CN111220808A - 一种tp螺旋体非特异性抗体检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及体外诊断技术领域，尤其涉及一种TP螺旋体非特异性抗体检测试剂盒。本发明通过改进心磷脂、卵磷脂和胆固醇与磁微粒的偶联方法，从而使磁微粒能够更好的与样品中的目标物结合，与本发明的酶标抗体配合，从而获得更好的检测效果。本发明提供的试剂盒中，包含酶标抗体和本发明制得的心磷脂、卵磷脂和胆固醇包被的磁性微粒，采用该试剂盒可实现对样本的自动化检测，具有操作简单、准确、抗干扰能力强的特点。

Description

一种TP螺旋体非特异性抗体检测试剂盒
技术领域
本发明涉及体外诊断技术领域，尤其涉及一种TP螺旋体非特异性抗体检测试剂盒。
背景技术
梅毒是一种由***引起的性传播疾病(STD)。全世界每年报告的成人梅毒病例超过10万例。在疾病早期得不到抗生素治疗会导致疾病在全身蔓延，常常导致器官不可逆损伤、精神错乱、失明或死亡。因为梅毒感染早期产生的生殖器溃疡促进了HIV的性传播，所以人类免疫缺陷病毒(HIV)在世界各地的传播极大地增加了梅毒问题的严重性。
梅毒的病程分为初期、二期、潜伏期、神经梅毒和三期(晚期)。受感染者可在前两个阶段感染他人。当螺旋体从感染者的溃疡传播到***的皮肤或生殖器、口腔或***的粘膜时，就会发生传播。***也可以通过身体其他部位破损的皮肤传播。在三级梅毒和神经梅毒中，感染是不具有传染性的，但螺旋体对器官、组织和大脑的入侵可造成严重的心血管畸形或神经疾病等致命后果。
原发性梅毒的首要症状是溃疡或***。***会在感染后10天至3个月内出现，通常出现在身体暴露于受感染***溃疡的部位，如***、外阴、***、宫颈、直肠、舌头或嘴唇。由于***仅持续数周，可能无痛或发生在体内，因此可能被忽视。且下疳有无治疗均消失。在未经治疗的患者中，次要症状将在原发病灶出现大约9周后出现。
继发性梅毒通常以皮疹为特征，其特征为褐色溃疡。由于在这些溃疡中存在活性病原体，任何身体接触，性接触或非性接触，与被感染者破损的皮肤接触，都可能在此阶段传播感染。其他症状包括轻度发烧、疲劳、头痛、喉咙痛、脱发和腺体肿胀。这些症状可能是轻微的，就像原发性梅毒的***，治疗或不治疗都会消失。如果不治疗，感染者将进入潜伏期。
潜伏期梅毒的特征是脑脊液(CSF)无临床症状或异常表现，血清学检测呈阳性。早期潜伏梅毒发生在感染后的一年内，具有潜在的传染性，有可能复发，而晚期潜伏梅毒则与对复发的免疫力和对再次感染的抵抗力有关。在梅毒感染的早期，螺旋体可能侵入神经***。如果不治疗，神经梅毒可能会发展。这种疾病发展为神经梅毒可能需要长达20年的时间，而且一些患有神经梅毒的人无法表现出可识别的症状，使得诊断非常困难。那些出现症状的人可能会抱怨头痛、脖子僵硬或发烧，这些症状是由大脑内壁发炎引起的。尽管大约三分之二的梅毒感染者没有得到治疗，也不会受到疾病的进一步影响，但大约三分之一未治疗的潜伏梅毒患者会出现晚期梅毒或三级梅毒的并发症。
在梅毒的第三阶段，***损害心脏、眼睛、大脑、神经***、骨骼、关节或几乎身体的任何其他部位。第三阶段可能持续数年，甚至数十年。晚期梅毒通常会导致心血管疾病、精神疾病、失明甚至死亡。
由于梅毒感染有时会造成严重和危及生命的后果，而且有传播或感染艾滋病毒的危险，因此对感染进行早期诊断至关重要。然而，梅毒有时被称为“伟大的模仿者”，因为它的早期症状与许多其他疾病相似。因此，临床诊断通常并不仅仅依赖于对梅毒症状的识别，而是依赖于梅毒显微鉴定和梅毒生物样本的临床试验结果。梅毒的微生物鉴定诊断一般如下，刮取溃疡或***表面在特殊的“暗视野”显微镜下检查，以发现微生物。显微镜观察结果，判断的主观性大且不同机构结果报告差异大，难以进行质量控制和平行比对，另外需专门的技术人员操作，容易存在误差。因此，大多数梅毒病例都是优先采用非特异性抗体检测进行血清学检查。
