CN103946222B - 作为mtor抑制剂的吗啉代取代的双环嘧啶脲或氨基甲酸衍生物 - Google Patents

作为mtor抑制剂的吗啉代取代的双环嘧啶脲或氨基甲酸衍生物 Download PDF

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Abstract

本发明涉及式(I)的化合物，其中m、o、Ra、Rb、R1和T1具有如说明书和权利要求中提及的含义。所述化合物用作mTOR抑制剂，用于治疗或预防mTOR相关的疾病和病况。本发明还涉及包括所述化合物的药物组合物、这些化合物的制备以及作为药物的用途。

Description

作为MTOR抑制剂的吗啉代取代的双环嘧啶脲或氨基甲酸衍 生物
本发明涉及一类新的激酶抑制剂，包括其药学上可接受的盐、药物前体和代谢物，其为调节细胞活性如信号转导、增殖和细胞因子分泌而有用于调节蛋白激酶活性。更具体地，本发明提供化合物，其抑制、调控和/或调节激酶活性，特别是mTOR活性，和如上述细胞活性有关的信号转导途径。此外，本发明涉及包含所述化合物的药物组合物，例如用于治疗疾病如免疫、炎症、自身免疫、变应性病症、或增殖性疾病如癌症。
激酶催化蛋白质、脂质、糖、核苷和其它细胞代谢产物的磷酸化，并在真核细胞生理学的所有方面起关键作用。尤其地，蛋白激酶和脂质激酶参与信号事件，其控制细胞对细胞外介质或刺激物如生长因子、细胞因子或趋化因子响应中的激活、生长、分化和生存。通常，蛋白激酶分为两类，优先磷酸化酪氨酸残基的那一类和优选磷酸化丝氨酸和/或苏氨酸残基的那一类。
不适当高的蛋白激酶活性涉及许多疾病，包括癌症、代谢疾病、和自身免疫/炎性病症。这可以由于酶的突变、过表达或不适当激活的控制机制失败而直接或间接引起。在所有这些情况下，激酶的选择性抑制预期具有有益效果。
mTOR(“雷帕霉素的哺乳动物靶标”，也被称为FRAP或RAFT1)已成为近来药物发现努力的焦点(Tsang等, 2007, Drug Discovery Today 12, 112-124)。据发现，mTOR蛋白质是雷帕霉素免疫抑制效果的药物靶标，雷帕霉素用于防止移植排斥。雷帕霉素通过结合细胞内的蛋白质“12 kDA的FK-506-结合蛋白”(FKBP12)经功能的获得机制起作用，产生药物-受体复合物，然后结合并抑制mTOR。因此，雷帕霉素诱导由雷帕霉素和两种蛋白FKBP12和mTOR组成的三元复合物的形成。
mTOR蛋白是一种289kDA的大激酶，其出现在迄今测序的所有真核生物中(Schmelzle和Hall, 2000, Cell 103, 253-262)。羧基末端“磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-相关激酶”(PIKK)区域的序列在物种之间是高度保守的，并显示出丝氨酸和苏氨酸激酶活性，但没有检测到脂质激酶活性。完整的PIKK域是mTOR所有已知功能所必需的。FKBP12-雷帕霉素-结合(FRB)域靠近于PIKK域，并形成疏水口袋，其结合已结合FKBP12的雷帕霉素。FRB域似乎并不直接抑制激酶域的酶活性。一种解释是FKBP12-雷帕霉素由于空间位阻防止mTOR与其底物相互作用。mTOR的N-末端包含约20个串联重复的37至43个氨基酸，称为HEAT重复。HEAT重复与蛋白结合配偶体如Raptor相互作用。
mTOR可形成至少两种不同的蛋白复合物，mTORC1和mTORC2。在mTORC1蛋白复合物中，mTOR与蛋白质Raptor和mLST8/GβL相互作用，并通过磷酸化效应物如p70S6K和4E-BP1促进mRNA翻译和蛋白质合成而调节细胞生长。mTORC1蛋白复合物负责在与胰岛素信号结合中的传感养分信号(例如氨基酸的可用性)。mTOR在mTORC1中的活性可被雷帕霉素抑制。
第二种蛋白复合物，mTORC2，包括蛋白质mTOR、Rictor、mLST8/GβL和Sinl，并参与肌动蛋白的组织。mTORC2最初被描述为雷帕霉素不敏感的。最近的出版物表明，雷帕霉素通过干扰mTORC2蛋白复合物的组装在延长的治疗后经间接机制影响mTORC2的功能(Sarbassov等, 2006, Molecular Cell 22, 159-168)。
mTOR的生物学功能是多种胞外和胞内信号包括生长因子、营养素、能量和压力的中心调节剂。生长因子和激素(例如胰岛素)诱导的mTOR激活是通过PI3激酶、Akt、和结节性硬化症蛋白复合物(TSC)介导的。例如，mTOR充当细胞增殖、血管生成、和细胞代谢的中心调节剂(Tsang等, 2007, Drug Discovery Today 12, 112-124)。除了其免疫抑制效应，雷帕霉素(西罗莫司)是血管平滑肌细胞增殖的有效抑制剂，并已被FDA批准作为抗再狭窄药物用于冠状支架。此外，据观察，雷帕霉素在几种体外和动物模型中显示抗肿瘤活性(Faivre等, 2006. Nat. Rev. Drug. Discov. 5(8)：671-688)。
因为雷帕霉素的治疗潜力，一些制药公司开始研制雷帕霉素类似物，以改善该分子的药代动力学性质(Tsang等, 2007, Drug Discovery Today 12, 112-124)。例如，CCl-779(坦西莫司)代表雷帕霉素水溶性更大的酯衍生物，用于静脉注射和口服制剂。CCl-779在细胞系中无论是单独使用或与细胞毒性剂组合均具有抗肿瘤活性。RAD-001(依维莫司)是雷帕霉素的羟乙基醚衍生物，其被开发用于口服施用。AP23573(42-(二甲基亚膦酰)雷帕霉素(deferolimus))被开发用于口服或静脉施用。
在一般情况下，雷帕霉素衍生物通过相同的分子机制作用，引起三元雷帕霉素-FKBP12-mTOR复合物。可以想象，mTOR的功能通过激酶功能的抑制剂可以同样或更有效地抑制。例如，这可以通过识别与mTOR激酶域的ATP结合口袋的相互作用的化合物来实现。例如Torinl是一种有效的和选择性的ATP-竞争性mTOR抑制剂，其直接结合两者mTOR复合物，比雷帕霉素更有效地损害细胞生长和增殖(Thoreen等, 2009. J Biol. Chem. 284(12)：8023-32；Feldman等, 2009. PLOSBiology 7(2)：e38)。
mTOR相关的疾病和病症进一步描述于例如WO-A 2008/116129、WO-A 2008/115974、WO-A 2008/023159、WO-A 2009/007748、WO-A 2009/007749、WO-A 2009/007750、WO-A 2009/007751、WO-A 2011/011716中。
已据文献报道，几种mTOR抑制剂可用于医学领域例如作为抗癌药物(Faivre等,2006. Nat. Rev. Drug. Discov. 5(8)：671-688)。在WO-A 2008/116129中，咪唑并嘧啶类似物被描述为混合型mTOR和PI3K激酶抑制剂。吡唑并嘧啶类似物在WO-A 2008/115974中被描述为混合型mTOR和PI3K激酶抑制剂。作为mTOR激酶和/或PI3K酶活性化合物进一步的嘧啶衍生物揭露于WO-A 2008/023159、WO-A 2009/007748、WO-A 2009/007749、WO-A 2009/007750、WO-A 2009/007751、WO-A 2010/103094、WO-A 2010/120994和WO-A 2010/120998中。
作为PI3K激酶和MTOR抑制剂的三嗪类化合物描述于WO 2009/143313 A1、WO2009/143317 A1和WO 2010/096619 A1中。
此外mTOR抑制剂描述在国际专利申请的申请号PCT/EP2012/055953和PCT/EP2012/068590以及WO2011/107585 A1中。
在Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, 2012, 22 (15), 5114-5117中，未取代的构象限制的环状砜已被描述为有效的和选择性的mTOR激酶抑制剂。
抑制mTOR比其他激酶有更大效力的选择性mTOR抑制剂，预期可有有益的治疗特性，因为抑制其他激酶可导致不必要的副作用(Richard等, 2011. Current Opinion DrugDiscovery and Development 13(4)：428-440)。尤其是对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)家族(例如PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ和PI3Kδ)和PI3K相关激酶(例如DMA-PK、ATM和ATR)的选择性可能是重要的。
即使mTOR抑制剂是本领域已知的，依然需要提供其他的mTOR抑制剂，其至少具有部分更有效的药学上相关的性质，如活性、选择性、和ADME的性质。
因此，本发明提供式(I)的化合物
或其药学上可接受的盐，其中
m是1；或2；
o是1；2；3；或4；
每个R1独立地选自H；卤素；CN；C(O)OR2；OR2a；氧代(=O)；C(O)R2；C(O)N(R2R2a)；S(O)2N(R2R2a)；S(O)N(R2R2a)；S(O)2R2；S(O)R2；N(R2)S(O)2N(R2aR2b)；N(R2)S(O)N(R2aR2b)；SR2；N(R2R2a)；NO2；OC(O)R2；N(R2)C(O)R2a；N(R2)S(O)2R2a；N(R2)S(O)R2a；N(R2)C(O)N(R2aR2b)；N(R2)C(O)OR2a；OC(O)N(R2R2a)；和C1-6烷基，其中C1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的R3取代；
任选2个R1与它们连接的环一起结合以形成8至11元的杂二环；
R2、R2a、R2b独立地选自H；C1-6烷基，其中C1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的卤素取代；
R3是卤素；CN；C(O)OR4；OR4；C(O)R4；C(O)N(R4R4a)；S(O)2N(R4R4a)；S(O)N(R4R4a)；S(O)2R4；S(O)R4；N(R4)S(O)2N(R4aR4b)；N(R4)S(O)N(R4aR4b)；SR4；N(R4R4a)；NO2；OC(O)R4；N(R4)C(O)R4a；N(R4)S(O)2R4a；N(R4)S(O)R4a；N(R4)C(O)N(R4aR4b)；N(R4)C(O)OR4a；或OC(O)N(R4R4a)；
R4、R4a、R4b独立地选自H；和C1-6烷基，其中C1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的卤素取代；
T1是苯基；或5至6元的芳族杂环，其中T1被N(R5a)C(O)N(R5bR5)或N(R5a)C(O)OR5取代，并任选进一步被一个或多个相同或不同的R6取代；
R6是卤素；CN；C(O)OR7；OR7；C(O)R7；C(O)N(R7R7a)；S(O)2N(R7R7a)；S(O)N(R7R7a)；S(O)2R7；S(O)R7；N(R7)S(O)2N(R7aR7b)；N(R7)S(O)N(R7aR7b)；SR7；N(R7R7a)；NO2；OC(O)R7；N(R7)C(O)R7a；N(R7)S(O)2R7a；N(R7)S(O)R7a；N(R7)C(O)N(R7aR7b)；N(R7)C(O)OR7a；OC(O)N(R7R7a)；或C1-6烷基，其中C1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的卤素取代；
R5a、R5b、R7、R7a、R7b独立地选自H；C1-6烷基，其中C1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的卤素取代；
R5是H；T2；和C1-6烷基，其中C1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的R8取代；
R8是卤素；CN；C(O)OR9；OR9；C(O)R9；C(O)N(R9R9a)；S(O)2N(R9R9a)；S(O)N(R9R9a)；S(O)2R9；S(O)R9；N(R9)S(O)2N(R9aR9b)；N(R9)S(O)N(R9aR9b)；SR9；N(R9R9a)；NO2；OC(O)R9；N(R9)C(O)R9a；N(R9)S(O)2R9a；N(R9)S(O)R9a；N(R9)C(O)N(R9aR9b)；N(R9)C(O)OR9a；OC(O)N(R9R9a)；或T2；
R9、R9a、R9b独立地选自H；和C1-6烷基，其中C1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的卤素取代；
任选R5、R5b与它们连接的氮原子一起结合以形成包含至少所述氮原子作为环杂原子的4至7元的杂环基环；或8至11元的杂二环基环，其中4至7元的杂环基环；和8至11元的杂二环基环任选被一个或多个相同或不同的R10取代；
T2是C3-7环烷基；4至7元的杂环基；4至7元的杂芳基；8至11元的杂二环基；苯基；萘基；茚基；或茚满基，其中T2任选被一个或多个相同或不同的R10取代；
R10是卤素；CN；C(O)OR11；OR11；氧代(=O),其中该环是至少部分饱和的；C(O)R11；C(O)N(R11R11a)；S(O)2N(R11R11a)；S(O)N(R11R11a)；S(O)2R11；S(O)R11；N(R11)S(O)2N(R11aR11b)；N(R11)S(O)N(R11aR11b)；SR11；N(R11R11a)；NO2；OC(O)R11；N(R11)C(O)R11a；N(R11)S(O)2R11a；N(R11)S(O)R11a；N(R11)C(O)N(R11aR11b)；N(R11)C(O)OR11a；OC(O)N(R11R11a)；或C1-6烷基，其中C1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的R12取代；
R11、R11a、R11b独立地选自H；C1-6烷基，其中C1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的卤素取代；
R12是卤素；CN；C(O)OR13；OR13；C(O)R13；C(O)N(R13R13a)；S(O)2N(R13R13a)；S(O)N(R13R13a)；S(O)2R13；S(O)R13；N(R13)S(O)2N(R13aR13b)；N(R13)S(O)N(R13aR13b)；SR13；N(R13R13a)；NO2；OC(O)R13；N(R13)C(O)R13a；N(R13)S(O)2R13a；N(R13)S(O)R13a；N(R13)C(O)N(R13aR13b)；N(R13)C(O)OR13a；或OC(O)N(R13R13a)；
R13、R13a、R13b独立地选自H；和C1-6烷基，其中C1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的卤素取代；
Ra、Rb结合以形成-(CR14R14a)p-S(O)r-(CR14bR14c)q-；
r是0；1；或2；
p、q是0；1；2；或3，条件是p + q是2；3；或4；
R14、R14a、R14b、R14c独立地选自H；卤素；CN；C(O)OR15；OR15；C(O)R15；C(O)N(R15R15a)；S(O)2N(R15R15a)；S(O)N(R15R15a)；S(O)2R15；S(O)R15；N(R15)S(O)2N(R15aR15b)；N(R15)S(O)N(R15aR15b)；SR15；N(R15R15a)；NO2；OC(O)R15；N(R15)C(O)R15a；N(R15)S(O)2R15a；N(R15)S(O)R15a；N(R15)C(O)N(R15aR15b)；N(R15)C(O)OR15a；OC(O)N(R15R15a)；或C1-6烷基，其中C1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的R16取代；
任选R14、R14a和R14b、R14c中的一对或两对形成氧代基(=O)；
任选地选自R14、R14a；R14、R14b；在p>1情形中的两个相邻的R14；和在q>1情形中的两个相邻的R14b中的一对，与它们连接的环一起结合以形成6至11元的杂二环；
R15、R15a、R15b独立地选自H；C1-6烷基，其中C1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的卤素取代；
R16是卤素；CN；C(O)OR17；OR17；C(O)R17；C(O)N(R17R17a)；S(O)2N(R17R17a)；S(O)N(R17R17a)；S(O)2R17；S(O)R17；N(R17)S(O)2N(R17aR17b)；N(R17)S(O)N(R17aR17b)；SR17；N(R17R17a)；NO2；OC(O)R17；N(R17)C(O)R17a；N(R17)S(O)2R17a；N(R17)S(O)R17a；N(R17)C(O)N(R17aR17b)；N(R17)C(O)OR17a；或OC(O)N(R17R17a)；
R17、R17a、R17b独立地选自H；C1-6烷基，其中C1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的卤素取代。
如果变量或取代基可选自一组不同的变量且这样的变量或取代基出现多于一次时，则各变量可以相同或不同。
在本发明的含义内，如下使用术语：
术语“任选取代的”是指未取代的或取代的。通常，但不限于，“一个或多个取代基”是指一个、两个或三个，优选一或两个，更优选一个取代基。通常这些取代基可以相同或不同。
“烷基”是指直链或支链碳链。烷基碳的每个氢可被本文进一步指定的取代基替代。
“C1-4烷基”是指具有1-4个碳原子的烷基链，例如如果存在于分子的末端为:甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基，或者例如，当分子的两个部分被烷基基团连接时，为-CH2-、-CH2-CH2-、-CH(CH3)-、-C(CH2)-、-CH2-CH2-CH2-、-CH(C2H5)-、-C(CH3)2-。C1-4烷基碳上的每个氢可被本文进一步指定的取代基替代。
“C1-6烷基”是指具有1-6个碳原子的烷基链，例如如果存在于分子的末端为：C1-4烷基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基，或者例如，当分子的两个部分被烷基基团连接时，为-CH2-、-CH2-CH2-、-CH(CH3)-、-CH2-CH2-CH2-、-CH(C2H5)-、-C(CH3)2-。C1-6烷基碳上的每个氢可被本文进一步指定的取代基替代。
“C3-7环烷基”或“C3-7环烷基环”是指具有3-7个碳原子的环烷基链，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基、环庚基。环烷基碳的每个氢可被本文进一步指定的取代基替代。
“卤素”是指氟、氯、溴或碘。通常优选的卤素是氟或氯。
“4至7元杂环基”或“4至7元杂环”是指具有4、5、6、或7个环原子的可包含高达最大数量双键的环(完全、部分或不饱和的芳香族的或非芳香族的环)，其中高达4个环原子的至少一个环原子被选自硫(包括-S(O)-、-S(O)2-)、氧和氮(包括=N(O)-)的杂原子替换，且其中环经由碳或氮原子连接到分子的其余部分。4至7元杂环的实例为氮杂环丁烷、氧杂环丁烷、硫杂环丁烷、呋喃、噻吩、吡咯、吡咯啉、咪唑、咪唑啉、吡唑、吡唑啉、噁唑、噁唑啉、异噁唑、异噁唑啉、噻唑、噻唑啉、异噻唑、异噻唑啉、噻二唑、噻二唑啉、四氢呋喃、四氢噻吩、吡咯烷、咪唑烷、吡唑烷、噁唑烷、异噁唑烷、噻唑烷、异噻唑烷、噻二唑烷、环丁砜、吡喃、二氢吡喃、四氢吡喃、咪唑烷、吡啶、哒嗪、吡嗪、嘧啶、哌嗪、哌啶、吗啉、四唑、***、***烷、四唑烷、二氮杂环庚烷、氮杂䓬或高哌嗪。术语“5至6元杂环基”或“5至6元杂环”据此定义。
“6至11元杂双环基”或“6至11元杂双环”是指具有6至11个环原子的双环杂环体系，其中至少一个环原子被两个环共有且可含有高达最大数量的双键(完全、部分或不饱和的芳族或非芳族环)，其中高达6个环原子(优选高达5个、更优选高达4个，更优选高达3个环原子)的至少一个环原子被选自硫(包括-S(O)-、-S(O)2-)、氧和氮(包括=N(O)-)的杂原子替换，且其中环经由碳或氮原子连接到分子的其余部分。6至11元杂双环的实例是吲哚、二氢吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并噁唑、苯并异噁唑、苯并噻唑、苯并异噻唑、苯并咪唑、苯并咪唑啉、喹啉、喹唑啉、二氢喹唑啉、喹啉、二氢喹啉、四氢喹啉、十氢喹啉、异喹啉、十氢异喹啉、四氢异喹啉、二氢异喹啉、苯并氮杂䓬(benzazepine)、嘌呤或蝶啶。术语6至11元杂双环也包括螺结构的两环如1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷或桥连杂环如8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷。术语“8至11元杂双环基”或“8至11元杂双环”据此定义。
“5至6元芳香族杂环基”或“5至6元芳香族杂环”是指由环戊二烯基或苯衍生的杂环，其中至少一个碳原子被选自硫(包括-S(O)-、-S(O)2-)、氧和氮(包括=N(O)-)的杂原子替换。这样杂环的实例是呋喃、噻吩、吡咯、咪唑、吡唑、噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、噻二唑、吡喃(pyranium)、吡啶、哒嗪、嘧啶、***、四唑。
优选的式(I)化合物为其中包含在其中的一个或多个残基具有下面给出含义的那些化合物，优选取代基所定义的所有组合为本发明的主题。对于所有优选的式(I)化合物，本发明还包括所有互变异构体和立体异构体形式及其所有比例的混合物，和它们的药学上可接受的盐。
在本发明的优选实施方案中，下面提及的取代基独立地具有下列含义。因此，一个或多个的这些取代基可具有下面给出的优选或更优选的含义。
优选地，选择式(I)中的Ra和Rb以得到式(Ia)至(Ij)中之一：
其中T1、R1、o、m、R14、R14a、R14b具有如上指示的含义。更优选为(Ib)、(If)和(Ii)，特别优选为(Ii)。
优选地，选择式(I)中的Ra和Rb以得到式(Ik)至(Ip)中之一：
其中T1、R1、o、m、R14、R14a、R14b具有如上指示的含义。最优选为(Ik)。
优选地，T1是苯基，其中T1被N(R5a)C(O)N(R5bR5)或N(R5a)C(O)OR5取代，并任选进一步被一个或多个相同或不同的R6取代。
优选地，T1被N(R5a)C(O)N(R5bR5)取代，并任选进一步被一个或多个相同或不同的R6取代。
优选地，T1未被一个或多个R6进一步取代。
优选地，限定式(I)中的T1以得到式(Ik)
其中o、m、R1、Ra、Rb、R5、R5a、R5b具有如上指示的含义。
优选地，R5a、R5b是H。
优选地，R5是T2，其中T2是未取代的或被一个或多个相同或不同的R10取代，且其中T2是苯基；吡啶基；环丙基；环丁基；环戊基；环己基；氧杂环丁烷基；或四氢呋喃基。更优选地，T2是未取代的。
优选地，R5是未取代的C1-6烷基。
优选地，R5是被一个或多个相同或不同的R8取代的C1-6烷基，所述R8选自F；OR9；和N(R9R9a)。
优选地，r是0；或2。优选地，r是1；或2。更加优选地，r是2。
优选地，p、q是1；2；或3。因此，优选p或q皆不是0。
优选地，p + q是2；或3。
更优选地，p和q都是1。
更加优选地，p和q都是1且r是2。
优选地，R14、R14a、R14b、R14c中至多两个不是H。因此，在一个实施方案中，R14、R14a、R14b、R14c中无一不是H；在另一个实施方案中，R、R14a、R14b、R14c中之一不是H；在第三个实施方案中，R14、R14a、R14b和R14c中两个不是H。优选地，R14、R14a、R14b和R14c中至少一个不是H。
优选地，R14、R14a、R14b和R14c中三个不是H。
优选地，R14、R14a、R14b、R14c独立地选自H；F；乙基；和甲基。更优选地，R14、R14a、R14b、R14c独立地选自H；和甲基。在一个实施方案中，R14是甲基、R14a是氢、R14b是氢和R14c是氢。在另一个实施方案中，R14是甲基、R14a是甲基、R14b是氢和R14c是氢。在另一个实施方案中，R14是甲基、R14a是甲基、R14b是甲基和R14c是氢。在另一个实施方案中，R14是甲基、R14a是F、R14b是氢和R14c是氢。在另一个实施方案中，R14是甲基、R14a是F、R14b是甲基和R14c是氢。在另一个实施方案中，R14是甲基、R14a是甲基、R14b是F和R14c是氢。在另一个实施方案中，R14是F、R14a是F、R14b是氢和R14c是氢。
优选地，m是1。
优选地，o是1或2。
优选地，每个R1独立地选自H；卤素；CN；氧代(=O)或C1-6烷基，其中C1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的R3取代。
优选地，R1是未取代的C1-6烷基(更优选甲基或乙基，更加优选甲基)；或被一个R3取代的C1-6烷基。
优选地，两个R1与它们连接的环一起结合以形成8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基或3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基环。
根据本发明化合物的一个亚类由式(Iq)表示：
其中R5、R5a、R5b、R14、R14a、R14b、R14c、R1、o、m如本文所定义。
在一个实施方案中，R5b和R5a是H和R5是C1-6烷基、或C3-7环烷基，其中C1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的R8取代和C3-7环烷基任选被一个或多个相同或不同的R10取代。
