CN103842380A - 融合至Fc结构域的抗VEGF单可变结构域 - Google Patents

融合至Fc结构域的抗VEGF单可变结构域 Download PDF

Info

Publication number
CN103842380A
CN103842380A CN201280047197.3A CN201280047197A CN103842380A CN 103842380 A CN103842380 A CN 103842380A CN 201280047197 A CN201280047197 A CN 201280047197A CN 103842380 A CN103842380 A CN 103842380A
Authority
CN
China
Prior art keywords
dab
antigen
vegf
binding constructs
sequence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201280047197.3A
Other languages
English (en)
Inventor
C.阿什曼
I.R.卡奇波尔
Z.休格斯-托马斯
A.P.路易斯
M.斯蒂沃德
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Glaxo Group Ltd
Original Assignee
Glaxo Group Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=46579044&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CN103842380(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Glaxo Group Ltd filed Critical Glaxo Group Ltd
Publication of CN103842380A publication Critical patent/CN103842380A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/35—Valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及抗原结合构建体，其包含通过抗体的单链Fc区域分隔的一个或两个表位结合结构域，其中每个表位结合结构域能够结合至VEGF；涉及包含两个本发明的抗原结合构建体的二聚体，包含所述二聚体的药物组合物及其在治疗与VEGF信号转递相关的疾病中的用途，所述疾病例如糖尿病性黄斑水肿(DME)、湿性年龄相关性黄斑变性(湿性AMD)、糖尿病性视网膜病变、视网膜静脉阻塞(RVO)和角膜新生血管形成，以及编码所述抗原结合构建体的多核苷酸序列。