目前常用的非特异性抗体检测包括性病研究实验室(VDRL)试验和快速血浆reagin(RPR)试验。VDRL测试使用天然脂质，检测***抗体。这些抗体是由感染***个体的免疫***产生的针对螺旋体心磷脂的抗体。目前可用的非特异性抗体检测的缺点是特异性差且操作繁琐。许多疾病，如支原体感染、肺炎、疟疾、急性细菌和病毒感染都可能导致梅毒检测结果出现假阳性。例如，静脉注射药物或自身免疫性疾病引起组织损伤，导致心磷脂释放和抗心磷脂抗体的产生。对神经梅毒的诊断尤其困难。此外，由于抗***抗体的持续存在，特异性抗体检测分析不能作为监测抗生素治疗成功与否的试验。因此，对于梅毒早期或神经梅毒的诊断，需要在样本中对***感染进行敏感、特异的检测。还需要一种简单、高通量的检测方法，可以用来监测梅毒的治疗效果。
化学发光法灵敏度高，线性范围宽，特异性高，操作快速简便，易于自动化，不存在环境污染等优点。化学发光技术依据其反应载体不同分为两种：一种基于微孔板反应的半自动化学发光技术，另一种基于磁微粒反应的全自动化学发光技术，更趋均相、更加快速、更易于自动化。目前国产的大部分产品为前者。国际主流的大型诊断公司，大多数采取基于磁微粒反应的化学发光技术。现在，国外多家公司均已研发了磁微粒化学发光检测***和配套试剂。磁微粒化学发光检测技术必将成为检测方法的主要发展方向之一，成为TP血清学检测的主流技术，广泛用于梅毒等疾病的筛查与诊断。
磁微粒化学发光技术应用于TP检测方面，具有高灵敏度、快速、准确、重复性好、线性范围宽、安全无毒、无放射性污染等优点，易于实现自动化检测。同时可以进一步缩短检测时间，适宜于急诊检测。但抗原与磁微粒的偶联步骤对检测效果的影响较大，偶联不当则阳性样本的报告值偏低，难以与阴性样本的报告值区分。因此，目前尚没有良好的以磁微粒化学发光检测TP螺旋体的方法。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种TP螺旋体非特异性抗体检测试剂盒，该试剂盒包含TP螺旋体的磁微粒化学发光法的检测试剂。其中磁珠与抗原(心磷脂、卵磷脂、胆固醇)偶联采用的试剂合理，偶联效果良好，从而使检测的阴性与阳性报告值存在较大差异，容易区分。
本发明提供了心磷脂、卵磷脂和胆固醇包被的磁性微粒的制备方法包括：
将心磷脂偶联BSA后，与卵磷脂和胆固醇溶解于无水乙醇，然后与经活化的羧基磁微粒混合，偶联后收集磁微粒，以PBS缓冲液洗涤，制得所述心磷脂、卵磷脂和胆固醇包被的磁性微粒；
其中，心磷脂、卵磷脂和胆固醇的质量比为(0.01～0.05)∶(0.11～0.46)∶0.9；
一些实施例中，心磷脂、卵磷脂和胆固醇的质量比为3∶15∶90；
每毫升心磷脂、卵磷脂和胆固醇的溶液与0.1～0.5μg活化后的羧基磁微粒混合。
一些具体实施例中，每毫升心磷脂、卵磷脂和胆固醇的溶液与0.3μg活化后的羧基磁微粒混合。
本发明中，所述心磷脂、卵磷脂和胆固醇溶解于无水乙醇后，心磷脂的质量分数为0.03％、卵磷脂的质量分数为0.15％、胆固醇的质量分数为0.9％。
所述羧基磁微粒的直径为0.2～4μm。所述心磷脂、卵磷脂和胆固醇通过化学试剂共价交联的方法偶联在所述磁性微粒上。
本发明中，所述偶联的条件为室温震荡反应30～60min。
本发明中，室温为18～30℃。
本发明中，所述羧基磁微粒的活化包括：以PBS清洗羧基磁微粒后，以含有EDC的MES缓冲液以及含有NHS的MES缓冲液活化，再以MES缓冲液清洗，制得活化后的羧基磁微粒；
所述PBS缓冲液的浓度为0.02mol/L；所述MES缓冲液的浓度为0.1mol/L；
本发明中，所述含有EDC的MES缓冲液中，EDC的浓度为10～70mg/ml；所述含有NHS的MES缓冲液中，NHS的浓度为10～70mg/ml。
一些具体实施例中，所述含有EDC的MES缓冲液中，EDC的浓度为40mg/ml；所述含有NHS的MES缓冲液中，NHS的浓度40mg/ml。
