDRL测试和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法的特点,以生成具有创造性的VDRLELISA测试。ELISA是使用抗体和颜色变化来鉴别物质的测试。其为一种分析性的生物化学试验,其使用固相酶免疫试验(EIA)来检测在液体样品或潮湿样品中通常为抗原或抗体的物质的存在。
以该重复方式进行的ELISA(也称作“间接”ELISA)的步骤遵从以下进程:
·向微量滴定板的各孔添加所述抗原的缓冲溶液,其中留出时间使其通过电荷相互作用来粘附至塑料。
·添加非反应性蛋白质(例如牛血清白蛋白或酪蛋白)的溶液以封闭所述孔中未被所述抗原被覆的任何塑料表面。
·添加一抗,其与被覆所述孔的测试抗原特异性结合。该一抗还可以存在于待检测针对所述抗原的反应性的供者血清中,经过合适的孵育时间之后,轻轻倒出未结合的抗体,并且用缓冲溶液漂洗所述孔。
·添加二抗,其将结合一抗。该二抗连接有酶,所述酶对该抗体的结合性质的影响可忽略。经过合适的孵育时间之后,轻轻倒出未结合的抗体,并且用缓冲溶液漂洗所述孔。
·然后添加针对该酶的底物。通常,该底物在与所述酶反应之后改变颜色。所述颜色变化显示所述二抗已与一抗结合,这强烈暗示所述供体已与所述测试抗原发生了免疫反应。
·血清中存在的一抗浓度越高,所述颜色变化越强烈。通常,使用分光计来获得颜色强度的定量值。
在ELISA中,所述酶起到放大器的作用;尽管仅有极少酶联抗体保持连接,但所述酶分子仍将产生许多信号分子。在常识限制中,所述酶可以继续无限地产生颜色,但供体血清中存在的一抗越多,将结合的二抗+酶则越多,所述颜色的形成越快。
ELISA可以定性或定量形式运行。定性结果提供针对样品的简单阳性或阴性结果(是或否)。阳性与阴性之间的截止值由分析者确定,并且可以是统计学的。常使用两倍或三倍的标准偏差(测试中的固有误差)来区分阳性样品和阴性样品。在定量ELISA中,将所述样品的光学密度(OD)与标准曲线作比较,所述标准曲线通常是靶分子的已知浓度溶液的一系列稀释物。例如,如果测试样品返回的OD是1.0,那么在标准曲线上OD=1.0处的点即是该样品的相同分析物浓度。与VDRL和RPR测试的明显对比在于,本发明的VDRLELISA测试是酶免疫试验,其结果可由分光光度计客观地读取。因此,本发明的梅毒测试能够在单一测试中产生标准化的、定量的并且可再现的结果,并且能够以自动化方式进行。所述VDRLELlSA测试具有与VDRL和RPR测试相当的灵敏度和特异度,并且与很多自动化分析仪相适应。
所述VDRL和RPR测试使用胶态悬浮液形式的抗原复合物进行。相反,本发明VDRLELISA测试中使用的抗原复合物通过将所述三种脂质成分溶解于有机溶剂混合物中来制备。这生成均匀一致的抗原,从而能够被精确地分配至微孔中,并且在微孔中干燥。这致使VDRL抗原孔被均一地被覆。所述被覆的均一性有助于精确且可再现的测试结果。所述VDRLELISA抗原被覆孔可储备更长的时间,然后用于进行ELISA测试。迄今,已经普遍认识到用VDRL抗原复合物被覆的孔无法储备更长时间,并且在这种储备之后也无法用于精确且可再现地进行ELISA测试。
本文描述的示例性实施方式使用微孔(例如,聚苯乙烯微孔)作为所述VDRLELISA测试的固相。使用所述术语“微孔”并不意味着将任何实施方式的任何平台仅限制为这种微孔。贯穿本文所用的该术语,其定义等价于包括能够替代微孔的全部其它固相平台,将这些平台定义为包括但不限于,微管、柱、珠、浸渍片、硝酸纤维素膜、侧流装置及其它容器等等。如此,所述固相平台一般还可描述为容器。
所述VDRLELISA测试的设计在现有技术基础上有显著改进,并且允许对测试结果进行定量和标准化,如下:
1)试剂盒校准物,所述试剂盒校准物协助测试结果的标准化和归一化。所述一种或多种校准物是标准血清样品,其可溯源至第一或第二标准,并且已被赋予已知值。各测试运行中包括一种或多种校准物以及所述患者样品,所述校准物产生已知值结果,可将患者测试结果与所述已知值结果作比较,从而解读为阳性或阴性。
2)该试剂盒的阴性和阳性对照物,所述阴性和阳性对照物协助验证测试结果。所述阳性和阴性对照物是已被赋予预期值范围的血清样品,并且与所述患者样品一同包括在各测试运行中。若相较于所述试剂盒校准物,所述阳性和阴性对照物所获得的值落在其被赋予的范围内,则所述患者样品获得的结果是有效的,若该值没有落在所赋予的范围内,则所述患者样品获得的结果是无效的,并且须重复该测试。
有助于所述VDRLELISA测试的灵敏度和特异度的配方包括以下这些:
1)有助于所述测试的灵敏度和特异度的配方,即,心磷脂、胆固醇、卵磷脂抗原制备物的相对浓度。
2)防止人抗体与抗原被覆孔非特异性结合的被覆后溶液的配方。
3)防止人抗体与抗原被覆孔非特异性结合的样品稀释物的配方。所述样品稀释物是包含惰性蛋白质的缓冲溶液,所述惰性蛋白质不干扰患者抗体针对被覆在孔上的抗原的特异性结合。同时,所述惰性蛋白质防止外源患者抗体针对被覆在孔上的抗原的非特异性结合,由此防止潜在的假阳性结果。
4)在很高水平的非密螺旋体抗体情况中,所述VDRLELISA测试不经历可导致VDRL和RPR测试中假阴性结果的前区效应或钩效应。