Description

融合至Fc结构域的抗VEGF单可变结构域
背景
生长因子的血管内皮生长因子(VEGF)家族及其受体是血管发生和血管通透性的基本调节剂。VEGF家族包括VEGF-A、PIGF (胎盘生长因子)、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-E和蛇毒VEGF，并且认为每一种在血管形成模式（vascular patterning）和血管发育中具有不同的作用。由于从8个外显子的单基因转录的mRNA的可变剪接，VEGF-A具有至少9个亚型(同种型)，其通过在信号肽剪切后剩余的氨基酸数量而确定。例如，在人中，最主要的同种型是VEGF165，其以可溶型和细胞结合型之间的平衡态存在。较长的同种型(VEGF183、VEGF189 和 VEGF206)具有高度带正电并介导与细胞表面的多糖以及调节其生物利用度的肝素结合的C-末端区域。所有的VEGF-A同种型都形成同二聚体，并且具有通过构成受体结合VEGF片段的大约110个N-末端残基的核心发生的结合。在正常条件下，并且在实体瘤的中心，VEGF的表达主要通过低氧条件介导，表示血管供应的短缺。低氧导致低氧诱导因子HIF-1α与组成型表达的HIF-1α的二聚化，形成结合至VEGF基因的启动子区域中的低氧响应元件的转录因子。在正常含氧量下，由于多个脯氨酸羟基化事件的结果，HIF-1α蛋白经历泛素介导的降解。其他肿瘤相关的VEGF上调由于经由通过炎性细胞因子和生长因子以及通过机械力的癌基因通路(即ras)的活化而发生。
活性VEGF同二聚体通过VEGFR家族的受体结合至细胞表面。VEGF-A的主要血管内皮相关受体是VEGFR1 (Flt1)和VEGFR2 (Flk-2；KDR)。这两种受体都是酪氨酸激酶家族的成员，并且需要配体介导的二聚化用于活化。在二聚化后，激酶结构域经历自身磷酸化，尽管VEGFR2中的激酶活性的程度大于在VEGFR1中的激酶活性的程度。已经证实，尽管VEGF对VEGFR1的亲和力高大约3倍(KD ~30pM，相比之下对VEGFR2为100pM)，但VEGF的血管生成信号传递主要通过VEGFR2介导。这导致下述提议，即VEGFR1主要充当诱饵受体以隔离VEGF并减缓VEGFR2活化的程度。尽管VEGFR1表达与一些肿瘤相关，但其主要作用看起来是在胚胎发育和器官发生期间。VEGF-A165也通过神经纤毛蛋白受体NRP1 和 NRP2结合。尽管这些受体缺少TK结构域，但认为它们充当VEGFR2的共同受体，并且通过将VEGF转移至VEGFR2而增强信号转递。
很多研究已帮助确认VEGF-A作为肿瘤血管发生中的关键因子。例如，VEGF-A表达在大多数肿瘤中和肿瘤相关的基质中。在缺少充分发育且扩张的血管***以支持生长的条件下，肿瘤细胞发生坏死和凋亡，从而对可由持续细胞增殖导致的肿瘤体积(1 mm3的级别)的增大施加限制。VEGF-A的表达在邻近坏死区域的低氧肿瘤细胞中最高，表明在生长的肿瘤中通过低氧诱导VEGF-A能够改变血管发生的活化剂和抑制剂的平衡，导致在肿瘤中的新血管的生长。与这个假说一致，已开发出作为治疗剂的多种方法，包括小分子量酪氨酸激酶抑制剂、单克隆抗体、反义寡核苷酸等，其抑制或捕获VEGF-A或阻断其信号转递受体VEGFR-2。
VEGF-A已参与多种眼部疾病，例如年龄相关性黄斑变性(AMD)、湿性AMD、地图样萎缩、糖尿病性视网膜病变、视网膜静脉阻塞疾病、糖尿病性黄斑水肿和角膜血管形成。VEGF-A由多种眼部细胞类型响应低氧而产生，并且具有多种功能，包括促进血管通透性和刺激内皮细胞生长。
AMD定义为视网膜色素上皮的异常，其导致黄斑中的上覆感光细胞退化，并且导致中央视觉损失。AMD代表了主要的公共健康负担，并且估计在美国，超过9百万人具有中期或晚期形式的AMD。早期AMD表征为玻璃疣和视网膜色素上皮的色素沉着或色素减退，而没有视觉损失。其中发生视觉损失的晚期AMD，可表现为地图样萎缩或脉络膜新生血管形成(CNV)。CNV，也称作湿性AMD，是血管异常生长的结果。
雷珠单抗(Lucentis)、贝伐单抗(Avastin)和阿柏西普(Eylea)是抗VEGF疗法的实例，它们通常施用以用于新生血管性AMD。尽管存在这样的治疗，但仍需要用于治疗AMD和其他眼部疾病的进一步的疗法。
发明概述
本发明涉及抗原结合构建体，其包含通过抗体的单链Fc区域分隔的一个或两个表位结合结构域，其中每个表位结合结构域都能够结合至VEGF。
一方面，本发明的抗原结合构建体的每个表位结合结构域是域抗体，也称作dAb。
在进一步的方面，本发明涉及以下抗原结合构建体：
a) DOM 15-26-597–AS–Fc (SEQ ID No. 110)–纤连蛋白x 4–DT02-K-044-085；或
b) DOM 15-26-597–IgG1铰链–Fc (SEQ ID No. 110)–纤连蛋白x 4–DT02-K-044-085；或
c) (a)或(b)的变体，其在整个序列上具有至少97%的氨基酸同一性；或
d) (a)或(b)的变体，其中每条dAb序列与特异的dAb的序列具有至少97%的序列同一性。
本发明进一步涉及包含两个本发明的抗原结合构建体的二聚体，包含所述二聚体的药物组合物，及其在治疗与VEGF信号转递相关的疾病中的用途，所述疾病例如糖尿病性黄斑水肿(DME)、湿性年龄相关性黄斑变性(湿性AMD)、糖尿病性视网膜病变、视网膜静脉阻塞(RVO)、和角膜新生血管形成，以及编码所述抗原结合构建体的多核苷酸序列。
附图
图1：ELISA，和EC50值，其显示了结合至人VEGF165的DMS1529、DMS1576和贝伐单抗(Avastin)的比较。
图2A：通过MSD，在使用3ug/mL Vk Fc-dAb DMS30000预饱和后，Vh dAb-Fc DMS1576与VEGF的结合。
图2B：通过MSD，在使用3ug/mL Vh dAb-Fc DMS1576预饱和后，Vk Fc-dAb DMS30000与VEGF的结合。
图3：对于来自与贝伐单抗(Avastin)相比的抗VEGF Vh dAb-Fc、Vk Fc-dAb和dAb-Fc-dAb分子的VEGF诱导的人脐带内皮细胞(HUVEC)增殖测定的最大抑制的加权方差分析。
图4：通过MSD，DMS1529和DMS30000对小鼠VEGF164的结合。
发明详述
本发明涉及抗原结合构建体，其包含通过抗体的单链Fc区域分隔的两个表位结合结构域，其中每个表位结合结构域能够结合至VEGF。
一方面，本发明的抗原结合构建体的每个表位结合结构域是域抗体，也称作dAb。
如本文使用的术语“表位结合结构域”是指独立于不同的可变区域或结构域而特异性地结合抗原或表位的结构域。这可以是域抗体(dAb)，或者它可以是作为支架的衍生物的结构域，所述支架选自CTLA-4 (Evibody)；脂质运载蛋白；蛋白A衍生的分子，例如蛋白A的Z-结构域(Affibody，SpA)、A-结构域(Avimer/Maxibody)；热激蛋白，例如GroEl和GroES；转铁蛋白(trans-body)；锚蛋白重复蛋白(DARPin)；肽适体；C-型凝集素结构域(四连接素(Tetranectin))；人γ-晶体蛋白和人泛素(affilins)；PDZ结构域；蝎毒素(卡律蝎毒素(charybdotoxin))；人蛋白酶抑制剂的kunitz型结构域；Ras-结合蛋白AF-6的PDZ结构域；和纤连蛋白(adnectin)；其已经过蛋白工程化以便获得对天然配体之外的配体的结合。
如本文使用的术语“结构域”是具有独立于蛋白其他部分的三级结构的折叠的蛋白结构。通常，结构域负责蛋白的分立的功能性质，并且在很多情况下，可添加、去除或转移至其他蛋白，而不损失蛋白剩余部分和/或结构域的功能。
如本文使用的术语“域抗体”是指包含抗体可变结构域特征的序列的折叠的多肽结构域。因此，它包括完整的抗体可变结构域，例如VH、VHH和VL，和修饰的抗体可变结构域（例如，其中一个或多个环已替代为不是抗体可变结构域特征的序列），或者已经被截短或包含N-或C-末端延伸的抗体可变结构域，以及至少保留全长结构域的结合活性和特异性的可变结构域的折叠片段。单可变结构域能够独立于不同的可变区域或结构域而结合抗原或表位。“域抗体”或“dAb(TM)”也可称作“单可变结构域”。域抗体可以是人域抗体，但也包括来其他物种的单域抗体，例如啮齿动物(例如，如在WO 00/29004中的公开)、铰口鲨和骆驼科（Camelid）VHH dAb。骆驼科VHH是源自包括骆驼、美洲驼、羊驼、单峰驼和原驼的物种的免疫球蛋白单可变结构域多肽，其产生天然缺乏轻链的重链抗体。这样的VHH结构域可以根据本领域中可用的标准技术进行人源化，并且这样的结构域被认为是“域抗体”。如本文使用的VH包括骆驼科VHH结构域。NARV是另一种类型的免疫球蛋白域抗体，其在包括铰口鲨在内的软骨鱼类中被鉴定到(Mol. Immunol. 44, 656-665 (2006)。这些结构域还称作新型的抗原受体可变区域(常缩写为V(NAR)或NARV)。
如本文使用的术语“抗体的单链Fc区域”是指IgG例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4 或IgG4PE，或IgA抗体的单重链Fc区域。单重链Fc区域可包含一个或多个的CH1、CH2和CH3恒定区抗体结构域，例如所有三个恒定区抗体结构域，或仅CH2和CH3结构域。除了包含一个或多个的CH1、CH2和CH3恒定区抗体结构域之外，抗体的单重链Fc区域可进一步包含抗体的铰链区(这样的区域通常见于CH1和CH2结构域之间)。
一方面，抗体的单链Fc区域是单IgG1重链，例如包含CH2和CH3抗体恒定结构域的单IgG1重链。
在进一步的方面，抗体的单链Fc区域是SEQ ID No. 110的IgG1序列。
在进一步的方面，抗体的单链Fc区域是以下序列：
Figure 287025DEST_PATH_IMAGE002
。
在一个方面，Fc序列的N末端起始于“AS”，或在Fc的起点没有N-末端氨基酸(Fc序列起始于ASTHTCPPC或THTCPPC)。
在另一个方面，Fc区域包含在Fc的N-末端内的突变，例如THTCPPC被替换为TATCPPC。例如THTCPPC被替换为THPCPPC (例如，SEQ ID 83和84)。这样的突变可存在于本文公开的任何序列中，并且是本文公开的那些具体序列的变体序列。
抗体的Fc区域可根据其效应子功能的程度进行选择。
如本文使用的术语“效应子功能”意指抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、补体依赖性细胞毒性(CDC)介导的应答、Fc介导的吞噬作用和经FcRn受体的抗体再循环中的一种或多种。对于IgG抗体，包括ADCC和ADCP在内的效应子功能性通过重链恒定区与存在于免疫细胞表面上的Fcγ受体家族的相互作用而介导。在人中，这些包括FcγRI (CD64)、FcγRII (CD32)和FcγRIII (CD16)。结合至抗原的抗原结合蛋白和Fc/ Fcγ复合物形成之间的相互作用诱导一系列的效应，包括细胞毒性、免疫细胞活化、吞噬作用和炎性细胞因子的释放。
认为抗原结合蛋白的恒定区和多种Fc受体(FcR)之间的相互作用介导抗原结合蛋白的效应子功能。显著的生物效应可以是效应子功能性的结果，具体为，抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、补体固定(补体依赖性细胞毒性或CDC)、和抗原结合蛋白的半衰期/清除率。通常，介导效应子功能的能力需要抗原结合蛋白结合至抗原，并且并非所有抗原结合蛋白都将介导每种效应子功能。
效应子功能可通过多种方式测量，包括例如经FcγRIII与天然杀伤细胞的结合，或经FcγRI与单核细胞/巨噬细胞的结合，以测量ADCC效应子功能。例如，可以在天然杀伤细胞测定中评估本发明的抗原结合蛋白的ADCC效应子功能。这样的测定的实例可见于Shields等人，2001, The Journal of Biological Chemistry, Vol. 276, p6591-6604；Chappel等人，1993 The Journal of Biological Chemistry, Vol 268, p25124-25131；Lazar等人，2006 PNAS USA, 103; 4005-4010。测定CDC功能的测定的实例包括1995 J Imm Meth 184:29-38中所述的那些。
人恒定区的一些同种型，特别是IgG4和IgG2同种型，在本质上缺少以下功能：(a)通过经典途径活化补体；和(b)抗体依赖性细胞毒性。可基于期望的效应子性质，对抗原结合蛋白的重链恒定区进行多种修饰。已分别地描述，包含特异突变的IgG1恒定区减少对Fc受体的结合，并且因此降低ADCC和CDC (Duncan等人，Nature 1988, 332; 563-564；Lund等人，J. Immunol. 1991, 147; 2657-2662；Chappel等人，PNAS USA 1991, 88; 9036-9040；Burton和Woof, Adv. Immunol. 1992, 51;1-84；Morgan等人，Immunology 1995, 86; 319-324；Hezareh等人，J. Virol. 2001, 75 (24); 12161-12168)。
还已描述，包含特异突变或在残基Asn297上包含改变的糖基化的人IgG1恒定区增强对Fc受体的结合。在一些情况下，还已显示这些突变增强ADCC和CDC (Lazar等人，PNAS USA 2006, 103; 4005-4010；Shields等人，J Biol Chem 2001, 276; 6591-6604；Nechansky等人，Mol Immunol, 2007, 44; 1815-1817)。
在本发明的一个实施方式中，这样的突变在选自239、332和330 (IgG1)的位置中的一个或多个，或在其他IgG同种型中的等价位置中。适合的突变的实例是S239D和I332E和A330L。在一个实施方式中，本文所述的本发明的抗原结合蛋白在239和332位突变，例如S239D和I332E，或者在进一步的实施方式中，它在选自239和332和330的三个或更多个位置突变，例如S239D和I332E和A330L (EU索引编号)。
在本发明的可选实施方式中，提供了抗原结合蛋白，其包含具有改变的糖基化概况的重链恒定区，从而使所述抗原结合蛋白具有增强的效应子功能。例如，其中所述抗原结合蛋白具有增强的ADCC或增强的CDC，或其中其具有均增强的ADCC和CDC效应子功能。用于生产具有改变的糖基化概况的抗原结合蛋白的适合的方法学的实例描述于WO2003011878、WO2006014679和EP1229125，所有这些文献均可应用于本发明的抗原结合蛋白。
本发明的抗原结合构建体包含能够结合至VEGF的表位结合结构域。如本文使用的术语“VEGF”是指任何VEGF分子，特别是VEGF-A，例如人VEGF-A，并且包括VEGF-A的任何同种型，例如VEGF165。
一方面，本发明的抗原结合构建体包含通过抗体的单链Fc区域分隔的两个表位结合结构域。所谓“分隔的”是指所述表位结合结构域不彼此直接连接。在一个方面，所述表位结合结构域位于Fc区域的相对的末端。一个表位结合结构域连接在N-末端，且另一个连接在C-末端。每个表位结合结构域独立地选择，并且这样的结构域可结合VEGF上的相同表位或不同表位。
一方面，在本发明的抗原结合构建体中，连接至抗体的Fc区域的N-末端的表位结合结构域是重链或轻链dAb，其中所述轻链dAb可以是κ或λ轻链。
在进一步的方面，在本发明的抗原结合构建体具有连接至C-末端的表位结合结构域的情况下，所述表位结合结构域是轻链dAb，其中所述轻链dAb可以是κ或λ轻链。
在又进一步的方面，在本发明的抗原结合构建体包含两个表位结合结构域的情况下，连接至Fc区域的N-末端的表位结合结构域是重链dAb，且连接至Fc区域的C-末端的表位结合结构域是轻链dAb。
在又进一步的方面，在本发明的抗原结合构建体包含两个表位结合结构域的情况下，连接至Fc区域的N-末端的表位结合结构域是轻链dAb，且连接至Fc区域的C-末端的表位结合结构域是轻链dAb。
本发明的抗原结合构建体可作为融合蛋白表达，或者所述表位结合结构域可分开表达，并通过另一种方式连接，例如使用本领域中熟知的方法化学缀合。
表位结合结构域可直接连接至抗体的Fc区域，或通过接头间接连接。在dAb的N-末端融合至抗体的Fc区域的C-末端的构建体中，肽接头可增强dAb的抗原结合。实际上，dAb的N-末端定位紧邻域涉及抗原结合活性的互补性决定区(CDRs)。因此，肽接头可充当表位结合结构域与蛋白支架的恒定结构域之间的间隔区，其可允许dAb CDR更容易地达到抗原，并且在一些环境下，以更高的亲和力结合。此外，在本文所述的异二聚体和同二聚体中，某些肽接头，例如长度大于7个氨基酸的那些，可促进并且使得连接至抗体的Fc区域的N-末端的重链dAb能够与连接至抗体的Fc区域的C-末端的轻链dAb连接。这样的连接可增强本发明的抗原结合构建体和二聚体的抗原结合和/或其他性质。
在融合至抗体的Fc区域的C-末端时，每个dAb可位于Fc区域的CH3结构域邻近。预期这不影响对Fc受体(例如，FcγRI、II、III和FcRn)的Fc结合性质，这是因为这些受体与CH2结构域(对于FcγRI、II和III类的受体)，或与CH2和CH3结构域之间的铰链(例如，FcRn受体)衔接。这样的抗原结合构建体的另一个特征是预期两个dAb在空间上都彼此接近，并且如果通过供给适当的接头提供柔性，这些dAb甚至可形成同二聚体种类，因此扩展Fc部分的‘拉链’四级结构，其可增强构建体的稳定性。
适合的接头的实例包括氨基酸序列，其长度可从1个氨基酸至150个氨基酸，或1个氨基酸至140个氨基酸，例如，1个氨基酸至130个氨基酸，或1-120个氨基酸，或1-80个氨基酸，或1-50个氨基酸，或1-20个氨基酸，或1-10个氨基酸，或5-18个氨基酸，或大于7个但小于或等于10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140或150个氨基酸。这样的序列可具有其本身的三级结构，例如，本发明的接头可包含单可变结构域。在一个实施方式中，接头的大小等于单可变结构域。适合的接头可具有1-100埃的大小，例如可以是20-80埃的大小，或例如可以是20-60埃的大小，或例如长度小于40埃，或小于20埃，或小于5埃。
一方面，所述接头的长度大于7个氨基酸，并且小于或等于150个氨基酸。
接头的实例包括但不限于如SEQ ID No. 57至63和66至82所示的那些。
一方面，所述接头选自SEQ ID No.'s 58、60、62、63和75。
在本发明的抗原结合构建体包含两个表位结合结构域的情况下，所述表位结合结构域可通过相同或不同的接头连接至抗体的Fc区域。
一方面，在使用接头将表位结合结构域连接至抗体的Fc区域的N-末端的情况下，所述接头选自SEQ ID No. 58、SEQ ID No. 60和62。在进一步的方面中，N-末端接头是SEQ ID no. 58或SEQ ID No. 60。
一方面，在使用接头将表位结合结构域连接至抗体的Fc区域的C-末端的情况下，所述接头选自SEQ ID No. 63和SEQ ID No. 75。特别优选的接头是SEQ ID No. 63。
一方面，用于本发明的抗原结合构建体中的接头可包含，单独的或除其他接头之外的，一组或更多组的GS残基，例如‘GSTVAAPS’或‘TVAAPSGS’或‘GSTVAAPSGS’。
在一个实施方式中，表位结合结构域通过接头‘(PAS)n(GS)m’、‘(GGGGS)n(GS)m’、‘(TVAAPS)n(GS)m’、‘(GS)m(TVAAPSGS)n’、‘(PAVPPP)n(GS)m’、‘(TVSDVP)n(GS)m’、‘(TGLDSP)n(GS)m’连接至抗体的Fc区域，其中n = 1-10且m = 0-4。
这样的接头的实例包括(PAS)n(GS)m 其中n=1且m=1，(PAS)n(GS)m 其中n=2且m=1，(PAS)n(GS)m 其中n=3且m=1，(PAS)n(GS)m 其中n=4且m=1，(PAS)n(GS)m 其中n=2且m=0，(PAS)n(GS)m 其中n=3且m=0，(PAS)n(GS)m 其中n=4且m=0。
这样的接头的实例包括(GGGGS)n(GS)m 其中n=1且m=1，(GGGGS)n(GS)m 其中n=2且m=1，(GGGGS)n(GS)m 其中n=3且m=1，(GGGGS)n(GS)m 其中n=4且m=1，(GGGGS)n(GS)m 其中n=2且m=0 (SEQ ID NO:49)，(GGGGS)n(GS)m 其中n=3且m=0 (SEQ ID NO:50)，(GGGGS)n(GS)m 其中n=4且m=0。
这样的接头的实例包括(TVAAPS)n(GS)m 其中n=1且m=1，(TVAAPS)n(GS)m 其中n=2且m=1，(TVAAPS)n(GS)m 其中n=3且m=1，(TVAAPS)n(GS)m 其中n=4且m=1，(TVAAPS)n(GS)m 其中n=2且m=0，(TVAAPS)n(GS)m 其中n=3且m=0，(TVAAPS)n(GS)m 其中n=4且m=0。
这样的接头的实例包括(GS)m(TVAAPSGS)n 其中n=1且m=1，(GS)m(TVAAPSGS)n 其中n=2且m=1，(GS)m(TVAAPSGS)n 其中n=3且m=1，或(GS)m(TVAAPSGS)n 其中n=4且m=1，(GS)m(TVAAPSGS)n 其中n=5且m=1，(GS)m(TVAAPSGS)n 其中n=6且m=1，(GS)m(TVAAPSGS)n 其中n=1且m=0，(GS)m(TVAAPSGS)n 其中n=2且m=10，(GS)m(TVAAPSGS)n 其中n=3且m=0，或(GS)m(TVAAPSGS)n 其中n=0。
这样的接头的实例包括(PAVPPP)n(GS)m 其中n=1且m=1，(PAVPPP)n(GS)m 其中n=2且m=1，(PAVPPP)n(GS)m 其中n=3且m=1，(PAVPPP)n(GS)m 其中n=4且m=1，(PAVPPP)n(GS)m 其中n=2且m=0，(PAVPPP)n(GS)m 其中n=3且m=0，(PAVPPP)n(GS)m 其中n=4且m=0。
这样的接头的实例包括(TVSDVP)n(GS)m 其中n=1且m=1，(TVSDVP)n(GS)m 其中n=2且m=1，(TVSDVP)n(GS)m 其中n=3且m=1，(TVSDVP)n(GS)m 其中n=4且m=1，(TVSDVP)n(GS)m 其中n=2且m=0，(TVSDVP)n(GS)m 其中n=3且m=0，(TVSDVP)n(GS)m 其中n=4且m=0。
这样的接头的实例包括(TGLDSP)n(GS)m 其中n=1且m=1，(TGLDSP)n(GS)m 其中n=2且m=1，(TGLDSP)n(GS)m 其中n=3且m=1，(TGLDSP)n(GS)m 其中n=4且m=1，(TGLDSP)n(GS)m 其中n=2且m=0，(TGLDSP)n(GS)m 其中n=3且m=0，(TGLDSP)n(GS)m 其中n=4且m=0。
可使用的进一步的接头公开在WO 2009068649中。
所述抗原结合构建体可额外地包含白蛋白或其片段，其作为接头并且源自人血清白蛋白，例如
Figure 461972DEST_PATH_IMAGE004
Figure 338661DEST_PATH_IMAGE005
和
Figure 161123DEST_PATH_IMAGE006
。所述接头可进一步包含一些额外的残基，例如，它们可包含额外的甘氨酸和丝氨酸残基，或可从接头的任一末端除去氨基酸，例如，在一个方面，除去5个氨基酸。这些额外的残基可以在白蛋白衍生的序列的起始或末端，或者可以在白蛋白衍生的序列内。
一方面，本发明涉及包含两个表位结合结构域的抗原结合构建体，其中每个表位结合结构域是独立选择的dAb且包含与DOM 15-26-593、DOM 15-26-597、DT02-K-044-085、DT02-K-044-251、DT02-K-044-232、DT02-K-044-236或DT02-K-044-255的序列至少97%相同的氨基酸序列。
在进一步的方面，每个表位结合结构域是独立地选自DOM 15-26-593、DOM 15-26-597、DT02-K-044-085、DT02-K-044-251、DT02-K-044-232、DT02-K-044-236和DT02-K-044-255的dAb。
在进一步的方面，连接至单链Fc区域的N-末端的dAb包含与DOM 15-26-597或DT02-K-044-085的序列至少97%相同的氨基酸序列。
在进一步的方面，连接至单链Fc区域的N-末端的dAb是DOM 15-26-597或DT02-K-044-085。
在进一步的方面，连接至单链Fc区域的C-末端的dAb包含与DT02-K-044-085、DT02-K-044-251、DT02-K-044-232、DT02-K-044-236或DT02-K-044-255的序列至少97%相同的氨基酸序列。
在进一步的方面，连接至单链Fc区域的C-末端的dAb是DT02-K-044-085、DT02-K-044-251、DT02-K-044-232、DT02-K-044-236或DT02-K-044-255。
在进一步的方面，本发明的抗原结合构建体是：
(a) DOM 15-26-597–AS–Fc (SEQ ID No. 110)–纤连蛋白x 4–DT02-K-044-085；或
e) (b) DOM 15-26-597–IgG1 铰链–Fc (SEQ ID No. 110)–纤连蛋白x 4–DT02-K-044-085；或
f) (c) 在整个序列上具有至少97%氨基酸同一性的(a)或(b)的变体；或
g) (d) (a)或(b)的变体，其中每条dAb序列与特异的dAb的序列具有至少97%序列同一性。
本发明进一步涉及包含连接至抗体的单链Fc区域的一个表位结合结构域的抗原结合构建体，其中所述表位结合结构域是包含与DT02-K-044-085、DT02-K-044-251、DT02-K-044-232、DT02-K-044-236或DT02-K-044-255的序列至少97%相同的氨基酸序列的dAb，并且进一步地其中所述表位结合结构域能够结合至VEGF。
在又进一步的方面，本发明涉及包含连接至抗体的单链Fc区域的一个表位结合结构域的抗原结合构建体，其中所述表位结合结构域是选自DT02-K-044-085、DT02-K-044-251、DT02-K-044-232、DT02-K-044-236或DT02-K-044-255的dAb。
一方面，所述抗原结合构建体具有以下结构(N末端至C末端)：
a. Fc–接头C- DT02-K-044-085 dAb； 
b. DOM 15-26-593 dAb–接头N- Fc-接头C- DT02-K-044-085 dAb；
c. DOM 15-26-597 dAb–接头N–Fc–接头C–DT02-K-044-085 dAb；
d. DT02-K-044-085 dAb-接头N- Fc-接头C DT02-K-044-085 dAb；
e. Fc–接头C- DT02-K-044-251 dAb；
f. DOM15-26-597 dAb–接头N- Fc-接头C- DT02-K-044-251 dAb； 
g. DT02-K-044-251 dAb–接头N- Fc-接头C- DT02-K-044-251 dAb； 
h. 其中，对于a-g，接头N可以是在SEQ ID NO:57-63 和 SEQ ID NO:76-82中描述的那些的任一种； 
i. 其中，对于a-g，接头C可以是在SEQ ID NO:66-75 和 SEQ ID NO:85-94中描述的那些的任一种； 
j. 其中，对于a-g，Fc可以是在SEQ ID NO:64、65、102 和 SEQ ID NO:83、84、110中描述的那些的任一种； 
k. a-j的任一种的变体，其具有至少97%的氨基酸同一性； 
l. a-j的任一种的变体，其中dAb序列与特异的dAb的序列具有至少97%的同一性。
在进一步的方面，本发明的抗原结合构建体具有以下结构：
dAb1-接头N-Fc-接头C-dAb2，
其中dAb1可由以下定义：
Figure 991938DEST_PATH_IMAGE007
其中接头N可由以下定义：
Figure 190838DEST_PATH_IMAGE008
其中Fc可由以下定义：
Figure 859717DEST_PATH_IMAGE009
其中接头C可由以下定义：
Figure 915398DEST_PATH_IMAGE010
其中dAb2可由以下定义：
Figure 669727DEST_PATH_IMAGE011
在人体中存在能够结合蛋白的天然发生的自身抗体。因此，自身抗体能够结合内源蛋白(存在于首次用于实验的（na?ve）个体中)并结合施用至个体用于治疗的蛋白或肽。结合治疗性蛋白的自身抗体和应答药物治疗而新形成的抗体统称为抗药物抗体(ADA)。针对施用给个体的分子(例如治疗性蛋白和肽)的预先存在的抗体会影响它们的效力，并且能够通过维持、消除或中和所述分子而导致施用反应、超敏感性、在治疗患者中的改变的临床应答和改变的生物利用度。可有利地提供包含具有降低的免疫原性(即，在施用至个体，特别是人个体时，结合预先存在的ADA的能力下降)的人免疫球蛋白(抗体)单可变结构域或dAb的用于治疗的分子。
因此，在本发明的一个方面，提供了修饰的dAb或包含这样的修饰的dAb的抗原结合构建体或二聚体，与等同的未修饰分子相比，其具有降低的结合预先存在的抗体(ADA)的能力。所谓“降低的结合的能力（reduced ability to bind）”是指修饰的分子以降低的亲和力或降低的亲和性结合预先存在的ADA。所述修饰的dAb包含选自以下的一种或多种修饰：(a) C-末端添加、延伸或删除或标签，和/或(b) 一个或多个氨基酸框架取代。
一方面，修饰的dAb或包含这样的修饰的dAb的抗原结合构建体或二聚体包含：
a) 由序列VTVS(S)nX [对于VH dAb]或VEIKpRqX [对于VL dAb]组成的C-末端序列；和还任选地
b) 与人种系框架序列相比，在位置14、41、108、110或112的一个或多个氨基酸取代，
其中：
n代表独立地选自0或1的整数；
p和q各自代表0或1，从而当p代表1时，q可以是0或1，并且从而当p代表0时，q也代表0；
X可以存在或不存在，并且如果存在，则代表1-8个氨基酸残基的氨基酸延伸。
一方面，dAb的C-末端序列是VEIKpRqX，其中p是1且q是0且X不存在。
在进一步的方面，对预先存在的ADAs的结合降低的所述修饰dAb具有一个或多个氨基酸取代，其中所述一个或多个氨基酸取代选自P14A取代、P41A取代、L108A取代、T110A取代、S112A取代、P14K取代、P14Q取代，和P14T取代。
在进一步的方面，X是存在的，并且是1-8个氨基酸的延伸，具体地为包含丙氨酸残基的1-8个氨基酸的延伸，例如单个丙氨酸延伸，或AS、AST、ASTK、ASTKG、ASTKGP延伸。
在进一步的方面，X是存在的，并且是1-8个氨基酸的延伸，具体地为包含A、AAA或T延伸的1-8个氨基酸的延伸。
一方面，修饰的dAb可包含存在于C-末端的标签。所述标签可以是本领域中已知的任何标签，例如亲和标签，例如myc-标签、FLAG标签、his-标签，化学修饰，例如PEG，或蛋白结构域，例如抗体Fc结构域。
所述C-末端添加或延伸或标签可以作为与分子的C-末端的直接融合体或缀合物而存在。
本领域技术人员熟知的免疫测定可用于确认修饰的dAb具有期望的降低的对ADA的结合。
在进一步的方面，本发明涉及本文公开的抗原结合构建体的二聚体。如本文使用的术语“二聚体”是指包含两个抗原结合构建体(即彼此结合形成二聚体的两条链)的多肽复合物。二聚体可以是包含两个相同的本发明的抗原结合构建体的同二聚体，或者是包含两个不同的本发明的抗原结合构建体的异二聚体。本发明的同二聚体和异二聚体可具有改进的性质，例如对于目标VEGF分子的亲和力。
一方面，本发明的同二聚体和异二聚体可以以对抗原为至少1mM的Kd结合VEGF，例如至少10nM、1nM、500pM、200pM、100pM、<100pM、10pM、5pM、1pM的Kd，其如同通过BiacoreTM，例如本文方法中所述的BiacoreTM方法所测量的。
可通过免疫球蛋白恒定结构域或FcRn (新生儿Fc受体)结合结构域的修饰提高本发明的抗原结合构建体和二聚体的体内半衰期。
在成年哺乳动物中，FcRn，也称作新生儿Fc受体，通过充当结合并救援IgG同种型抗体免于被降解的保护性受体而在血清抗体水平的保持中发挥关键作用。IgG分子被内皮细胞内吞，并且如果它们结合至FcRn，则被回收进入循环。相反，没有结合至FcRn的IgG分子进入细胞，并且靶向溶酶体途径，在该途径中被降解。
认为新生儿FcRn受体参与抗体清除和跨组织的转胞吞作用(参见Junghans R.P (1997) Immunol. Res 16. 29-57和Ghetie等人 (2000) Annu.Rev.Immunol. 18, 739-766)。经测定，与人FcRn直接相互作用的人IgG1残基包括Ile253、Ser254、Lys288、Thr307、Gln311、Asn434和His435。在这个部分中所述的这些位置中的任一处的转变可能够提供本发明抗原结合蛋白的增加的血清半衰期和/或改变的效应子性质。
本发明的抗原结合蛋白可具有氨基酸修饰，其提高恒定结构域或其片段对FcRn的亲和力。治疗性和诊断性IgG和其他生物活性分子的半衰期增加具有很多益处，包括减少这些分子的给药量和/或给药频率。因此，在一个实施方式中，提供了本文提供的本发明的抗原结合或融合蛋白，其包含具有这些氨基酸修饰的一个或多个的IgG恒定结构域的全部或部分(FcRn结合部分)，和缀合至这样的修饰的IgG恒定结构域的非IgG蛋白或非蛋白分子，其中所述修饰的IgG恒定结构域的存在提高了抗原结合蛋白的体内半衰期。
PCT公开号WO 00/42072公开了包含具有改变的FcRn结合亲和力的变体Fc区域的多肽，所述多肽包含在任何一个或多个的以下氨基酸位置中的氨基酸修饰：Fc区域的238、252、253、254、255、256、265、272、286、288、303、305、307、309、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、386、388、400、413、415、424、433、434、435、436、439，和447，其中Fc区域中的残基的编号是EU索引的编号(Kabat等人)。
PCT公开号WO 02/060919 A2公开了修饰的IgG，其包含相对于野生型IgG恒定结构域包含一个或多个氨基酸修饰的IgG恒定结构域，其中所述修饰的IgG相对于具有野生型IgG恒定结构域的IgG的半衰期，具有提高的半衰期，并且其中一个或多个氨基酸修饰是在位置251、253、255、285-290、308-314、385-389，和428-435中的一个或多个。Shields等人(2001, J Biol Chem ; 276:6591-604)使用丙氨酸扫描突变以改变人IgG1抗体的Fc区域中的残基，并且随后评估与人FcRn的结合。在改变成丙氨酸时有效地消除与FcRn的结合的位置包括I253、S254、H435，和Y436。显示较低显著的结合下降的其他位置如下：E233-G236、R255、K288、L309、S415，和H433。若干个氨基酸位置显示在改变成丙氨酸时FcRn结合的改进，其中值得注意的是P238、T256、E272、V305、T307、Q311、D312、K317、D376、E380、E382、S424，和N434。很多其他氨基酸位置显示FcRn结合的轻微改进(D265、N286、V303、K360、Q362，和A378)或没有变化(S239、K246、K248、D249、M252、E258、T260、S267、H268、S269、D270、K274、N276、Y278、D280、V282、E283、H285、T289、K290、R292、E293、E294、Q295、Y296、N297、S298、R301、N315、E318、K320、K322、S324、K326、A327、P329、P331、E333、K334、T335、S337、K338、K340、Q342、R344、E345、Q345、Q347、R356、M358、T359、K360、N361、Y373、S375、S383、N384、Q386、E388、N389、N390、K392、L398、S400、D401、K414、R416、Q418、Q419、N421、V422、E430、T437、K439、S440、S442、S444，和K447)。
最显著的效应见于具有改进的FcRn结合的组合变体。在pH 6.0，E380A/N434A变体显示对FcRn的结合比天然IgG1好8倍以上，相比之下，E380A为2倍，且N434A为3.5倍。对其添加T307A产生了相对于天然IgG1为12倍的结合改进。在一个实施方式中，本发明的抗原结合蛋白包含E380A/N434A突变并且具有提高的FcRn结合。
Dall'Acqua等人(2002, J Immunol.169: 5171-80)描述了人IgG1铰链-Fc片段噬菌体展示文库的随机诱变和针对小鼠FcRn的筛选。他们公开了在位置251、252、254-256、308、309、311、312、314、385-387、389、428、433、434，和436的随机诱变。IgG1-人FcRn复合体稳定性的主要改进发生在取代位于跨Fc-FcRn界面的条带上的残基(M252、S254、T256、H433、N434，和Y436)时，并且在较小程度上发生在取代外周残基如V308、L309、Q311、G385、Q386、P387，和N389时。对人FcRn具有最高亲和力的变体通过组合M252Y/S254T/T256E和H433K/N434F/Y436H突变而获得，并且相对于野生型IgG1显示出亲和力中增加57倍。这样的突变人IgG1的体内行为显示，相比于野生型IgG1，在食蟹猴中的血清半衰期中增加近4倍。
因此，本发明提供了具有优化的FcRn结合的抗原结合蛋白的变体。在优选的实施方式中，抗原结合蛋白的所述变体包含在所述抗原结合蛋白的Fc区域中的至少一个氨基酸修饰，其中所述修饰与所述亲本多肽相比选自Fc区域的
Figure 469056DEST_PATH_IMAGE012
Figure 422285DEST_PATH_IMAGE015
和447，其中在所述Fc区域中的氨基酸的编号是在Kabat中的EU索引的编号。
在本发明的进一步的方面，所述修饰是M252Y/S254T/T256E。
此外，多种出版物描述了用于获得生理活性的分子的方法，其中，通过向所述分子引入FcRn结合多肽(WO 97/43316；美国专利号5,869,046；美国专利号5,747,035；WO 96/32478；WO 91/14438)，或通过将所述分子与保留了FcRn结合亲和力但对其他Fc受体的亲和力已大大降低的抗体融合(WO 99/43713)，或与抗体的FcRn结合结构域融合(WO 00/09560；美国专利号4,703,039)，而改变所述分子的半衰期。
此外，还提供了用于产生具有减少的生物半衰期的抗原结合蛋白的方法。其中的His435突变为丙氨酸的变体IgG导致FcRn结合的选择性损失和显著降低的血清半衰期(Firan等人，2001, International immunology 13:993)。美国专利号6,165,745公开了通过在编码抗原结合蛋白的DNA段中引入突变，产生具有减少的生物半衰期的抗原结合蛋白的方法。所述突变包括在Fc铰链结构域的位置253、310、311、433，或434的氨基酸取代。
本发明还涉及本文公开的任何特异的抗原结合构建体序列的变体，例如表位结合结构域序列，例如dAb序列，或整个抗原结合构建体的序列。适合地，所述变体包含与指定的序列具有至少70%，或至少75%，或至少80%，或至少85%，或至少90%，或至少95%，至少96%，至少97%，至少98%，或至少99%序列同一性的氨基酸序列，适合地同时基本保持亲本序列的结合性质，或在所述亲本是多特异性的情况下，保持至少一种结合性质，例如对VEGF (例如VEGF A)的一些结合亲和力。通常，任何变体可具有亲本的结合亲和力的至少30%，适合地至少40%、50%、60%、70％、80%、90%或更多，且适合地具有100%的亲本序列的结合亲和力(或更多)。
一方面，所述抗原结合构建体可改变1、2、3或4个氨基酸，只要所述抗原结合构建体能够结合VEGF，例如VEGF A。
一方面，所述表位结合结构域序列包含来自域抗体(dAb)的一个或多个CDR。本文中确定或涉及的任何序列的CDR可改变1、2、3或4个氨基酸，只要所述抗原结合构建体能够结合VEGF，例如VEGF-A。
CDR定义为抗原结合蛋白的互补性决定区氨基酸序列。这些是免疫球蛋白重链和轻链的高可变区。
除非另有指定，在本说明书全文中，可变结构域序列中的氨基酸残基根据Kabat编号协定进行编号。关于进一步的信息，参见Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第四版，U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)。
以下表格(表1)代表了使用每种编号协定，对各CDR或结合单元的一个定义。在表1中使用Kabat编号方案对可变结构域氨基酸序列进行编号。应注意，一些CDR定义可依据所使用的个别出版物而改变。
表1：CDR的编号协定
Figure 726228DEST_PATH_IMAGE016
一方面，本发明提供了包含两个dAb的抗原结合构建体，其中每个dAb独立地选择且包含：
i) CDR序列SEQ ID No. 111、112和113中的一个或多个；
ii) CDR序列SEQ ID No. 114、115和116中的一个或多个；
iii) CDR序列SEQ ID No. 117、118和119中的一个或多个；
iv) CDR序列SEQ ID No. 120、121和122中的一个或多个；
v) CDR序列SEQ ID No. 123、124和125中的一个或多个；
vi) CDR序列SEQ ID No. 126、127和128中的一个或多个；或
vii) CDR序列SEQ ID No. 129、130和131中的一个或多个。
在进一步的方面，本发明提供了包含两个dAb的抗原结合构建体，其中连接至抗体的Fc区域的N-末端的dAb包含一个或多个CDR序列SEQ ID No. 114、115和116，且连接至抗体的Fc区域的C-末端的dAb包含一个或多个CDR序列SEQ ID No. 117、118和119。
在又进一步的方面，本发明提供了包含一个dAb的抗原结合构建体，其包含：
i) CDR序列SEQ ID No. 117、118和119中的一个或多个；
ii) CDR序列SEQ ID No. 120、121和122中的一个或多个；
iii) CDR序列SEQ ID No. 123、124和125中的一个或多个；
iv) CDR序列SEQ ID No. 126、127和128中的一个或多个；或
v) CDR序列SEQ ID No. 129、130和131中的一个或多个。
一方面，提供了与本文所述的抗原结合构建体或二聚体竞争，例如竞争结合VEGF (例如VEGF A)的抗原结合构建体或二聚体。
一方面，本文所述的抗原结合构建体和二聚体能够与Avastin竞争结合VEGF-A。
可理解，本文所述的任何抗原结合构建体和二聚体均能够中和一种或多种抗原。
在本说明书全文中，与本发明的抗原结合构建体相连使用的术语“中和”及其语法变式是指与在缺少这样的抗原结合构建体的情况下的目标的活性相比，在本发明的抗原结合构建体的存在下，目标的生物活性完全或部分地降低。中和可以由于阻断配体结合、防止配体活化受体、下调受体或影响效应子功能性中的一种或多种而产生，但不限于此。
评估中和的方法，例如通过评估在中和性抗原结合构建体的存在下配体及其受体之间的结合降低，是本领域中已知的，并且包括受体结合测定(参见本文的实施例7、17、26、41和50)和兔视网膜渗漏模型(参见本文的实施例9和42)。
本发明还涉及多核苷酸序列，其编码本发明的抗原结合构建体，或编码部分的此类构建体，例如表位结合结构域序列。适合地，所述多核苷酸编码能够结合VEGF (例如VEGF-A)的多肽。本发明还涉及多核苷酸序列，其编码与该抗原结合构建体或其部分具有至少70%序列同一性的抗原，例如至少75%，至少80%，至少85%，至少90%，至少91%，至少92%，至少93%，至少94%，至少95%，至少96%，至少97%，至少98%，至少99%的序列同一性。一方面，所述抗原结合构建体或其部分能够结合VEGF (例如VEGF-A)，并且完全或部分地预防或治疗与VEGF (例如VEGF-A)信号转递相关的疾病。
本发明还涉及多核苷酸序列，其与本文公开的特定多核苷酸序列具有至少70%的序列同一性，例如至少75%，至少80%，至少85%，至少90%，至少91%，至少92%，至少93%，至少94%，至少95%，至少96%，至少97%，至少98%，至少99%的同一性。
本发明的抗原结合构建体可通过使用包含本发明的抗原结合构建体的编码序列的表达载体转染宿主细胞而产生。通过与能够控制在宿主细胞中复制和表达和/或从其中分泌的常规调控序列可操作结合的方式放置所述抗原结合构建体的这些编码序列，而产生表达载体或重组质粒。调节序列包括启动子序列，例如CMV启动子，和可源自其他已知抗体的信号序列。类似地，可生产具有编码互补抗原结合构建体的DNA序列的第二表达载体。在某些实施方式中，除了在所涉及的编码序列和选择标志物的范围内之外，该第二表达载体与第一表达载体相同，从而尽可能地确保每条多肽链功能性地表达。或者，形成同二聚体或异二聚体的两个抗原结合构建体的编码序列可位于单一载体上，例如在相同载体的两个表达盒中。
一方面，本发明涉及重组转化或转染的宿主细胞，其包含编码如本文所述的抗原结合构建体、同二聚体或异二聚体的一个或多个多核苷酸序列。
通过常规技术，可以用第一载体和第二载体共转染(或简单地通过单个载体转染)所选择的宿主细胞，以产生本发明的转染的宿主细胞。随后，通过常规技术培养转染的细胞，以产生本发明的工程化抗原结合构建体、同二聚体或异二聚体。通过适合的测定，例如ELISA或RIA，从培养物筛选所述抗原结合构建体、同二聚体或异二聚体。可采用类似的常规技术构建如本文公开的其他抗原结合构建体、同二聚体或异二聚体。
本领域技术人员可选择用于本发明的方法和组合物的构建中使用的克隆和亚克隆步骤的适合的载体。例如，可使用常规的pUC序列的克隆载体，例如pUC19。此外，能够容易地复制、具有丰富的克隆位点和选择性基因(例如，抗生素抗性)且易于操作的任何载体均可用于克隆。因此，克隆载体的选择不是本发明中的限制因素。
表达载体还可通过适合用于扩增异源DNA序列(例如哺乳动物二氢叶酸还原酶基因(DHFR))的表达的基因来表征。其他优选的载体序列包括聚A信号序列，例如来自牛生长激素(BGH)和β珠蛋白启动子序列(betaglopro)。可用于本文的表达载体可通过本领域技术人员熟知的技术合成。
此类载体的组件，例如复制子、选择基因、增强子、启动子、信号序列等，可从商业或天然来源获得，或通过已知的程序合成，用于在指导在所选的宿主中表达和/或分泌重组DNA的产物。在本领域中已知其很多类型的用于哺乳动物、细菌、昆虫、酵母和真菌表达的其他适合的表达载体也可选择用于此目的。
本发明还涵盖使用包含编码本发明的抗原结合构建体、同二聚体或异二聚体的编码序列的重组质粒转染的细胞系。用于这些克隆载体的克隆和其他操作的宿主细胞也是常规的。然而，来自多种大肠杆菌菌株的细胞可用于克隆载体的复制以及本发明的抗原结合构建体、同二聚体或异二聚体构建中的其他步骤。
用于表达本发明的抗原结合构建体、异二聚体或同二聚体的适合的宿主细胞或细胞系包括哺乳动物细胞，例如NS0、Sp2/0、CHO (例如DG44)、COS、HEK，成纤维细胞(例如3T3)和骨髓瘤细胞，例如它可以在CHO或骨髓瘤细胞中表达。可使用人细胞，以使得所述分子能够以人糖基化模式修饰。或者，可采用其他真核细胞系。适合的哺乳动物宿主细胞的选择和用于转化、培养、扩增、筛选和产物生产和纯化的方法是本领域中已知的。参见例如Sambrook, J., Fritsch, E., Maniatis, T. 1989: Cold Spring harbour Press, Molecular Cloning: Laboratory Manual。
本领域技术人员已知的细菌细胞和期望的酵母细胞菌株也可用作宿主细胞，以及昆虫细胞（例如果蝇和鳞翅目）和病毒表达***。参见，例如Miller等人，Genetic Engineering, 8:277-298, Plenum Press (1986)以及该文献中引用的文献。
在另一个方面，本发明涉及用于产生如本文所述的抗原结合构建体、同二聚体或异二聚体的方法，所述方法包括培养宿主细胞和分离所述抗原结合构建体、同二聚体或异二聚体的步骤。
本发明还提供了用于产生如本文所述的抗原结合构建体、同二聚体或异二聚体的方法，其包括以下步骤：
a) 培养包含表达载体的重组宿主细胞，所述表达载体包含如本文所述的分离的核酸，其中，在所述重组宿主细胞中编码α-1,6-岩藻糖基转移酶的FUT8基因已被失活；和 
b) 回收所述抗原结合蛋白。
用于产生抗原结合构建体、异二聚体和同二聚体的这样的方法可以，例如，使用可得自于BioWa, Inc. (Princeton, NJ)的POTELLIGENT?技术***进行，其可产生具有增强的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性的抗原结合构建体、同二聚体和异二聚体，所述活性相对于在具有有功能的FUT8基因的细胞中产生的相同蛋白提高。POTELLIGENT?技术***的方面描述在US7214775、US6946292、WO0061739和WO0231240中，所有这些均通过引用并入本文。本领域普通技术人员也可认知其他适合的***。
本发明还提供了用于产生如本文所述的抗原结合构建体、同二聚体或异二聚体的方法，其包括以下步骤：
a) 培养包含表达载体的重组宿主细胞，所述表达载体包含如本文所述的分离的核酸，其中所述表达载体包含编码具有IgG1和IgG3 Fc结构域氨基酸残基的Fc结构域的核酸序列；和
b) 回收所述抗原结合蛋白。
用于生产抗原结合构建体、异二聚体和同二聚体的这样的方法可以，例如，使用可得自于BioWa, Inc. (Princeton, NJ)和Kyowa Hakko Kogyo (现在为Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd.) Co., Ltd.的COMPLEGENT?技术***进行，其中重组宿主细胞包含这样的表达载体，其中表达编码具有IgG1和IgG3 Fc结构域氨基酸残基的嵌合Fc结构域的核酸序列，以产生具有增强的补体依赖性细胞毒性(CDC)活性的抗原结合构建体、异二聚体或同二聚体，所述活性相对于缺少此类嵌合Fc结构域的其他方面相同的蛋白提高。COMPLEGENT?技术***的方面描述在WO2007011041和US20070148165中，各自均通过引用并入本文。在可选的实施方式中，可通过将序列特定突变引入到IgG链的Fc区域中而提高CDC活性。本领域普通技术人员也可认知其他适合的***。
对本领域技术人员显而易见的是，这样的修饰不仅可单独使用，也可彼此组合使用以进一步增强效应子功能。
在本发明的一个方面，提供了包含重链恒定区的抗原结合构建体、异二聚体或同二聚体，所述重链恒定区包含突变且嵌合的重链恒定区，其包含至少一个来自IgG3的CH2结构域和一个来自IgG1的CH2结构域，其中所述IgG1 CH2结构域在选自239和332和330的位置具有一个或多个突变(例如，所述突变抗原可选自S239D和I332E和A330L)，从而使所述抗原结合蛋白具有增强的效应子功能，例如其中它具有一种或多种以下功能：增强的ADCC或增强的CDC，例如其中它具有增强的ADCC和增强的CDC。一方面，所述IgG1 CH2结构域具有突变S239D和I332E。
在本发明的可选方面，提供了包含嵌合重链恒定区的抗原结合构建体、异二聚体或同二聚体，并且其具有改变的糖基化概况。在一个这样的方面中，所述重链恒定区包含至少一个来自IgG3的CH2结构域和一个来自IgG1的CH2结构域，并且具有改变的糖基化概况，以使岩藻糖对甘露糖的比例为0.8:3或更小，例如其中所述抗原结合蛋白是脱岩藻糖化的，以使所述抗原结合蛋白与具有缺少所述突变和改变的糖基化概况的免疫球蛋白重链恒定区的等同的抗原结合蛋白相比具有增强的效应子功能，例如其中它具有一种或多种以下功能：增强的ADCC或增强的CDC，例如其中它具有增强的ADCC和增强的CDC。
在本发明的一个方面，提供了用于产生如本文所述的抗原结合构建体、异二聚体或同二聚体的方法，其使用可得自于BioWa, Inc. (Princeton, NJ)的ACCRETAMAB?技术***，该技术***将POTELLIGENT?和COMPLEGENT?技术***组合，以产生具有ADCC和CDC活性均增强的抗原结合蛋白，所述活性相对于缺少嵌合Fc结构域且在寡糖上具有岩藻糖的其他方面相同的单克隆抗体提高。
表达抗原结合构建体的另一个方法可利用在转基因动物中的表达，例如在美国专利号4,873,316中所述。这涉及使用动物酪蛋白启动子的表达***，该表达***在转基因整合入哺乳动物中时允许雌性动物在其乳汁中生产期望的重组蛋白。
本发明还涉及用于产生如本文公开的抗原结合构建体的方法，其中使用计算机设计抗原结合构建体的氨基酸序列或编码它的核酸、或其部分，并且其中所述构建体经由计算机模拟(in silico)而存在于计算机中。
本发明还提供了本文公开的抗原结合构建体，其用于药物，例如用于制造用于治疗与VEGF信号转递(例如VEGF-A信号转递)相关的疾病的药物，所述疾病例如癌症和眼部疾病，例如糖尿病性黄斑水肿(DME)、湿式AMD (年龄相关性黄斑变性)、糖尿病性视网膜病变、RVO (视网膜静脉阻塞)、和角膜新生血管形成。
本发明还涉及治疗患有由VEGF信号转递(例如VEGF-A)导致的眼部血管疾病的患者的方法，所述疾病例如癌症和眼部疾病，例如糖尿病性黄斑水肿(DME)、湿式AMD、糖尿病性视网膜病变、RVO、和角膜新生血管形成，所述方法包括施用治疗量的本发明的抗原结合构建体。
本发明还涉及本发明的抗原结合构建体，其用于治疗癌症和眼部疾病，例如糖尿病性黄斑水肿(DME)、湿式AMD、糖尿病性视网膜病变、RVO、和角膜新生血管形成。
治疗的剂量和持续时间涉及本发明的分子在人循环中的相对持续时间，并且可由本领域技术人员依据所治疗的病况和患者的一般健康状况进行调整。设想可能需要在延长的时间周期(例如，4-6个月)期间重复给药(例如，每周一次或每2周一次)，以达到最大治疗效力。
