CN103933032B - 作为抗癌药物的吡唑类衍生物的使用方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及由通式(II)表示的一系列吡唑类衍生物在治疗或防治肾脏型谷氨酰胺酶活性增高相关的疾病中的用途、方法及其药物组合物。

Description

作为抗癌药物的吡唑类衍生物的使用方法和用途

技术领域

本发明涉及吡唑类衍生物，包含这些化合物的组合和治疗或防治肾脏型谷氨酰胺酶活性增高相关的疾病中的用途。

背景技术

肿瘤细胞的快速生长不仅需要能量，而且也需要核酸、脂肪酸和蛋白质进行新细胞的生成。谷氨酰胺作为人体中最丰富的氨基酸，在肿瘤细胞的生长和发展过程中起到了至关重要的作用(参见，文献DeBerardinis，R.J.et al.(2008)The biology of cancer：Metabolic reprogramming fuels cell growth and proliferation.Cell Metabolism7：11-20和文献Hsu，P.P.and Sabatini，D.M.(2008)Warburg and beyard.Cell134：703-707)。因此，许多肿瘤细胞被描述为“沉溺于谷氨酰胺”(addicted to glutamine)的细胞(参见Wise D.R.and Thompson C.B.(2010)Glutamine addiction：a new therapeutictarget in cancer.Trends in Biochemical Sciences35：427-433)。

在谷氨酰胺新陈代谢的过程中，其中一个重要的酶是谷氨酰胺酶，它位于细胞中线粒体的内膜(参见Shapiro，R.A.et al.(1985)The orientation of phosphate-dependent glutaminase on the inner membrane of rat renal mitochondria.ArchBiochem Biophys243：1-7)，可以催化由谷氨酰胺生成谷氨酸的反应，谷氨酸在谷氨酸脱氢酶的作用下转变为α-酮戊二酸，以底物的形式进入三羧酸循环，为肿瘤细胞的大分子合成提供新陈代谢的中间体(参见Lu W.Q.et al.(2010)Cancer metabolism：is glutaminesweeter than glucose.Cancer Cell18：199-200)。谷氨酰胺酶可以分为两种亚型(isoform)，一种叫做肾脏型谷氨酰胺酶(GLS1)，另一种叫肝脏型谷氨酰胺酶(GLS2)。GLS2只在出生后的肝脏周边细胞表达；而GLS1在身体的各个部分比如：肾脏、大脑、肠等组织都有丰富表达，更重要的是广泛常存在于肿瘤细胞中(参见Shapiro et al.，“Isolation，Characterisation，and In vitro Expression of a cDNA that Encodes the KidneyIsoenzyme of the Mitochondrial Glutaminase，”J.Biol.Chem.266：18792-18796(1991)和Szeliga，M and Obara- Michlewska，M.(2009)Glutamine in neoplastic cells：focuson the expression and role of glutaminases.Neurochem Int55：71-75)。这两种亚型虽然在氨基酸的序列上高度相似，但他们来自不同的相关基因(Curthoys et al.，“Regulation of Glutaminase Activity and Glutamine Metabolism，”Annu.Rev.Nutr.16：133-159(1995))，具有不同的蛋白结构和动力学特征，从而行使不同的功能，并且涉及的调节机制也不同。

细胞的恶性转化伴随着核酸和蛋白质合成的显著增加。对快速增长的肿瘤细胞来说蛋白质的高速合成，需要不断提供必需和非必需的氨基酸，谷氨酰胺作为人体中最丰富的氨基酸，为这一巨大的需求提供了保证(参见Souba，W.，“Gutamine and Cancer，”Ann.Surg.218：715-728(1993))。谷氨酰胺代谢在细胞内的线粒体中进行，因此谷氨酰胺必需通过细胞膜从细胞外遇到细胞质中，再从细胞质中通过线粒体膜运到线粒体内。研究表明，肿瘤细胞通过细胞膜运输谷氨酰胺远比正常细胞快。在艾氏腹水(Ehrlich asctites)癌细胞上的研究，也证明了该该细胞线粒体膜上存在的一种特殊的谷氨酰胺运输***可以比正常细胞更快的把谷氨酰胺运输入线粒体(参见Molina，M.et al.(1995)Glutaminetransport by vesicles isolated from tumor cell mitochondrial innermembrane.Biochem J.308：629-633)。因为谷氨酰胺酶的活性是依赖于无机磷的浓度(参见Quesada et al.，“Purification of Phosphate-Dependent Glutaminase from IsolatedMitochondria of Ehrlich Ascites Tumor Cells，”Biochem.J.255：1031-1035(1988))，而肿瘤细胞线粒体中无机磷浓度高，所以其谷氨酰胺酶的活性也高。事实上科学研究证明谷氨酰胺酶的高活性和肿瘤细胞的快速生长密切相关(参见Souba，W.W.，“Glutamine andCancer，”Ann.Surg.218：715-728(1993))。研究表明，在艾氏腹水癌细胞中用反义mRNA干扰的方法明显降低GLSl基因的表达后，不但肿瘤细胞的生长受到抑制而且形态也发生了变化。将这种细胞接种到小鼠体内，细胞完全失去了产生肿瘤的能力，这样的小鼠和健康动物完全一样(参见Baskerville A，Hambleton P，Benbough JE，et al.Pathologicalfeatures of glutaminase toxicity[J].Br J Exp Pathol，1980，61(2)：132-138和Lobo，C.et al.(2000)Inhibition of glutaminase expression by antisense mRNAdecreases growth and tumourgenicity of tumor cells.Biochem.J.348：257-261)。这些科学发现充分说明了谷氨酰胺酶的活性与肿瘤发生和发展密切相关，谷氨酰胺酶已成为抗肿瘤疗法中受到人们极大关注的目的基因。

但是，迄今为止尚未有通过有效抑制谷氨酰胺酶来有效抑制肿瘤的药物或疗法的报道。

发明内容

本发明涉及结构式(II)中的化合物或其可药用的盐或溶剂合物用于制作抑制谷氨酰胺酶活性的药物的用途：

其中：

Y表示-C(O)-N(R⁵)-或-O-；A和B独立的选自-C(O)-NH-R¹或

R¹表示H或独立地选自：

a)C_1-16烷基，或所述基团可任选被以下基团取代：

1)1-5个卤代基团至最高全卤代烷基基团；

2)1个氧代基团；

3)1-2个羟基基团；

4)1-2个C_1-10烷氧基基团，或所述基团可任选被以下基团取代：最高5个卤代或卤代烷氧基，1个羟基或CO₂R^a基团；

5)1个CO₂R^a或S(O)_pR^d

6)l-2个芳基，Hetcy或HAR基团，或所述基团可任选被以下基团取代：

a.1-5个卤代基团，

b.1个羟基，CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c，

c.1-2个C_1-10烷基或烷氧基基团，或所述基团可任选被以下基团取代：1-5个卤代，最高全卤代烷基，和1-2个羟基或CO₂R^a基团；

d.1-2个苯基环，或所述基团可任选被以下基团取代：1-5个卤代基团至最高全卤代，1-3个C_1-10烷基或烷氧基基团，分别进一步视需要被1-5个卤代至最高全卤代，或1-2个羟基或CO₂R^a基团；

b)芳基，HAR，Hetcy，或所述基团可任选的被以下基团取代：

1)1-3个C_1-10烷基或烷氧基基团，或所述基团可任选的被以下基团取代：1-5个卤代基团，1-2个羟基基团；CO₂R^a基团；CN；S(O)_pR^d，苯基，或所述基团可任选被以下基团取代：

i.1-5个卤代基团；

ii.1个CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c基团；

iii.1-2个C_1-10烷基或烷氧基基团，或所述基团可任选被以下基团取代：1-5个卤代，最高全卤代烷基，和1-2个羟基或CO₂R^a基团；和

2)苯基，该苯基可选择性的被以下基团取代：

i.1-5个卤代基团；

ii.1个CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c基团；

iii.1-2个C_1-10烷基或烷氧基基团，或所述基团可任选被以下基团取代：1-5个卤代，最高全卤代烷基，和1-2个羟基或CO₂R^a基团；

以上所述芳基，HAR，Hetcy基团也可在碳上被选自以下的基团取代；

3)1-5个卤代基团；

4)1-2个羟基基团；

5)1个CN，S(O)_pR^d或NO₂基团；

6)1-2个CO₂R^a基团；

7)C(O)NR^bR^c基团；

R²独立的选自H或：

a)卤代，羟基，CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d或NO₂基团，

b)C_1-6烷基或OC_1-6烷基，该C_1-6烷基或OC_1-6烷基可选择性的被以下基团取代：

1)1-5个卤代基团至最高全卤代烷基基团；

2)CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d或羟基基团；

3)苯基，或所述基团可任选被以下基团取代：

i.1-5个卤代基团；

ii.1个CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c基团；

iii.1-2个C_1-10烷基或烷氧基基团，或所述基团可任选被以下基团取代：1-5卤代，最高全卤代烷基，和1-2羟基或CO₂R^a基团

R³是H或C_1-3烷基；

R⁵是H或C_1-6烷基；

R⁶选自H，羟基和C_1-3烷基；

R⁷是H或F，或R⁶和R⁷在一起表示氧代；

R^a是H或C_1-10烷基，所述C_1-10烷基可选择性的被苯基，羟基，OC_1-6烷基，CO₂H，CO₂C_1-6烷基和1-3卤代烷基取代；

R^b是H或C_1-10烷基；

R^c是H或独立的选自：

a)C_1-10烷基，该C_1-10烷基可选择性的被羟基，OC_1-6烷基，CO₂H，CO₂C_1-6烷基和1-3个卤代烷基取代；

b)芳基或Ar-C_1-6烷基，所述芳基或Ar-C_1-6烷基可选择性的被1-5个卤素或1-3个选自以下成分取代：CN，羟基，C_1-10烷基和OC_1-10烷基，所述烷基和烷氧基可选择性的进一步被1-5个卤代基团至最高全卤代；

c)Hetcy或Hetcy-C_1-6烷基，所述Hetcy或Hetcy-C_1-6烷基可选择性的被1-5个卤素和1-3个选自以下基团取代：氧代，C_1-10烷基和OC_1-10烷基，所述烷基和烷氧基可选择性的进一步被1-5个卤代基团至最高全卤代；和

d)HAR或HAR-C_1-6烷基，所述HAR或HAR-C_i-6烷基可选择性的被1-5个卤素和1-3个选自以下基团取代：C_1-10烷基和OC_1-10烷基，所述烷基和烷氧基可选择性的进一步被1-5个卤代基团至最高全卤代；

R^d是C_1-10烷基，Aryl或Ar-C_1-10烷基；

m是选自0，1和2的整数；

n是选自0到6的整数；

p是选自0，1和2的整数，并且如果至少一个m和n不是0，则Z选自CO₂R^a，5-四氮唑和5-(2-氧代-1，3，4-氧杂二唑基)；如果m和n都是0，则Z选自5-四氮唑和5-(2-氧代-1，3，4-氧杂二唑基)，

X选自CH或N

本发明的另一个实施方案中，提供了一种使用结构式(III)中的化合物或其可药用的盐或溶剂合物用于制作抑制谷氨酰胺酶活性的药物的用途：

其中：

A表示含有1-4个杂原子的9-10元双环杂芳环，其中0-4个杂原子为N并且0-1个杂原子为O或S

所述双环杂芳基可任选的被以下基团取代：

a)1-5个卤素基团；

b)1个CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂，C(O)NR^bR^c和NR^bR^c基团；

c)1-2个C_1-10烷基或烷氧基基团，所述基团可任选的被以下基团取代：

1)1-5个卤素基团至全卤代烷基；

2)1个氧代基团；

3)1-2个羟基基团；

4)1-2个C_1-10烷氧基，所述基团可任选的被1到5个卤素或全卤代烷氧基、1个羟基或CO₂R^a基团取代；

5)1个CO₂R^a或S(O)_pR^d

6)1-2个芳基，Hetcy或HAR基团，所述基团可任选的被以下基团取代：

a)1-5个卤素基团，

b)1个羟基，CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c，

c)1-2个C_1-10烷基或烷氧基，所述基团可任选的被1-5个卤素，直到全卤代烷基和1-2个羟基或CO₂R^a基团取代；和

d)芳基，HAR，Hetcy，所述基团可任选的被以下基团取代：

i.1-5个卤素基团；

ii.1个CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c基团；

iii.1-2个C_1-10烷基和烷氧基，每个任选被1-5个卤素，直到全卤代烷基，和1-2个羟基或CO₂R^a基团；

所述芳基，HAR，Hetcy基还可任选的被选自以下的基团取代；

1)1-5个卤素基团；

2)1-2个羟基基团；

3)1个CN，S(O)_pR^d或NO₂基团；

4)1-2个CO₂R^a基团；

5)C(O)NR^bR^c基团；

R^a是H或C_1-10烷基，所述基团可任选的被苯基，羟基，OC_1-6alkyl，CO₂H，CO₂C_1-6烷基和1-3个卤素取代；

R^b是H或C_1-10烷基；

R^c是H或独立的选自：

a)C_1-10烷基，所述基团可任选的被羟基，OC_1-6烷基，CO₂H，CO₂C_1-6烷基和1-3个卤代烷基取代；

b)芳基或Ar-C_1-6烷基，所述基团可任选的被1-5个卤素和1-3个选自以下成分取代：CN，羟基，C_1-10烷基和OC_1-10烷基，所述烷基和烷氧基可任选的进一步被1-5卤代基团至最高全卤代；

c)Hetcy或Hetcy-C_1-6烷基，所述基团可任选的被1-5个卤素和1-3个选自以下基团取代：氧代，C_1-10烷基和OC_1-10烷基，所述烷基和烷氧基可任选的进一步被1-5个卤代基团至最高全卤代；和

d)HAR或HAR-C_1-6烷基，所述基团可任选的被1-5个卤素和1-3个选自以下基团取代：C_1-10烷基和OC_1-10烷基，所述烷基和烷氧基可任选的进一步被1-5个卤代基团至最高全卤代；