在另一个实施方案中，R5b和R5a是H和R5是C1-6烷基(例如甲基、乙基、丙基、或异丙基)，其任选被一个或多个相同或不同的卤素(例如氟)或R8(例如OR9)取代，或R5是C3-7环烷基(例如环丙基)，其任选被一个或多个相同或不同的卤素(例如氟)或R10(例如OR11)取代。
在另一个实施方案中，R5b和R5a是H和R5是C1-6烷基(例如甲基、乙基、丙基、或异丙基)，其任选被一个或多个相同或不同的卤素(例如氟)或R8(例如OR9)取代，或R5是C3-7环烷基(例如环丙基)，其任选被一个或多个相同或不同的卤素(例如氟)或R10(例如OR11)取代，且其中R8和R10是H。
在另一个实施方案中，R5b和R5a是H和R5是C1-6烷基(例如甲基、乙基或丙基)，且被一个或多个氟或羟基取代。
R5具体的实例包括环丙基、甲基、乙基、氟乙基、羟基乙基、二氟乙基、异丙基、氟丙基、吡啶基和氧杂环丁烷基。
在一个实施方案中，R1是C1-6烷基(例如甲基、或乙基)和o是1。
在另一个实施方案中，(R1)o连接在3位。
在一个实施方案中，R14、R14a、R14b和R14c选自C1-6烷基或H。在一个实施方案中，R14、R14a、R14b和R14c选自C1-6烷基；F或H。
在一个实施方案中，R14、R14a、R14b和R14c中三个不是H。
在另一个实施方案中，R14、R14a、R14b和R14c中3个选自C1-6烷基(例如甲基、乙基或丙基)。在另一个实施方案中，R14、R14a、R14b和R14c中3个选自C1-6烷基(例如甲基、乙基或丙基)或F。
在另一个实施方案中，R14、R14a、R14b和R14c中3个选自甲基。在另一个实施方案中，R14、R14a、R14b和R14c中3个选自甲基或F。
在另外的实施方案中，R14、R14a、R14b是甲基和R14c是H。
其中部分或所有上述基团具有优选含义的式(I)的化合物也是本发明的目的。
本发明进一步优选的化合物选自：
1-环丙基-3-(4-(4-吗啉代-6,6-二氧代(dioxido)-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-环丙基-3-(4-(4-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(S)-1-环丙基-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(S)-1-环丙基-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(S)-1-乙基-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(S)-1-甲基-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(S)-1-(2-羟基乙基)-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(S)-1-(2-氟乙基)-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-(4-(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-乙基脲；
1-(4-(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-(2-羟基乙基)脲；
(R)-1-环丙基-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-(4-(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-环丙基脲；
1-(4-(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲基脲；
1-(4-(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-(2-氟乙基)脲；
(S)-1-环丙基-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-7,8-二氢-5H-噻喃并[4,3-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(S)-1-环丙基-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-7,8-二氢-5H-噻喃并[4,3-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(S)-1-(2,2-二氟乙基)-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-(4-(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-(2,2-二氟乙基)脲；
(S)-1-异丙基-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-(4-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-环丙基脲；
1-环丙基-3-(4-(4-(3-乙基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(S)-1-(3-氟丙基)-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-(4-(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-(3-氟丙基)脲；
1-环丙基-3-(4-(7-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(S)-1-环丙基-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-5,5-二氧代-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(S)-1-环丙基-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-环丙基-3-(4-(5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(S)-1-环丙基-3-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-环丙基-3-(4-(5-甲基-4-吗啉代-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-环丙基-3-(4-(4-(3-乙基吗啉代)-5-甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-(4-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-5-甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-环丙基脲；
1-(4-(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-5-甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-环丙基脲；
(S)-1-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-(吡啶-4-基)脲；
(S)-1-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶基-2-基)苯基)-3-(吡啶-3-基)脲；
1-环丙基-3-(4-((R)-5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-环丙基-3-(4-((S)-5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；和
(S)-1-环丙基-3-(4-(6,6-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-5,5-二氧代-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-2-基)苯基)脲。
本发明进一步优选的化合物选自：
1-乙基-3-(4-(5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-乙基-3-(4-((R)-5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-乙基-3-(4-((S)-5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-乙基-3-(4-(4-((S)-3-乙基吗啉代)-7-甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-乙基-3-(4-(5,7,7-三甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-环丙基-3-(4-(7-氟-7-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-环丙基-3-(4-(5,7-二甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-(4-(5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-丙基脲；
1-(环丙基甲基)-3-(4-(5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-环丙基-3-(4-(4-((S)-3-乙基吗啉代)-5-甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-环丙基-3-(4-(5-甲基-4-((R)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-环丙基-3-(4-(5-乙基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-乙基-3-(2-氟-4-(5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(S)-1-环丙基-3-(4-(4-(3-乙基吗啉代)-7,7-二甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-乙基-3-(4-((R)-4-((S)-3-乙基吗啉代)-5-甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-乙基-3-(4-((S)-4-((S)-3-乙基吗啉代)-5-甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(R)-1-环丙基-3-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(R)-1-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并 d]嘧啶-2-基)苯基)-3-乙基脲；
(S)-1-乙基-3-(4-(4-(3-乙基吗啉代)-7,7-二甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(S)-1-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲基脲；
1-甲基-3-(4-(5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-(4-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-7,7-二甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-环丙基脲；
1-(4-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-7,7-二甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-乙基脲；
(S)-1-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-(2-氟乙基)脲；
(S)-1-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-乙基脲；
1-环丙基-3-(4-((S)-5-甲基-4-((R)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(S)-1-(4-(4-(3-乙基吗啉代)-7,7-二甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)-2-氟苯基)-3-甲基脲；
(S)-1-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)-2-氟苯基)-3-甲基脲；
(S)-1-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)-3-氟苯基)-3-甲基脲；
1-乙基-3-(4-(5-乙基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(S)-1-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-(氧杂环丁烷-3-基)脲；
(S)-1-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)-3-氟苯基)-3-乙基脲；
(S)-1-环丙基-3-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-7,8-二氢-5H-噻喃并[4,3-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-环丙基-3-(4-(7-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-7,8-二氢-5H-噻喃并[4,3-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-环丙基-3-(4-(5,7-二甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-7,8-二氢-5H-噻喃并[4,3-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(S)-1-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-7,8-二氢-5H-噻喃并[4,3-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-乙基脲；
1-环丙基-3-(4-(5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-7,8-二氢-5H-噻喃并[4,3-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-(2-氟乙基)-3-(4-(5,7,7-三甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-(4-(7,7-二甲基-4-吗啉代-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-乙基脲；
1-甲基-3-(4-(5,7,7-三甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
1-(3-氟-4-(5,7,7-三甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲基脲；
1-(4-(4-((S)-3-乙基吗啉代)-5,7,7-三甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)-3-氟苯基)-3-甲基脲；
1-(4-(4-((S)-3-乙基吗啉代)-5,7,7-三甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲基脲；
1-(2-氟乙基)-3-(4-(5,7,7-三甲基-4-吗啉代-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；和
1-环丙基-3-(4-((R)-5,7,7-三甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲。
在通式(I)化合物的互变异构现象例如酮-烯醇互变异构可发生时，包括单独的各个体形式例如酮和烯醇形式以及各个体形式任意比例的混合物。这同样适用于立体异构体例如对映异构体、顺/反异构体、和构象异构体等。
尤其，其中吗啉代环在3-位被一个R1(不是H)取代和/或不同取代基R14/R14a、R14b/R14c的式(I)化合物，本发明涵盖其各手性碳中心的异构体、对映异构体、非对映异构体或其混合物。
如果需要，异构体可通过本领域公知的方法例如通过液相色谱法分离。这同样适用于通过使用例如手性固定相分离对映异构体。类似地，非对映异构体可通过常规的液相色谱法或通过使用手性固定相进行分离。此外，对映异构体可通过将其转化为非对映异构体来分离，即与对映异构纯的辅助化合物偶联，随后分离所得非对映异构体并裂解辅助残基。可替换地，式(I)化合物的任意对映异构体或非对映异构体可使用光学纯的起始材料从立体选择性合成而获得。
式(I)化合物可以以晶体或无定形形式存在。此外，式(I)化合物的某些晶体形式可以以多晶型形式存在，这包括在本发明范围内。式(I)化合物的多晶型可以使用许多常规分析技术包括但不限于X-射线粉末衍射(XRPD)图、红外(IR)光谱、拉曼光谱、差示扫描量热法(DSC)、热重分析(TGA)、和固体核磁共振(ssNMR)来表征和区分。
如果根据式(I)的化合物包含一个或多个酸性或碱性基团，本发明还包括其相应的药学上或毒理学上可接受的盐，特别是其药学上可利用的盐。因此，包含酸性基团的式(I)化合物可根据本发明，例如作为碱金属盐、碱土金属盐或作为铵盐使用。这样盐的更精确实例包括钠盐、钾盐、钙盐、镁盐或与氨或有机胺如乙胺、乙醇胺、三乙醇胺或氨基酸的盐。包含一个或多个碱性基团即可被质子化的基团的式(I)化合物，可根据本发明以其与无机酸或有机酸的加成盐的形式存在和使用。适当酸的实例包括氯化氢、溴化氢、磷酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、萘二磺酸、草酸、乙酸、酒石酸、乳酸、水杨酸、苯甲酸、甲酸、丙酸、新戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸、庚二酸、富马酸、马来酸、苹果酸、氨基磺酸、苯基丙酸、葡萄糖酸、抗坏血酸、异烟酸、柠檬酸、己二酸、以及本领域技术人员已知的其他酸。如果式(I)化合物在分子内同时包含酸性和碱性基团，本发明还包括除了所提及的盐形式之外的内盐或内铵盐(两性离子）。根据式(I)的各个盐可由本领域技术人员已知的常规方法获得，例如通过使这些在溶剂或分散剂中与有机或无机酸或碱接触获得，或通过与其他盐进行阴离子交换或阳离子交换获得。本发明还包括式(I)化合物的所有盐，其由于低生理学相容性不直接适用于药物，但是其可例如用作化学反应的中间体或用于制备药学上可接受的盐。
在整个本发明中，术语“药学上可接受的”是指相应的化合物、载体或分子适于施用给人。优选地，该术语是指由管理机构例如EMEA (欧洲)和/或FDA (US)和/或任意其他国家管理机构批准用于哺乳动物优选人。
本发明还包括根据本发明化合物的所有溶剂化物。
如果需要，所要求保护的化合物对mTOR活性的作用可例如使用在哺乳动物细胞系如HEK293中瞬时表达表位标记的mTOR(其被直接抗表位标记的单克隆抗体实行免疫沉淀)进行测试(Knight等人，2004, Bioorganic and Medicinal Chemistry 12, 4749-4759)。另一测定采用来自细胞或组织裂解液中的使用常规蛋白质纯化方法富含的mTOR蛋白质。在该测定中P70 S6激酶的GST-融合蛋白用作底物。使用磷酸化特异性第一抗体(针对抗磷酸化的苏氨酸389)和酶连结的第二抗体，在ELISA测定法中检测P70 S6的磷酸化(US-A 2004/0191836)。
根据本发明，表述“mTOR”或“mTOR激酶”是指mTOR蛋白(Tsang等人, 2007, DrugDiscovery Today 12, 112-124)。编码mTOR的基因位于人染色体地图基因座lp36.2，且它于人体组织中广泛表达。
如实施例中所示，测试了本发明化合物与其它激酶相比对mTOR的选择性。如所显示，测试化合物与激酶PI3Kδ或DNA-PK相比更有选择性结合mTOR(参照下表9和表10)。因此，本发明化合物被认为有用于预防或治疗与mTOR相关的疾病和病症，例如免疫、炎性、自身免疫性或变应性病症、或增殖性疾病、移植排斥、移植物抗宿主病、心血管疾病、代谢性疾病或神经变性疾病。
因此，本发明提供药物组合物，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分以及药学上可接受的载体，任选与一种或多种其他药物组合物一起组合。
“药物组合物”是指一种或多种活性成分和构成载体的一种或多种惰性成分，以及直接或间接由任意两种或多种成分的组合、络合或聚集导致的，或者由一种或多种成分的离解导致的，或者由一种或多种成分的其他类型的反应或相互作用导致的任意产品。因此，本发明的药物组合物包括将本发明化合物与药学上可接受的载体混合所制成的任意组合物。
术语“载体”是指与治疗剂一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂、或媒介。这样的药物载体可为无菌液体，例如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些，其包括但不限于花生油、豆油、矿物油、和芝麻油等。当药物组合物口服施用时，水是优选的载体。当药物组合物静脉内施用时，盐水和葡萄糖水溶液是优选的载体。盐水溶液和葡萄糖水溶液和甘油溶液优选用作可注射溶液的液体载体。适当的药物赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙二醇(propylene, glycol)、水、和乙醇等。如果需要，组合物还可包含小量润湿剂或乳化剂、或pH缓冲剂。这些组合物可采取溶液剂、悬浮剂、乳剂、片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、和缓释制剂等形式。组合物可用传统粘合剂和载体如甘油三酯配制成栓剂。口服制剂可包括标准载体，例如药用级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。适当药物载体的实例描述在E.W. Martin的"Remington's Pharmaceutical Sciences"。这样的组合物将包含治疗有效量的优选为纯化形式的治疗剂，以及适当量的载体，以便提供用于患者适当施用的形式。该制剂应适合施用方式。
本发明的药物组合物可包含一种或多种另外的化合物作为像一种或多种式(I)化合物一样的活性成分，其不是组合物中的第一种化合物或mTOR抑制剂。进一步的生物活性化合物可以为甾体化合物、白三烯拮抗剂、环孢霉素或雷帕霉素。
本发明的化合物或其药学上可接受的盐以及其他药物活性剂可以一起或分开施用，并且当分开施用时，可以以任意顺序分开或相继发生。当在同一制剂中组合时，应理解，这两种化合物必须是稳定的且彼此以及与制剂的其它组分相容。当分开配制时，它们可以以任何方便的制剂提供，便利地以本领域对于这样的化合物已知的方式提供。
本发明进一步包括式(I)化合物或其药学上可接受的盐，或者包括式(I)化合物的药物组合物与另一种药物或药物活性剂组合施用，和/或本发明的药物组合物还包括这样的药物或药物活性剂。
在本文中，术语“药物或药物活性剂”包括将引出例如由研究员或临床医生欲寻找的组织、***、动物或人的生物或医学反应的药物或药剂。
“组合的”或“组合”或“结合”应理解为功能性共同施用，其中某些或全部化合物可以以不同制剂、不同施用方式(例如皮下、静脉内或口服)和不同施用时间分别施用。这样组合的个体化合物可以以分开的药物组合物连续施用，或者以组合的药物组合物同时施用。
例如，在类风湿性关节炎治疗中，设想与其他化疗剂或抗体试剂组合。可与本发明化合物和它们的盐组合用于类风湿性关节炎治疗的药物活性剂的适宜实例包括：免疫抑制剂如呱氨托美丁、咪唑立宾和利美索龙；抗-TNFα剂如依那西普、英夫利昔单抗、阿达木单抗、阿那白滞素、阿巴西普、利妥昔单抗；酪氨酸激酶抑制剂如来氟米特；激肽释放酶拮抗剂如subreum；白细胞介素11激动剂如奥普瑞白介素；干扰素β1激动剂；透明质酸激动剂如NRD-101(Aventis)；白细胞介素1受体拮抗剂如阿那白滞素；CD8拮抗剂如盐酸氨普立糖盐；β淀粉样前体蛋白拮抗剂如reumacon；基质金属蛋白酶抑制剂如西马司他和其他缓解疾病的抗风湿性药物(DMARDs)如氨甲喋呤、柳氮磺胺吡啶、环孢菌素A、羟氯喹(hydroxychoroquine)、金诺芬、金硫葡糖、硫代苹果酸金钠和青霉胺。