本发明的治疗剂的施用模式可以是将药剂递送至宿主的任何适合的途径。本发明的抗原结合构建体和药物组合物对于胃肠外施用特别有用，即，皮下(s.c.)、鞘内、腹膜内、肌内(i.m.)、静脉内(i.v.)、或鼻内施用。
一方面，所述施用是用于眼部指征，并且所述施用是通过局部眼递送，例如玻璃体内递送(直接注射到眼睛的玻璃体中)，或者是眼周递送，例如，如经巩膜、结膜下、筋膜下(sub-tenon)、眼球周、局部、眼球后递送，或递送至下直肌、上直肌或外直肌。一方面，所述施用是通过经巩膜或眼局部递送。
对于向眼睛的局部施用，例如通过玻璃体内注射，药物制剂可以以高至100μL的总体积施用，例如50-100μL，通过带有25-30g的针规的标准注射器单次注射来施用，例如通过带有30g针的标准注射器施用50μl体积。如果配制用于不频繁施用，则此类制剂可包含在液体体积内高至15%的固体悬浮液。这样的制剂中的活性药物的剂量可改变，但在优选的方面，可包括高至25-30%的固体悬浮液。在优选的方面，通过眼周（perocular）施用，施用0.5 -2.5mg的活性药物。
一方面，所述施用适合地以与每月注射方案相比时降低的施用频率来使用持续释放或缓释***，例如基于微粒或凝胶的***，或基于脂质体的***或本领域技术人员已知的可允许向眼睛局部施用的任何其他***。这样的方案可允许低于每周一次或每两周一次的频率递送，并且例如可以是每4周一次，每2个月或8周一次，每3个月或12周一次，每4个月或16周一次，每5个月或20周一次，每6个月或24周一次，每9个月或36周一次，或每12个月或52周一次。本发明的抗原结合构建体、异二聚体和同二聚体的优选递送频率是每6个月或24周一次。
本发明的治疗剂可作为药物组合物制备，其包含在药学上可接受的载体中的作为活性成分的有效量的本发明的抗原结合构建体、同二聚体或异二聚体。在本发明的预防剂中，优选以即开即可用于注射的形式的包含抗原结合构建体的含水悬浮液或溶液，优选在生理pH下缓冲。用于胃肠外施用的组合物通常可包含溶解在药学上可接受的载体(优选含水载体)中的本发明的抗原结合构建体或其混合物的溶液。可采用多种含水载体，例如0.9%盐水、0.3%甘氨酸等。这些溶液可制备成无菌的，并且通常不含颗粒物质。这些溶液可通过常规的熟知的灭菌技术(例如，过滤)灭菌。所述组合物可包含对于适当的生理条件所需的药学上可接受的辅助物质，例如pH调节剂和缓冲剂等。本发明的抗原结合构建体在这样的药物制剂中的浓度可宽泛地变化，即从小于约0.5重量%，通常为约1重量%或至少约1重量%，至高达15或20重量%，并且可根据所选的具体施用模式，主要基于流体体积、粘度等进行选择。
因此，可制备本发明用于肌内注射的药物组合物，以包含1 mL无菌缓冲水和约1 ng至约100 mg之间，例如约50 ng至约30 mg或更多，优选约5mg至约25mg的本发明的抗原结合构建体。类似地，可制备本发明用于静脉内输注的药物组合物，以包含约250 ml的无菌林格氏溶液，和每ml林格氏溶液约1至约30，且优选5 mg至约25 mg的本发明的抗原结合构建体。用于制备胃肠外可施用的组合物的实际方法是本领域技术人员熟知或将是显而易见的，并且更详细描述于，例如Remington's Pharmaceutical Science，第15版，Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania。关于本发明的静脉内可施用的抗原结合构建体制剂的制备，参见Lasmar U和Parkins D “The formulation of Biopharmaceutical products”, Pharma. Sci.Tech.today, 第129-137页, Vol.3 (2000年4月3日)；Wang, W “Instability, stabilisation and formulation of liquid protein pharmaceuticals”, Int. J. Pharm 185 (1999) 129-188；Stability of Protein Pharmaceuticals Part A and B ed Ahern T.J., Manning M.C., New York, NY: Plenum Press (1992)；Akers,M.J. “Excipient-Drug interactions in Parenteral Formulations”, J.Pharm Sci 91 (2002) 2283-2300；Imamura, K等人，“Effects of types of sugar on stabilization of Protein in the dried state”, J Pharm Sci 92 (2003) 266-274；Izutsu, Kkojima, S. “Excipient crystalinity and its protein-structure-stabilizing effect during freeze-drying”, J Pharm. Pharmacol, 54 (2002) 1033-1039；Johnson, R, “Mannitol-sucrose mixtures-versatile formulations for protein lyophilization”, J. Pharm. Sci, 91 (2002) 914-922；Ha, E Wang W, Wang Y.j. “Peroxide formation in polysorbate 80 and protein stability”, J. Pharm Sci, 91, 2252-2264,(2002)，这些文献的全部内容均通过引用并入本文，并且读本具体提及所述文献。
优选本发明的治疗剂，当在药物制剂中时，以单位剂量形式存在。适合的治疗有效剂量可由本领域技术人员容易地确定。对于患者，可根据其体重计算适合的剂量，例如适合的剂量可以在0.01-20mg/kg的范围内，例如0.1-20mg/kg，例如1-20mg/kg，例如10-20mg/kg，或例如1-15mg/kg，例如10-15mg/kg。为了有效治疗在人中用于本发明的病况，适合的剂量可以在0.01-1000 mg的范围内，例如0.1-1000mg，例如0.1-500mg，例如500mg，例如0.1-100mg，或0.1-80mg，或0.1-60mg，或0.1-40mg，或例如1-100mg，或1-50mg的本发明的抗原结合构建体，其可以胃肠外施用，例如皮下、静脉内或肌内施用。如果有必要，这样的剂量可在由医师适当选择的适当的时间间隔重复。
可将本文所述的抗原结合构建体冻干用于贮存，并在使用前在适合的载体中重构。此技术已显示对常规免疫球蛋白有效，并且可采用本领域已知的冻干和重构技术。
本领域中已知有若干种方法可用于产生用于本发明中的表位结合结构域。
在一个实例中，所述方法采用将核酸的编码功能与核酸编码的多肽的物理、化学和/或功能特征连接的展示***。这样的展示***可包含多个可复制的遗传包(genetic package)，例如噬菌体或细胞(细菌)。所述展示***可包含文库，例如噬菌体展示文库。噬菌体展示库是展示***的实例。
术语“文库”是指不同种类的多肽或核酸的混合物。文库由成员构成，每个成员具有单条多肽或核酸序列。在这种程度上，“文库”与“所有组成成分(repertoire)”同义。文库成员之间的序列差异是造成文库中存在的多样性的原因。文库可采取多肽或核酸的简单混合物的形式，或者可以是由核酸的文库转化的生物或细胞的形式，例如细菌、病毒、动物或植物细胞等。在一个实例中，每个体生物或细胞仅包含一个或有限数量的文库成员。有利地，将核酸整合入到表达载体中，以允许由所述核酸编码的多肽的表达。因此，一方面，文库可采取宿主生物群的形式，每个生物包含一个或多个拷贝的表达载体，所述表达载体包含核酸形式的单一文库成员，所述核酸可以表达以产生其相应的多肽成员。因此，宿主生物群具有编码不同多肽的大量的所有组成成分的潜力。
现已描述了大量适合的噬菌体展示***(例如，单价展示和多价展示***)。(参见，例如Griffiths等人，美国专利号6,555,313 B1 (通过引用并入本文)；Johnson等人，美国专利号5,733,743 (通过引用并入本文)；McCafferty等人，美国专利号5,969,108 (通过引用并入本文)；Mulligan-Kehoe，美国专利号5,702,892 (通过引用并入本文)；Winter, G.等人，Annu. Rev. Immunol. 12:433-455 (1994)；Soumillion, P. 等人，Appl. Biochem. Biotechnol. 47(2-3):175-189 (1994)；Castagnoli, L.等人，Comb. Chem. High Throughput Screen, 4(2):121-133 (2001)。) 在噬菌体展示***中展示的肽或多肽可在任何适合的噬菌体上展示，诸如例如丝状噬菌体(例如，fd、M13、F1)，裂解性噬菌体(例如，T4、T7、λ)，或RNA噬菌体(例如，MS2)。
当展示***(例如，连接核酸的编码功能和所述核酸编码的肽或多肽的功能特征的***)，例如噬菌体展示，用于本文所述的方法时，例如在dAb或其他表位结合结构域的选择中，扩增或增加编码所选的肽或多肽的核酸的拷贝数常常是有利的。这提供了获得足够量的核酸和/或肽或多肽的有效途径，以用于使用本文所述的方法或其他适合的方法的额外轮次的选择，或用于制备额外的所有组成成分(例如亲和力成熟的所有组成成分)。可使用任何适合的方法扩增核酸，例如通过噬菌体扩增、细胞生长或聚合酶链反应。
通常，产生或提供展示作为与适合的噬菌体外壳蛋白(例如，fd pIII蛋白)的融合蛋白的肽或噬菌体多肽的所有组成成分的噬菌体文库。所述融合蛋白可以在噬菌体外壳蛋白的顶部，或者如果需要则在内部位置，展示肽或多肽。例如，所展示的肽或多肽可存在于pIII的结构域1的氨基末端的位置。(pIII的结构域1也称作N1)。所展示的多肽可直接融合至pIII (例如pIII的结构域1的N-末端)，或使用接头融合至pIII。如果需要，所述融合体可进一步包含标签(例如，myc表位，His标签)。包含作为与噬菌体外壳蛋白的融合蛋白展示的肽或多肽的所有组成成分的文库可以使用任何适合的方法生产，例如通过将编码所展示的肽或多肽的噬菌体载体或噬菌粒载体的文库引入到适合的宿主细菌中，并培养所得细菌以生产噬菌体(例如，如需要，使用适合的辅助噬菌体或互补质粒)。可以使用任何适合的方法，例如沉淀和离心，从培养物回收噬菌体的文库。
所述展示***可包含肽或多肽的所有组成成分，其包含任何期望量的多样性。例如，所有组成成分可包含具有对应于由生物、生物的组、期望的组织或期望的细胞类型表达的天然发生的多肽的氨基酸序列的肽或多肽，或者可包含具有随机的或随机化的氨基酸序列的肽或多肽。如果需要，所述多肽可共有共同的核心或支架。例如，在所有组成成分或文库中的所有多肽可基于选自以下的支架：蛋白A、蛋白L、蛋白G、纤连蛋白结构域、抗运载蛋白（anticalin）、CTLA4、期望的酶(例如，聚合酶、纤维素酶)，或来自免疫球蛋白超家族的多肽，例如抗体或抗体片段(例如，抗体可变结构域)。在这样的所有组成成分或文库中的多肽可包含随机或随机化的氨基酸序列的确定区域和共有氨基酸序列的区域。在某些实施方式中，所有组成成分中的所有或基本所有的多肽都是期望的类型，例如期望的酶(例如，聚合酶)，或抗体的期望的抗原结合片段(例如，人VH或人VL)。在一些实施方式中，多肽展示***包含多肽的所有组成成分，其中每种多肽包含抗体可变结构域。例如，所有组成成分中的每种多肽可包含VH、VL或Fv (例如，单链Fv)。
可使用任何适合的方法，将氨基酸序列多样性引入到肽或多肽或支架的任何期望的区域中 例如，可使用任何适合的诱变方法(例如，低保真PCR、寡核苷酸介导的诱变或定点诱变、使用NNK密码子的多样化)或任何其他适合的方法，通过制备编码多样化的多肽的核酸的文库，将氨基酸序列多样性引入到目标区域，例如抗体可变结构域或疏水结构域的互补性决定区。如果需要，可将待多样化的多肽区域随机化。
构成所有组成成分的多肽的大小在很大程度上是选择的问题，并且不需要一致的多肽大小。所有组成成分中的多肽可至少具有三级结构(形成至少一个结构域)。
可以使用任何适合的方法，从所有组成成分或文库(例如，在展示***中)选择、分离和/或回收表位结合结构域或结构域的群体。例如，基于可选择的特征(例如，物理特征、化学特征、功能特征)，选择或分离结构域。适合的可选择的功能特征包括所有组成成分中的肽或多肽的生物活性，例如对通用配体(例如，超级抗原)的结合，对目标配体(例如，抗原、表位、底物)的结合，对抗体(例如，通过在肽或多肽上表达的表位)的结合，和催化活性。(参见，例如Tomlinson等人，WO 99/20749；WO 01/57065；WO 99/58655)。
免疫球蛋白超家族的成员对于其多肽链均具有类似的折叠。例如，尽管抗体在其一级序列方面高度不同，但序列和晶体结构比较已经揭示，与预期不同，抗体的6个抗原结合环中的5个(H1、H2、L1、L2、L3)采用有限数量的主链构象，或正则结构（canonical structures）(Chothia和Lesk (1987) J. Mol. Biol., 196: 901；Chothia等人，(1989) Nature, 342: 877)。因此，对环长度和关键残基的分析已经能够预测见于大部分人抗体中的H1、H2、L1、L2和L3的主链构象(Chothia等人，(1992) J. Mol. Biol., 227: 799；Tomlinson等人，(1995) EMBO J., 14: 4628；Williams等人，(1996) J. Mol. Biol., 264: 220)。尽管H3区域在序列、长度和结构方面的多样性大得多(由于D段的应用)，但它对于短环长度也形成有限数量的主链构象，这取决于长度和在环和抗体框架中的关键位置上的具体残基的存在或残基的类型(Martin等人，(1996) J. Mol. Biol., 263: 800；Shirai等人，(1996) FEBS Letters, 399: 1)。
有利地，从结构域的文库组装dAb，例如VH结构域的文库和/或VL结构域的文库。一方面，将结构域的文库设计为其中某些环的长度和关键残基已经过选择以确保成员的主链构象是已知的。有利地，如上文的讨论，这些是在自然界中发现的免疫球蛋白超家族分子的真实构象，以将它们无功能的可能性降到最低。可发生低频率的变化，从而使少数功能成员可具有改变的主链构象，这不影响其功能。
在已选择若干个已知的主链构象或单个已知的主链构象的情况下，可通过改变分子的结合位点构建dAb，从而产生具有结构和/或功能多样性的所有组成成分。这意味着产生变体，以使它们在其结构和/或在其功能上具有足够的多样性，从而使它们能够提供一定范围的活性。
一方面，本发明包括与本文所述序列基本上相同的序列，例如与本文所述序列至少90%相同的序列，例如与本文所述序列至少91%，或至少92%，或至少93%，或至少94%，或至少95%，或至少96%，或至少97%，或至少98%，或至少99%相同的序列。
对于核酸，术语“基本同一性”是指两个核酸或其指定的序列，在使用适合的核苷酸***或删除的最佳比对和比较时，至少约80%的核苷酸，通常至少约90%至95%，且更优选至少约98%至99.5%的核苷酸是相同的。或者，在片段将在选择性杂交条件下与链的互补链杂交时，存在基本同一性。
对于核苷酸和氨基酸序列，术语“相同”是指在使用适合的***或删除的最佳比对和比较时，两条核酸或氨基酸序列之间的同一性程度。或者，在DNA段可在选择性杂交条件下与链的互补链杂交时，存在基本同一性。
在考虑需要引入缺口数目以及每一缺口长度以进行两条序列的最优比对的情况下，两条序列之间的同一性百分比是所述序列共享的相同位置的数目的函数(即，同一性% = 相同位置的数目/位置的总数 X 100)。如下文的非限定实例中所述，序列的比较以及两条序列之间同一性百分比的确定可使用数学算法完成。
可使用GCG软件包中的GAP程序，使用NWSgapdna.CMP矩阵，以及40、50、60、70或80的缺口权重和1、2、3、4、5或6的长度权重确定两条核苷酸序列之间的同一性百分比。还可以使用已经整合入ALIGN程序(2.0版)的E. Meyers和W. Miller (Comput. Appl. Biosci., 4:11-17 (1988))的算法，使用PAM120权重残基表、12的缺口长度罚分和4的缺口罚分，确定两条核苷酸或氨基酸序列之间的同一性百分比。此外，可以使用已经整合入GCG软件包的GAP程序中的Needleman和Wunsch (J. Mol. Biol. 48:444-453 (1970))算法，使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵，和16、14、12、10、8、6或4的缺口权重和1、2、3、4、5或6的长度权重，确定两条氨基酸序列之间的同一性百分比。
举例而言，本发明的多核苷酸序列可以与参考序列相同，即100%相同，或者它可以包含与参考序列相比高至某个整数的核苷酸改变。这样的改变选自至少一个核苷酸删除、取代（包括转换(transition)和易位(transversion)）、或***，并且其中所述改变可发生在参考核苷酸序列的5'或3'末端位置，或这些末端位置之间的任何位置，单独地散布在参考序列的核苷酸之间，或者在参考序列内的一个或多个连续的组中。核苷酸改变数目的确定是通过在参考序列中的核苷酸总数乘以各自同一性百分比的数字百分比(除以100)并从所述参考序列的核苷酸总数中减去将该乘积，或：
nn ≤ xn - (xn · y)，其中nn是核苷酸改变的数目，xn是参考序列中的核苷酸的总数，并且y对于50%同一性是0.50，对于60%同一性是0.60，对于70%同一性是0.70，对于80%同一性是0.80，对于85%同一性是0.85，对于90%同一性是0.90，对于95%同一性是0.95，对于97%同一性是0.97，或对于100%同一性是1.00，并且其中在将xn与y的任何非整数乘积从xn中减去之前，将其下舍入至最近的整数。参考序列的多核苷酸序列的变化可在其编码序列中产生无义突变、错义突变或移码突变，并且由此在这样的改变后改变了由所述核苷酸编码的多肽。
类似地，在另一个实例中，本发明的多肽序列可以与参考序列相同，即100%相同，或者它可以包含与参考序列相比高至某个整数的氨基酸改变，从而使同一性%小于100%。这样的改变选自至少一个氨基酸删除、取代（包括保守和非保守的取代）、或***，并且其中所述改变可发生在参考多肽序列的氨基末端或羧基末端位置，或这些末端位置之间的任何位置，单独地散布在参考序列的氨基酸之间，或者在参考序列内的一个或多个连续的组中。对于给定同一性%，氨基酸改变数目的确定是通过由参考序列编码的多肽序列中的氨基酸总数乘以各自同一性百分比的数字百分比(除以100)并从所述多肽参考序列的氨基酸总数中减去将该乘积，或
na≤xa - (xa · y)，
其中，na是氨基酸改变的数目，xa是多肽序列中氨基酸的总数，并且y是例如对于70%为0.70，对于80%为0.80，对于85%为0.85等，并且其中在将xa与y的任何非整数乘积从xa中减去之前，将其下舍入最近的整数。
本发明的主要特征可用于多种实施方式中而不背离本发明的范围。本领域技术人员可仅使用常规研究而认识到或能够确定本文所述具体方案的大量等价方案。认为这样的等价方案在本发明的范围之内并且受权利要求的保护。本说明书中提到的所有出版物和专利申请均可表示本发明所属领域技术人员的技术水平。所有出版物和专利申请均以相同程度通过引用并入本文，就如同明确且单独地指明每一单独的出版物或专利申请通过引用并入本文一样。在权利要求书和/或说明书中，当与术语“包含”连接使用时，措辞“一个(a)”或“一个(an)”的使用可以表示“一个（one）”，但也符合“一个或多个”、“至少一个”以及“一个或多于一个”的含义。除非明确指明指代仅可选物或者可选物是相互排斥的，否则权利要求书中术语“或”的使用用于指代“和/或”，尽管本公开支持指代仅可选物以及“和/或”的定义。在本申请全文中，术语“约”用于指代数值，其包括用于测定该数值的设备、方法的内在误差变化，或在研究对象之间存在的变化。
本文使用的术语“或其组合”是指在该术语之前列出的项目的所有排列和组合。例如，“A、B、C，或其组合”意指包括以下的至少一种：A、B、C、AB、AC、BC、或ABC，并且如果在具体上下文中的顺序是重要的，则还包括BA、CA、CB、CBA、BCA、ACB、BAC，或CAB。
实施例
可理解，本文所述的具体实施方式以说明的方式展示，并不作为对本发明的限制。
在全部实施例中，引用了dAb-Fc、Fc-dAb和dAb-Fc-dAb分子。术语“dAb-Fc”和“Fc-dAb”是包含两个抗原结合构建体的二聚体的简单引用，其中每个抗原结合构建体具有直接或通过接头间接连接至N-末端(dAb-Fc)或C-末端(Fc-dAb)的dAb。
简单地，术语“dAb-Fc-dAb”是指包含两个抗原结合构建体的二聚体，其中每个抗原结合构建体具有直接或通过接头间接连接至N-末端的dAb和连接至C-末端的dAb。
实施例1 － Vh dAb-Fc分子的表达
DMS1529，(SEQ ID NO:1 和 29)，已经描述在WO2008/149150/A20。通过从DMS1529的定点诱变，将氨基酸56从Y转变为N，产生DMS1576，(SEQ ID NO:2 和 30)。DMS1529和DMS1576从CHROMOS合并的(或整体)转染物生产，或使用摇瓶和搅拌罐悬浮培养的组合利用GlaxoSmithKline的一般单克隆抗体生产方法平台，从稳定的多克隆或单克隆CHO细胞系生产。监测生物反应器，并维持在搅动速度、溶解氧浓度、pH和温度的受控条件。通过添加N2中40% O2维持溶解氧，同时通过自动添加碳酸钠和CO2控制pH。从细胞存活力和最小抗体效价的组合测定生产培养持续时间。在生产期的末端，通过深度过滤和灭菌过滤澄清生物反应器中的培养物，从而产生批量的澄清的未加工部分(CUB)。
实施例2 － Vh dAb-Fc分子的纯化
使用亲和层析和自动FPLC纯化***，从澄清的细胞培养上清(CUB，实施例1)中捕获DMS1529和DMS1576。一经上样，则使用pH中性的含水缓冲液组合清洗结合的产物，以除去非特异性结合的杂质，随后进行低pH洗脱。回收90%以上的结合产物，并且随后将洗脱合并物的pH调整至pH 3.5，进行30分钟以完成病毒中和，此时间后将pH调整至pH 4.5。如果需要进一步纯化，则进行进一步的pH调整以实现在第二柱上的结合。在结合后，在相同pH下在低电导率缓冲液中清洗产物，以进一步除去非特异性结合的杂质。随后，使用pH和盐替换（salt shift）洗脱纯化的dAb-Fc，并在0.2um过滤和贮存前收集作为合并物。除非另有说明，在以下实施例中描述的体外测定中分析仅使用第一亲和柱制备的蛋白的VEGF结合，然而，在将检测材料进一步纯化，即使用第二柱时，可制备参照物。
实施例3 －通过SDS-PAGE和体积排阻层析(SEC)的分子分析
通过在还原和非还原两种条件下的SDS-PAGE和分析性体积排阻层析(SEC)分析DMS1529和DMS1576的分子完整性、同质性和纯度百分比(%)。根据制造商的说明书，使用Novex “NuPAGE”***进行SDS-PAGE分析，并使用瞬时蓝蛋白染色溶液(Triple Red Ltd)染色凝胶。凝胶显示与完整成熟蛋白的预测分子量相符的条带大小(~76-79kDa)，其允许每个单体链存在预测的多糖链。使用TSK凝胶G2000SWXL柱(TOSOH, BioScience)进行SEC。以0.5ml/min的流速使用中性pH的基于磷酸钠/氯化钠的流动相。纯化蛋白(以约1mg/ml)的标准样品注射体积为10ul。在214 和 280nm处监测柱流出液的UV吸光度。将所有蛋白相关的峰面积积分，以确定与分子相关的峰的纯度。在生物测定中进一步分析之前，通过SDS-PAGE和SEC确定蛋白为>95%的纯目标蛋白(数据未显示)。
实施例4 － VEGF结合ELISA
通过ELISA测定DMS1529和DMS1576特异性结合至VEGF165的能力，并与贝伐单抗(Avastin，来自Phillip Chapper 和 Co. Ltd., UK的临床药物产品)的所述能力进行比较。使用100ul 25ug/ml的hVEGF165 (GSK‘内部’来源的由HEK293哺乳动物细胞制备的VEGF)包被F96 Maxisorp 96孔平底免疫平板(Nunc, 目录号: 439454)，并在4℃孵育过夜。使用包含0.05% Tween-20的PBS清洗平板6次，向每个孔添加200 ul 封闭溶液(PBS中1% BSA)，并将平板在室温下孵育1小时。随后，使用0.05% Tween-20/PBS清洗平板。向每个孔添加90 ul的测定稀释剂(PBS中的0.1% BSA、0.05% Tween-20)，随后，向平板添加在封闭溶液中的10 ul的每种样品或对照(两倍连续稀释，在80-0.08ng/ml的浓度范围)，并在室温下孵育1小时。随后，使用0.05% Tween-20/PBS清洗平板。向适当的孔添加以1:10,000稀释在PBS中的0.1% BSA、0.05% Tween-20的100 ul抗人IgG (Fc特异性) HRP (Sigma, 目录号: A0170)。将平板在室温下孵育1小时并且使用0.05% Tween-20/PBS清洗。向每个孔添加100 μl的3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)液体底物***(Sigma T0440)。一旦显出足够的蓝色(>2.0的预期OD450)，则在15分钟后通过添加100μL的0.25M硫酸(Fisher Scientific J/8410/17)停止反应。使用SpectraMax Plus384微板读数仪(Molecular Devices)，使用基本端点方案读取450 nm的吸光度。
发现DMS1529和DMS1576都以类似的方式特异性结合至VEGF165，并且如降低的IC50值所示，两种分子都显示比贝伐单抗(Avastin)更强效(图1)。
实施例5 － VEGF结合MSD
通过MSD (Meso Scale Discovery)测定确定DMS1529和DMS1576特异性结合至VEGF165的能力。在使用抗Vh或抗Fc试剂检测后，MSD数据显示DMS1529和DMS1576与hVEGF165的等同结合。
实施例6 －使用表面等离子共振的DMS1529和DMS1576与VEGF的结合
使用Biacore T100 (GE Healthcare)通过表面等离子共振(SPR)(实施例6)，和ProteOn XPR36蛋白相互作用阵列***(BioRad) (数据未显示)，测定DMS1529和DMS1576分子对VEGF165的结合亲和力。
实施例6A –使用Biacore的DMS1529和DMS1576与VEGF的结合
通过伯胺偶联将蛋白A固定在C1芯片上，并且随后将此表面用于捕获抗VEGF构建体。使用256nM、64nM、16nM、4nM、1nM、0.25nM和0.0625nM的人重组VEGF (‘内部’来源于HEK293细胞的瞬时转染)作为分析物。使用缓冲液注射(即，0nM)对所有结合曲线进行双参照，并且将数据对1:1模型和二价模型(T100内带)二者拟合。使用100mM H3PO4进行再生。运行在室温下进行，使用HBS-EP作为运行缓冲液。对于DMS1529和DMS1576，由于分析模型与实验数据的拟合差，因此无法获得可靠的动力学，(但可以评估缔合常数和离解常数，并且这些总结在表2A中)。
Biacore和ProteOn数据都显示，使用表面等离子共振，DMS1529和DMS1576对VEGF165具有相当的结合动力学。
表2A：对DMS1529和DMS1576与人VEGF165的结合动力学的Biacore分析，以测定ka、kd和KD
Figure 1351DEST_PATH_IMAGE017
实施例7 – VEGF R1 和 R2受体结合测定
在VEGF受体结合测定中，分析DMS1529和DMS1576的功效，以与贝伐单抗(Avastin)的功效进行比较。此测定测量了VEGF165与VEGF R1或VEGF R2的结合，以及测试分子阻断这种相互作用的能力。使用碳酸氢盐缓冲液(50μl/孔)中的0.25μg/ml VEGF R1 (R&D Systems 321-FL)或VEGF R2 (R&D 357-KD)包被MSD标准结合96孔板(L11XA-3)，使用平板密封物覆盖，并在4℃孵育过夜。次日，使用Tris清洗缓冲液以3x 300μl/孔清洗MSD板，并在织物垫上吸干以从孔除去过量的清洗缓冲液。随后，使用PBS中的3% BSA (250μl/孔)封闭MSD平板，并在室温下振荡(750 RPM)孵育1小时。再次清洗MSD平板，随后添加2x浓度的抗VEGF分子(25μl/孔)并在室温下振荡(750 RPM)孵育10分钟，随后添加2x浓度的rhVEGF，25μl/孔，R&D Systems (293-VE/CF，使用杆状病毒在昆虫细胞中制备)或GSK“内部”来源的VEGF (从HEK293哺乳动物细胞制备，后者的数据除表3A外没有显示)。使用PBS中的0.1% BSA制备抗VEGF分子和VEGF。进行具有将抗VEGF分子与VEGF预孵育步骤的初步测定。通过在室温下将等体积的2x浓度的抗VEGF分子添加到等体积的2x浓度的VEGF (R&D, 293-VE/CF) 中30分钟，而制备预孵育物。最终使用的VEGF浓度是10ng/ml。还包括无VEGF和仅VEGF的对照。将MSD平板在室温下振荡(750 RPM)孵育2小时，随后，将其再次清洗，随后添加在PBS中1% BSA中的0.25μg/ml的检测试剂(50μL/孔，山羊抗人VEGF生物素化抗体– R&D Systems BAF293)，并在室温下振荡(750 RPM)孵育1小时。再次清洗MSD平板，随后添加在PBS中1% BSA中的2μg/ml的链霉抗生物素硫代-TAG (50μl/孔，MSD R32AD-1)，并在室温下振荡(750 RPM)孵育30分钟。在MSD Sector Imager 6000中的电化学发光测量之前，清洗MSD平板，并添加150μl/孔的2x读数缓冲液T (MSD R92TC-1)。使用GraphPad Prism进行曲线拟合和EC50计算。如所述，测定DMS1529、DMS1576和贝伐单抗(Avastin)抑制VEGF结合至VEGFR1和VEGFR2的能力。EC50值列出在表3A中。
进行第二测定，其中在向VEGF受体包被的MSD平板添加之前，没有预孵育抗VEGF试剂和VEGF。进行此测定，仅比较DMS1576和贝伐单抗(Avastin)，并且仅使用来自R&D Systems的VEGF (293-VE/CF)。如上文所述测定DMS1576和贝伐单抗(Avastin)抑制VEGF结合至VEGFR1和VEGFR2的能力，但没有预孵育步骤。EC50值列出在表3B中。
从表3A中的数据可见，DMS1529和DMS1576都看起来具有相似的EC50值，并且这些比贝伐单抗(Avastin)针对对于VEGFR1和VEGFR2的两种VEGF结合的EC50值几乎低10倍(即，更大的功效)。对于VEGFR1和VEGFR2结合测定，与“内部”HEK293产生的VEGF相比，所有的抗VEGF分子都更有效地结合R&D Systems VEGF，并且在进行与VEGF预-孵育的测定中更为有效。由于DMS1576在没有与VEGF预-孵育的情况下，保持了相比贝伐单抗(Avastin)针对VEGFR1和VEGFR2的相对EC50值，因此，采用这种简化的测定类型用于后续新分子的分析。注意，尽管在所有RBA测定中看起来DMS1529和DMS1576都比贝伐单抗(Avastin)更有效，但与贝伐单抗(Avastin)不同，似乎DMS1529和DMS1576在这些测定中都没有完全达到100%抑制(数据未显示)。
表3：来自VEGFR RBAs的EC50值
(A) 与抗VEGF 和 VEGF试剂的预孵育的RBA。内部VEGF和来自R&D Systems (杆状病毒生产的) VEGF。
(B) 改良的RBA (没有与抗VEGF试剂预孵育)。 来自R&D Systems (杆状病毒生产的) VEGF。
Figure 546700DEST_PATH_IMAGE019
实施例8 –人脐带内皮细胞(HUVEC)增殖测定
测定DMS1529和DMS1576与贝伐单抗(Avastin)相比它们抑制人脐带内皮细胞增殖的能力。该测定测量由确定浓度的 VEGF165诱导的内皮细胞增殖的程度和VEGF拮抗剂阻断这种效应的能力。将HUVECs以5000个细胞/孔接种在明胶包被的96孔板中，保持外侧的孔不含细胞，并且孵育数小时以允许粘附。使用2倍连续稀释以等摩尔浓度(最大3.33x10-08M)测定测试分子，各一式三份。将VEGF165制备在基础培养基中以达到75ng/ml的终浓度。从细胞单层手工除去培养基，并添加50μl基础培养基以防止细胞变干。添加包含25μl VEGF165的培养基或25μl基础培养基或包含测试抗体的培养基，视情况而定。将细胞孵育72小时，在此时间后，使用Cell Titre Glo测定细胞的总数。与未经VEGF165处理的细胞相比时，使用VEGF165处理HUVECs导致72小时后的细胞总数的预期增加(数据未显示)。这种VEGF介导的增加解释为表示VEGF对HUVEC增殖和防止HUVEC细胞死亡的累积效应。针对比较分子，贝伐单抗(Avastin)，在单独的平板上独立地评估测试化合物。
DMS1529在两个单独的测定中评价。数据表明，DMS1529仅能以~50%抑制HUVEC增殖，相比之下贝伐单抗(Avastin)为~100%，并且最佳拟合曲线表明，在这个测定中，DMS1529具有比贝伐单抗(Avastin)更高的IC50 (即，功效较低)。已经多次在HUVEC测定中评估DMS1576。在一个样品数据集中，数据表明类似于DMS1529，DMS1576 仅能以~50%抑制HUVEC增殖，相比之下贝伐单抗(Avastin)为~100%；并且最佳拟合曲线表明，在这个测定中，DMS1576具有比贝伐单抗(Avastin)更高的IC50 (即，功效较低)。然而，两个其他数据集表明，DMS1576的最大抑制%和IC50与贝伐单抗(Avastin)相比的差额较小(数据未显示)。
实施例9 –在VEGF诱导的血视网膜破坏：兔视网膜渗漏模型中的性能
在人VEGF165 (R&D Systems)在兔眼睛中诱导的血视网膜破坏(BRB)模型中测试DMS1529和DMS1576，并与贝伐单抗(Avastin)、雷珠单抗(Lucentis)和康宁克通(Tramcinalone)比较。如此前所述，贝伐单抗、雷珠单抗和康宁克通的所有来源获自临床来源，Phillip Chapper & Co. Ltd, UK。所述模型在一些细节上已描述于文献中，并且也被称作“Edelman模型”(Edelman JL, Lutz D, Castro MR, Corticosteroids inhibit VEGF-induced vascular leakage in a rabbit model of blood-retinal and blood-aqueous barrier breakdown, Exp Eye Res. 2005 Feb; 80(2):249-58)。
此研究的目的是评估DMS1529和DMS1576在两个剂量下：高剂量(H)和低剂量(L)，减少在兔子中重组人VEGF165诱导的血视网膜屏障破坏模型中的视网膜血管渗漏的功效。高剂量(H)和低剂量(L)基于对雷珠单抗(Lucentis)的摩尔当量给药。低剂量(L)是高剂量的三分之一。贝伐单抗(Avastin)也以从在临床上用于眼科指征的剂量的成比例降低的剂量给药。给药和注射方案显示在表4A中。
简要而言，使用PD-10脱盐柱(GE Healthcare)将所有分子经缓冲液交换到10mM组氨酸盐酸盐、10% α-α 脱水海藻糖、0.01%聚山梨醇酯80、pH 5.5中，并且使用Vivaspin 20，分子量截断值5000Da，旋转浓缩(Sartorius Stedim Biotech)，浓缩至期望的浓度，二者均根据制造商的说明书使用。在此过程后，如在上述实施例中所述，在经测试确认稳定性、功能活性和同质性后，将样品在-80℃冷冻，并在干冰上运输(数据未显示)。
将九十八只(98) GD79B色素兔（pigmented rabbits）随机分入各十只(10)动物的九个(9)组，和八只(8)动物的1个组(用于康宁克通对照)。每个组细分成对应于2个实验组的2个小组。在第-7日，通过玻璃体内注射(IVT，50 μL)将测试物、参照物或对照物施用到右眼中。保留左眼不进行处理并充当阴性对照。在第0日，使用单次玻璃体内注射的500ng rhVEGF165 (血管通透性诱导物)诱导右眼血视网膜屏障(BRB)破坏。在VEGF激发(第2日)后47小时，对所有组进行荧光素钠静脉注射。在注射示踪剂后10分钟内，对右眼进行视网膜血管造影，并照相。1小时后，使用非侵入性扫描眼荧光光度计，测量玻璃体视网膜室中的眼荧光素含量。测定右眼/左眼荧光素含量(AUC) Rt比例，用于视网膜渗透性评价。在评价期结束时(第2日)，将动物安乐死并摘出所有动物的右眼。将速冻的眼球和房水样品贮存在-80℃，直至运输到发起者GSK。收集荧光素血管造影照片，用于定性评估。根据GSK的要求，化合物保持为盲测(masked)。对此的施用方案总结在表4A中。
玻璃体内注射的VEGF诱导BRB破坏，所述BRB破坏通过在注射后9天被用盲测的化合物处理而阻断：所述化合物标记为E：贝伐单抗(Avastin)，H：雷珠单抗(Lucentis，高剂量)和I：雷珠单抗(Lucentis，低剂量)，效力类似于市售的参照物(Kenacort?)。对于化合物E，观察到右眼(诱导的)与左眼之间的玻璃体视网膜荧光素含量的低Rt比例值(Rt = 1.39 ± 0.77 (n = 9)；对于化合物H为Rt = 1.05 ± 0.52 (n = 10)，且对于化合物I为Rt = 1.81 ± 1.76 (n = 10)。康宁克通处理组显示接近于未诱导动物的平均Rt比例(Rt = 1.15 ± 0.61)。
在盲测研究中，在使用化合物A：DMS1576 (高剂量)、B：DMS1576 (高剂量)、C：媒介物，阴性对照组、D：DMS1576 (低剂量)、F: DMS1529 (低剂量)和G: DMS1529 (高剂量)处理后，在诱导的右眼中观察到大量视网膜血管渗漏。即便没有解除化合物的盲测并且与媒介物对照进行比较，化合物A、B、C、D、F和G的功效也显然低于化合物E、H和I。
证明对VEGF诱导的兔视网膜渗漏的抑制作用的除盲测（Unmasked）数据和统计分析显示在表4B中。对于这个分析，将对应于相同分子和剂量的盲测组合并。对于表4B中的数据：所示的经过和未经多重比较调整的P值分别标记为“Dunnett”p值和“未调整”p值。置信区间对应于未调整的p值(在p>0.05，CI包括1的比例)。从表4B中的数据分析：高剂量的DMS1529 (46%)和DMS1576 (41%)仅部分地降低了VEGF诱导的视网膜渗漏的程度，并且在低剂量下，所述降低甚至更低：DMS1529 (19%)和DMS1576 (25%)。在相同的条件下，化合物E：贝伐单抗(Avastin, 75%)，H：雷珠单抗(Lucentis，高剂量，82%)和I：雷珠单抗(Lucentis，低剂量，78%)抑制了VEGF诱导的视网膜血管渗漏，效果类似于市售的肾上腺皮质激素参照物(康宁克通? 缓释剂（retard），85%)。
表4A：与贝伐单抗(Avastin)、雷珠单抗(Lucentis)和康宁克通(Tramcinalone)相比，通过DMS1529、DMS1576抑制VEGF诱导的兔视网膜渗漏的给药和注射方案。
Figure 275622DEST_PATH_IMAGE020
表4B：与贝伐单抗(Avastin)、雷珠单抗(Lucentis)和康宁克通(Tramcinalone)相比，通过DMS1529、DMS1576抑制VEGF诱导的兔视网膜渗漏。
Figure 416753DEST_PATH_IMAGE021
实施例10 –抗VEGF Vk dAb-Fc和Fc-dAb分子的克隆
将dAb序列(SEQ ID NO:97-101, 105-109)克隆到哺乳动物表达载体中的人IgG1同种型的通用Fc的N-或C-末端上。使用接头序列将dAb连接到Fc：N-末端接头是AAAS (SEQ ID NO:57 和 76)或TVAAPS (SEQ ID NO:59 和 78)，且C-末端接头是((GS(TVAAPSGS)x3) (SEQ ID NO:66 和 85)或白蛋白结构域3 (SEQ ID NO:71 和 90)。
实施例11 –抗VEGF Vk dAb-Fc和Fc-dAb分子的表达
将编码相关Vk抗VEGF dAb-Fc和Fc-dAb分子 (列出在SEQ ID NO:3-9, 16-24, 31-37 和 44-52，表19中)的表达质粒瞬时转染到HEK293 6E细胞中，并在500 ml规模表达以产生抗体片段分子。将500ug质粒DNA添加到18ml OptiMEM (Invitrogen)，并单独地向18ml OptiMEM添加666ul的293fectin。两个管在室温下孵育5分钟。将DNA/OptiMEM溶液缓慢地添加到293fectin/OptiMEM管，并温和旋转。随后，允许在室温下形成DNA/293fectin转染复合物25分钟。将HEK293E悬浮细胞培养物稀释以获得0.5x 106个细胞/ml，并且将上述转染复合物缓慢地添加到500 ml的稀释细胞培养物中，并对培养烧瓶进行温和旋转。随后，将烧瓶放回到37℃、5% CO2培养箱，并以135rpm振荡。转染后24小时，将12.5ml的20% w/v 酪蛋白-胰蛋白胨添加到细胞培养物中，并如上所述继续进行孵育。在转染后6天，将培养物在5,500xg下离心20分钟，以沉淀细胞，并过滤上清液(0.22um)并分析分泌的蛋白表达。常规地达到50-100mg/L上清液的表达水平。
实施例12 –Vk抗VEGF dAb-Fc和Fc-dAb分子的纯化
从上清液(参见实施例11)亲和纯化Vk 抗VEGF dAb-Fc和Fc-dAb分子。将20 ml在磷酸钠缓冲液中的悬浮亲和树脂(50:50浆料)添加到500 ml过滤的上清液；将上清液/亲和树脂混合物在+4℃温和摇晃过夜，在室温下摇晃~3小时，以允许发生结合。在这个时间后，允许树脂沉降并小心地倾出上清液。将树脂重新悬浮在剩余的上清液中，并倾入到空滴柱(drip column)中。允许上清液通过柱流出，并且随后使用3 x 10柱体积PBS清洗，随后使用4 x柱体积的Tris缓冲液清洗，来清洗树脂。使用4 x柱体积的低pH缓冲液进行洗脱，并且将洗脱液收集到包含1 x柱体积的1M Tris pH 8.0的管中，以中和洗脱的蛋白。
实施例13－Vk抗-VEGF dAb-Fc和Fc-dAb分子通过SDS-PAGE和尺寸排阻层析(SEC)的分子分析
按照实施例3，通过SDS-PAGE分析如在实施例12中所述已纯化的抗VEGF dAb-Fc和Fc-dAb分子的分子完整性、同质性和纯度%。凝胶显示与完整成熟蛋白的预测分子量相符的条带大小(对于dAb-Fc和Fc-dAb分子分别为 ~76kDa至~85kDa)，这允许每个单体链存在预测的多糖链。在生物学测定中进一步分析之前，通过SDS-PAGE和SEC确定蛋白为>95%的纯目标蛋白。如果 dAb-Fc或Fc-dAb分子的纯度<95%，则进行进一步的SEC纯化(参见实施例14)。
实施例14 –Vk抗VEGF dAb-Fc和Fc-dAb分子通过尺寸排阻层析(SEC)的纯化
如果有必要，则使用HiLoad 16/600 Superdex 200柱(GE Healthcare)，对Vk dAb-Fc和Fc-dAb分子进行制备型尺寸排阻层析(SEC)。所使用的流动相是磷酸盐缓冲盐水，流速0.5ml/min，并收集0.5-2ml 级分。在214 和 280nm监测柱流出液的UV吸光度。将针对对应于dAb-Fc或Fc-dAb分子洗脱的峰而收集的级分合并。如实施例13中所述，再次通过SDS-PAGE和分析型SEC分析分子完整性、同质性和纯度%。在生物学测定中进一步分析之前，通过SDS-PAGE和SEC确定蛋白为>95%的纯目标蛋白。
实施例15 – Vk抗VEGF dAb-Fc和Fc-dAb分子的VEGF结合ELISA
通过ELISA测定Vk抗-VEGF dAb-Fc和Fc-dAb分子特异性结合VEGF165的能力。这以与实施例4类似的方式进行。发现所有测试的抗VEGF化合物都特异性结合VEGF165 (数据未显示)。
实施例16 –抗VEGF Vk dAb-Fc和Fc-dAb分子在Biacore上与VEGF的结合
按照与实施例6类似但稍有改进的方式，使用Biacore T100通过表面等离子共振(SPR)测定抗VEGF Vk dAb-Fc和Fc-dAb分子对VEGF165的结合亲和力。通过伯胺偶联将蛋白A固定在C1芯片上，并且随后将此表面用于捕获抗VEGF构建体。使用64nM、16nM、4nM、2nM、1nM、0.5nM和0.25nM的人重组VEGF165 (来自HEK293细胞的瞬时转染，“内部”来源)作为分析物。使用缓冲液注射(即，0nM)对所有结合曲线进行双参照，并且将数据对T100内带的1:1模型进行拟合。使用50mM NaOH进行再生。运行在37℃下进行，使用HBS-EP作为运行缓冲液。
将Vk dAb-Fc和Fc-dAb分子与DMS1576和贝伐单抗(Avastin)进行比较。如通过Biacore测定，数据显示Vk Fc-dAb分子(DMS30000、DMS30001、DMS30002、DMS30003和DMS30004)相比DMS1576和Vk dAb-Fc在与VEGF结合方面都有改进(参见表5)。
表5：抗VEGF dAb-Fc和Fc-dAb分子和贝伐单抗(Avastin)与VEGF165的结合
Figure 914730DEST_PATH_IMAGE022
实施例17 –抗-VEGF Vk dAb-Fc和Fc-dAb分子的VEGF R1 和 R2受体结合测定
使用实施例7中描述的改良方法，即没有预孵育，在VEGF受体(R1和R2)结合测定中分析抗VEGF Vk dAb-Fc和Fc-dAb分子的功效，并且与Vh dAb-Fc、DMS1576和贝伐单抗(Avastin)进行比较。可见，对于VEGFR1和VEGFR2，Vk Fc-dAb分子(DMS30000、DMS30003和DMS30004)比DMS1576和贝伐单抗(Avastin)更强效(即，更低的EC50值，参见表6A和 6B)；而对于VEGFR1，Vk dAb-Fc分子(DMS30005)则比DMS1576功效更差且类似于贝伐单抗(Avastin)，且对于VEGFR2，则比贝伐单抗(Avastin)更强效。针对VEGFR1，数据指出通过Vk Fc-dAb分子(DMS30000、DMS30003和DMS30004)实现的抑制略有降低，在87-89%，与之相比，Vh dAb-Fc分子(DMS1576)和贝伐单抗(Avastin)都 ≥90%。Vk dAb-Fc分子(DMS30005)进一步降低，为82%。针对VEGFR2，数据指出通过Vk Fc-dAb分子(DMS30000、DMS30003和DMS30004)实现的抑制与Vh dAb-Fc分子(DMS1576)和贝伐单抗(Avastin)的匹配，都 ≥90%。Vk dAb-Fc分子(DMS30005)略有降低，为86%。
表6A：在VEGFR1受体结合测定中，抗VEGF化合物与贝伐单抗(Avastin)相比的EC50值 
使用GraphPad Prism进行曲线拟合和EC50计算。
Figure 686377DEST_PATH_IMAGE023
表6B：在VEGFR2受体结合测定中，抗VEGF化合物与贝伐单抗(Avastin)相比的EC50值 
使用GraphPad Prism进行曲线拟合和EC50计算。
Figure 699333DEST_PATH_IMAGE024
实施例18 –人脐带内皮细胞(HUVEC)增殖测定：使用抗VEGF dAb-Fc和Fc-dAb分子的抑制
如实施例8中所述，将Vk dAb-Fc和Fc-dAb分子抑制VEGF驱动的人脐带静脉内皮细胞增殖的能力与 Vh dAb-Fc (DMS1576)和贝伐单抗(Avastin)在此测定中的抑制能力进行比较。将Vk dAb-Fc分子(DMS30005和DMS30006)在单个测定中进行测试(数据未显示)。数据表明，这些分子功效较低(较低的IC50)并且完全抑制增殖的能力较低，DMS30005为~70-80%，与之相比，贝伐单抗(Avastin)为~100%。如此前在实施例8中所见，数据表明Vh dAb-Fc分子(DMS1576)具有高于贝伐单抗(Avastin)的IC50 (即功效较低)。对Vk Fc-dAb分子(DMS30000、DMS30003 和 DMS30004)进行多次测定。数据集指出通过Vk Fc-dAb分子处理达到的抑制给出了与贝伐单抗(Avastin)达到的水平匹配的VEGF-介导的抑制水平，即~100%。实际上，所有Vk Fc-dAb分子产生了与类似的贝伐单抗(Avastin)曲线重叠或略向其左侧移动的最佳拟合曲线，因此，其是在此测定中潜在地更强效的分子(数据未显示)。
实施例19 –抗VEGF Vh dAb-Fc和Vk Fc-dAb分子与人VEGF结合的差别和非干扰性的证明
使用DMS30000作为基于Vk的Fc-dAb分子并使用DMS1576作为基于Vh的dAb-Fc分子，在改进的MSD测定中证明了基于Vh的dAbFc分子结合已使用基于Vk的Fc-dAb分子预饱和的VEGF的能力，以及反之，基于Vk的Fc-dAb分子结合已使用基于Vh的dAb-Fc分子预饱和的VEGF的能力。
19. A – 在使用Vk Fc-dAb DMS30000预饱和后，Vh dAb-Fc DMS1576与VEGF的结合
使用PBS (25μl/孔)中的3μg/mL rhVEGF165 (来自HEK293细胞的瞬时转染，“内部”来源)包被MSD高结合96孔板(MSD L11XB-3)，使用平板密封物覆盖，并在4℃孵育过夜。次日，使用Tris清洗缓冲液以3x 300μl/孔清洗MSD平板，并在织物垫上吸干以从孔除去过量的清洗缓冲液。随后，使用PBS (250μl/孔)中的3% BSA封闭MSD平板，并在室温下振荡(750 RPM)孵育1小时。在清洗MSD平板后，添加饱和浓度(≥3μg/ml)的DMS30000 (25μl/孔)，并在室温下振荡(750 RPM)孵育1小时。再次清洗MSD平板，随后添加DMS1576 (25μl/孔，0-100ng/ml)，并在室温下振荡(750 RPM)孵育1小时。DMS30000和DMS1576制备在PBS中的0.1% BSA中。再次清洗MSD平板，随后添加在PBS中的1% BSA中的1μg/ml的对包含在DMS1576中的Vh dAb特异性的检测试剂(25μL/孔，内部硫代-TAG标记的抗Vh mAb)，并在室温下振荡(750 RPM)孵育1小时。在MSD Sector Imager 6000中的电化学发光测量之前，清洗MSD平板，并添加150μl/孔的2x读数缓冲液T (MSD R92TC-1)。
图2A中的数据显示基于Vh的dAb-Fc分子DMS1576有可能结合已使用基于Vk的Fc-dAb分子DMS30000预饱和的VEGF165。
19. B – 在使用Vh dAb-Fc DMS1576预饱和后，Vk Fc-dAb DMS30000与VEGF的结合
使用PBS (25μl/孔)中的3μg/mL VEGF (来自HEK293细胞的瞬时转染，“内部”来源)包被MSD高结合96孔板(MSD L11XB-3)，使用平板密封物覆盖，并在4℃孵育过夜。次日，使用Tris清洗缓冲液以3x 300μl/孔清洗MSD平板，并在织物垫上吸干以从孔除去过量的清洗缓冲液。随后，使用PBS (250μl/孔)中的3% BSA封闭MSD平板，并在室温下振荡(750 RPM)孵育1小时。在清洗MSD平板后，添加饱和浓度(≥3μg/ml)的DMS1576 (25μL/孔)，并在室温下振荡(750 RPM)孵育1小时。再次清洗MSD平板，随后添加DMS30000 (25μl/孔，0-100ng/ml)，并在室温下振荡(750 RPM)孵育1小时。DMS30000和DMS1576制备在PBS中的0.1% BSA中。再次清洗MSD平板，随后添加在PBS中的1% BSA中的1μg/ml的对包含在DMS30000 中的Vk dAb特异性的检测试剂(25μL/孔，内部硫代-TAG标记的抗Vk mAb)，并在室温下振荡(750 RPM)孵育1小时。在MSD Sector Imager 6000中的电化学发光测量之前，清洗MSD平板，并添加150μl/孔的2x读数缓冲液T (MSD R92TC-1)。
图2B中的数据显示基于Vk的Fc-dAb分子DMS30000有可能结合已使用基于Vh的dAb-Fc分子DMS1576预饱和的VEGF165。
实施例19中的数据集显示对于Vk Fc-dAb (DMS30000)和Vh dAb-Fc, (DMS1576)都有可能在其他分子的存在下结合VEGF165。实施例19中描述的实验表明，Vk和Vh衍生的两个谱系的dAb可结合VEGF同二聚体上的不同表位。
实施例20 –抗VEGF dAb-Fc-dAb分子的克隆
通过将Vk dAb序列(DT02-K-044-085 (SEQ ID NO: 97 和 105)或DT02-K-044-251 (SEQ ID NO: 100 和 108)克隆到哺乳动物表达载体中的Vh dAb-Fc (DMS1576, SEQ ID NO:2 和 30)的C-末端上，将Vh-Vk dAb-Fc-dAb (SEQ ID NO: 10-11、25、38-39 和 53)工程化。使用((GS(TVAAPSGS)x3) (SEQ ID NO:66 和 85)或白蛋白结构域3 (SEQ ID NO:71 和 90)接头序列将C-末端dAb连接到Fc的C-末端。通过将Vk dAb序列(DT02-K-044-085 (SEQ ID NO: 97 和 105)或DT02-K-044-251 (SEQ ID NO:100 和 108)克隆到哺乳动物表达载体中对应的Vk dAb-Fc (即，DMS30000 (SEQ ID NO:3 和 31)或DMS30003 (SEQ ID NO:6 和 34)或DMS30013 (SEQ ID NO:16 和 44))的C-末端上，将Vk-Vk dAb-Fc-dAb (SEQ ID NO:12-15、26-28、40-43 和 54-56)工程化。使用AS (SEQ ID NO:58 和 77)或铰链IgG1 (SEQ ID NO:60 和 79)将N-末端dAb连接到Fc的N-末端。在Fc区域中进行定点诱变，使用以下变化，例如His 2 Ala或Thr 3 Pro，以分别产生 SEQ ID NO: 27和28。