R^d是C_1-10烷基，Aryl或Ar-C_1-10烷基；

p为选自0，1和2的整数；

每个R¹独立的选自H或以下的基团：

a)卤素；CO₂R^a，CN，羟基，S(O)_pR^d，NO₂，C(O)NR^bR^c和NR^bR^C；

b)C_1-10烷基或OC_1-10烷基，所述基团可任选的被以下基团取代：

1)1-5个卤素直至全卤代烷基；

2)1个氧代基团；

3)1-2个羟基；

4)1-2个C_1-10烷氧基，所述基团可任选的被1-5个卤素，直到全卤代烷基和1-2个羟基或CO₂R^a基团取代；

5)1个CO₂R^a或S(O)_pR^d

6)1-2个芳基，Hetcy或HAR基团，所述基团可任选的被以下基团取代：

a)1-5个卤素基团，

b)1个羟基，CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c，

c)1-2个C_1-10烷基或烷氧基，所述基团可任选的被1-5个卤素，直到全卤代烷基和1-2个羟基或CO₂R^a基团取代；和

d)芳基，HAR，Hetcy，所述基团可任选的被以下基团取代：

i.1-5个卤素基团；

ii.1个CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c基团；

iii.1-2个C_1-10烷基和烷氧基，每个任选被1-5个卤素，直到全卤代烷基，和1-2羟基或CO₂R^a基团；

所述芳基，HAR，Hetcy基可任选的进一步被选自以下的基团取代：

1)1-5个卤素基团；

2)1-2个羟基基团；

3)1个CN，S(O)_pR^d或NO₂基团；

4)1-2个CO₂R^a基团；

5)C(O)NR^bR^c基团；

其中R^a，R^b，R^c，R^d和p定义如上；

R²选自氢和C_1-6烷基

本发明的另一个实施方案中，提供了一种使用结构式(IV)中的化合物或其可药用的盐或溶剂合物用于制作抑制谷氨酰胺酶活性的药物的用途：

其中：

每个R¹独立的选自氢或以下基团：

a)卤素；CO₂R^a，CN，羟基，S(O)_pR^d，NO₂；

b)任选被以下基团取代的C_1-6烷基或OC_l-6烷基：

1)1-5个卤素直到全卤代烷基；

2)CO₂R^a；

3)任选被以下基团取代的苯基：

a.1-5个卤素，

b.1个CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c，

c.1-2个C_1-10烷基或C_1-10烷氧基；

R³是氢或C_1-3烷基；

R^a是H、C_1-6烷；

R⁵选自以下基团：C_l-10烷基，芳基或Ar-C_1-10烷基；

R⁶和R⁷各自独立的表示H或C_1-3烷基，并且p是0，l或2.

本发明的另一个实施方案中，提供了一种使用结构式(I)中的化合物或其可药用的盐或溶剂合物用于制作抑制谷氨酰胺酶活性的药物的用途：

本发明的另一个实施方案中，提供了一种治疗或防治与肾脏型谷氨酰胺酶活性增高有关的病症的的方法，所述方法包括向哺乳动物施用有效量的通式(II)所示的化合物或其可药用的盐或溶剂合物

其中：

Y表示-C(O)-N(R⁵)-或-O-；A和B独立的选自-C(O)-NH-R¹或

R¹表示H或独立地选自：

c)C_1-16烷基，或所述基团可任选被以下基团取代：

7)1-5个卤代基团至最高全卤代烷基基团；

8)1个氧代基团；

9)1-2个羟基基团；

10)1-2个C_1-10烷氧基基团，或所述基团可任选被以下基团取代：最高5个卤代或卤代烷氧基，1个羟基或CO₂R^a基团；

11)1个CO₂R^a或S(O)_pR^a

12)1-2个芳基，Hetcy或HAR基团，或所述基团可任选被以下基团取代：

e.1-5个卤代基团，

f.1个羟基，CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c，

g.1-2个C_1-10烷基或烷氧基基团，或所述基团可任选被以下基团取代：1-5个卤代，最高全卤代烷基，和1-2个羟基或CO₂R^a基团；

h.1-2个苯基环，或所述基团可任选被以下基团取代：1-5个卤代基团至最高全卤代，1-3个C_1-10烷基或烷氧基基团，分别进一步视需要被1-5个卤代至最高全卤代，或1-2个羟基或CO₂R^a基团；

d)芳基，HAR，Hetcy，或所述基团可任选的被以下基团取代：

8)1-3个C_1-10烷基或烷氧基基团，或所述基团可任选的被以下基团取代：1-5个卤代基团，1-2个羟基基团；CO₂R^a基团；CN；S(O)_pR^d，苯基，或所述基团可任选被以下基团取代：

iv.1-5个卤代基团；

v.1个CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c基团；

vi.1-2个C_1-10烷基或烷氧基基团，或所述基团可任选被以下基团取代：1-5个卤代，最高全卤代烷基，和1-2个羟基或CO₂R^a基团；和

9)苯基，该苯基可选择性的被以下基团取代：

iv.1-5个卤代基团；

v.1个CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c基团；

vi.1-2个C_1-10烷基或烷氧基基团，或所述基团可任选被以下基团取代：1-5个卤代，最高全卤代烷基，和1-2个羟基或CO₂R^a基团；

以上所述芳基，HAR，Hetcy基团也可在碳上被选自以下的基团取代；

10)1-5个卤代基团；

11)1-2个羟基基团；

12)1个CN，S(O)_pR^d或NO₂基团；

13)1-2个CO₂R^a基团；

14)C(O)NR^bR^c基团；

R²独立的选自H或：

c)卤代，羟基，CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d或NO₂基团，

d)C_1-6烷基或OC_1-6烷基，该C_1-6烷基或OC_1-6烷基可选择性的被以下基团取代：

4)1-5个卤代基团至最高全卤代烷基基团；

5)CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d或羟基基团；

6)苯基，或所述基团可任选被以下基团取代：

iv.1-5个卤代基团；

v.1个CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c基团；

vi.1-2个C_1-10烷基或烷氧基基团，或所述基团可任选被以下基团取代：1-5卤代，最高全卤代烷基，和1-2羟基或CO₂R^a基团

R³是H或C_1-3烷基；

R⁵是H或C_1-6烷基；

R⁶选自H，羟基和C_1-3烷基；

R⁷是H或F，或R⁶和R⁷在一起表示氧代；

R^a是H或C_1-10烷基，所述C_1-10烷基可选择性的被苯基，羟基，OC_1-6烷基，CO₂H，CO₂C_1-6烷基和1-3卤代烷基取代；

R^b是H或C_1-10烷基；

R^c是H或独立的选自：

e)C_1-10烷基，该C_1-10烷基可选择性的被羟基，OC_1-6烷基，CO₂H，CO₂C_1-6烷基和1-3个卤代烷基取代；

f)芳基或Ar-C_1-6烷基，所述芳基或Ar-C_1-6烷基可选择性的被1-5个卤素或1-3个选自以下成分取代：CN，羟基，C_1-10烷基和OC_1-10烷基，所述烷基和烷氧基可选择性的进一步被1-5个卤代基团至最高全卤代；

g)Hetcy或Hetcy-C_1-6烷基，所述Hetcy或Hetcy-C_1-6烷基可选择性的被1-5个卤素和1-3个选自以下基团取代：氧代，C_1-10烷基和OC_1-10烷 基，所述烷基和烷氧基可选择性的进一步被1-5个卤代基团至最高全卤代；和

h)HAR或HAR-C_1-6烷基，所述HAR或HAR-C_1-6烷基可选择性的被1-5个卤素和1-3个选自以下基团取代：C_1-10烷基和OC_1-10烷基，所述烷基和烷氧基可选择性的进一步被1-5个卤代基团至最高全卤代；

R^d是C_1-10烷基，Aryl或Ar-C_1-10烷基；

m是选自0，1和2的整数；

n是选自0到6的整数；

p是选自0，1和2的整数，并且如果至少一个m和n不是0，则Z选自CO₂R^a，5-四氮唑和5-(2-氧代-1，3，4-氧杂二唑基)；如果m和n都是0，则Z选自5-四氮唑和5-(2-氧代-1，3，4-氧杂二唑基)，

X选自CH或N

本发明的另一个实施方案中，提供了一种治疗或防治与肾脏型谷氨酰胺酶活性增高有关的病症的的方法，所述方法包括向哺乳动物施用有效量的通式(III)所示的化合物或其可药用的盐或溶剂合物

A表示含有1-4个杂原子的9-10元双环杂芳环，其中0-4个杂原子为N并且0-1个杂原子为O或S

所述双环杂芳基可任选的被以下基团取代：

d)1-5个卤素基团；

e)1个CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂，C(O)NR^bR^c和NR^bR^c基团；

f)1-2个C_1-10烷基或烷氧基基团，所述基团可任选的被以下基团取代：

7)1-5个卤素基团至全卤代烷基；

8)1个氧代基团；

9)1-2个羟基基团；

10)1-2个C_1-10烷氧基，所述基团可任选的被1到5个卤素或全卤代烷氧基、1个羟基或CO₂R^a基团取代；

11)1个CO₂R^a或S(O)_pR^d

12)1-2个芳基，Hetcy或HAR基团，所述基团可任选的被以下基团取代：

e)1-5个卤素基团，

f)1个羟基，CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c，

g)1-2个C_1-10烷基或烷氧基，所述基团可任选的被1-5个卤素，直到全卤代烷基和1-2个羟基或CO₂R^a基团取代；和

h)芳基，HAR，Hetcy，所述基团可任选的被以下基团取代：

iv.1-5个卤素基团；

v.1个CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c基团；

vi.1-2个C_1-10烷基和烷氧基，每个任选被1-5个卤素，直到全卤代烷基，和1-2个羟基或CO₂R^a基团；

所述芳基，HAR，Hetcy基还可任选的被选自以下的基团取代；

6)1-5个卤素基团；

7)1-2个羟基基团；

8)1个CN，S(O)_pR^d或NO₂基团；

9)1-2个CO₂R^a基团；

10)C(O)NR^bR^c基团；

R^a是H或C_1-10烷基，所述基团可任选的被苯基，羟基，OC_1-6alkyl，CO₂H，CO₂C_1-6烷基和1-3个卤素取代；

R^b是H或C_1-10烷基；

R^c是H或独立的选自：

e)C_1-10烷基，所述基团可任选的被羟基，OC_1-6烷基，CO₂H，CO₂C_1-6烷基和1-3个卤代烷基取代；

f)芳基或Ar-C_1-6烷基，所述基团可任选的被1-5个卤素和1-3个选自以下成分取代：CN，羟基，C_1-10烷基和OC_1-10烷基，所述烷基和烷氧基可任选的进一步被1-5卤代基团至最高全卤代；

g)Hetcy或Hetcy-C_1-6烷基，所述基团可任选的被1-5个卤素和1-3个选自以下基团取代：氧代，C_1-10烷基和OC_1-10烷基，所述烷基和烷氧基可任选的进一步被1-5个卤代基团至最高全卤代；和

h)HAR或HAR-C_1-6烷基，所述基团可任选的被1-5个卤素和1-3个选自以下基团取代：C_1-10烷基和OC_1-10烷基，所述烷基和烷氧基可任选的进一步被1-5个卤代基团至最高全卤代；

R^d是C_1-10烷基，Aryl或Ar-C_1-10烷基；

p为选自0，1和2的整数；

每个R¹独立的选自H或以下的基团：

c)卤素；CO₂R^a，CN，羟基，S(O)_pR^d，NO₂，C(O)NR^bR^c和NR^bR^c；

d)C_1-10烷基或OC_1-10烷基，所述基团可任选的被以下基团取代：

7)1-5个卤素直至全卤代烷基；

8)1个氧代基团；

9)1-2个羟基；

10)1-2个C_1-10烷氧基，所述基团可任选的被1-5个卤素，直到全卤代烷基和1-2个羟基或CO₂R^a基团取代；

11)1个CO₂R^a或S(O)_pR^d

12)1-2个芳基，Hetcy或HAR基团，所述基团可任选的被以下基团取代：

e)1-5个卤素基团，

f)1个羟基，CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c，

g)1-2个C_1-10烷基或烷氧基，所述基团可任选的被1-5个卤素，直到全卤代烷基和1-2个羟基或CO₂R^a基团取代；和

h)芳基，HAR，Hetcy，所述基团可任选的被以下基团取代：

iv.1-5个卤素基团；

v.1个CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c基团；

vi.1-2个C_1-10烷基和烷氧基，每个任选被1-5个卤素，直到全卤代烷基，和1-2羟基或CO₂R^a基团；

所述芳基，HAR，Hetcy基可任选的进一步被选自以下的基团取代：

6)1-5个卤素基团；

7)1-2个羟基基团；

8)1个CN，S(O)_pR^d或NO₂基团；

9)1-2个CO₂R^a基团；

10)C(O)NR^bR^c基团；

其中R^a，R^b，R^c，R^d和p定义如上；

R²选自氢和C_1-6烷基

本发明的另一个实施方案中，提供了一种治疗或防治与肾脏型谷氨酰胺酶活性增高有关的病症的的方法，所述方法包括向哺乳动物施用有效量的通式(IV)所示的化合物或其可药用的盐或溶剂合物

每个R¹独立的选自氢或以下基团：

c)卤素；CO₂R^a，CN，羟基，S(O)_pR^d，NO₂；

d)任选被以下基团取代的C_1-6烷基或OC_1-6烷基：

4)1-5个卤素直到全卤代烷基；

5)CO₂R^a；

6)任选被以下基团取代的苯基：

d.1-5个卤素，

e.1个CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c，

f.1-2个C_1-10烷基或C_1-10烷氧基；

R³是氢或C_1-3烷基；

R^a是H、C_1-6烷；

R⁵选自以下基团：C_1-10烷基，芳基或Ar-C₁-₁₀烷基；

R⁶和R⁷各自独立的表示H或C_1-3烷基，并且p是0，1或2.