特别地，本文定义的治疗可以用作单一治疗或可以涉及除本发明化合物之外的常规手术或放疗或化疗。因此，本发明的化合物还可以与现有治疗剂组合用于治疗增殖性疾病如癌症。用于组合的适宜药剂包括：
(i) 如用于医学肿瘤学中的抗增殖/抗肿瘤药及其组合，例如烷基化剂(例如顺铂、卡铂、环磷酰胺、氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安和亚硝基脲)；抗代谢物(例如抗叶酸剂如氟嘧啶像5-氟尿嘧啶和替加氟、雷替曲塞、氨甲喋呤、阿糖胞苷、羟基脲和吉西他滨)；抗肿瘤抗生素(例如蒽环类像阿霉素、博来霉素、多柔比星、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素-C、更生霉素和光辉霉素)；抗有丝***剂(例如长春花生物碱像长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞滨，以及紫衫烷类像紫杉醇和泰索帝(taxotere))；以及拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素像依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶、拓扑替康和喜树碱类；
(ii) 细胞抑制剂如抗***药(例如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和艾多昔芬(iodoxyfene）)、***受体下调剂(例如氟维司群)、抗雄激素剂(例如比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特和醋酸环丙孕酮)、LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(例如戈舍瑞林、亮丙瑞林和布舍瑞林)、孕激素(例如醋酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑、来曲唑、(伏氯唑(vorazole))和依西美坦)以及5α-还原酶抑制剂如非那雄胺；
(iii) 抗侵入剂(例如c-Src激酶家族抑制剂像4-(6-氯-2,3-亚甲基二氧基苯胺基)-7-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]-5-四氢吡喃-4-基氧基-喹唑啉(AZD0530)和N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-{6-[4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基]-2-甲基嘧啶-4-基氨基}噻唑-5-甲酰胺(达沙替尼, BMS-354825)，和金属蛋白酶抑制剂像马立马司他和尿激酶纤溶酶原激活剂受体功能抑制剂)；
(iv) 生长因子功能抑制剂：例如这样的抑制剂包括生长因子抗体和生长因子受体抗体(例如，抗erbB2抗体曲妥珠单抗[Herceptin™]和抗erbBl抗体西妥昔单抗[C225])；这样的抑制剂还包括例如酪氨酸激酶抑制剂，例如表皮生长因子家族抑制剂(例如EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂，例如N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(吉非替尼, ZD 1839)、N-(3-乙炔基苯基-6,7-双(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(埃罗替尼, OSI-774)和6-丙烯酰胺-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉代丙氧基)-喹唑啉-4-胺(CI 1033)和erbB2酪氨酸激酶抑制剂如拉帕替尼)、肝细胞生长因子家族抑制剂、血小板衍生生长因子家族抑制剂如伊马替尼、丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂(例如Ras/Raf信号抑制剂如法尼基转移酶抑制剂，例如索拉非尼(BAY 43-9006))和通过MEK和/或Akt激酶的细胞信号抑制剂；
(v) 抗血管生成剂如抑制血管内皮生长因子作用的那些，例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗(Avastin™)和VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂如4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(ZD6474；WO 01/32651的实施例2)、4-(4-氟-2-甲基吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹唑啉(AZD2171；WO 00/47212的实施例240)、伐他拉尼(PTK787；WO 98/35985)和SUl 1248 (舒尼替尼；WO 01/60814)，和通过其他机制作用的化合物(例如利诺胺、整合素αvβ3功能抑制剂和血管他丁)；
(vi) 血管损伤剂如考布他汀A4和国际专利申请WO 99/02166中公开的化合物；
(vii) 反义疗法，例如涉及上面所列靶点的那些，如ISIS 2503，抗ras反义剂；
(viii) 基因治疗方法，包括替换异常基因如异常p53或异常BRCA1或BRCA2的方法、GDEPT (基因导向的酶前药治疗)的方法如使用胞嘧啶脱氨酶、胸苷激酶或细菌硝基还原酶的那些方法，以及增加患者对化疗或放疗耐受的方法如多药耐药基因疗法；以及（ix）免疫治疗方法，包括增加患者肿瘤细胞免疫原性的体外和体内方法，如用细胞因子如白细胞介素2、白细胞介素4或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子转染，降低T细胞无反应性的方法，使用转染的免疫细胞如细胞因子转染的树突细胞的方法，使用细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法，和使用抗独特型抗体的方法。
其他组合治疗描述在WO-A 2009/008992中，在此将其引入作为参考。
因此，这样组合的个体化合物可以以分开的药物组合物连续施用，以及以组合的药物组合物同时施用。
本发明的药物组合物包括适于口服、直肠、局部、肠胃外(包括皮下、肌内、和静脉内）、眼部(眼)、肺部(鼻或口腔吸入)、或鼻给药的组合物，虽然在任意给定情况下最适当的途径将依赖于要治疗病况的性质和严重程度以及活性成分性质。它们可以方便地存在于单一剂型中，并且由药学领域众所周知的的任意方法制备。
在实际使用中，式(I)化合物可根据常规药物混合技术在紧密混合中作为活性成分与药物载体组合。载体可采取多种多样的形式，其依赖于施用例如口服或肠胃外(包括静脉内)所需的制剂形式。在制备用于口服剂型的组合物中可以使用任何常用的药物介质，如在口服液体制剂例如悬浮剂、酏剂和溶液剂情况下，可用水、二醇、油、醇、矫味剂、防腐剂、和着色剂等；或在口服固体制剂如粉剂、硬胶囊和软胶囊和片剂情况下，可用载体如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、颗粒剂、润滑剂、粘合剂、和崩解剂等，相对于液体制剂优选固体口服制剂。
由于它们易于施用，片剂和胶囊剂代表最有利的口服剂量单位形式，在这种情况下明显使用固体药物载体。如果需要，片剂可通过标准的水性或非水性技术进行包衣。这样的组合物和制剂应包含至少0.1%的活性化合物。活性化合物在这些组合物中的百分比当然可以改变，并且可以方便地为单位重量的约2%至约60%。活性化合物在这样治疗有用的组合物中的量是将获得有效剂量的量。活性化合物也可例如作为液体滴剂或喷雾剂鼻内施用。
片剂、丸剂、和胶囊剂等还可包含粘合剂，例如黄蓍胶、***胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，例如磷酸二钙；崩解剂，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉、藻酸；润滑剂，例如硬脂酸镁；以及甜味剂，例如蔗糖、乳糖或糖精。当剂量单位形式为胶囊剂时，其除了上述类型的材料之外还可以包含液体载体，例如脂肪油。
各种其他材料可以作为包衣或者改变剂量单位的物理形式存在。例如，片剂可以用虫胶、糖、或二者包衣。糖浆剂或酏剂除了活性成分之外可包含蔗糖作为甜味剂、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯作为防腐剂、染料和矫味剂例如樱桃或橙味剂。
式(I)化合物还可肠胃外施用。这些活性化合物的溶液剂或悬浮剂可在适当地与表面活性剂如羟丙基纤维素混合的水中制备。分散剂还可在甘油、液体聚乙二醇及其油混合物中制备。在常规的储存和使用条件下，这些制剂包含防腐剂以防止微生物生长。
适于可注射使用的药物形式包括无菌水溶液或分散液和用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。在所有情况下，该形式必须为无菌的并且必须是以达到易注射性存在的程度的流体。它在制备和储存条件下必须是稳定的，并且在保存时必须防止微生物例如细菌和真菌的污染作用。载体可为溶剂或分散介质，其包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)、其适当的混合物和植物油。
可以使用任意适当的给药途径为哺乳动物尤其是人提供有效剂量的本发明化合物。可以使用例如口服、直肠、局部、肠胃外、眼部、肺部、和鼻部等。剂型包括片剂、锭剂、分散剂、悬浮剂、溶液剂、胶囊剂、乳膏剂、软膏剂、和气雾剂等。优选地，口服施用式(I)化合物。
所用活性成分的有效剂量可以根据所用特定化合物、施用方式、要治疗的病况和要治疗病况的严重程度而变化。本领域技术人员可以容易确定这样的剂量。
本发明化合物的治疗有效量将通常依赖于许多因素，包括例如动物的年龄和重量、需要治疗的准确病况及其严重程度、剂型性质、和施用途径。然而，式(I)化合物用于治疗炎性疾病例如类风湿性关节炎(RA)的有效量通常在每日0.1～100 mg/kg接受者(哺乳动物)体重，并且更通常在每日1～10 mg/kg体重。因此，对于70 kg成年哺乳动物，每日实际量通常为70～700 mg，并且该量可以以每日单次剂量给予或者更通常以每日若干(例如二、三、四、五或六)个子剂量给予以使每日总剂量相同。药学上可接受的盐、药物前体或其代谢物的有效量可以根据式(I)化合物本身有效量的比例来确定。据设想，类似的剂量会适于治疗其他上面提及的病况。
如本文所用的术语“有效量”是指药物或药剂引发例如研究员或临床医生欲寻求的组织、***、动物或人的生物或医学反应的量。
此外，术语“治疗有效量”是指任何量，与未接受这样量的相应受试者相比，其导致改进的治疗、治愈、预防、或改善疾病、病症或副作用，或降低疾病或病症的发展速度。该术语在其范围内还包括有效增强正常生理功能的量。
本发明的另一方面为本发明的化合物或其药学上可接受的盐用作药物。
本发明的另一方面为本发明化合物或其药学上可接受的盐用于治疗或预防与mTOR有关的疾病或病症的方法。
在本发明的上下文中，与mTOR相关的疾病或病症被定义为其中涉及mTOR的疾病或病症。
mTOR激酶和免疫性疾病之间的联系被FDA于1997年批准mTOR抑制剂雷帕霉素(Sirolimus®)作为防止肾移植排斥药物的事实所证明(Tsang等, 2007, Drug DiscoveryToday 12, 112-124)。雷帕霉素阻止白细胞介素2(IL-2)-介导的T细胞增殖和活化。因此mTOR抑制剂可有用于治疗其中T细胞发挥作用的其他免疫、炎症、自身免疫和变应性疾病，例如类风湿性关节炎(RA)、炎性肠病(IBD；克罗恩病和溃疡性结肠炎)、银屑病、***性红斑狼疮(SLE)、和多发性硬化(MS)。
此外，FDA于2003年批准雷帕霉素在冠状动脉支架中用作抗再狭窄的药物，因为雷帕霉素是血管平滑肌细胞增殖的有效抑制剂(Tsang等, 2007, Drug Discovery Today12, 112-124)。因此mTOR抑制剂可用于其中细胞过度增殖发挥作用的其他疾病的治疗中。
雷帕霉素类似物(rapalogs)坦西莫司和依维莫司被批准用于晚期肾细胞癌，表明抑制mTOR通路在癌症治疗中的效用(Richard等, 2011. Current Opinion DrugDiscovery and Development 13(4)：428-440)。
虽然本发明化合物作为mTOR激酶抑制剂且不具有雷帕霉素相同的作用方式，但可以预期，这一类mTOR抑制剂将在与雷帕霉素相同的适应症和下文所述的其他适应症中有效。
在优选的实施方案中，与mTOR相关的疾病或病症是免疫、炎性、自身免疫、或变应性病症或疾病或移植排斥反应或移植物抗宿主病。
因此，本发明另一方面是本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗或预防免疫、炎性、自身免疫、或变应性病症或疾病或移植排斥反应或移植物抗宿主病的方法。
根据本发明，自身免疫疾病为至少部分由身体对抗自身组分例如蛋白质、脂质或DNA的免疫反应所引发的疾病。
在优选的实施方案中，自身免疫疾病选自类风湿性关节炎(RA)、炎性肠病(IBD；克罗恩病和溃疡性结肠炎)、银屑病、***性红斑狼疮(SLE)、和多发性硬化(MS)。
类风湿性关节炎(RA)是慢性进行性衰弱的炎性疾病，其影响约1%的世界人口。RA为主要影响手和脚的小关节的对称性多发性关节炎。除了滑膜炎症，关节内膜(jointlining)，称为血管翳的组织攻击正面(aggressive front)侵入和破坏局部关节结构(Firestein 2003, Nature 423：356-361)。
炎性肠病(IBD)的特征为慢性复发性肠炎。IBD细分为克罗恩病和溃疡性结肠炎显型。克罗恩病最常涉及末端回肠和结肠，是透壁的和不连续的。相反，在溃疡性结肠炎中，炎症是连续的且限于直肠和结肠的粘膜层。在限定于直肠和结肠大约10%的情况下，克罗恩病或溃疡性结肠炎的确定分类不能作出，并指定“未定型结肠炎”。两种疾病都包括皮肤、眼睛或关节的肠外炎症。嗜中性粒细胞诱导的损伤可以通过使用嗜中性粒细胞迁移抑制剂来预防(Asakura等, 2007, World JGastroenterol. 13(15)：2145-9)。
银屑病是慢性炎性皮肤病，其影响约2%的人口。其特征为通常在头皮、肘、和膝盖上发现的红色、鳞片状皮肤斑，且可以与严重的关节炎有关。损害由异常角化细胞增殖和炎症细胞渗入真皮和表皮导致(Schön等, 2005, New Engl. J. Med. 352：1899-1912)。
***性红斑狼疮(SLE)是由T-细胞介导的B-细胞激活产生的慢性炎性疾病，其导致肾小球肾炎和肾衰竭。人SLE在早期的特征为持久的自身反应性CD4+记忆细胞的扩张(D'Cruz等, 2007, Lancet 369(9561)：587-596)。
多发性硬化(MS)是炎性和脱髓鞘(demyelating)神经***疾病。据认为，它是由CD4+1型T辅助细胞介导的自身免疫病症，但目前的研究指向其他免疫细胞的作用(Hemmer等, 2002, Nat. Rev. Neuroscience 3, 291-301)。
移植物抗宿主病(GVDH)是异源骨髓移植(BMT)的主要并发症。GVDH由组织相容性复杂***中识别接受者差异并且对其作出反应的供体T细胞引起，这导致了显著的发病率和死亡率。
移植排斥(同种异体移植排斥)包括但不限于例如肾、心脏、肝、肺、骨髓、皮肤和角膜的移植之后的急性和慢性同种异体排斥。已知T细胞在同种异体排斥的特异性免疫反应中起关键作用。
在进一步优选的实施方案中，与mTOR相关的疾病或病症是增殖性疾病，特别是癌症。
特别与mTOR相关的疾病和病症是增殖性病症或疾病，特别是癌症。
因此，本发明的另一方面为本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗或预防增生疾病尤其是癌症的方法。
癌症包括一组特征为异常细胞不受控制的生长和扩散的疾病。所有类型的癌症通常涉及控制细胞生长、***和存活的某些异常，从而导致细胞的恶性生长。对所述细胞恶性生长起作用的关键因素是不依赖生长信号，对抗生长信号不敏感，逃避细胞凋亡，无限的复制潜能，持续的血管生成、组织侵入和转移，以及基因组不稳定(Hanahan和Weinberg,2000. The Hallmarks of Cancer. Cell 100, 57-70)。
通常，癌症分为血液学癌症(例如白血病和淋巴瘤)，和实体癌症例如肉瘤和癌(例如脑癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、***癌、卵巢癌）。
特别是癌症，其中PI3K/Akt信号转导途径被激活，例如由于肿瘤抑制因子PTEN的失活或PIK3A(编码催化磷酸肌醇-3激酶亚单位p110α(p11Oα)的基因)中激活的突变，预期其对mTOR抑制剂治疗有反应(Garcia-Echeverria和Sellers, 2008, Oncogene 27, 5511-5526)。具有PTEN突变和/或PI3K/Akt激活高发病率的癌症的实例子宫内膜癌、胶质母细胞瘤、头颈部癌、结肠癌、胰腺癌、胃癌、肝癌、卵巢癌、甲状腺癌、肾细胞癌、乳腺癌、***癌和胃肠道间质瘤(GIST)。mTOR抑制剂最有前途的结果已在肾细胞癌(RCC)、套细胞淋巴瘤和子宫内膜癌中获得(Faivre等, 2006. Nat. Rev. Drug. Discov. 5(8)：671-688)。另外，mTOR抑制剂可有用于治疗包括ALL和CML的白血病、多发性骨髓瘤和淋巴瘤。
此外，包含激活mTOR突变(例如赋予mTOR基本激活的单个氨基酸变化如S2215Y或R2505P)的癌症，可以用mTOR抑制剂治疗(Sato等, 2010, Oncogene 29(18)：2746-2752)。
mTOR在血管生成中起重要作用，新血管生成提供生长和***细胞的氧和营养物质。在此文中，mTOR控制产生HIFl-α和HIFl-β蛋白质(其为缺氧诱导因子(HIF)的亚单位)，控制基因表达的转录因子，其产品在血管生成、细胞增殖、运动和生存中起作用。HIF诱导的两种重要的蛋白是血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素-2。据最近报道，小分子mTOR抑制剂可降低肿瘤的生长，肿瘤血管生成血管通透性(Xue等, 2008. Cancer Research 68(22)：9551-9557)。
除了肿瘤形成，有证据表明，mTOR在错构瘤综合征中起作用。最近的研究表明，肿瘤抑制蛋白如TSC1、TSC2、PTEN和LKB1严格控制mTOR信号。这些肿瘤抑制蛋白的丧失由于升高mTOR信号而导致一系列错构瘤条件(Rosner等, 2008. Mutation Research 659(3)：284-292)。与mTOR失调已建立分子联系的综合征包括黑斑息肉综合征(Peutz-Jegherssyndrome)(PJS)、考登病(Cowden disease)、斑-赖-卢综合征(Bannayan-Riley-Ruvalcabasyndrome)(BRRS)、普罗特斯综合征(Proteus syndrome)、小脑发育不良性节细胞瘤(Lhermitte-Duclos disease)和结节性硬化症(TSC)。这些综合症的患者特征性发展为多器官良性错构瘤。对mTOR活性有影响的其它肿瘤抑制蛋白是VHL、NF1和PKD，其丧失可分别触发希佩尔-林道综合征(Hippel-Lindau disease)、1型神经纤维瘤病、和多囊性肾病。
增殖性疾病或病症包括一组特征为增加细胞增殖的疾病。一个实例是在支架冠状动脉血管成形术后由血管平滑肌(VSM)细胞过度生长引起的再狭窄。为了防止发生这个问题，已开发药物洗脱支架，以抑制VSM细胞的生长。雷帕霉素涂层支架有效降低再狭窄并已通过FDA批准(Serruys等, 2006. N. Engl. J. Med. 354(5)：483-95)。
在进一步优选的实施方案中，与mTOR有关的疾病或病症是心血管疾病、代谢性疾病或神经变性疾病。
因此，本发明的另一方面是本发明化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗或预防心血管疾病、代谢性疾病或神经变性疾病的方法。
最近的研究已经揭示mTOR在心血管疾病中的作用，例如升高的mTOR激酶活性已相关于心脏肥大(心脏扩大)，它是心脏衰竭的主要危险因素。在细胞水平，心脏肥大的特征细胞尺寸的增加和增强的蛋白质合成。虽然存在各种肥大性刺激，如神经激素和肽生长因子，以及几种蛋白激酶级联涉及心脏肥大，但可能地，所有形式的肥大性刺激以mTOR依赖性方式激活一般蛋白质的翻译机制。值得注意的是，雷帕霉素抑制mTOR在许多转基因小鼠模型中防止心脏肥大。此外，应激诱导的心脏肥大在小鼠中依赖于mTOR。这些结果表明，mTOR对于异常心脏过生长是至关重要的，mTOR抑制剂可有用于治疗人心脏肥大(Tsang等, 2007,Drug Discovery Today 12, 112-124)。
可用mTOR抑制剂治疗的代谢性疾病包括1型糖尿病、2型糖尿病、肥胖(Tsang等,2007, Drug Discovery Today 12, 112-124)。1型糖尿病是由于胰腺β细胞破坏而因胰岛素产生损失所引起的。使用含有雷帕霉素防止胰岛移植排斥的免疫抑制方案的临床研究已在1型糖尿病患者中显示显著成效。当胰腺β细胞分泌胰岛素不能补偿骨骼肌、肝脏和脂肪细胞周边的胰岛素抵抗(对胰岛素不敏感)时，发生2型糖尿病。最近的数据表明，mTOR信号的持续激活是致使胰岛素受体底物(IRS)对胰岛素不反应的关键事件。此外，已经证实，雷帕霉素恢复IRS对胰岛素的敏感性(Shah等, 2004. Curr. Biol. 14(18)：1650-1656)。因此，mTOR抑制剂在2型糖尿病患者的处理中是潜在有用的。肥胖是一种代谢性疾病，具有世界范围内稳定增加的健康风险。最近的证据表明，mTOR在脂质代谢中起作用。在脂肪形成过程中，mTOR的表达从前脂肪细胞中仅仅可检测急剧增加到完全分化的脂肪细胞中的高表达，雷帕霉素抑制脂肪细胞分化(Yeh等, 1995. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 92(24)：11086-90)。
最近的报告表明，mTOR抑制剂可有用于治疗神经变性疾病如亨廷顿病、阿尔茨海默氏病和帕金森氏病。亨廷顿病是由蛋白质亨廷顿与氨基末端异常的长谷氨酰胺重复的突变体形式所引起的神经变性病症。该突变体蛋白聚集在神经元细胞中，并可导致神经细胞损伤和毒性。雷帕霉素在亨廷顿病的动物模型中减少亨廷顿的累积和细胞死亡，并且防止神经变性(Ravikumar等, 2004. Nat Genet. 36(6)：585-95)。此外，雷帕霉素诱导自噬响应，这提示在亨廷顿聚集体的清除中发挥作用。
细胞内蛋白质聚集体也发生在其他神经变性疾病，例如阿尔茨海默氏病。Tau蛋白经常发现在阿尔茨海默氏症患者的大脑，并且被认为有助于形成神经原纤维缠结(例如，在tau病变如额颞痴呆)。在苍蝇模型中，雷帕霉素减少tau蛋白的浓度，并降低tau积聚引起的毒性(Berger等, 2006. Hum Mol Genet. 2006年2月1日；15(3)：433-42)。因此，mTOR抑制剂可有用于预防阿尔茨海默氏症患者的毒性tau蛋白的积累。
帕金森氏病(PD)是与错折叠蛋白的积累和聚集有关的神经变性疾病。防止聚集或解聚错折叠的蛋白质，可以通过减慢或预防PD进展提供治疗益处。泛素-蛋白酶体***(UPS)是作用于聚集蛋白质的重要降解机理。据报道，雷帕霉素对蛋白酶体抑制剂乳胞素诱导的多巴胺能神经元细胞死亡提供神经保护。有人建议，雷帕霉素的作用部分是通过错折叠蛋白质增强降解由自噬增强介导的(Pan等, 2008. Neurobiol. Dis. 32(1)：16-25)。因此可增强自噬的化合物，可代表治疗PD患者的有前途的策略。
在进一步优选的实施方案中，与mTOR相关的疾病或病症是自噬相关的疾病。
因此，本发明的另一方面是本发明化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗或预防自噬相关的疾病的方法中。
自噬是一种溶酶体依赖性的过程，由此蛋白质或损伤的细胞器官在细胞内降解(Mizushima等, 2008. Nature 451 (7182)：1069-75)。在此过程中，有双层膜的自噬体包围要降解的细胞组分。然后自噬体与溶酶体融合，其例如降解蛋白质，导致氨基酸的重复利用。自噬主要涉及长寿命蛋白质的降解、蛋白质聚集、以及细胞器官和其它细胞组分。除了其生理功能之外，自噬可开发用于治疗由错叠蛋白聚集引起的多种疾病，例如神经变性疾病如亨廷顿病、阿尔茨海默氏病或帕金森氏病。自噬相关的其它疾病描述于WO-A2009/049242，在此引入，作为参考。
自噬诱导的化合物是指在细胞中诱导自噬的化合物。自噬相关的疾病是指通过引入自噬可以治疗的疾病。近来已经表明，ATP竞争性mTOR激酶抑制剂可以诱导自噬(Thoreen等, 2009. J. Biol. Chem. 284(12)：8023-32)。有趣地，ATP竞争性mTOR激酶抑制剂在哺乳动物细胞中诱导自噬似乎比雷帕霉素更有效。综上所述，本发明的化合物在细胞中可有用于诱导自噬，并用于治疗自噬相关的疾病。
在进一步优选的实施方案中，所述疾病或病症是病毒感染。
因此，本发明的另一方面是本发明化合物或其药学上可接受的盐用于治疗或预防病毒感染的方法。
所有病毒需要细胞核糖体翻译其mRNA。例如，人巨细胞病毒(HCMV)感染已显示激活mTORC1信号途径。在Torinl治疗感染的细胞中，靶向mTOR激酶的催化位点的mTOR抑制剂阻断病毒后代的产生。另外，Torinl显示了抑制α、β、和γ疱疹病毒家族代表性成员的复制，说明mTOR激酶抑制剂作为广谱抗病毒剂的潜力(Moorman和Shenk, 2010. J. Virol. 84(10)：5260-9)。此外可由mTOR抑制剂治疗或预防的病毒感染描述在WO-A 2011/011716，在此引入，作为参考。
本发明的再一方面是本发明化合物或其药学上可接受的盐用于制备治疗或预防与mTOR有关的疾病或病症的药物中的用途。