实施例21 –抗VEGF dAb-Fc-dAb分子的表达
使用实施例11中所述的方法，将编码相关抗VEGF dAb-Fc-dAb分子 (列出在SEQ ID NO:10-15, 25-28, 38-43 和 53-56中)的表达质粒瞬时转染到HEK293 6E细胞中，并以500 ml规模表达以产生抗体片段分子。常规地达到50-100mg/L上清液的表达水平。
实施例22 –抗VEGF dAb-Fc-dAb分子的纯化
从上清液(实施例21)亲和纯化dAb-Fc-dAb分子。将2ml在磷酸缓冲盐水中的悬浮亲和树脂(50:50浆料)添加到500 ml过滤的上清液中；将上清液/亲和树脂混合物在+4℃温和摇晃过夜，以允许发生结合。在这个时间后，允许树脂沉降并小心地倾出上清液。将树脂重新悬浮在剩余的上清液中，并倾入到空滴柱中，并允许上清液通过柱流出。使用pH中性的含水缓冲液的组合清洗结合的产物，以除去非特异性结合的杂质，随后进行低pH洗脱。回收90%以上的结合产物，并且随后将洗脱合并物的pH调整至pH 3.5，进行30分钟以完成病毒中和，此时间后将pH调整至pH 4.5。
实施例23 –通过抗VEGF dAb-Fc-dAb分子的尺寸排阻层析(SEC)的分子分析
通过如实施例3中所述的SDS-PAGE和分析尺寸排阻层析(SEC)分析已如实施例22中所述纯化的抗VEGF dAb-Fc-dAb分子的完整性、同质性和纯度%。在生物测定中进一步分析之前，通过SDS-PAGE和SEC确定蛋白为>95%的纯目标蛋白。
实施例24 –抗VEGF dAb-Fc-dAb分子的VEGF结合ELISA
如实施例4和15中所述，通过ELISA测定抗VEGF dAb-Fc-dAb分子特异性结合VEGF165的能力。发现所有测试的抗VEGF dAb-Fc-dAb都特异性地结合VEGF165 (数据未显示)。
实施例25 –抗VEGF dAb-Fc-dAb分子在Biacore上与VEGF的结合
按照与实施例6类似但稍有改进的方式，使用Biacore T100通过表面等离子共振(SPR)测定抗VEGF dAb-Fc-dAb分子对VEGF165的结合亲和力。通过伯胺偶联将蛋白A固定在C1芯片上，并且随后将此表面用于捕获抗VEGF构建体。使用75nM、15nM、3nM和0.6nM的人重组VEGF165 (来自HEK293细胞的瞬时转染，“内部”来源)作为分析物。使用缓冲液注射(即，0nM)对所有结合曲线进行双参照，并且将数据对T100内带的1:1模型进行拟合。使用50mM NaOH进行再生。运行在37℃下进行，使用HBS-EP作为运行缓冲液。
将dAb-Fc-dAb分子与它们对应的Vk Fc-dAb和Vh dAb-Fc分子进行比较。这种测定形式的数据可表明，dAb-Fc-dAb分子没有看起来比对应的Vk Fc-dAb更好。Vk Fc-dAb看起来具有比相应的dAb-Fc-dAb更好的解离速率。然而，由于dAb-Fc-dAb “亲和力”是对VEGF的两个不同结合事件的混合，即N-末端dAb和C-末端Vk dAb的结合，因此曲线(数据未显示)可能没有描述完整的事件。预期dAb-Fc-dAb中的Vk dAb，即与在C-末端Vk Fc-dAb中相同的方向，将具有相同的亲和力，并且该数据证实了此前在实施例16中的描述。在Fc的N-末端的Vh或Vk dAb定位导致较差的亲和力(参见实施例16)，因此导致组合分子的整体亲和力看起来更差。表观亲和力(参见表7)显示对于这些分子在Biacore上的以下功效：Vh-Vk dAb-Fc-dAb (DMS30007和DMS30008)具有最差的亲和力；Vk-Vk dAb-Fc-dAb (DMS30009、DMS30010、DMS30011和DMS30012)具有最好的dAb-Fc-dAb亲和力，并且显示彼此非常相似。
表7：抗VEGF dAb-Fc-dAb分子和对应的dAb-Fc-和Fc-dAb分子与VEGF165的结合
Figure 581838DEST_PATH_IMAGE025
实施例26 –抗VEGF dAb-Fc-dAb分子的VEGF R1 和 R2受体结合测定
在VEGF受体R1和R2结合测定中，分析抗VEGF Vh-Vk和Vk-Vk dAb-Fc-dAb分子的功效。可见dAb-Fc-dAb针对VEGFR1和VEGFR2的功效(EC50)都与Vk Fc-dAb分子(DMS30000)匹配，并且发现比Vh dAb-Fc分子(DMS1576)和贝伐单抗(Avastin)都更强效(即，更低的EC50值)，参见表8A和B。针对VEGFR1，数据指出通过Vh-Vk dAb-Fc-dAb (DMS30007和DMS30008)和Vk-Vk dAb-Fc-dAb (DMS30009)实现的抑制与使用Vh dAb-Fc分子(DMS1576)、Vk Fc-dAb分子(DMS30000)和贝伐单抗(Avastin)所实现的抑制匹配，都 ≥90% (表8A)。针对VEGFR2，数据指出通过Vh-Vk (DMS30022) dAb-Fc-dAb 实现的抑制与使用Vh dAb-Fc分子(DMS1576)、Vk Fc-dAb分子(DMS30000和DMS30003)和贝伐单抗(Avastin)所实现的抑制匹配，都 ≥90%；而通过Vh-Vk dAb-Fc-dAb (DMS30007和DMS30008)和Vk-Vk dAb-Fc-dAb分子(DMS30009、DMS30023和DMS30025)实现的抑制较低，为~75-87%，(表8B)。
表8A：在VEGFR1受体结合测定中，抗VEGF dAb-Fc-dAb分子与贝伐单抗 (Avastin)相比的EC50值。
使用GraphPad Prism进行曲线拟合和EC50计算。
Figure 934322DEST_PATH_IMAGE026
表8B：在VEGFR2受体结合测定中，抗VEGF dAb-Fc-dAb分子与贝伐单抗(Avastin)相比的EC50值。  
(i) 使用GraphPad Prism进行曲线拟合和EC50计算。
Figure 939187DEST_PATH_IMAGE027
Figure 377122DEST_PATH_IMAGE028
实施例27 –抗VEGF dAb-Fc-dAb分子的人脐带内皮细胞(HUVEC)增殖测定
使用实施例8 和 18中所述的方法，将Vh-Vk (DMS30022)和Vk-Vk (DMS30023和DMS30025) dAb-Fc-dAb分子抑制人脐静脉内皮细胞增殖的能力与Vh dAb-Fc分子(DMS1576)、Vk Fc-dAb分子(DMS30000)和贝伐单抗(Avastin)比较，并具有以下差异：(i) 不保持外侧的孔不含细胞，而是使用整个96孔板，和(ii) 相比于非线性回归(可变斜率)，使用GraphPad Prism利用Sigmodial曲线拟合、可变斜率分析数据。数据表明，如此前在实施例8 和 18中所见，Vh dAb-Fc分子(DMS1576)具有比贝伐单抗(Avastin)更高的EC50 (即，功效较低)；平均地，可见Vk Fc-dAb分子(DMS30000)在EC50方面与贝伐单抗(Avastin)类似；而发现所有的Vh-Vk和Vk-Vk dAb-Fc-dAb分子(DMS300022、DMS300023、DMS300024和DMS300025)在EC50方面都比贝伐单抗(Avastin)有所改进。
实施例28 –通过等温量热法(ITC)在溶液中测量的dAb-Fc-dAb和dAb-Fc和Fc-dAb形式在VEGF结合测定中的性能
通过等温滴定量热法(ITC)使用Microcal VP-ITC，测定抗VEGF dAb-Fc-dAb、dAb-Fcs和Fc-dAb结合至VEGF165的溶液平衡结合亲和力(KD)、化学计量(N)和热力学(ΔH，焓和ΔS，熵)，并与单克隆抗体贝伐单抗(Avastin)进行比较。此实验的主要目的是比较不同分子形式结合至VEGF的相对化学计量。在25℃，将VEGF165滴定到抗体溶液中直到有超过3倍浓度过量的VEGF165，并且达到饱和。所有滴定使用相同批次的VEGF165，以确保一致性。由于没有多相行为的迹象，因此使用标准1:1结合模型，在Origin软件(Microcal版本)内拟合级分的结合等温线。结果总结在表10中。
表10：抗VEGF dAb-Fc-dAb分子、dAb-Fcs和Fc-dAb分子与VEGF165的结合
Figure 361521DEST_PATH_IMAGE029
所有抗体在25℃具有在焓方面有利且在熵方面不利的结合。化学计量在dAb-Fc、Fc-dAb和dAb-Fc-dAb dAb形式之间有明显的区别，并且对于双dAb形式有更大的容量(capacity)。当存在过量VEGF165时，dAb-Fc-dAb形式还显示比Avastin更高的容量。所测量的亲和力在相同的等级次序，并且与通过其他方法测量的那些一致。
实施例29 –带有多种接头修饰的抗VEGF Vh dAb-Fc、Vk dAb-Fc和Vk Fc-dAb分子的克隆
将dAb序列(SEQ ID NO: 96-97、104-105，参见表19)克隆到哺乳动物表达载体中人IgG1同种型的通用Fc的N-或C-末端上。使用多种接头序列(参见表19，SEQ ID Nos 57-75 和 76-94)将dAb连接到Fc：对于Vh dAb-Fc，dAb是DOM15-26-597；N-末端接头是AS (SEQ ID NO:58 和 77)，或TVAAPS (SEQ ID NO:59 和 78)，或铰链IgG1接头(SEQ ID NO:60 和 79)，或铰链IgG3接头(SEQ ID NO:61 和 80)或纤连蛋白x3接头(SEQ ID NO:62 和 81)或纤连蛋白x4接头(SEQ ID NO:63 和 82)；对于Vk dAb-Fc，dAb是DT02-K-044-085；N-末端接头是带有H2A IgG1Fc点突变的AS (SEQ ID NO:64 和 83)，带有T3P IgG1Fc点突变的AS (SEQ ID NO:65 和 84)，或TVAAPS (SEQ ID NO:59 和 78)，或铰链IgG1接头(SEQ ID NO:60 和 79)，或铰链IgG3接头(SEQ ID NO:61 和 80)，或纤连蛋白x3接头(SEQ ID NO:62 和 81)或纤连蛋白x4接头(SEQ ID NO:63 和 82)；并且Vk Fc-dAb是DT02-K-044-085；C-末端接头是(GS(TVAAPSGS)x3 (SEQ ID NO:66 和 85)，或纤连蛋白x3接头(SEQ ID NO:67 和 86)，或纤连蛋白x4接头(SEQ ID NO:68 和 87)或白蛋白结构域1 (SEQ ID NO:69 和 88)，白蛋白结构域2 (SEQ ID NO:70 和 89)，截短的白蛋白结构域3接头(Alb Dom 3-TFHAD，SEQ ID NO:72 和 91)，或Gly4Ser 3x 接头(SEQ ID NO:73 和 92)，Gly4Ser 4x 接头(SEQ ID NO:74 和 93)或螺旋状接头(SEQ ID NO:75 和 94)。
实施例30 –带有多种接头修饰的抗VEGF Vh dAb-Fc、Vk dAb-Fc和Vk Fc-dAb分子的表达
将编码相关Vh抗VEGF dAb-Fc、Vk抗VEGF dAb-Fc和Vk抗VEGF Fc-dAb分子(描述于实施例29 SEQ ID NO: 132-134和155-176，表19中)的表达质粒瞬时转染到HEK293 6E细胞中，并以500 ml规模表达以产生抗体片段分子，如实施例11中所述。
实施例31 –带有多种接头修饰的抗VEGF Vh dAb-Fc、Vk dAb-Fc和Vk Fc-dAb分子的纯化
从上清液(参见实施例12)亲和纯化在实施例30中所述的Vh抗VEGF dAb-Fc、Vk抗VEGF dAb-Fc和Vk 抗VEGF Fc-dAb分子。
实施例32–带有多种接头修饰的抗VEGF Vh dAb-Fc、Vk dAb-Fc和Fc-dAb分子通过SDS-PAGE和尺寸排阻层析(SEC)的分子分析
如实施例3中所述，通过SDS-PAGE分析已按照实施例31中所述纯化的抗VEGF Vh dAb-Fc、抗-VEGF Vk dAb-Fc和抗VEGF Vk Fc-dAb分子的分子完整性、同质性和纯度%。凝胶显示与完整成熟蛋白的预测分子量相符的条带大小(对于dAb-Fc和Fc-dAb为 ~76kDa至~85kDa)，这允许每个单体链存在预测的多糖链。在生物测定中进一步分析之前，通过SDS-PAGE和SEC确定蛋白为>95%纯的目标蛋白。如果 dAb-Fc或Fc-dAb分子的纯度<95%，则进行进一步的SEC纯化(参见实施例14和33)。
实施例33 –带有多种接头修饰的抗VEGF Vh dAb-Fc、Vk dAb-Fc和Vk Fc-dAb分子通过尺寸排阻层析(SEC)的纯化
如果有必要，对Vh dAb-Fc、Vk dAb-Fc和Vk Fc-dAb分子进行制备型尺寸排阻层析(SEC)。
实施例34 –带有多种接头修饰的抗VEGF Vh dAb-Fc、Vk dAb-Fc和Fc-dAb分子在Biacore上与VEGF的结合
按照与实施例16类似但稍有改进的方式，使用Biacore T100通过表面等离子共振(SPR)测定抗VEGF Vh dAb-Fc、Vk dAb-Fc和Fc-dAb分子对VEGF165的结合亲和力。通过伯胺偶联将蛋白A固定在C1芯片上，并且随后将此表面用于捕获抗-VEGF构建体。在下文详述的不同连续稀释范围中，使用人重组VEGF165 (来自HEK293细胞的瞬时转染，“内部”来源)作为分析物。使用缓冲液注射(即，0nM)对所有结合曲线进行双参照，并且将数据对T100内带的1:1模型进行拟合。使用50mM NaOH进行再生。运行在37℃下进行，使用HBS-EP作为运行缓冲液。
在16nM、4nM、2nM、1nM、0.5nM和0.25nM的浓度范围中，将Vk Fc-dAb分子与DMS30000和贝伐单抗(Avastin)进行比较。从所述数据总结出，带有通过C-末端接头白蛋白结构域2和纤连蛋白x4连接到IgG1Fc的DT02-K-085 dAb的Vk Fc-dAb分子在Biacore中的行为类似于DMS30000 (表11A)。根据生物物理研究，白蛋白2接头的使用不是优选的(数据未显示)，因此，纤连蛋白4 (fib4)是用于替代DMS3000中的(GS(TVAAPSGS)x3 接头的优选C-末端接头，(GS(TVAAPSGS)x3接头导致很多糖基化同种型，引发分子研发问题(数据未显示)。在128nM至0.03125nM的浓度范围中的4倍连续稀释，通过类似的Biacore实验产生进一步的抗VEGF VkFc-dAb数据集，并且显示在表11B中。数据比较了作为C-末端以连接DT02-K-085 dAb至IgG1Fc的fib4接头(DMS30026)与螺旋状接头(DMS30027)。优选fib4接头。
表11A：抗VEGF Vk dAb-Fc和Fc-dAb分子与VEGF165的结合，以及与DMS1576、DMS30000，抗VEGF dAb-Fc-dAb和贝伐单抗(Avastin)的比较
表11B：抗VEGF Vh dAb-Fc、Vk dAb-Fc和Vk Fc-dAb分子与VEGF165的结合，以及与DMS1576和贝伐单抗(Avastin)的比较
Figure 9857DEST_PATH_IMAGE031
在16nM、4nM、2nM、1nM、0.5nM和0.25nMm的浓度范围中，将Vk dAb-Fc分子与DMS1576和贝伐单抗(Avastin)进行比较，其中，将带有通过N-末端接头N085纤连蛋白4和1xTVAAAPS将DT02-K-085 dAb连接到IgG1Fc的Vk dAbFc分子进行比较。数据表明在用于将DT02-K-085 dAb连接至IgG1Fc的N-末端的两个接头中优选1xTVAPPS。Vk dAb-Fc分子的进一步实例显示在表11B和11C中。以4倍连续稀释在128nM至0.03125nM的浓度范围中产生数据，并且将带有通过N085 T113P (T2P)或ASTHP接头(DMS30029)、N085 extg1或IgG1铰链接头(DMS30028)连接至IgG1Fc的N-末端的DT02-K-085 dAb的Vk dAb-Fc蛋白与DMS1576进行比较。根据表11B中的数据，采用IgG1铰链接头(N085extg1)作为用于将DT02-K-085 dAb连接至IgG1Fc的N-末端的优选接头，优先于1x TVAAPS。
以4倍连续稀释在128nM至0.03125nM的浓度范围中，将Vh dAb-Fc分子与DMS1576和贝伐单抗(Avastin)进行比较。来自表11B的数据表明，用于15-26-597 Vh dAb与dAb-Fc的N-末端的连接的优选接头是基于3拷贝的纤连蛋白重复的接头。表11C中显示的进一步数据表明，在将其他接头用于15-26-597 dAb至Fc的N-末端连接时，所产生的dAb-Fc蛋白在抗VEGF Biacore中是两相性的。根据Biacore曲线的斜率，认为N597extg1 (IgG1 铰链)接头作为来自这个数据集的次优的。
表11C：抗VEGF VhdAb-Fc、Vk dAb-Fc分子与VEGF165的结合，以及与DMS1576和贝伐单抗(Avastin)的比较
Figure 935087DEST_PATH_IMAGE032
以4倍连续稀释在VEGF 32nM至0.03125nM的浓度范围，比较包含用于将15-26-597 dAb N末端偶联至Fc的接头Fib3或Fib4的Vh dAb-Fc分子与DMS1576在抗VEGF Biacore中的行为。数据显示在表11D中。数据表明使用Fib4接头没有超过Fib3接头的优点，但是当使用Fib3或Fib4接头的序列从存在于DMS1576用于15-26-597 dAb与Fc的N-末端连接的 ‘AS’延长接头时，Vh dAb-Fc通过抗VEGF Biacore显示更优化的结合动力学。
全部数据集表明为了使用新接头以改进功效并且还减少糖基化同种型的数目，以构建最为优化的抗VEGF dAb-Fc-dAb，则对于：
(i)  DT-02-K44-085 Vk dAb至Fc的C-末端添加，纤连蛋白x4和螺旋状接头是优选的；
(ii) DT-02-K44-085 Vk dAb至Fc的N-末端添加，IgG1铰链、ASTHP和1xTVAAPs接头是优选的；
(iii) 15-26-597 Vh dAb至Fc的N-末端添加，纤连蛋白3接头是优选的，但IgG1铰链和AS接头也是可行的。
表11D：带有Fibr4和Fibr3 N-末端接头的抗VEGF VhdAb-Fc分子与VEGF165的结合，并与DMS1576比较。
Figure 159395DEST_PATH_IMAGE033
实施例35 –带有修饰接头的抗VEGF Vh/Vk 和 Vk/Vk dAb-Fc-dAb分子的克隆
通过将Vk dAb序列(DT02-K-044-085 (SEQ ID NO: 97 和 105)，或Vh dAb序列DOM15-26-597 (SEQ ID: 96 和 104)从Vh-dAb-Fc融合载体(DMS1576, SEQ ID NO: 2 和 30)克隆到Fc IgG1序列(SEQ ID: 102 和 110)的N-末端或C-末端上，将Vk-Vk dAb-Fc-dAb：DMS30034和DMS30035 (SEQ ID NO: 135-136、177-178，表19)和Vh-Vk dAb-Fc-dAb：DMS30036-DMS30041 (SEQ ID NO: 137-142、179-184，表19)工程化。在哺乳动物表达载体中，通过纤连蛋白x4接头 (SEQ ID: 63 和 82，参见表19)，将Fc IgG1连接到Vk dAb (DT02-K-044-085 (SEQ ID NO: 97 和 105))的C末端至N-末端。使用以下，将N-末端Vh dAb连接到Fc的N-末端：AS (SEQ ID NO:58 和 77，表19)：DMS30038 (SEQ ID NO:139、181，表19)，或铰链IgG1 (SEQ ID NO:60 和 79，表19)：DMS30037 (SEQ ID NO:138、180，表19)，或纤连蛋白3 (SEQ ID NO:67 和 86，表19)：DMS30036 (SEQ ID NO:137、179，表19)和DMS30040 (SEQ ID NO:141、183，表19)，或纤连蛋白4 (SEQ ID NO:60 和 79，表19)：DMS30039 (SEQ ID NO:140、182，表19)和DMS30041 (SEQ ID NO:142、184，表19 -)。使用以下，将N-末端Vk dAb连接到Fc的N-末端：铰链IgG1 (SEQ ID NO:60 和 79，表19)：DMS30034 (SEQ ID NO:135、177，表19)，或ASTHP (H2A IgG1Fc，SEQ ID NO: 58 和 65；77 和 84，表19)：DMS30035 (SEQ ID NO:136、178，表19)，或铰链IgG1 (SEQ ID NO:60 和 79，表19-)：DMS30043 (SEQ ID NO: 143、177，表19)。在序列DMS 30035、30040和30041 (分别为SEQ IDs 136 和 178；141 和 183；和142 和 148)中，Fc在Fc的3位包含代替苏氨酸的脯氨酸。
对纤连蛋白x4接头序列和C-末端Vk dAb进行密码子优化，以提高整体dAb-Fc-dAb密码子适应指数(人)至>0.95，用于在哺乳动物细胞中的稳定表达。通过寡核苷酸组装产生这个片段，并克隆到DMS30034 (SEQ ID 135 和 177)、DMS30036 (SEQ ID 137 和 179)、DMS30037 (SEQ ID 138 和 180)和DMS30038 (SEQ ID 139 和 181)，以分别产生DMS30043 (SEQ ID 143 和 177)、DMS30044 (SEQ ID 144 和 179)、DMS30045 (SEQ ID 145 和 180)和DMS30046 (SEQ ID 146 和 181)。为了说明，蛋白质氨基酸序列保持相同，仅改变了DNA序列。
实施例36 –带有修饰接头的抗VEGF Vh/Vk 和 Vk/Vk dAb-Fc-dAb分子的表达
使用实施例10和21中所述的方法，将编码相关抗VEGF dAb-Fc-dAb分子(列出在SEQ ID NO:135、137-139和177、179-181中)的表达质粒瞬时转染到HEK293 6E细胞中，并以500 ml规模表达以产生抗体片段分子。常规地达到 >30mg/L上清液的表达水平。
实施例37 –带有修饰接头的抗VEGF Vh/Vk 和 Vk/Vk dAb-Fc-dAb分子的纯化
从上清液(实施例36)亲和纯化dAb-Fc-dAb分子。将2ml在磷酸缓冲盐水中的悬浮亲和树脂(50:50浆料)添加到500 ml过滤的上清液；将上清液/亲和树脂混合物在+4℃温和摇晃过夜，以允许发生结合。在这个时间后，允许树脂沉降并小心地倾出上清液。将树脂重新悬浮在剩余的上清液中，并倾入到空滴柱中，并允许上清液通过柱流出。使用pH中性的含水缓冲液的组合清洗结合的产物，以除去非特异性结合的杂质，随后进行低pH洗脱。回收90%以上的结合产物，并且随后将洗脱合并物的pH调整至pH 3.5，进行30分钟以完成病毒中和，此时间后将pH调整至pH 4.5。
实施例38 –带有修饰接头的抗VEGF Vh/Vk 和 Vk/Vk dAb-Fc-dAb分子通过尺寸排阻层析(SEC)的分子分析
通过如实施例3、13 和 24中所述的SDS-PAGE和分析尺寸排阻层析(SEC)分析已如实施例38中所述纯化的抗VEGF dAb-Fc-dAb分子的完整性、同质性和纯度%。在生物测定中进一步分析之前，通过SDS-PAGE和SEC确定蛋白为>95%纯的目标蛋白。
实施例39 –在Biacore上，带有修饰接头的抗VEGF Vh/Vk 和 Vk/Vk dAb-Fc-dAb分子与VEGF的结合，以及与Vh和Vk dAb-Fcs和Vk Fc-dAb的比较
按照与实施例25和 34类似但稍有改进的方式，使用Biacore T100通过表面等离子共振(SPR)测定抗VEGF dAb-Fc-dAb分子对VEGF165的结合亲和力。通过伯胺偶联将蛋白A固定在C1芯片上，并且随后将此表面用于捕获抗VEGF构建体。以4倍连续稀释，在32nM至0.03125nM使用人重组VEGF165 (来自HEK293细胞的瞬时转染，“内部”来源)作为分析物。使用缓冲液注射(即，0nM)对所有结合曲线进行双参照，并且将数据对T100内带的1:1模型进行拟合。使用50mM NaOH进行再生。运行在37℃下进行，使用HBS-EP作为运行缓冲液。
将dAb-Fc-dAb分子与其对应的Vk Fc-dAb和Vk dAb-Fc和Vh dAb-Fc分子比较，数据显示在表12A中。这些Vh / Vk dAb-Fc-dAb的某一些：DMS30037和DMS30022 (参见表12A)，在Biacore上的表现预想不到地好，并且具有良好的结合和解离速率，表明是高度强效的分子。
表12A：抗VEGF dAb-Fc-dAb分子和对应的dAb-Fc-和Fc-dAb分子与VEGF165的结合
Figure 283209DEST_PATH_IMAGE034
获得进一步的Biacore数据集，对大部分看起来强效的dAb-Fc-dAb与DMS1576和Avastin进行比较，并且其中的实例显示在表12B中。所述数据集再次确认了Vh / Vk dAb-Fc-dAb：DMS30022、DMS30036、DMS30037和DMS30038在功效方面看起来与Avastin类似，并且Vk / Vk dAb-Fc-dAb DMS30034在整体上功效较低(在解离速率方面Kd s-1 1.04E-04，参见表12B)，尽管在整体KD方面对于DMS1576 有所改进(参见表12B)。
与实施例25不同，在这些结果中所见的dAb-Fc-dAb分子与VEGF结合数据表明，当两个VEGF结合位点具有类似的功效(例如，DMS30036、DMS30037和DMS30038)时，Biacore可以是用于分析二价抗VEGF dAb-Fc-dAb分子的非常有教益的测试形式，并且可用于区分具有一个有功效的结合位点的分子和具有一个功效较低的结合位点的分子，例如DMS30034。
表12B：抗VEGF dAb-Fc-dAb分子与 VEGF165的结合，以及与DMS1576和Avastin的比较。
Figure 567560DEST_PATH_IMAGE035
实施例40 –与最强效的Vh dAb-Fc和Avastin相比，带有修饰接头的抗VEGF Vh/Vk 和 Vk/Vk dAb-Fc-dAb分子的VEGF R2受体结合测定
使用实施例7、17 和 26中描述的改良方法，即没有预孵育，在VEGF受体2 (R2)结合测定中分析某些带有修饰接头的抗VEGF  Vh/Vk 和 Vk/Vk dAb-Fc-dAb分子的功效，并且与Vh dAb-Fc、DMS30030和贝伐单抗(Avastin)进行比较。数据显示在表13A和13B中。根据表13A中的数据，通过较低的EC50值，看起来所有测试的dAb-Fc-dAb分子：DMS30022、DMS30023、DMS30034、DMS30036和DMS30037比DMS30030更强效，且比贝伐单抗(Avastin)显著地更加强效。然而，分子在测定中达到的最大抑制百分比有一些差异，其中，Avastin、DMS30022和DMS30030达到>94%的最大抑制，且DMS30023、DMS30034、DMS30036和DMS30037达到78-84%的最大抑制(数据未显示)。
产生进一步的数据，比较dAb-Fc-dAb：DMS30022和DMS30038与Vh dAb-Fc：DMS30030和贝伐单抗(Avastin)，并且这显示在表13B。
综上，DMS30022和DMS30038看起来相当，且通过更低的EC50值而比DMS30030更强效，且比贝伐单抗(Avastin)显著地更加强效，表13B。同样，分子在测定中达到的最大抑制百分比也有一些差异，其中，Avastin、DMS30022和DMS30030达到>95%的最大抑制，且DMS30038达到91%的最大抑制(数据未显示)。
表13A：在VEGFR2受体结合测定中，抗VEGF dAb-Fc-dAb与DMS30030和贝伐单抗(Avastin)相比的EC50值。  
使用GraphPad Prism进行曲线拟合和EC50计算。
Figure 980087DEST_PATH_IMAGE036
表13B：在VEGFR2受体结合测定中，抗VEGF dAb-Fc-dAb：DMS30022和DMS30038与DMS30030和贝伐单抗(Avastin)相比的EC50值。  
使用GraphPad Prism进行曲线拟合和EC50计算。
实施例41 –人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖测定：使用含有修饰接头的抗VEGF Vh/Vk 和 Vk/Vk dAb-Fc-dAb分子的抑制作用
使用实施例8 和 18 和 27中所述的方法，将带有修饰接头的dAb-Fc-dAb分子：Vh-Vk (DMS30022、DMS30036、DMS30037)和Vk-Vk (DMS30023、DMS30034)抑制人脐静脉内皮细胞增殖的能力与Vh dAb-Fc分子(DMS30030)、Vk Fc-dAb分子(DMS30026)和贝伐单抗(Avastin)比较，并具有以下差异：(i) 不保持外侧的孔不含细胞，而是使用整个96孔板，和(ii) 相比于非线性回归(可变斜率)，使用GraphPad Prism利用Sigmodial曲线拟合，可变斜率分析数据。在单独的平板上针对比较分子贝伐单抗(Avastin)独立地评估测试化合物；进行至少4次单独的测定，以下每分子的总数据组为：贝伐单抗(Avastin)：20；DMS30030：8；DMS30036：8；DMS30022：4；DMS30037：8；DMS30026：4；DMS30023：4；DMS30034：4 (数据未显示)。焦点在于，分析与贝伐单抗(Avastin)相比，某些分子在测定中产生的最大抑制程度和相对EC50值这二者。
相比于非线性回归(可变斜率)，使用GraphPad Prism利用Sigmodial曲线拟合，可变斜率分析数据。将单个曲线拟合对于每种分子且在每天拟合。由于一些差拟合，决定对于在较低浓度没有观察到平台的曲线引入约束条件。这种约束条件将等于在最低浓度的点的平均值。手动选择数据，以是否约束最小值，并且基于这种标准选择自动更新曲线拟合和参数。使用变量的加权混合模型分析，使用1/ (标准误差)2，[SE]2，作为权重，分析曲线最大值和标准误差的估计值。使用随机效果项，对平板和天数之间的变量调整分析。根据这种分析，评估预测的平均值，并对Avastin (对照)进行反向比较(表14A)。随后，对IC50的log10规模进行相同的分析，并反向转化结果。由此产生几何平均值的估计值，并以对Avastin (对照)的比例的形式，对Avastin进行反向比较，即0.5的比例将表示从Avastin降低50% (表14B)。
表14A：在HUVEC测定中，与DMS30026、DMS30030和贝伐单抗(Avastin)比较的使用95%置信区间(CI)预测的抗VEGF dAb-Fc-dAb的最大抑制百分比的几何平均值。
Figure 251985DEST_PATH_IMAGE038
根据这种分析，分子DMS30022、DMS30034、DMS30036和DMS30037看起来在HUVEC测定中产生最大的最大抑制，并且，尽管它们的表现明显超过Avastin组，但置信区间与零参照重叠，因此与Avastin没有统计学显著的差异，数据未显示(表14A)。
表14B：在HUVEC测定中，与DMS30026、DMS30030和贝伐单抗(Avastin)比较的在95%置信区间(CI)的抗VEGF dAb-Fc-dAb的IC50的几何平均值。
Figure 2510DEST_PATH_IMAGE039
在95%置信区间(CI)的IC50值的几何平均值的类似分析显示分子DMS30022、DMS30023、DMS30036和DMS30037具有统计学上显著低于Avastin的IC50值，数据未显示(表14B)。
由来自不同操作者的类型形式的HUVEC测定产生单独的数据集。数据集中于比较两种dAb-Fc-dAb：DMS30022和DMS30037与贝伐单抗(Avastin)在HUVEC测定中的行为，并且一式四份地进行。数据表明，两种dAb-Fc-dAb在HUVEC测定中具有非常类似的IC50值和最大抑制水平，并且看起来比贝伐单抗(Avastin)更强效，尽管在这个具体数据集中不是统计学上如此(数据未显示)。
实施例42 –带有修饰接头的抗VEGF Vh/Vk 和 Vk/Vk dAb-Fc-dAb分子在VEGF诱导的血-视网膜破坏：兔视网膜渗漏模型中的性能
如实施例9中所述，在人VEGF165 (R&D Systems)在兔眼睛中诱导的血-视网膜破坏(BRB)模型中测试DMS30022、DMS30030、DMS30034、DMS30036和DMS30037，并与贝伐单抗(Avastin)和康宁克通(Tramcinalone)比较。
本研究的目的和方法与上文实施例9中简述的那些类似。给药和注射方案显示在表15A中。按照上文实施例9的方法，将所有分子经缓冲液交换到50mM乙酸钠缓冲液pH5.5，104mM NaCl，0.02mM EDTA中。
一百四十只(140) HY79B色素兔随机分入各十二只(12)动物的十一个(11)组，和八只动物的一个(1)组，除康宁克通处理组之外(各2只动物的4个小组)，每个组细分成各3只动物的4个实验小组(参见表15A)。
基于功能性VEGF结合测定，通过MSD (MesoScale Discovery)测定一些给药分子(DMS30036、DMS30037和DMS30022)的平均玻璃体内水平(数据未显示)。对于所测量的分子，水平与从注射水平以及分子在兔玻璃体中的可能半衰期范围预期的类似(数据未显示)。收集荧光素血管造影照片，用于定性评估。
表15A：与贝伐单抗(Avastin)和康宁克通(Triamcinalone)相比，通过DMS30022、DMS30030、DMS30034、DMS30036和DMS30037抑制VEGF诱导的兔视网膜渗漏的给药和注射方案。
Figure 902333DEST_PATH_IMAGE040
玻璃体内注射的VEGF诱导BRB破坏，其通过在注射后9天使用以下化合物在盲测时处理而被阻断：贝伐单抗(Avastin)，在所有3个剂量；DMS30030 (L和L/3剂量)；DMS30022 (L/3剂量)；DMS30034 (L/3剂量)、DMS30036 (L剂量)，和DMS30037 (L和L/3剂量)，功效类似于市售的参照物(康宁克通?)。在盲测研究中，在使用媒介物、阴性对照和L/3剂量的DMS30036处理后，在诱导的右眼中注意到大量的视网膜血管渗漏，尽管归类受到单个显著离群数据点的影响(数据未显示)。注意，由于荧光计分异常，将一个数据点(兔子134)从DMS30037 L/3剂量组的进一步分析中排除。
对原始数据进行进一步的统计分析：将对应于相同分子和剂量的盲测组合并，并使用95%置信区间(CI)测定几何平均值。几何平均数据值显示在表15B (i)中，并且对媒介物值的比例以及在95% CI的方差显示在表15B (ii)中。根据表15B (i)和(ii)中的数据分析，市售的肾上腺皮质激素参照物(康宁克通?缓蚀剂)降低VEGF诱导的视网膜渗漏程度80%，三种不同剂量的贝伐单抗(Avastin)的有效率为71.4-76.4%，没有明显的剂量应答，DMS30022 (L/3)的有效率为74.6%，DMS30037 (L)为74.2%且 (L/3)为67.4%；DMS30036 L/3 为63.7%；DMS30034 L/3为59.5%且DMS 30030 (L)为65.5%且L/3为70.5%。总之，Vh/Vk dAb-Fc-dAb，例如DMS30022和DMS30037是在这个模型中最强效的形式。
表15B：与贝伐单抗(Avastin)和康宁克通(Triamcinalone)相比，通过DMS30022、DMS30030、DMS30034、DMS30036 和DMS30037抑制VEGF诱导的兔视网膜渗漏。  
根据log10左眼数值(LE)调整的log10右数值(RE)的分析，(排除第5组：DMS30037 L/3中兔子134的不透明晶状体)
(i) 几何平均值
Figure 468443DEST_PATH_IMAGE041
(ii) 与媒介物的比例和下降百分比
Figure 832429DEST_PATH_IMAGE042
实施例43 –来自中国仓鼠卵巢(CHO)细胞的Vh/Vk dAb-Fc-dAb分子的大规模纯化
例如，使用亲和层析和自动FPLC纯化***从澄清的细胞培养上清液捕获DMS30037。一经上样，则使用pH中性的含水缓冲液的组合清洗结合的产物，以除去非特异性结合的杂质，随后进行低pH洗脱，由此回收超过90%的结合产物。在-40℃贮存后，将洗脱合并物解冻，随后调整至pH 3.6，进行30分钟以实现病毒中和，在此时间后，将pH调节至pH 6.0。在第二柱上进一步纯化pH调整的合并物，其中，将产物在促进加工杂质去除的非产物结合条件下上样。随后，收集纯化的DMS30037作为合并物，此后进行0.2μm过滤和贮存。此外，在低盐缓冲液中将DMS30037亲和柱洗脱物的pH调整至7.5，过滤并随后浓缩并使用正切流动过滤***将其渗滤到适合的配制缓冲液中。对回收的产物进行0.2μm无菌过滤并贮存。
实施例44 –带有修饰C-末端的抗VEGF Vh/Vk dAb-Fc-dAb分子的克隆
通过PCR产生变体Vk dAb序列，并且随后分别重新克隆到DMS30045和DMS30046中，以产生修饰的哺乳动物表达载体，从而工程化带有对Vk dAb的C-末端的修饰的Vh-Vk dAb-Fc-dAb：DMS30047-30054 (SEQ ID NO:147-154 和 185-192，表19)。从DMS30045：(i) 除去C-末端的精氨酸残基以产生DMS30047 (DMS30037-R)，(ii) 添加C-末端丙氨酸以产生DMS30048 (DMS30037+A)，(iii) 添加三个C-末端丙氨酸以产生DMS30049 (DMS30037+AAA)和添加C-末端苏氨酸以产生DMS30050 (DMS30037+T)。从DMS30046 ：(i) 除去C-末端的精氨酸残基以产生DMS30051 (DMS30038-R)，(ii) 添加C-末端丙氨酸以产生DMS30052 (DMS30038+A)，(iii) 添加三个C-末端丙氨酸以产生DMS30053 (DMS30038+AAA)和添加C-末端苏氨酸以产生DMS30054 (DMS30038+T)。
实施例45 –带有修饰C-末端的抗VEGF Vh/Vk dAb-Fc-dAb分子(DMS30047-30054)的表达
使用实施例10、21和36中所述的方法，将编码相关抗VEGF dAb-Fc-dAb分子(列出在SEQ ID NO:147-154和185-192，表19)的表达质粒瞬时转染到HEK293 6E细胞中，并以500 ml规模表达以产生抗体片段分子。常规地达到 >30mg/L上清液的表达水平。
实施例46 –带有修饰C-末端的抗VEGF Vh/Vk dAb-Fc-dAb分子的纯化
如上文实施例37所述，从上清液(实施例45)亲和纯化dAb-Fc-dAb分子。
实施例47 –带有修饰C-末端的抗VEGF Vh/Vk dAb-Fc-dAb分子通过尺寸排阻层析(SEC)的分子分析
通过如实施例3和13中所述的SDS-PAGE和分析尺寸排阻层析(SEC)分析已如实施例46中所述纯化的抗VEGF dAb-Fc-dAb分子的完整性、同质性和纯度%。在生物测定中进一步分析之前，通过SDS-PAGE和SEC确定蛋白为>95%纯的目标蛋白。
实施例48 –带有修饰C-末端的抗VEGF Vh/Vk dAb-Fc-dAb分子在Biacore上与VEGF的结合
按照与实施例34和40类似但稍有改进的方式，使用Biacore T100通过表面等离子共振(SPR)测定某些抗VEGF dAb-Fc-dAb分子(带有小的C-末端修饰)对VEGF165的结合亲和力。通过伯胺偶联将蛋白A固定在C1芯片上，并且随后将此表面用于捕获抗VEGF构建体。以4倍连续稀释，在32nM至0.03125nM使用人重组VEGF165 (来自HEK293细胞的瞬时转染，“内部”来源)作为分析物。使用缓冲液注射(即，0nM)对所有结合曲线进行双参照，并且将数据对T100内带的1:1模型进行拟合。使用50mM NaOH进行再生。运行在37℃下进行，使用HBS-EP作为运行缓冲液。获得的数据显示在表16A、16B 和 16C中。根据表16A中的数据，DMS30037以及在C-末端修饰的若干个变体：DMS30037+A (DMS30048)、DMS30037+AAA (DMS30049)和DMS30037+T (DMS30050)在Biacore上的行为看起来相似，并且C-末端修饰看起来没有使功效比亲本降低。
进一步的数据集显示在表16B中，其中将DMS30037和DMS30038二者在Biacore上的性能与在C-末端修饰的变体：DMS30037-R (标记为 +R (DMS30047))、DMS30037+T (DMS30050)和DMS30038-R (标记为 +R (DMS30051))以及贝伐单抗(Avastin)进行比较。在这个数据集中，所有分子在Biacore上的行为同样看起来相似，并且C-末端修饰看起来没有使功效比亲本降低。除了观察Avastin曲线之外，没能捕获到有意义的数据。进一步的数据集显示在表16C中，其中将分子DMS30037和DMS30038与C-末端修饰的变体：DMS30037-R (DMS30047)、DMS30037+T (DMS30050)、DMS30038-R (DMS30051)和DMS30038+T (DMS30054)，以及贝伐单抗(Avastin)进行比较。所有dAb-Fc-dAb分子在Biacore上的行为同样看起来相似，并且C-末端修饰看起来没有使功效比亲本降低。参见表16C，在这个数据集中，由于解离速率太紧，不能恰当地测量贝伐单抗(Avastin)数据。
表16A：抗VEGF dAb-Fc-dAb分子：带有C-末端修饰的DMS30037与VEGF165的结合，以及与DMS30037的比较
Figure 193003DEST_PATH_IMAGE043
表16B：抗VEGF dAb-Fc-dAb分子：带有C-末端修饰的DMS30037和DMS30038与VEGF165的结合，以及与亲本dAb-Fc-dAb以及贝伐单抗(Avastin)的比较。
Figure 580122DEST_PATH_IMAGE044
表16C：抗VEGF dAb-Fc-dAb分子：带有C-末端修饰的DMS30037和DMS30038与VEGF165的结合，以及与亲本dAb-Fc-dAb以及贝伐单抗(Avastin)的比较。
Figure 12240DEST_PATH_IMAGE045
实施例49 –带有修饰C-末端的抗VEGF Vh/Vk dAb-Fc-dAb分子的VEGF R2受体结合测定
用实施例7、17 和 26 和 40中描述的改良方法，即没有预孵育，在VEGF受体 2 (R2)结合测定中比较基于DMS30037和DMS30038但具有C-末端修饰的抗VEGF  Vh/Vk dAb-Fc-dAb分子与野生型分子以及贝伐单抗(Avastin)的功效。数据显示在表17A中，看起来所有测试的dAb-Fc-dAb分子：DMS30037、DMS30037+T (DMS30050)、DMS30037-R (DMS30047)、DMS30038、DMS30038-R (DMS30051)都具有相当的功效，且比贝伐单抗(Avastin)显著地更加强效，表17A。分子在测定中达到的最大抑制百分比几乎没有变化，所有分子都达到>93-98%的最大抑制(数据未显示)。
产生进一步的数据，在相同测定形式中比较dAb-Fc-dAb：DMS30038、DMS30038+T、(DMS30050)和DMS30038-R (DMS30051)与贝伐单抗(Avastin)，所述数据显示在表17B中。根据所述数据，DMS30038及其C-末端变体(表17B)，通过RBA测定中的EC值判断具有相似的功效，并且通过这种标准看起来比贝伐单抗(Avastin)显著地更加强效。所述分子在测定中达到的最大抑制百分比几乎没有变化，所有分子都达到>94%的最大抑制(数据未显示)。
表17A：在VEGFR2受体结合测定中，带有C-末端修饰的抗VEGF dAb-Fc-dAb相比于贝伐单抗(Avastin)的EC50值。  
使用GraphPad Prism进行曲线拟合和EC50计算。
Figure 902836DEST_PATH_IMAGE046
表17B：在VEGFR2受体结合测定中，带有C-末端修饰的抗VEGF dAb-Fc-dAb相比于贝伐单抗(Avastin)的EC50值。  
使用GraphPad Prism进行曲线拟合和EC50计算。
实施例49 –人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖测定：使用包含C-末端修饰的抗VEGF Vh/Vk dAb-Fc-dAb分子的抑制作用
使用实施例8、18、27 和 41中所述的方法，将基于DMS30037和DMS30038但带有C-末端修饰的dAb-Fc-dAb分子：DMS30037-R (DMS30047) 和 DMS30037+T (DMS30050)、DMS30038-R (DMS30051) 和 DMS30038+T (DMS30054)抑制人脐静脉内皮细胞增殖的能力与贝伐单抗(Avastin)比较，并具有以下差异：(i) 不保持外侧的孔不含细胞，而是使用整个96孔板，和(ii) 相比于非线性回归(可变斜率)，使用GraphPad Prism利用Sigmodial曲线拟合，可变斜率分析数据。在单独的平板上针对比较分子贝伐单抗(Avastin)独立地评估测试化合物；进行至少3次单独的测定，以下每分子的总数据组为：贝伐单抗(Avastin)：15；DMS30037：7；DMS30038：8； DMS30037-R (DMS30047)：3；DMS30037+T (DMS30050)：4；DMS30038-R (DMS30051)：4 和 DMS30038+T (DMS30054)：4 (数据未显示)。焦点在于，分析与贝伐单抗(Avastin)相比，某些分子在测定中产生的最大抑制程度和相对EC50值这二者。
相比于非线性回归(可变斜率)，使用GraphPad Prism利用Sigmodial曲线拟合、可变斜率分析数据。将单个曲线拟合对于每种分子且在每天拟合。由于一些差拟合，决定对于在较低浓度没有观察到平台的曲线引入约束条件。由于尽管有约束条件仍曲线拟合差，将一个平板从分析排除。这种约束条件将等于在最低浓度的点的平均值。手动选择数据，以是否约束最小值，并且基于这种标准选择自动更新曲线拟合和参数。使用变量的加权混合模型分析，使用1/ (标准误差)2，[SE]2，作为权重，分析曲线最大值和标准误差的估计值。使用随机效果项，对平板和天数之间的变量调整分析。根据这种分析，评估预测的平均值，并对贝伐单抗(Avastin，对照)进行反向比较(参见表18A)。随后，对IC50的log10规模进行相同的分析，并反向转化结果。由此产生几何平均值的估计值，并以对贝伐单抗 (Avastin，对照)的比例的形式，对贝伐单抗(Avastin)进行反向比较，即0.5的比例将表示从贝伐单抗(Avastin)降低50% (参见表18B)。
表18A：在HUVEC测定中，与亲本和贝伐单抗(Avastin)比较的使用95%置信区间(CI)预测的C末端修饰的抗VEGF dAb-Fc-dAb的最大抑制百分比的几何平均值。
根据这种分析，分子DMS30037, DMS30037+T和DMS30037-R看起来在HUVEC测定中产生最大的最大抑制，并且它们的表现超过Avastin组，置信区间没有与零参照重叠，因此，与Avastin的数据相比，所述数据具有统计学上的显著性，数据未显示(参见表18A)。
表18B：在HUVEC测定中，与亲本和贝伐单抗(Avastin)比较的使用95%置信区间(CI)的C末端修饰的抗VEGF dAb-Fc-dAb 的IC50的几何平均值。
Figure 544536DEST_PATH_IMAGE049
使用95%置信区间(CI)的IC50值的几何平均值的类似分析显示所有的dAb-Fc-dAb分子DMS30037、DMS30037+T、DMS30038、DMS30038+T和DMS30038-R具有统计学上显著低于贝伐单抗(Avastin)的IC50值，数据未显示(参见表18B)。使用低n数目(3)，来自DMS30037-R的数据集高度可变。
整体数据表明对两种dAb-Fc-dAb：DMS30037 和 DMS30038的C-末端修饰在HUVEC测定中具有与亲本分子非常类似的IC50值和最大抑制水平，并且在最大抑制百分比和较低的IC50的两个方面都看起来比贝伐单抗(Avastin)更强效(参见表18A和18B)。
实施例50：Vh dAb-Fc (DMS1529)和Vk Fc-dAb (DMS30000)与鼠VEGF164的交叉反应性
使用1或2μg/mL mVEGF164 (R&D 493-MV/CF) (25μL/孔)包被MSD (MesoScale Discovery)高结合96孔板(MSD L11XB-3)，密封并在4℃孵育过夜。次日，使用Tris清洗缓冲液以3x 300μl/孔清洗MSD平板，并使用PBS中的3% BSA (250uL/孔)封闭，并在室温下振荡(750 RPM)孵育1小时。再次清洗MSD平板，随后添加DMS1529、DMS30000或mVEGF R2 Fc (R&D 443-KD/CF)标准曲线(25uL/孔)并在室温下振荡(750 RPM)孵育2小时。使用PBS中的0.1% BSA稀释标准品。再次清洗MSD平板，随后添加在PBS中的1% BSA中的1μg/mL的检测试剂(25μL/孔，内部硫代-TAG标记的山羊抗人IgG，Fc特异性– Sigma I2136)，并在室温下振荡(750 RPM)孵育1小时。在MSD Sector Imager 6000中测量电化学发光之前，再次清洗MSD平板，并添加150μl/孔的2x读数缓冲液T (MSD R92TC-1)。使用Excel进行数据分析和绘图。
示例数据集显示在图4中，其中对于DMS1529、DMS3000和小鼠VEGF R2 Fc对照蛋白，将MSD信号相对抗体浓度作图。
所有3种蛋白都以浓度依赖性的方式与小鼠VEGF164明显结合，表明所述dAb与小鼠VEGF164交叉反应。
表19：DNA和氨基酸序列ID表
Figure 118999DEST_PATH_IMAGE050
Figure 183087DEST_PATH_IMAGE052
表19续：DNA和氨基酸序列ID表
Figure 822195DEST_PATH_IMAGE054
Figure 961053DEST_PATH_IMAGE055
Figure 606798DEST_PATH_IMAGE056
Figure 856514DEST_PATH_IMAGE057
Figure 904104DEST_PATH_IMAGE058
Figure 213863DEST_PATH_IMAGE059
Figure 284587DEST_PATH_IMAGE060
Figure 916424DEST_PATH_IMAGE061
Figure 756204DEST_PATH_IMAGE062
Figure 591621DEST_PATH_IMAGE064
Figure 143006DEST_PATH_IMAGE066
Figure 902200DEST_PATH_IMAGE068
Figure 297409DEST_PATH_IMAGE069
Figure 908519DEST_PATH_IMAGE070
Figure 996561DEST_PATH_IMAGE071
Figure 827376DEST_PATH_IMAGE072
Figure 26276DEST_PATH_IMAGE073
Figure 429576DEST_PATH_IMAGE074
Figure 750836DEST_PATH_IMAGE075
Figure 505165DEST_PATH_IMAGE076
Figure 242177DEST_PATH_IMAGE077
Figure 827879DEST_PATH_IMAGE078
Figure 257723DEST_PATH_IMAGE079
Figure 296086DEST_PATH_IMAGE080
Figure 836789DEST_PATH_IMAGE081
Figure 480260DEST_PATH_IMAGE082
Figure 184015DEST_PATH_IMAGE085
Figure 250377DEST_PATH_IMAGE087
Figure 528911DEST_PATH_IMAGE088
Figure 411417DEST_PATH_IMAGE089
Figure 763900DEST_PATH_IMAGE090
Figure 768766DEST_PATH_IMAGE091
Figure 206700DEST_PATH_IMAGE092
Figure 627317DEST_PATH_IMAGE093
Figure 511539DEST_PATH_IMAGE095
Figure 499086DEST_PATH_IMAGE096
Figure 723394DEST_PATH_IMAGE097
Figure 112787DEST_PATH_IMAGE098
Figure 397138DEST_PATH_IMAGE099
Figure 809665DEST_PATH_IMAGE100
Figure 815984DEST_PATH_IMAGE102
Figure 103527DEST_PATH_IMAGE103
Figure 402287DEST_PATH_IMAGE106
Figure 28441DEST_PATH_IMAGE107
Figure 415560DEST_PATH_IMAGE108
Figure 582099DEST_PATH_IMAGE109
Figure 738274DEST_PATH_IMAGE110
Figure 597645DEST_PATH_IMAGE111
Figure 206481DEST_PATH_IMAGE112
Figure 954436DEST_PATH_IMAGE114
        序列表                               
 