本发明的另一个实施方案中，提供了一种治疗或防治与肾脏型谷氨酰胺酶活性增高有关的病症的的方法，所述方法包括向哺乳动物施用有效量的通式(I)所示的化合物或其可药用的盐或溶剂合物

本发明的另一个实施方案中，提供了一种治疗或防治与肾脏型谷氨酰胺酶活性增高有关的与肾脏型谷氨酰胺酶活性增高有关的肿瘤的方法，所述方法包括向哺乳动物施用有效量的通式(I)、(II)、(III)、或(IV)所示的化合物或其可药用的盐或溶剂合物。

本发明的另一个实施方案中，提供了一种治疗或防治与肾脏型谷氨酰胺酶活性增高有关的与肾脏型谷氨酰胺酶活性增高有关的乳腺癌、肺癌、脑癌、胰腺癌和结肠癌的方法，所述方法包括向哺乳动物施用有效量的通式(I)、(II)、(III)、或(IV)所示的化合物或其可药用的盐或溶剂合物。

本发明的另一个实施方案中，提供了一种治疗或防治与肾脏型谷氨酰胺酶活性增高有关的与肾脏型谷氨酰胺酶活性增高有关的乳腺癌、肺癌、脑癌、胰腺癌和结肠癌的方法， 所述方法包括向哺乳动物施用有效量的通式(I)、(II)、(III)、或(IV)所示的化合物或其可药用的盐或溶剂合物，施用方式包括肠道给药、口服给药、皮下给药、静脉注射、肌肉注射、或腹膜外给药。

本发明的另一个实施方案中，提供了一种用于治疗或防治与肾脏型谷氨酰胺酶活性增高有关的肿瘤病症的药物组合物，该组合物包含通式(I)、(II)、(III)、或(IV)所示的化合物及其药学上可接受的盐或溶剂化物、一种或多种另外的活性药物成分和一种或多种可药用赋形剂。

本发明的另一个实施方案中，提供了一种用于治疗或防治与肾脏型谷氨酰胺酶活性增高有关的肿瘤病症的药物组合物，该组合物包含通式(I)、(II)、(III)、或(IV)所示的化合物及其药学上可接受的盐或溶剂化物、一种或多种另外的抗癌药物和一种或多种可药用赋形剂。

本发明的另一个实施方案中，提供了一种在细胞或组织中减少由谷氨酰胺酶催化分解产生的谷氨酸的方法，该方法包括在细胞核组织中抑制谷氨酰胺酶的活性而有效地降低谷氨酸的产生。

本发明的另一个实施方案中，提供了一种在细胞或组织中减少由谷氨酰胺酶催化分解产生的谷氨酸的方法，该方法包括在细胞核组织中抑制谷氨酰胺酶的活性而有效地降低谷氨酸的产生来治疗或防治与谷氨酰胺酶活性增高相关的病症的药用的用途。

附图说明

图1：对肾脏型谷氨酰胺酶活性的抑制

图2：肿瘤体积随给药时间变化曲线

图3：小鼠体重随给药时间变化曲线

发明详述

本发明涉及在细胞或组织中减少由谷氨酰胺酶催化分解产生的谷氨酸。该方法包括在细胞核组织中抑制谷氨酰胺酶的活性而有效地降低谷氨酸的产生。.

本发明提供了一种全新的方法来确定和开发用来抑制谷氨酰胺酶活性的药物。由于肿瘤的发生于谷氨酰胺代谢密切相关，本发明可以在抗癌药物开发领域有重要影响。

本发明涉及一种药物组合物，该组合物的成分之一为结构式I、II、III、或IV的化合物与药学上可接受的盐或溶剂化物。

本发明涉及使用结构式I、II、III、或IV的化合物与药学上可接受的盐或溶剂化物治疗哺乳动物患者肿瘤疾病的方法。

本发明涉及一个通过抑制谷氨酰胺酶活性来治疗哺乳动物患者肿瘤疾病的方法，包括结构式I、II、III、或IV的化合物与药学上可接受的盐***的有效剂量。

在某些实施方案中，癌症可能是一个或急性淋巴细胞白血病(ALL)，急性髓系白血病(AML)，肾上腺皮质癌，艾滋病相关的癌症，***癌，附录癌，非典型畸胎样／横纹肌样瘤的一个变种，基底细胞癌，胆汁导管癌，膀胱癌，骨肿瘤，脑肿瘤，乳腺癌，支气管肿瘤，Brukitt淋巴瘤，慢性淋巴细胞白血病(CLL)，慢性粒细胞白血病(CML)，结肠癌，直肠癌，胃肠道间质瘤(GIST)，胃癌，胃肠道类癌肿瘤，头颈部肿瘤，心脏肿瘤，肝癌(肝)癌，非小细胞肺癌，口腔癌，口腔癌，唇和口咽癌，骨肉瘤，恶性纤维组织细胞瘤骨，卵巢癌，胰腺癌，皮肤癌，小肠癌，小细胞肺癌，T细胞淋巴瘤。

在其最宽的方面，本发明涉及结构式II的化合物或其药物可接受盐或溶剂合物的用途、方法和药物组合物：

其中：Y表示-C(O)-N(R⁵)-或-O-；A和B独立的选自-C(O)-NH-R¹或

R¹表示H或独立地选自：

e)C_1-16烷基，或所述基团可任选被以下基团取代：

13)1-5个卤代基团至最高全卤代烷基基团；

14)1个氧代基团；

15)1-2个羟基基团；

16)1-2个C_1-10烷氧基基团，或所述基团可任选被以下基团取代：最高5个卤代或卤代烷氧基，1个羟基或CO₂R^a基团；

17)1个CO₂R^a或S(O)_pR^d

18)1-2个芳基，Hetcy或HAR基团，或所述基团可任选被以下基团取代：

i.1-5个卤代基团，

j.1个羟基，CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c，

k.1-2个C_1-10烷基或烷氧基基团，或所述基团可任选被以下基团取代：1-5个卤代，最高全卤代烷基，和1-2个羟基或CO₂R^a基团；

1.1-2个苯基环，或所述基团可任选被以下基团取代：1-5个卤代基团至最高全卤代，1-3个C_1-10烷基或烷氧基基团，分别进一步视需要被1-5个卤代至最高全卤代，或1-2个羟基或CO₂R^a基团；

f)芳基，HAR，Hetcy，或所述基团可任选的被以下基团取代：

15)1-3个C_1-10烷基或烷氧基基团，或所述基团可任选的被以下基团取代：1-5个卤代基团，1-2个羟基基团；CO₂R^a基团；CN；S(O)_pR^d，苯基，或所述基团可任选被以下基团取代：

vii.1-5个卤代基团；

viii.1个CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c基团；

ix.1-2个C_1-10烷基或烷氧基基团，或所述基团可任选被以下基团取代：1-5个卤代，最高全卤代烷基，和1-2个羟基或CO₂R^a基团；和

16)苯基，该苯基可选择性的被以下基团取代：

vii.1-5个卤代基团；

viii.1个CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c基团；

ix.1-2个C_1-10烷基或烷氧基基团，或所述基团可任选被以下基团取代：1-5个卤代，最高全卤代烷基，和1-2个羟基或CO₂R^a基团；

以上所述芳基，HAR，Hetcy基团也可在碳上被选自以下的基团取代；

17)1-5个卤代基团；

18)1-2个羟基基团；

19)1个CN，S(O)_pR^d或NO₂基团；

20)1-2个CO₂R^a基团；

21)C(O)NR^bR^c基团；

R²独立的选自H或：

e)卤代，羟基，CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d或NO₂基团，

f)C_1-6烷基或OC_1-6烷基，该C_1-6烷基或OC_1-6烷基可选择性的被以下基团取代：

7)1-5个卤代基团至最高全卤代烷基基团；

8)CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d或羟基基团；

9)苯基，或所述基团可任选被以下基团取代：

vii.1-5个卤代基团；

viii.1个CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c基团；

ix.1-2个C_1-10烷基或烷氧基基团，或所述基团可任选被以下基团取代：1-5卤代，最高全卤代烷基，和1-2羟基或CO₂R^a基团

R³是H或C_1-3烷基；

R⁵是H或C_1-6烷基；

R⁶选自H，羟基和C_1-3烷基；

R⁷是H或F，或R⁶和R⁷在一起表示氧代；

R^a是H或C_1-10烷基，所述C_1-10烷基可选择性的被苯基，羟基，OC_1-6烷基，CO₂H，CO₂C_1-6烷基和1-3卤代烷基取代；

R^b是H或C_1-10烷基；

R^c是H或独立的选自：

i)C_1-10烷基，该C_1-10烷基可选择性的被羟基，OC_1-6烷基，CO₂H，CO₂C_1-6烷基和1-3个卤代烷基取代；

j)芳基或Ar-C_1-6烷基，所述芳基或Ar-C_1-6烷基可选择性的被1-5个卤素或1-3个选自以下成分取代：CN，羟基，C_1-10烷基和OC_1-10烷基，所述烷基和烷氧基可选择性的进一步被1-5个卤代基团至最高全卤代；

k)Hetcy或Hetcy-C_1-6烷基，所述Hetcy或Hetcy-C_1-6烷基可选择性的被1-5个卤素和1-3个选自以下基团取代：氧代，C_1-10烷基和OC_1-10烷 基，所述烷基和烷氧基可选择性的进一步被1-5个卤代基团至最高全卤代；和

l)HAR或HAR-C_1-6烷基，所述HAR或HAR-C_1-6烷基可选择性的被1-5个卤素和1-3个选自以下基团取代：C_1-10烷基和OC_1-10烷基，所述烷基和烷氧基可选择性的进一步被1-5个卤代基团至最高全卤代；

R^d是C_1-10烷基，Aryl或Ar-C_1-10烷基；

m是选自0，1和2的整数；

n是选自0到6的整数；

p是选自0，1和2的整数，并且如果至少一个m和n不是0，则Z选自CO₂R^a，5-四氮唑和5-(2-氧代-1，3，4-氧杂二唑基)；如果m和n都是0，则Z选自5-四氮唑和5-(2-氧代-1，3，4-氧杂二唑基)，

X选自CH或N

本发明涉及结构式III的化合物或其药物可接受盐或溶剂合物的用途、方法和药物组合物

其中，

A表示含有1-4个杂原子的9-10元双环杂芳环，其中0-4个杂原子为N并且0-1个杂原子为O或S

所述双环杂芳基可任选的被以下基团取代：

g)1-5个卤素基团；

h)1个CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂，C(O)NR^bR^c和NR^bR^c基团；

i)1-2个C_1-10烷基或烷氧基基团，所述基团可任选的被以下基团取代：

13)1-5个卤素基团至全卤代烷基；

14)1个氧代基团；

15)1-2个羟基基团；

16)1-2个C_1-1-烷氧基，所述基团可任选的被1到5个卤素或全卤代烷氧基、1个羟基或CO₂R^a基团取代；

17)1个CO₂R^a或S(O)_pR^d

18)1-2个芳基，Hetcy或HAR基团，所述基团可任选的被以下基团取代：

i)1-5个卤素基团，

j)1个羟基，CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c，

k)1-2个C_1-10烷基或烷氧基，所述基团可任选的被1-5个卤素，直到全卤代烷基和1-2个羟基或CO₂R^a基团取代；和

l)芳基，HAR，Hetcy，所述基团可任选的被以下基团取代：

vii.1-5个卤素基团；

viii.1个CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c基团；

ix.1-2个C_1-10烷基和烷氧基，每个任选被1-5个卤素，直到全卤代烷基，和1-2个羟基或CO₂R^a基团；

所述芳基，HAR，Hetcy基还可任选的被选自以下的基团取代；

11)1-5个卤素基团；

12)1-2个羟基基团；

13)1个CN，S(O)_pR^d或NO₂基团；

14)1-2个CO₂R^a基团；

15)C(O)NR^bR^c基团；

R^a是H或C_1-10烷基，所述基团可任选的被苯基，羟基，OC_1-6alkyl，CO₂H，CO₂C_1-6烷基和1-3个卤素取代；

R^b是H或C_1-10烷基；

R^c是H或独立的选自：

i)C_1-10烷基，所述基团可任选的被羟基，OC_1-6烷基，CO₂H，CO₂C_1-6烷基和1-3个卤代烷基取代；

j)芳基或Ar-C_1-6烷基，所述基团可任选的被1-5个卤素和1-3个选自以下成分取代：CN，羟基，C_1-10烷基和OC_1-10烷基，所述烷基和烷氧基可任选的进一步被1-5卤代基团至最高全卤代；

k)Hetcy或Hetcy-C_1-6烷基，所述基团可任选的被1-5个卤素和1-3个选自以下基团取代：氧代，C_1-10烷基和OC_1-10烷基，所述烷基和烷氧基可任选的进一步被1-5个卤代基团至最高全卤代；和

1)HAR或HAR-C_1-6烷基，所述基团可任选的被1-5个卤素和1-3个选自以下基团取代：C_1-10烷基和OC_1-10烷基，所述烷基和烷氧基可任选的进一步被1-5个卤代基团至最高全卤代；

R^d是C_1-10烷基，Aryl或Ar-C_1-10烷基；

p为选自0，1和2的整数；

每个R¹独立的选自H或以下的基团：

e)卤素；CO₂R^a，CN，羟基，S(O)_pR^d，NO₂，C(O)NR^bR^c和NR^bR^c；

f)C_1-10烷基或OC_1-10烷基，所述基团可任选的被以下基团取代：

13)1-5个卤素直至全卤代烷基；

14)1个氧代基团；

15)1-2个羟基；

16)1-2个C_1-10烷氧基，所述基团可任选的被1-5个卤素，直到全卤代烷基和1-2个羟基或CO₂R^a基团取代；

17)1个CO₂R^a或S(O)_pR^d

18)1-2个芳基，Hetcy或HAR基团，所述基团可任选的被以下基团取代：

i)1-5个卤素基团，

j)1个羟基，CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c，

k)1-2个C_1-10烷基或烷氧基，所述基团可任选的被1-5个卤素，直到全卤代烷基和1-2个羟基或CO₂R^a基团取代；和

1)芳基，HAR，Hetcy，所述基团可任选的被以下基团取代：

vii.1-5个卤素基团；

viii.1个CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c基团；

ix.1-2个C_1-10烷基和烷氧基，每个任选被1-5个卤素，直到全卤代烷基，和1-2羟基或CO₂R^a基团；

所述芳基，HAR，Hetcy基可任选的进一步被选自以下的基团取代：

11)1-5个卤素基团；

12)1-2个羟基基团；

13)1个CN，S(O)_pR^d或NO₂基团；

14)1-2个CO₂R^a基团；

15)C(O)NR^bR^c基团；

其中R^a，R^b，R^c，R^d和p定义如上；

R²选自氢和C_1-6烷基

本发明涉及结构式IV的化合物或其药物可接受盐或溶剂合物的用途、方法以及药物组合物

其中，

个R¹独立的选自氢或以下基团：

e)卤素；CO₂R^a，CN，羟基，S(O)_pR^d，NO₂；

f)任选被以下基团取代的C_1-6烷基或OC_1-6烷基：

7)1-5个卤素直到全卤代烷基；

8)CO₂R^a；

9)任选被以下基团取代的苯基：

g.1-5个卤素，

h.1个CO₂R^a，CN，S(O)_pR^d，NO₂或C(O)NR^bR^c，

i.1-2个C_1-10烷基或C_1-10烷氧基；

R³是氢或C_1-3烷基；

R^a是H、C_1-6烷；

R⁵选自以下基团：C_1-10烷基，芳基或Ar-C_1-10烷基；

R⁶和R⁷各自独立的表示H或C_1-3烷基，并且p是0，1或2.