本发明的再一方面是本发明化合物或其药学上可接受的盐用于制备治疗或预防免疫、炎性、自身免疫、或变应性病症或疾病或移植排斥或移植物抗宿主病的药物中的用途。
本发明的再一方面是本发明化合物或其药学上可接受的盐用于制备治疗或预防增殖性疾病特别是癌症的药物中的用途。
本发明的再一方面是本发明化合物或其药学上可接受的盐用于制备治疗或预防心血管疾病、代谢性疾病或神经变性疾病的药物中的用途。
本发明的再一方面是本发明化合物或其药学上可接受的盐用于制备治疗或预防自噬相关的疾病的药物中的用途。
本发明的再一方面是本发明化合物或其药学上可接受的盐用于制备治疗或预防病毒感染的药物中的用途。
在本发明这些用途的上下文中，与mTOR相关的疾病和病症如上面所定义。
本发明的再一方面是在需要其的哺乳动物患者中治疗、控制、延迟或预防一种或多种选自与mTOR相关的疾病和病症的病况的方法，其中所述方法包括给所述患者施用治疗有效量的根据本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
本发明的再一方面是在需要其的哺乳动物患者中治疗、控制、延迟或预防一种或多种选自免疫、炎性、自身免疫、或变应性病症或疾病或移植排斥或移植物抗宿主病的病况的方法，其中所述方法包括给所述患者施用治疗有效量的根据本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
本发明的再一方面是在需要其的哺乳动物患者中治疗、控制、延迟或预防增殖性疾病特别是癌症的方法，其中所述方法包括给所述患者施用治疗有效量的根据本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
本发明的再一方面是在需要其的哺乳动物患者中治疗、控制、延迟或预防一种或多种选自心血管疾病、代谢性疾病或神经变性疾病的病况的方法，其中所述方法包括给所述患者施用治疗有效量的根据本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
本发明的再一方面是在需要其的哺乳动物患者中治疗、控制、延迟或预防自噬相关的疾病的方法，其中所述方法包括给所述患者施用治疗有效量的根据本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
本发明的再一方面是在需要其的哺乳动物患者中治疗、控制、延迟或预防病毒感染的方法，其中所述方法包括给所述患者施用治疗有效量的根据本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
在本发明这些方法的上下文中，与mTOR相关的疾病和病症如上面所定义。
如本文所用的术语“治疗”或“治疗”意指所有方法，其中其可以为减慢、中断、阻止、或停止疾病的进展，但是不必须表示所有症状的完全消除。
与本发明药物组合物有关的所有上述实施方案也适用于本发明上述第一或第二个医学用途或方法。
用于本发明化合物制备的示例性路线如下所述。尤其是在引入活化或保护化学基团的结合中，本领域从业者清楚要结合或调节路线。
一般的路线是指制备本发明化合物的方法，其包括如下步骤：
- 将式(II)的化合物
其中Ra、Rb、R1、o、m具有如上指出的含义，与式T1-X的化合物反应，其中T1具有如上指出的含义和X是适合铃木(Suzuki)反应的基团，像4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基，以得到式(I)的化合物。
通过实例的方式提供了以下方案。本领域从业者清楚尤其是在引入用于官能团活化和/或用于官能团保护的步骤中，要相应改变反应条件。
实施例
材料和方法
NMR
1H NMR光谱使用Bruker AVANCE 400 MHz光谱仪在400 MHz进行了记录。
LC-MS的设备和条件如下：
LC-MS方法A：
分析在Agilent Technologies 1200系列上使用二元泵进行，
柱：Waters xTerra, 3.5μm，2.1 x50 mm
溶剂：A =水+ 0.07％甲酸
B =甲醇
流速：0.4ml/min
温度：25℃。
表1
时间(分钟) B(％) A(％)
0 10 90
1 10 90
1.5 95 5
7.0 95 5
7.2 10 90
10 10 90
波长：PDA检测，200-400nm
质谱条件：G6110A, Quadrupole(四极杆)LC。以正模式在50至900原子量之间扫描质量，收集了质谱数据。
LC-MS方法B：
分析在Waters-ZQ***上使用以下条件进行：
柱：Phenomenex Gemini NX C18 30 x 3mm 3μm
溶剂：
A =水+ 0.1％甲酸
B = (95%乙腈：5%水)+ 0.1%甲酸
流速：1.5ml/min
温度：室温。
表2 梯度：表2 梯度：
时间(分钟) A(％) B(％)
0 95.0 5.0
0.50 95.0 5.0
3.00 0.0 100.0
4.50 0.0 100.0
4.60 95.0 5.0
6.00 95.0 5.0
波长：PDA检测，200-400nm
质谱条件：采用20V的锥孔(cone)电压，以正和负的模式在150至700原子量之间扫描质量，收集了质谱数据。
LC-MS方法C：
分析在Agilent Technologies 1200系列上使用二元泵进行，
柱：Venusil XBP-C18 2.1 x50 mm, 5μm
溶剂：A =水 + 0.04% TFA
B =乙腈 + 0.02% TFA
流速：0.6mL/min
温度：40℃。
表3：
时间(分钟) B(％) A(％)
0 0 100
0.4 0 100
3.4 80 20
3.85 100 0
3.86 0 100
4.50 0 100
波长：PDA检测，200-400nm
质谱条件：G6110A, Quadrupole LC。以正模式在100至1000原子量之间扫描质量，收集了质谱数据。
LC-MS方法D：
分析在Agilent Technologies 1200系列上使用二元泵进行，
柱：Venusil XBP-C18 2.1 x50 mm, 5μm
溶剂：A =水 + 0.04% TFA
B =乙腈 + 0.02% TFA
流速：0.8 mL/min
温度：40℃。
表4：
时间(分钟) B(％) A(％)
0.00 1 99
0.40 1 99
3.40 90 10
3.85 100 0
3.86 1 99
4.50 1 99
波长：PDA检测，200-400nm
质谱条件：采用20V的锥孔电压，以正和负的模式在150至700原子量之间扫描质量，收集了质谱数据。
LC-MS方法E：
分析在Agilent Technologies 1200系列上使用二元泵进行，
柱：Waters Acquity UPLC BEH C18, 30 x 2.1 mm, 1.7μm
溶剂：A =水+ 0.1％甲酸
B =乙腈+ 0.1%甲酸
流速：0.5ml/min
温度：40℃。
表5：
时间(分钟) B(％) A(％)
0.00 5.0 95.0
0.20 5.0 95.0
1.00 95.0 5.0
1.50 95.0 5.0
1.70 5.0 95.0
2.70 5.0 95.0
波长：PDA检测，210-400nm
质谱条件：采用25V的锥孔电压，以正和负的模式在150至1000原子量之间扫描质量，收集了质谱数据。
LC-MS方法F：
分析在Agilent Technologies 1200系列上使用二元泵进行，
柱：Waters Acquity UPLC BEH C18, 50 x 2.1 mm, 1.7μm
溶剂：A =水+ 0.1％甲酸
B =乙腈+ 0.1%甲酸
流速：0.5ml/min
温度：40℃。
表6：
时间(分钟) B(％) A(％)
0.00 5.0 95.0
0.20 5.0 95.0
4.20 95.0 5.0
4.70 95.0 5.0
4.75 5.0 95.0
6.00 5.0 95.0
波长：PDA检测，210-400nm
质谱条件：采用25V的锥孔电压，以正和负的模式在150至1000原子量之间扫描质量，收集了质谱数据。
LC-MS方法G：
分析在Shimadzu Technologies LC-20AD上使用二元泵进行，
柱：HALO-C18 2.1x30 mm, 2.7μm
溶剂：A =4L水(0.04% TFA)
B =4L乙腈(0.02% TFA)
流速：1.0 mL/min
温度：40℃。
表7：
时间(分钟) B(％) A(％)
0.00 10 90
1.15 90 10
1.55 90 10
1.56 10 90
2 10 90
波长：PDA检测，200-400nm
质谱条件：LCMS-2010EV, Quadrupole LC。以正模式在100至1000原子量之间扫描质量，收集了质谱数据。
表8：缩写
ACN 乙腈
Ar 芳基
aq 水性
br 宽峰
Boc 叔丁氧基羰基
BuLi 丁基锂
d 双重峰
DCM 二氯甲烷
dd 双双重峰
ddd 双重双双重峰
DEAD 偶氮二甲酸二乙酯
DIAD 偶氮二甲酸二异丙酯
DIPEA 二异丙基乙胺
DME 1,2-二甲氧基乙烷
DMF N,N‘-二甲基甲酰胺
DMF-DMA N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛
DMSO N,N‘-二甲基亚砜
DP 药物拉下(Drug pulldown)
dt 三双重峰(Doublet of triplets)
DTT 二硫苏糖醇
EDC 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺
EDTA 乙二胺四乙酸
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
eq 当量
g 克
h 小时
HC1 盐酸
H20 水
H2S 硫化氢
HOBt 1-羟基苯并***
HPLC 高效液相色谱法
IC50 50%抑制浓度
iPr 异丙基
L 升
LC-MS 液相色谱质谱法
m 多重峰
M 摩尔
MeOH 甲醇
Mesyl 甲基磺酰氯
mg 毫克
MgSO4 硫酸镁
min 分钟
mL 毫升
mm 毫米
mmol 毫摩尔
mol% 摩尔百分率
μL 微升
nm 纳米
NMR 核磁共振
PBS 磷酸盐缓冲液
q 四重峰
qu 五重峰
rpm 每分钟转数
rt 室温
RT 保留时间
s 单峰
sat. 饱和的
t 三重峰
td 三重双峰
tdd 双三重双峰(Triple doublet of doublets)
THF 四氢呋喃
tt 三三重峰
tert 叔
实施例1：
(S)-1-环丙基-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲
步骤(i)
将丙烯酸甲酯(99.2 mL, 1.1 mmol)缓慢加入到巯基乙酸甲酯(91 mL, 1.0mmol)和哌啶(2.0 mL, 0.02 mol)的溶液中，同时保持反应混合物的温度在50℃。将反应​​搅拌2小时，然后将过量的丙烯酸甲酯和哌啶在高真空下蒸出，得到目标产物3-((甲氧基羰基)甲硫基)丙酸甲酯(185 g, 96%)。
LC-MS (方法A)：(ES+) 193，RT = 4.29分钟。
步骤(ii)
在甲苯(250 mL)中将金属锂(2.12 g, 0.30 mol)在室温用甲醇(80 mL)处理。所有锂都溶解后，在70℃经0.5小时加入3-((甲氧基羰基)甲硫基)丙酸甲酯。然后将反应温度提高(馏出甲醇)至最终温度110℃，并将该温度维持18小时。所得混合物含有1：1的所需产物和3-氧代四氢噻吩-2-甲酸甲酯的混合物。将反应冷却，通过过滤收集固体，以提供含有所需产物锂盐富集的固体。将固体用1N HCl溶液酸化，并用DCM萃取。将有机相浓缩，并将剩余物通过柱色谱法纯化，用EtOAc/石油醚(2%至10%)洗脱以除去任何残留的3-氧代四氢噻吩-2-甲酸甲酯，从柱的第二个洗脱馏分得到四氢-4-氧代噻吩-3-甲酸甲酯(14.7 g,33%)。
LC-MS (方法A),(ES+) 161，RT = 4.92分钟。
步骤(iii)
向S-乙基异硫脲鎓溴化物(S-ethyl isothiouronium bromide)(3.0 g, 16.2mmol)的水(60 mL)溶液中，滴加入碳酸钠(1.71 g, 16.2 mmol)和四氢-4-氧代噻吩-3-甲酸甲酯(2.51 g, 16.2 mmol)。混合物在室温黑暗中搅拌过夜。将所得混合物中的固体沉淀通过过滤收集，用水、二***、甲醇和丙酮洗涤，然后将固体真空干燥，得到2-(乙基硫基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4-(3H,5H,7H)-酮，为白色固体(2.88 g, 83%)。未经进一步纯化，将粗产物直接用于下一步骤。
LC-MS (方法A), (ES+) 215，RT = 4.99分钟。
步骤(iv)
向2-(乙基硫基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4-(3H,5H,7H)-酮(2.88 g, 13.45 mmol)于水(20 mL)的悬浮液中，加入2.0 mL浓HC1和4.0 mL AcOH。将反应回流加热过夜，然后冷却，并通过过滤收集固体，用水和甲醇洗涤，蒸发并干燥，得到白色固体的噻吩并[3,4-d]嘧啶-2,4-(1H,3H,5H,7H)-二酮(1.80 g, 80%)。未经进一步纯化，将粗产物直接用于下一步骤。
LC-MS (方法A), (ES+) 171，RT = 1.66分钟。
步骤(v)
将噻吩并[3,4-d]嘧啶-2,4-(1H,3H,5H,7H)-二酮(1.6 g, 9.41 mmol)悬浮于4.0mL苯膦酰二氯(phenylphosphonyl dichloride)，并将悬浮液在135℃加热过夜，然后在165℃加热1小时。将所得反应混合物冷却并倒入冰水中。水层用乙酸乙酯萃取。将有机层合并，用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥并蒸发。然后将粗产物在硅胶上用柱色谱法(洗脱剂：PE/EA=20/1-10/1)纯化，得到2,4-二氯-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶，为浅黄色固体(1.6 g, 83%)。
LC-MS (方法A), (ES+)207/ 209，RT = 4.96分钟。
步骤(vi)
在0℃向2,4-二氯-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶(300mg, 1.45 mmol)和Et3N(294mg, 2.9 mmol)的DMF(5.0 mL)溶液中，滴加入3-(S)-甲基吗啉(161mg,1.59 mmol)。加入完成后，将混合物室温搅拌过夜。真空除去溶剂，将得到的剩余物分配于水和乙酸乙酯之间。有机层用盐水洗涤，干燥并浓缩，得到粗产物，将其通过制备型TLC(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯=2/1)纯化，得到2-氯-5,7-二氢-4-((S)-3-甲基吗啉代)噻吩并[3,4-d]嘧啶，为浅黄色固体(283 mg, 72%)。
LC-MS (方法A), (ES+)272，RT = 5.00分钟。
步骤(vii)
向2-氯-5,7-二氢-4-((S)-3-甲基吗啉代)噻吩并[3,4-d]嘧啶(100 mg, 0.37mmol)的DME/H20 (4：1, 10 mL)溶液中，加入1-环丙基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)脲(124 mg, 0.41 mmol)、和Na2CO3 (118 mg, 1.11 mmol)，接着加入 PdCl2(dppf)(15 mg, 0.02mmol)。在氮气下将所得混合物加热至70℃并搅拌过夜。减压除去溶剂，将所得剩余物在乙酸乙酯和水之间进行分配。有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩得到粗产物，将其通过制备型TLC(DCM/MeOH = 20/1)纯化，得到所需产物，为黄色固体(20 mg, 13%)。
1H NMR (d4-甲醇) δ 8.24 (d, 2H), 7.51 (d, 2H), 4.69 (s, 1H), 4.60-4.58(m, 1H), 4.37-4.35 (m, 1H), 4.24-4.17 (m, 3H), 4.03-3.99 (m, 1H), 3.80 (s,2H), 3.70-3.65 (m, 1H), 3.55-3.48 (m, 1H), 2.64-2.60 (m, 1H), 1.40 (d, 3H),0.79-0.77 (m, 2H), 0.55-0.54 (m, 2H)。
LC-MS (方法A), (ES+)412，RT = 4.90分钟。
实施例2：
(S)-1-环丙基-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲
步骤(i)
向2,4-二氯-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶(400 mg, 1.93 mmol)(实施例1, 步骤v)于CH2Cl2 (5 mL)的溶液中，分批加入m-CPBA (830 mg, 4.83 mmol)。将反应混合物室温搅拌过夜。将所得混合物用饱和NaHSO3和饱和Na2CO3洗涤，用CH2C12萃取，经无水Na2SO4干燥，蒸发。然后将剩余物在硅胶上经柱色谱法(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯=2/1)纯化，得到2,4-二氯-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物，为白色固体(260 mg, 57 %)。
LC-MS (方法A), (ES+) 239/241，RT = 4.04分钟。
步骤(ii)
在0℃向2,4-二氯-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物(120 mg, 0.5mmol)和Et3N(101 mg, 1.0 mmol)于DMF(5.0 mL)的溶液中，滴加入(S)-3-甲基吗啉(51mg, 0.5 mmol)的混合物。加入完成后，将混合物室温搅拌过夜。真空除去溶剂，将得到的剩余物在水和乙酸乙酯之间进行分配。将有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩，将得到的产物通过制备型TLC(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯=2/1)纯化，得到2-氯-5,7-二氢-4-((S)-3-甲基吗啉代)噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物，为浅黄色固体(100 mg, 66%)。
LC-MS (方法A), (ES+)304，RT = 2.50分钟。
步骤(iii)
向2-氯-5,7-二氢-4-((S)-3-甲基吗啉代)噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物(96mg, 0.32 mmol)于DME/H20 (4：1, 10 mL)的溶液中，加入1-环丙基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)脲(106 mg, 0.35 mmol)、和Na2CO3 (102 mg, 0.96mmol)，接着加入PdCl2(dppf)(15 mg, 0.02 mmol)。在氮气下将所得混合物加热至70℃并搅拌过夜。真空除去溶剂，将得到的剩余物在乙酸乙酯和水之间进行分配。将有机层分离，干燥(Na2SO4)，除去溶剂，得到粗产物，将其通过制备型TLC(DCM/MeOH=20/1)纯化，得到所需产物，为黄色固体(15 mg, 11%)。
1H NMR (d6-DMSO) δ8.66(s, 1H) 8.20(d, 2H), 7.53 (d, 2H), 6.52 (s, 1H),4.75-4.44 (m, 5H), 3.98-3.93 (m, 2H), 3.66 (s, 2H), 3.54-3.40 (m, 2H), 2.50(m, 1H, 被DMSO覆盖), 1.29 (d, 3H), 0.66-0.64 (m, 2H), 0.43-0.39 (m, 2H)。
LC-MS (方法A), (ES+)444，RT = 4.64分钟。
实施例3：
(S)-1-环丙基-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-7,8-二氢-5H-噻喃并[4,3-d]嘧啶-2-基)苯基)脲
步骤(i)
在0℃向2,4-二氯-7,8-二氢-5H-噻喃并[4,3-d]嘧啶(200 mg, 0.9 mmol)、和Et3N(182 mg, 1.8 mmol)于DMF(3 mL)的溶液中，加入3-(S)-甲基吗啉(100 mg, 0.99mmol)。将所得混合物室温搅拌过夜。真空除去溶剂，将得到的剩余物在水和乙酸乙酯之间进行分配。有机层用盐水洗涤，干燥并浓缩，将得到的产品通过制备TLC(石油醚/乙酸乙酯=2/1)纯化，得到(S)-2-氯-4-(3-甲基吗啉代)-7,8-二氢-5H-噻喃并[4,3-d]嘧啶(150 mg,58%)。
LC-MS (方法A), (ES+)286，RT = 4.75分钟。
步骤(ii)
向(S)-2-氯-4-(3-甲基吗啉代)-7,8-二氢-5H-噻喃并[4,3-d]嘧啶(100 mg,0.35 mmol)于DME/H20 (4：1, 10 mL)溶液中，加入1-环丙基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)脲(116 mg, 0.38 mmol)和Na2CO3 (111 mg, 1.05 mmol)，随后加入PdCl2(dppf)(15 mg, 0.02 mmol)。将所得混合物在氮气氛下70℃搅拌过夜。真空除去溶剂，将得到的剩余物在乙酸乙酯和水之间进行分配。将有机层分离，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物，将其通过制备型TLC(DCM/MeOH=20/1)纯化，得到所需产物，为黄色固体(40 mg, 27%)。
1H NMR (CDC13)8.37 (d, 2H), 7.53 (d, 2H), 7.12 (s, 1H), 5.09 (s, 1H),3.93-3.75 (m, 4H), 3.67-3.58 (m, 3H), 3.52-3.40 (m, 1H),3.35-3.32 (m, 1H),3.20 (t, 2H),3.03 (t, 2H), 2.66-2.63 (m, 1H), 1.30-1.27 (m, 3H), 0.89-0.87(m, 2H), 0.72-0.68 (m, 2H)。
LC-MS (方法A), (ES+) 426，RT = 4.50分钟。
实施例4：
(S)-1-环丙基-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-7,8-二氢-5H-噻喃并[4,3-d]嘧啶-2-基)苯基)脲
步骤(i)
使用类似于实施例2步骤(ii)的方法，用2,4-二氯-7,8-二氢-5H-噻喃并[4,3-d]嘧啶6,6二氧化物开始，合成了(S)-2-氯-4-(3-甲基吗啉代)-7,8-二氢-5H-噻喃并[4,3-d]嘧啶6,6二氧化物。
LC-MS (方法A), (ES+) 318/320，RT = 4.43分钟。
步骤(ii)
向(S)-2-氯-4-(3-甲基吗啉代)-7,8-二氢-5H-噻喃并[4,3-d]嘧啶6,6二氧化物(160 mg, 0.5 mmol)于DME/H20 (4：1, 10 mL)的溶液中，加入1-环丙基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)脲(167 mg, 0.55 mmol)和Na2CO3 (159 mg,1.5 mmol)，随后加入PdCl2(dppf)(20 mg, 0.025 mmol)。在氮气下将所得混合物加热至70℃并搅拌过夜。真空除去溶剂，将得到的剩余物在乙酸乙酯和水之间进行分配。将有机层分离，经Na2SO4干燥，过滤并除去溶剂，得到粗产物，将其通过制备型TLC(DCM/MeOH=20/1)纯化，得到所需产物，为黄色固体(36 mg, 16%)。
1H NMR (CDC13) 8.61 (s, 1H), 8.22 (d,, 2H), 7.53 (d, 2H), 6.48 (s,1H), 4.41-4.37 (m, 1H), 4.27-4.23 (m, 1H), 3.87-3.27 (m, 10H), 2.60-2.54 (m,1H), 1.20 (d, 3H), 0.65-0.63 (m, 2H), 0.43-0.40 (m, 2H)。
LC-MS (方法A), (ES+) 458，RT = 4.52分钟。
实施例5：
(S)-1-环丙基-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-5,5-二氧代-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-2-基)苯基)脲
步骤(i)
向巯基乙酸甲酯(91.0 mL, 1.0 mol)和哌啶(2 mL, 4.05 mmol)的溶液中，滴加入丙烯酸甲酯(99.2 mL, 1.1 mol)。将反应混合物在50℃搅拌2小时。然后通过蒸馏除去过量的丙烯酸甲酯和哌啶，得到无色油的3-(2-甲氧基-2-氧代乙基硫基)-丙酸甲酯(185g,96%)。未经进一步纯化，将粗产物直接用于下一步骤。
LC-MS (方法A), (ES+)193，RT = 4.29分钟。
步骤(ii)