所述活化中，采用的所述含有EDC的MES缓冲液与所述含有NHS的MES缓冲液的的体积比为1∶1；所述活化的条件为室温震荡反应30～60分钟。
以本发明所述制备方法制得的心磷脂、卵磷脂和胆固醇包被的磁性微粒。
本发明还提供了TP螺旋体非特异性抗体检测的试剂盒，其包括酶标抗体、本发明制备方法制得的心磷脂、卵磷脂和胆固醇包被的磁性微粒；
所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的抗人IgA、IgG和IgM抗体。
本发明所述的试剂盒中，心磷脂、卵磷脂和胆固醇包被的磁性微粒的浓度为0.1～0.5μg/ml。
本发明所述的试剂盒中，所述酶标抗体的制备方法为：辣根过氧化物酶经活化后，加入抗人IgA、IgG和IgM抗体，于2～8℃反应8～12h后，加入硼氢化钠还原酶结合物，透析去除未反应的试剂后与等体积甘油混合。
本发明所述的试剂盒中，还包括酶标抗体稀释液，所述酶标抗体稀释液由水和20wt％小牛血清和0.1wt％P300防腐剂组成。
在使用时，酶标抗体以酶标抗体的稀释液按照1∶1000～1∶5000的比例稀释。具体实施例中，稀释比例为1∶5000。
经过稀释后，酶标抗体的浓度为0.5μg/ml。
所述酶标抗体的保存温度为-20℃，所述酶标抗体稀释液的保藏温度为2～8℃。
本发明所述的试剂盒中还包括化学发光底物和/或样本稀释液；
所述化学发光底物包括底物A液和底物B液，其中底物A液为异鲁米诺衍生物溶液，底物B液为过氧化氢，
所述样本稀释液为PBS缓冲液。
所述样本稀释液为PBS缓冲液，用其稀释样本时，比例为5～200倍。
本发明所述的试剂盒中还包括阴性对照和阳性对照；
所述阴性对照为PBS缓冲液；
所述阳性对照是含有1/100～1/1000的TP螺旋体非特异性抗体阳性物质的阴性对照。
本发明还提供了TP螺旋体非特异性抗体的检测方法，其以本发明所述的试剂盒检测血清样品。
本发明通过改进心磷脂、卵磷脂和胆固醇与磁微粒的偶联方法，从而使磁微粒能够更好的与样品中的目标物结合，与本发明的酶标抗体配合，从而获得更好的检测效果。本发明提供的试剂盒中，包含酶标抗体和本发明制得的心磷脂、卵磷脂和胆固醇包被的磁性微粒，采用该试剂盒可实现对样本的自动化检测，具有操作简单、准确、抗干扰能力强的特点。
具体实施方式
本发明提供了一种TP螺旋体非特异性抗体检测试剂盒，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
其中，所述合成抗原中合成心磷脂为采用硅胶色谱法纯化的四甲基嘧啶心磷脂，纯度接近99％，以粉末形式从极性脂质中获得。采用薄层色谱法和高压液相色谱法测定了钠盐的最终浓度。样品储存在-20℃，心磷脂最初来源于植物的半合成脂质前体。卵磷脂粉体经硅胶色谱快速纯化，纯度约99％。合成抗原中的为一种含1.2％胆固醇的无水乙醇溶液，并用乙醇漂洗滤纸过滤。胆固醇最初来源于羊毛脂，通过re-crvstallization纯化，该晶体保存于-20℃。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1
合成抗原偶联磁性微粒的制备：
1.1磁性微粒洗涤
取200μl表面含羧基的磁微粒放在玻璃瓶中，用磁铁将磁微粒吸附在玻璃瓶底部，除去上清；加入2ml 0.02M PBS(pH 8.0)，重复以上操作3次。
1.2磁性微粒活化
将EDC和NHS分别溶解在0.1M MES(pH 5.0)缓冲液中，浓度呈10～70mg/ml，然后各取1ml加入到磁微粒中；室温轻轻震荡反应30～60分钟；用磁铁将磁微粒吸附在底部，除去上清；再加入2ml 0.1M MES(pH 5.0)缓冲液，重悬磁微粒；重复以上操作2次。
1.3合成心磷脂、合成卵磷脂、胆固醇包被磁性微粒