本发明涉及结构式I的化合物或其药物可接受盐或溶剂合物的用途、方法及药物组合物

光学异构-非对映体-几何异构体-互变异构体

许多具有结构式I的化合物包括一个或多个非对称中心。因此，他们可能作为消旋体和外消旋体混合物，单个对映异构体，非对映体混合物和各个非对映体存在。本发明包括该化合物的所有的这些异构体形式，纯形式以及混合物。

本文所述的一些化合物包含烯烃双键，除非另有所述，意味着包括E和Z几何异构体两者。

本文所述的一些化合物可以存在不同的氢连接点，称作互变异构体。这些例子可以是酮和其烯醇式形式，称作酮-烯醇互变异构体。各个互变异构体以及其混合物包括在结构式II中.

盐和溶剂合物

具有结构式I的化合物的盐和溶剂合物被包括在本发明中。术语“药物可接受盐”是指由包括无机或有机或有机酸的药物可接受显著非毒性碱或酸制成的盐，以及可被转化成药物可接受盐的盐。衍生自无机碱的盐包括铝、铵、钙、高铁、亚铁、锂、镁、锰盐、亚锰、钾、钠、锌和类似物。尤其优选的是铵、钙钾、钠盐。衍生自药物可接受有机非毒性碱的盐包括伯、仲、和叔胺，取代的胺(包括天然出现环取代的胺)，环状胺，和碱性离子交换树脂，如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N’-二苄基亚乙基二胺，二乙基胺、2-二乙基氨基醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺，亚乙基二胺、N-乙基吗啉，N-乙基哌啶、葡萄糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、卡巴胺、异丙基胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、多元胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙基胺、三甲基胺、三丙基胺、氨丁三醇和类似物。

组合治疗

如前所述，结构式II中的化合物可以用于治疗、预防、延迟与肾脏型谷氨酰胺酶活性增高有关的病症，其中优选作为抗癌药物使用。同时，结构式II中的化合物可和本文所述的其它疾病和症状的其它药物联合使用。在一个具体实施方案中，本发明的药物组合物还包含一种或多种另外的活性药物组分。本发明的化合物可与一种或多种领域的活性药物组分一起给药。该组合物可以是含有本发明化合物和一种或多种另外的活性药物组分的单一组合物的形式。或者，该组合物可为两种或多种单独的组合物组合形式，其中本发明的化合物包含在一种组合物中，一种或多种另外的活性药物组分包含在一种或多种单独的组合物中。在所述的药物组合物中所述另外的活性药物组分例如可以是另一种抗肿瘤药物。所述抗肿瘤药物可选自吉西他滨、Taxol，AZD-6244，RDEA119，ARRY-142886.

除非另有规定，本发明在此使用以下定义的术语详细描述。

“烷基”，以及具有前缀“烷基”的其它，如烷氧基，烷酰基和类似基团是至包含所指数目碳原子的碳链，可以是直链、支链或环状，或其组合。如果没有规定，直链或支链烷基基团预期具有1-10个碳原子。烷基基团的例子包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲和叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基和类似物。环烷基是烷基的子集；如果没有规定原子数，3-10个碳原子是所预期的，形成1-3个被稠合的碳环环。环烷基的例子包括环烷基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、十氢萘基和类似物。

“链烯基”是指包含至少一个碳-碳双键的碳链，和可以是直链或支链或其组合。链烯基的例子包括乙烯基、烯丙基、异烯丙基、戊烯基、己烯基、庚烯基、1-丙烯基、2-丁烯基，2-甲基-2-丁烯基、和类似物。

“炔基”是指包含至少一个碳-碳三键的碳链，和可以是直链或支链或其组合。炔基的例子包括乙炔基、炔丙基、3-甲基-1-戊炔基、2-庚炔基和类似组合。

“芳基”(Ar)是指包含6-12个碳原子的单-和双环芳族环。芳基的例子包括苯基、萘基、茚基和类似物。“芳基”还包括被稠合至芳基基团上的单环状环。例子包括四氢萘基、茚满基和类似物。

“杂芳基”(HAR)是指包含至少一个选自O，S和N的杂原子的单-或双环芳族环或环体系，其中每个环包含5-6原子。例子包括吡咯基、异恶唑基、异噻唑基、吡唑基、吡啶基、噁唑基、氧杂二唑基、噻二唑基、噻唑基、咪唑基、四唑基、呋喃基、三嗪基、噻吩基、嘧啶基、哒啨基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫代苯基、呋(2，3-b)吡啶基、喹啉基、吲哚基、异喹啉基和类似物。杂芳基还包括用于杂环(是非芳族或部分芳族的)上的芳族杂环基团，和芳族杂环基团用于环烷基环。杂芳基还包括带电形式的这些基团，如吡啶嗡。

“杂环基”(Hetcy)是指包含至少一个选自N，S和O的杂原子的单-和双环饱和环和环体系，每一个所述环具有3-10原子，其中连接点可以是碳或氮。“杂环基”的例子包括吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、咪唑烷基、2，3-二氢呋(2，3-b)吡啶基、苯并噁嗪基，四氢喹啉基、四氢异喹啉基、二氢吲哚基、和类似物。该术语还包括不是芳族的部分不饱和单环，如通过氮连接的2-或4-吡啶酮或N-取代的-(1H，3H)-嘧啶-2，4-二酮(N-取代的尿嘧啶)。杂环基另外包括带电形式的这些部分，如哌啶嗡。

“卤素”(卤代)包括氟、氯、溴和碘。

本发明的化合物可根据在以下一般合成方案中概述的方法而制成

在本发明一个实施方案中，化合物I可由中间体II(见下页)制成

其中R¹和A定义如上

化合物II在文献中已知并且可通过本领域技术人员所熟知的多种方法方便制备，例如公开在Katritsky等人，Advances in Heterocyclic Chemistry，Vol.6，pg347-429的内容，一条路线如方案1所示。可购自市场货通过使用含有例如硫酸的酸的甲醇或乙醇酯化由相应羧酸制备的酯1与甲基酮2阴离子缩合得到二酮3。反应使用例如氢化钠的碱在例如四氢呋喃的极性非质子溶剂中在0to25℃反应16到24小时，参见March，Advanced或ganicChemistry，3^rdEd.，pg439引用于此作为参考文献.化合物2可购自市场货可通过本领域技术人员所熟知的多种方法制备。然后在0to25℃，二酮3在例如甲苯的极性溶剂中与肼4缩合反应16到24小时，极性溶剂中可含有例如乙酸或盐酸的酸。通过使用在例如四氢呋喃、二氧六环、甲醇、乙醇或相似混合溶剂中的氢氧化钠或氢氧化锂的碱皂化酯II，可进行beta-丙氨酸酯8的此处加工。使用1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳化二亚胺(EDCI)或1-羟基苯基***(HOBt)和通常为二异丙基乙胺的碱在例如N，N-二甲基甲酰胺(DMF)或二氯甲烷的溶剂中室温下反应3到48小时得到化合物5。通过使用在例如四氢呋喃、二氧六环、甲醇、乙醇或相似混合溶剂中的氢氧化钠或氢氧化锂的碱皂化酯得到中间体I。

根据方案2，苄肼4通过在升温下在例如甲苯的非极性溶剂中，在乙酸的存在下相应的羰基类似物与肼基甲酸叔丁酯缩合16到24小时直奔。中间体6然后用例如氰基硼氢化钠的氢化还原剂和1当量对甲苯磺酸还原，其应当以滴加方式加入。反应在室温下，在例如四氢呋喃的极性非质子溶剂中进行16-48小时。或者如果乙酸用作溶剂，反应也可以在没有对甲苯磺酸的存在下进行。进行水相处理后，通过缓慢加入氢氧化钠水溶液或其他强碱，硼烷络合物可被分解得到氨基甲酸酯7。通过在室温下在二氯甲烷中用例如三氟乙酸的酸处理0.25-2小时，进行BOC保护基脱去。反应可加入或不加入三异丙基硅烷。肼4可以再去保护后直接以三氟乙酸盐的形式使用，或者可以制备游离碱并且通过加入盐酸水溶液并蒸发溶剂以盐酸盐的形式使用。

合成式I化合物的另一种方法包括吡唑III的烷基化

其中R¹和A定义如上.

化合物III在文献中已知并且可同本领域技术人员所熟知的多种方法制备。例如公开在Katritsky et al.，Advances in Heterocyclic Chemistry，Vol.6，pg347-429的内容。一条路线如方案3所示。可购自市场货通过使用含有例如硫酸的酸的甲醇或乙醇酯化由相应羧酸制备的酯1与甲基酮2阴离子缩合得到二酮3。反应使用例如氢化钠的碱在例如四氢呋喃的极性非质子溶剂中在0to25℃反应16到24小时，参见March，Advanced或ganicChemistry，3^rdEd.，pg439引用于此作为参考文献.化合物2可购自市场货可通过本领域技术人员所熟知的多种方法制备。然后在0to25℃，二酮3在例如甲苯的极性溶剂中与肼

4缩合反应16到24小时，极性溶剂中可含有例如乙酸或盐酸的酸。

如方案4所示，中间体III可经由9转化为式I。吡唑III与4-烷氧基羰基苄基溴的烷基化可在吡唑去质子化后使用例如氢化钠或碳酸铯的碱在通常为二甲基甲酰胺的极性溶剂中在0-25℃反应3-24小时。有时将形成异构体的混合物。然后向最终化合物的转化克如先前对酯9所示进行。有时，从方案4所述反应得到的产物将被进一步反应。这些操作包括但不限于取代、还原、氧化、烷基化、酰基化和水解反应。

本发明另一实施方案中，化合物可由中间体IV制备(见下文)

其中R¹定有如上并且R表示烷基.

化合物IV在文献中已知并可通过本领域技术人员所熟知的多种方法制备，这些方法例如公开在Katritsky，et al.，Advances in Heterocyclic Chemistry，Vol.6，pg347-429中。一种路线如方案5所示。可购自市场或通过使用含有硫酸的酸的甲醇或乙醇酯化由相应羧酸来制备的草酸的二酯10与甲基酮2阴离子缩合得到二酮酯11。在例如四氢呋喃的极性非质子溶剂中使用例如六甲基硅基氮烷锂在-78℃-0℃反应2-24小时，参见March，Advanced Organic Chemistry，3^rdEd.，pg439并引用于此作为参考。化合物2可购自市场货可通过本领域技术人员所熟知的多种方法制备。然后在0to25℃，二酮3在例 如甲苯的极性溶剂中与肼4缩合反应16到24小时，极性溶剂中可含有例如乙酸或盐酸的酸。

如方案6所示，中间体IV可以转换为式Ic。吡唑IV与4-甲氧甲酰基苄基溴用氢化钠或碳酸铯做碱，在二甲基甲酰胺中，在进行烷基化0-25℃反应3-24小时进行烷基化。通常，烷基化的主要产物得到化合物12，有时得到异构体的混合物。就如W.C.Still等额在J.Org.Chem.，43，2923，(1978)所描述的。

如果化合物12的保护基是叔丁基，那么吡唑羧酸13在室温下，用三氟乙酸的二氯甲烷溶液处理0.5-3得到。实现酸与芳香胺的偶联，可通过在二甲基甲酰胺或二氯甲烷中，用1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳化二亚胺或1-羟基-7-本***为偶联试剂，二异丙基乙胺做碱，反应3-48小时得到酰胺14。如果胺15是二胺，通过在诸如乙酸的极性质子溶剂中回流30分钟到6小时，中间体14可被环化形成苯并咪唑。通过在诸如四氢呋喃、甲醇、乙醇或相似混合溶剂中使用氢氧化钠或氢氧化锂进行甲酯14的皂化，并使用前述酰胺偶联的条件，实现酸与beta-丙氨酸8的偶联，得到化合物Ic。

制备17的路线为本领域技术人员所熟知并且可以简便合成。方案7显示出当杂芳基为3-取代的喹啉时的合成方法。在高温下，例如用甲苯作溶剂，用乙氧亚甲基丙二酸二甲酯和合适取代的苯胺反应得到4-羟基喹啉16(Reigel，B.；Lappin，B.H.；Adelson，B.H.；Jackson，R.I.；Albisetti，C.J.；Dodson，R.M.；Baker，R.H>，JACS vol68p12641946)。用诸如三氯氧磷等氯化剂在高温下处理16得到氯代-16，随后用诸如钯／碳催化剂在氢气氛围中还原得到化合物17。如果需要，皂化17得到酸。

如方案8所示，其它合成中间体III的路线包括用肼缩合炔基酮19。该路线公开在Cabarrocas等人发表的Thetrahedron Asymmetry，Vol.11，pg2483-2493，2000中。通常在例如DMF的极性溶剂中在0-25℃反应16-24小时。中间体19的制备包括在-78℃使用例如二异丙基胺基锂，在例如四氢呋喃的极性非质子溶剂中用适当的官能化的羧酸的酰胺偶合炔18.这一反应公开在Tetrahedron Lett.，Vol.22，pg3815，1981.炔18或者购自市场，或者由相应的卤化物和炔基碘化镁制备。参考Negishi等人的.，J.Org.Chem.，Vol62，pg，8957-8960，1997和Org.Lett.Vol.3，pg3111-3113，2001.

