CN103908489A - 一种参芪芝药性菌质双向固体发酵方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种参芪芝药性菌质双向固体发酵方法，属于中药微生物发酵领域。该方法将中药人参、黄芪粉碎，将人参和黄芪按照质量比（1～9）：（1～9）混合，配制发酵基质，加蒸馏水混匀浸泡，调节含水量50%～65%，装入培养瓶中，放入高压灭菌锅中灭菌；将生长并保存于PDA培养基中的灵芝菌种分别接入培养瓶中，每瓶接种5块，封口，于24～30℃避光培养，待菌丝体长满整瓶时，终止发酵，收集发酵产物，烘干，即得到参芪芝药性菌质。本发明的发酵方法得到的参芪芝药性菌质，抗氧化活性高于原中药材，可以用现有的中药制备技术和工艺方法制成任何固体剂型，包括片剂、散剂等。
Description
技术领域
本发明属于中药微生物发酵领域，具体涉及一种参芪芝药性菌质双向固体发酵方法。
背景技术
人参、黄芪均是临床治疗中常用的补气药。人参味甘微苦而性微温，善补五脏之气，补气而兼能养阴，守而不走；黄芪味甘性温，善走肌表，补气兼能扶阳，走而不守。二药配对，具有强大的补气助阳作用，补元气生精血，阴阳兼顾，一切气虚不足之症均可用之。灵芝自古又称仙草，按本草纲目记载：“灵芝性平，味苦，无毒，主胸中结，益心气，补中，增智慧，不忘，久服轻身不老，延年神仙。”现代药理学证明，灵芝发酵菌丝体具有与灵芝子实体相同的药理学功效。
中国专利201210115166.9公开了一种灵芝发酵人参的方法及其药性菌质在治疗肺癌中的应用，证实了所得药性菌质较原中药在抑制肺癌方面具有更高的活性。但是，目前尚未有任何文献公开以灵芝为发酵菌种，发酵人参、黄芪2种中药组合的复配型发酵基质的双向固体发酵工艺及其及其药性菌质抗氧化方面的应用。
发明内容
本发明的目的是为了提供一种参芪芝药性菌质双向固体发酵方法，该方法得到的参芪芝药性菌质具有较高的生物活性。
本发明提供一种参芪芝药性菌质双向固体发酵方法，该方法包括：将中药人参、黄芪粉碎，过10目筛，将人参和黄芪按照质量比（1～9）：（1～9）混合，配制发酵基质，加蒸馏水混匀浸泡，调节含水量50%～65%，装入250ml培养瓶中，放入高压灭菌锅中115～121℃灭菌2小时；无菌条件下，将生长并保存于PDA培养基中的灵芝菌种按0.4cm×0.4cm的菌块，分别接入培养瓶中，每瓶接种5块，封口，于24～30℃避光培养，待菌丝体长满整瓶时，终止发酵，收集发酵产物，60℃烘干，即得到参芪芝药性菌质。
优选的是，所述的人参和黄芪质量比（1～3）：（1～5）。
优选的是，所述的灵芝菌种包括寒芝和赤芝。
本发明的有益效果
本发明提供一种参芪芝药性菌质双向固体发酵方法，该方法利用双向固体发酵技术将灵芝接种在人参、黄芪两种中药组成的复合基质上，灵芝发酵产生菌丝体及代谢产物的同时，产生的酶可催化人参、黄芪的化学成分发生转化，提高或降低中药化学成分的含量，从而将三味具有增强免疫、调节机体代谢、延缓衰老的传统药材有机配伍，平衡药理药性，协调起效，提升原药材的生物活性。
本发明的发酵方法得到的参芪芝药性菌质，抗氧化活性高于原中药材，可以用现有的中药制备技术和工艺方法制成任何固体剂型，包括片剂、散剂等。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步详细的说明。
实施例1
将中药人参、黄芪粉碎，过10目筛，按质量比1:1混合，配制发酵基质，加蒸馏水混匀充分浸泡，调节含水量达60%，装入250ml培养瓶中，放入高压灭菌锅中121℃灭菌2小时；无菌条件下，将生长并保存于PDA培养基中的赤芝菌种按0.4cm×0.4cm的菌块，分别接入培养瓶中，每瓶接种5块，封口，于26℃条件下避光培养，待菌丝体长满整瓶时，终止发酵，收集发酵产物，60℃烘干，即得到参芪芝药性菌质。
将发酵得到1g参芪芝药性菌质生物量，以甲壳素为标准品，按药性菌质菌丝体干重计不低于35mg，1g药性菌质总皂苷含量以人参皂苷Re为标准品计不低于20mg，1g药性菌质总黄酮含量以芦丁为标准品计不低于0.35mg，1g药性菌质总多糖含量以葡萄糖为标准品计不低于75mg。