将合成心磷脂偶联BSA后与卵磷脂、胆固醇依次以0.03％、0.15％、0.9％质量份数混于无水乙醇中，与1.2活化后磁性微粒以0.1μg/ml的浓度混匀，室温轻轻震荡反应60分钟；用磁铁将磁微粒吸附在底部，除去上清；再加入1ml 0.2M PBS(pH 7.3)缓冲液，重悬磁微粒；重复以上操作5次。
最后以0.2M PBS(pH 7.3)缓冲液重悬磁微粒至浓度为0.1μg/ml。
实施例2
抗人IgA+IgG+IgM多克隆抗体酶结合物的制备
辣根过氧化物酶(HRP)用常规改良过碘酸钠法活化，加入抗人IgA+IgG+IgM多克隆抗体，2～8℃反应过夜，加硼氢化钠还原酶结合物，透析去除未反应的试剂，加50％体积甘油，置-20℃保存；至IgA的浓度为0.5μg/ml，IgG的浓度为0.5μg/ml，IgM的浓度为0.5μg/ml。
实施例3
将实施例1制得的抗原偶联磁性微粒和实施例2制得的酶标抗体溶液，以及样本稀释液、化学发光底物、阴性对照、阳性对照，一同制得试剂盒。
1、酶标抗体稀释液：
用双蒸水配制含有20％小牛血清和0.1％P300防腐剂的缓冲液。
1、所述样本稀释液的制备
配制1000ml样本稀释液(PBS缓冲液)：十二水磷酸氢二钠5.80g、二水磷酸二氢钠0.59g、氯化钠9.00g、吐温-20 1ml，用去离子水定容至1000ml，加入0.02％叠氮钠和0.1％P300防腐剂。
2、所述阴性对照和阳性对照制备
阴性对照为基质液，配制1000ml阴性对照：十二水磷酸氢二钠5.80g、二水磷酸二氢钠0.59g、氯化钠9.00g用去离子水定容至1000ml，加入0.02％叠氮钠防腐剂。
阳性对照是在基质液中加入1/100～1/1000的TP螺旋体非特异性抗体阳性物质制备而成。
3、化学发光底物液：底物A液采用异鲁米诺衍生物溶液，浓度为0.01-0.1g/L，底物B液采用过氧化氢。
检测实例
一、采用实施例3制备的试剂盒，与郑州安图生物工程股份有限公司生产的全自动化学发光仪AutoLumo A2000或AutoLumo A2000 Plus配合使用，用以检测TP螺旋体非特异性抗体：
1、用酶标抗体稀释液来稀释酶标抗体，稀释比例为1∶5000，2～8℃保存。
2、在反应容器(以下简称“孔”)中依次加入阳性对照3孔(用于定Cutoff值)，阴性对照2孔，100μL/孔；其余孔中每孔分别加入0.5μL样本(血清)和100μL上述样品稀释液；
3、每孔分别加入磁微粒混悬液20μL；混匀后，37℃温育15分钟；然后用清洗液洗涤5次；
4、每孔分别再加入酶结合物100μL；混匀后37℃温育17分钟；清洗液洗涤5次；
5、最后每孔再加入底物A液和底物B液各50μL；混匀后1～5分钟检测发光强度；
结果计算：Cut off值＝阳性对照孔平均发光值×0.2；
阳性判断值：S/CO＝待测样本发光值/Cutoff值；
S/CO≥1.00时，结果判为阳性；S/CO＜1.00时，结果判为阴性。
二、本发明试剂盒的性能评价
1、重复性
重复性是指对同一份样品重复测定，每次测定结果和均值的接近程度，以变异系数CV表示。
选择不同浓度的3份样本，每天检测4个重复，连续检测5天，变异系数CV＜8％，结果见表1：
表1重复性检测结果
Figure BDA0002298563630000081
Figure BDA0002298563630000091
从表1中结果可以看出：样本1的变异系数为5.28％，样本2的变异系数为6.87％，样本3的变异系数为2.79％，均小于行业要求的10％，证明其重复性良好。
2.特异性
检测乙肝、丙肝、HIV、EB-EA、HSV-1、HSV-2、CMV、VCA-IgG及HAMA阳性样本，每种病原体各10份，无交叉反应性。
检测类风湿因子RF阳性和抗核抗体(ANA)阳性样本各12份，无干扰，结果见表2：
表2特异性检测结果
Figure BDA0002298563630000092
从表2结果可以看出：所检测的不同病原体阳性不与本试剂盒产生交叉反应，类风湿因子RF和自身抗体ANA不对本试剂盒产生干扰。