在冰浴中将金属锂(2.70 g, 390.15 mmol)加入到500 mL甲醇中。然后在室温向该溶液中逐滴加入3-(2-甲氧基-2-氧代乙基硫基)-丙酸甲酯(50.0 g, 260.10 mmol)。将反应混合物搅拌过夜。将所得反应混合物蒸发以除去溶剂。将混合物用3N HC1中和至pH=7-8，用二氯甲烷萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发。所得粗制剩余物含有作为唯一可分离产物的目标。在硅胶上经柱色谱法(洗脱剂：PE/EA=20/1-5/1)纯化，得到为无色油的3-氧代四氢噻吩-2-甲酸甲酯(18.0g, 43%)。
1H NMR (CDC13)4.04 (s, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.34 (m,1H), 3.06 (m,1H),2.83 (m,1H), 2.69 (m,1H)。
LC-MS (方法A), (ES+) 183，RT = 4.15分钟。
步骤(iii)
向S-乙基异硫脲鎓溴化物(6.06 g, 32.7 mmol)的水(60 mL)溶液中，滴加入碳酸钠(3.64 g, 34.33 mmol)和3-氧代四氢噻吩-2-甲酸甲酯(5.00 g, 31.20 mmol)。该混合物在黑暗中搅拌3天。通过过滤收集所得混合物中的固体沉淀，用水、***和乙酸乙酯洗涤，然后真空干燥，得到白色固体的2-(乙基硫基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-4(3H)-酮(2.8 g, 42.4%)。未经进一步纯化，将粗产物直接用于下一步骤。
LC-MS (方法A), (ES+)215，RT = 4.51分钟。
步骤(iv)
向2-(乙基硫基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-4(3H)-酮(2.80 g, 13.06 mmol)于水(2.0 mL)的悬浮液中，加入2.0 mL浓HC1和4.0 mL AcOH。将混合物在110℃加热过夜。将反应冷却，所形成的固体通过过滤收集，用水和甲醇洗涤，干燥得到白色固体6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(1.80g, 82%)。未经进一步纯化，将粗产物直接用于下一步骤。
LC-MS (方法A), (ES+) 171，RT = 4.21分钟。
步骤(v)
将6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(1.8 g, 10.57 mmol)悬浮于4.0 mL苯膦酰二氯中。将悬浮液加热至130-140℃并搅拌6小时。将所得反应混合物冷却，并倒入10.0 ml冰水中。将混合物用乙酸乙酯萃取，将有机层合并，用饱和NaHCO3和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发。然后将粗产物在硅胶上经柱色谱法(洗脱剂：PE/EA=20：1-10/1)纯化，得到灰白色固体的2,4-二氯-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶(1.0 g, 46 %)。
LC-MS (方法A), (ES+)207/209，RT = 4.68分钟。
步骤(vi)
在0℃向2,4-二氯-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶(200.0 mg, 0.96 mmol)和Et3N(195.5 mg, 1.93 mmol)于DMF(2.0 mL)的溶液中，滴加入(S)-3-甲基吗啉(97.7 mg)。将混合物室温搅拌过夜，然后在H20和乙酸乙酯之间进行分配。水层用乙酸乙酯萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，蒸发，然后将粗产物在硅胶上经柱色谱法(洗脱剂：PE/EA=20：1-2/1)纯化，得到(S)-2-氯-4-(3-甲基吗啉代)-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶，为浅黄色固体(120 mg, 46%)。
LC-MS (方法A), (ES+) 272/274，RT = 4.88分钟。
步骤(vii)
将(S)-2-氯-4-(3-甲基吗啉代)-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶(120 mg, 0.44mmol)溶于4.0 mL二氯甲烷中。向此溶液中分批加入m-CPBA (190.4 mg, 1.10 mmol)。反应混合物在室温搅拌5小时。所得混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHSO3和饱和Na2CO3洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发。然后将剩余物通过制备的TLC(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯, 2/1)纯化，得到2-氯-4-[(3S)-3-甲基吗啉-4-基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶5,5-二氧化物，为白色固体(50.0 mg, 37%)。
LC-MS (方法A), (ES+)304/306，RT = 3.44分钟。
步骤(viii)
向2-氯-4-[(3S)-3-甲基吗啉-4-基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶5,5-二氧化物(50 mg, 0.16mmol)于2.0 mL的DME/H20 (4/1, v/v)的溶液中，加入1-环丙基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)脲(59.7 mg, 0.20mmol)和Na2CO3(52.3mg, 0.49 mmol)。将混合物脱气两次，然后加入催化剂量的Pd(dppf)Cl2 (10 mg,0.013mmol)。在氮气下将混合物加热至80℃并搅拌3小时。然后将所得混合物冷却，用EtOAc和H20稀释，水层用乙酸乙酯萃取，将合并的有机层合并，用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，然后蒸发，得到粗品，将其在硅胶上经柱色谱法(洗脱剂：CH2Cl2/乙酸乙酯=30/1～1/1)纯化，得到1-环丙基-3-[4-[4-[(3S)-3-甲基吗啉-4-基]-5,5-二氧代-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-2-基]苯基]脲，为白色固体(30.0mg, 41%)。
1H NMR (d6-DMSO)：8.68(s,1H), 8.24 (d, 2H), 7.54(d,, 2H),6.51(s, 1H),4.90 (s, 1H), 4.39 (s, 1H), 4.01-4.02 ( d, 1H), 3.80(d, 1H), 3.69-3.66 (m,3H), 3.53-3.51 (d,, 2H), 2.56-2.51 (m, 1H), 1.35 (d, 3H),1.24 (s, 1H),0.66-0.64 (m, 2H), 0.42 (m, 2H)。
LC-MS (方法A), (ES+) 444，RT = 3.32分钟。
实施例6：
1-环丙基-3-(4-(5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲
步骤(i)
在0℃向巯基乙酸甲酯(21.2 g, 199.7 mmol)和哌啶(0.5 mL, 5.06 mmol)的混合物中，滴加入巴豆酸甲酯(25.0 g, 249.70 mmol)。10分钟后分两部分加入额外的哌啶(0.3 mL, 3.04 mmol)。然后将混合物在室温搅拌过夜。通过蒸馏除去过量的巴豆酸甲酯和哌啶，留下3-(2-甲氧基-2-氧代乙基硫基)丁酸甲酯，为浅黄色油(40g, 97%)。未经进一步纯化，将粗产物直接用于下一步骤。
LC-MS (方法A), (ES+)207，RT = 4.78分钟。
步骤(ii)
向甲醇钠(5.89 g, 109.2 mmol)的甲苯(150 mL)悬浮液中，滴加入3-(2-甲氧基-2-氧代乙基硫基)丁酸甲酯(150 g, 72.8 mmol)。将所得混合物加热至回流并搅拌过夜。将所得反应混合物冷却，然后倾入10.0 mL乙酸和150.0g碎冰的混合物中。该溶液通过加入饱和Na2CO3调成碱性(pH=8-9)，并用乙酸乙酯萃取所得混合物。然后将合并的有机层合并，并用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，蒸发，剩余物通过柱色谱法(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯=20/1-5/1)纯化，得到2-甲基-4-氧代-四氢噻吩-3-甲酸甲酯，为无色油(4.0g, 32%)。
LC-MS (方法A), (ES+) 175，RT = 4.40分钟。
步骤(iii)
向S-乙基异硫脲鎓溴化物(5.09 g, 22.7 mmol)的水(35.0 mL)溶液中，分批加入碳酸钠(3.65 g, 34.4 mmol)和2-甲基-4-氧代-四氢噻吩-3-甲酸甲酯(4.00g,22.9mmol)。将所得混合物在暗处搅拌3天，并通过过滤收集从该反应中沉淀出的固体，用水、***和乙酸乙酯洗涤，然后真空干燥，得到2-(乙基硫基)-5-甲基噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H,5H,7H)-酮，为白色固体(4.0g, 76%)。未经进一步纯化，将粗产物直接用于下一步骤。
LC-MS (方法A), (ES+)229，RT = 4.90分钟。
步骤(iv)
将2-(乙基硫基)-5-甲基噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H,5H,7H)-酮(4.0 g, 17.5mmol)悬浮于4.0 mL浓HC1和6.0 mL冰醋酸，并将悬浮液加热回流过夜。将混合物冷却，通过过滤收集沉淀的固体，用水洗涤，干燥，得到5-甲基噻吩并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H,5H,7H)-二酮，为白色固体(3.20g,100%)。
1H NMR (d6-DMSO)：11.19 (s, 1H), 11.04 (s, 1H), 4.36-4.34 (m, 1H),4.07-4.02 (dd, J=16, 4.4 Hz, 1H), 3.87-3.83 (dd, J=16, 1.2Hz, 1H), 1.48-1.48(d, J=6.4 Hz, 3H)。
LC-MS (方法A), (ES+) 185，RT = 4.11分钟。
步骤(v)
将5-甲基噻吩并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H,5H,7H)-二酮(3.2g, 17.2 mmol)悬浮在苯膦酰二氯(8.0 mL)中，然后将悬浮液加热至130-140℃并搅拌6小时。将所得反应混合物冷却，并倒入30mL冰-水中。混合物用乙酸乙酯萃取，将合并后的有机层用饱和的NaHCO3、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发。然后将粗产物在硅胶上经柱色谱法(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯=20/1-10/1)纯化，得到2,4-二氯-5-甲基-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶，为浅黄色固体(2.0g, 53%)。
1H NMR (CDCl3)：4.66-4.64 (m, 1H), 4.47-4.42 (dd, J=2.8, 2.4 Hz, 1H),4.19-4.14 (m, 1H),1.71-1.69 (d, J=6.8Hz, 3H)。
LC-MS (方法A), (ES+)221/223，RT = 4.94分钟。
步骤(vi)
将2,4-二氯-5-甲基-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶(1.0 g, 4.5 mmol)溶于二氯甲烷(10 mL)。分批加入m-CPBA (2.3 g, 13.6 mmol)，并在室温将反应搅拌过夜。将反应用二氯甲烷稀释，用饱和的NaHSO3和饱和的Na2CO3洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发，得到粗制剩余物，将其在硅胶上经柱色谱法(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯=2/1)纯化。得到白色固体的产物2,4-二氯-5-甲基-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物(0.60 g,53%)。
LC-MS (方法A), (ES+) 253/255，RT = 4.36分钟。
步骤(vii)
向2,4-二氯-5-甲基-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物(150.0 mg,0.5926 mmol)和Et3N(119.9 mg, 1.2 mmol)于DMF(2.0 mL)的溶液中，滴加入(S)-3-甲基吗啉(59.9 mg, 0.6 mmol)。将反应混合物搅拌过夜，然后通过加入H20淬火，并用乙酸乙酯萃取所得混合物。将有机层合并，用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发。将粗产物在硅胶上经柱色谱法(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯 =20：1-2/1)纯化，得到4-氯-5-甲基-2-[(3S)-3-甲基吗啉-4-基]-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物(B)，为浅黄色固体(50 mg, 13.5%)。然后进一步洗脱，得到2-氯-5-甲基-4-[(3S)-3-甲基吗啉-4-基]-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物(A)，为灰白色固体(100mg, 27 %)，
A：1H NMR (CDC13)：4.35-4.29 (m, 2H), 4.26-4.21 (m, 3H), 4.06-4.00 (m,1H), 3.89-3.86 (m, 1H), 3.80 (s, 2H), 3.73-3.72 (m, 1H), 3.62-3.59 (m, 1H),3.57-3.51 (m, 2H), 1.37-1.36 (d, J=7.8Hz, 3H)。
LC-MS (方法A), (ES+)318/320，RT = 4.51分钟。
B：1H NMR (CDC13)：4.69-4.67 (m, 1H), 4.35-4.24 (m, 3H), 4.20-4.15 (m,1H), 4.02-3.98 (m, 1H), 3.80-3.77 (m, 1H), 3.69-3.65 (m, 1H), 3.55-3.49 (m,1H), 3.34-3.27 (m, 1H), 1.68-1.66 (d, J=7.2 Hz, 3H), 1.34-1.66 (d, J=6.8 Hz,3H)。
LC-MS (方法A), (ES+)318/320，RT = 4.73分钟。
步骤(viii)
向2-氯-5-甲基-4-[(3S)-3-甲基吗啉-4-基]-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物(100 mg, 0.3147 mmol)于DME/H20 (2mL, 4/1, v/v)的溶液中，加入1-环丙基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)脲(114.1 mg, 0.37 mmol)和碳酸钠(100.1 mg, 0.94 mmol)。将反应脱气两次，加入催化剂量的Pd(dppf)Cl2 (10 mg,0.013 mmol)到悬浮液中。在氮气气氛下将混合物在80℃加热3小时。将所得混合物冷却，加入H20。混合物用乙酸乙酯萃取，将合并后的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，然后蒸发。剩余物通过硅胶柱色谱法(洗脱剂：CH2Cl2/乙酸乙酯=20/1～5/1)和制备型HPLC纯化，得到白色固体产物(30.0 mg,21%)。
1H NMR (CDCl3)：8.32-8.24 (m, 2H), 7.52 (d, 2H), 7.12 (s, 1H), 5.05 (s,1H), 4.42-4.20(m, 4H), 4.07-3.98 (m, 1H), 3.88-3.77 (m, 3H), 3.75-3.49 (m,2H), 2.67-2.62 (m, 1H), 1.65-1.62 (m, 3H),0.90-0.84 (m, 2H), 0.72-0.67 (m2H)。
LC-MS (方法A), (ES+)458，RT = 3.47分钟。
实施例7：
1-环丙基-3-(4-(7-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲
步骤(i)
向3-巯基丙酸甲酯(34.3 g, 0.29 mol)、和2-溴丙酸乙酯(54.3 g, 0.30 mol)于THF (200 mL)的混合物中，慢慢地加入NaH (在矿物油中的60%分散体, 12.76 g, 0.32mol)，并将反应在室温搅拌过夜。在减压下除去溶剂，加入水。混合物用DCM萃取，将有机相经Na2SO4干燥并浓缩，得到粗产物3-(2-乙氧基-1-甲基-2-氧代-乙基)硫烷基(sulfanyl)丙酸甲酯(65 g, 100%)，将其直接用于下一步骤。
LC-MS (方法A), (ES+)221，RT = 4.63分钟。
步骤(ii)
在0℃向3-(2-乙氧基-1-甲基-2-氧代-乙基)硫烷基丙酸甲酯(2.2 g, 10 mmol)的甲醇(15 mL)溶液中，加入甲醇钠(886 mg, 16.4 mmol)。将反应​​升温至室温并搅拌3小时。将混合物用1N HCl酸化至pH为2，并用DCM萃取。将有机相用水和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，浓缩，并通过柱色谱法纯化，用EtOAc/石油醚(3%-10%)洗脱，得到无色油的四氢-5-甲基-4-氧代噻吩-3-甲酸甲酯(0.85 g, 50%产率)。
LC-MS (方法A), (ES+) 175，RT = 4.30分钟。
步骤(iii)
向S-乙基异硫脲鎓溴化物(4.89 g, 26.4 mmol)的水(60mL)溶液中，滴加入碳酸钠(2.80 g, 26.4 mmol)和四氢-5-甲基-4-氧代噻吩-3-甲酸甲酯(4.60 g, 26.4 mmol)。将混合物在黑暗中室温搅拌过夜。通过过滤收集所得混合物中沉淀出的固体，用水、二***、甲醇和丙酮洗涤，然后将固体真空干燥，得到2-(乙基硫基)-7-甲基噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H,5H,7H)-酮，为白色固体(3.96 g, 66%)。
LC-MS (方法A), (ES+)229，RT = 3.10分钟。
步骤(iv)
向2-(乙基硫基)-7-甲基噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H,5H,7H)-酮(3.96 g, 17.3mmol)于水(20 mL)的悬浮液中，加入2.0 mL浓HC1和4.0 mL AcOH。将混合物加热至回流过夜，然后冷却，将沉淀的固体通过过滤收集，用水和甲醇洗涤，蒸发并干燥，得到7-甲基噻吩并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H,5H,7H)-二酮，为白色固体(2.52 g, 80%)。未经进一步纯化，将粗产物直接用于下一步骤。
LC-MS (方法A), (ES+) 185，RT = 2.58分钟。
步骤(v)
将7-甲基噻吩并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H,5H,7H)-二酮 (2.52 g, 13.7 mmol)悬浮于POCl3 (20 mL)中，并加热回流过夜。减压除去溶剂，将剩余物倾入10.0 ml冰水中。混合物用乙酸乙酯(3 x 10.0mL)萃取，将合并后的有机层用饱和的NaHCO3和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。然后将粗产物在硅胶上经柱色谱法(洗脱：PE/EA=20：1～10/1)纯化，得到2,4-二氯-5,7-二氢-7-甲基噻吩并[3,4-d]嘧啶，灰白色固体(670 mg, 23%)。
LC-MS (方法A), (ES+)221/223，RT = 3.32分钟。
步骤(vi)
在0℃向2,4-二氯-5,7-二氢-7-甲基噻吩并[3,4-d]嘧啶(221 mg, 1.0 mmol) 于DCM (10 mL)的溶液中，分份加入m-CPBA (432 mg, 2.5 mmol)。反应在室温搅拌2小时，然后通过加入饱和Na2CO3溶液淬灭。将混合物用DCM萃取，合并后的有机层用水和盐水洗涤，干燥并浓缩，得到粗产物2,4-二氯-7-甲基-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物，为白色固体(230 mg, 92%产率)。此物质未经进一步纯化直接用于下一步骤。
LC-MS (方法A), (ES+) 275 (M+ Na)，RT = 2.73分钟。
步骤(vii)
在0℃向2,4-二氯-7-甲基-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物(160 mg,0.63 mmol)、和三乙胺(64 mg, 0.63 mmol)于DMF(3 mL)的溶液中，加入3-(S)-甲基吗啉(57 mg, 0.57 mmol)。将所得混合物在室温搅拌2小时。真空除去溶剂，将获得的剩余物在水和乙酸乙酯之间进行分配。将有机层干燥(Na2SO4)并浓缩得到产物，将其通过制备TLC(石油醚/乙酸乙酯=2/1)纯化，产生2-氯-7-甲基-4-[(3S)-3-甲基吗啉-4-基]-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物(72 mg, 36%产率)。
LC-MS (方法A), (ES+)318/320，RT = 2.95分钟。
步骤(viii)
向2-氯-7-甲基-4-[(3S)-3-甲基吗啉-4-基]-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物(32 mg, 0.10 mmol)于DME/H20 (4：1, 10 mL)溶液中，加入1-环丙基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)脲(45 mg, 0.15 mmol)和Na2CO3 (32mg, 0.30 mmol)，随后加入PdCl2(dppf)(10 mg, 0.013 mmol)。在氮气氛下将所得混合物在80℃搅拌过夜。真空除去溶剂，将得到的剩余物在乙酸乙酯和水之间进行分配。将有机层分离，干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发，得到粗产物，将其通过制备型TLC(DCM/MeOH=10/1)纯化，得到所需产物，为白色固体(10 mg, 22%)。
1H NMR (d6-DMSO) 9.30 (s, 1H), 8.20 (d, 2H), 7.52 (d, 2H), 7.00 (s,1H), 4.75-4.35 (m, 4H), 4.02-3.85 (m, 2H), 3.73-3.42 (m, 4H), 2.57-2.49 (m,1H，部分在DMSO下) 1.54 (d, 3H), 1.24 (d, 3H), 0.65-0.59 (m, 2H), 0.41-0.35 (m,2H)。
LC-MS (方法A), (ES+)458，RT = 3.06分钟。
实施例8：
(S)-1-环丙基-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-2-基)苯基)脲
步骤(i)
小心地将金属钠(4.3 g, 0.18 mol)少量分批加入乙醇(150 mL)中。在钠完全溶解后，将混合物冷却至0℃，加入2-巯基(sulfanyl)乙酸乙酯(21.9 g,0.18 mol)。然后缓慢加入4-氯丁酸乙酯(27.4 g,0.18 mol)，并在室温将所得混合物搅拌过夜。将固体滤出，然后减压浓缩滤液。将获得的油在水和乙酸乙酯之间进行分配。收集有机层，经无水Na2SO4干燥，并在真空浓缩，得到所需的4-((乙氧基羰基)甲硫基)丁酸乙酯(40.2 g, 95%)，为无色油。该粗物质未经进一步纯化用于后续步骤。
LC-MS (方法A), (ES+)235，RT = 4.74分钟。
步骤(ii)
将金属钠(4.6 g, 0.2 mol)小心地分份加入乙醇(150 mL)中。在固体耗尽后，将混合物冷却到0℃，加入于甲苯(80mL)中的4-((乙氧基羰基)甲硫基)丁酸乙酯(40.2 g,0.17mol)。将混合物在室温搅拌3小时，然后加热至50℃进行另一小时。混合物在室温放置24小时。然后减压除去溶剂，将剩余物在乙酸乙酯和水之间进行分配。将有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，蒸发。然后将粗产物在硅胶上经柱色谱法(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯=30/1)纯化，得到10：1比例的四氢-3-氧代-2H-噻喃-2-甲酸乙酯和3-氧代四氢-2H-噻喃-4-甲酸甲酯的混合物(4.8 g, 15%)。此产物未经进一步纯化用于下一步骤。