迄今阻止稳定且可再现VDRLELISA测试发展的VDRL抗原混合物的性质如下:
1)心磷脂,所述VDRL抗原制备物的主要成分,其本身是不稳定的。
2)心磷脂和所述抗原制备物的其它成分(胆固醇和卵磷脂)不溶于水性溶液,并且因此无法通过常规方式结合聚苯乙烯孔。
本发明***和方法不限于特定的心磷脂或胆固醇。本发明***和方法预想使用天然心磷脂或纯化自天然的心磷脂,或甚至使用合成的心磷脂。使用合成的心磷脂是可行的,尽管其本身稳定。本发明***和方法预想还与合成的胆固醇和/或合成的卵磷脂一同使用。
采用以下步骤来制备VDRL抗原覆被孔,其稳定且能够产生可再现的测试结果:
1)开始时,使胆固醇溶解于有机溶剂,然后进一步在含有心磷脂和卵磷脂的乙醇溶液中稀释。
2)允许小体积(例如,50微升)的抗原溶液在聚苯乙烯微孔中蒸发。
3)所述经被覆的孔用缓冲盐水漂洗一次。
4)然后,通过外覆(overcoat)一层溶解于缓冲盐水的惰性蛋白质来使所述抗原覆层稳定。
5)将所述外覆溶液(overcoatsolution)轻轻倒出,并且空气干燥所述孔,然后密封在有干燥剂的气密袋中。
6)配制所述测试的经酶标记的共轭物成分,使其与被覆在孔上的VDRL抗原的脂质性质相适应。
7)配制样品稀释物,使其与被覆在孔上的VDRL抗原的脂质性质相适应。
8)配制洗涤液,使其与被覆在孔上的VDRL抗原的脂质性质相适应。
9)配制酶底物,使其与被覆在孔上的VDRL抗原的脂质性质相适应。
基于前述以及其它考虑到的目的,本发明提供一种制备针对梅毒感染的非密螺旋体诊断测试物的方法,所述方法包括:开始时,使胆固醇溶解于有机溶剂中,并在含有心磷脂和卵磷脂的乙醇溶液中进一步稀释该溶解的胆固醇以形成抗原溶液,允许在容器内蒸发一定体积的抗原溶液,并且使抗原覆层至少部分被覆所述容器,用缓冲盐水漂洗至少部分被覆的容器,通过用含有惰性蛋白质的外覆溶液外覆所述抗原覆层来使所述抗原覆层稳定成梅毒抗原复合物,然后轻轻倒出所述外覆溶液,干燥所述容器,并且将所述容器密封在气密袋中。
基于本发明考虑到的目的,还提供一种制备针对梅毒感染的非密螺旋体诊断测试物的方法,所述方法包括:开始时,使胆固醇溶解于有机溶液,并用含有心磷脂和卵磷脂的乙醇溶液进一步稀释所述溶解的胆固醇,以形成抗原溶液,允许容器内蒸发一定体积的抗原溶液,并且使抗原覆层至少部分被覆所述容器,用缓冲盐水漂洗所述至少部分经被覆的容器,通过用含有惰性蛋白质的外覆溶液外覆所述抗原覆层来使所述抗原覆层稳定成梅毒抗原复合物,轻轻倒出所述外覆溶液,干燥所述容器,并将所述容器封闭在气密袋中,提供梅毒感染测试的经酶标记的共轭物成分,所述共轭物成分被配制成与所述胆固醇、心磷脂和卵磷脂的脂质性质相适应,提供样品稀释物,所述样品稀释物被配制成与所述胆固醇、心磷脂和卵磷脂的脂质性质相适应,提供洗涤液,所述洗涤液被配制成与所述胆固醇、心磷脂和卵磷脂的脂质性质相适应,并且提供酶底物,所述酶底物被配制成与所述胆固醇、心磷脂和卵磷脂的脂质性质相适应。基于本发明考虑到的目的,还提供一种针对梅毒感染的非密螺旋体诊断测试物,所述诊断测试物包括:具有内部的容器,所述容器的内部首先用溶解于有机溶剂中且在含有心磷脂和卵磷脂的乙醇溶液中进一步稀释的胆固醇的混合物至少部分被覆,以形成内部抗原覆层,然后该覆层用溶解于缓冲盐水的惰性蛋白质外覆,所述外覆层干燥后密封所述容器的气密袋,梅毒感染测试的经酶标记的共轭物成分,所述共轭物成分被配制成与所述胆固醇、心磷脂和卵磷脂的脂质性质相适应,样品稀释物,所述样品稀释物被配制成与所述胆固醇、心磷脂和卵磷脂的脂质性质相适应,洗涤液,所述洗涤液被配制成与所述胆固醇、心磷脂和卵磷脂的脂质性质相适应,酶底物,所述酶底物被配制成与所述胆固醇、心磷脂和卵磷脂的脂质性质相适应。
根据本发明的另一种模式,所述抗原溶液的体积约为50微升。
根据本发明的另一种模式,所述容器是微孔、聚苯乙烯微孔、微管、柱、珠、浸渍片、硝酸纤维素膜和侧流装置中的一种或多种。
根据本发明的另一种模式,所述有机溶剂是丙酮、氯仿、丁醇、甲醇或***中的一种或多种。
根据本发明的另一种模式,所述胆固醇是天然胆固醇、纯化自天然的胆固醇、和/或合成的胆固醇。
根据本发明的另一种模式,所述心磷脂是天然心磷脂、纯化自天然的心磷脂、和/或合成的心磷脂。
根据本发明的另一种模式,所述卵磷脂是天然卵磷脂、纯化自天然的卵磷脂、和/或合成的卵磷脂。
根据本发明的另一种模式,所述容器是经空气干燥的。
根据本发明的另一种模式,提供将所述容器密封在有干燥剂的气密袋中的步骤。
根据本发明的另一种模式,所述外覆步骤采用选自牛血清、牛血清白蛋白、胎牛血清、明胶、山羊血清、马血清和乳蛋白中的一种或多种惰性蛋白质进行。
根据本发明的另一种模式,所述外覆步骤通过将所述惰性蛋白质溶解于缓冲盐水来进行。
根据本发明的另一种模式,所述外覆步骤通过将所述惰性蛋白质的盐水溶液在所述至少部分被覆的容器中放置一段时间来进行,这一段时间足以使所述惰性蛋白质与所述容器的未经被覆部分结合。
根据本发明的另一种模式,所述这段时间是约30分钟~约5小时、约1小时~约3小时、约1.5小时~约2.5小时或约2小时中的至少一段时间。