<110> Glaxo Group Limited
 
<120> 抗原结合构建体
 
 
<130> PB64717
 
<160> 192
 
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
 
<210> 1
<211> 1029
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-593-Fc dAb-Fc
 
<400> 1
gaggtgcagc tgttggtgtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgcgtctc 60
tcctgtgcag cctccggatt cacctttaag gcttatccga tgatgtgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg gtctagagtg ggtttcagag atttcgcctt cgggttctta tacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tcccgcgaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgcg tgccgaggac accgcggtat attactgtgc gaaagatcct 300
cggaagttag actactgggg tcagggaacc ctggtcaccg tctcgagcgc tagcacccac 360
acctgccccc cctgccctgc ccccgagctg ctgggcggac ctagcgtgtt cctgttcccc 420
cccaagccta aggacaccct gatgatcagc aggacccccg aagtgacctg cgtggtggtg 480
gatgtgagcc acgaggaccc tgaagtgaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaagtg 540
cacaacgcca agaccaagcc cagagaggag cagtacaaca gcacctaccg cgtggtgtct 600
gtgctgaccg tgctgcacca ggattggctg aacggcaagg agtacaagtg caaagtgagc 660
aacaaggccc tgcctgcccc tatcgagaaa accatcagca aggccaaggg ccagcctaga 720
gagccccagg tctacaccct gcctccctcc agagatgagc tgaccaagaa ccaggtgtcc 780
ctgacctgtc tggtgaaggg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaac 840
ggccagcccg agaacaacta caagaccacc ccccctgtgc tggacagcga tggcagcttc 900
ttcctgtact ccaagctgac cgtggacaag agcagatggc agcagggcaa cgtgttcagc 960
tgcagcgtga tgcacgaggc cctgcacaat cactacaccc agaagagtct gagcctgtcc 1020
cctggcaag                                                         1029
 
<210> 2
<211> 1029
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597-Fc dAb-Fc
 
<400> 2
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccca tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccca gcggcagcaa cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggacccc 300
cggaagctgg actactgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcagcgc tagcacccac 360
acctgccccc cctgccctgc ccctgagctg ctgggcggac ccagcgtgtt cctgttcccc 420
cccaagccca aggacaccct gatgatcagc cggacccccg aggtgacctg cgtggtggtg 480
gacgtgagcc acgaggaccc tgaggtgaag ttcaattggt acgtggacgg cgtggaggtg 540
cacaacgcca agaccaagcc ccgggaggaa cagtacaaca gcacctaccg ggtggtgtcc 600
gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg aacggcaaag aatacaagtg caaggtgtcc 660
aacaaggccc tgcctgcccc catcgagaaa accatcagca aggccaaggg ccagcccagg 720
gaaccccagg tgtacaccct gccccccagc cgggacgagc tgaccaagaa ccaggtgtcc 780
ctgacctgcc tggtgaaggg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaac 840
ggccagcccg agaacaacta caagaccacc ccccctgtgc tggacagcga cggcagcttc 900
ttcctgtaca gcaagctgac cgtggacaag agccggtggc agcagggcaa cgtgttcagc 960
tgcagcgtga tgcacgaggc cctgcacaac cactacaccc agaagagcct gagcctgtcc 1020
cccggcaag                                                         1029
 
<210> 3
<211> 1095
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb (GS(TVAAPSGS)x3接头) Fc-dAb的C-末端Fc融合体
 
<400> 3
caggctagct ctgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctggga 60
ggccccagcg tgttcctgtt cccccccaag cctaaggaca ccctgatgat cagcagaacc 120
cccgaggtga cctgtgtggt ggtggatgtg agccacgagg accctgaggt gaagttcaac 180
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaat gccaagacca agcccaggga ggagcagtac 240
aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 300
aaggagtaca agtgtaaggt gtccaacaag gccctgcctg cccctatcga gaaaaccatc 360
agcaaggcca agggccagcc cagagagccc caggtgtaca ccctgccccc tagcagagat 420
gagctgacca agaaccaggt gtccctgacc tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac 480
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 540
gtgctggaca gcgatggcag cttcttcctg tacagcaagc tgaccgtgga caagagcaga 600
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgctcc gtgatgcacg aggccctgca caatcactac 660
acccagaaga gcctgagcct gtcccctggc aagggatcta ccgtggcagc accatcagga 720
tctaccgtgg cagcaccatc aggttcaaca gtagctgctc cttctggatc cgacatccag 780
atgacccagt ctccatcctc cctgtctgca tctgtaggag accgtgtcac catcacttgc 840
cgggcaagtc agtggattgg tcctgagtta aagtggtacc agcagaaacc agggaaagcc 900
cctaagctcc tgatctatca tggttccatt ttgcaaagtg gggtcccatc acgtttcagt 960
ggcagtggat ctgggacaga cttcactctc accatcagca gtctgcaacc tgaagatttt 1020
gctacgtact actgtcaaca gtatatgtat tatcctcata cgttcggcca agggaccaag 1080
gtggaaatca aacgt                                                  1095
 
<210> 4
<211> 1095
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-232 dAb (GS(TVAAPSGS)x3接头) Fc-dAb的C-末端Fc融合体
 
<400> 4
caggctagct ctgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctggga 60
ggccccagcg tgttcctgtt cccccccaag cctaaggaca ccctgatgat cagcagaacc 120
cccgaggtga cctgtgtggt ggtggatgtg agccacgagg accctgaggt gaagttcaac 180
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaat gccaagacca agcccaggga ggagcagtac 240
aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 300
aaggagtaca agtgtaaggt gtccaacaag gccctgcctg cccctatcga gaaaaccatc 360
agcaaggcca agggccagcc cagagagccc caggtgtaca ccctgccccc tagcagagat 420
gagctgacca agaaccaggt gtccctgacc tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac 480
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 540
gtgctggaca gcgatggcag cttcttcctg tacagcaagc tgaccgtgga caagagcaga 600
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgctcc gtgatgcacg aggccctgca caatcactac 660
acccagaaga gcctgagcct gtcccctggc aagggatcta ccgtggcagc accatcagga 720
tctaccgtgg cagcaccatc aggttcaaca gtagctgctc cttctggatc cgacatccag 780
atgacccagt ctccatcctc cctgtctgca tctgtaggag accgtgtcac catcacttgc 840
cgggcaagtc agtggattgg tcctgagtta agttggtacc agcagaaacc agggaaagcc 900
cctaagctcc tgatctatca tggttccatt ttgcaaagtg gggtcccatc acgtttcagt 960
ggcagtggat ctgggacaga cttcactctc accatcagca gtctgcaacc tgaagatttt 1020
gctacgtact actgtcaaca gtatatgtat tatcctgaga cgttcggcca agggaccaag 1080
gtggaaatca aacgt                                                  1095
 
<210> 5
<211> 1095
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-236 dAb (GS(TVAAPSGS)x3接头) Fc-dAb的C-末端Fc融合体 
 
<400> 5
caggctagct ctgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctggga 60
ggccccagcg tgttcctgtt cccccccaag cctaaggaca ccctgatgat cagcagaacc 120
cccgaggtga cctgtgtggt ggtggatgtg agccacgagg accctgaggt gaagttcaac 180
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaat gccaagacca agcccaggga ggagcagtac 240
aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 300
aaggagtaca agtgtaaggt gtccaacaag gccctgcctg cccctatcga gaaaaccatc 360
agcaaggcca agggccagcc cagagagccc caggtgtaca ccctgccccc tagcagagat 420
gagctgacca agaaccaggt gtccctgacc tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac 480
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 540
gtgctggaca gcgatggcag cttcttcctg tacagcaagc tgaccgtgga caagagcaga 600
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgctcc gtgatgcacg aggccctgca caatcactac 660
acccagaaga gcctgagcct gtcccctggc aagggatcta ccgtggcagc accatcagga 720
tctaccgtgg cagcaccatc aggttcaaca gtagctgctc cttctggatc cgacatccag 780
atgacccagt ctccatcctc cctgtctgca tctgtaggag accgtgtcac catcacttgc 840
cgggcaagtc agtggattgg tcctgagtta agttggtacc agcagaaacc agggaaagcc 900
cctaagctcc tgatctatca tggttccatt ttgcaaagtg gggtcccatc acgtttcagt 960
ggcagtggat ctgggacaga cttcactctc accatcagca gtctgcaacc tgaagatttt 1020
gctacgtact actgtcaaca gtatatgtat tatcctaaga cgttcggcca agggaccaag 1080
gtggaaatca aacgt                                                  1095
 
<210> 6
<211> 1095
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-251 dAb (GS(TVAAPSGS)x3接头) Fc-dAb的C-末端Fc融合体 
 
<400> 6
caggctagct ctgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctggga 60
ggccccagcg tgttcctgtt cccccccaag cctaaggaca ccctgatgat cagcagaacc 120
cccgaggtga cctgtgtggt ggtggatgtg agccacgagg accctgaggt gaagttcaac 180
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaat gccaagacca agcccaggga ggagcagtac 240
aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 300
aaggagtaca agtgtaaggt gtccaacaag gccctgcctg cccctatcga gaaaaccatc 360
agcaaggcca agggccagcc cagagagccc caggtgtaca ccctgccccc tagcagagat 420
gagctgacca agaaccaggt gtccctgacc tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac 480
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 540
gtgctggaca gcgatggcag cttcttcctg tacagcaagc tgaccgtgga caagagcaga 600
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgctcc gtgatgcacg aggccctgca caatcactac 660
acccagaaga gcctgagcct gtcccctggc aagggatcta ccgtggcagc accatcagga 720
tctaccgtgg cagcaccatc aggttcaaca gtagctgctc cttctggatc cgacatccag 780
atgacccagt ctccatcctc cctgtctgca tctgtaggag accgtgtcac catcacttgc 840
cgggcaagtc agtggattgg tcctgagtta aagtggtacc agcagaaacc agggaaagcc 900
cctaagctcc tgatctatca tggttccatt ttgcaaagtg gggtcccatc acgtttcagt 960
ggcagtggat ctgggacaga cttcactctc accatcagca gtctgcaacc tgaagatttt 1020
gctacgtact actgtcaaca gtatatgtat tatcctgaga cgttcggcca agggaccaag 1080
gtggaaatca aacgt                                                  1095
 
<210> 7
<211> 1095
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-255 dAb (GS(TVAAPSGS)x3接头) Fc-dAb的C-末端Fc融合体 
 
<400> 7
caggctagct ctgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctggga 60
ggccccagcg tgttcctgtt cccccccaag cctaaggaca ccctgatgat cagcagaacc 120
cccgaggtga cctgtgtggt ggtggatgtg agccacgagg accctgaggt gaagttcaac 180
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaat gccaagacca agcccaggga ggagcagtac 240
aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 300
aaggagtaca agtgtaaggt gtccaacaag gccctgcctg cccctatcga gaaaaccatc 360
agcaaggcca agggccagcc cagagagccc caggtgtaca ccctgccccc tagcagagat 420
gagctgacca agaaccaggt gtccctgacc tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac 480
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 540
gtgctggaca gcgatggcag cttcttcctg tacagcaagc tgaccgtgga caagagcaga 600
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgctcc gtgatgcacg aggccctgca caatcactac 660
acccagaaga gcctgagcct gtcccctggc aagggatcta ccgtggcagc accatcagga 720
tctaccgtgg cagcaccatc aggttcaaca gtagctgctc cttctggatc cgacatccag 780
atgacccagt ctccatcctc cctgtctgca tctgtaggag accgtgtcac catcacttgc 840
cgggcaagtc agtggattgg tcctgagtta aagtggtacc agcagaaacc agggaaagcc 900
cctaagctcc tgatctatca tggttccatt ttgcaaagtg gggtcccatc acgtttcagt 960
ggcagtggat ctgggacaga cttcactctc accatcagca gtctgcaacc tgaagatttt 1020
gctacgtact actgtcaaca gtatatgtat tatcctaaga cgttcggcca agggaccaag 1080
gtggaaatca aacgt                                                  1095
 
<210> 8
<211> 1020
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-251 dAb (AAAS接头) dAb-Fc的N-末端Fc融合体 
 
<400> 8
gagtcgacgg acatccagat gacccagtct ccatcctccc tgtctgcatc tgtaggagac 60
cgtgtcacca tcacttgccg ggcaagtcag tggattggtc ctgagttaaa gtggtaccag 120
cagaaaccag ggaaagcccc taagctcctg atctatcatg gttccatttt gcaaagtggg 180
gtcccatcac gtttcagtgg cagtggatct gggacagact tcactctcac catcagcagt 240
ctgcaacctg aagattttgc tacgtactac tgtcaacagt atatgtatta tcctgagacg 300
ttcggccaag ggaccaaggt ggaaatcaaa cgggcggccg ctagcaccca cacctgcccc 360
ccctgccctg cccccgagct gctgggcgga cctagcgtgt tcctgttccc ccccaagcct 420
aaggacaccc tgatgatcag caggaccccc gaagtgacct gcgtggtggt ggatgtgagc 480
cacgaggacc ctgaagtgaa gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaagt gcacaacgcc 540
aagaccaagc ccagagagga gcagtacaac agcacctacc gcgtggtgtc tgtgctgacc 600
gtgctgcacc aggattggct gaacggcaag gagtacaagt gcaaagtgag caacaaggcc 660
ctgcctgccc ctatcgagaa aaccatcagc aaggccaagg gccagcctag agagccccag 720
gtctacaccc tgcctccctc cagagatgag ctgaccaaga accaggtgtc cctgacctgt 780
ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc 840
gagaacaact acaagaccac cccccctgtg ctggacagcg atggcagctt cttcctgtac 900
tccaagctga ccgtggacaa gagcagatgg cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg 960
atgcacgagg ccctgcacaa tcactacacc cagaagagtc tgagcctgtc ccctggcaag 1020
 
 
<210> 9
<211> 1020
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-255 dAb (AAAS接头) dAb-Fc的N-末端Fc融合体 
 
<400> 9
gagtcgacgg acatccagat gacccagtct ccatcctccc tgtctgcatc tgtaggagac 60
cgtgtcacca tcacttgccg ggcaagtcag tggattggtc ctgagttaaa gtggtaccag 120
cagaaaccag ggaaagcccc taagctcctg atctatcatg gttccatttt gcaaagtggg 180
gtcccatcac gtttcagtgg cagtggatct gggacagact tcactctcac catcagcagt 240
ctgcaacctg aagattttgc tacgtactac tgtcaacagt atatgtatta tcctaagacg 300
ttcggccaag ggaccaaggt ggaaatcaaa cgggcggccg ctagcaccca cacctgcccc 360
ccctgccctg cccccgagct gctgggcgga cctagcgtgt tcctgttccc ccccaagcct 420
aaggacaccc tgatgatcag caggaccccc gaagtgacct gcgtggtggt ggatgtgagc 480
cacgaggacc ctgaagtgaa gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaagt gcacaacgcc 540
aagaccaagc ccagagagga gcagtacaac agcacctacc gcgtggtgtc tgtgctgacc 600
gtgctgcacc aggattggct gaacggcaag gagtacaagt gcaaagtgag caacaaggcc 660
ctgcctgccc ctatcgagaa aaccatcagc aaggccaagg gccagcctag agagccccag 720
gtctacaccc tgcctccctc cagagatgag ctgaccaaga accaggtgtc cctgacctgt 780
ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc 840
gagaacaact acaagaccac cccccctgtg ctggacagcg atggcagctt cttcctgtac 900
tccaagctga ccgtggacaa gagcagatgg cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg 960
atgcacgagg ccctgcacaa tcactacacc cagaagagtc tgagcctgtc ccctggcaag 1020
 
 
<210> 10
<211> 1416
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597-AS接头-Fc-白蛋白结构域3
      接头-DT02-K-044-085 Vh-Vk dAb-Fc-dAb
 
<400> 10
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccca tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccca gcggcagcaa cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggacccc 300
cggaagctgg actactgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcagcgc tagcacccac 360
acctgccccc cctgccctgc ccccgagctg ctgggaggcc ccagcgtgtt cctgttcccc 420
cccaagccta aggacaccct gatgatcagc agaacccccg aggtgacctg tgtggtggtg 480
gatgtgagcc acgaggaccc tgaggtgaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 540
cacaatgcca agaccaagcc cagggaggag cagtacaaca gcacctaccg ggtggtgtcc 600
gtgctgaccg tgctgcacca ggattggctg aacggcaagg agtacaagtg taaggtgtcc 660
aacaaggccc tgcctgcccc tatcgagaaa accatcagca aggccaaggg ccagcccaga 720
gagccccagg tgtacaccct gccccctagc agagatgagc tgaccaagaa ccaggtgtcc 780
ctgacctgcc tggtgaaggg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaac 840
ggccagcccg agaacaacta caagaccacc ccccctgtgc tggacagcga tggcagcttc 900
ttcctgtaca gcaagctgac cgtggacaag agcagatggc agcagggcaa cgtgttcagc 960
tgctccgtga tgcacgaggc cctgcacaat cactacaccc agaagagcct gagcctgtcc 1020
cctggcaagg aggtggacga gacctacgtg cccaaggagt tcaacgccga gaccttcacc 1080
ttccacgccg acgacatcca gatgacccag tctccatcct ccctgtctgc atctgtagga 1140
gaccgtgtca ccatcacttg ccgggcaagt cagtggattg gtcctgagtt aaagtggtac 1200
cagcagaaac cagggaaagc ccctaagctc ctgatctatc atggttccat tttgcaaagt 1260
ggggtcccat cacgtttcag tggcagtgga tctgggacag acttcactct caccatcagc 1320
agtctgcaac ctgaagattt tgctacgtac tactgtcaac agtatatgta ttatcctcat 1380
acgttcggcc aagggaccaa ggtggaaatc aaacgt                           1416
 
<210> 11
<211> 1416
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597-AS接头-Fc-白蛋白结构域3
      接头-DT02-K-044-251 Vh-Vk dAb-Fc-dAb
 
<400> 11
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccca tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccca gcggcagcaa cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggacccc 300
cggaagctgg actactgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcagcgc tagcacccac 360
acctgccccc cctgccctgc ccccgagctg ctgggaggcc ccagcgtgtt cctgttcccc 420
cccaagccta aggacaccct gatgatcagc agaacccccg aggtgacctg tgtggtggtg 480
gatgtgagcc acgaggaccc tgaggtgaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 540
cacaatgcca agaccaagcc cagggaggag cagtacaaca gcacctaccg ggtggtgtcc 600
gtgctgaccg tgctgcacca ggattggctg aacggcaagg agtacaagtg taaggtgtcc 660
aacaaggccc tgcctgcccc tatcgagaaa accatcagca aggccaaggg ccagcccaga 720
gagccccagg tgtacaccct gccccctagc agagatgagc tgaccaagaa ccaggtgtcc 780
ctgacctgcc tggtgaaggg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaac 840
ggccagcccg agaacaacta caagaccacc ccccctgtgc tggacagcga tggcagcttc 900
ttcctgtaca gcaagctgac cgtggacaag agcagatggc agcagggcaa cgtgttcagc 960
tgctccgtga tgcacgaggc cctgcacaat cactacaccc agaagagcct gagcctgtcc 1020
cctggcaagg aggtggacga gacctacgtg cccaaggagt tcaacgccga gaccttcacc 1080
ttccacgccg acgacatcca gatgacccag tctccatcct ccctgtctgc atctgtagga 1140
gaccgtgtca ccatcacttg ccgggcaagt cagtggattg gtcctgagtt aaagtggtac 1200
cagcagaaac cagggaaagc ccctaagctc ctgatctatc atggttccat tttgcaaagt 1260
ggggtcccat cacgtttcag tggcagtgga tctgggacag acttcactct caccatcagc 1320
agtctgcaac ctgaagattt tgctacgtac tactgtcaac agtatatgta ttatcctgag 1380
acgttcggcc aagggaccaa ggtggaaatc aaacgt                           1416
 
<210> 12
<211> 1392
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-085-AS接头-Fc-白蛋白结构域3
      接头-DT02-K-044-085 Vk-Vk dAb-Fc-dAb
 
<400> 12
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gtggattggt cctgagttaa agtggtacca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatcat ggttccattt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag tatatgtatt atcctcatac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgtgctagc acccacacct gccccccctg ccctgccccc 360
gagctgctgg gaggccccag cgtgttcctg ttccccccca agcctaagga caccctgatg 420
atcagcagaa cccccgaggt gacctgtgtg gtggtggatg tgagccacga ggaccctgag 480
gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcaca atgccaagac caagcccagg 540
gaggagcagt acaacagcac ctaccgggtg gtgtccgtgc tgaccgtgct gcaccaggat 600
tggctgaacg gcaaggagta caagtgtaag gtgtccaaca aggccctgcc tgcccctatc 660
gagaaaacca tcagcaaggc caagggccag cccagagagc cccaggtgta caccctgccc 720
cctagcagag atgagctgac caagaaccag gtgtccctga cctgcctggt gaagggcttc 780
taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaacggcc agcccgagaa caactacaag 840
accacccccc ctgtgctgga cagcgatggc agcttcttcc tgtacagcaa gctgaccgtg 900
gacaagagca gatggcagca gggcaacgtg ttcagctgct ccgtgatgca cgaggccctg 960
cacaatcact acacccagaa gagcctgagc ctgtcccctg gcaaggaggt ggacgagacc 1020
tacgtgccca aggagttcaa cgccgagacc ttcaccttcc acgccgacga catccagatg 1080
acccagtctc catcctccct gtctgcatct gtaggagacc gtgtcaccat cacttgccgg 1140
gcaagtcagt ggattggtcc tgagttaaag tggtaccagc agaaaccagg gaaagcccct 1200
aagctcctga tctatcatgg ttccattttg caaagtgggg tcccatcacg tttcagtggc 1260
agtggatctg ggacagactt cactctcacc atcagcagtc tgcaacctga agattttgct 1320
acgtactact gtcaacagta tatgtattat cctcatacgt tcggccaagg gaccaaggtg 1380
gaaatcaaac gt                                                     1392
 
<210> 13
<211> 1398
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-085-AAAS接头-Fc-白蛋白结构域3
      接头-DT02-K-044-085 Vk-Vk dAb-Fc-dAb
 
<400> 13
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gtggattggt cctgagttaa agtggtacca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatcat ggttccattt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag tatatgtatt atcctcatac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgtgccgct gctagcaccc acacctgccc cccctgccct 360
gcccccgagc tgctgggagg ccccagcgtg ttcctgttcc cccccaagcc taaggacacc 420
ctgatgatca gcagaacccc cgaggtgacc tgtgtggtgg tggatgtgag ccacgaggac 480
cctgaggtga agttcaactg gtacgtggac ggcgtggagg tgcacaatgc caagaccaag 540
cccagggagg agcagtacaa cagcacctac cgggtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac 600
caggattggc tgaacggcaa ggagtacaag tgtaaggtgt ccaacaaggc cctgcctgcc 660
cctatcgaga aaaccatcag caaggccaag ggccagccca gagagcccca ggtgtacacc 720
ctgcccccta gcagagatga gctgaccaag aaccaggtgt ccctgacctg cctggtgaag 780
ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca acggccagcc cgagaacaac 840
tacaagacca ccccccctgt gctggacagc gatggcagct tcttcctgta cagcaagctg 900
accgtggaca agagcagatg gcagcagggc aacgtgttca gctgctccgt gatgcacgag 960
gccctgcaca atcactacac ccagaagagc ctgagcctgt cccctggcaa ggaggtggac 1020
gagacctacg tgcccaagga gttcaacgcc gagaccttca ccttccacgc cgacgacatc 1080
cagatgaccc agtctccatc ctccctgtct gcatctgtag gagaccgtgt caccatcact 1140
tgccgggcaa gtcagtggat tggtcctgag ttaaagtggt accagcagaa accagggaaa 1200
gcccctaagc tcctgatcta tcatggttcc attttgcaaa gtggggtccc atcacgtttc 1260
agtggcagtg gatctgggac agacttcact ctcaccatca gcagtctgca acctgaagat 1320
tttgctacgt actactgtca acagtatatg tattatcctc atacgttcgg ccaagggacc 1380
aaggtggaaa tcaaacgt                                               1398
 
<210> 14
<211> 1392
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-251-AS接头-Fc-白蛋白结构域3
      接头-DT02-K-044-251 Vk-Vk dAb-Fc-dAb
 
<400> 14
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gtggattggt cctgagttaa agtggtacca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatcat ggttccattt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag tatatgtatt atcctgagac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgtgctagc acccacacct gccccccctg ccctgccccc 360
gagctgctgg gaggccccag cgtgttcctg ttccccccca agcctaagga caccctgatg 420
atcagcagaa cccccgaggt gacctgtgtg gtggtggatg tgagccacga ggaccctgag 480
gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcaca atgccaagac caagcccagg 540
gaggagcagt acaacagcac ctaccgggtg gtgtccgtgc tgaccgtgct gcaccaggat 600
tggctgaacg gcaaggagta caagtgtaag gtgtccaaca aggccctgcc tgcccctatc 660
gagaaaacca tcagcaaggc caagggccag cccagagagc cccaggtgta caccctgccc 720
cctagcagag atgagctgac caagaaccag gtgtccctga cctgcctggt gaagggcttc 780
taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaacggcc agcccgagaa caactacaag 840
accacccccc ctgtgctgga cagcgatggc agcttcttcc tgtacagcaa gctgaccgtg 900
gacaagagca gatggcagca gggcaacgtg ttcagctgct ccgtgatgca cgaggccctg 960
cacaatcact acacccagaa gagcctgagc ctgtcccctg gcaaggaggt ggacgagacc 1020
tacgtgccca aggagttcaa cgccgagacc ttcaccttcc acgccgacga catccagatg 1080
acccagtctc catcctccct gtctgcatct gtaggagacc gtgtcaccat cacttgccgg 1140
gcaagtcagt ggattggtcc tgagttaaag tggtaccagc agaaaccagg gaaagcccct 1200
aagctcctga tctatcatgg ttccattttg caaagtgggg tcccatcacg tttcagtggc 1260
agtggatctg ggacagactt cactctcacc atcagcagtc tgcaacctga agattttgct 1320
acgtactact gtcaacagta tatgtattat cctgagacgt tcggccaagg gaccaaggtg 1380
gaaatcaaac gt                                                     1392
 
<210> 15
<211> 1398
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-251-AAAS接头-Fc-白蛋白结构域3
      接头-DT02-K-044-251 Vk-Vk d-Fc-dAb
 
<400> 15
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gtggattggt cctgagttaa agtggtacca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatcat ggttccattt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag tatatgtatt atcctgagac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgtgccgct gctagcaccc acacctgccc cccctgccct 360
gcccccgagc tgctgggagg ccccagcgtg ttcctgttcc cccccaagcc taaggacacc 420
ctgatgatca gcagaacccc cgaggtgacc tgtgtggtgg tggatgtgag ccacgaggac 480
cctgaggtga agttcaactg gtacgtggac ggcgtggagg tgcacaatgc caagaccaag 540
cccagggagg agcagtacaa cagcacctac cgggtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac 600
caggattggc tgaacggcaa ggagtacaag tgtaaggtgt ccaacaaggc cctgcctgcc 660
cctatcgaga aaaccatcag caaggccaag ggccagccca gagagcccca ggtgtacacc 720
ctgcccccta gcagagatga gctgaccaag aaccaggtgt ccctgacctg cctggtgaag 780
ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca acggccagcc cgagaacaac 840
tacaagacca ccccccctgt gctggacagc gatggcagct tcttcctgta cagcaagctg 900
accgtggaca agagcagatg gcagcagggc aacgtgttca gctgctccgt gatgcacgag 960
gccctgcaca atcactacac ccagaagagc ctgagcctgt cccctggcaa ggaggtggac 1020
gagacctacg tgcccaagga gttcaacgcc gagaccttca ccttccacgc cgacgacatc 1080
cagatgaccc agtctccatc ctccctgtct gcatctgtag gagaccgtgt caccatcact 1140
tgccgggcaa gtcagtggat tggtcctgag ttaaagtggt accagcagaa accagggaaa 1200
gcccctaagc tcctgatcta tcatggttcc attttgcaaa gtggggtccc atcacgtttc 1260
agtggcagtg gatctgggac agacttcact ctcaccatca gcagtctgca acctgaagat 1320
tttgctacgt actactgtca acagtatatg tattatcctg agacgttcgg ccaagggacc 1380
aaggtggaaa tcaaacgt                                               1398
 
<210> 16
<211> 1068
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb (白蛋白结构域3接头) Fc-dAb的C-末端Fc融合体 
 
<400> 16
gctagcaccc acacctgccc cccctgccct gcccccgagc tgctgggagg ccccagcgtg 60
ttcctgttcc cccccaagcc taaggacacc ctgatgatca gcagaacccc cgaggtgacc 120
tgtgtggtgg tggatgtgag ccacgaggac cctgaggtga agttcaactg gtacgtggac 180
ggcgtggagg tgcacaatgc caagaccaag cccagggagg agcagtacaa cagcacctac 240
cgggtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac caggattggc tgaacggcaa ggagtacaag 300
tgtaaggtgt ccaacaaggc cctgcctgcc cctatcgaga aaaccatcag caaggccaag 360
ggccagccca gagagcccca ggtgtacacc ctgcccccta gcagagatga gctgaccaag 420
aaccaggtgt ccctgacctg cctggtgaag ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 480
tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccctgt gctggacagc 540
gatggcagct tcttcctgta cagcaagctg accgtggaca agagcagatg gcagcagggc 600
aacgtgttca gctgctccgt gatgcacgag gccctgcaca atcactacac ccagaagagc 660
ctgagcctgt cccctggcaa ggaggtggac gagacctacg tgcccaagga gttcaacgcc 720
gagaccttca ccttccacgc cgacgacatc cagatgaccc agtctccatc ctccctgtct 780
gcatctgtag gagaccgtgt caccatcact tgccgggcaa gtcagtggat tggtcctgag 840
ttaaagtggt accagcagaa accagggaaa gcccctaagc tcctgatcta tcatggttcc 900
attttgcaaa gtggggtccc atcacgtttc agtggcagtg gatctgggac agacttcact 960
ctcaccatca gcagtctgca acctgaagat tttgctacgt actactgtca acagtatatg 1020
tattatcctc atacgttcgg ccaagggacc aaggtggaaa tcaaacgt              1068
 
<210> 17
<211> 1062
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb (白蛋白结构域3接头) Fc-dAb的C-末端Fc融合体 
 
<400> 17
acccacacct gccccccctg ccctgccccc gagctgctgg gaggccccag cgtgttcctg 60
ttccccccca agcctaagga caccctgatg atcagcagaa cccccgaggt gacctgtgtg 120
gtggtggatg tgagccacga ggaccctgag gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg 180
gaggtgcaca atgccaagac caagcccagg gaggagcagt acaacagcac ctaccgggtg 240
gtgtccgtgc tgaccgtgct gcaccaggat tggctgaacg gcaaggagta caagtgtaag 300
gtgtccaaca aggccctgcc tgcccctatc gagaaaacca tcagcaaggc caagggccag 360
cccagagagc cccaggtgta caccctgccc cctagcagag atgagctgac caagaaccag 420
gtgtccctga cctgcctggt gaagggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 480
agcaacggcc agcccgagaa caactacaag accacccccc ctgtgctgga cagcgatggc 540
agcttcttcc tgtacagcaa gctgaccgtg gacaagagca gatggcagca gggcaacgtg 600
ttcagctgct ccgtgatgca cgaggccctg cacaatcact acacccagaa gagcctgagc 660
ctgtcccctg gcaaggaggt ggacgagacc tacgtgccca aggagttcaa cgccgagacc 720
ttcaccttcc acgccgacga catccagatg acccagtctc catcctccct gtctgcatct 780
gtaggagacc gtgtcaccat cacttgccgg gcaagtcagt ggattggtcc tgagttaaag 840
tggtaccagc agaaaccagg gaaagcccct aagctcctga tctatcatgg ttccattttg 900
caaagtgggg tcccatcacg tttcagtggc agtggatctg ggacagactt cactctcacc 960
atcagcagtc tgcaacctga agattttgct acgtactact gtcaacagta tatgtattat 1020
cctcatacgt tcggccaagg gaccaaggtg gaaatcaaac gt                    1062
 
<210> 18
<211> 1068
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-251 dAb (白蛋白结构域3接头) Fc-dAb的C-末端Fc融合体 
 
<400> 18
gctagcaccc acacctgccc cccctgccct gcccccgagc tgctgggagg ccccagcgtg 60
ttcctgttcc cccccaagcc taaggacacc ctgatgatca gcagaacccc cgaggtgacc 120
tgtgtggtgg tggatgtgag ccacgaggac cctgaggtga agttcaactg gtacgtggac 180
ggcgtggagg tgcacaatgc caagaccaag cccagggagg agcagtacaa cagcacctac 240
cgggtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac caggattggc tgaacggcaa ggagtacaag 300
tgtaaggtgt ccaacaaggc cctgcctgcc cctatcgaga aaaccatcag caaggccaag 360
ggccagccca gagagcccca ggtgtacacc ctgcccccta gcagagatga gctgaccaag 420
aaccaggtgt ccctgacctg cctggtgaag ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 480
tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccctgt gctggacagc 540
gatggcagct tcttcctgta cagcaagctg accgtggaca agagcagatg gcagcagggc 600
aacgtgttca gctgctccgt gatgcacgag gccctgcaca atcactacac ccagaagagc 660
ctgagcctgt cccctggcaa ggaggtggac gagacctacg tgcccaagga gttcaacgcc 720
gagaccttca ccttccacgc cgacgacatc cagatgaccc agtctccatc ctccctgtct 780
gcatctgtag gagaccgtgt caccatcact tgccgggcaa gtcagtggat tggtcctgag 840
ttaaagtggt accagcagaa accagggaaa gcccctaagc tcctgatcta tcatggttcc 900
attttgcaaa gtggggtccc atcacgtttc agtggcagtg gatctgggac agacttcact 960
ctcaccatca gcagtctgca acctgaagat tttgctacgt actactgtca acagtatatg 1020
tattatcctg agacgttcgg ccaagggacc aaggtggaaa tcaaacgt              1068
 
<210> 19
<211> 1062
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-251 dAb (白蛋白结构域3接头) Fc-dAb的C-末端Fc融合体 
 
<400> 19
acccacacct gccccccctg ccctgccccc gagctgctgg gaggccccag cgtgttcctg 60
ttccccccca agcctaagga caccctgatg atcagcagaa cccccgaggt gacctgtgtg 120
gtggtggatg tgagccacga ggaccctgag gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg 180
gaggtgcaca atgccaagac caagcccagg gaggagcagt acaacagcac ctaccgggtg 240
gtgtccgtgc tgaccgtgct gcaccaggat tggctgaacg gcaaggagta caagtgtaag 300
gtgtccaaca aggccctgcc tgcccctatc gagaaaacca tcagcaaggc caagggccag 360
cccagagagc cccaggtgta caccctgccc cctagcagag atgagctgac caagaaccag 420
gtgtccctga cctgcctggt gaagggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 480
agcaacggcc agcccgagaa caactacaag accacccccc ctgtgctgga cagcgatggc 540
agcttcttcc tgtacagcaa gctgaccgtg gacaagagca gatggcagca gggcaacgtg 600
ttcagctgct ccgtgatgca cgaggccctg cacaatcact acacccagaa gagcctgagc 660
ctgtcccctg gcaaggaggt ggacgagacc tacgtgccca aggagttcaa cgccgagacc 720
ttcaccttcc acgccgacga catccagatg acccagtctc catcctccct gtctgcatct 780
gtaggagacc gtgtcaccat cacttgccgg gcaagtcagt ggattggtcc tgagttaaag 840
tggtaccagc agaaaccagg gaaagcccct aagctcctga tctatcatgg ttccattttg 900
caaagtgggg tcccatcacg tttcagtggc agtggatctg ggacagactt cactctcacc 960
atcagcagtc tgcaacctga agattttgct acgtactact gtcaacagta tatgtattat 1020
cctgagacgt tcggccaagg gaccaaggtg gaaatcaaac gt                    1062
 