LC-MS (方法A), (ES+) 189，RT = 4.39分钟。
步骤(iii)
向S-乙基异硫脲鎓溴化物(4.4 g, 24 mmol)的水(50mL)溶液中，滴加入碳酸钠(2.5 g, 24 mmol)和四氢-3-氧代-2H-噻喃-2-甲酸乙酯(4.5 g, 24 mmol)。在黑暗中将混合物室温搅拌过夜。通过过滤收集从反应中沉淀的固体，用水、二***、甲醇和丙酮洗涤。真空干燥固体，得到2-(乙基硫基)-7,8-二氢-3H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4(6H)-酮，为白色固体(4.5 g, 82%)。未经进一步纯化，将粗产物直接用于下一步骤。
LC-MS (方法A), (ES+) 229，RT = 4.60分钟。
步骤(iv)
向2-(乙基硫基)-7,8-二氢-3H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4(6H)-酮 (4.5 g, 19.7mmol)的水(20mL)悬浮液中，加入3.0mL浓HC1和6.0mL AcOH。将混合物加热至回流并搅拌过夜。将反应冷却，通过过滤收集所形成的固体，用水和甲醇洗涤，蒸发并干燥，得到7,8-二氢-1H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮，为白色固体(2.6 g, 72%)。未经进一步纯化，将粗产物直接用于下一步骤。
LC-MS (方法A), (ES+)185，RT = 2.17分钟。
步骤(v)
向7,8-二氢-1H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮 (2.6 g, 14.13 mmol)中，加入6.0 mL三氯氧磷，并在135℃将悬浮液加热过夜，然后在165℃加热1小时。将所得反应混合物冷却并倒入冰水中。水层用乙酸乙酯萃取，合并后的有机层用饱和的NaHCO3、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并蒸发。粗产物随后在硅胶上经柱色谱法(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯=20/1)纯化，得到2,4-二氯-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶，为淡黄色固体(2.7 g,87%)。由3-氧代四氢-2H-噻喃-4-甲酸甲酯(实施例8, 步骤ii)所带来的区域异构体产品未被检测到，并假定其在纯化中失去。
LC-MS (方法A), (ES+)221，RT = 2.88分钟。
步骤(vi)
在0℃向2,4-二氯-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶(500mg, 2.26 mmol)和Et3N(457 mg, 4.52 mmol)在DMF(5.0mL)的溶液中，滴加入3-(S)-甲基吗啉(252 mg, 2.49mmol)。将反应​​室温搅拌过夜，然后在真空下除去溶剂，将得到的剩余物在水和乙酸乙酯之间进行分配。将有机层分离，干燥并浓缩，得到粗产物，将其在硅胶上经柱色谱法(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯=10/1)纯化，得到2-氯-7,8-二氢-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶(380 mg, 87%)，为浅黄色固体。
LC-MS (方法A), (ES+)286，RT = 3.69分钟。
步骤(vii)
向2-氯-7,8-二氢-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶(150 mg,0.53 mmol)于DME/H20 (4：1, 10 mL)的溶液中，加入1-环丙基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)脲(175 mg, 0.58 mmol)和Na2CO3 (170 mg, 1.60mmol)，随后加入PdCl2(dppf)(15 mg, 0.02 mmol)。将所得混合物在70℃氮气氛下搅拌过夜。真空除去溶剂，将得到的剩余物在乙酸乙酯和水之间进行分配。将有机层分离并经无水Na2SO4干燥。除去溶剂，得到粗品，将其通过制备型TLC(DCM/MeOH=20/1)纯化，得到所需产物，为白色固体(180 mg, 80%)。
1H NMR (CDC13) δ8.34 (d, 2H), 7.52 (d, 2H), 7.10 (s, 1H), 5.08 (s,1H), 4.20-4.14 (m, 1H), 3.92-3.84 (m, 3H), 3.65-3.58 (m, 3H), 3.04-2.98 (m,4H), 2.66-2.63 (m, 1H), 2.30-2.24 (qu, 2H), 1.30 (d, 3H), 0.88-0.86 (m, 2H),0.71-0.68(m, 2H)。
LC-MS (方法A), (ES+)426，RT = 3.29分钟。
实施例9和10：
1-环丙基-3-(4-((R)-5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；和1-环丙基-3-(4-((S)-5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲
实施例6(1-环丙基-3-(4-(5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲)的化合物是非对映异构体的混合物。个体非对映异构体在下述的超临界流体色谱法条件下得到分离。
仪器：MG II制备的SFC
柱：ChiralPak AS-H, 250x30mmI.D.
流动相：A为CO2和B为乙醇
梯度：B 40%
流速：50mL /min
反压：1OObar
柱温：38℃
波长：220nm
循环时间：14分钟
样品制备：将化合物溶解在乙醇中至～5mg/ml
注射：每次注射4.7ml。
后处理：分离后，将流分通过旋转蒸发器在浴温40℃干燥，以得到所需的非对映异构体。
根据275mg非对映体混合物
实施例9，首先流出的非对映异构体(92mg)
1H NMR (DMSO) δ 8.65 (s, 1H), 8.18 (d, 2H), 7.52 (d, 2H), 6.53 (s,1H), 4.77 (q, 1H), 4.71 (d, 1H), 4.61-4.51 (m, 1H), 4.40 (d, 1H), 3.99-3.83(m, 2H), 3.81-3.65 (m, 2H), 3.57 (ddd, 7.9 Hz, 1H), 3.46-3.38 (m, 1H), 2.56(m, 1H), 1.50 (d, 3H), 1.35 (d, 3H), 0.65 (ddd, 2H), 0.40 (ddd, 2H)。
实施例10，第二流出的非对映异构体(145mg)
1H NMR ( DMSO) δ 8.70 (s, 1H), 8.24 (d, 2H), 7.57 (d, 2H), 6.58 (d,1H), 4.77 (q, 1H), 4.73 (d, 1H), 4.54 (d, 1H), 4.50-4.41 (m, 1H), 4.08-3.93(m, 2H), 3.85-3.73 (m, 2H), 3.67-3.55 (m, 1H), 3.55-3.43 (m, 1H), 2.64-2.58(m, 1H), 1.54 (d, 3H), 1.27 (d, 3H), 0.70 (ddd, 2H), 0.47 (ddd, 2H)。
下列化合物通过类似上述的那些方法得到合成：
。
实施例42：1-乙基-3-(4-(5,7,7-三甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲
步骤(i)
向EtONa(6.5g, 95.4 mmol)的EtOH (185mL)溶液中，加入1(18.50 g, 95.4mmol)和3-巯基丙酸乙酯(1.28 g, 95.4mmol)。将混合物在室温搅拌过夜。反应后，将混合物过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，然后真空浓缩滤液。该浓度用乙酸乙酯稀释，并用水洗涤三次。有机相经MgSO4干燥和真空浓缩，得到液体的化合物2(2.1 g)，将其直接用于下一步骤。
步骤(ii)
向EtONa (5.76 g, 84.60 mmol)的THF (105 mL)溶液中，逐滴加入化合物2(10.50 g, 42.30 mmol)，然后将混合物加热至60℃并搅拌过夜。反应后，将混合物倒入饱和NH4C1溶液中，用乙酸乙酯萃取。有机相经MgSO4干燥，然后过滤并真空浓缩，得到粗化合物3(7.5 g)，将其直接用于下一步骤。
步骤(iii)
将化合物3(2.50 g, 12.30 mmol)和尿素(2.25 g, 37.50 mmol)的混合物在开口烧瓶中加热至160℃(反应中形成的水和EtOH在高温蒸发)，然后将褐色油在相同温度下继续搅拌3小时。反应后，加水(12 mL)到热反应混合物中，过滤沉淀物，滤饼用水洗涤，剩余物在真空下干燥，得到粗化合物4(1.6 g)，为黄色固体。
步骤(iv)
将化合物4(2.0 g, 10 mmol)于PhPOCl2 (6.0 g, 31 mmol)的溶液加热至160℃，然后将混合物搅拌3小时。反应后，将混合物冷却至室温，然后倒入冰水中，水相用乙酸乙酯萃取。将有机相经MgSO4干燥和真空浓缩。剩余物通过硅胶色谱法(石油醚：乙酸乙酯 = 50：1)纯化，得到二氯核心部分(dichloro-Core)(1.35 g, 产率57 %)，为白色固体。1H NMR(CDC13, 400MHz) δ 1.710 (s, 6H), 4.107 (s, 2H)；LCMS (ESI-)：m/z 235 (M+H)+。
步骤(v)
向二氯核心部分(6.0 g, 23.8 mmol)于DCM (60 mL)的溶液中，在冰浴下分批加入m-CPBA (12.26 g, 71.30 mmol)，并在室温搅拌过夜。反应完成后，向该溶液中加入DCM(40mL)和NH4Cl水溶液(100 mL)。通过过滤除去固体，并将有机层用NaHCO3水溶液和盐水洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩，得到化合物6(6 g, 产率91.6%)，为白色固体。1H NMR (CDC13,400MHz)δ1.70 (s, 6H), 4.34 (s, 2H)；LCMS (ESI-)：m/z 267(M+H)+。
步骤(vi)
向化合物6(1.4 g, 5.2 mmol)和TEA(1.1g, 10.5 mmol)在DMF(14 mL)的溶液中，滴加入(S)-3-甲基吗啉(0.52 g, 5.20 mmol)，并在室温搅拌过夜。在反应完成后，加入EtOAc (20 mL)和H20 (50 mL)。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩，得到粗产物，将其在硅胶上经柱色谱法(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯=5/1-2/1)纯化，得到(S)-2-氯-7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物(0.8g, 产率46%)，为白色固体。1H NMR (CDC13, 400MHz) δ 1.39 (d, 3H), 1.60 (s, 6H), 3.46-3.56 (m,2H), 3.70-3.77 (m, 2H), 3.96-3.98 (m, 2H), 4.16-4.26 (m, 3H)；LCMS(ESI-)：m/z332(M+H)+。
步骤(vii)
在-78℃向(S)-2-氯-7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物(步骤vi,1.5 g, 4.5 mmol)的THF(30 mL)溶液中，滴加LDA(2.5 mL, 5mmol)。将混合物在此温度搅拌0.5小时，向上述混合物中滴加入于THF(5 mL)中的MeI (0.7g, 5 mmol)。将所得混合物在室温搅拌2小时。然后将混合物倒入饱和NH4Cl中，用EtOAc(3×30 mL)萃取。将有机层用盐水洗涤，经 Na2SO4干燥并真空浓缩。剩余物通过柱色谱法纯化，得到2-氯-5,7,7-三甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物(1.2 g, 产率77%)，为黄色固体。1H NMR (400MHz, CDC13) 1.38-4.31 (m, 1H),4.29-4.21 (m, 1H), 3.99-3.96 (m, 1H), 3.78-3.43 (m, 5H), 1.65-1.25 (m, 12H)。
步骤(iii)
标题化合物根据实施例5(步骤viii)中的操作程序，使用2-氯-5,7,7-三甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物和1-乙基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)脲，得到合成。LC-MS (方法D), (ES+) 474，RT = 3.00分钟。
实施例43：1-环丙基-3-(4-(7-氟-7-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲
步骤(i)
在0℃向2,4-二氯-7-甲基-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物(实施例7,步骤(vi))(160 mg, 0.63 mmol)和三乙胺(64 mg, 0.63 mmol)于DMF(3 mL)的溶液中，加入3-(S)-甲基吗啉(57 mg, 0.57 mmol)。将所得混合物在室温搅拌2小时。真空除去溶剂，将所得剩余物在水和乙酸乙酯之间进行分配。将有机层干燥(Na2SO4)并浓缩，将所得产物通过制备型TLC(石油醚/乙酸乙酯=2/1)纯化，产生2-氯-7-甲基-4-[(3S)-3-甲基吗啉-4-基]-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物(72 mg, 36%产率)。LC-MS (方法A), (ES+)318/320，RT = 2.95分钟。
步骤(ii)
将2-氯-7-甲基-4-[(3S)-3-甲基吗啉-4-基]-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物(0.15 g, 0.47 mmol)在无水THF (10 mL)的溶液冷却至-70℃，逐滴加入LDA(2M, 0.26 mL)，并搅拌30分钟。慢慢加入在THF(2 mL)中的NFSI (0.15 g, 0.47 mmol)。然后让其逐渐升温至室温，并搅拌1小时。反应后，将其倾入NH4C1溶液，用EA萃取，有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，蒸发，通过Pre-TLC纯化，得到2-氯-7-氟-7-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物(0.10 g, 产率63%)，为白色固体。1HNMR (400 MHz, CDC13) 4.44-4.38 (m, 1H), 4.19-3.99 (m, 3H), 3.78-3.40 (m, 5H),2.03 (d, 3H), 1.57-1.35 (m, 3H)。
步骤(iii)
标题化合物根据实施例5(步骤viii)中的操作程序，使用2-氯-7-氟-7-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物和1-环丙基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)脲，得到合成。LC-MS (方法D), (ES+)476，RT = 2.90分钟。
实施例44：1-环丙基-3-(4-(5,7-二甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲
步骤(i)
将2-氯-7-甲基-4-[(3S)-3-甲基吗啉-4-基]-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶(实施例6, 步骤(vii))(0.5 g, 1.58 mmol)于THF (10 mL)的溶液冷却至-70℃, 逐滴加入LDA(2M, 0.86 mL)，并搅拌30分钟。慢慢加入在THF (2 mL)中的MeI(0.24 g, 1.73 mmol)。让混合物逐渐升温至室温，并搅拌2小时。反应后，将其倾入NH4Cl溶液，用EtOAc萃取，将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，蒸发，并通过柱纯化，得到2-氯-5,7-二甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物(0.2 g, 产率38%)，为浅黄色固体。LC-MS (方法G), (ES+)332，RT = 1.27分钟。
步骤(ii)
标题化合物根据实施例5(步骤viii)中的操作程序，使用2-氯-5,7-二甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶6,6-二氧化物和1-环丙基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼-2-基)苯基)脲，得到合成。LC-MS (方法D), (ES+) 472，RT = 2.90分钟。
下列化合物通过类似上述的那些方法得到合成：
。
Kinobeads测定说明
根据本发明的化合物对mTOR的影响的确定
如所描述的本发明化合物在如下所述的mTOR kinobeads(固相激酶结合基质测定中进行了测试。简言之，将测试化合物(以各种浓度)和亲和性基质(1：1苯基噻唑配体1的固定珠与苯基吗啉-色烯(chromen)配体的固定珠的混合物；WO 2009/098021)加到细胞裂解物等分部分中，并使其在裂解物样品中与蛋白质结合。在孵育时间后，将被蛋白质捕获的珠与裂解物分离。然后洗脱结合蛋白质，并在mTOR存在下，在斑点印迹法中使用特异性抗体和Odyssey红外检测***，测试和量化了PI3K α(PI3Ka)、PI3Kβ(PI3Kb)、PI3Kγ(PI3Kg)、PI3Kδ(PI3Kd)和DNA-依赖性蛋白激酶(DNA-PK)。生成了各种激酶的剂量反应曲线，并计算了IC50值。PI3激酶(WO-A 2008/015013)和激酶选择性特性(WO 2009/098021)的Kinobeads测定已如前所述。
洗涤亲和基质
亲和基质(固定苯基吗啉-色烯配体的珠)用15 ml含有0.2% NP40 (IGEPAL® CA-630, Sigma, #13021)的1倍DP缓冲液洗涤三次，然后再悬浮于5.5 ml含有0.2% NP40的1倍DP缓冲液中(10%珠浆)。
5倍DP缓冲液：250 mM Tris-HCl pH 7.4, 25%甘油, 7.5 mM MgCl2, 750 mMNaCl, 5 mM Na3V04, 通过0.22μm过滤器过滤5倍的裂解缓冲液，并以等分部分存储在-80℃。将5倍DP缓冲液稀释到含1 mM DTT和25 mM NaF的1倍DP缓冲液。
测试化合物的制备
在DMSO中制备了测试化合物的原液。在96孔板中，制备了30μL的5 mM测试化合物的DMSO稀释溶液。从该溶液开始，制备了1:3 稀释系列(9步)。对于对照试验(无测试化合物)，使用了含2% DMSO的缓冲液。化合物PI-103用作阳性对照(Calbiochem目录号528100)。
细胞培养和细胞裂解液的制备
在1L旋转瓶(Spinner flask)(Integra Biosciences, #182101)中，将Jurkat细胞(ATCC目录号TIB-152 Jurkat, 克隆E6-1)以密度0.15 x 106至1.2 x 106细胞/ml在补充有10%胎牛血清(Invitrogen)的RPMI 1640培养基(Invitrogen, #21875-034)中悬浮生长。细胞通过离心收获，用1 x PBS缓冲液(Invitrogen, #14190-094)洗涤一次，并将细胞片在液氮中冷冻，然后在-80℃储存。
在Potter S均质器中将Jurkat细胞在裂解缓冲液：50 mM Tris-HCl、0.8% NP40、5% 甘油、150 mM NaCl、1.5mM MgCl2、25 mM NaF、1mM 钒酸钠、1mM DTT、pH 7.5中匀浆。每25mL缓冲液加入一个完整的无EDTA片剂(蛋白酶抑制剂混合物，Roche Diagnostics,1873580)。使用机械化的POTTER S将材料均质(dounced)10次，将其转移至50mL的falcon管中，在冰上孵育30分钟，并在4℃以20,000 g旋转10分钟(10,000 rpm，在Sorvall SLA600，预冷却)。将上清液转移至超速离心器(UZ)-聚碳酸酯管(Beckmann, 355654)，并在4℃以100.000 g旋转1小时(33.500 rpm，在Ti50.2，预冷却的)。将上清液再次转移至新鲜的50mL的falcon管中，通过Bradford测定(BioRad)确定蛋白质浓度，并制备了含50mg的蛋白质每等分试样的样品。将样品立即用于试验或在液氮中冷冻并在-80℃冷冻储存。
细胞裂解物的稀释
在室温水浴中将Jurkat细胞裂解物(每板约50mg蛋白质)解冻，然后在冰上储存。向解冻的细胞裂解液中，加入含蛋白酶抑制剂(1片/25mL缓冲液；无EDTA的蛋白酶抑制剂混合物；Roche Diagnostics 1873580)的1xDP 0.8% NP40缓冲液，以达到5mg/mL总蛋白质的最终蛋白质浓度。将稀释的细胞裂解液储存在冰上。
测试化合物和亲和基质与裂解液的孵育
向96孔过滤器板(Multiscreen HTS, BV Filter Plates, Millipore #MSBVN1250)中每孔加入：50μL的亲和基质(10%珠浆)、3μL的化合物溶液、和100μL的细胞稀释裂解液。将板密封，并在冷室中在恒温混合器(Thermomixer)振荡(750 rpm)下，孵育3小时。然后，用230μL清洗缓冲液(1xDP 0.4% NP40)洗涤板3次。将过滤器板放在收集板(Greiner bio-one, PP-微板96孔V-型, 65120)顶部，然后用20μL样品缓冲液(100 mMTris、pH 7.4、4% SDS、0.00025%溴酚蓝、20%甘油、50 mM DTT)洗脱珠。在-80℃快速冷冻洗脱液并在-20℃储存。
洗脱激酶的检测和量化
通过在硝化纤维膜上印迹和使用对抗目标激酶的第一抗体和荧光标记的第二抗体(来自Rockland的抗小鼠或抗兔IRDyeTM抗体)，检测并量化了洗脱液中的激酶。来自LI-COR Biosciences (Lincoln, Nebraska, USA)的Odyssey红外成像***根据制造商提供的指示操作(Schutz-Geschwendener等, 2004. Quantitative, two-color Western blotdetection with infrared fluorescence. 由LI-COR Biosciences于2004年5月发布,www.licor.com)。
在洗脱液印迹后，首先通过用Odyssey封闭缓冲液(LICOR, 927-40000)在室温孵育1小时封闭硝化纤维膜(BioTrace NT；PALL, #BTNT30R)。然后在25℃(或在4C)用在Odyssey封闭缓冲液(LICOR #927-40000)中稀释的第一抗体孵育已封闭的膜16小时。然后，在室温用含0.1% Tween 20的PBS缓冲液洗涤膜两次10分钟。然后，在室温用在Odyssey封闭缓冲液(LICOR #927-40000)中稀释的检测抗体(来自Rockland的IRDyeTM标记的抗体)孵育膜60分钟。然后，在室温每次用含0.1% Tween 20的1 x PBS缓冲液洗涤膜两次10分钟。然后，用PBS缓冲液冲洗膜一次，以除去残留的Tween 20。在4℃将膜保持在PBS缓冲液中，然后用Odyssey仪器扫描。制造商指示，记录和分析了荧光信号。
抗体的来源和稀释
表11
靶标激酶 第一抗体(稀释) 第一孵育的温度 第二抗体(稀释)
PI3Kα Cell Signalling Technologies 4255 (1:100) 25℃ 抗兔(1:2500)
PI3Kβ Millipore 04-400 (1:1000) 25℃ 抗兔(1:2500)
PI3Kδ Santa Cruz SC7176 (1:1000) 4℃ 抗兔(1:2500)
PI3Kγ Jena Bioscience ABD-026L (1:100) 25℃ 抗小鼠(1:2500)
mTOR Cell Signalling Technologies 2972 (1:500) 25℃ 抗兔(1:5000)
DNAPK Calbiochem NA57 (1:1000) 4℃ 抗兔(1:5000)
Kinobeads结果
表12：如kinobeadsTM测定中确定的抑制值(IC50，μM)(活性水平：A＜0.1μM≤B＜1μM ≤C≤10μM＜D)TM
实施例 mTor PI3Ka PI3Kb PI3Kg PI3Kd DNA-PK
1 A D D D D D
2 A D D D D D
3 A D
4 A D D
5 A D D
6 A C D
7 A D D
8 A D D
9 A C >3 >3 D
10 A D >3 >3 >3 D