根据本发明的另一种模式,所述用惰性蛋白质外覆的稳定化的抗原覆层的保存期限为约6个月~约1年。
根据本发明的另一种模式,所述容器是微孔、聚苯乙烯微孔、微管、柱、珠、浸渍片、硝酸纤维素膜和侧流装置中的一种或多种。
根据本发明的另一种模式,提供以下步骤:提供梅毒感染测试的经酶标记的共轭物成分,所述共轭物成分被配制成与所述胆固醇、心磷脂和卵磷脂的脂质性质相适应,提供样品稀释物,所述样品稀释物被配制成与所述胆固醇、心磷脂和卵磷脂的脂质性质相适应,提供洗涤液,所述洗涤液被配制成与所述胆固醇、心磷脂和卵磷脂的脂质性质相适应,并且提供酶底物,所述酶底物被配制成与所述胆固醇、心磷脂和卵磷脂的脂质性质相适应。根据本发明的另一种模式,提供以下步骤:向容器内添加待测试针对梅毒抗原复合物的反应性的供体血清,并允许所述梅毒抗体结合至所述抗原覆层(若所述患者血清中存在所述梅毒抗体),用缓冲盐水漂洗所述容器,向所述容器添加二抗,所述二抗被设计成与血清中的一抗结合,所述二抗与酶相连,所述酶在向其添加了针对该酶的酶底物并与该酶反应时会改变颜色,用缓冲盐水漂洗所述容器,并添加所述酶底物以产生颜色变化(若所述血清含有所述梅毒抗体)。
根据本发明的另一种模式,提供以下步骤:用自动化的分光光度计分析仪检测所述容器的内容物,以检测所测试血清的颜色变化,并且,若有颜色变化则显示所述二抗已结合至所述一抗,形成测试结果,结论为该血清供者对测试梅毒抗原已有免疫反应。
根据本发明的另一种模式,提供以下步骤:用分光光度计产生对应于所述颜色变化强度的定量值。
尽管本发明在本文中具体说明并描述了针对梅毒抗体的血清学方法和诊断测试,但其并不意在限制为所展示的具体内容,因为可对其进行各种修改和结构变化而不偏离本发明的精神,从而落在权利要求等价范围内。此外,将不具体描述或省略本发明的示例性实施方式的为人熟知的基本原理,从而不至于使得本发明的相关细节模糊不清。
本发明的其它优点和其它特征特点将于后文的具体实施方式中陈述,其通过具体实施方式将是显而易见的,或可从本发明的示例性实施方式的实践中了解。本发明的另外的其它优点可通过权利要求中具体指出的任何手段、方法或组合来被认识到。
被认为是本发明特点的其它特征在附加权利要求中陈述。按需要,本文中公开本发明的具体实施方式;但是,应理解,所公开的实施方式仅仅是本发明的示例,其可被包含在不同的形式中。因此,本文公开的特定结构和功能性细节不解释为限定,而仅作为权利要求的基础,并且作为指导本领域普通技术人员通过不同方式以实际任何合适的具体结构使用本发明的代表性基础。此外,本文所用的术语和短语不意在限制;而是提供对于本发明的可理解的描述。尽管说明书以限定被认为新颖的本发明特征的权利要求结束,但发明人相信,结合以下说明和附图(其中沿用相同的附图标记)一同考虑将更好地理解本发明。
附图简述
附图中相同的附图标记表示各视图中相同或功能相似的要素(其尺寸并非按比例),所述附图和下面的详细描述并入本说明书并形成其一部分,用于进一步描述各实施方式和解释所有依本发明的各原理和优点。本发明的实施方式的优点将从以下示例性实施方式的详细描述中明显呈现,该描述应与附图结合理解,其中:
图1是RPR测试卡片的一部分的照片,其显示一个呈阳性结果的测试区域和一个呈阴性结果的测试区域;
图2是制备VDRLELISA测试物的示例性实施方式的流程图;
图3是进行VDRLELISA测试的流程图;
图4是说明VDRLELISA测试中的反应的图;和
图5是说明VDRLELISA测试和RPR测试之间结果比较的图表,且证明RPR测试中的前区效应或“钩”效应。
具体实施方式
按需要,本文中公开本发明的具体实施方式;但是,应理解,所公开的实施方式仅仅是本发明的示例,其可以不同的形式体现。因此,本文公开的特定结构和功能性细节不解释为限定,而仅作为权利要求的基础,并且作为指导本领域技术人员通过不同方式以实际任何合适的具体结构使用本发明的代表性基础。此外,本文所用的术语和短语不意在限制;而是提供对于本发明的可理解的描述。尽管说明书以限定被认为新颖的本发明特征的权利要求结束,但发明人相信,结合以下说明和附图(其中沿用相同的附图标记)一同考虑将更好地理解本发明。
定义
在公开和描述本发明之前,应理解本文的术语并不意在限制而只是用于描述具体实施方式的目的。除非另外指定,否则,本文中使用的所有技术术语具有本发明所属领域普通技术人员通常所理解的同样含义。
可设计替代性的实施方式而不偏离本发明的精神或范围。此外,将不具体描述或省略本发明的示例性实施方式的为人熟知的基本原理,从而不至于使得本发明的相关细节模糊不清。
如本文中所用,术语“一个”或“一种”,被定义为一个/一种或多于一个/一种。如本文中所用,术语“多个/多种”被定义为两个/两种或多于两个/两种。如本文所用,术语“另一个/另一种/其它”被定义为至少第二个/第二种或第更多个/第更多种。