实施例2
将中药人参、黄芪粉碎，过10目筛，按质量比1:2混合，配制发酵基质，加蒸馏水混匀充分浸泡，调节含水量达60%，装入250ml培养瓶中，放入高压灭菌锅中121℃灭菌2小时；无菌条件下，将生长并保存于PDA培养基中的赤芝菌种按0.4cm×0.4cm的菌块，分别接入培养瓶中，每瓶接种5块，封口，于25℃条件下避光培养，待菌丝体长满整瓶时，终止发酵，收集发酵产物，60℃烘干，即得到参芪芝药性菌质。
将发酵得到1g参芪芝药性菌质生物量，以甲壳素为标准品，按药性菌质菌丝体干重计不低于25mg，1g药性菌质总皂苷含量以人参皂苷Re为标准品计不低于30mg，1g药性菌质总黄酮含量以芦丁为标准品计不低于0.25mg，1g药性菌质总多糖含量以葡萄糖为标准品计不低于30mg。
实施例3
将中药人参、黄芪粉碎，过10目筛，按质量比1:3混合，配制发酵基质，加蒸馏水混匀充分浸泡，调节含水量达65%，装入250ml培养瓶中，放入高压灭菌锅中115℃灭菌2小时；无菌条件下，将生长并保存于PDA培养基中的赤芝菌种按0.4cm×0.4cm的菌块，分别接入培养瓶中，每瓶接种5块，封口，于27℃条件下避光培养，待菌丝体长满整瓶时，终止发酵，收集发酵产物，60℃烘干，即得到参芪芝药性菌质。
将发酵得到1g参芪芝药性菌质生物量，以甲壳素为标准品，按药性菌质菌丝体干重计不低于85mg，1g药性菌质总皂苷含量以人参皂苷Re为标准品计不低于35mg，1g药性菌质总黄酮含量以芦丁为标准品计不低于0.30mg，1g药性菌质总多糖含量以葡萄糖为标准品计不低于20mg。
实施例4
将人参、黄芪原药材粉碎，过10目筛，按质量比2:1混合，配制发酵基质，加蒸馏水混匀充分浸泡，调节含水量达55%，装入250ml培养瓶中，放入高压灭菌锅中115℃灭菌2小时；无菌条件下，将生长并保存于PDA培养基中的赤芝菌种按0.4cm×0.4cm的菌块，分别接入培养瓶中，每瓶接种5块，封口，于30℃条件下避光培养，待菌丝体长满整瓶时，终止发酵，收集发酵产物，60℃烘干，即得到参芪芝药性菌质。
将发酵得到1g参芪芝药性菌质生物量，以甲壳素为标准品，按药性菌质菌丝体干重计不低于15mg，1g药性菌质总皂苷含量以人参皂苷Re为标准品计不低于35mg，1g药性菌质总黄酮含量以芦丁为标准品计不低于0.25mg，1g药性菌质总多糖含量以葡萄糖为标准品计不低于65mg。
实施例5
将人参、黄芪原药材粉碎，过10目筛，按质量比3:1混合，配制发酵基质，加蒸馏水混匀充分浸泡，调节含水量达50%，装入250ml培养瓶中，放入高压灭菌锅中121℃灭菌2小时；无菌条件下，将生长并保存于PDA培养基中的赤芝菌种按0.4cm×0.4cm的菌块，分别接入培养瓶中，每瓶接种5块，封口，于24℃条件下避光培养，待菌丝体长满整瓶时，终止发酵，收集发酵产物，60℃烘干，即得到参芪芝药性菌质。
将发酵得到1g参芪芝药性菌质生物量，以甲壳素为标准品，按药性菌质菌丝体干重计不低于20mg，1g药性菌质总皂苷含量以人参皂苷Re为标准品计不低于30mg，1g药性菌质总黄酮含量以芦丁为标准品计不低于0.65mg，1g药性菌质总多糖含量以葡萄糖为标准品计不低于55mg。
实施例6
将人参、黄芪原药材粉碎，过10目筛，按质量比5:1混合，配制发酵基质，加蒸馏水混匀充分浸泡，调节含水量达50%，装入250ml培养瓶中，放入高压灭菌锅中121℃灭菌2小时；无菌条件下，将生长并保存于PDA培养基中的赤芝菌种按0.4cm×0.4cm的菌块，分别接入培养瓶中，每瓶接种5块，封口，于28℃条件下避光培养，待菌丝体长满整瓶时，终止发酵，收集发酵产物，60℃烘干，即得到参芪芝药性菌质。
将发酵得到1g参芪芝药性菌质生物量，以甲壳素为标准品，按药性菌质菌丝体干重计不低于20mg，1g药性菌质总皂苷含量以人参皂苷Re为标准品计不低于30mg，1g药性菌质总黄酮含量以芦丁为标准品计不低于0.45mg，1g药性菌质总多糖含量以葡萄糖为标准品计不低于50mg。
实施例7