11 B D D D D D
12 A C D D D D
13 A C D D D C
14 A D D D D >3
15 A D D D D D
16 A D D D D D
17 B D D D D D
18 A D D D D D
19 C D
20 A D D
21 A D
22 A D D
23 A D
24 B D
25 B D
26 A D D
27 A D D
28 B D D
29 B D D
30 A D D D D D
31 B D D
32 A D D D D D
33 A D D D D D
34 A D D D D
35 A D D
36 A D D
37 B D D D D D
38 A C D D D D
39 A C D D D D
40 A C D D D D
41 A C D D D D
42 A D D D D D
43 A D D D D D
44 A C D D D D
45 A C D D D D
46 A C C D D D
47 B D D D D D
48 A D D D D D
49 A C C D D D
50 A D D D D D
51 A D D D D D
52 A D D D D D
53 A D D D D D
54 A C C D D D
55 A C D D D D
56 A D D D D D
57 A D D D D D
58 A D D D D D
59 A D D D D D
60 A D D D D D
61 A D D D D D
62 B D D D D D
63 B D D D D D
64 B C D D D D
65 B D D D D D
66 A D D D D D
67 A D D D D D
68 B D D D D D
69 A D D D D D
70 A D D D D D
71 A D D D D D
72 A D D D D D
73 A D D D D D
74 A D D D D D
75 A D D D - -
76 A D D D - -
77 A D D D - -
78 A D D D - -
79 A D D D - -
80 A D D D - -
81 A D D D - -
82 A D D D - -
体外磷酸化S6和磷酸化Akt的细胞测定
mTOR信号的激活导致几种下游靶标的磷酸化。在细胞中，mTOR存在两种不同的蛋白质复合物。mTOR复合物-1(mTORC1)磷酸化和激活S6激酶1(S6K1)和S6激酶2(S6K2)(也称为p70S6K)，其然后磷酸化S6核糖体蛋白(S6RP)(也称为RPS6)3。S6RP在丝氨酸235、丝氨酸236、丝氨酸240和丝氨酸244上由pS6K1和pS6K2两者磷酸化。mTOR复合物-2(mTORC2)在激活AKT信号通路AKT的丝氨酸473上磷酸化AKT。
该测定法在人胚肾Akt衍生的HEK293T/17细胞(ATCC CRL-11268)中测量试验化合物抑制S6RP丝氨酸-240/244的磷酸化和抑制Akt丝氨酸473的磷酸化。
在37℃、5% CO2的加湿培养箱中，将HEK293T/17细胞系维持在补充有10% FCS的DMEM培养基(Invitrogen目录号41965-039)中。
在96孔板中将细胞以40,000个细胞/孔(pS6RP S240/244测定)或80,000个细胞/孔(pAkt S473测定)接种在90μl生长培养基(DMEM, 2% FCS)中。将板在加湿培养箱中孵育1小时，以使细胞附着。将细胞用8种浓度的测试化合物或作为对照的单独DMSO(DMSO最终浓度0.1%)处理，并在37℃孵育2小时。然后加入20μl 5倍浓度的裂解缓冲液(750mM NaCl,100mM Tris pH7.4, 5mM ADTA, 5mM EGTA, 5% Triton X-100)，将板密封并在4℃轻轻摇动下孵育15分钟。细胞裂解后，将25μl细胞裂解物转移至涂覆有pS6RP Ser240/244抗体(MesoScale Discovery K150DGD-3)或pAkt Ser473抗体 (MesoScale DiscoveryK151DGD-3)的MesoScale板。将板封闭，然后用150μl MesoScale Discovery封闭液A在室温孵育1小时，接着每孔用150μl的1x Tris清洗缓冲液洗涤。在细胞裂解物转移至MSD板之后，通过在室温轻轻摇动下孵育1小时，在涂覆抗体上捕获pS6RP(或pAkt)蛋白质。在捕获步骤后，将板每孔用150μl的1x Tris清洗缓冲液洗涤三次。然后加入25μl结合有磺基标记(Sulfo-Tag)的检测抗体，并在室温轻轻摇动下孵育1小时。随后，除去抗体溶液，将板每孔用150μl的1x Tris清洗缓冲液洗涤三次，加入150μl读数(Read)缓冲溶液。将板在MSD 2400读板器(MesoScale Discovery)上测定。使用非线性回归对具有可变斜率的S形剂量响应进行数据分析。
细胞测定结果
表13：抑制值(IC50，μM)(活性水平：A＜0.1μM≤B＜1μM≤C≤10μM＜D)
实施例 pS6 pAkt
1 A A
2 A A
3 A -
4 B -
5 A A
6 A -
7 A -
8 A -
9 A A
10 A A
11 A -
12 B -
13 C -
14 B -
15 A -
16 C -
17 A -
18 B -
19 - -
20 B -
21 B -
22 B -
23 B -
24 A -
25 B -
26 A -
27 A -
28 B -
29 B -
30 A -
31 A -
32 A -
33 A -
34 A -
35 A -
36 - -
37 - -
38 A -
39 A -
40 A -
41 A -
42 A -
43 A -
44 A -
45 A -
46 A -
47 A -
48 A -
49 A -
50 A -
51 A -
52 A -
53 A -
54 A -
55 A -
56 - -
57 - -
58 A -
59 A -
60 A -
61 A -
62 A -
63 A -
64 A -
65 A -
66 A -
67 A -
68 A -
69 A -
70 A -
71 A -
72 A -
73 A -
74 A -
75 A -
76 A -
77 A -
78 A -
79 A -
80 A -
81 - -
82 - -
体外人全血测定
该测定法在αCD3/αCD28和IL-2治疗后测量全血的IFNγ释放。全血包含循环的T淋巴细胞；αCD3/αCD28刺激模拟抗原受体信号，导致IFNγ基因位点的后生变化，以致在加入IL-2时产生IFNγ。
人全血，用肝素Na作为抗凝剂，来自临床试验实验室服务处(Clinical TrialsLaboratory Services)。将血液用RPMI 1640 (Lonza, BE12-167F)稀释1.4倍，以175μl/孔分布在低蒸发的96孔板(Falcon, BD Labware, 353072)中。血液用10种浓度的测试化合物或作为对照的单独DMSO(DMSO最终浓度0.2%)处理，并在37℃孵育1小时。然后血液用1μg/mlαCD3(R&D Systems, MAB100)、1μg/ml αCD28 (BD Pharmingen, 555725)和10ng/ml的IL-2(Peprotech, 200-02)刺激。然后让血液在37℃孵育18小时。之后，将板于250g旋转5分钟，以沉淀血细胞，将25μl血浆转移到涂覆含有IFNγ抗体(MesoScale Discovery K151AEC-2)的25μl/孔MesoScale Discovery封闭液(Blocking Solution)-2的MesoScale板。通过用25μl/孔MesoScale Discovery封闭液-2在室温孵化30分钟，将板封闭。在血清转移至MSD板之后，通过在室温轻轻摇动下孵育2小时，在涂覆抗体上捕获IFNγ蛋白质。在捕获步骤后，将板用150μl/孔的1x PBS-Tween清洗缓冲液洗涤三次。然后加入25μl/孔结合有磺基标记的检测抗体，并在室温轻轻摇动下孵育2小时。随后，除去抗体溶液，将板用150μl/孔的1xPBS-Tween清洗缓冲液洗涤三次，加入150μl/孔 MesoScale Discovery读数缓冲溶液。将板在MSD 2400读板器(MesoScale Discovery)上测定。使用非线性回归对具有可变斜率的S形剂量响应进行数据分析。
全血测定结果
表14：抑制值(pIC50)
实施例 WB
38 6.8
39 7.0
40 6.7
41 6.6
42 6.6
43 6.0
44 7.4
45 6.4
46 5.7
47 7.1
48 7.1
49 6.7
50 6.0
51 6.8
52 7.5
53 7.2
54 6.7
55 7.0
56 6.5
57 6.6
58 6.6
59 7.0
60 6.7
61 6.6
62 6.7
63 6.6
64 6.8
65 -
66 6.0
67 6.5
68 6.5
69 6.9
70 6.8
71 6.1
72 6.4
73 7.2
74 6.3
75 6.9
76 6.2
77 6.7
78 6.3
79 6.2
80 7.0
81 -
82 -
Caco-2细胞渗透性
如下所述，进行了评估化合物在胃肠道通透性的双向Caco-2测定。
Caco-2细胞购自欧洲细胞培养保藏中心(ECACC, 目录号86010202)，并在21天细胞培养后用于24孔Transwell板(Fisher TKT-545-020B)。以2x105细胞/孔接种于平板培养基中，所述培养基组成为DMEM + GlutaMAXI+1% NEAA + 10% FBS (FetalClone II)+ 1%Pen/Strep。每2-3天更换培养基。在含有25 mM HEPES的汉克斯平衡盐溶液(pH7.4)中，制备了测试和参照化合物(***和罗丹明L23或长春碱，全部购自Sigma公司)，并以10uM的浓度组合地添加到Transwell板的顶室(125ul)或基底室(600ul)​​，最终DMSO的浓度为0.25%。
将50uM荧光黄(Sigma)加入到所有孔的供体缓冲液中，以通过监测荧光黄的渗透评估细胞层的完整性。因为荧光黄(LY)不能自由透过亲脂性屏障，荧光黄的高度传输指示细胞层完整性差。在37℃轨道摇床上150rpm晃动下孵育1小时后，从顶室(A)和基底室(B)取70ul等分试样，并在96孔板中添加到100ul含有分析内标物(0.5uM卡马西平)的50：50乙腈：水的溶液中。
用Spectramax Gemini XS (Ex 426nm和Em 538nm)，在含有底侧和顶侧的150uL液体的干净96孔板中，测量了荧光黄。
通过高效液相色谱法/质谱法(LC-MS/MS)，测量了样品中化合物的浓度。
表观渗透性(Papp)值根据以下关系进行了计算：
Papp = [化合物]受体最终XV受体/([化合物]供体最初XV供体)/TincXV供体/表面积x 60 x 10-6cm/s
其中V =室容积 Tinc=孵化时间。表面积= 0.33cm2
流出物比值，当做从Caco-2细胞的顶端细胞表面主动流出的标志，使用Papp B>A/Papp A>B的比率，进行了计算。
Caco-2测定结果
表15：流出物比值
实施例 流出物比值
2 63
6 25
7 29
9 20
10 27
20 39
27 25
30 21
33 23
34 13
38 34
39 61
42 2.1
44 5.5
45 52
46 35
48 30
49 32
50 7
62 22
82 1.6
在啮齿类动物中的药代动力学研究
动物
SD大鼠(雄性，7-9周龄)从SLAC Laboratory Animal Co Ltd (China)获得。在治疗前，大鼠适应新环境约3天，并保持在12小时光/暗周期。温度维持在18～26℃，相对湿度维持在30～70%。食物和水无限制地提供。动物在颈动脉(采样)或在颈静脉(给药)和颈动脉(采样)两者中手术植入导管，使用聚丙烯管和肝素(50i.u./rnL)/葡萄糖(50%)溶液作为管腔封管溶液。让动物在手术后恢复至少3天。
药代动力学研究
将化合物配制在5% DMSO(v/v)、95%(静脉内途径在10%羟丙基-β-环糊精(kleptose)HPB (w/v)的盐水中，口服途径在0.5%HPMC、2%w/v泊洛沙姆188(PluronicF68)的水中。测试化合物在给药体积2 mg/ml中以10 mg/kg作为单个食管饲法口服给药，和在给药体积0.5 mg/ml中以1 mg/kg经颈静脉推注静脉内给药。每组包括3只大鼠。血液样品使用K-EDTA作为抗凝剂经由颈静脉在以下时间点收集：0.08、0.25、0.5、1、2、4和6小时(静脉内途径)，和0.25、0.5、1、2、4、6和8小时(口服途径)。在收集30分钟内，在4℃将全血样品以7000rpm离心10分钟，将所得血浆样品保存在-20℃以待分析。
血浆中化合物水平的定量
各试验化合物的血浆浓度通过LC-MS/MS法使用内标进行了确定。
药代动力学参数的测定
使用WinNonlin® 软件程序(Pharsight®,Mountain View, CA)计算了药代动力学参数。
给出了大鼠中的药代动力学，例如化合物2、6和30分别为血浆水平(Cmax)0.16 uM、0.27 uM和0.32 uM，和口服生物利用度分别为7%、26%和69%。

Claims (40)

1.式(I)的化合物
或其药学上可接受的盐，其中
m是1；
o是1或2；
每个R1独立地选自H和未取代的C1-6烷基；
任选2个R1与它们连接的环一起结合以形成8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基或3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基环；
T1是苯基；其中T1被N(R5a)C(O)N(R5bR5)取代，且T1任选进一步被一个或多个相同或不同的R6取代；
R6是卤素；
R5a、R5b各自代表H；
R5是H；T2；或C1-6烷基，其中C1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的R8取代；
R8是卤素或OR9；
R9代表H；
T2是未被取代的，且T2选自苯基；吡啶基；环丙基；环丁基；环戊基；环己基；氧杂环丁烷基；或四氢呋喃基；
Ra和Rb选择以形成下式(Ik)-(Ip)中的一种：
或Ra、Rb、T1被定义以得到式(Iq)：
R14、R14a、R14b、R14c独立地选自H；卤素；或未取代的C1-6烷基。
2.权利要求1的化合物，其中选择式(I)中的Ra和Rb以得到式(Ib)、(Id)、(If)、(Ig)或(Ii)中之一：
其中T1、R1、o、m、R14、R14a、R14b具有如权利要求1中指示的含义。
3.权利要求1或2的化合物，其中T1未被一个或多个R6进一步取代。
4.权利要求1或2的化合物，其中限定式(I)中的T1以得到式(Ik)
其中o、m、R1、Ra、Rb、R5、R5a、R5b具有如权利要求1或2指示的含义。
5.权利要求1或2的化合物，其中R5是未取代的C1-6烷基。
6.权利要求1或2的化合物，其中R5是被一个或多个相同或不同的R8取代的C1-6烷基，且所述R8选自F和OR9。
7.权利要求1或2的化合物，其中R14、R14a、R14b和R14c中至多两个不是H。
8.权利要求1或2的化合物，其中R14、R14a、R14b和R14c中至少一个不是H。
9.权利要求1或2的化合物，其中R14、R14a、R14b和R14c中两个不是H。
10.权利要求1或2的化合物，其中R14、R14a、R14b和R14c中三个不是H。
11.权利要求1或2的化合物，其中R14、R14a、R14b和R14c独立地选自H；F；乙基；和甲基。
12.权利要求11的化合物，其中R14是甲基、R14a是氢、R14b是氢和R14c是氢。
13.权利要求11的化合物，其中R14是甲基、R14a是甲基、R14b是氢和R14c是氢。
14.权利要求11的化合物，其中R14是甲基、R14a是甲基、R14b是甲基和R14c是氢。
15.权利要求11的化合物，其中R14是甲基、R14a是F、R14b是氢和R14c是氢。
16.权利要求11的化合物，其中R14是甲基、R14a是F、R14b是甲基和R14c是氢。
17.权利要求11的化合物，其中R14是甲基、R14a是甲基、R14b是F和R14c是氢。
18.权利要求11的化合物，其中R14是F、R14a是F、R14b是氢和R14c是氢。
19.权利要求1或2的化合物，其中R1是未取代的C1-6烷基。
20.权利要求1或2的化合物，其中两个R1与它们连接的环一起结合以形成8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基或3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基环。
21.权利要求1或2的化合物，其中R5b和R5a是H；和R5是C1-6烷基，其中C1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的R8取代，或R5未被取代且选自环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
22.权利要求1或2的化合物，其中R5b和R5a是H；和R5是C1-6烷基，其任选被一个或多个相同或不同的卤素或OR9取代，或R5未被取代且选自环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
23.权利要求1或2的化合物，其中R5b和R5a是H；和R5是C1-6烷基，且被一个或多个氟或羟基取代。
24.权利要求1或2的化合物，其中R5是环丙基、甲基、乙基、氟乙基、羟基乙基、二氟乙基、异丙基、氟丙基、吡啶基和氧杂环丁烷基。
25.权利要求1或2的化合物，其中R1是C1-6烷基和o是1。
26.权利要求1或2的化合物，其中(R1)o连接在3位和o是1。
27.权利要求1或2的化合物，其中R14、R14a、R14b和R14c选自C1-6烷基；F或H。
28.权利要求1或2的化合物，其中R14、R14a、R14b和R14c中3个选自C1-6烷基或F。
29.权利要求1或2的化合物，其中R14、R14a、R14b和R14c中3个选自甲基或F。
30.权利要求1的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中化合物选自
(1).1-环丙基-3-(4-(4-吗啉代-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(2).1-环丙基-3-(4-(4-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(3).(S)-1-环丙基-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(4).(S)-1-乙基-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(5).(S)-1-甲基-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(6).(S)-1-(2-羟基乙基)-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(7).(S)-1-(2-氟乙基)-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(8).1-(4-(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-乙基脲；
(9).1-(4-(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-(2-羟基乙基)脲；
(10).(R)-1-环丙基-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(11).1-(4-(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-环丙基脲；
(12).1-(4-(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲基脲；
(13).1-(4-(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-(2-氟乙基)脲；
(14).(S)-1-环丙基-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-7,8-二氢-5H-噻喃并[4,3-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(15).(S)-1-(2,2-二氟乙基)-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(16).1-(4-(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-(2,2-二氟乙基)脲；
(17).(S)-1-异丙基-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(18).1-(4-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-环丙基脲；
(19).1-环丙基-3-(4-(4-(3-乙基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(20).(S)-1-(3-氟丙基)-3-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(21).1-(4-(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-(3-氟丙基)脲；
(22).1-环丙基-3-(4-(7-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(23).1-环丙基-3-(4-(5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(24).(S)-1-环丙基-3-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(25).1-环丙基-3-(4-(5-甲基-4-吗啉代-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(26).1-环丙基-3-(4-(4-(3-乙基吗啉代)-5-甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(27).1-(4-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-5-甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-环丙基脲；
(28).1-(4-(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-5-甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-环丙基脲；
(29).(S)-1-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-(吡啶-4-基)脲；
(30).(S)-1-(4-(4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-(吡啶-3-基)脲；
(31).1-环丙基-3-(4-((R)-5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(32).1-环丙基-3-(4-((S)-5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(33).1-乙基-3-(4-(5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(34).1-乙基-3-(4-((R)-5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(35).1-乙基-3-(4-((S)-5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(36).1-乙基-3-(4-(4-((S)-3-乙基吗啉代)-7-甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(37).1-乙基-3-(4-(5,7,7-三甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(38).1-环丙基-3-(4-(7-氟-7-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(39).1-环丙基-3-(4-(5,7-二甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(40).1-(4-(5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-丙基脲；