如本文所用,术语“包括”和/或“具有”被定义为包含(即,开放式表达)。术语“包含”、“含有”或其任何其它变型旨在覆盖非排他的包含,使得包括一系列要素的过程、方法、物品或装置不仅包括这些元素而且还可包括并未明确列出的或这些过程、方法、物品或装置固有的其它要素。前有“包含…一(个/种)”的要素不排除(没有更多的限制)在含该要素的过程、方法、物品、或装置中存在其他相同元素。
如本文所用,相关的术语例如“第一”和“第二”,可单独使用以区分一个实体或行为与另一个实体或行为,而非必须要求或暗示这些实体或行为之间的任何实际的这种关系或顺序。
如本文所用,术语“偶联”定义为连接,尽管不必直接连接,也不必机械连接。
如本文所用,术语“约”或“大约”应用于全部数值,不论是否明确指示。这些术语一般指本领域技术人员将认为等价于列举数值的数字范围(即,具有相同的功能或结果)。在多种示例中,这些术语可包括最近有效数字周围的数字。
本文描述本发明的不同实施方式。在许多所述不同实施方式中,特征是相似的。因此,为避免冗余,在一些情况下不对这些相似特征进行重复描述。然而,应理解,对首次出现特征的描述适用于之后描述的相似特征,因而各描述将这样以不重复的方式纳入本文。
现在描述本发明的示例性实施方式。现在根据具体附图,首先,具体到图2,其中显示用于生成并制备VDRLELISA测试物的第一种示例性实施方式。本发明的VDRLELISA测试基于以下前提理解来开始:针对梅毒的抗原复合物由心磷脂、胆固醇和卵磷脂组合形成,该抗原复合物因其脂质性质而不易留存在微孔中。基于此,有必要寻找在微孔中获得所述抗原复合物的沉积物的方法,使得该沉积物不仅留存足够长的时间以进行针对梅毒的非密螺旋体测试,而且还留存以进行具有理想长度保存期限的微孔测试。
用于生成本发明所述微孔的方法示于图2的流程图。注意到,如上所述,术语“微孔”在示例性实施方式中的应用并不理解为将平台仅限于微孔,而等价地包括可替代微孔的全部其它固相平台,其可包括微管、柱、珠、浸渍片、硝酸纤维素膜和侧流装置。
如上所述,抗体复合物不与微孔结合是因为心磷脂、胆固醇和卵磷脂的脂质性质所致,这些化合物不溶于水性溶液。然而,本发明人发现,这些化合物可溶解于有机溶剂且在孔内干燥而不对所述化合物造成有害影响。本发明人还发现,在VDRL-ELISA方法中在孔中进行干燥时,将经典VDRL方法中使用的化合物的相对比例稀释至所述浓度的十分之一(即0.003%W/V心磷脂、0.09%W/V胆固醇和0.02%W/V卵磷脂)时能获得所需结果。此外,通过在VDRLELISA方法中以独立或多种相对比例检测上述化合物,本发明人确定,相较于检测的任何单独化合物或任何其它相对比例而言,上述相对浓度对非密螺旋体梅毒抗体的反应性更大。因此,在步骤210中,使胆固醇溶解于有机溶剂中,例如丙酮、氯仿、丁醇、甲醇和/或***。在步骤220中,使心磷脂和卵磷脂溶解于乙醇,并使上述有机溶剂混合物在含有心磷脂和卵磷脂的乙醇溶液中进一步稀释。在步骤230中,将两种混合物合并,并将一定量的该混合物置于微孔(例如,聚苯乙烯微孔)内。在一个示例性实施方式中,置于各微孔中的混合物的量为约40~60微升,具体是约50微升。
已知有机溶剂和乙醇都是易蒸发的。基于此,在步骤240中允许有机溶剂和乙醇发生蒸发,可采用空气流通装置(例如风扇)来协助该蒸发。在一个示例性实施方式中,所述蒸发在室温(20℃~25℃)发生。蒸发持续直至微孔中的液体干燥。基于此,所述抗原复合物的三种成分开始与所述微孔内表面结合。在步骤250中对所述微孔洗涤一次,例如,用缓冲盐水洗涤。
在微孔经所述抗原复合物被覆之后,发现该覆层并不在所述微孔内部完整存在。当这种未被覆部分出现时,可能发生以下状况:当用于实际测试步骤时,测试物质(即,潜在包含梅毒抗体的患者血清)会结合或受所述微孔内表面的负面影响。在这种情况下,所述测试物质可能会与未经被覆的表面结合,并不希望地增加上述通过分光光度读取而产生的结果。在这种情况下,读取的颜色将比测试样品应有的颜色更强。因此,希望防止该不利情况发生。为解决该问题,本发明的制备方法使非反应性化合物结合至所述微孔的未经被覆部分。所选择的非反应性化合物是惰性蛋白质,例如牛血清、牛血清白蛋白、胎牛血清、明胶、山羊血清、马血清和乳蛋白等等中的任何一种。利用心磷脂、胆固醇和卵磷脂不溶于水性溶液的已知性质,在步骤260中,用溶解于缓冲盐水的惰性蛋白质的被覆后混合物填充所述经被覆的微孔。在步骤270中,使该水性溶液在微孔中留存给定的时间(对抗原复合物覆层无负面影响),该给定时间足以允许所述惰性蛋白质结合至所述微孔的未经被覆部分。该被覆后浸泡进行约30分钟~约5小时,例如,约1小时~约3小时,约1.5小时~约2.5小时,并且具体为约2小时,使得所述惰性蛋白质连接至所有无抗原复合物存在的区域。在步骤280通过轻轻倒出或吸出剩余溶液来消除所述惰性蛋白质浸泡。在步骤290中空气干燥所述微孔内部,然后密封在有干燥剂的气密袋中。当将照此被覆的微孔与干燥剂一同包装时,发现所述抗原复合物和所述被覆后惰性蛋白质保持稳定多个月,发现通过所述惰性蛋白质的非特异性结合增加了其稳定性。在这种包装状态,如此被覆的内部的保存期限是至少12个月。具体而言,所述保存期限是6个月~1年。