步骤A：2-{1-[4-(乙氧羰基)苯基]亚乙基}肼羧酸叔丁酯

肼基甲酸叔丁酯(13.90g，105mmol)和4-乙酰基苯甲酸乙酯(20.00g，0.104mol)在甲苯(120mL)的容颜在80℃搅拌过夜(15小时)。通过结晶固体分离2-{1-[4-(乙氧羰基)苯基]亚乙基}肼羧酸叔丁酯。HPLC／MS：m／z＝307.3(M+1)⁺，R₁＝3.47min.¹H NMR(500 MHz，CDCl₃)：δ8.05(2H，d，J＝8.5Hz)，7.88(2H，d，J＝8.5Hz)，7.79(1H，brs)，4.41(2H，q，J＝7.0Hz)，2.24(3H，s)，1.58(9H，s)，1.43(3H，t，J＝7.0Hz).

步骤B：2-{1-[4-(乙氧羰基)苯基]乙基}肼羧酸叔丁酯：

在氮气氛围下，NaBH₃CN(6.0g，0.095mol)和2-{1-[4-(乙氧羰基)苯基]亚乙基}肼羧酸叔丁酯(25.6g，0.084mol)溶解在四氢呋喃(200mL)中。将对甲苯磺酸一水合物(17.3g，0.091mol)的四氢呋喃(50mL)溶液缓慢滴加到上述体系中。滴加完毕后，将混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释并用饱和食盐水洗涤(150mL)。将有机相干燥、浓缩得到白色固体。该白色固体溶在二氯甲烷中并加入1N氢氧化钠强力搅拌1小时后，用盐水洗涤，干燥、浓缩至体积大约50毫升。将白色固体沉淀产物过滤收集，用正己烷洗涤得到标题化合物。HPLC／MS：m／z＝331.3(M+Na)⁺，R_t＝3.24min.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ8.03(2H，d，J＝8.0Hz)，7.44(2H，d，J＝8.0Hz)，5.99(1H，br s)，4.40(2H，q，J＝7.0Hz)，4.29(IH，m)，1.45(9H，s)，1.41(3H，U J＝7.0Hz)，1.35(3H，d，J＝6.5Hz).

步骤C：2-{1-[4-(乙氧羰基)苯基]乙基}肼盐酸盐

2-{1-[4-(乙氧羰基)苯基]乙基}肼羧酸叔丁酯(29g，94mmol)溶解在100毫升TFA-DCM-三异丙基硅烷(20：20：1)的混合溶液中，室温条件下处理1小时。混合物浓缩后，将残余物溶于水，用二氯甲烷洗涤。向水溶液中加入盐酸(5N，20毫升)并浓缩至约50毫升。加入乙腈(50毫升)并冻干得到标题化合物。NMR(500MHz，acetone-d₆)δ：1.34(3H，t，J＝7.1Hz)；1.67(3H，d，J＝6.8Hz)；4.33(2H，q，J＝7.1Hz)，4.97(1H，q，J＝6.8Hz)，7.76(2H，d，J＝8.5Hz)，7.97(2H，d，J＝8.5Hz).MSC₁₁H_i6N₂O₂CaId：208.12；Obsd(M+1)：209.19.

步骤A：2-[4-(甲氧碳基)苯甲基]肼羧酸叔丁酯.

使用上述中间体A步骤A和B的方法制备标题化合物。1H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ：1.38(9H，s)；3，84(3H，s，)；3.92(2H，d，J＝4.2Hz)；4.95(1H，d，J＝4.2Hz)；7.47(2H，d，J=8.4Hz)；7.90(2H，d，J＝8.1Hz)；8.29(1H，s).

步骤B.[4-(甲氧碳基)苯甲基]肼盐酸盐.

使用上述中间体A步骤C中的方法制备标题化合物。NMR(500MHz，CD₃OD)δ：3.91(3H，s)；4.19(2H，s)；7.54(2H，d，J＝8.3Hz)；8.05(2H，d，J＝8.3Hz).MSC₉H₁₂N₂O₂CaId：180.09；Obsd(M+1)：181.12.

中间体C

3-(3，5-二氯苯基)-1-[4-(甲氧基羰基)苯基]-1H-吡唑-5-羧酸

步骤A：3，5-二氯-N-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺.

在0℃，向3，5-二氯苯甲酰氯(5g，23.9mmol)的50毫升二氯甲烷溶液中加入N，O-二甲基羟基胺盐酸盐(2.56g，26.3mmol和吡啶(4.3mL，52.6mmo1).室温条件下，上述体系搅拌16小时。加入水淬灭反应，用二氯甲烷萃取。将合并的有机相干燥、浓缩，并将残余物用硅胶柱分离提纯得到标题化合物(SiO₂，20％乙酸乙酯／石油醚)。¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ：7.61(2H，d，J＝1.9Hz)；7.50(1H，d，J＝1.9Hz)；3.60(3H，s)；3.40(3H，s).

步骤B：1-(3，5-二氯苯基)乙酮.

向步骤A产物(5.42g，23.2mmol)的100mL四氢呋喃溶液中滴加甲基溴化镁(11.6mL，34.8mmol)。室温下搅拌25分钟后，加入1N盐酸并用乙酸乙酯萃取。合并的有机相干燥、浓缩得到标题化合物。¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ：7.84(2H，d，J＝1.9Hz)；7.58(1H，d，J＝1.8Hz)；2.63(3H，s).

步骤C：4-(3，5-二氯苯基)-2，4-二氧代丁酸叔丁酯.

在-78℃向步骤B产物(4.1g，21.7mmol)的100mL***溶液中加入二(三甲基甲硅烷)酰胺锂(23.9mL，23.9mmol)。搅拌50分钟后，在-78℃加入固体二叔丁基乙二酸酯(4.18g，20.66mmol)。室温条件下搅拌2小时后，加入另一份固体二叔丁基乙二酸酯(530mg，2.6mmol)，并继续搅拌16小时。加入150mL1N盐酸淬灭并搅拌1小时。混合物用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，干燥并浓缩得到标题化合物。¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ：7.84(2H，d，J＝1.9Hz)；7.59(H，d，J＝1.9Hz)；6.93(1H，s)；1.56(9H，s).

步骤D：3-(3，5-二氯苯基)-1H-吡唑-5-羧酸叔丁酯.

向步骤C产物(6.8g，21.7mmol)的125mL乙醇溶液中加入肼(0.75mL，23.9mmol)和10mL冰醋酸。反应混合物在室温下搅拌16小时，浓缩后并将残余物悬浮在乙酸乙酯中用饱和碳酸氢钠水溶液和食盐水洗涤。有机相干燥浓缩得到标题化合物。

步骤E：3-(3，5-二氯苯基)-1-[4-(甲氧羰基)苯甲基]-lH-吡唑-5-羧酸叔丁酯.

向步骤D产物(6.8g，21.7mmol)的50mLN，N-二甲基甲酰胺的溶液中加入碳酸铯(10.6g，32.6mmol)并将所得混合物在室温下搅拌15分钟。加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(5.46g，23.9mmol)并连续搅拌3小时。反应物用乙酸乙酯稀释并用水和饱和食盐水洗涤。有机相干燥并浓缩后用硅胶柱(SiO2，5％乙酸乙酯／石油醚)分离提纯得到标题化合物。¹HNMR(500MHz，CDCl₃)δ：8.03(2H，d，J＝8.4Hz)；7.75(2H，d，J＝1.8Hz)；7.35(3H，m)；7.12(1H，s)；5.88(2H，s)；3.94(3H，s)；1.57(9H，s).

步骤F：3-(3，5-二氯苯基)-1-[4-(甲氧羰基)苯甲基]-1H-吡唑-5-羧酸.

向步骤E产物(5.54g，12mmol)的30mL二氯甲烷溶液中加入13mL三氟乙酸并在室温下搅拌16小时后浓缩。将残余物溶解在二氯甲烷中在浓缩除去过量三氟乙酸得到白色固体的标题化合物。¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ：8.00(2H，d，J＝8.2Hz)；7.83(2H，d，J＝1.8Hz)；7.41(1H，d，J＝1.9Hz)；7.36(2H，d，J＝8.3Hz)；7.32(1H，s)；5.94(2H，s)；4.87(3H，s).

实施例1

3-(6-((3-(3’5-二氯苯基)-5-(6-甲氧基-2-萘基)-1H-吡唑-1-基)甲基)烟酰胺基)丙氨酸

步骤A：1-(3，5-二氯苯基)-3-(6-甲氧基-2-萘基)丙烷-1，3-二酮.

向含有氢化钠(38.9g，974mmol)的四氢呋喃(1.5L)中加入3，5-二氯苯甲酸甲酯(160g，730mmol)。该反应混合物加热到70C并加入1-(6-甲氧基-2-萘基)乙酮(97g，487mmol)。将反应混合物加热回流过夜。冷却到0C加入水(1L)并过滤收集产生的固体得到标题化合物(160g，88％)。¹H NMR(DMSO)：δ7.77-7.89(4H，m)，7.52(1H，s)，7.30-7.36(3H，m)，6.24(1H，s).

步骤B：3-(3，5-二氯苯基)-5-(6-甲氧基-2-萘基)-1H-吡唑.

向步骤A产物(10g，26.8mmol)的乙醇(200mL)溶液中加入水合肼(1.5mL)并加热回流过夜。冷却到室温后，过滤收集产生固体得到标题化合物(3.2g，35％)。¹H NMR(400MHz，dmso)δ，8.25(1H，s)，7.96-7.87(4H，m)，7.83(1H，d，J＝9.0Hz)，7.55(1H，d，J＝1.8Hz)，7.46(1H，s)，7.34(1H，d，J＝2.5Hz)，7.20(1H，dd，J＝8.9，2.5Hz)，3.88(3H，s).

步骤C：6-(溴甲基)烟酸甲酯.

向含有6-甲基烟酸甲酯(1.51g，10mmol)的四氯化碳(20mL)的溶液中加入N-溴代琥珀酰亚胺(1.78g，10mmol)和AIBN(164mg，0.1mmol)。加热回来2小时后，冷却到室温过滤除去固体，滤液浓缩后用硅胶柱分离提纯(15％乙酸乙酯／石油醚)得到标题化合物。¹H NMR(CDCl₃，500MHz)：9.2(d，J＝2.0Hz，IH)，8.34(dd，J＝2.1，8.0Hz，IH)，7.58(d，J＝8.2Hz，IH)，4.6(s，2H)，4.0(s，3H).LC-MS＝1.71min；(M+H)＝230.0.

步骤D：6-((3-(3，5-二氯苯基)-5-(6-甲氧基萘-2-基)-1H-吡唑-1-甲基)烟酸甲酯.

向步骤B产物(522mg，1.66mmol)的DMF(10mL)溶液中加入步骤C产物(460mg，2.0mmol)，随后加入碳酸铯(815mg，2.5mmol)。室温下搅拌3小时，加入水淬灭反应并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，干燥、浓缩后，用硅胶柱分离提纯(30％乙酸乙酯／石油醚)得到标题化合物。.¹H NMR(CDCl₃)：δ9.17(1H，d，J＝1.6Hz)，8.25(1H，dd，J＝8.0Hz，2.0Hz)，7.75-7.79(4H，m)，7.68(1H，d，J＝9.2Hz)，7.43(1H，dd，J＝8.8Hz，2.0Hz)，7.32(1H，t，J＝2.0Hz)，7.19(1H，dd，J＝9.2Hz，2.4Hz)，7.14(1H，d，J=2.4Hz)，7.10(1H，d，J＝8.0Hz)，6.77(1H，s)，5.63(2H，s)，3.95(3H，s)，3.94(3H，s).

步骤E：6-((3-(3，5-二氯苯基)-5-(6-甲氧基萘-2-基)-1H-吡唑-1-甲基)烟酸.

向含有步骤D产物(0.14g，0.24mmol)的of四氢呋喃／甲醇(1：1，10ml)加入5N氢氧化钠水溶液(1mL)。室温下搅拌2小时，浓缩。残余物用1N盐酸水溶液(10ml)酸化并用乙酸乙酯萃取、干燥和浓缩后得到标题化合物。

步骤F：3-(6-((3-(3，5-二氯苯基)-5-(6-甲氧基萘-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)烟酸酰胺)丙氨酸乙酯

向含有步骤E产物(65mg，0.122mmol)的DM(2mL)溶液中加入HOAt(25mg，0.184mmol)，β-丙氨酸乙酯盐酸盐(34mg，0.184mmol)，DIEA(64μL，0.37mmo1)和EDCI(36mg，0.l84mmol)。混合物室温下搅拌过夜，加入水淬灭反应，用乙酸乙酯催。有机相用饱和食盐水洗涤，干燥浓缩后所得残余物用硅胶柱分离提纯(30％乙酸乙酯／石油醚)得到标题化合物。¹H NMR(CDCl₃)：δ8.93(1H，d，1.6Hz)，8.03(1H，dd，J＝8.4Hz，2.4Hz)，7.75-7.81(4H，m)，7.69(1H，d，J＝8.4Hz)，7.44(1H，dd，J＝8.4Hz，1.6Hz)，7.30(1H，t，J＝2.0Hz)，7.19(1H，dd，J＝8.8Hz，2.4Hz)，7.14(1H，d，J＝1.6Hz)，7.10(1H，d，J＝8.4Hz)，6.90(1H，t，J＝6.0Hz)，6.76(1H，s)，5.60(2H，s)，4.17(2H，q，J＝7.2Hz)，3.94(3H，s)，3.73(2H，q，J＝6.0Hz)，2.84(2H，t，J＝6.0Hz)，1.27(3H，t，J＝7.2Hz).