<210> 20
<211> 1017
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb (TVAAPS接头) dAb-Fc的N-末端Fc融合体 
 
<400> 20
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gtggattggt cctgagttaa agtggtacca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatcat ggttccattt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag tatatgtatt atcctcatac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgtaccgtc gccgctccta gcacccacac ctgccccccc 360
tgccctgccc ccgagctgct gggcggacct agcgtgttcc tgttcccccc caagcctaag 420
gacaccctga tgatcagcag gacccccgaa gtgacctgcg tggtggtgga tgtgagccac 480
gaggaccctg aagtgaagtt caactggtac gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag 540
accaagccca gagaggagca gtacaacagc acctaccgcg tggtgtctgt gctgaccgtg 600
ctgcaccagg attggctgaa cggcaaggag tacaagtgca aagtgagcaa caaggccctg 660
cctgccccta tcgagaaaac catcagcaag gccaagggcc agcctagaga gccccaggtc 720
tacaccctgc ctccctccag agatgagctg accaagaacc aggtgtccct gacctgtctg 780
gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag 840
aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg gacagcgatg gcagcttctt cctgtactcc 900
aagctgaccg tggacaagag cagatggcag cagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg 960
cacgaggccc tgcacaatca ctacacccag aagagtctga gcctgtcccc tggcaag    1017
 
<210> 21
<211> 1017
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-232 dAb (TVAAPS接头) dAb-Fc的N-末端Fc融合体 
 
<400> 21
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gtggattggt cctgagttaa gttggtacca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatcat ggttccattt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag tatatgtatt atcctgagac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgtaccgtc gccgctccta gcacccacac ctgccccccc 360
tgccctgccc ccgagctgct gggcggacct agcgtgttcc tgttcccccc caagcctaag 420
gacaccctga tgatcagcag gacccccgaa gtgacctgcg tggtggtgga tgtgagccac 480
gaggaccctg aagtgaagtt caactggtac gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag 540
accaagccca gagaggagca gtacaacagc acctaccgcg tggtgtctgt gctgaccgtg 600
ctgcaccagg attggctgaa cggcaaggag tacaagtgca aagtgagcaa caaggccctg 660
cctgccccta tcgagaaaac catcagcaag gccaagggcc agcctagaga gccccaggtc 720
tacaccctgc ctccctccag agatgagctg accaagaacc aggtgtccct gacctgtctg 780
gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag 840
aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg gacagcgatg gcagcttctt cctgtactcc 900
aagctgaccg tggacaagag cagatggcag cagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg 960
cacgaggccc tgcacaatca ctacacccag aagagtctga gcctgtcccc tggcaag    1017
 
<210> 22
<211> 1017
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-236 dAb (TVAAPS接头) dAb-Fc的N-末端Fc融合体 
 
<400> 22
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gtggattggt cctgagttaa gttggtacca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatcat ggttccattt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag tatatgtatt atcctaagac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgtaccgtc gccgctccta gcacccacac ctgccccccc 360
tgccctgccc ccgagctgct gggcggacct agcgtgttcc tgttcccccc caagcctaag 420
gacaccctga tgatcagcag gacccccgaa gtgacctgcg tggtggtgga tgtgagccac 480
gaggaccctg aagtgaagtt caactggtac gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag 540
accaagccca gagaggagca gtacaacagc acctaccgcg tggtgtctgt gctgaccgtg 600
ctgcaccagg attggctgaa cggcaaggag tacaagtgca aagtgagcaa caaggccctg 660
cctgccccta tcgagaaaac catcagcaag gccaagggcc agcctagaga gccccaggtc 720
tacaccctgc ctccctccag agatgagctg accaagaacc aggtgtccct gacctgtctg 780
gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag 840
aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg gacagcgatg gcagcttctt cctgtactcc 900
aagctgaccg tggacaagag cagatggcag cagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg 960
cacgaggccc tgcacaatca ctacacccag aagagtctga gcctgtcccc tggcaag    1017
 
<210> 23
<211> 1017
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-251 dAb (TVAAPS接头) dAb-Fc的N-末端Fc融合体 
 
<400> 23
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gtggattggt cctgagttaa agtggtacca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatcat ggttccattt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag tatatgtatt atcctgagac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgtaccgtc gccgctccta gcacccacac ctgccccccc 360
tgccctgccc ccgagctgct gggcggacct agcgtgttcc tgttcccccc caagcctaag 420
gacaccctga tgatcagcag gacccccgaa gtgacctgcg tggtggtgga tgtgagccac 480
gaggaccctg aagtgaagtt caactggtac gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag 540
accaagccca gagaggagca gtacaacagc acctaccgcg tggtgtctgt gctgaccgtg 600
ctgcaccagg attggctgaa cggcaaggag tacaagtgca aagtgagcaa caaggccctg 660
cctgccccta tcgagaaaac catcagcaag gccaagggcc agcctagaga gccccaggtc 720
tacaccctgc ctccctccag agatgagctg accaagaacc aggtgtccct gacctgtctg 780
gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag 840
aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg gacagcgatg gcagcttctt cctgtactcc 900
aagctgaccg tggacaagag cagatggcag cagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg 960
cacgaggccc tgcacaatca ctacacccag aagagtctga gcctgtcccc tggcaag    1017
 
<210> 24
<211> 1017
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-255 dAb (TVAAPS接头) dAb-Fc的N-末端Fc融合体
 
<400> 24
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gtggattggt cctgagttaa agtggtacca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatcat ggttccattt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag tatatgtatt atcctaagac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgtaccgtc gccgctccta gcacccacac ctgccccccc 360
tgccctgccc ccgagctgct gggcggacct agcgtgttcc tgttcccccc caagcctaag 420
gacaccctga tgatcagcag gacccccgaa gtgacctgcg tggtggtgga tgtgagccac 480
gaggaccctg aagtgaagtt caactggtac gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag 540
accaagccca gagaggagca gtacaacagc acctaccgcg tggtgtctgt gctgaccgtg 600
ctgcaccagg attggctgaa cggcaaggag tacaagtgca aagtgagcaa caaggccctg 660
cctgccccta tcgagaaaac catcagcaag gccaagggcc agcctagaga gccccaggtc 720
tacaccctgc ctccctccag agatgagctg accaagaacc aggtgtccct gacctgtctg 780
gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag 840
aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg gacagcgatg gcagcttctt cctgtactcc 900
aagctgaccg tggacaagag cagatggcag cagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg 960
cacgaggccc tgcacaatca ctacacccag aagagtctga gcctgtcccc tggcaag    1017
 
<210> 25
<211> 1431
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597-AS接头-Fc-GS(TVAAPSGS)x3
      接头-DT02-K-044-085 Vh-Vk dAb-Fc-dAb
 
<400> 25
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccca tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccca gcggcagcaa cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggacccc 300
cggaagctgg actactgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcagcgc tagcacccac 360
acctgccccc cctgccctgc ccccgagctg ctgggaggcc ccagcgtgtt cctgttcccc 420
cccaagccta aggacaccct gatgatcagc agaacccccg aggtgacctg tgtggtggtg 480
gatgtgagcc acgaggaccc tgaggtgaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 540
cacaatgcca agaccaagcc cagggaggag cagtacaaca gcacctaccg ggtggtgtcc 600
gtgctgaccg tgctgcacca ggattggctg aacggcaagg agtacaagtg taaggtgtcc 660
aacaaggccc tgcctgcccc tatcgagaaa accatcagca aggccaaggg ccagcccaga 720
gagccccagg tgtacaccct gccccctagc agagatgagc tgaccaagaa ccaggtgtcc 780
ctgacctgcc tggtgaaggg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaac 840
ggccagcccg agaacaacta caagaccacc ccccctgtgc tggacagcga tggcagcttc 900
ttcctgtaca gcaagctgac cgtggacaag agcagatggc agcagggcaa cgtgttcagc 960
tgctccgtga tgcacgaggc cctgcacaat cactacaccc agaagagcct gagcctgtcc 1020
cctggcaagg gatctaccgt ggcagcacca tcaggatcta ccgtggcagc accatcaggt 1080
tcaacagtag ctgctccttc tggatccgac atccagatga cccagtctcc atcctccctg 1140
tctgcatctg taggagaccg tgtcaccatc acttgccggg caagtcagtg gattggtcct 1200
gagttaaagt ggtaccagca gaaaccaggg aaagccccta agctcctgat ctatcatggt 1260
tccattttgc aaagtggggt cccatcacgt ttcagtggca gtggatctgg gacagacttc 1320
actctcacca tcagcagtct gcaacctgaa gattttgcta cgtactactg tcaacagtat 1380
atgtattatc ctcatacgtt cggccaaggg accaaggtgg aaatcaaacg t          1431
 
<210> 26
<211> 1425
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-085-铰链IgG1接头-Fc-GS(TVAAPSGS)x3
      接头-DT02-K-044-085 Vh-Vk dAb-Fc-dAb
 
<400> 26
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gtggattggt cctgagttaa agtggtacca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatcat ggttccattt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag tatatgtatt atcctcatac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgtgtggag cctaagtctt ctgacaagac ccacacctgc 360
cccccctgcc ctgcccccga gctgctggga ggccccagcg tgttcctgtt cccccccaag 420
cctaaggaca ccctgatgat cagcagaacc cccgaggtga cctgtgtggt ggtggatgtg 480
agccacgagg accctgaggt gaagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaat 540
gccaagacca agcccaggga ggagcagtac aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg 600
accgtgctgc accaggattg gctgaacggc aaggagtaca agtgtaaggt gtccaacaag 660
gccctgcctg cccctatcga gaaaaccatc agcaaggcca agggccagcc cagagagccc 720
caggtgtaca ccctgccccc tagcagagat gagctgacca agaaccaggt gtccctgacc 780
tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caacggccag 840
cccgagaaca actacaagac caccccccct gtgctggaca gcgatggcag cttcttcctg 900
tacagcaagc tgaccgtgga caagagcaga tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgctcc 960
gtgatgcacg aggccctgca caatcactac acccagaaga gcctgagcct gtcccctggc 1020
aagggatcta ccgtggcagc accatcagga tctaccgtgg cagcaccatc aggttcaaca 1080
gtagctgctc cttctggatc cgacatccag atgacccagt ctccatcctc cctgtctgca 1140
tctgtaggag accgtgtcac catcacttgc cgggcaagtc agtggattgg tcctgagtta 1200
aagtggtacc agcagaaacc agggaaagcc cctaagctcc tgatctatca tggttccatt 1260
ttgcaaagtg gggtcccatc acgtttcagt ggcagtggat ctgggacaga cttcactctc 1320
accatcagca gtctgcaacc tgaagatttt gctacgtact actgtcaaca gtatatgtat 1380
tatcctcata cgttcggcca agggaccaag gtggaaatca aacgt                 1425
 
<210> 27
<211> 1407
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-085-AS-Fc (H112A)-GS(TVAAPSGS)x3
      接头-DT02-K-044-085 Vh-Vk dAb-Fc-dAb
 
<400> 27
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gtggattggt cctgagttaa agtggtacca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatcat ggttccattt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag tatatgtatt atcctcatac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgtgctagc accgccacct gccccccctg ccctgccccc 360
gagctgctgg gaggccccag cgtgttcctg ttccccccca agcctaagga caccctgatg 420
atcagcagaa cccccgaggt gacctgtgtg gtggtggatg tgagccacga ggaccctgag 480
gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcaca atgccaagac caagcccagg 540
gaggagcagt acaacagcac ctaccgggtg gtgtccgtgc tgaccgtgct gcaccaggat 600
tggctgaacg gcaaggagta caagtgtaag gtgtccaaca aggccctgcc tgcccctatc 660
gagaaaacca tcagcaaggc caagggccag cccagagagc cccaggtgta caccctgccc 720
cctagcagag atgagctgac caagaaccag gtgtccctga cctgcctggt gaagggcttc 780
taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaacggcc agcccgagaa caactacaag 840
accacccccc ctgtgctgga cagcgatggc agcttcttcc tgtacagcaa gctgaccgtg 900
gacaagagca gatggcagca gggcaacgtg ttcagctgct ccgtgatgca cgaggccctg 960
cacaatcact acacccagaa gagcctgagc ctgtcccctg gcaagggatc taccgtggca 1020
gcaccatcag gatctaccgt ggcagcacca tcaggttcaa cagtagctgc tccttctgga 1080
tccgacatcc agatgaccca gtctccatcc tccctgtctg catctgtagg agaccgtgtc 1140
accatcactt gccgggcaag tcagtggatt ggtcctgagt taaagtggta ccagcagaaa 1200
ccagggaaag cccctaagct cctgatctat catggttcca ttttgcaaag tggggtccca 1260
tcacgtttca gtggcagtgg atctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagtctgcaa 1320
cctgaagatt ttgctacgta ctactgtcaa cagtatatgt attatcctca tacgttcggc 1380
caagggacca aggtggaaat caaacgt                                     1407
 
<210> 28
<211> 1407
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-085-AS-Fc (T113P)-GS(TVAAPSGS)x3
      接头-DT02-K-044-085 Vh-Vk dAb-Fc-dAb
 
<400> 28
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gtggattggt cctgagttaa agtggtacca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatcat ggttccattt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag tatatgtatt atcctcatac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgtgctagc acccaccctt gccccccctg ccctgccccc 360
gagctgctgg gaggccccag cgtgttcctg ttccccccca agcctaagga caccctgatg 420
atcagcagaa cccccgaggt gacctgtgtg gtggtggatg tgagccacga ggaccctgag 480
gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcaca atgccaagac caagcccagg 540
gaggagcagt acaacagcac ctaccgggtg gtgtccgtgc tgaccgtgct gcaccaggat 600
tggctgaacg gcaaggagta caagtgtaag gtgtccaaca aggccctgcc tgcccctatc 660
gagaaaacca tcagcaaggc caagggccag cccagagagc cccaggtgta caccctgccc 720
cctagcagag atgagctgac caagaaccag gtgtccctga cctgcctggt gaagggcttc 780
taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaacggcc agcccgagaa caactacaag 840
accacccccc ctgtgctgga cagcgatggc agcttcttcc tgtacagcaa gctgaccgtg 900
gacaagagca gatggcagca gggcaacgtg ttcagctgct ccgtgatgca cgaggccctg 960
cacaatcact acacccagaa gagcctgagc ctgtcccctg gcaagggatc taccgtggca 1020
gcaccatcag gatctaccgt ggcagcacca tcaggttcaa cagtagctgc tccttctgga 1080
tccgacatcc agatgaccca gtctccatcc tccctgtctg catctgtagg agaccgtgtc 1140
accatcactt gccgggcaag tcagtggatt ggtcctgagt taaagtggta ccagcagaaa 1200
ccagggaaag cccctaagct cctgatctat catggttcca ttttgcaaag tggggtccca 1260
tcacgtttca gtggcagtgg atctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagtctgcaa 1320
cctgaagatt ttgctacgta ctactgtcaa cagtatatgt attatcctca tacgttcggc 1380
caagggacca aggtggaaat caaacgt                                     1407
 
<210> 29
<211> 343
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-593-Fc dAb-Fc
 
<400> 29
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
        115                 120                 125            
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
    130                 135                 140                
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
145                 150                 155                 160
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
                165                 170                 175    
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
            180                 185                 190        
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
        195                 200                 205            
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
    210                 215                 220                
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
225                 230                 235                 240
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
                245                 250                 255    
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
            260                 265                 270        
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
        275                 280                 285            
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
    290                 295                 300                
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
305                 310                 315                 320
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
                325                 330                 335    
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
            340            
 
 
<210> 30
<211> 343
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597-Fc dAb-Fc
 
<400> 30
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
        115                 120                 125            
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
    130                 135                 140                
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
145                 150                 155                 160
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
                165                 170                 175    
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
            180                 185                 190        
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
        195                 200                 205            
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
    210                 215                 220                
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
225                 230                 235                 240
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
                245                 250                 255    
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
            260                 265                 270        
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
        275                 280                 285            
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
    290                 295                 300                
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
305                 310                 315                 320
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
                325                 330                 335    
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
            340            
 
 
<210> 31
<211> 365
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb (GS(TVAAPSGS)x3接头) Fc-dAb的C-末端Fc融合体
 
<400> 31
Gln Ala Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
 1               5                  10                  15     
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
            20                  25                  30         
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
        35                  40                  45             
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
    50                  55                  60                 
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65                  70                  75                  80 
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
                85                  90                  95     
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
            100                 105                 110        
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
        115                 120                 125            
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
    130                 135                 140                
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145                 150                 155                 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
                165                 170                 175    
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
            180                 185                 190        
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
        195                 200                 205            
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
    210                 215                 220                
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly
225                 230                 235                 240
Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly
                245                 250                 255    
Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
            260                 265                 270        
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro
        275                 280                 285            
Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
    290                 295                 300                
Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
305                 310                 315                 320
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
                325                 330                 335    
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro
            340                 345                 350        
His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
        355                 360                 365
 
 
<210> 32
<211> 365
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-232 dAb (GS(TVAAPSGS)x3接头) Fc-dAb的C-末端Fc融合体 
 
<400> 32
Gln Ala Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
 1               5                  10                  15     
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
            20                  25                  30         
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
        35                  40                  45             
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
    50                  55                  60                 
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65                  70                  75                  80 
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
                85                  90                  95     
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
            100                 105                 110        
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
        115                 120                 125            
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
    130                 135                 140                
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145                 150                 155                 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
                165                 170                 175    
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
            180                 185                 190        
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
        195                 200                 205            
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
    210                 215                 220                
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly
225                 230                 235                 240
Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly
                245                 250                 255    
Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
            260                 265                 270        
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro
        275                 280                 285            
Glu Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
    290                 295                 300                
Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
305                 310                 315                 320
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
                325                 330                 335    
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro
            340                 345                 350        
Glu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
        355                 360                 365
 
 
<210> 33
<211> 365
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-236 dAb (GS(TVAAPSGS)x3接头) Fc-dAb的C-末端Fc融合体 
 
<400> 33
Gln Ala Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
 1               5                  10                  15     
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
            20                  25                  30         
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
        35                  40                  45             
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
    50                  55                  60                 
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65                  70                  75                  80 
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
                85                  90                  95     
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
            100                 105                 110        
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
        115                 120                 125            
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
    130                 135                 140                
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145                 150                 155                 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
                165                 170                 175    
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
            180                 185                 190        
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
        195                 200                 205            
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
    210                 215                 220                
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly
225                 230                 235                 240
Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly
                245                 250                 255    
Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
            260                 265                 270        
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro
        275                 280                 285            
Glu Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
    290                 295                 300                
Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
305                 310                 315                 320
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
                325                 330                 335    
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro
            340                 345                 350        
Lys Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
        355                 360                 365
 
 
<210> 34
<211> 365
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-251 dAb (GS(TVAAPSGS)x3接头) Fc-dAb的C-末端Fc融合体 
 
<400> 34
Gln Ala Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
 1               5                  10                  15     
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
            20                  25                  30         
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
        35                  40                  45             
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
    50                  55                  60                 
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65                  70                  75                  80 
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
                85                  90                  95     
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
            100                 105                 110        
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
        115                 120                 125            
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
    130                 135                 140                
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145                 150                 155                 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
                165                 170                 175    
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
            180                 185                 190        
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
        195                 200                 205            
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
    210                 215                 220                
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly
225                 230                 235                 240
Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly
                245                 250                 255    
Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
            260                 265                 270        
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro
        275                 280                 285            
Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
    290                 295                 300                
Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
305                 310                 315                 320
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
                325                 330                 335    
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro
            340                 345                 350        
Glu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
        355                 360                 365
 
 
<210> 35
<211> 365
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-255 dAb (GS(TVAAPSGS)x3接头) Fc-dAb的C-末端Fc融合体 
 
<400> 35
Gln Ala Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
 1               5                  10                  15     
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
            20                  25                  30         
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
        35                  40                  45             
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
    50                  55                  60                 
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
65                  70                  75                  80 
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
                85                  90                  95     
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
            100                 105                 110        
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
        115                 120                 125            
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
    130                 135                 140                
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
145                 150                 155                 160
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
                165                 170                 175    
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
            180                 185                 190        
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
        195                 200                 205            
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
    210                 215                 220                
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly
225                 230                 235                 240
Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly
                245                 250                 255    
Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
            260                 265                 270        
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro
        275                 280                 285            
Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
    290                 295                 300                
Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
305                 310                 315                 320
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
                325                 330                 335    
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro
            340                 345                 350        
Lys Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
        355                 360                 365
 
 
<210> 36
<211> 340
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-251 dAb (AAAS 接头) dAb-Fc的N-末端Fc融合体 
 
<400> 36
Glu Ser Thr Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
 1               5                  10                  15     
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile
            20                  25                  30         
Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
        35                  40                  45             
Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg
    50                  55                  60                 
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr
                85                  90                  95     
Tyr Pro Glu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala
            100                 105                 110        
Ala Ala Ser Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
        115                 120                 125            
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
    130                 135                 140                
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
145                 150                 155                 160
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
                165                 170                 175    
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
            180                 185                 190        
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
        195                 200                 205            
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
    210                 215                 220                
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
225                 230                 235                 240
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
                245                 250                 255    
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
            260                 265                 270        
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
        275                 280                 285            
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
    290                 295                 300                
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
305                 310                 315                 320
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
                325                 330                 335    
Ser Pro Gly Lys
            340
 
 
<210> 37
<211> 340
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-255 dAb (AAAS 接头) dAb-Fc的N-末端Fc融合体 
 
<400> 37
Glu Ser Thr Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
 1               5                  10                  15     
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile
            20                  25                  30         
Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
        35                  40                  45             
Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg
    50                  55                  60                 
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr
                85                  90                  95     
Tyr Pro Lys Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala
            100                 105                 110        
Ala Ala Ser Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
        115                 120                 125            
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
    130                 135                 140                
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
145                 150                 155                 160
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
                165                 170                 175    
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
            180                 185                 190        
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
        195                 200                 205            
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
    210                 215                 220                
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
225                 230                 235                 240
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
                245                 250                 255    
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
            260                 265                 270        
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
        275                 280                 285            
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
    290                 295                 300                
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
305                 310                 315                 320
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
                325                 330                 335    
Ser Pro Gly Lys
            340
 
 
<210> 38
<211> 472
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597-AS接头-Fc-白蛋白结构域3
      接头-DT02-K-044-085 Vh-Vk dAb-Fc-dAb
 
<400> 38
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45              
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
        115                 120                 125            
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
    130                 135                 140                 
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
145                 150                 155                 160
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
                165                 170                 175    
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
            180                 185                 190        
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
        195                 200                 205            
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
    210                 215                 220                
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
225                 230                 235                 240
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
                245                 250                 255    
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
            260                 265                 270        
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
        275                 280                 285            
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
    290                 295                 300                
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
305                 310                 315                 320
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
                325                 330                 335    
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys
            340                 345                 350        
Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Asp Ile Gln Met
        355                 360                 365            
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr
    370                 375                 380                
Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr
385                 390                 395                 400
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser
                405                 410                 415    
Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
            420                 425                 430        
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
        435                 440                 445            
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His Thr Phe Gly Gln
    450                 455                 460                
Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
465                 470        
 
 
<210> 39
<211> 472
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597-AS接头-Fc-白蛋白结构域3
      接头-DT02-K-044-251 Vh-Vk dAb-Fc-dAb
 
<400> 39
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
        115                 120                 125            
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
    130                 135                 140                
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
145                 150                 155                 160
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
                165                 170                 175    
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
            180                 185                 190        
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
        195                 200                 205            
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
    210                 215                 220                
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
225                 230                 235                 240
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
                245                 250                 255    
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
            260                 265                 270        
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
        275                 280                 285            
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
    290                 295                 300                
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
305                 310                 315                 320
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
                325                 330                 335    
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys
            340                 345                 350         
Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Asp Ile Gln Met
        355                 360                 365            
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr
    370                 375                 380                 
Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr
385                 390                 395                 400
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser
                405                 410                 415    
Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
            420                 425                 430        
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
        435                 440                 445             
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro Glu Thr Phe Gly Gln
    450                 455                 460                
Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
465                 470        
 
 
<210> 40
<211> 464
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-085-AS接头-Fc-白蛋白结构域3
      接头-DT02-K-044-085 Vk-Vk dAb-Fc-dAb
 
<400> 40
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ser Thr His
            100                 105                 110        
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
        115                 120                 125            
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
    130                 135                 140                
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
145                 150                 155                 160
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
                165                 170                 175    
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
            180                 185                 190        
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
        195                 200                 205            
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
    210                 215                 220                
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
225                 230                 235                 240
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
                245                 250                 255    
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
            260                 265                 270        
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
        275                 280                 285            
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
    290                 295                 300                
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
305                 310                 315                 320
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu
                325                 330                 335    
Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr
            340                 345                 350        
Phe His Ala Asp Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
        355                 360                 365            
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp
    370                 375                 380                
Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
385                 390                 395                 400
Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
                405                 410                 415    
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
            420                 425                 430        
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met
        435                 440                 445            
Tyr Tyr Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
    450                 455                 460                
 
 
<210> 41
<211> 466
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-085-AAAS接头-Fc-白蛋白结构域3
      接头-DT02-K-044-085 Vk-Vk dAb-Fc-dAb
 
<400> 41
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Ser
            100                 105                 110         
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
        115                 120                 125            
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
    130                 135                 140                 
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
145                 150                 155                 160
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
                165                 170                 175    
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
            180                 185                 190        
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
        195                 200                 205             
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
    210                 215                 220                
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
225                 230                 235                 240
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
                245                 250                 255    
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
            260                 265                 270        
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
        275                 280                 285            
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
    290                 295                 300                 
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
305                 310                 315                 320
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                325                 330                 335    
Lys Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr
            340                 345                 350        
Phe Thr Phe His Ala Asp Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
        355                 360                 365            
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser
    370                 375                 380                
Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
385                 390                 395                 400
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val
                405                 410                 415    
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
            420                 425                 430        
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln
        435                 440                 445            
Tyr Met Tyr Tyr Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
    450                 455                 460                
Lys Arg
465    
 
 
<210> 42
<211> 464
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-251-AS接头-Fc-白蛋白结构域3
      接头-DT02-K-044-251 Vk-Vk dAb-Fc-dAb
 
<400> 42
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro Glu
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ser Thr His
            100                 105                 110        
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
        115                 120                 125            
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
    130                 135                 140                
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
145                 150                 155                 160
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
                165                 170                 175    
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
            180                 185                 190        
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
        195                 200                 205            
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
    210                 215                 220                
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
225                 230                 235                 240
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
                245                 250                 255    
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
            260                 265                 270        
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
        275                 280                 285            
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
    290                 295                 300                
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
305                 310                 315                 320
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu
                325                 330                 335    
Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr
            340                 345                 350        
Phe His Ala Asp Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
        355                 360                 365            
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp
    370                 375                 380                
Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
385                 390                 395                 400
Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
                405                 410                 415    
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
            420                 425                 430        
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met
        435                 440                 445            
Tyr Tyr Pro Glu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
    450                 455                 460                
 
 
<210> 43
<211> 466
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-251-AAAS接头-Fc-白蛋白结构域3
      接头-DT02-K-044-251 Vk-Vk dAb-Fc-dAb
 
<400> 43
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro Glu
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Ser
            100                 105                 110        
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
        115                 120                 125            
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
    130                 135                 140                
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
145                 150                 155                 160
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
                165                 170                 175    
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
            180                 185                 190        
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
        195                 200                 205            
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
    210                 215                 220                
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
225                 230                 235                 240
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
                245                 250                 255    
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
            260                 265                 270        
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
        275                 280                 285            
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
    290                 295                 300                
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
305                 310                 315                 320
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                325                 330                 335    
Lys Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr
            340                 345                 350        
Phe Thr Phe His Ala Asp Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
        355                 360                 365            
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser
    370                 375                 380                
Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
385                 390                 395                 400
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val
                405                 410                 415    
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
            420                 425                 430        
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln
        435                 440                 445            
Tyr Met Tyr Tyr Pro Glu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
    450                 455                 460                
Lys Arg
465    
 
 
<210> 44
<211> 356
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb (白蛋白结构域3接头) Fc-dAb的C-末端Fc融合体 
 
<400> 44
Ala Ser Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
 1               5                  10                  15     
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
            20                  25                  30         
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
        35                  40                  45             
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
    50                  55                  60                 
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65                  70                  75                  80 
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
                85                  90                  95     
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
            100                 105                 110        
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
        115                 120                 125             
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
    130                 135                 140                
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145                 150                 155                 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
                165                 170                 175    
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
            180                 185                 190         
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
        195                 200                 205            
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
    210                 215                 220                 
Pro Gly Lys Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala
225                 230                 235                 240
Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
                245                 250                 255    
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
            260                 265                 270        
Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
        275                 280                 285             
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser
    290                 295                 300                
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
305                 310                 315                 320
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
                325                 330                 335    
Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
            340                 345                 350        
Glu Ile Lys Arg
        355    
 
 
<210> 45
<211> 354
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb (白蛋白结构域3接头) Fc-dAb的C-末端Fc融合体 
 
<400> 45
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
 1               5                  10                  15     
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
            20                  25                  30         
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
        35                  40                  45             
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
    50                  55                  60                 
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65                  70                  75                  80 
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
                85                  90                  95     
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
            100                 105                 110        
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
        115                 120                 125            
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
    130                 135                 140                
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145                 150                 155                 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
                165                 170                 175    
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
            180                 185                 190        
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
        195                 200                 205            
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
    210                 215                 220                
Lys Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr
225                 230                 235                 240
Phe Thr Phe His Ala Asp Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
                245                 250                 255    
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser
            260                 265                 270        
Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
        275                 280                 285            
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val
    290                 295                 300                
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
305                 310                 315                 320
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln
                325                 330                 335    
Tyr Met Tyr Tyr Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
            340                 345                 350        
Lys Arg
       
 
 
<210> 46
<211> 356
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-251 dAb (白蛋白结构域3接头) Fc-dAb的C-末端Fc融合体 
 
<400> 46
Ala Ser Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
 1               5                  10                  15     
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
            20                  25                  30         
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
        35                  40                  45             
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
    50                  55                  60                 
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65                  70                  75                  80 
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
                85                  90                  95     
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
            100                 105                 110        
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
        115                 120                 125            
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
    130                 135                 140                
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145                 150                 155                 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
                165                 170                 175    
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
            180                 185                 190        
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
        195                 200                 205            
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
    210                 215                 220                
Pro Gly Lys Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala
225                 230                 235                 240
Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
                245                 250                 255    
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
            260                 265                 270        
Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
        275                 280                 285            
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser
    290                 295                 300                
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
305                 310                 315                 320
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
                325                 330                 335    
Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro Glu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
            340                 345                 350        
Glu Ile Lys Arg
        355    
 
 
<210> 47
<211> 354
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-251 dAb (白蛋白结构域3接头) Fc-dAb的C-末端Fc融合体 
 
<400> 47
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
 1               5                  10                  15     
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
            20                  25                  30         
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
        35                  40                  45             
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
    50                  55                  60                 
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65                  70                  75                  80 
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
                85                  90                  95     
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
            100                 105                 110        
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
        115                 120                 125            
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
    130                 135                 140                
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145                 150                 155                 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
                165                 170                 175    
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
            180                 185                 190        
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
        195                 200                 205            
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
    210                 215                 220                
Lys Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr
225                 230                 235                 240
Phe Thr Phe His Ala Asp Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
                245                 250                 255    
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser
            260                 265                 270        
Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
        275                 280                 285            
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val
    290                 295                 300                
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
305                 310                 315                 320
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln
                325                 330                 335    
Tyr Met Tyr Tyr Pro Glu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
            340                 345                 350        
Lys Arg
       
 
 
<210> 48
<211> 339
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb (TVAAPS接头) dAb-Fc的N-末端Fc融合体 
 
<400> 48
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
        115                 120                 125            
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
    130                 135                 140                
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
145                 150                 155                 160
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
                165                 170                 175    
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
            180                 185                 190        
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
        195                 200                 205            
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
    210                 215                 220                
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
225                 230                 235                 240
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
                245                 250                 255    
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
            260                 265                 270        
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
        275                 280                 285            
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
    290                 295                 300                
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
305                 310                 315                 320
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
                325                 330                 335    
Pro Gly Lys
           
 
 
<210> 49
<211> 339
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-232 dAb (TVAAPS接头) dAb-Fc的N-末端Fc融合体 
 
<400> 49
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro Glu
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
        115                 120                 125             
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
    130                 135                 140                
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
145                 150                 155                 160
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
                165                 170                 175    
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
            180                 185                 190         
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
        195                 200                 205            
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
    210                 215                 220                 
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
225                 230                 235                 240
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
                245                 250                 255    
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
            260                 265                 270        
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
        275                 280                 285             
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
    290                 295                 300                
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
305                 310                 315                 320
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
                325                 330                 335    
Pro Gly Lys
           
 
 
<210> 50
<211> 339
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-236 dAb (TVAAPS接头) dAb-Fc的N-末端Fc融合体 
 
<400> 50
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro Lys
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
        115                 120                 125            
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
    130                 135                 140                
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
145                 150                 155                 160
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
                165                 170                 175    
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
            180                 185                 190        
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
        195                 200                 205            
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
    210                 215                 220                
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
225                 230                 235                 240
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
                245                 250                 255    
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
            260                 265                 270        
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
        275                 280                 285            
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
    290                 295                 300                
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
305                 310                 315                 320
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
                325                 330                 335    
Pro Gly Lys
           
 
 
<210> 51
<211> 339
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-251 dAb (TVAAPS接头) dAb-Fc的N-末端Fc融合体 
 
<400> 51
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro Glu
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
        115                 120                 125            
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
    130                 135                 140                
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
145                 150                 155                 160
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
                165                 170                 175    
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
            180                 185                 190        
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
        195                 200                 205            
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
    210                 215                 220                
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
225                 230                 235                 240
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
                245                 250                 255    
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
            260                 265                 270        
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
        275                 280                 285            
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
    290                 295                 300                
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
305                 310                 315                 320
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
                325                 330                 335    
Pro Gly Lys
           
 
 
<210> 52
<211> 339
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-255 dAb (TVAAPS接头) dAb-Fc的N-末端Fc融合体 
 
<400> 52
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro Lys
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
        115                 120                 125            
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
    130                 135                 140                
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
145                 150                 155                 160
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
                165                 170                 175    
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
            180                 185                 190        
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
        195                 200                 205            
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
    210                 215                 220                
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
225                 230                 235                 240
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
                245                 250                 255    
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
            260                 265                 270        
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
        275                 280                 285            
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
    290                 295                 300                
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
305                 310                 315                 320
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
                325                 330                 335    
Pro Gly Lys
           
 
 
<210> 53
<211> 477
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597-AS接头-Fc-GS(TVAAPSGS)x3
      接头-DT02-K-044-085 Vh-Vk dAb-Fc-dAb
 
<400> 53
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
        115                 120                 125            
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
    130                 135                 140                
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
145                 150                 155                 160
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
                165                 170                 175    
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
            180                 185                 190        
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
        195                 200                 205            
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
    210                 215                 220                
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
225                 230                 235                 240
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
                245                 250                 255    
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
            260                 265                 270        
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
        275                 280                 285            
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
    290                 295                 300                
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
305                 310                 315                 320
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
                325                 330                 335    
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly
            340                 345                 350        
Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly
        355                 360                 365            
Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
    370                 375                 380                
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro
385                 390                 395                 400
Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
                405                 410                 415    
Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
            420                 425                 430        
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
        435                 440                 445            
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro
    450                 455                 460                
His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
465                 470                 475        
 
 
<210> 54
<211> 475
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-085-铰链IgG1接头-Fc-GS(TVAAPSGS)x3
      接头-DT02-K-044-085 Vh-Vk dAb-Fc-dAb
 
<400> 54
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Val Glu Pro Lys
            100                 105                 110        
Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
        115                 120                 125            
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
    130                 135                 140                
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
145                 150                 155                 160
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
                165                 170                 175    
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
            180                 185                 190        
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
        195                 200                 205            
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
    210                 215                 220                
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
225                 230                 235                 240
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
                245                 250                 255    
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
            260                 265                 270        
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
        275                 280                 285            
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
    290                 295                 300                
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
305                 310                 315                 320
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
                325                 330                 335    
Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr
            340                 345                 350        
Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Asp
        355                 360                 365            
Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
    370                 375                 380                
Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu
385                 390                 395                 400
Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
                405                 410                 415    
His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
            420                 425                 430        
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
        435                 440                 445            
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His Thr
    450                 455                 460                
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
465                 470                 475
 
 
<210> 55
<211> 469
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-085-AS-Fc (H112A)-GS(TVAAPSGS)x3
      接头-DT02-K-044-085 Vh-Vk dAb-Fc-dAb
 
<400> 55
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ser Thr Ala
            100                 105                 110        
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
        115                 120                 125            
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
    130                 135                 140                
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
145                 150                 155                 160
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
                165                 170                 175    
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
            180                 185                 190        
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
        195                 200                 205            
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
    210                 215                 220                
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
225                 230                 235                 240
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
                245                 250                 255    
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
            260                 265                 270        
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
        275                 280                 285            
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
    290                 295                 300                
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
305                 310                 315                 320
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
                325                 330                 335    
Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly
            340                 345                 350        
Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser
        355                 360                 365            
Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
    370                 375                 380                
Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys
385                 390                 395                 400
Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln
                405                 410                 415    
Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
            420                 425                 430        
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr
        435                 440                 445            
Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
    450                 455                 460                
Val Glu Ile Lys Arg
465                
 
 
<210> 56
<211> 469
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-085-AS-Fc (T113P)-GS(TVAAPSGS)x3
      接头-DT02-K-044-085 Vh-Vk dAb-Fc-dAb
 
<400> 56
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ser Thr His
            100                 105                 110        
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
        115                 120                 125            
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
    130                 135                 140                
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
145                 150                 155                 160
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
                165                 170                 175    
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
            180                 185                 190        
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
        195                 200                 205            
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
    210                 215                 220                
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
225                 230                 235                 240
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
                245                 250                 255    
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
            260                 265                 270        
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
        275                 280                 285            
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
    290                 295                 300                
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
305                 310                 315                 320
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
                325                 330                 335    
Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly
            340                 345                 350        
Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser
        355                 360                 365            
Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
    370                 375                 380                
Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys
385                 390                 395                 400
Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln
                405                 410                 415    
Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
            420                 425                 430        
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr
        435                 440                 445            
Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
    450                 455                 460                
Val Glu Ile Lys Arg
465                
 
 
<210> 57
<211> 12
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> AAAS接头 (N-末端接头)
 
<400> 57
gcggccgcta gc                                                     12
 
<210> 58
<211> 6
<212> DNA
<213> 人
 
<400> 58
gctagc                                                            6
 
<210> 59
<211> 18
<212> DNA
<213> 人
 
<400> 59
accgtcgccg ctcctagc                                               18
 
<210> 60
<211> 24
<212> DNA
<213> 人
 
<400> 60
gtggagccta agtcttctga caag                                        24
 
<210> 61
<211> 27
<212> DNA
<213> 人
 
<400> 61
gagctcaaaa ccccacttgg tgacaca                                     27
 
<210> 62
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 纤连蛋白x3接头 (N-末端接头)
 