采用这些经被覆的微孔,所述VDRLELISA测试步骤遵循以下机制且参考图3的流程图和图4的图表予以说明。在步骤310中,向微滴定板中的一个或多个微孔中添加待测试针对梅毒抗原复合物420的反应性的供者血清410。因为所述梅毒抗原复合物420被覆各微孔,所以如果在所述患者血清410中存在梅毒抗体,那么抗体将在步骤320中结合至覆层420。在步骤330中用缓冲盐水漂洗所述微孔。在步骤340中添加二抗430,该抗体430被设计成与血清410中的一抗结合,然后在步骤350中漂洗所述微孔,例如采用缓冲盐水进行漂洗。该二抗430连接有酶E,其对所述抗体的结合性质的影响可忽略。然而,当添加针对该酶E的底物时,所述底物会在与酶E反应后改变颜色。在步骤360添加该底物以在步骤370中产生颜色变化(若血清410含有梅毒抗体)。在步骤380中,采用自动化的分光光度计分析仪检测所述反应,以检测所述测试血清410的颜色变化。所述微孔中的任何颜色变化显示二抗430已结合至一抗410,这强烈暗示血清410的供者已对该测试梅毒抗原具有免疫反应。血清410中存在的梅毒一抗的浓度越高,步骤370中的颜色变化将会越强烈。在步骤390中,所述分光光度计生成针对该颜色变化的定量值。如本领域技术人员所知,该测试完全消除了前区效应,这意味着,在实践中实验室不必进行(甚至重复地进行)稀释样品和重新测试样品的进一步的测试。VDRLELISA测试结果与具有前区效应的测试结果之间的差异示于图5的图表中,其中在本发明测试中出现平台状态,之后的滴定证明剂量效应降低。此外,该测试能够简单容易地通过标准自动化分光光度计分析仪来实现自动化。已发现其灵敏度至少与RPR和VDRL测试相等,但其保存期限长且能够自动化(由此无需医师的主观分析)。
已知常规的非密螺旋体测试VDRL和RPR用以检测IgG和IgM类抗体,但其无法区分所述两类抗体。本发明人意识到,能基于测试中所用的经酶标记的偶联物的特异性来改进所述VDRLELISA测试。因此,能够检测单一IgG、单一IgM、或其两者。在一个重复中,所述VDRL测试可通过采用检测IgG和IgM两者的偶联物来筛选成人中非密螺旋体梅毒抗体的存在。这是疾病控制中心(CDC)针对梅毒筛选所建议的方法。在另一个重复中,可改进所述VDRLELISA以检测单一IgM抗体。已知母方来源的IgM抗体不会穿过胎盘屏障,因此,在新生儿血清中检测到梅毒的IgM抗体指示该新生儿感染了梅毒。之后,可在所述VDRLELISA测试的新型示例性实施方式中采用所述VDRLELISA测试的这个重复来诊断新生儿梅毒。
前述说明及附图描述了本发明的原理、示例性实施方式和操作模式。然而,本发明不应解释为受到上述具体实施方式的限制。本领域技术人员应理解上述实施方式的其它变化形式,并且上述实施方式应被认为是说明性而非限制性的。因此,应理解,本领域技术人员能以不偏离权利要求限定的本发明范围的方式来实行所述那些实施方式的变化形式。
Claims (27)
1.一种制备针对梅毒感染的非密螺旋体诊断测试物的方法,所述方法包括:
开始时,使胆固醇溶解于有机溶剂,并使所述溶解的胆固醇在包含心磷脂和卵磷脂的乙醇溶液中进一步稀释,以形成抗原溶液;
允许一定体积的抗原溶液在容器中蒸发,并使抗原覆层至少部分被覆所述容器;和
通过用包含惰性蛋白质的外覆溶液外覆所述抗原覆层来使所述抗原覆层稳定成梅毒抗原复合物。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法还包括:
在允许一定体积的抗原溶液蒸发的步骤之后,用缓冲盐水漂洗所述至少部分经被覆的容器;和
在使所述抗原覆层稳定成梅毒抗原复合物的步骤之后,轻轻倒出所述外覆溶液,干燥所述容器,并将所述容器密封在气密袋中。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述容器是微孔、微管、柱、珠、浸渍片、和侧流装置中的一种或多种。
4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述有机溶剂是丙酮、氯仿、丁醇、甲醇或***中的一种或多种。
5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述胆固醇是天然胆固醇和/或合成的胆固醇。
6.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述心磷脂是天然心磷脂和/或合成的心磷脂。
7.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述卵磷脂是天然卵磷脂和/或合成的卵磷脂。
8.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述容器是经空气干燥的。
9.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法还包括将所述容器密封在有干燥剂的气密袋中。
10.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法还包括采用一种或多种选自下组的惰性蛋白质进行所述外覆的步骤:牛血清、牛血清白蛋白、明胶、山羊血清、马血清和乳蛋白。