步骤G：3-(6-((3-(3，5-二氯苯基)-5-(6-甲氧基萘-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)烟酰胺基)丙氨酸.

将步骤F产物(0.14g，0.24mmol)用步骤E的方法处理得到标题化合物。¹H NMR(CDCl₃)：δ9.11(1H，d，J＝1.2Hz)，8.32(1H，dd，J＝8.0Hz，1.6Hz)，7.74-7.76 (3H，m)，7.72(1H，s)，7.66-7.69(2H，m)，7.35(1H，dd，J＝8.4Hz，1.6Hz)，7.31(1H，t，J＝1.2Hz)，7.13-7.19(3H，m)，6.74(1H，s)，5.60(2H，s)，3.92(3H，s)，3.67-3.73(2H，m)，2.57(2H，t，J=5.2Hz).

实施例2

4-(4-((3-(3，5-二氯苯基)-5-(6-甲氧基萘-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)苯氧基)丁酸

步骤A：4-(4-甲酰基苯氧基)丁酸乙酯.

向冷却在0℃的4-羟基苯甲(5.0g，41mmol)的干燥DMF(150mL)溶液中加入氢化钠(1.96g，49.1mmol)。搅拌15分钟后，加入4-溴丁酸乙酯(7.02g，49.1mmol)。室温下，反应物搅拌过夜。加入水淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗涤。有机相干燥并浓缩后，将残余物用硅胶柱分离提纯(10％乙酸乙酯／石油醚)得到标题化合物。¹H NMR(CDCl₃，500MHz)：9.89(1H，s)，7.84(2H，d，J＝8.7Hz)，7.01(2H，d，J＝8.7Hz)，4.18(2H，q，J＝5.9Hz)，4.1(2H，t，J＝5.9Hz)，2.55(2H，t，J＝7.3Hz)，2.17(2H，m)，1.28(2H，t，J＝7.4Hz).LC-MS＝I.89min，(M+H)＝237.1.

步骤B：4-[4-(羟甲基)苯氧基]丁酸乙酯.

向来自步骤A的产物(8.3g，35.17mmol)的甲醇(200mL)溶液中加入硼氢化钠(1.96g，52.7mmol)。室温搅拌2小时后，浓缩。将残余物悬浮在乙酸乙酯中，并用饱和碳酸氢钠水溶液和食盐水洗涤。有机相干燥浓缩后得到标题化合物。¹H NMR(CDCl₃，500MHz)：7.27(2H，d，J=8.7Hz)，6.87(2H，d，J＝8.4Hz)，4.51(2H，s)，4.16(2H，q，J＝7.1Hz)，4.0(2H，t，J＝6.0Hz)，2.52(2H，t，J＝7.3Hz)，2.1(2H，m)，1.26(3H，t，J＝I.1Hz).LC-MS＝2.6min；(M+23)＝261.1.

步骤C：4-[4-(碘甲基)苯氧基]丁酸甲酯.

向来自步骤B的产物(1g，4.24mmol)的乙腈溶液中加入三苯基膦(1.45g，5.5mmol)和咪唑(0.4g，5.93mmol)以及碘(1.51g，5.94mmol)。室温搅拌20分钟后，用饱和Na₂S₂O₃水溶液淬灭。用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，干燥浓缩后，残余物用硅胶柱分离提纯(15％乙酸乙酯／石油醚)得到标题化合物。¹H NMR(CDCl₃，500MHz)：7.32(2H，d，J=8.7Hz)，6.82(2H，d，J＝8.7Hz)，4.48(2H，s)，4.18(2H，q，J＝6.1Hz)，4.01(2H，t，J＝6.1Hz)，2.53(2H，t，J＝7.4Hz)，2.14(2H，m)，1.29(3H，t，J＝7.1Hz).LC-MS＝2.36min；(M+23)＝371.0.

步骤D：4-(4-((3-(3，5-二氯苯基)-5-(6-甲氧基萘-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)苯氧基)丁酸乙酯

向来自实施例1步骤B的产物(85mg，0.21mmol)的DMF(5mL)溶液中加入来自步骤C的中间体(111mg，0.31mmol)，随后加入碳酸铯(103mg，0.31mmol)。室温搅拌3小时，加入水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，干燥浓缩后用硅胶柱分离提纯(25％乙酸乙酯／石油醚)得到标题化合物。¹H NMR(CDCl₃)：δ7.76-7.79(3H，m)，7.72(1H，s)，7.69(1H，d，J＝8.8Hz)，7.40(1H，dd，J＝8.4Hz，1.6Hz)，7.29(1H，t，J＝2.0Hz)，7.20(1H，dd，J＝8.8Hz，2.8Hz)，7.17(1H，d，J＝2.4Hz)，7.06(2H，d，J＝8.8Hz)，6.81(2H，d，J＝8.8Hz)，6.67(1H，s)，5.34(2H，s)，4.14(2H，q，J＝6.8Hz)，3.98(2H，t，J＝6.0Hz)，3.95(3H，s)，2.50(2H，t，J＝7.2Hz)，2.06-2.13(2H，m)，1.25(3H，t，J＝7.2Hz).

步骤E：4-(4-((3-(3，5-二氯苯基)-5-(6-甲氧基萘-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)苯氧基)丁酸.

使用实施例1中步骤E的操作方法对来自步骤D的中间体(0.14g)进行处理得到标题化合物。¹H NMR(CDCl₃)：δ7.76-7.79(3H，m)，7.73(1H，s)，7.69(1H，d，J＝8.8Hz)，7.40(1H，dd，J＝8.4Hz，1.6Hz)，7.29(1H，t，J＝1.6Hz)，7.20(1H，dd，J＝8.8Hz，2.4Hz)，7.17(1H，d，J＝2.0Hz)，7.06(2H，d，J＝8.4Hz)，6.81(2H，d，J＝8.4Hz)，6.67(1H，s)，5.35(2H，s)，3.98(2H，t，J＝6.0Hz)，3.95(3H，s)，2.56(2H，t，J＝7.2Hz)，2.05-2.12(2H，m).

实施例3

3-(4-((3-(3，5-二氯苯基)-5-(6-甲氧基-2-萘基)-1H-吡唑-1-基)甲基)苯甲酰基)-beta-丙氨酸

步骤A：4((3-(3，5-二氯苯基)-5-(6-甲氧基萘基-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)苯甲酸乙酯.

将混有1-(3，5-二氯苯基)-3-(6-甲氧基萘-2-基)丙烷-1，3-二酮(100mg，0.27mmol)和[4-(甲氧碳基)苯甲基]肼盐酸盐(40mg，0.27mmol)的甲苯(20mL)溶液加热回流过夜。浓缩反应体系后，将残余物用硅胶柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)得到标题化合物(mg，43％)。¹H NMR(400MHz，cdcl₃)δ7.96(2H，d，J＝8.1Hz)，7.75(3H，t，J＝5.5Hz)，7.69-7.60(2H，m)，7.37-7.22(6H，m)，7.21-7.11(4H，m)，6.70(1H，s)，5.45(2H，s)，3.91(6H，d，J＝16.4Hz).

步骤B：4-((3-(3，5-二氯苯基)-5-(6-甲氧基萘基-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)苯甲酸.

使用实施例1中步骤E的操作方法对来自步骤A的中间体(0.14g)进行操作得到标题化合物。

步骤C：3-(4-((3-(3，5-二氯苯基)-5-(6-甲氧基萘基-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)苯甲酰基)-beta-丙氨酸乙酯

使用实施例1中步骤F的操作方法对步骤B的中间体(65mg，0.122mmol)进行处理得到标题化合物。

步骤D：3-(4-((3-(3，5-二氯苯基)-5-(6-甲氧基-2-萘基)-1H-吡唑-1-基)甲基)苯甲酰基)-beta-丙氨酸

使用实施例1中步骤E的操作方法对来自步骤F的中间体(0.14g，0.24mmol)进行处理得到标题化合物。¹H NMR(DMSO-d6)δ：8.44(1H，t，NH，J＝5.6Hz)，7.93(2H，d，J＝1.9Hz)，7.91(1H，d，J＝8.4Hz)，7.86(1H，d，J=1.7Hz)，7.83(1H，d，J＝9.0Hz)，7.72(2H，d，J＝8.4Hz)，7.56(1H，t，J＝1.9Hz)，7.43(1H，dd，J＝1.7，8.4Hz)，7.39(1H，d，J＝2.6Hz)，7.23(1H，dd，J＝2.6，9.0Hz)，7.20(2H， d，J＝8.4Hz)，7.16(1H，s)，5.76(2H，q，J＝7.0Hz)，3.41(2H，q，J＝7Hz)，2.47(2H，t，J＝7Hz)，1.90(3H，d，J＝7.0Hz).

实施例4

4-((3-(3，5-二氯苯基)-5-(6-甲氧基萘基-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-N-(1H-四唑-5-基)苯甲酰胺

使用实施例1中步骤F的操作方法对实施例3中步骤B的中间体(65mg，0.122mmol)进行处理得到标题化合物。¹H NMR(400MHz，dmso)δ8.07-7.87(5H，m)，7.82(1H，d，J＝9.2Hz)，7.54(2H，dd，J＝8.2，6.3Hz)，7.37(1H，d，J＝2.4Hz)，7.28-7.11(3H，m)，5.60(2H，s)，3.88(3H，s).

实施例5

3-(4-((3-(3，5-二氯苯基)-5-(2，3-二氢-1H-茚-2-基羰基)-1H-吡唑-1-基)甲基)苯甲酰基)-beta-丙氨酸

步骤A：3-(3，5-二氯苯基)-N-(2，3-二氢-1H-茚-2-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺.

使用实施例1步骤F的操作方法对(0.39g，1.0mmo1)和2-氨基茚(34mg，0.184mmol进行处理得到标题化合物。

步骤B：4-((3-(3，5-二氯苯基)-5-(2，3-二氢-1H-茚-2-基羰基)-1H-吡唑-1-基)甲基)苯甲酸甲酯

使用实施例1步骤G的操作方法对来自步骤A的中间体(85mg，0.21mmol)和4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(111mg，0.31mmol)进行处理得到标题化合物。¹H NMR(CDCl₃)：δ7.98(2H，d，J＝8.0Hz)，7.66(2H，d，J＝1.6Hz)，7.35(2H，d，J＝8.0Hz)，7.29(1H，t，J＝1.6Hz)，7.19-7.25(4H，m)，6.74(1H，s)，6.19(1H，d，J＝7.6Hz)，5.85(2H，s)，4.81-4.86(1H，m)，3.90(3H，s)，3.97(2H，dd，J＝16.4Hz，7.2Hz)，2.84(2H，dd，J＝16.0Hz，3.6Hz)

步骤C：3-(4-((3-(3，5-二氯苯基)-5-(2，3-二氢-1H-茚-2-基羰基)-1H-吡唑-1-基)甲基)苯甲酸

使用实施例1中步骤E的操作方法对来自步骤B(0.14g)中间体进行处理得到标题化合物。¹H NMR(DMSO)：δ8.16(1H，d，J＝7.2Hz)，7.81-7.83(2H，m)，7.75(2H，d，J＝1.6Hz)，7.55(1H，t，J＝2.0Hz)，7.49(1H，s)，7.12-7.23(6H，m)，5.77(2H，s)，4.80-4.85(1H，m)，3.23(2H，dd，J＝16.4Hz，7.6Hz)，2.89(2H，dd，J＝16.0Hz，6.0Hz).

步骤D：3-(4-((3-(3，5-二氯苯基)-5-(2，3-二氢-1H-茚-2-基羰基)-1H-吡唑-1-基)甲基)苯甲酰基)-beta-丙氨酸乙酯.

使用实施例1中步骤F的操作方法对步骤C的中间体(65mg，0.122mmol)和β-丙氨酸乙酯盐酸盐(34mg，0.184mmol)进行处理得到标题化合物。¹H NMR(CDCl₃)：δ7.67-7.71(3H，m)，7.64(2H，d，J＝2.0Hz)，7.35(2H，d，J=8.0Hz)，7.28(1H，t，J＝2.0Hz)，7.19-7.25(3H，m)，6.83(1H，t，J=6.0Hz)，6.76(1H，s)，6.35(1H，d，J＝7.6Hz)，5.83(2H，s)，4.81-4.87(1H，m)，4.16(2H，q，J＝7.2Hz)，3.70(2H，q，J＝5.6Hz)，3.37(2H，dd，J＝16.0Hz，6.8Hz)，2.85(2H，dd，J＝16.4Hz，4.0Hz)，2.62(2H，t，J＝5.6Hz)，1.26(3H，t，J=7.2Hz).

步骤E：3-(4-((3-(3，5-二氯苯基)-5-(2，3-二氢-1H-茚-2-基羰基)-1H-吡唑-1-基)甲基)苯甲酰基)-beta-丙氨酸

使用实施例1中步骤E的操作方法对来自步骤F的中间体(0.14g，0.24mmol)进行处理得到标题化合物。¹H NMR(DMSO)：δ8.78(1H，d，J＝7.2Hz)，8.48(1H，t，J＝ 5.6Hz)，7.74-7.79(4H，m)，7.56(1H，t，J＝2.0Hz)，7.48(1H，s)，7.27(2H，d，J＝8.0Hz)，7.21-7.23(2H，m)，7.13-7.15(2H，m)，5.80(2H，s)，4.59-4.65(1H，m)，3.42(2H，q，J＝6.0Hz)，3.23(2H，dd，J＝16.0Hz，7.6Hz)，2.88(2H，dd，J＝16.0Hz，6.0Hz)，2.47(2H，t，J＝6.8Hz).