3.样本的采集和处理
临床检验的样本类型一般为血清或者血浆。血浆样本采用的抗凝剂有柠檬酸钠，EDTA-2Na或者肝素钠等。不同抗凝剂及普通管(不含添加剂)的采血管均需要考核其对检测结果是否存在干扰。对比不同采血管的阳性样本和阴性样本，检测结果是否存在干扰。结果显示，不同抗凝剂样本检测信号值差异较小，说明抗凝剂对检测结果无明显干扰。因此，本试剂盒适用的样本类型可以是血清或血浆，抗凝剂可以使用EDTA-2Na或K、枸橼酸钠或肝素，结果见表3：
表3.不同抗凝剂对比
Figure BDA0002298563630000101
4.样本中内源性物质的干扰
样本中的内源性干扰物质可能会干扰检测结果，需要考核本试剂盒对内源性干扰物质的耐受浓度。在6份阳性样本(1份弱阳性、3份中强阳性、2份强阳性和6份阴性样本)中分别添加以下浓度的纯品：1.0g/L血红蛋白、0.4g/L胆红素和30g/L甘油三酯进行检测。
对于阳性样本，计算样本和对照品的平均发光值，计算每个样本发光值的干扰百分比：干扰百分比＝(样本平均发光值-对照品平均发光值)/对照品平均发光值×100％，如果阳性样本干扰在±15％以内，阴性样本本底无明显变化，不影响结果判定，认为本试剂盒对样本中内源性物质的干扰可以接受。
经验证，添加内源性物质后干扰率均＜15％，干扰可接受。由于临床样本生理浓度和病理浓度均低于内源性干扰物考核浓度，因此我们认为0.4g/L胆红素、30g/L甘油三酯和1g/L血红蛋白可以作为本试剂盒的内源性干扰耐受极限，结果见表4：
表4内源性干扰物质的影响
Figure BDA0002298563630000111
5.参考值确定
在发光值400-5000之间设定cuo-off值，根据所假设的不同cut-off值计算特异性、灵敏度(TPR)和假阳性率(FPR)，见表5：
表5不同cut-off值下测定的特异性、灵敏度(TPR)和假阳性率(FPR)的关系
Figure BDA0002298563630000112
在cut-off值的发光值为1200时，灵敏度为99.40％，特异性为99.04％，此时灵敏度及特异性满足国家标准，因此，设定试剂盒cut-off值的发光值为1200。
Cut-off值确定以后并不意味着每次测定的cut-off值都一成不变。由于每次测定的cut-off值都存在一定差异，在临界值计算时引入cut-off标本，即阳性对照PC，发光值范围为3000～7000，阳性对照PC的发光值平均值乘以系数0.2为cut-off值。
结果判定选用S/CO方式(即：待测样本Sample发光值/cut-off值)，S/CO≥1.00时，结果判为阳性；S/CO＜1.00时，结果判为阴性。
对比例1
合成抗原偶联磁性微粒的制备的1.1～1.2步骤与实施例1一致。
1.3合成心磷脂、合成卵磷脂、胆固醇包被磁性微粒
将天然心磷脂与卵磷脂、胆固醇以0.01％、0.09％、0.9％比例混于无水乙醇中，与1.2活化后磁性微粒以0.1μg/ml的工作浓度混匀，室温轻轻震荡反应60分钟；用磁铁将磁微粒吸附在底部，除去上清；再加入1ml 0.2M PBS(pH 7.3)缓冲液，重悬磁微粒；重复以上操作5次。
最后以0.2M PBS(pH 7.3)缓冲液重悬磁微粒至浓度为0.1μg/ml，抗原偶联磁性微粒。
将对比例1制得的抗原偶联磁性微粒和实施例2制得的酶标抗体溶液，以及实施例3提供的样本稀释液、化学发光底物、阴性对照、阳性对照，一同制得试剂盒并对样品进行检测，但结果表明，反应灵敏度不足，阴性样品与阳性样品发光值差距不大，阳性与阴性样本发光值比值小于20，难以分辨阴阳性。
对比例2
合成抗原偶联磁性微粒的制备的1.1～1.2步骤与实施例1一致，
1.3合成心磷脂、合成卵磷脂、胆固醇包被磁性微粒