将人参、黄芪原药材粉碎，过10目筛，按质量比1:1混合，配制发酵基质，加蒸馏水混匀充分浸泡，调节含水量达60%，装入250ml培养瓶中，放入高压灭菌锅中121℃灭菌2小时；无菌条件下，将生长并保存于PDA培养基中的寒芝菌种按0.4cm×0.4cm的菌块，分别接入培养瓶中，每瓶接种5块，封口，于28℃条件下避光培养，待菌丝体长满整瓶时，终止发酵，收集发酵产物，60℃烘干，即得到参芪芝药性菌质。
将发酵得到1g参芪芝药性菌质生物量，以甲壳素为标准品，按药性菌质菌丝体干重计不低于20mg，1g药性菌质总皂苷含量以人参皂苷Re为标准品计不低于30mg，1g药性菌质总黄酮含量以芦丁为标准品计不低于0.20mg，1g药性菌质总多糖含量以葡萄糖为标准品计不低于40mg。
实施例8
将人参、黄芪原药材粉碎，过10目筛，按质量比1:2混合，配制发酵基质，加蒸馏水混匀充分浸泡，调节含水量达60%，装入250ml培养瓶中，放入高压灭菌锅中115℃灭菌2小时；无菌条件下，将生长并保存于PDA培养基中的寒芝菌种按0.4cm×0.4cm的菌块，分别接入培养瓶中，每瓶接种5块，封口，于26℃条件下避光培养，待菌丝体长满整瓶时，终止发酵，收集发酵产物，60℃烘干，即得到参芪芝药性菌质。
将发酵得到1g参芪芝药性菌质生物量，以甲壳素为标准品，按药性菌质菌丝体干重计不低于20mg，1g药性菌质总皂苷含量以人参皂苷Re为标准品计不低于35mg，1g药性菌质总黄酮含量以芦丁为标准品计不低于0.20mg，1g药性菌质总多糖含量以葡萄糖为标准品计不低于45mg。
实施例9
将人参、黄芪原药材粉碎，过10目筛，按质量比1:3混合，配制发酵基质，加蒸馏水混匀充分浸泡，调节含水量达65%，装入250ml培养瓶中，放入高压灭菌锅中121℃灭菌2小时；无菌条件下，将生长并保存于PDA培养基中的寒芝菌种按0.4cm×0.4cm的菌块，分别接入培养瓶中，每瓶接种5块，封口，于25℃条件下避光培养，待菌丝体长满整瓶时，终止发酵，收集发酵产物，60℃烘干，即得到参芪芝药性菌质。
将发酵得到1g参芪芝药性菌质生物量，以甲壳素为标准品，按药性菌质菌丝体干重计不低于65mg，1g药性菌质总皂苷含量以人参皂苷Re为标准品计不低于35mg，1g药性菌质总黄酮含量以芦丁为标准品计不低于0.25mg，1g药性菌质总多糖含量以葡萄糖为标准品计不低于20mg。
实施例10
将人参、黄芪原药材粉碎，过10目筛，按质量比1:5混合，配制发酵基质，加蒸馏水混匀充分浸泡，调节含水量达65%，装入250ml培养瓶中，放入高压灭菌锅中121℃灭菌2小时；无菌条件下，将生长并保存于PDA培养基中的寒芝菌种按0.4cm×0.4cm的菌块，分别接入培养瓶中，每瓶接种5块，封口，于30℃条件下避光培养，待菌丝体长满整瓶时，终止发酵，收集发酵产物，60℃烘干，即得到参芪芝药性菌质。
将发酵得到1g参芪芝药性菌质生物量，以甲壳素为标准品，按药性菌质菌丝体干重计不低于70mg，1g药性菌质总皂苷含量以人参皂苷Re为标准品计不低于30mg，1g药性菌质总黄酮含量以芦丁为标准品计不低于0.35mg，1g药性菌质总多糖含量以葡萄糖为标准品计不低于15mg。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (3)
1.一种参芪芝药性菌质双向固体发酵方法，其特征在于，该方法包括：将中药人参、黄芪粉碎，过10目筛，将人参和黄芪按照质量比（1～9）：（1～9）混合，配制发酵基质，加蒸馏水混匀浸泡，调节含水量50%～65%，装入250ml培养瓶中，放入高压灭菌锅中115～121℃灭菌2小时；无菌条件下，将生长并保存于PDA培养基中的灵芝菌种按0.4cm×0.4cm的菌块，分别接入培养瓶中，每瓶接种5块，封口，于24～30℃避光培养，待菌丝体长满整瓶时，终止发酵，收集发酵产物，60℃烘干，即得到参芪芝药性菌质。
2.根据权利要求1所述的一种参芪芝药性菌质双向固体发酵方法，其特征在于，所述的人参和黄芪质量比（1～3）：（1～5）。
3.根据权利要求1所述的一种参芪芝药性菌质双向固体发酵方法，其特征在于，所述的灵芝菌种包括寒芝和赤芝。
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