实施例6

(R)-3-(4-((3-(3，5-二氯苯基)-5-(1-苯乙基氨基羰基)-1H-吡唑-1-基)甲基)苯甲酰基)-beta-丙氨酸

使用实施例5中步骤A到E的操作合成标题化合物。¹H NMR(DMSO)：δ8.91(1H，d，J＝8.4Hz)，8.47(1H，t，J=4.2Hz)，7.80(2H，d，J＝2.0Hz)，7.73(2H，d，J＝8.0Hz)，7.58-7.60(2H，m)，7.30-7.35(4H，m)，7.21-7.25(3H，m)，5.75(2H，s)，5.04-5.15(1H，m)，3.43(2H，q，J=6.0Hz)，2.48(2H，t，J＝7.2Hz)，1.45(3H，d，J＝6.8Hz).

实施例7

3-(4-((3-(3，5-二氯苯基)-5-(苯基氨基羰基)-1H-吡唑-1-基)甲基)苯甲酰基)-beta-丙氨酸

使用实施例5中步骤A到E的操作合成标题化合物。¹H NMR(DMSO)：δ12.29-12.46(1H，brs)，10.37(1H，s)，8.48(1H，t，J＝4.2Hz)，7.84(2H，d，J＝1.6Hz)，7.76(2H，d，J＝8.4Hz)，7.69-7.71(3H，m)，7.62(1H，t，J＝2.0Hz)，7.37(2H，t，J＝8.4Hz)，7.30(2H，d，J＝8.4Hz)，7.14(1H，t，J＝7.6Hz)，5.83(2H，s)，3.42(2H，q，J＝5.6Hz)，2.46(2H，t，J＝6.8Hz).

实施例8

3-(4-((5-(环己基氨基羰基)-3-(3，5-二氯苯基)-1H-吡唑-1-基)甲基)苯甲酰基)-beta-丙氨酸

使用实施例5中步骤A到E的操作合成标题化合物。¹H NMR(DMSO)：δ12.13-12.31(1H，brs)，8.47(1H，t，J＝4.2Hz)，8.32(1H，d，J＝8.0Hz)，7.75-7.78(4H，m)，7.58(1H，t，J＝2.0Hz)，7.49(1H，s)，7.27(2H，d，J＝8.4Hz)，5.79(2H，s)，3.67-3.73(1H，m)，3.43(2H，q，J＝5.6Hz)，2.48(2H，t，J＝7.2Hz)，1.71-1.81(4H，m)，1.56-1.62(1H，m)，1.21-1.31(4H，m)，1.09-1.14(1H，m).

实施例9

3-(4-(1-(5-(6-甲氧基萘基-2-基)-3-苯基-1H-吡唑-1-基)乙基)苯甲酰基)-beta-丙氨酸

步骤A：1-(6-甲氧基萘基-2-基)-3-苯丙烷-1，3-二酮

使用实施例1中步骤A的实验方法制备得到标题化合物。¹H NMR(CDCl₃)：δ8.50(1H，s)，8.02-8.06(3H，m)，7.90(1H，d，J＝8.4Hz)，7.84(1H，d，J＝8.4Hz)， 7.51-7.59(3H，m)，7.24(1H，dd，J＝8.8Hz，2.4Hz)，7.21(1H，d，J＝2.4Hz)，7.01(1H，s)，3.97(3H，s).

步骤B：4-(1-(5-(6-甲氧基萘基-2-基)-3-苯基-1H-吡唑-1-基)乙基)苯甲酸乙酯.使用实施例3中步骤A的实验方法对来自步骤A的中间体和2-{1-[4-(乙氧羰基)苯基]乙基}肼盐酸盐进行反应得到标题化合物。¹H NMR(CDCl₃)：δ7.97(2H，d，J＝8.0Hz)，7.93(2H，d，J＝8.4Hz)，7.75(1H，d，J＝8.4Hz)，7.67(1H，d，J＝8.8Hz)，7.64(1H，d，J＝2.0Hz)，7.43(2H，t，J＝7.6Hz)，7.30-7.34(4H，m)，7.19(1H，dd，J＝8.8Hz，2.8Hz)，7.16(1H，d，J＝2.4Hz)，6.66(1H，s)，5.59(1H，q，J＝7.2Hz)，4.36(2H，q，J＝7.2Hz)，3.95(3H，s)，1.97(3H，d，J＝7.2Hz)，1.38(3H，t，J＝7.2Hz).

步骤C：3-(4-(1-(5-(6-甲氧基萘基-2-基)-3-苯基-1H-吡唑-1-基)乙基)苯甲酰基)-beta-丙氨酸

使用实例1中步骤E到G的实验方法合成得到标题化合物。¹H NMR(DMSO)：δ12.19(1H，s)，8.45(1H，t，J＝4.2Hz)，7.88-7.92(4H，m)，7.84(1H，d，J＝8.8Hz)，7.73(2H，d，J＝8.4Hz)，7.44-7.48(3H，m)，7.40(1H，d，J＝2.4Hz)，7.34(1H，t，J＝7.2Hz)，7.21-7.25(3H，m)，6.97(1H，s)，5.74(1H，q，J＝6.0Hz)，3.91(3H，s)，3.42(2H，q，J＝6.4Hz)，2.48(2H，t，J＝6.8Hz)，1.92(3H，d，J＝6.8Hz).

实施例10

3-(4-(1-(3-(3，5-二氯苯基)-5-苯基-1H-吡唑-1-基)乙基)苯甲酰基)-beta-丙氨酸

步骤A：1-(3，5-二氯苯基)-3-苯丙烷-1，3-二酮.

使用实施例1中步骤A的实验方法得到标题化合物。¹H NMR(DMSO)：δ7.77-7.89(4H，m)，7.52(1H，s)，7.30-7.36(3H，m)，6.24(1H，s).

步骤B：3-(4-(1-(3-(3，5-二氯苯基)-5-苯基-1H-吡唑-1-基)乙基)苯甲酰基)-beta-丙氨酸

使用实施例9中步骤B和实施例1中步骤E到G的实验方法得到标题化合物。¹HNMR(DMSO)：δ12.14-12.22(1H，brs)，8.45(1H，t，J＝6.0Hz)，7.90(2H，d，J＝2.0Hz)，7.72(2H，d，J=8.4Hz)，7.55(1H，t，J＝2.0Hz)，7.46-7.49(3H，m)，7.35-7.37(2H，m)，7.17(2H，d，J＝8.4Hz)，7.08(1H，s)，5.66(1H，q，J＝7.2Hz)，3.41(2H，q，J＝6.0Hz)，2.46(2H，t，J＝6.0Hz)，1.87(3H，d，J＝7.2Hz).

实施例11

N-(4-{1-[3-(3，5-二氯苯基)-5-(7-甲氧基喹啉-3-基)-1H-吡唑-1-基]乙基}苯甲酰基)-beta-丙氨酸

步骤A：4-羟基-7-甲氧基喹啉-3-羧酸乙酯

向间甲基苯胺(1.1Ig，8.94mmo1)的甲苯(5mL)溶液中加入二乙基乙氧基亚甲基丙二酸酯(1.93g，8.94mmol)。反应回流45分钟后浓缩。将残余物溶于苯醚(5mL)中并加入到回流的苯醚中(10mL)。回流1小时后冷却到室温，过滤收集产出固体得到标题化合物。LC-MS：2.08min；(M+H)=248.2.

步骤B：4-氯-7-甲氧基喹啉-3-羧酸乙酯

将来自步骤A的中间体(890mg，mmol)悬浮在三氯氧磷中POCl₃(5mL)并加热回流1小时。冷却后倒入含有冰和5N氢氧化钠(30mL)的溶液中。用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤。干燥浓缩后，所得残余物用硅胶柱分离提纯得到标题化合物。¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：9.19(1H，s)，8.33(1H，s，7＝9.2Hz)， 7.46(1H，d，7＝2.5Hz)，7.36(1H，dd，7＝2.5，9.1Hz)，4.53(2H，q，7＝7.1Hz)，4.01(3H，s)，1.5(3H，t，7＝7.4Hz).LC-MS：3.22min；(M+H)＝266.1.

步骤C：7-甲氧基喹啉-3-羧酸乙酯

向来自步骤B的中间体(400mg在1：1的乙醇-乙酸乙酯溶液中加入Pd／C(20mg)并在氢气氛围下搅拌3小时。将过量Pd／C过滤除去，所得滤液浓缩得到标题化合物。¹HNMR(500MHz，CDCl₃)：9.37(1H，s)，9.26(1H，s)，8.1(1H，s)，8.09(1H，d，7＝10.3Hz)，7.51(1H，d，7＝9.3Hz)，4.49(2H，q，7＝7.1Hz)，4.06(3H，s)，1.42(3H，t，7＝7.1Hz).LC-MS：2.31min；(M+H)＝232.1.

步骤D：7-甲氧基喹啉-3-羧酸

使用实施例1中步骤E的实验方法对步骤C的中间体(399mg，mmol)进行处理得到标题化合物。

步骤E：N，7-二甲氧基-N-甲基-3-羧酰胺

向得自步骤D的中间体(1.5mmol)和N，O-二甲基羟基胺盐酸盐(219mg，2.25mmol)的二氯甲烷溶液(20mL)中加入三乙胺(1.04mL，7.5mmol)和溴化(三吡咯烷-1-基)膦基六氟磷酸酯(840mg，1.8mmol)。反应混合物在室温下搅拌3小时后，加入1N盐酸(10mL)淬灭。用二氯甲烷萃取，有机相用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，干燥浓缩后，所得残余物用硅胶柱分离提纯(70％乙酸乙酯／石油醚)得到标题化合物。¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：9.15(1H，d，7＝1.8Hz)，8.5(1H，d，7＝1.8Hz)，8.0(1H，s)，7.7(1H，d，7＝9.0Hz)，7.43(1H，d，7＝2.2Hz)，7.24(1H，dd，7＝2.5，9.0Hz)，3.96(3H，s)，3.57(3H，s)，3.43(3H，s).LC-MS：1.6min；(M+H)＝247.1.

步骤F：3-(3.5-二氯苯基)-1-(7-甲氧基喹啉-3-基)丙-2-炔-1-酮

向1，3-二氯-5-乙炔基苯(185mg，1.08mmo1)在无水四氢呋喃溶液中(在氮气氛围下冷却到-78℃)，加入nButLi(750μL，1.18mmol)。搅拌5分钟后加入得自步骤E的中间体(320mg，1.3mmol)的四氢呋喃溶液。反应30分钟后，室温下用饱和氯化铵水溶液淬灭。用乙酸乙酯萃取，并用饱和食盐水洗涤。干燥浓缩后所得残余物使用硅胶柱分离提纯(20％乙酸乙酯／石油醚)得到标题化合物。¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：9.54(1H，d，7＝2.3Hz)，8.85(1H，d，7＝2.1Hz)，7.92(1H，d，7＝9.2Hz)，7.62(2H， d，7＝2.0Hz)，7.5(2H，m)，7.34(1H，dd，7＝2.5，8.9Hz)，4.04(3H，s).LC-MS：3.92min；(M+H)＝356.0.

步骤G：4-{1-[3-(3，5-二氯苯基)-5-(7-甲氧基喹啉-3-基)-1H-吡唑-1-基]乙基}苯甲乙酯

向得自步骤F的中间体(118mg，0.33mmo1)在四氢呋喃溶液中加入4-(肼基乙基)苯甲酸乙酯盐酸盐(89mg，0.36mmo1)和三乙胺(55μL，0.39mmol)。室温下搅拌过夜。浓缩后残余物用水和乙酸乙酯稀释。有机相用饱和食盐水洗涤，干燥浓缩后的残余物用硅胶柱分离提纯.(25％乙酸乙酯／石油醚)得到标题化合物。¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：8.76(1H，d，7＝2.0Hz)，8.04(2H，d，7＝8.2Hz)，7.92(1H，1.8Hz)，7.85(2H，d，7＝1.8Hz)，7.68(1H，d，7＝8.9Hz)，7.5(1H，d，7＝2.1Hz)，7.36(1H，t，7＝1.8Hz)，7.31(2H，d，7＝8.0Hz)，6.76(1H，s)，4.42(1H，q，7＝7.0Hz)，4.03(3H，s)，2.04(3H，s)，2.01(2H，t，7＝7.1Hz)，1.43(3H，t，7＝7.1Hz).LC-MS：4.28min；(M+H)＝546.0.

步骤H：4-{1-[3-(3，5-二氯苯基)-5-(7-甲氧基喹啉-3-基)-1H-吡唑-1-基]乙基}苯甲酸

使用实施例1中步骤E的实验方法对得自步骤G的中间体(67mg，0.12mmol)进行处理得到标题化合物。

步骤I：N-(4-{1-[3-(3，5-二氯苯基)-5-(7-甲氧基喹啉-3-基)-1H-吡唑-1-基]乙基}苯甲酰基)-beta-丙氨酸

使用实施例1中步骤G的实验方法对得自步骤H的中间体(59mg，0.11mmol)和β-丙氨酸乙酯盐酸盐(33mg，0.18mmol)进行反应得到标题化合物。¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：8.75(1H，bs)，7.9(1H，s)，7.83(2H，d，7＝1.8Hz)，7.75(2H，d，7＝8.2Hz)，7.67(1H，d，7＝9.0Hz)，7.48(1H，s)，7.34(1H，t，7＝1.9Hz)，7.3(2H，d，7＝8.3Hz)，6.92(1H，t，7＝5.7Hz)，6.73(1H，s)，5.56(2H，q，7＝6.8Hz)，4.01(3H，s)，3.71(2H，q，7＝6.0Hz)，2.58(2H，t，7＝5.7Hz)，2.0(3H，d，7＝6.9Hz)，1.48(9H，s).LC-MS：4.07min；(M+H)＝645.0.