11.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法还包括通过使所述惰性蛋白质溶解于缓冲盐水来进行所述外覆步骤。
12.如权利要求11所述的方法,其特征在于,所述方法还包括通过将所述惰性蛋白质的盐水溶液在所述至少部分被覆的容器中放置一段时间来进行所述外覆步骤,所述一段时间足以使所述惰性蛋白质结合至所述容器的未经被覆部分。
13.如权利要求12所述的方法,其特征在于,所述一段时间是以下时间段中的至少一个:
30分钟~5小时;
1小时~3小时;
1.5小时~2.5小时;或
2小时。
14.如权利要求1所述的方法,其特征在于,用所述惰性蛋白质外覆的稳定化的抗原覆层的保存期限为6个月~1年。
15.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法还包括:
提供梅毒感染测试的经酶标记的共轭物成分,所述共轭物成分被配制成与所述胆固醇、所述心磷脂和所述卵磷脂的脂质性质相适应;
提供样品稀释物,所述样品稀释物被配制成与所述胆固醇、所述心磷脂和所述卵磷脂的脂质性质相适应;
提供洗涤液,所述洗涤液被配制成与所述胆固醇、所述心磷脂和所述卵磷脂的脂质性质相适应;
提供酶底物,所述酶底物被配制成与所述胆固醇、所述心磷脂和所述卵磷脂的脂质性质相适应。
16.如权利要求15所述的方法,其特征在于,所述方法还包括:
向所述容器添加待测试针对所述梅毒抗原复合物的反应性的供者血清,并且,如果所述供者血清内存在所述梅毒抗体,则所述梅毒抗体结合至所述抗原覆层;
用缓冲盐水漂洗所述容器;
向所述容器添加二抗,所述二抗被设计成与血清中的一抗相结合,所述二抗连接有酶,所述酶在向其添加针对该酶的酶底物并在所述酶底物与所述酶反应时改变颜色;
用缓冲盐水漂洗所述容器;和
添加所述酶底物,如果所述血清包含所述梅毒抗体,则产生颜色变化。
17.如权利要求16所述的方法,其特征在于,所述方法还包括以下步骤:用自动化的分光光度计分析仪检测所述容器的内容物,以检测所述测试血清的颜色变化,并且,若有颜色变化则显示所述二抗已结合至所述一抗,形成测试结果,结论为该血清供者已对所述测试梅毒抗原产生免疫反应。
18.如权利要求17所述的方法,其特征在于,所述方法还包括用所述分光光度计产生对应于所述颜色变化强度的定量值。
19.一种制备针对梅毒感染的非密螺旋体诊断测试物的方法,所述方法包括:
开始时,使胆固醇溶解于有机溶剂,并使所述溶解的胆固醇在包含心磷脂和卵磷脂的乙醇溶液中进一步稀释,以形成抗原溶液;
允许一定体积的抗原溶液在容器中蒸发,并使抗原覆层至少部分被覆所述容器;
用缓冲盐水漂洗所述至少部分经被覆的容器;
通过用包含惰性蛋白质的外覆溶液外覆所述抗原覆层来使所述抗原覆层稳定成梅毒抗原复合物;
轻轻倒出所述外覆溶液,干燥所述容器,并将所述容器密封在气密袋中;
提供梅毒感染测试的经酶标记的共轭物成分,所述共轭物成分被配制成与所述胆固醇、所述心磷脂和所述卵磷脂的脂质性质相适应;
提供样品稀释物,所述样品稀释物被配制成与所述胆固醇、所述心磷脂和所述卵磷脂的脂质性质相适应;
提供洗涤液,所述洗涤液被配制成与所述胆固醇、所述心磷脂和所述卵磷脂的脂质性质相适应;
提供酶底物,所述酶底物被配制成与所述胆固醇、所述心磷脂和所述卵磷脂的脂质性质相适应。
20.一种针对梅毒感染的非密螺旋体诊断测试物,其包括:
具有内部的容器,所述容器的内部首先用溶解于有机溶剂且在包含心磷脂和卵磷脂的乙醇溶液中进一步稀释的胆固醇的混合物至少部分被覆,以形成内部抗原覆层,然后所述内部抗原覆层用溶解于缓冲盐水的惰性蛋白质外覆;
在所述外覆层干燥后密封所述容器的气密袋;
梅毒感染测试的经酶标记的共轭物成分,所述共轭物成分被配制成与所述胆固醇、所述心磷脂和所述卵磷脂的脂质性质相适应;
样品稀释物,所述样品稀释物被配制成与所述胆固醇、所述心磷脂和所述卵磷脂的脂质性质相适应;
洗涤液,所述洗涤液被配制成与所述胆固醇、所述心磷脂和所述卵磷脂的脂质性质相适应;和
酶底物,所述酶底物被配制成与所述胆固醇、所述心磷脂和所述卵磷脂的脂质性质相适应。
21.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述抗原溶液的体积为50微升。
22.如权利要求3所述的方法,其特征在于,所述微孔是聚苯乙烯微孔,并且/或者所述侧流装置是硝酸纤维素膜。
23.如权利要求5所述的方法,其特征在于,所述天然胆固醇是纯化自天然的胆固醇。
24.如权利要求6所述的方法,其特征在于,所述天然心磷脂是纯化自天然的心磷脂。
25.如权利要求7所述的方法,其特征在于,所述天然卵磷脂是纯化自天然的卵磷脂。
26.如权利要求10所述的方法,其特征在于,所述牛血清是胎牛血清。
27.一种制备针对梅毒感染的非密螺旋体诊断测试物的方法,所述方法包括:
开始时,使胆固醇溶解于有机溶剂,并使所述溶解的胆固醇在包含心磷脂和卵磷脂的乙醇溶液中进一步稀释,以形成抗原溶液;
允许一定体积的抗原溶液在容器中蒸发,并使抗原覆层至少部分被覆所述容器;