将合成心磷脂偶联BSA后与天然卵磷脂、胆固醇以0.03％、0.01％、0.9％比例混于无水乙醇中，与1.2活化后磁性微粒以0.1μg/ml的工作浓度混匀，室温轻轻震荡反应60分钟；用磁铁将磁微粒吸附在底部，除去上清；再加入1ml 0.2M PBS(pH 7.3)缓冲液，重悬磁微粒；重复以上操作5次。最后以0.2M PBS(pH 7.3)缓冲液重悬磁微粒至浓度为0.1μg/ml。
将对比例2制得的抗原偶联磁性微粒和实施例2制得的酶标抗体溶液，以及实施例3提供的样本稀释液、化学发光底物、阴性对照、阳性对照，一同制得试剂盒并对样品进行检测，但结果表明，特异性不足，临床检测出现假阳性样本。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.心磷脂、卵磷脂和胆固醇包被的磁性微粒的制备方法，其特征在于，包括：
将心磷脂偶联BSA后，与卵磷脂和胆固醇溶解于无水乙醇，然后与经活化的羧基磁微粒混合，偶联后收集磁微粒，以PBS缓冲液洗涤，制得所述心磷脂、卵磷脂和胆固醇包被的磁性微粒；
其中，心磷脂、卵磷脂和胆固醇的质量比为(0.01～0.05)∶(0.11～0.46)∶0.9；
每毫升心磷脂、卵磷脂和胆固醇的溶液与0.1～0.5μg活化后的羧基磁微粒混合。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述心磷脂、卵磷脂和胆固醇溶解于无水乙醇后，心磷脂的质量分数为0.03％、卵磷脂的质量分数为0.15％、胆固醇的质量分数为0.9％。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述偶联的条件为室温震荡反应30～60min。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述羧基磁微粒的活化包括：以PBS清洗羧基磁微粒后，以含有EDC的MES缓冲液以及含有NHS的MES缓冲液活化，再以MES缓冲液清洗，制得活化后的羧基磁微粒；
所述PBS缓冲液的浓度为0.02mol/L；所述MES缓冲液的浓度为0.1mol/L；
所述含有EDC的MES缓冲液中，EDC的浓度为10～70mg/ml；
所述含有NHS的MES缓冲液中，NHS的浓度为10～70mg/ml；
所述活化中，采用的所述含有EDC的MES缓冲液与所述含有NHS的MES缓冲液的的体积比为1∶1；
所述活化的条件为室温震荡反应30～60分钟。
5.权利要求1～4任一项所述的制备方法制得的心磷脂、卵磷脂和胆固醇包被的磁性微粒。
6.TP螺旋体非特异性抗体检测的试剂盒，其特征在于，包括酶标抗体、权利要求1～4任一项所述的制备方法制得的心磷脂、卵磷脂和胆固醇包被的磁性微粒；
所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的抗人IgA、IgG和IgM抗体。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标抗体的制备方法为：辣根过氧化物酶经活化后，加入抗人IgA、IgG和IgM抗体，于2～8℃反应8～12h后，加入硼氢化钠还原酶结合物，透析去除未反应的试剂后与等体积甘油混合。
8.根据权利要求6或7所述的试剂盒，其特征在于，还包括酶标抗体稀释液，所述酶标抗体稀释液由水和20wt％小牛血清和0.1wt％P300防腐剂组成。
9.根据权利要求6～8任一项所述的试剂盒，其特征在于，其中还包括化学发光底物和/或样本稀释液；
所述化学发光底物包括底物A液和底物B液，其中底物A液为异鲁米诺衍生物溶液，底物B液为过氧化氢，
所述样本稀释液为PBS缓冲液。
10.根据权利要求6～9任一项所述的试剂盒，其特征在于，其中还包括阴性对照和阳性对照；
所述阴性对照为PBS缓冲液；
所述阳性对照是含有1/100～1/1000的TP螺旋体非特异性抗体阳性物质的阴性对照。
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