<400> 62
accggattag acagtcccac aggtctcgat tcacctactg gcttagactc tcca       54
 
<210> 63
<211> 72
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 纤连蛋白x4接头 (N-末端接头)
 
<400> 63
accggattag acagtcccac aggtctcgat tcacctactg gcttagactc tccaaccggc 60
ctggacagcc cc                                                     72
 
<210> 64
<211> 675
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> H2A IgG1 Fc
 
<400> 64
accgccacct gccccccctg ccctgccccc gagctgctgg gaggccccag cgtgttcctg 60
ttccccccca agcctaagga caccctgatg atcagcagaa cccccgaggt gacctgtgtg 120
gtggtggatg tgagccacga ggaccctgag gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg 180
gaggtgcaca atgccaagac caagcccagg gaggagcagt acaacagcac ctaccgggtg 240
gtgtccgtgc tgaccgtgct gcaccaggat tggctgaacg gcaaggagta caagtgtaag 300
gtgtccaaca aggccctgcc tgcccctatc gagaaaacca tcagcaaggc caagggccag 360
cccagagagc cccaggtgta caccctgccc cctagcagag atgagctgac caagaaccag 420
gtgtccctga cctgcctggt gaagggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 480
agcaacggcc agcccgagaa caactacaag accacccccc ctgtgctgga cagcgatggc 540
agcttcttcc tgtacagcaa gctgaccgtg gacaagagca gatggcagca gggcaacgtg 600
ttcagctgct ccgtgatgca cgaggccctg cacaatcact acacccagaa gagcctgagc 660
ctgtcccctg gcaag                                                  675
 
<210> 65
<211> 675
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> T3P IgG1 Fc
     
 
<400> 65
acccaccctt gccccccctg ccctgccccc gagctgctgg gaggccccag cgtgttcctg 60
ttccccccca agcctaagga caccctgatg atcagcagaa cccccgaggt gacctgtgtg 120
gtggtggatg tgagccacga ggaccctgag gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg 180
gaggtgcaca atgccaagac caagcccagg gaggagcagt acaacagcac ctaccgggtg 240
gtgtccgtgc tgaccgtgct gcaccaggat tggctgaacg gcaaggagta caagtgtaag 300
gtgtccaaca aggccctgcc tgcccctatc gagaaaacca tcagcaaggc caagggccag 360
cccagagagc cccaggtgta caccctgccc cctagcagag atgagctgac caagaaccag 420
gtgtccctga cctgcctggt gaagggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 480
agcaacggcc agcccgagaa caactacaag accacccccc ctgtgctgga cagcgatggc 540
agcttcttcc tgtacagcaa gctgaccgtg gacaagagca gatggcagca gggcaacgtg 600
ttcagctgct ccgtgatgca cgaggccctg cacaatcact acacccagaa gagcctgagc 660
ctgtcccctg gcaag                                                  675
 
<210> 66
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> ((GS(TVAAPSGS)x3))接头 (C-末端接头)
     
 
<400> 66
ggatctaccg tggcagcacc atcaggatct accgtggcag caccatcagg ttcaacagta 60
gctgctcctt ctggatcc                                               78
 
<210> 67
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 纤连蛋白x3接头 (C-末端接头)
     
 
<400> 67
accggattag acagtcccac aggtctcgat tcacctactg gcttagactc tcca       54
 
<210> 68
<211> 72
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 纤连蛋白x4接头 (C-末端接头)
 
<400> 68
accggattag acagtcccac aggtctcgat tcacctactg gcttagactc tccaaccggc 60
ctggacagcc cc                                                     72
 
<210> 69
<211> 57
<212> DNA
<213> 人
 
<400> 69
cacaaggacg acaaccccaa cctgcccagg ctggtgaggc ccgaggtgga cgtgatg    57
 
<210> 70
<211> 63
<212> DNA
<213> 人
 
<400> 70
gagaacgacg agatgcccgc cgacctgccc agcctggccg ccgacttcgt ggagagcaag 60
gac                                                               63
 
<210> 71
<211> 63
<212> DNA
<213> 人
 
<400> 71
gaggtggacg agacctacgt gcccaaggag ttcaacgccg agaccttcac cttccacgcc 60
gac                                                               63
 
<210> 72
<211> 48
<212> DNA
<213> 人
 
<400> 72
gaggtggacg agacctacgt gcccaaggag ttcaacgccg agaccttc              48
 
<210> 73
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> Gly4Ser 3x接头 (C-末端接头)
 
<400> 73
ggtggaggcg gttcaggcgg aggtggcagc ggcggtggcg ggtcg                 45
 
<210> 74
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> Gly4Ser 4x接头 (C-末端接头)
 
<400> 74
ggtggaggcg gttcaggcgg aggtggcagc ggcggtggcg ggtcgggtgg aggcggttca 60
 
 
<210> 75
<211> 120
<212> DNA
<213> 人
 
<400> 75
aaagaagcgg cggcgaaaga agcggcggcg aaagaagcgg ccgccaagga gctggccgcc 60
aaggaggccg ccgccaagga ggccgccgcc aaggaggccg ccgccaaaga attggccgca 120
 
 
<210> 76
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> AAAS接头 (N-末端接头)
 
<400> 76
Ala Ala Ala Ser
 1             
 
 
<210> 77
<211> 2
<212> PRT
<213> 人
 
<400> 77
Ala Ser
 1     
 
 
<210> 78
<211> 6
<212> PRT
<213> 人
 
<400> 78
Thr Val Ala Ala Pro Ser
 1               5     
 
 
<210> 79
<211> 8
<212> PRT
<213> 人
 
<400> 79
Val Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys
 1               5             
 
 
<210> 80
<211> 9
<212> PRT
<213> 人
 
<400> 80
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr
 1               5                 
 
 
<210> 81
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 纤连蛋白x3接头 (N-末端接头)
 
<400> 81
Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp
 1               5                  10                  15     
Ser Pro
       
 
 
<210> 82
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 纤连蛋白x4接头 (N-末端接头)
 
<400> 82
Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp
 1               5                  10                  15     
Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro
            20                 
 
 
<210> 83
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> H2A IgG1 Fc
 
<400> 83
Thr Ala Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
 1               5                  10                  15     
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
            20                  25                  30         
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
        35                  40                  45             
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
    50                  55                  60                 
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65                  70                  75                  80 
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
                85                  90                  95     
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
            100                 105                 110        
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
        115                 120                 125            
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
    130                 135                 140                
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145                 150                 155                 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
                165                 170                 175    
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
            180                 185                 190        
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
        195                 200                 205            
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
    210                 215                 220                
Lys
225
 
 
<210> 84
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> T3P IgG1 Fc
 
<400> 84
Thr His Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
 1               5                  10                  15     
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
            20                  25                  30         
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
        35                  40                  45             
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
    50                  55                  60                 
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65                  70                  75                  80 
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
                85                  90                  95     
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
            100                 105                 110        
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
        115                 120                 125            
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
    130                 135                 140                
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145                 150                 155                 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
                165                 170                 175    
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
            180                 185                 190        
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
        195                 200                 205            
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
    210                 215                 220                
Lys
225
 
 
<210> 85
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> ((GS(TVAAPSGS)x3))接头 (C-末端接头)
 
<400> 85
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser
 1               5                  10                  15     
Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Gly Ser
            20                  25     
 
 
<210> 86
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 纤连蛋白x3接头 (C-末端接头)
 
<400> 86
Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp
 1               5                  10                  15     
Ser Pro
       
 
 
<210> 87
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 纤连蛋白x4接头 (C-末端接头)
 
<400> 87
Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp
 1               5                  10                  15     
Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro
            20                  
 
 
<210> 88
<211> 19
<212> PRT
<213> 人
 
<400> 88
His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val
 1               5                  10                  15     
Asp Val Met
           
 
 
<210> 89
<211> 21
<212> PRT
<213> 天然的
 
<400> 89
Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser Leu Ala Ala Asp Phe
 1               5                  10                  15     
Val Glu Ser Lys Asp
            20     
 
 
<210> 90
<211> 21
<212> PRT
<213> 人
 
<400> 90
Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe
 1               5                  10                  15     
Thr Phe His Ala Asp
            20     
 
 
<210> 91
<211> 16
<212> PRT
<213> 人
 
<400> 91
Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe
 1               5                  10                  15     
 
 
<210> 92
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> Gly4Ser 3x接头 (C-末端接头)
 
<400> 92
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
 1               5                  10                  15 
 
 
<210> 93
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> Gly4Ser 4x接头 (C-末端接头)
 
<400> 93
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
 1               5                  10                  15     
Gly Gly Gly Ser
            20 
 
 
<210> 94
<211> 40
<212> PRT
<213> 人
 
<400> 94
Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
 1               5                  10                  15     
Glu Leu Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu
            20                  25                  30         
Ala Ala Ala Lys Glu Leu Ala Ala
        35                  40 
 
 
<210> 95
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-593 dAb
 
<400> 95
gaggtgcagc tgttggtgtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgcgtctc 60
tcctgtgcag cctccggatt cacctttaag gcttatccga tgatgtgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg gtctagagtg ggtttcagag atttcgcctt cgggttctta tacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tcccgcgaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgcg tgccgaggac accgcggtat attactgtgc gaaagatcct 300
cggaagttag actactgggg tcagggaacc ctggtcaccg tctcgagc              348
 
<210> 96
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb
 
<400> 96
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccca tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccca gcggcagcaa cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggacccc 300
cggaagctgg actactgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcagc              348
 
<210> 97
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-085 dAb
 
<400> 97
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gtggattggt cctgagttaa agtggtacca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatcat ggttccattt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag tatatgtatt atcctcatac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgt                                        324
 
<210> 98
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-232 dAb
 
<400> 98
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gtggattggt cctgagttaa gttggtacca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatcat ggttccattt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag tatatgtatt atcctgagac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgt                                        324
 
<210> 99
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-236 dAb
 
<400> 99
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gtggattggt cctgagttaa gttggtacca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatcat ggttccattt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag tatatgtatt atcctaagac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgt                                        324
 
<210> 100
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-251 dAb
 
<400> 100
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gtggattggt cctgagttaa agtggtacca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatcat ggttccattt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag tatatgtatt atcctgagac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgt                                        324
 
<210> 101
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-255 dAb
 
<400> 101
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gtggattggt cctgagttaa agtggtacca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatcat ggttccattt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag tatatgtatt atcctaagac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgt                                        324
 
<210> 102
<211> 675
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> Fc IgG1
 
<400> 102
acccacacct gccccccctg ccctgccccc gagctgctgg gaggccccag cgtgttcctg 60
ttccccccca agcctaagga caccctgatg atcagcagaa cccccgaggt gacctgtgtg 120
gtggtggatg tgagccacga ggaccctgag gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg 180
gaggtgcaca atgccaagac caagcccagg gaggagcagt acaacagcac ctaccgggtg 240
gtgtccgtgc tgaccgtgct gcaccaggat tggctgaacg gcaaggagta caagtgtaag 300
gtgtccaaca aggccctgcc tgcccctatc gagaaaacca tcagcaaggc caagggccag 360
cccagagagc cccaggtgta caccctgccc cctagcagag atgagctgac caagaaccag 420
gtgtccctga cctgcctggt gaagggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 480
agcaacggcc agcccgagaa caactacaag accacccccc ctgtgctgga cagcgatggc 540
agcttcttcc tgtacagcaa gctgaccgtg gacaagagca gatggcagca gggcaacgtg 600
ttcagctgct ccgtgatgca cgaggccctg cacaatcact acacccagaa gagcctgagc 660
ctgtcccctg gcaag                                                  675
 
<210> 103
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-593 dAb
 
<400> 103
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser
        115    
 
 
<210> 104
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb
 
<400> 104
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser
        115    
 
 
<210> 105
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-085 dAb
 
<400> 105
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
            100                 105            
 
 
<210> 106
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-232 dAb
 
<400> 106
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro Glu
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
            100                 105            
 
 
<210> 107
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-236 dAb
 
<400> 107
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro Lys
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
            100                 105            
 
 
<210> 108
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-251 dAb
 
<400> 108
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro Glu
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
            100                 105            
 
 
<210> 109
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-255 dAb
 
<400> 109
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro Lys
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
            100                 105            
 
 
<210> 110
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> Fc IgG1 dAb
 
<400> 110
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
 1               5                  10                  15     
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
            20                  25                  30         
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
        35                  40                  45             
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
    50                  55                  60                 
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65                  70                  75                  80 
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
                85                  90                  95     
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
            100                 105                 110        
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
        115                 120                 125            
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
    130                 135                 140                
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145                 150                 155                 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
                165                 170                 175    
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
            180                 185                 190        
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
        195                 200                 205            
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
    210                 215                 220                
Lys
225
 
 
<210> 111
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-593 CDR1
 
<400> 111
Ala Tyr Pro Met Met
 1               5 
 
 
<210> 112
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-593 CDR2
 
<400> 112
Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
 1               5                  10                  15     
Gly
   
 
 
<210> 113
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-593 CDR3
 
<400> 113
Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr
 1               5         
 
 
<210> 114
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 CDR1
 
<400> 114
Ala Tyr Pro Met Met
 1               5 
 
 
<210> 115
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 CDR2
 
<400> 115
Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
 1               5                  10                  15     
Gly
   
 
 
<210> 116
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 CDR3
 
<400> 116
Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr
 1               5         
 
 
<210> 117
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-085 CDR1
 
<400> 117
Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys
 1               5                  10     
 
 
<210> 118
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-085 CDR2
 
<400> 118
His Gly Ser Ile Leu Gln Ser
 1               5         
 
 
<210> 119
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-085 CDR3
 
<400> 119
Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His Thr
 1               5                 
 
 
<210> 120
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-232 CDR1
 
<400> 120
Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Ser
 1               5                  10     
 
 
<210> 121
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-232 CDR2
 
<400> 121
His Gly Ser Ile Leu Gln Ser
 1               5         
 
 
<210> 122
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-232 CDR3
 
<400> 122
Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro Glu Thr
 1               5                 
 
 
<210> 123
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-236 CDR1
 
<400> 123
Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Ser
 1               5                  10     
 
 
<210> 124
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-236 CDR2
 
<400> 124
His Gly Ser Ile Leu Gln Ser
 1               5         
 
 
<210> 125
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-236 CDR3
 
<400> 125
Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro Lys Thr
 1               5                 
 
 
<210> 126
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-251 CDR1
 
<400> 126
Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys
 1               5                  10     
 
 
<210> 127
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-251 CDR2
 
<400> 127
His Gly Ser Ile Leu Gln Ser
 1               5         
 
 
<210> 128
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-251 CDR3
 
<400> 128
Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro Glu Thr
 1               5                 
 
 
<210> 129
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-255 CDR1
 
<400> 129
Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys
 1               5                  10     
 
 
<210> 130
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-255 CDR2
 
<400> 130
His Gly Ser Ile Leu Gln Ser
 1               5         
 
 
<210> 131
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DT02-K-044-255 CDR3
 
<400> 131
Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro Lys Thr
 1               5                  
 
 
<210> 132
<211> 1077
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb ((TGLDSP)x3)的N-末端Fc融合体 
 
<400> 132
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccta tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggtaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccaa gcggcagcaa cacctactac 180
gcagacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa cacactgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgcagtgt actactgcgc caaggaccca 300
cggaagctgg actactgggg tcagggcacc ctggtgaccg tgagcagcac cggattagac 360
agtcccacag gtctcgattc acctactggc ttagactctc caacccacac ctgccccccc 420
tgccctgccc cagagctgct gggcggacct agcgtgttcc tgttcccacc aaagcctaag 480
gacaccctga tgatcagcag aacccccgag gtgacctgtg tggtggtgga tgtgagccac 540
gaggaccctg aggtgaagtt caactggtac gtggacggcg tggaggtgca caatgccaag 600
accaagccca gggaggagca gtacaacagc acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg 660
ctgcaccagg attggctgaa cggcaaggag tacaagtgta aggtgtccaa caaggccctg 720
cctgccccta tcgagaaaac catcagcaag gccaagggcc agcccagaga gccccaggtg 780
tacaccctgc cccctagcag aaatgagctg accaagaacc aggtgtccct gacctgcctg 840
gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg ccagcccgag 900
aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg gacagcgatg gcagcttctt cctgtacagc 960
aagctgaccg tggacaagag cagatggcag cagggcaacg tgttcagctg ctccgtgatg 1020
cacgaggccc tgcacaatca ctacacccag aagagcctga gcctgtcccc tggcaag    1077
 
<210> 133
<211> 1077
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb (TGLDSP)x3 T113P突变Fc)的N-末端Fc融合体 
 
<400> 133
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccca tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccca gcggcagcaa cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggacccc 300
cggaagctgg actactgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcagcac gggtctggac 360
agtccgactg gtttagattc acctacgggc ttggactccc caacccaccc ttgccccccc 420
tgccctgccc ccgagctgct gggaggcccc agcgtgttcc tgttcccccc caagcctaag 480
gacaccctga tgatcagcag gacccccgaa gtgacctgcg tggtggtgga tgtgagccac 540
gaggaccctg aagtgaagtt caactggtac gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag 600
accaagccca gagaggagca gtacaacagc acctaccgcg tggtgtctgt gctgaccgtg 660
ctgcaccagg attggctgaa cggcaaggag tacaagtgca aagtgagcaa caaggccctg 720
cctgccccta tcgagaaaac catcagcaag gccaagggcc agcctagaga gccccaggtc 780
tacaccctgc ctccctccag agatgagctg accaagaacc aggtgtccct gacctgtctg 840
gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag 900
aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg gacagcgatg gcagcttctt cctgtactcc 960
aagctgaccg tggacaagag cagatggcag cagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg 1020
cacgaggccc tgcacaatca ctacacccag aagagcctga gcctgtcccc cggcaag    1077
 
<210> 134
<211> 1095
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb (TGLDSP)x4 T113P突变Fc)的N-末端Fc融合体 
 
<400> 134
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccca tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccca gcggcagcaa cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggacccc 300
cggaagctgg actactgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcagcac gggtctggac 360
agtccgactg gtttagattc acctacgggc ttggactccc caaccggctt agatagcccg 420
acccaccctt gccccccctg ccctgccccc gagctgctgg gaggccccag cgtgttcctg 480
ttccccccca agcctaagga caccctgatg atcagcagga cccccgaagt gacctgcgtg 540
gtggtggatg tgagccacga ggaccctgaa gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg 600
gaagtgcaca acgccaagac caagcccaga gaggagcagt acaacagcac ctaccgcgtg 660
gtgtctgtgc tgaccgtgct gcaccaggat tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaaa 720
gtgagcaaca aggccctgcc tgcccctatc gagaaaacca tcagcaaggc caagggccag 780
cctagagagc cccaggtcta caccctgcct ccctccagag atgagctgac caagaaccag 840
gtgtccctga cctgtctggt gaagggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 900
agcaacggcc agcccgagaa caactacaag accacccccc ctgtgctgga cagcgatggc 960
agcttcttcc tgtactccaa gctgaccgtg gacaagagca gatggcagca gggcaacgtg 1020
ttcagctgca gcgtgatgca cgaggccctg cacaatcact acacccagaa gagcctgagc 1080
ctgtcccccg gcaag                                                  1095
 
<210> 135
<211> 1419
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb N-(VEPKSSDK接头) & C-末端
      ((TGLDSP)x4)
 
<400> 135
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcct ctgtgggaga cagggtgact 60
atcacctgca gggccagcca gtggattggc cccgagctga agtggtatca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctaccac ggcagcatcc tgcagtccgg cgtgcctagc 180
aggttctcag gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctca ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tatatgtact acccccacac cttcggccag 300
ggcaccaagg tggagatcaa gagggtggag cctaagtctt ctgacaagac ccacacctgc 360
cccccctgcc ctgccccaga gctgctggga ggacccagcg tgttcctgtt cccacccaag 420
cctaaggaca ccctgatgat cagcagaacc cccgaggtga cctgtgtggt ggtggatgtg 480
agccacgagg accctgaggt gaagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaat 540
gccaagacca agcccaggga ggagcagtac aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg 600
accgtgctgc accaggattg gctgaacggc aaggagtaca agtgtaaggt gtccaacaag 660
gccctgcctg cccctatcga gaaaaccatc agcaaggcca agggccagcc cagagagccc 720
caggtgtaca ccctgccccc tagcagagat gagctgacca agaaccaggt gtccctgacc 780
tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatggccag 840
cccgagaaca actacaagac caccccccct gtgctggaca gcgatggcag cttcttcctg 900
tacagcaagc tgaccgtgga caagagcaga tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgctcc 960
gtgatgcacg aggccctgca caatcactac acccagaaga gcctgagcct gtcccctggc 1020
aagaccggat tagacagtcc cacaggtctc gattcaccta ctggcttaga ctctccaacc 1080
ggcctggaca gccccgacat ccagatgacc cagtctccat cctccctgtc tgcatctgta 1140
ggagaccgtg tcaccatcac ttgccgggca agtcagtgga ttggtcctga gttaaagtgg 1200
taccagcaga aaccagggaa agcccctaag ctcctgatct atcatggttc cattttgcaa 1260
agtggggtcc catcacgttt cagtggcagt ggatctggga cagacttcac tctcaccatc 1320
agcagtctgc aacctgaaga ttttgctacg tactactgtc aacagtatat gtattatcct 1380
catacgttcg gccaagggac caaggtggaa atcaaacgt                        1419
 
<210> 136
<211> 1401
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb N-(ASTHP接头) & C-末端
      ((TGLDSP)x4)
 
<400> 136
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcct ctgtgggaga cagggtgact 60
atcacctgca gggccagcca gtggattggc cccgagctga agtggtatca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctaccac ggcagcatcc tgcagtccgg cgtgcctagc 180
aggttctcag gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctca ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tatatgtact acccccacac cttcggccag 300
ggcaccaagg tggagatcaa gagggctagc acccaccctt gccccccctg ccctgccccc 360
gagctgctgg gaggccccag cgtgttcctg ttccccccca agcctaagga caccctgatg 420
atcagcagga cccccgaagt gacctgcgtg gtggtggatg tgagccacga ggaccctgaa 480
gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaagtgcaca acgccaagac caagcccaga 540
gaggagcagt acaacagcac ctaccgcgtg gtgtctgtgc tgaccgtgct gcaccaggat 600
tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaaa gtgagcaaca aggccctgcc tgcccctatc 660
gagaaaacca tcagcaaggc caagggccag cctagagagc cccaggtcta caccctgcct 720
ccctccagag atgagctgac caagaaccag gtgtccctga cctgtctggt gaagggcttc 780
taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaacggcc agcccgagaa caactacaag 840
accacccccc ctgtgctgga cagcgatggc agcttcttcc tgtactccaa gctgaccgtg 900
gacaagagca gatggcagca gggcaacgtg ttcagctgca gcgtgatgca cgaggccctg 960
cacaatcact acacccagaa gagtctgagc ctgtcccctg gcaagaccgg attagacagt 1020
cccacaggtc tcgattcacc tactggctta gactctccaa ccggcctgga cagccccgac 1080
atccagatga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagaccg tgtcaccatc 1140
acttgccggg caagtcagtg gattggtcct gagttaaagt ggtaccagca gaaaccaggg 1200
aaagccccta agctcctgat ctatcatggt tccattttgc aaagtggggt cccatcacgt 1260
ttcagtggca gtggatctgg gacagacttc actctcacca tcagcagtct gcaacctgaa 1320
gattttgcta cgtactactg tcaacagtat atgtattatc ctcatacgtt cggccaaggg 1380
accaaggtgg aaatcaaacg t                                           1401
 
<210> 137
<211> 1473
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb N-((TGLDSP)x3) & C-末端
      K-044-085 dAb ((TGLDSP)x4)
 
<400> 137
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccca tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccca gcggcagcaa cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggacccc 300
cggaagctgg actactgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcagcac gggtctggac 360
agtccgactg gtttagattc acctacgggc ttggactccc caacccacac ctgccccccc 420
tgccctgccc ctgagctgct gggcggaccc agcgtgttcc tgttcccccc caagcccaag 480
gacaccctga tgatcagccg gacccccgag gtgacctgcg tggtggtgga cgtgagccac 540
gaggaccctg aggtgaagtt caattggtac gtggacggcg tggaggtgca caacgccaag 600
accaagcccc gggaggaaca gtacaacagc acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg 660
ctgcaccagg actggctgaa cggcaaagaa tacaagtgca aggtgtccaa caaggccctg 720
cctgccccca tcgagaaaac catcagcaag gccaagggcc agcccaggga accccaggtg 780
tacaccctgc cccccagccg ggacgagctg accaagaacc aggtgtccct gacctgcctg 840
gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag 900
aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg gacagcgacg gcagcttctt cctgtacagc 960
aagctgaccg tggacaagag ccggtggcag cagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg 1020
cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag aagagcctga gcctgtcccc cggcaagacc 1080
ggattagaca gtcccacagg tctcgattca cctactggct tagactctcc aaccggcctg 1140
gacagccccg acatccagat gacccagtct ccatcctccc tgtctgcatc tgtaggagac 1200
cgtgtcacca tcacttgccg ggcaagtcag tggattggtc ctgagttaaa gtggtaccag 1260
cagaaaccag ggaaagcccc taagctcctg atctatcatg gttccatttt gcaaagtggg 1320
gtcccatcac gtttcagtgg cagtggatct gggacagact tcactctcac catcagcagt 1380
ctgcaacctg aagattttgc tacgtactac tgtcaacagt atatgtatta tcctcatacg 1440
ttcggccaag ggaccaaggt ggaaatcaaa cgt                              1473
 
<210> 138
<211> 1443
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb N-(VEPKSSDK接头) & C-末端
      K-044-085 dAb ((TGLDSP)x4)
 
<400> 138
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccta tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggtaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccaa gcggcagcaa cacctactac 180
gcagacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa cacactgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgcagtgt actactgcgc caaggaccca 300
cggaagctgg actactgggg tcagggcacc ctggtgaccg tgagcagcgt ggagcctaag 360
tcttctgaca agacccacac ctgcccaccc tgccctgccc cagagctgct gggaggaccc 420
agcgtgttcc tgttcccacc caagcctaag gacaccctga tgatcagcag aacccccgag 480
gtgacctgtg tggtggtgga tgtgagccac gaggaccctg aggtgaagtt caactggtac 540
gtggacggcg tggaggtgca caatgccaag accaagccca gggaggagca gtacaacagc 600
acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg attggctgaa cggcaaggag 660
tacaagtgta aggtgtccaa caaggccctg cctgccccta tcgagaaaac catcagcaag 720
gccaagggcc agcccagaga gccccaggtg tacaccctgc cccctagcag agatgagctg 780
accaagaacc aggtgtccct gacctgcctg gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc 840
gtggagtggg agagcaatgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 900
gacagcgatg gcagcttctt cctgtacagc aagctgaccg tggacaagag cagatggcag 960
cagggcaacg tgttcagctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaatca ctacacccag 1020
aagagcctga gcctgtcccc tggcaagacc ggattagaca gtcccacagg tctcgattca 1080
cctactggct tagactctcc aaccggcctg gacagccccg acatccagat gacccagtct 1140
ccatcctccc tgtctgcatc tgtaggagac cgtgtcacca tcacttgccg ggcaagtcag 1200
tggattggtc ctgagttaaa gtggtaccag cagaaaccag ggaaagcccc taagctcctg 1260
atctatcatg gttccatttt gcaaagtggg gtcccatcac gtttcagtgg cagtggatct 1320
gggacagact tcactctcac catcagcagt ctgcaacctg aagattttgc tacgtactac 1380
tgtcaacagt atatgtatta tcctcatacg ttcggccaag ggaccaaggt ggaaatcaaa 1440
cgt                                                               1443
 
<210> 139
<211> 1425
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 带有C-末端 K-044-085 dAb ((TGLDSP)x4)的DMS1576
 
<400> 139
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccca tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccca gcggcagcaa cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggacccc 300
cggaagctgg actactgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcagcgc tagcacccac 360
acctgccccc cctgccctgc ccctgagctg ctgggcggac ccagcgtgtt cctgttcccc 420
cccaagccca aggacaccct gatgatcagc cggacccccg aggtgacctg cgtggtggtg 480
gacgtgagcc acgaggaccc tgaggtgaag ttcaattggt acgtggacgg cgtggaggtg 540
cacaacgcca agaccaagcc ccgggaggaa cagtacaaca gcacctaccg ggtggtgtcc 600
gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg aacggcaaag aatacaagtg caaggtgtcc 660
aacaaggccc tgcctgcccc catcgagaaa accatcagca aggccaaggg ccagcccagg 720
gaaccccagg tgtacaccct gccccccagc cgggacgagc tgaccaagaa ccaggtgtcc 780
ctgacctgcc tggtgaaggg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaac 840
ggccagcccg agaacaacta caagaccacc ccccctgtgc tggacagcga cggcagcttc 900
ttcctgtaca gcaagctgac cgtggacaag agccggtggc agcagggcaa cgtgttcagc 960
tgcagcgtga tgcacgaggc cctgcacaac cactacaccc agaagagcct gagcctgtcc 1020
cctggcaaga ccggattaga cagtcccaca ggtctcgatt cacctactgg cttagactct 1080
ccaaccggcc tggacagccc cgacatccag atgacccagt ctccatcctc cctgtctgca 1140
tctgtaggag accgtgtcac catcacttgc cgggcaagtc agtggattgg tcctgagtta 1200
aagtggtacc agcagaaacc agggaaagcc cctaagctcc tgatctatca tggttccatt 1260
ttgcaaagtg gggtcccatc acgtttcagt ggcagtggat ctgggacaga cttcactctc 1320
accatcagca gtctgcaacc tgaagatttt gctacgtact actgtcaaca gtatatgtat 1380
tatcctcata cgttcggcca agggaccaag gtggaaatca aacgt                 1425
 
<210> 140
<211> 1491
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb N-((TGLDSP)x4) & C-末端
      K-044-085 dAb ((TGLDSP)x4)
 
<400> 140
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccca tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccca gcggcagcaa cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggacccc 300
cggaagctgg actactgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcagcac gggtctggac 360
agtccgactg gtttagattc acctacgggc ttggactccc caaccggctt agatagcccg 420
acccacacct gccccccctg ccctgcccct gagctgctgg gcggacccag cgtgttcctg 480
ttccccccca agcccaagga caccctgatg atcagccgga cccccgaggt gacctgcgtg 540
gtggtggacg tgagccacga ggaccctgag gtgaagttca attggtacgt ggacggcgtg 600
gaggtgcaca acgccaagac caagccccgg gaggaacagt acaacagcac ctaccgggtg 660
gtgtccgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaagaata caagtgcaag 720
gtgtccaaca aggccctgcc tgcccccatc gagaaaacca tcagcaaggc caagggccag 780
cccagggaac cccaggtgta caccctgccc cccagccggg acgagctgac caagaaccag 840
gtgtccctga cctgcctggt gaagggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 900
agcaacggcc agcccgagaa caactacaag accacccccc ctgtgctgga cagcgacggc 960
agcttcttcc tgtacagcaa gctgaccgtg gacaagagcc ggtggcagca gggcaacgtg 1020
ttcagctgca gcgtgatgca cgaggccctg cacaaccact acacccagaa gagcctgagc 1080
ctgtcccctg gcaagaccgg attagacagt cccacaggtc tcgattcacc tactggctta 1140
gactctccaa ccggcctgga cagccccgac atccagatga cccagtctcc atcctccctg 1200
tctgcatctg taggagaccg tgtcaccatc acttgccggg caagtcagtg gattggtcct 1260
gagttaaagt ggtaccagca gaaaccaggg aaagccccta agctcctgat ctatcatggt 1320
tccattttgc aaagtggggt cccatcacgt ttcagtggca gtggatctgg gacagacttc 1380
actctcacca tcagcagtct gcaacctgaa gattttgcta cgtactactg tcaacagtat 1440
atgtattatc ctcatacgtt cggccaaggg accaaggtgg aaatcaaacg t          1491
 
<210> 141
<211> 1473
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223>  DOM15-26-597 dAb N-((TGLDSP)x3 T113P突变Fc)
       & C-末端 K-044-085 dAb ((TGLDSP)x4)
 
<400> 141
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccca tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccca gcggcagcaa cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggacccc 300
cggaagctgg actactgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcagcac gggtctggac 360
agtccgactg gtttagattc acctacgggc ttggactccc caacccaccc ttgccccccc 420
tgccctgccc ccgagctgct gggaggcccc agcgtgttcc tgttcccccc caagcctaag 480
gacaccctga tgatcagcag gacccccgaa gtgacctgcg tggtggtgga tgtgagccac 540
gaggaccctg aagtgaagtt caactggtac gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag 600
accaagccca gagaggagca gtacaacagc acctaccgcg tggtgtctgt gctgaccgtg 660
ctgcaccagg attggctgaa cggcaaggag tacaagtgca aagtgagcaa caaggccctg 720
cctgccccta tcgagaaaac catcagcaag gccaagggcc agcctagaga gccccaggtc 780
tacaccctgc ctccctccag agatgagctg accaagaacc aggtgtccct gacctgtctg 840
gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag 900
aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg gacagcgatg gcagcttctt cctgtactcc 960
aagctgaccg tggacaagag cagatggcag cagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg 1020
cacgaggccc tgcacaatca ctacacccag aagagtctga gcctgtcccc tggcaagacc 1080
ggattagaca gtcccacagg tctcgattca cctactggct tagactctcc aaccggcctg 1140
gacagccccg acatccagat gacccagtct ccatcctccc tgtctgcatc tgtaggagac 1200
cgtgtcacca tcacttgccg ggcaagtcag tggattggtc ctgagttaaa gtggtaccag 1260
cagaaaccag ggaaagcccc taagctcctg atctatcatg gttccatttt gcaaagtggg 1320
gtcccatcac gtttcagtgg cagtggatct gggacagact tcactctcac catcagcagt 1380
ctgcaacctg aagattttgc tacgtactac tgtcaacagt atatgtatta tcctcatacg 1440
ttcggccaag ggaccaaggt ggaaatcaaa cgt                              1473
 
<210> 142
<211> 1491
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb N-((TGLDSP)x4 T113P突变Fc)
      & C-末端 K-044-085 dAb ((TGLDSP)x4)
 
<400> 142
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccca tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccca gcggcagcaa cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggacccc 300
cggaagctgg actactgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcagcac gggtctggac 360
agtccgactg gtttagattc acctacgggc ttggactccc caaccggctt agatagcccg 420
acccaccctt gccccccctg ccctgccccc gagctgctgg gaggccccag cgtgttcctg 480
ttccccccca agcctaagga caccctgatg atcagcagga cccccgaagt gacctgcgtg 540
gtggtggatg tgagccacga ggaccctgaa gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg 600
gaagtgcaca acgccaagac caagcccaga gaggagcagt acaacagcac ctaccgcgtg 660
gtgtctgtgc tgaccgtgct gcaccaggat tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaaa 720
gtgagcaaca aggccctgcc tgcccctatc gagaaaacca tcagcaaggc caagggccag 780
cctagagagc cccaggtcta caccctgcct ccctccagag atgagctgac caagaaccag 840
gtgtccctga cctgtctggt gaagggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 900
agcaacggcc agcccgagaa caactacaag accacccccc ctgtgctgga cagcgatggc 960
agcttcttcc tgtactccaa gctgaccgtg gacaagagca gatggcagca gggcaacgtg 1020
ttcagctgca gcgtgatgca cgaggccctg cacaatcact acacccagaa gagtctgagc 1080
ctgtcccctg gcaagaccgg attagacagt cccacaggtc tcgattcacc tactggctta 1140
gactctccaa ccggcctgga cagccccgac atccagatga cccagtctcc atcctccctg 1200
tctgcatctg taggagaccg tgtcaccatc acttgccggg caagtcagtg gattggtcct 1260
gagttaaagt ggtaccagca gaaaccaggg aaagccccta agctcctgat ctatcatggt 1320
tccattttgc aaagtggggt cccatcacgt ttcagtggca gtggatctgg gacagacttc 1380
actctcacca tcagcagtct gcaacctgaa gattttgcta cgtactactg tcaacagtat 1440
atgtattatc ctcatacgtt cggccaaggg accaaggtgg aaatcaaacg t          1491
 
<210> 143
<211> 1419
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb N-(VEPKSSDK接头) & C-末端
      ((TGLDSP)x4)，经过密码子优化
 
<400> 143
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcct ctgtgggaga cagggtgact 60
atcacctgca gggccagcca gtggattggc cccgagctga agtggtatca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctaccac ggcagcatcc tgcagtccgg cgtgcctagc 180
aggttctcag gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctca ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tatatgtact acccccacac cttcggccag 300
ggcaccaagg tggagatcaa gagggtggag cctaagtctt ctgacaagac ccacacctgc 360
cccccctgcc ctgccccaga gctgctggga ggacccagcg tgttcctgtt cccacccaag 420
cctaaggaca ccctgatgat cagcagaacc cccgaggtga cctgtgtggt ggtggatgtg 480
agccacgagg accctgaggt gaagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaat 540
gccaagacca agcccaggga ggagcagtac aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg 600
accgtgctgc accaggattg gctgaacggc aaggagtaca agtgtaaggt gtccaacaag 660
gccctgcctg cccctatcga gaaaaccatc agcaaggcca agggccagcc cagagagccc 720
caggtgtaca ccctgccccc tagcagagat gagctgacca agaaccaggt gtccctgacc 780
tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatggccag 840
cccgagaaca actacaagac caccccccct gtgctggaca gcgatggcag cttcttcctg 900
tacagcaagc tgaccgtgga caagagcaga tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgctcc 960
gtgatgcacg aggccctgca caatcactac acccagaaga gcctgagcct gtcccctggc 1020
aagaccggcc tcgacagccc cactggcctg gacagcccaa ccggactgga ttctcccacc 1080
ggcctggaca gccccgacat ccagatgacc cagagcccca gcagcctgag cgccagcgtg 1140
ggggacaggg tgactatcac ctgcagggcc tcccagtgga ttggccccga gctgaagtgg 1200
tatcagcaga agcccggcaa ggcccccaag ctgctgatct accacggcag catcctgcag 1260
agcggcgtgc cctcaaggtt ctcaggcagc ggcagcggca ccgacttcac cctgaccatc 1320
agcagcctgc agcccgagga cttcgccacc tactactgcc agcagtacat gtactacccc 1380
cacaccttcg gccagggcac caaggtggag atcaaaagg                        1419
 
<210> 144
<211> 1473
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb N-((TGLDSP)x3) & C-末端
      K-044-085 dAb ((TGLDSP)x4)，经过密码子优化
 
<400> 144
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccca tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccca gcggcagcaa cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggacccc 300
cggaagctgg actactgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcagcac gggtctggac 360
agtccgactg gtttagattc acctacgggc ttggactccc caacccacac ctgccccccc 420
tgccctgccc ctgagctgct gggcggaccc agcgtgttcc tgttcccccc caagcccaag 480
gacaccctga tgatcagccg gacccccgag gtgacctgcg tggtggtgga cgtgagccac 540
gaggaccctg aggtgaagtt caattggtac gtggacggcg tggaggtgca caacgccaag 600
accaagcccc gggaggaaca gtacaacagc acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg 660
ctgcaccagg actggctgaa cggcaaagaa tacaagtgca aggtgtccaa caaggccctg 720
cctgccccca tcgagaaaac catcagcaag gccaagggcc agcccaggga accccaggtg 780
tacaccctgc cccccagccg ggacgagctg accaagaacc aggtgtccct gacctgcctg 840
gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag 900
aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg gacagcgacg gcagcttctt cctgtacagc 960
aagctgaccg tggacaagag ccggtggcag cagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg 1020
cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag aagagcctga gcctgtcccc tggcaagacc 1080
ggcctcgaca gccccactgg cctggacagc ccaaccggac tggattctcc caccggcctg 1140
gacagccccg acatccagat gacccagagc cccagcagcc tgagcgccag cgtgggggac 1200
agggtgacta tcacctgcag ggcctcccag tggattggcc ccgagctgaa gtggtatcag 1260
cagaagcccg gcaaggcccc caagctgctg atctaccacg gcagcatcct gcagagcggc 1320
gtgccctcaa ggttctcagg cagcggcagc ggcaccgact tcaccctgac catcagcagc 1380
ctgcagcccg aggacttcgc cacctactac tgccagcagt acatgtacta cccccacacc 1440
ttcggccagg gcaccaaggt ggagatcaaa agg                              1473
 