通过用包含惰性蛋白质的外覆溶液外覆所述抗原覆层来使所述抗原覆层稳定成梅毒抗原复合物;
提供梅毒感染测试的经酶标记的共轭物成分,所述共轭物成分被配制成与所述胆固醇、所述心磷脂和所述卵磷脂的脂质性质相适应;
提供样品稀释物,所述样品稀释物被配制成与所述胆固醇、所述心磷脂和所述卵磷脂的脂质性质相适应;
提供洗涤液,所述洗涤液被配制成与所述胆固醇、所述心磷脂和所述卵磷脂的脂质性质相适应;和
提供酶底物,所述酶底物被配制成与所述胆固醇、所述心磷脂和所述卵磷脂的脂质性质相适应。
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201361778544P | 2013-03-13 | 2013-03-13 | |
US61/778,544 | 2013-03-13 | ||
US14/191,014 US8945827B2 (en) | 2013-03-13 | 2014-02-26 | Serological methods and diagnostic tests for syphilis antibodies |
US14/191,014 | 2014-02-26 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104049081A CN104049081A (zh) | 2014-09-17 |
CN104049081B true CN104049081B (zh) | 2016-03-09 |
Family
ID=51502185
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201410090394.4A Expired - Fee Related CN104049081B (zh) | 2013-03-13 | 2014-03-12 | 针对梅毒抗体的血清学方法和诊断测试 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN104049081B (zh) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110456086B (zh) * | 2019-08-02 | 2023-07-14 | 南方医科大学皮肤病医院(广东省皮肤病医院、广东省皮肤性病防治中心、中国麻风防治研究中心) | 梅毒非特异性抗体质控定值血清、制备方法、应用以及用于梅毒检测的试剂盒 |
CN111220808A (zh) * | 2019-12-02 | 2020-06-02 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种tp螺旋体非特异性抗体检测试剂盒 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1195986C (zh) * | 1999-06-09 | 2005-04-06 | 美国政府健康及人类服务部 | 使用合成抗原检测梅毒的方法 |
DE10250368A1 (de) * | 2002-10-29 | 2004-05-19 | Viramed Biotech Ag | Mittel und Verfahren zur Diagnose einer Treponemainfektion |
CN101243321A (zh) * | 2005-06-21 | 2008-08-13 | 美国政府健康及人类服务部,疾病控制和预防中心 | 用于检测抗-类脂抗体的方法、免疫测定法和装置 |
BRPI0618713B8 (pt) * | 2005-11-18 | 2021-07-27 | The Government Of The United State Of America Representado Por The Secretary Of The Dept Of Health A | cardiolipina modificada e seus usos |
JP4629563B2 (ja) * | 2005-12-07 | 2011-02-09 | 積水メディカル株式会社 | 抗リン脂質抗体測定試薬 |
-
2014
- 2014-03-12 CN CN201410090394.4A patent/CN104049081B/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN104049081A (zh) | 2014-09-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5345677B2 (ja) | 血液を分離および分析する装置並びにその方法 | |
CN104126120B (zh) | 纸基诊断测试 | |
CN103454412B (zh) | 一种用于过敏原特异性抗体检测的液相芯片及其制备方法 | |