步骤J：N-(4-{1-[3-(3，5-二氯苯基)-5-(7-甲氧基喹啉-3-基)-1H-吡唑-1-基]乙基}苯甲酰基)-beta-丙氨酸

使用实施例1中步骤E的实验方法对得自步骤I的中间体(64mg)进行处理得到标题化合物。¹H NMR(DMSO，500MHz)8.8(1H，d，7＝1.6Hz)，8.45(1H，t，7＝5.5Hz)，8.38(1H，s)，7.94(2H，s)，7.92(2H，d，7＝8.4Hz)，7.72(2H，d，7＝8.0Hz)，7.58(1H，s)，7.45(1H，d，7＝2.1Hz)，7.37(1H，dd，7＝2.3，8.7Hz)，7.28(1H，s)，7.2(2H，d，7＝8.0Hz)，5.8(1H，q，7＝6.9Hz)，3.95(3H，s)，3.41(2H，q，7＝6.9Hz)，2.45(2H，t，7＝7.1Hz)，1.93(3H，d，7＝6.9Hz).LC-MS：3.53min；(M+H)=588.9.

实施例12

3-(4-(1-(5-(6-溴基萘-2-基)-3-(3，5-二氯苯基)-1H-吡唑-1-基)乙基)苯甲酰基)-beta-丙氨酸

步骤A：1-(6-溴基萘-2-基)乙酮.

使用中间体C中步骤A和B的实验方法制备标题化合物。¹H NMR(400MHz，cdcl₃)δ＝8.43(1H，s)，8.09-8.03(2H，m)，7.83(2H，dd，J=10.8，8.8)，7.64(1H，dd，J=8.7，1.9)，2.72(3H，d，J=0.5).

步骤B：1-(6-溴基萘-2-基)-3-(3，5-二氯苯基)丙烷-1，3-二酮.

使用实施例9中步骤A合成得到标题化合物。¹H NMR(400MHz，dmso)δ8.46(1H，s)，8.18(1H，d，J＝1.6Hz)，8.08(1H，d，J=8.4Hz)，7.99(1H，d，J＝8.8Hz)，7.86(3H，d，J=8.6Hz)，7.64-7.52(2H，m)，6.43(1H，s)，4.06(1H，s)，3.15(2H，s).

步骤C：3-(4-(1-(5-(6-溴基萘-2-基)-3-(3，5-二氯苯基)-1H-吡唑-1-基)乙基)苯甲酰基)-beta-丙氨酸

使用实施例9中步骤B和实施例1中步骤E到G的合成方法制备得到标题化合物。 ¹HNMR(400MHz，cdcl₃)δ8.04(1H，s)，7.86-7.75(3H，m)，7.73-7.56(5H，m)， 7.41-7.32(1H，m)，7.31-7.21(3H，m)，6.84(1H，t，J＝6.0Hz)，6.71-6.63(1H，m)，5.55(1H，q，J＝6.9Hz)，3.70(2H，dd，J＝11.6，5.9Hz)，2.67(2H，t，J＝5.7Hz)，1.97(3H，dd，J＝31.0，17.9Hz).

实施例13

3-(4-(1-(3-(3，5-二氯苯基)-5-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-1-基)乙基)苯甲酰基)-beta-丙氨酸

步骤A：1-(5-喹啉-6-基)乙酮.

使用中间体C中步骤A和B的实验方法制备标题化合物。¹H NMR(400MHz，cdcl₃)δ9.00(1H，dd，J＝4.2，1.7Hz)，8.44(1H，d，J＝1.9Hz)，8.30-8.23(2H，m)，8.15(1H，d，J＝8.9Hz)，7.47(1H，dd，J＝8.3，4.2Hz)，2.75-2.71(3H，m).

步骤B：1-(3，5-二氯苯基)-3-(喹啉-6-基)丙烷-1，3-二酮.

使用实施例9中步骤A合成得到标题化合物。¹H NMR(400MHz，dmso)δ9.04(1H，d，J＝2.6Hz)，8.94(1H，s)，8.62-8.46(2H，m)，8.24(2H，d，J＝1.8Hz)，8.16(1H，d，J＝8.9Hz)，7.94(1H，s)，7.72-7.60(2H，m).

步骤C：3-(4-(1-(3-(3，5-二氯苯基)-5-(喹啉-6-基)-1H-吡唑-1-基)乙基)苯甲酰基)-beta-丙氨酸

使用实施例9中步骤B和实施例1中步骤E到G的合成方法制备得到标题化合物。 ¹HNMR(400MHz，dmso)δ8.96(1H，d，J＝2.6Hz)，8.79(1H，s)，8.37(1H，d，J＝7.1Hz)，8.10(1H，d，J＝8.6Hz)，8.03(1H，s)，7.94(2H，d，J＝1.9Hz)，7.73(1H，d，J＝8.7Hz)，7.67(2H，d，J＝8.2Hz)，7.62-7.54(2H，m)，7.23(1H，s)，7.19(2H，d，J＝8.3Hz)，5.79(1H，d，J＝6.7Hz)，2.09(3H，s)，1.91(3H，d，J＝6.9Hz).

实施例14

3-(4-(1-(5-(6-甲氧基萘-2-基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-吡唑-1-基)乙基)苯甲酰基)-beta-丙氨酸

步骤A：1-(6-甲氧基萘-2-基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)丙烷-1，3-二酮.

使用实施例9中步骤A合成得到标题化合物。¹H NMR(400MHz，cdcl₃)δ8.50(1H，s)，8.14(2H，d，J＝8.7Hz)，8.03(1H，dd，J＝8.6，1.8Hz)，7.90(1H，d，J＝8.9Hz)，7.84(1H，d，J＝8.6Hz)，7.78(2H，d，J＝8.7Hz)，7.25(1H，dd，J＝8.9，2.5Hz)，7.20(1H，d，J＝2.4Hz)，7.01(1H，s)，3.98(3H，s).

步骤B：3-(4-(1-(5-(6-甲氧基萘-2-基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-吡唑-1-基)乙基)苯甲酰基)-beta-丙氨酸

使用实施例9中步骤B和实施例1中步骤E到G的合成方法制备得到标题化合物。 ¹HNMR(400MHz，dmso)δ8.44(1H，t，J＝5.5Hz)，8.12(2H，d，J＝8.2Hz)，7.94-7.87(2H，m)，7.81(3H，dd，J＝16.8，8.7Hz)，7.72(2H，d，J＝8.3Hz)，7.44(1H，d，J＝8.5Hz)，7.39(1H，d，J＝2.4Hz)，7.27-7.16(3H，m)，7.10(1H，s)，5.76(1H，d，J＝6.9Hz)，3.89(3H，s)，3.41(3H，dd，J＝12.6，7.1Hz)，2.45(2H，d，J＝7.1Hz)，1.91(3H，d，J＝6.9Hz).

实施例15

N-[4-({3-(3，5-二氯苯基)-5-[5-(三氟甲基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-1-基}甲基)苯甲酰基]-beta-丙氨酸

步骤A：4-({3-(3，5-二氯苯基)-5-[5-(三氟甲基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-1-基}甲基)苯甲酸

3-(3，5-二氯苯基)-1-[4-(甲氧羰基)苄基]-1H-吡唑-5-羧酸(36.7mg，91umol)，4-(三氟甲基)苯-1，2-二胺(52mg，3eq.)，DIEA(25ul，1.5eq.)溶在DMF(0.7ml)中.加入PyBOP(66mg，1.4eq.)的DMF(0.2ml)溶液。将混合物搅拌30分钟，用乙腈：水(5％TFA)淬灭。并用反相HPLC纯化得到标题化合物。¹H NMR(CDC]₃)：δ9.42-9.48(1H，brs)，8.13(1H，s)，7.96(2H，d，J＝8.4Hz)，7.76(2H，d，J＝2.0Hz)，7.59(1H，d，J＝2.0Hz)，7.43(2H，d，J＝8.4Hz)，7.36(1H，t，J＝2.0Hz)，7.05(1H，s)，6.23(2H，s)，3.88(3H，s).

步骤B：4-({3-(3，5-二氯苯基)-5-[5-(三氟甲基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-1-基}甲基)苯甲酸

使用实施例1中步骤E的实验方法对步骤A的中间体(45mg，82umol)进行处理得到标题化合物。¹H NMR(DMSO)：δ13.52(1H，s)，12.80-12.96(1H，brs)，7.99(1H，s)，7.89(1H，s)，7.81-7.83(3H，m)，7.78(2H，d，J=2.0Hz)，7.55-7.58(2H，m)，7.32(2H，d，J＝8.0Hz)，6.24(2H，s).

步骤C：N-[4-({3-(3，5-二氯苯基)-5-[5-(三氟甲基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-1-基}甲基)苯甲酰基]-beta-丙氨酸

使用实施例1中步骤F和E对上述步骤B的中间体进行处理得到标题化合物。¹HNMR(DMSO)：δ13.45-13.55(1H，brs)，12.13-12.22(1H，brs)，8.43(1H，t，J＝6.0Hz)，8.01-8.15(1H，brs)，7.77-7.95(3H，m)，7.73(2H，d，J＝8.0Hz)，7.63-7.65(2H，m)，7.59(1H，d，J＝8.0Hz)，7.35(2H，d，J＝8.0Hz)，6.20(2H，s)，3.39(2H，q，J＝7.2Hz)，2.46(2H，t，J＝7.2Hz).

实施例16

N-(4-{(1S)-1-[3-(3，5-二氯苯基)-5-(6-甲氧基萘-2-基)-1H-吡唑-1-基]乙基}苯甲酰基)-beta-丙氨酸

使用中间体B和实施例3中步骤A到D的合成方法合成得到标题化合物.¹H NMR(DMSO-d6)δ：8.44(1H，t，NH，J＝5.6Hz)，7.93(2H，d，J＝1.9Hz)，7.91(1H，d，J＝8.4Hz)，7.86(1H，d，J＝1.7Hz)，7.83(1H，d，J＝9.0Hz)，7.72(2H，d，J＝8.4Hz)，7.56(1H，t，J＝1.9Hz)，7.43(1H，dd，J＝1.7，8.4Hz)，7.39(1H，d，J＝2.6Hz)，7.23(1H，dd，J＝2.6，9.0Hz)，7.20(2H，d，J＝8.4Hz)，7.16(1H，s)，5.76(1H，q，J＝7.0Hz)，3.89(3H，s)，3.41(2H，q，J＝7Hz)，2.47(2H，t，J＝7Hz)，1.90(3H，d，J＝7.0Hz).

生物测定

本发明中设计的部分实施例对谷氨酰胺酶体外活性测试和动物体内药效学研究通过以下实验完成。

重组谷氨酰胺酶的活性的检测

谷氨酸酶活性检测***使用重组酶。一段编码人的GAC(128～603残基)克隆到pET128a载体(Novagen生产)中，由BL21感受态细胞转化进大肠杆菌中。蛋白N端带有His标签，用镍柱纯化，透析浓缩到40uM，-80度冰箱保存。重组GAC(80nM)与待测化合物(20uM)37摄氏度孵育60分钟反应体积为22.5ul(PH8.0)，反应缓冲液为50mMTris-乙酸(pH8.6)，0.2mM EDTA，150mM KH₂PO₄。化合物用DMSO溶解，并且所有样本加入的化合物体积恒定，并保证反应孵育的DMSO浓度为(0.2％v/v)，终浓度20mM的L-谷氨酰胺溶液加入到反应中，终体积25ul，37度反应20min，加入5ul冰上预冷的3M盐 酸终止反应，200ul第二步反应混合液包括200mM水合肼，80mM Tris-乙酸(pH9.4)，0.35mM二磷酸腺苷(ADP)，2mM烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)，0.6U/mL谷氨酸脱氢酶GDH)，加入到每个反应中，终体积为230ul(PH8.0)，室温反应60min，波长340nm光吸收检测。把样品光吸收值减去无-谷氨酰胺的反应混合液的光吸收值来计算酶的活性。根据以上试验方法，测定了不同化合物对肾脏型谷氨酰胺酶活性(图1)

体内药效学研究

方法：

6周龄的BALB／c雌性裸鼠(北京维通利华实验动物技术有限公司)，用于体内的药效学研究。5×10⁶体积的Colo-205肿瘤细胞(ATCC生产)悬浮于100ul的无血清的RPMI-1640培养(Invitrogen生产)基中，注射到小鼠双侧掖下，用游标卡尺检测肿瘤体积，使用的公式为肿瘤体积(立方毫米)＝(w²×L)／2，其中w＝肿瘤的宽度L＝肿瘤的长度，单位为毫米。当肿瘤体积达到150～200立方毫米，小鼠随机分为四组(每组4～5只小鼠)分别口服给药吡唑类化合物(300mg／kg)，CT-034(1mg／kg)，吡唑类化合物和CT-034 组合用药，溶剂为(20％SBE)，每天给药一次，持续给药14天，在第7，10，14天测量肿瘤体积和体重用于数据分析，计算肿瘤生长抑制(TGI)和体重变化，与对照组比较。

结果：

吡唑类化合物和MEK抑制剂CT-034联合用药对裸鼠Colo-205异体移植瘤模型中的肿瘤生长表现出了明显的抑制效果(表1)。在Colo-205肿瘤抑制模型中，在口服300mg／kg吡唑类化合物和1mg／kg CT-034共同给药14天后，肿瘤抑制率(TGI)提高到98％以上(吡唑类化合物和CT-034单独给药的肿瘤抑制率分别是60％和73％)。同时，裸鼠体重变化正常，没有表现出明显的毒副作用(图2和3)。

表1：给药14天后肿瘤抑制率和体重变化.

。

Claims (1)

1.式(I)所示的化合物或其可药用的盐在用来治疗与肾脏型谷氨酰胺酶活性增高有关的病症的药物的制备中的用途，

其中的病症为乳腺癌、肺癌、脑癌、胰腺癌和结肠癌。