(41).1-(环丙基甲基)-3-(4-(5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(42).1-环丙基-3-(4-(4-((S)-3-乙基吗啉代)-5-甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(43).1-环丙基-3-(4-(5-甲基-4-((R)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(44).1-环丙基-3-(4-(5-乙基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(45).1-乙基-3-(2-氟-4-(5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(46).(S)-1-环丙基-3-(4-(4-(3-乙基吗啉代)-7,7-二甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(47).1-乙基-3-(4-((R)-4-((S)-3-乙基吗啉代)-5-甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(48).1-乙基-3-(4-((S)-4-((S)-3-乙基吗啉代)-5-甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(49).(R)-1-环丙基-3-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(50).(R)-1-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-乙基脲；
(51).(S)-1-乙基-3-(4-(4-(3-乙基吗啉代)-7,7-二甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(52).(S)-1-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲基脲；
(53).1-甲基-3-(4-(5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(54).1-(4-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-7,7-二甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-环丙基脲；
(55).1-(4-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-7,7-二甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-乙基脲；
(56).(S)-1-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-(2-氟乙基)脲；
(57).(S)-1-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-乙基脲；
(58).1-环丙基-3-(4-((S)-5-甲基-4-((R)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(59).(S)-1-(4-(4-(3-乙基吗啉代)-7,7-二甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)-2-氟苯基)-3-甲基脲；
(60).(S)-1-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)-2-氟苯基)-3-甲基脲；
(61).(S)-1-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)-3-氟苯基)-3-甲基脲；
(62).1-乙基-3-(4-(5-乙基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(63).(S)-1-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-(氧杂环丁烷-3-基)脲；
(64).(S)-1-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)-3-氟苯基)-3-乙基脲；
(65).(S)-1-环丙基-3-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-7,8-二氢-5H-噻喃并[4,3-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(66).1-环丙基-3-(4-(7-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-7,8-二氢-5H-噻喃并[4,3-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(67).1-环丙基-3-(4-(5,7-二甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-7,8-二氢-5H-噻喃并[4,3-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(68).(S)-1-(4-(7,7-二甲基-4-(3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-7,8-二氢-5H-噻喃并[4,3-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-乙基脲；
(69).1-环丙基-3-(4-(5-甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-7,8-二氢-5H-噻喃并[4,3-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(70).1-(2-氟乙基)-3-(4-(5,7,7-三甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(71).1-(4-(7,7-二甲基-4-吗啉代-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-乙基脲；
(72).1-甲基-3-(4-(5,7,7-三甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；
(73).1-(3-氟-4-(5,7,7-三甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲基脲；
(74).1-(4-(4-((S)-3-乙基吗啉代)-5,7,7-三甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)-3-氟苯基)-3-甲基脲；
(75).1-(4-(4-((S)-3-乙基吗啉代)-5,7,7-三甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)-3-甲基脲；
(76).1-(2-氟乙基)-3-(4-(5,7,7-三甲基-4-吗啉代-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲；和
(77).1-环丙基-3-(4-((R)-5,7,7-三甲基-4-((S)-3-甲基吗啉代)-6,6-二氧代-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲。
31.药物组合物，其包含权利要求1至30中任何一项的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体，其任选地与一种或多种其他药物组合物组合。
32.权利要求1至30中任何一项的化合物或其药学上可接受的盐用于制备治疗或预防与mTOR相关的疾病或病症的药物中的用途。
33.权利要求32的用途，其中所述疾病或病症是免疫、炎性或变应性病症或疾病或移植排斥或移植物抗宿主病。
34.权利要求32的用途，其中所述疾病或病症是自身免疫性病症或疾病。
35.权利要求32的用途，其中所述疾病或病症是增殖性疾病。
36.权利要求35的用途，其中所述增殖性疾病是癌症。
37.权利要求32的用途，其中所述疾病或病症是心血管疾病、代谢性疾病或神经变性疾病。
38.权利要求32的用途，其中所述疾病或病症是自噬相关的疾病。
39.权利要求32的用途，其中所述疾病或病症是病毒感染。
40.制备权利要求1至30中任何一项的化合物的方法，其包括以下步骤：
将式(II)的化合物
其中Ra、Rb、R1、o、m具有如权利要求1－30任一项指出的含义，与式T1-X的化合物反应，其中T1具有如权利要求1－30任一项指出的含义和X是适合铃木反应的基团，以得到式(I)的化合物。
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Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9249129B2 (en) 2010-03-04 2016-02-02 Cellzome Limited Morpholino substituted urea derivatives as mTOR inhibitors
BR112014006743A8 (pt) 2011-09-21 2018-01-09 Cellzome Ltd composto, uso de um composto, e, método para tratar, controlar, retardar ou impedir uma ou mais condições
US10722484B2 (en) 2016-03-09 2020-07-28 K-Gen, Inc. Methods of cancer treatment
CN106117242B (zh) * 2016-06-27 2018-08-03 山东大学 四氢噻喃并嘧啶类衍生物及其制备方法与应用
FR3075795A1 (fr) * 2017-12-21 2019-06-28 Galderma Research & Development Nouveaux composes inhibiteurs de mtor
CN111205310B (zh) * 2018-11-22 2023-12-19 上海迪诺医药科技有限公司 杂环稠合嘧啶衍生物、其药物组合物及应用
WO2021143821A1 (zh) * 2020-01-17 2021-07-22 江苏恒瑞医药股份有限公司 稠合杂芳基类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
WO2022240876A1 (en) 2021-05-11 2022-11-17 Oric Pharmaceuticals, Inc. Polo like kinase 4 inhibitors

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1638823A (zh) * 2002-02-28 2005-07-13 诺瓦提斯公司 N－{5－[4－(4－甲基－哌嗪－1－基甲基)－苯甲酰氨基]－2－甲基苯基}－4－(3－吡啶基)－2－嘧啶－胺涂层的支架
CN1898568A (zh) * 2003-12-22 2007-01-17 诺瓦提斯公司 增生性疾病对mTOR抑制剂敏感性的生物标志
CN101048152A (zh) * 2004-10-28 2007-10-03 惠氏公司 mTOR抑制剂在治疗子宫平滑肌瘤中的应用
CN101128204A (zh) * 2005-02-25 2008-02-20 库多斯药物有限公司 2,4-二氨基-吡啶并嘧啶衍生物及其作为mTOR抑制剂的用途
WO2010052569A2 (en) * 2008-11-10 2010-05-14 University Of Basel Triazine, pyrimidine and pyridine analogs and their use as therapeutic agents and diagnostic probes
WO2010103094A1 (en) * 2009-03-13 2010-09-16 Cellzome Limited PYRIMIDINE DERIVATIVES AS mTOR INHIBITORS

Family Cites Families (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ337750A (en) 1997-02-12 2001-08-31 Univ Michigan Protein markers for lung cancer and use thereof
GB9714249D0 (en) 1997-07-08 1997-09-10 Angiogene Pharm Ltd Vascular damaging agents
AU1507199A (en) 1997-12-15 1999-07-05 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Novel pyrimidine-5-carboxamide derivatives
CN1167422C (zh) 1999-02-10 2004-09-22 阿斯特拉曾尼卡有限公司 用作血管生成抑制剂的喹唑啉衍生物
KR100881105B1 (ko) 1999-11-05 2009-02-02 아스트라제네카 아베 Ｖｅｇｆ 억제제로서의 퀴나졸린 유도체
WO2001060814A2 (en) 2000-02-15 2001-08-23 Sugen, Inc. Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
US7135298B2 (en) 2003-03-26 2006-11-14 The Burnham Institute For Medical Research Screening assay for agents that alter target of Rapamycin activity
US20080194606A1 (en) 2005-05-05 2008-08-14 Astrazeneca Pyrazolyl-Amino-Substituted Pyrimidines and Their Use in the Treatment of Cancer
CA2611365C (en) 2005-06-14 2014-02-11 Cellzome Ag Process for the identification of novel enzyme interacting compounds
EP1887359B1 (en) 2006-08-03 2008-11-12 Cellzome Ag Methods for the identification of PI3K interacting molecules and for the purification of PI3K
AU2007287428B2 (en) 2006-08-24 2011-08-11 Astrazeneca Ab Morpholino pyrimidine derivatives useful in the treatment of proliferative disorders
CL2007003520A1 (es) * 2006-12-07 2008-08-22 Piramed Ltd Genentech Inc Compuestos derivados de heterociclos sustituidos con morfolina, inhibidores de la actividad pi3 quinasa; composicion farmaceutica que comprende a dichos compuestos; kit farmaceutico; y su uso para el tratamiento profilactico o terapeutico del cancer.
US20080234262A1 (en) 2007-03-21 2008-09-25 Wyeth Pyrazolopyrimidine analogs and their use as mtor kinase and pi3 kinase inhibitors
US20080233127A1 (en) 2007-03-21 2008-09-25 Wyeth Imidazolopyrimidine analogs and their use as pi3 kinase and mtor inhibitors
DK2146779T3 (en) 2007-04-18 2016-11-28 Pfizer Prod Inc Sulfonylamid derivatives to treat abnormal cell growth.
WO2009008992A2 (en) 2007-07-06 2009-01-15 Osi Pharmaceuticals Inc. Combination anti-cancer therapy comprising an inhibitor of both mtorc1 and mt0rc2
WO2009007749A2 (en) 2007-07-09 2009-01-15 Astrazeneca Ab Trisubstituted pyrimidine derivatives for the treatment of proliferative diseases
BRPI0814818A2 (pt) 2007-07-09 2019-09-10 Astrazeneca Ab composto, uso de um composto, métodos para produzir um efeito anti-proliferativo e um efeito inibitório de mtor quinase em uma animal de sangue quente, método para tratar doenças, e, composição farmacêutica
WO2009007751A2 (en) 2007-07-09 2009-01-15 Astrazeneca Ab Trisubstituted pyrimidine derivatives for the treatment of proliferative diseases
WO2009007750A1 (en) 2007-07-09 2009-01-15 Astrazeneca Ab Morpholino pyrimidine derivatives used in diseases linked to mtor kinase and/or pi3k
CN101224207A (zh) 2007-10-12 2008-07-23 中国科学院上海有机化学研究所 具有诱导自吞噬治疗错误折叠蛋白聚集所致疾病的药物及其筛选方法
DK2245181T3 (da) 2008-02-04 2012-02-06 Cellzome Ag Selektivitetsprofilering af PI3K-interagerende molekyler med multiple mål
AP2775A (en) 2008-05-23 2013-09-30 Wyeth Llc Triazine compounds as P13 kinase and MTOR inhibitors
PE20110403A1 (es) 2008-07-31 2011-07-04 Genentech Inc Compuestos biciclicos fusionados de pirimidina en el tratamiento del cancer
WO2010096619A1 (en) 2009-02-23 2010-08-26 Wyeth Llc Process, purification and crystallization of 1-(4-{[4-(dimethylamino)piperidin-1-yl]carbonyl}phenyl)-3-[4-(4,6-dimorpholin-4-yl-1,3,5-triazin-2-yl)phenyl]urea
WO2010120987A1 (en) * 2009-04-17 2010-10-21 Wyeth Llc Ring fused, ureidoaryl- and carbamoylaryl-bridged morpholino-pyrimidine compounds, their use as mtor kinase and pi3 kinase inhibitors, and their syntheses
WO2010120998A1 (en) 2009-04-17 2010-10-21 Wyeth Llc Pyrimidine compounds, their use as mtor kinase and pi3 kinase inhibitors, and their syntheses
WO2010120994A2 (en) 2009-04-17 2010-10-21 Wyeth Llc Ureidoaryl-and carbamoylaryl-morpholino- pyrimidine compounds, their use as mtor kinase and pi3 kinase inhibitors, and their synthesis
SG176959A1 (en) * 2009-06-24 2012-01-30 Genentech Inc Oxo-heterocycle fused pyrimidine compounds, compositions and methods of use
US20140018354A9 (en) 2009-07-23 2014-01-16 Nathaniel Moorman Inhibitors of mtor kinase as anti-viral agents
US9249129B2 (en) 2010-03-04 2016-02-02 Cellzome Limited Morpholino substituted urea derivatives as mTOR inhibitors
WO2012136622A1 (en) 2011-04-04 2012-10-11 Cellzome Limited Dihydropyrrolo pyrimidine derivatives as mtor inhibitors
BR112014006743A8 (pt) 2011-09-21 2018-01-09 Cellzome Ltd composto, uso de um composto, e, método para tratar, controlar, retardar ou impedir uma ou mais condições

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1638823A (zh) * 2002-02-28 2005-07-13 诺瓦提斯公司 N－{5－[4－(4－甲基－哌嗪－1－基甲基)－苯甲酰氨基]－2－甲基苯基}－4－(3－吡啶基)－2－嘧啶－胺涂层的支架
CN1898568A (zh) * 2003-12-22 2007-01-17 诺瓦提斯公司 增生性疾病对mTOR抑制剂敏感性的生物标志
CN101048152A (zh) * 2004-10-28 2007-10-03 惠氏公司 mTOR抑制剂在治疗子宫平滑肌瘤中的应用
CN101128204A (zh) * 2005-02-25 2008-02-20 库多斯药物有限公司 2,4-二氨基-吡啶并嘧啶衍生物及其作为mTOR抑制剂的用途
WO2010052569A2 (en) * 2008-11-10 2010-05-14 University Of Basel Triazine, pyrimidine and pyridine analogs and their use as therapeutic agents and diagnostic probes
WO2010103094A1 (en) * 2009-03-13 2010-09-16 Cellzome Limited PYRIMIDINE DERIVATIVES AS mTOR INHIBITORS

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Discovery of 2-arylthieno[3,2-d]pyrimidines containing 8-oxa-3-azabicyclo[3.2.1]octane in the 4-position as potent inhibitors of mTOR with selectivity over PI3K;Jeroen C. Verheijen，等;《Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters》;20091022;第20卷(第1期);表3，方案1、2 *
The Identification of 2-(1H-Indazol-4-yl)-6-(4-methanesulfonyl-piperazin-1-ylmethyl)-4-morpholin-4-yl-thieno[3,2-d]pyrimidine (GDC-0941) as a Potent, Selective, Orally Bioavailable Inhibitor of Class I PI3 Kinase for the Treatment of Cancer;Adrian J. Folkes,等;《J. Med. Chem.》;20080829;第51卷;第5522-5532页 *

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