Zhu et al. | Lateral flow assay for the detection of African swine fever virus antibodies using gold nanoparticle-labeled acid-treated p72 | |
Yin et al. | Tape integrated self-designed microfluidic chip for point-of-care immunoassays simultaneous detection of disease biomarkers with tunable detection range | |
JPH07508102A (ja) | アッセイ | |
CN104330575B (zh) | 一种肌钙蛋白i检测试剂及其制备方法 | |
BR112012033591B1 (pt) | processo de detecção de interações moleculares | |
US9482674B2 (en) | Serological methods and diagnostic tests for syphilis antibodies | |
WO2004040310A1 (de) | Mittel und verfahren zur diagnose einer treponemainfektion | |
Kanda et al. | M-type phospholipase A 2 receptor (PLA 2 R) glomerular staining in pediatric idiopathic membranous nephropathy | |
CN104049081B (zh) | 针对梅毒抗体的血清学方法和诊断测试 | |
EP2732288B1 (en) | Biological microchip for the estimation of immunoglobulin e and g levels in human blood, method of assay thereof, and reagent kit comprising same | |
CN106324251A (zh) | 小片段BMG抗体的制备方法及β2‑微球蛋白检测试剂盒 | |
Jarrige et al. | A fast intraoperative PTH point-of-care assay on the Philips handheld magnotech system | |
CN104849455B (zh) | 一种基于梅毒血清学检测蛋白芯片制备与应用 | |
WO2006043614A1 (ja) | メンブランエンザイムイムノアッセイ法 | |
Espinosa et al. | A new optical interferometric-based in vitro detection system for the specific IgE detection in serum of the main peach allergen | |
Majsiak et al. | Evaluation of the Usefulness of a Serological Test for Diagnosis of Celiac Disease Simultaneously Detecting Specific Antibodies and Total IgA | |
Bacarese-Hamilton et al. | Allergen microarrays | |
Lis et al. | Experimental Research Models to Assess the Cross-Reactivity between Can f 5 and Human PSA—Two Different Perspectives | |
CN109154602A (zh) | 免疫测定对照及其使用方法 | |
CN110716054A (zh) | 一种血清亲细胞性免疫球蛋白e的定量检测试剂盒 | |
Rudenko et al. | Bluetongue Virus Detection Using Microspheres Conjugated with Monoclonal Antibodies against Group-Specific Protein Vp7 by Flow Virometry | |
Khemthongcharoen et al. | A simple and high-performance immobilization technique of membrane protein from crude cell lysate sample for a membrane-based immunoassay application |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20160309 Termination date: 20210312 |