<210> 145
<211> 1443
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb N-(VEPKSSDK接头) & C-末端
      K-044-085 dAb ((TGLDSP)x4)，经过密码子优化
 
<400> 145
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccta tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggtaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccaa gcggcagcaa cacctactac 180
gcagacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa cacactgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgcagtgt actactgcgc caaggaccca 300
cggaagctgg actactgggg tcagggcacc ctggtgaccg tgagcagcgt ggagcctaag 360
tcttctgaca agacccacac ctgcccaccc tgccctgccc cagagctgct gggaggaccc 420
agcgtgttcc tgttcccacc caagcctaag gacaccctga tgatcagcag aacccccgag 480
gtgacctgtg tggtggtgga tgtgagccac gaggaccctg aggtgaagtt caactggtac 540
gtggacggcg tggaggtgca caatgccaag accaagccca gggaggagca gtacaacagc 600
acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg attggctgaa cggcaaggag 660
tacaagtgta aggtgtccaa caaggccctg cctgccccta tcgagaaaac catcagcaag 720
gccaagggcc agcccagaga gccccaggtg tacaccctgc cccctagcag agatgagctg 780
accaagaacc aggtgtccct gacctgcctg gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc 840
gtggagtggg agagcaatgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 900
gacagcgatg gcagcttctt cctgtacagc aagctgaccg tggacaagag cagatggcag 960
cagggcaacg tgttcagctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaatca ctacacccag 1020
aagagcctga gcctgtcccc tggcaagacc ggcctcgaca gccccactgg cctggacagc 1080
ccaaccggac tggattctcc caccggcctg gacagccccg acatccagat gacccagagc 1140
cccagcagcc tgagcgccag cgtgggggac agggtgacta tcacctgcag ggcctcccag 1200
tggattggcc ccgagctgaa gtggtatcag cagaagcccg gcaaggcccc caagctgctg 1260
atctaccacg gcagcatcct gcagagcggc gtgccctcaa ggttctcagg cagcggcagc 1320
ggcaccgact tcaccctgac catcagcagc ctgcagcccg aggacttcgc cacctactac 1380
tgccagcagt acatgtacta cccccacacc ttcggccagg gcaccaaggt ggagatcaaa 1440
agg                                                               1443
 
<210> 146
<211> 1425
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 带有C-末端 K-044-085 dAb ((TGLDSP)x4)的DMS1576，经过密码子优化
 
<400> 146
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccca tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccca gcggcagcaa cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggacccc 300
cggaagctgg actactgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcagcgc tagcacccac 360
acctgccccc cctgccctgc ccctgagctg ctgggcggac ccagcgtgtt cctgttcccc 420
cccaagccca aggacaccct gatgatcagc cggacccccg aggtgacctg cgtggtggtg 480
gacgtgagcc acgaggaccc tgaggtgaag ttcaattggt acgtggacgg cgtggaggtg 540
cacaacgcca agaccaagcc ccgggaggaa cagtacaaca gcacctaccg ggtggtgtcc 600
gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg aacggcaaag aatacaagtg caaggtgtcc 660
aacaaggccc tgcctgcccc catcgagaaa accatcagca aggccaaggg ccagcccagg 720
gaaccccagg tgtacaccct gccccccagc cgggacgagc tgaccaagaa ccaggtgtcc 780
ctgacctgcc tggtgaaggg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaac 840
ggccagcccg agaacaacta caagaccacc ccccctgtgc tggacagcga cggcagcttc 900
ttcctgtaca gcaagctgac cgtggacaag agccggtggc agcagggcaa cgtgttcagc 960
tgcagcgtga tgcacgaggc cctgcacaac cactacaccc agaagagcct gagcctgtcc 1020
cctggcaaga ccggcctcga cagccccact ggcctggaca gcccaaccgg actggattct 1080
cccaccggcc tggacagccc cgacatccag atgacccaga gccccagcag cctgagcgcc 1140
agcgtggggg acagggtgac tatcacctgc agggcctccc agtggattgg ccccgagctg 1200
aagtggtatc agcagaagcc cggcaaggcc cccaagctgc tgatctacca cggcagcatc 1260
ctgcagagcg gcgtgccctc aaggttctca ggcagcggca gcggcaccga cttcaccctg 1320
accatcagca gcctgcagcc cgaggacttc gccacctact actgccagca gtacatgtac 1380
tacccccaca ccttcggcca gggcaccaag gtggagatca aaagg                 1425
 
<210> 147
<211> 1440
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb N-(VEPKSSDK接头) & C-末端
      K-044-085 dAb除去C-末端R ((TGLDSP)x4)，经过密码子优化
 
<400> 147
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccta tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggtaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccaa gcggcagcaa cacctactac 180
gcagacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa cacactgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgcagtgt actactgcgc caaggaccca 300
cggaagctgg actactgggg tcagggcacc ctggtgaccg tgagcagcgt ggagcctaag 360
tcttctgaca agacccacac ctgcccaccc tgccctgccc cagagctgct gggaggaccc 420
agcgtgttcc tgttcccacc caagcctaag gacaccctga tgatcagcag aacccccgag 480
gtgacctgtg tggtggtgga tgtgagccac gaggaccctg aggtgaagtt caactggtac 540
gtggacggcg tggaggtgca caatgccaag accaagccca gggaggagca gtacaacagc 600
acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg attggctgaa cggcaaggag 660
tacaagtgta aggtgtccaa caaggccctg cctgccccta tcgagaaaac catcagcaag 720
gccaagggcc agcccagaga gccccaggtg tacaccctgc cccctagcag agatgagctg 780
accaagaacc aggtgtccct gacctgcctg gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc 840
gtggagtggg agagcaatgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 900
gacagcgatg gcagcttctt cctgtacagc aagctgaccg tggacaagag cagatggcag 960
cagggcaacg tgttcagctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaatca ctacacccag 1020
aagagcctga gcctgtcccc tggcaagacc ggcctcgaca gccccactgg cctggacagc 1080
ccaaccggac tggattctcc caccggcctg gacagccccg acatccagat gacccagagc 1140
cccagcagcc tgagcgccag cgtgggggac agggtgacta tcacctgcag ggcctcccag 1200
tggattggcc ccgagctgaa gtggtatcag cagaagcccg gcaaggcccc caagctgctg 1260
atctaccacg gcagcatcct gcagagcggc gtgccctcaa ggttctcagg cagcggcagc 1320
ggcaccgact tcaccctgac catcagcagc ctgcagcccg aggacttcgc cacctactac 1380
tgccagcagt acatgtacta cccccacacc ttcggccagg gcaccaaggt ggagatcaaa 1440
 
 
<210> 148
<211> 1446
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb N-(VEPKSSDK接头) & C-末端
      K-044-085 dAb + A ((TGLDSP)x4)，经过密码子优化
 
<400> 148
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccta tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggtaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccaa gcggcagcaa cacctactac 180
gcagacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa cacactgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgcagtgt actactgcgc caaggaccca 300
cggaagctgg actactgggg tcagggcacc ctggtgaccg tgagcagcgt ggagcctaag 360
tcttctgaca agacccacac ctgcccaccc tgccctgccc cagagctgct gggaggaccc 420
agcgtgttcc tgttcccacc caagcctaag gacaccctga tgatcagcag aacccccgag 480
gtgacctgtg tggtggtgga tgtgagccac gaggaccctg aggtgaagtt caactggtac 540
gtggacggcg tggaggtgca caatgccaag accaagccca gggaggagca gtacaacagc 600
acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg attggctgaa cggcaaggag 660
tacaagtgta aggtgtccaa caaggccctg cctgccccta tcgagaaaac catcagcaag 720
gccaagggcc agcccagaga gccccaggtg tacaccctgc cccctagcag agatgagctg 780
accaagaacc aggtgtccct gacctgcctg gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc 840
gtggagtggg agagcaatgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 900
gacagcgatg gcagcttctt cctgtacagc aagctgaccg tggacaagag cagatggcag 960
cagggcaacg tgttcagctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaatca ctacacccag 1020
aagagcctga gcctgtcccc tggcaagacc ggcctcgaca gccccactgg cctggacagc 1080
ccaaccggac tggattctcc caccggcctg gacagccccg acatccagat gacccagagc 1140
cccagcagcc tgagcgccag cgtgggggac agggtgacta tcacctgcag ggcctcccag 1200
tggattggcc ccgagctgaa gtggtatcag cagaagcccg gcaaggcccc caagctgctg 1260
atctaccacg gcagcatcct gcagagcggc gtgccctcaa ggttctcagg cagcggcagc 1320
ggcaccgact tcaccctgac catcagcagc ctgcagcccg aggacttcgc cacctactac 1380
tgccagcagt acatgtacta cccccacacc ttcggccagg gcaccaaggt ggagatcaaa 1440
agggcc                                                            1446
 
<210> 149
<211> 1452
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb N-(VEPKSSDK接头) & C-末端
      K-044-085 dAb +AAA ((TGLDSP)x4)，经过密码子优化
 
<400> 149
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccta tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggtaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccaa gcggcagcaa cacctactac 180
gcagacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa cacactgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgcagtgt actactgcgc caaggaccca 300
cggaagctgg actactgggg tcagggcacc ctggtgaccg tgagcagcgt ggagcctaag 360
tcttctgaca agacccacac ctgcccaccc tgccctgccc cagagctgct gggaggaccc 420
agcgtgttcc tgttcccacc caagcctaag gacaccctga tgatcagcag aacccccgag 480
gtgacctgtg tggtggtgga tgtgagccac gaggaccctg aggtgaagtt caactggtac 540
gtggacggcg tggaggtgca caatgccaag accaagccca gggaggagca gtacaacagc 600
acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg attggctgaa cggcaaggag 660
tacaagtgta aggtgtccaa caaggccctg cctgccccta tcgagaaaac catcagcaag 720
gccaagggcc agcccagaga gccccaggtg tacaccctgc cccctagcag agatgagctg 780
accaagaacc aggtgtccct gacctgcctg gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc 840
gtggagtggg agagcaatgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 900
gacagcgatg gcagcttctt cctgtacagc aagctgaccg tggacaagag cagatggcag 960
cagggcaacg tgttcagctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaatca ctacacccag 1020
aagagcctga gcctgtcccc tggcaagacc ggcctcgaca gccccactgg cctggacagc 1080
ccaaccggac tggattctcc caccggcctg gacagccccg acatccagat gacccagagc 1140
cccagcagcc tgagcgccag cgtgggggac agggtgacta tcacctgcag ggcctcccag 1200
tggattggcc ccgagctgaa gtggtatcag cagaagcccg gcaaggcccc caagctgctg 1260
atctaccacg gcagcatcct gcagagcggc gtgccctcaa ggttctcagg cagcggcagc 1320
ggcaccgact tcaccctgac catcagcagc ctgcagcccg aggacttcgc cacctactac 1380
tgccagcagt acatgtacta cccccacacc ttcggccagg gcaccaaggt ggagatcaaa 1440
agggccgccg cc                                                     1452
 
<210> 150
<211> 1446
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb N-(VEPKSSDK接头) & C-末端
      K-044-085 dAb +T ((TGLDSP)x4)，经过密码子优化
 
<400> 150
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccta tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggtaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccaa gcggcagcaa cacctactac 180
gcagacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa cacactgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgcagtgt actactgcgc caaggaccca 300
cggaagctgg actactgggg tcagggcacc ctggtgaccg tgagcagcgt ggagcctaag 360
tcttctgaca agacccacac ctgcccaccc tgccctgccc cagagctgct gggaggaccc 420
agcgtgttcc tgttcccacc caagcctaag gacaccctga tgatcagcag aacccccgag 480
gtgacctgtg tggtggtgga tgtgagccac gaggaccctg aggtgaagtt caactggtac 540
gtggacggcg tggaggtgca caatgccaag accaagccca gggaggagca gtacaacagc 600
acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg attggctgaa cggcaaggag 660
tacaagtgta aggtgtccaa caaggccctg cctgccccta tcgagaaaac catcagcaag 720
gccaagggcc agcccagaga gccccaggtg tacaccctgc cccctagcag agatgagctg 780
accaagaacc aggtgtccct gacctgcctg gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc 840
gtggagtggg agagcaatgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 900
gacagcgatg gcagcttctt cctgtacagc aagctgaccg tggacaagag cagatggcag 960
cagggcaacg tgttcagctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaatca ctacacccag 1020
aagagcctga gcctgtcccc tggcaagacc ggcctcgaca gccccactgg cctggacagc 1080
ccaaccggac tggattctcc caccggcctg gacagccccg acatccagat gacccagagc 1140
cccagcagcc tgagcgccag cgtgggggac agggtgacta tcacctgcag ggcctcccag 1200
tggattggcc ccgagctgaa gtggtatcag cagaagcccg gcaaggcccc caagctgctg 1260
atctaccacg gcagcatcct gcagagcggc gtgccctcaa ggttctcagg cagcggcagc 1320
ggcaccgact tcaccctgac catcagcagc ctgcagcccg aggacttcgc cacctactac 1380
tgccagcagt acatgtacta cccccacacc ttcggccagg gcaccaaggt ggagatcaaa 1440
aggacc                                                            1446
 
<210> 151
<211> 1422
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 带有C-末端 K-044-085 dAb除去C-末端R ((TGLDSP)x4)的DMS1576，
      经过密码子优化
 
<400> 151
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccca tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccca gcggcagcaa cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggacccc 300
cggaagctgg actactgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcagcgc tagcacccac 360
acctgccccc cctgccctgc ccctgagctg ctgggcggac ccagcgtgtt cctgttcccc 420
cccaagccca aggacaccct gatgatcagc cggacccccg aggtgacctg cgtggtggtg 480
gacgtgagcc acgaggaccc tgaggtgaag ttcaattggt acgtggacgg cgtggaggtg 540
cacaacgcca agaccaagcc ccgggaggaa cagtacaaca gcacctaccg ggtggtgtcc 600
gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg aacggcaaag aatacaagtg caaggtgtcc 660
aacaaggccc tgcctgcccc catcgagaaa accatcagca aggccaaggg ccagcccagg 720
gaaccccagg tgtacaccct gccccccagc cgggacgagc tgaccaagaa ccaggtgtcc 780
ctgacctgcc tggtgaaggg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaac 840
ggccagcccg agaacaacta caagaccacc ccccctgtgc tggacagcga cggcagcttc 900
ttcctgtaca gcaagctgac cgtggacaag agccggtggc agcagggcaa cgtgttcagc 960
tgcagcgtga tgcacgaggc cctgcacaac cactacaccc agaagagcct gagcctgtcc 1020
cctggcaaga ccggcctcga cagccccact ggcctggaca gcccaaccgg actggattct 1080
cccaccggcc tggacagccc cgacatccag atgacccaga gccccagcag cctgagcgcc 1140
agcgtggggg acagggtgac tatcacctgc agggcctccc agtggattgg ccccgagctg 1200
aagtggtatc agcagaagcc cggcaaggcc cccaagctgc tgatctacca cggcagcatc 1260
ctgcagagcg gcgtgccctc aaggttctca ggcagcggca gcggcaccga cttcaccctg 1320
accatcagca gcctgcagcc cgaggacttc gccacctact actgccagca gtacatgtac 1380
tacccccaca ccttcggcca gggcaccaag gtggagatca aa                    1422
 
<210> 152
<211> 1428
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 带有C-末端 K-044-085 dAb +A ((TGLDSP)x4)的DMS1576，经过密码子优化
 
<400> 152
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccca tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccca gcggcagcaa cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggacccc 300
cggaagctgg actactgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcagcgc tagcacccac 360
acctgccccc cctgccctgc ccctgagctg ctgggcggac ccagcgtgtt cctgttcccc 420
cccaagccca aggacaccct gatgatcagc cggacccccg aggtgacctg cgtggtggtg 480
gacgtgagcc acgaggaccc tgaggtgaag ttcaattggt acgtggacgg cgtggaggtg 540
cacaacgcca agaccaagcc ccgggaggaa cagtacaaca gcacctaccg ggtggtgtcc 600
gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg aacggcaaag aatacaagtg caaggtgtcc 660
aacaaggccc tgcctgcccc catcgagaaa accatcagca aggccaaggg ccagcccagg 720
gaaccccagg tgtacaccct gccccccagc cgggacgagc tgaccaagaa ccaggtgtcc 780
ctgacctgcc tggtgaaggg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaac 840
ggccagcccg agaacaacta caagaccacc ccccctgtgc tggacagcga cggcagcttc 900
ttcctgtaca gcaagctgac cgtggacaag agccggtggc agcagggcaa cgtgttcagc 960
tgcagcgtga tgcacgaggc cctgcacaac cactacaccc agaagagcct gagcctgtcc 1020
cctggcaaga ccggcctcga cagccccact ggcctggaca gcccaaccgg actggattct 1080
cccaccggcc tggacagccc cgacatccag atgacccaga gccccagcag cctgagcgcc 1140
agcgtggggg acagggtgac tatcacctgc agggcctccc agtggattgg ccccgagctg 1200
aagtggtatc agcagaagcc cggcaaggcc cccaagctgc tgatctacca cggcagcatc 1260
ctgcagagcg gcgtgccctc aaggttctca ggcagcggca gcggcaccga cttcaccctg 1320
accatcagca gcctgcagcc cgaggacttc gccacctact actgccagca gtacatgtac 1380
tacccccaca ccttcggcca gggcaccaag gtggagatca aaagggcc              1428
 
<210> 153
<211> 1434
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 带有C-末端 K-044-085 dAb +AAA ((TGLDSP)x4)的DMS1576，
      经过密码子优化
 
<400> 153
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccca tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccca gcggcagcaa cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggacccc 300
cggaagctgg actactgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcagcgc tagcacccac 360
acctgccccc cctgccctgc ccctgagctg ctgggcggac ccagcgtgtt cctgttcccc 420
cccaagccca aggacaccct gatgatcagc cggacccccg aggtgacctg cgtggtggtg 480
gacgtgagcc acgaggaccc tgaggtgaag ttcaattggt acgtggacgg cgtggaggtg 540
cacaacgcca agaccaagcc ccgggaggaa cagtacaaca gcacctaccg ggtggtgtcc 600
gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg aacggcaaag aatacaagtg caaggtgtcc 660
aacaaggccc tgcctgcccc catcgagaaa accatcagca aggccaaggg ccagcccagg 720
gaaccccagg tgtacaccct gccccccagc cgggacgagc tgaccaagaa ccaggtgtcc 780
ctgacctgcc tggtgaaggg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaac 840
ggccagcccg agaacaacta caagaccacc ccccctgtgc tggacagcga cggcagcttc 900
ttcctgtaca gcaagctgac cgtggacaag agccggtggc agcagggcaa cgtgttcagc 960
tgcagcgtga tgcacgaggc cctgcacaac cactacaccc agaagagcct gagcctgtcc 1020
cctggcaaga ccggcctcga cagccccact ggcctggaca gcccaaccgg actggattct 1080
cccaccggcc tggacagccc cgacatccag atgacccaga gccccagcag cctgagcgcc 1140
agcgtggggg acagggtgac tatcacctgc agggcctccc agtggattgg ccccgagctg 1200
aagtggtatc agcagaagcc cggcaaggcc cccaagctgc tgatctacca cggcagcatc 1260
ctgcagagcg gcgtgccctc aaggttctca ggcagcggca gcggcaccga cttcaccctg 1320
accatcagca gcctgcagcc cgaggacttc gccacctact actgccagca gtacatgtac 1380
tacccccaca ccttcggcca gggcaccaag gtggagatca aaagggccgc cgcc       1434
 
<210> 154
<211> 1428
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 带有C-末端 K-044-085 dAb +T ((TGLDSP)x4)的DMS1576，经过密码子优化
 
<400> 154
gaggtgcagc tgctggtgtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcaag gcctacccca tgatgtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggaatg ggtgtccgag atcagcccca gcggcagcaa cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caaggacccc 300
cggaagctgg actactgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcagcgc tagcacccac 360
acctgccccc cctgccctgc ccctgagctg ctgggcggac ccagcgtgtt cctgttcccc 420
cccaagccca aggacaccct gatgatcagc cggacccccg aggtgacctg cgtggtggtg 480
gacgtgagcc acgaggaccc tgaggtgaag ttcaattggt acgtggacgg cgtggaggtg 540
cacaacgcca agaccaagcc ccgggaggaa cagtacaaca gcacctaccg ggtggtgtcc 600
gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg aacggcaaag aatacaagtg caaggtgtcc 660
aacaaggccc tgcctgcccc catcgagaaa accatcagca aggccaaggg ccagcccagg 720
gaaccccagg tgtacaccct gccccccagc cgggacgagc tgaccaagaa ccaggtgtcc 780
ctgacctgcc tggtgaaggg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaac 840
ggccagcccg agaacaacta caagaccacc ccccctgtgc tggacagcga cggcagcttc 900
ttcctgtaca gcaagctgac cgtggacaag agccggtggc agcagggcaa cgtgttcagc 960
tgcagcgtga tgcacgaggc cctgcacaac cactacaccc agaagagcct gagcctgtcc 1020
cctggcaaga ccggcctcga cagccccact ggcctggaca gcccaaccgg actggattct 1080
cccaccggcc tggacagccc cgacatccag atgacccaga gccccagcag cctgagcgcc 1140
agcgtggggg acagggtgac tatcacctgc agggcctccc agtggattgg ccccgagctg 1200
aagtggtatc agcagaagcc cggcaaggcc cccaagctgc tgatctacca cggcagcatc 1260
ctgcagagcg gcgtgccctc aaggttctca ggcagcggca gcggcaccga cttcaccctg 1320
accatcagca gcctgcagcc cgaggacttc gccacctact actgccagca gtacatgtac 1380
tacccccaca ccttcggcca gggcaccaag gtggagatca aaaggacc              1428
 
<210> 155
<211> 359
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb ((TGLDSP)x3)的N-末端Fc融合体 
 
<400> 155
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro
        115                 120                 125            
Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
    130                 135                 140                
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
145                 150                 155                 160
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
                165                 170                 175    
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
            180                 185                 190        
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
        195                 200                 205            
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
    210                 215                 220                
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
225                 230                 235                 240
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
                245                 250                 255    
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asn Glu Leu Thr Lys
            260                 265                 270        
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
        275                 280                 285            
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
    290                 295                 300                
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
305                 310                 315                 320
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
                325                 330                 335    
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
            340                 345                 350        
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
        355                
 
 
<210> 156
<211> 365
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb ((TGLDSP)x4)的N-末端Fc融合体 
 
<400> 156
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro
        115                 120                 125            
Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr His Thr Cys
    130                 135                 140                
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
145                 150                 155                 160
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
                165                 170                 175    
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
            180                 185                 190        
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
        195                 200                 205            
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
    210                 215                 220                
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
225                 230                 235                 240
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
                245                 250                 255    
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
            260                 265                 270        
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
        275                 280                 285            
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
    290                 295                 300                
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
305                 310                 315                 320
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
                325                 330                 335    
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
            340                 345                 350        
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
        355                 360                 365
 
 
<210> 157
<211> 359
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb ((TGLDSP)x3 T113P突变Fc)的N-末端Fc融合体 
 
<400> 157
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro
        115                 120                 125            
Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr His Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
    130                 135                 140                
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
145                 150                 155                 160
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
                165                 170                 175    
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
            180                 185                 190        
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
        195                 200                 205            
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
    210                 215                 220                
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
225                 230                 235                 240
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
                245                 250                 255    
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
            260                 265                 270        
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
        275                 280                 285            
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
    290                 295                 300                
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
305                 310                 315                 320
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
                325                 330                 335    
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
            340                 345                 350        
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
        355                
 
 
<210> 158
<211> 365
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb ((TGLDSP)x4 T113P突变Fc)的N-末端Fc融合体 
 
<400> 158
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro
        115                 120                 125            
Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr His Pro Cys
    130                 135                 140                
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
145                 150                 155                 160
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
                165                 170                 175    
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
            180                 185                 190        
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
        195                 200                 205            
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
    210                 215                 220                
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
225                 230                 235                 240
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
                245                 250                 255    
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
            260                 265                 270        
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
        275                 280                 285            
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
    290                 295                 300                
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
305                 310                 315                 320
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
                325                 330                 335    
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
            340                 345                 350        
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
        355                 360                 365
 
 
<210> 159
<211> 349
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb (IgG1 铰链)的N-末端Fc融合体 
 
<400> 159
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Val Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
        115                 120                 125            
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
    130                 135                 140                
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
145                 150                 155                 160
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
                165                 170                 175    
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
            180                 185                 190        
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
        195                 200                 205            
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
    210                 215                 220                
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
225                 230                 235                 240
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
                245                 250                 255    
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
            260                 265                 270        
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
        275                 280                 285            
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
    290                 295                 300                
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
305                 310                 315                 320
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
                325                 330                 335    
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
            340                 345                
 
 
<210> 160
<211> 350
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 15-26-597 dAb (IgG3 铰链)的N-末端Fc融合体 
 
<400> 160
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr
        115                 120                 125            
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
    130                 135                 140                
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
145                 150                 155                 160
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
                165                 170                 175    
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
            180                 185                 190        
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
        195                 200                 205            
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
    210                 215                 220                
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
225                 230                 235                 240
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
                245                 250                 255    
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
            260                 265                 270        
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
        275                 280                 285            
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
    290                 295                 300                
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
305                 310                 315                 320
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
                325                 330                 335    
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
            340                 345                 350
 
 
<210> 161
<211> 347
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 15-26-597 dAb (TVAAPS)的N-末端Fc融合体 
 
<400> 161
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Thr His Thr Cys Pro Pro
        115                 120                 125            
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
    130                 135                 140                
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
145                 150                 155                 160
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
                165                 170                 175    
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
            180                 185                 190        
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
        195                 200                 205            
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
    210                 215                 220                
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
225                 230                 235                 240
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
                245                 250                 255    
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
            260                 265                 270        
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
        275                 280                 285            
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
    290                 295                 300                
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
305                 310                 315                 320
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
                325                 330                 335    
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
            340                 345        
 
 
<210> 162
<211> 357
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb ((TGLDSP)x4)的C-末端Fc融合体 
 
<400> 162
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
 1               5                  10                  15     
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
            20                  25                  30         
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
        35                  40                  45             
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
    50                  55                  60                 
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65                  70                  75                  80 
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
                85                  90                  95     
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
            100                 105                 110        
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
        115                 120                 125            
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
    130                 135                 140                
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145                 150                 155                 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
                165                 170                 175    
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
            180                 185                 190        
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
        195                 200                 205            
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
    210                 215                 220                
Lys Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu
225                 230                 235                 240
Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser
                245                 250                 255    
Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
            260                 265                 270        
Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys
        275                 280                 285            
Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln
    290                 295                 300                
Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
305                 310                 315                 320
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr
                325                 330                 335    
Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
            340                 345                 350        
Val Glu Ile Lys Arg
        355        
 
 
<210> 163
<211> 373
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb (螺旋状接头)的C-末端Fc融合体  
 
<400> 163
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
 1               5                  10                  15     
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
            20                  25                  30         
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
        35                  40                  45             
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
    50                  55                  60                  
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65                  70                  75                  80 
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
                85                  90                  95     
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
            100                 105                 110        
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
        115                 120                 125            
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
    130                 135                 140                
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145                 150                 155                 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
                165                 170                 175    
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
            180                 185                 190        
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
        195                 200                 205            
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
    210                 215                 220                
Lys Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala
225                 230                 235                 240
Lys Glu Leu Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
                245                 250                 255    
Glu Ala Ala Ala Lys Glu Leu Ala Ala Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser
            260                 265                 270        
Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
        275                 280                 285            
Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys
    290                 295                 300                
Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln
305                 310                 315                 320
Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                325                 330                 335    
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr
            340                 345                 350        
Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
        355                 360                 365            
Val Glu Ile Lys Arg
    370            
 
 
<210> 164
<211> 341
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb (IgG1 铰链)的N-末端Fc融合体 
 
<400> 164
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Val Glu Pro Lys
            100                 105                 110        
Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
        115                 120                 125            
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
    130                 135                 140                
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
145                 150                 155                 160
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
                165                 170                 175    
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
            180                 185                 190        
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
        195                 200                 205            
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
    210                 215                 220                
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
225                 230                 235                 240
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
                245                 250                 255    
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
            260                 265                 270        
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
        275                 280                 285            
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
    290                 295                 300                
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
305                 310                 315                 320
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
                325                 330                 335    
Leu Ser Pro Gly Lys
            340    
 
 
<210> 165
<211> 335
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb (ASTHP 接头)的N-末端Fc融合体 
 
<400> 165
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ser Thr His
            100                 105                 110        
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
        115                 120                 125            
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
    130                 135                 140                
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
145                 150                 155                 160
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
                165                 170                 175    
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
            180                 185                 190        
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
        195                 200                 205            
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
    210                 215                 220                
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
225                 230                 235                 240
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
                245                 250                 255    
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
            260                 265                 270        
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
        275                 280                 285            
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
    290                 295                 300                
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
305                 310                 315                 320
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
                325                 330                 335
 
 
<210> 166
<211> 357
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb ((TGLDSP)x4)的N-末端Fc融合体 
 
<400> 166
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Gly Leu Asp
            100                 105                 110        
Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly
        115                 120                 125            
Leu Asp Ser Pro Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
    130                 135                 140                
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
145                 150                 155                 160
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
                165                 170                 175    
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
            180                 185                 190        
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
        195                 200                 205            
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
    210                 215                 220                
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
                245                 250                 255    
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
            260                 265                 270        
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
        275                 280                 285            
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
    290                 295                 300                
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
305                 310                 315                 320
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
                325                 330                 335    
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
            340                 345                 350        
Leu Ser Pro Gly Lys
        355        
 
 
<210> 167
<211> 339
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb (TVAAPS)的N-末端Fc融合体 
 
<400> 167
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30          
Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110        
Pro Ser Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
        115                 120                 125            
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
    130                 135                 140                
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
145                 150                 155                 160
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
                165                 170                 175    
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
            180                 185                 190        
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
        195                 200                 205            
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
    210                 215                 220                
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
225                 230                 235                 240
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
                245                 250                 255    
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
            260                 265                 270        
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
        275                 280                 285            
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
    290                 295                 300                
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
305                 310                 315                 320
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
                325                 330                 335    
Pro Gly Lys
           
 
 
<210> 168
<211> 351
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb ((TGLDSP)x3)的N-末端Fc融合体 
 
<400> 168
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Gly Leu Asp
            100                 105                 110        
Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr His
        115                 120                 125            
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
    130                 135                 140                
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
145                 150                 155                 160
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
                165                 170                 175    
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
            180                 185                 190        
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
        195                 200                 205            
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
    210                 215                 220                
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
225                 230                 235                 240
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
                245                 250                 255    
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
            260                 265                 270        
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
        275                 280                 285            
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
    290                 295                 300                
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
305                 310                 315                 320
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
                325                 330                 335    
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
            340                 345                 350    
 
 
<210> 169
<211> 342
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb (IgG3 铰链)的N-末端Fc融合体 
 
<400> 169
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Glu Leu Lys Thr
            100                 105                 110        
Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
        115                 120                 125            
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
    130                 135                 140                
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
145                 150                 155                 160
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
                165                 170                 175    
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
            180                 185                 190        
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
        195                 200                 205            
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
    210                 215                 220                
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
225                 230                 235                 240
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
                245                 250                 255    
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
            260                 265                 270        
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
        275                 280                 285            
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
    290                 295                 300                
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
305                 310                 315                 320
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
                325                 330                 335    
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
            340        
 
 
<210> 170
<211> 335
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085-AS-Fc (H112A)的N-末端Fc融合体 
 
<400> 170
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ser Thr Ala
            100                 105                 110        
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
        115                 120                 125            
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
    130                 135                 140                
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
145                 150                 155                 160
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
                165                 170                 175    
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
            180                 185                 190        
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
        195                 200                 205            
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
    210                 215                 220                
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
225                 230                 235                 240
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
                245                 250                 255    
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
            260                 265                 270        
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
        275                 280                 285            
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
    290                 295                 300                
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
305                 310                 315                 320
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
                325                 330                 335
 
 
<210> 171
<211> 351
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb ((TGLDSP)x3)的C-末端Fc融合体 
 
<400> 171
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
 1               5                  10                  15     
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
            20                  25                  30         
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
        35                  40                  45             
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
    50                  55                  60                 
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65                  70                  75                  80 
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
                85                  90                  95     
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
            100                 105                 110        
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
        115                 120                 125            
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
    130                 135                 140                
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145                 150                 155                 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
                165                 170                 175    
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
            180                 185                 190        
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
        195                 200                 205            
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
    210                 215                 220                
Lys Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu
225                 230                 235                 240
Asp Ser Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
                245                 250                 255    
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile
            260                 265                 270        
Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
        275                 280                 285            
Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg
    290                 295                 300                
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
305                 310                 315                 320
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr
                325                 330                 335    
Tyr Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
            340                 345                 350    
 
 
<210> 172
<211> 352
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb (白蛋白结构域1)的C-末端Fc融合体 
 
<400> 172
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
 1               5                  10                  15     
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
            20                  25                  30         
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
        35                  40                  45             
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
    50                  55                  60                 
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65                  70                  75                  80 
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
                85                  90                  95     
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
            100                 105                 110        
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
        115                 120                 125            
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
    130                 135                 140                
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145                 150                 155                 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
                165                 170                 175    
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
            180                 185                 190        
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
        195                 200                 205            
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
    210                 215                 220                
Lys His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu
225                 230                 235                 240
Val Asp Val Met Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
                245                 250                 255    
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp
            260                 265                 270        
Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
        275                 280                 285            
Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
    290                 295                 300                
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
305                 310                 315                 320
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met
                325                 330                 335    
Tyr Tyr Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
            340                 345                 350        
 
 
<210> 173
<211> 354
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb (白蛋白结构域2)的C-末端Fc融合体 
 
<400> 173
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
 1               5                  10                  15     
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
            20                  25                  30         
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
        35                  40                  45             
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
    50                  55                  60                 
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65                  70                  75                  80 
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
                85                  90                  95     
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
            100                 105                 110        
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
        115                 120                 125            
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
    130                 135                 140                
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145                 150                 155                 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
                165                 170                 175    
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
            180                 185                 190        
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
        195                 200                 205            
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
    210                 215                 220                
Lys Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser Leu Ala Ala Asp
225                 230                 235                 240
Phe Val Glu Ser Lys Asp Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
                245                 250                 255    
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser
            260                 265                 270        
Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
        275                 280                 285            
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val
    290                 295                 300                
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
305                 310                 315                 320
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln
                325                 330                 335    
Tyr Met Tyr Tyr Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
            340                 345                 350        
Lys Arg
       
 
 
<210> 174
<211> 349
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb (白蛋白结构域3-TFHAD)的C-末端Fc融合体 
 
<400> 174
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
 1               5                  10                  15     
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
            20                  25                  30         
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
        35                  40                  45             
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
    50                  55                  60                 
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65                  70                  75                  80 
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
                85                  90                  95     
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
            100                 105                 110        
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
        115                 120                 125            
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
    130                 135                 140                
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145                 150                 155                 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
                165                 170                 175    
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
            180                 185                 190        
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
        195                 200                 205            
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
    210                 215                 220                
Lys Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr
225                 230                 235                 240
Phe Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
                245                 250                 255    
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro
            260                 265                 270        
Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
        275                 280                 285            
Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
    290                 295                 300                
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
305                 310                 315                 320
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro
                325                 330                 335    
His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
            340                 345                
 
 
<210> 175
<211> 348
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb ((Gly4Ser)x3)的C-末端Fc融合体 
 
<400> 175
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
 1               5                  10                  15     
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
            20                  25                  30         
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
        35                  40                  45             
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
    50                  55                  60                 
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65                  70                  75                  80 
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
                85                  90                  95     
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
            100                 105                 110        
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
        115                 120                 125            
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
    130                 135                 140                
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145                 150                 155                 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
                165                 170                 175    
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
            180                 185                 190        
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
        195                 200                 205            
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
    210                 215                 220                
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
225                 230                 235                 240
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
                245                 250                 255    
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            260                 265                 270        
Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        275                 280                 285            
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    290                 295                 300                
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
305                 310                 315                 320
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His
                325                 330                 335    
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
            340                 345            
 
 
<210> 176
<211> 353
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb ((Gly4Ser)x4)的C-末端Fc融合体 
 
<400> 176
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
 1               5                  10                  15     
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
            20                  25                  30         
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
        35                  40                  45             
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
    50                  55                  60                 
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
65                  70                  75                  80 
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
                85                  90                  95     
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
            100                 105                 110        
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
        115                 120                 125            
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
    130                 135                 140                
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145                 150                 155                 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
                165                 170                 175    
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
            180                 185                 190        
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
        195                 200                 205            
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
    210                 215                 220                
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
225                 230                 235                 240
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
                245                 250                 255    
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
            260                 265                 270        
Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
        275                 280                 285            
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro
    290                 295                 300                
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
305                 310                 315                 320
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
                325                 330                 335    
Met Tyr Tyr Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            340                 345                 350        
Arg
   
 
 
<210> 177
<211> 473
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb N-(VEPKSSDK接头) & C-末端
      ((TGLDSP)x4)
 
<400> 177
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Val Glu Pro Lys
            100                 105                 110        
Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
        115                 120                 125            
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
    130                 135                 140                
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
145                 150                 155                 160
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
                165                 170                 175    
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
            180                 185                 190        
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
        195                 200                 205            
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
    210                 215                 220                
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
225                 230                 235                 240
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
                245                 250                 255    
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
            260                 265                 270        
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
        275                 280                 285            
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
    290                 295                 300                
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
305                 310                 315                 320
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
                325                 330                 335    
Leu Ser Pro Gly Lys Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser
            340                 345                 350        
Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Asp Ile Gln
        355                 360                 365            
Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val
    370                 375                 380                
Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp
385                 390                 395                 400
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly
                405                 410                 415    
Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
            420                 425                 430        
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe
        435                 440                 445            
Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His Thr Phe Gly
    450                 455                 460                
Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
465                 470            
 
 
<210> 178
<211> 467
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> K-044-085 dAb N-(ASTHP接头) & C-末端
      ((TGLDSP)x4)
 
<400> 178
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15     
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu
            20                  25                  30         
Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His
                85                  90                  95     
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ser Thr His
            100                 105                 110        
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
        115                 120                 125            
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
    130                 135                 140                
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
145                 150                 155                 160
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
                165                 170                 175    
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
            180                 185                 190        
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
        195                 200                 205            
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
    210                 215                 220                
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
225                 230                 235                 240
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
                245                 250                 255    
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
            260                 265                 270        
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
        275                 280                 285            
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
    290                 295                 300                
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
305                 310                 315                 320
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr
                325                 330                 335    
Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser
            340                 345                 350        
Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser
        355                 360                 365            
Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala
    370                 375                 380                
Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
385                 390                 395                 400
Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly
                405                 410                 415    
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
            420                 425                 430        
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
        435                 440                 445            
Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu
    450                 455                 460                
Ile Lys Arg
465        
 
 
<210> 179
<211> 491
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb N-((TGLDSP)x3) & C-末端
      K-044-085 dAb ((TGLDSP)x4)
 
<400> 179
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro
        115                 120                 125            
Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
    130                 135                 140                
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
145                 150                 155                 160
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
                165                 170                 175    
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
            180                 185                 190        
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
        195                 200                 205            
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
    210                 215                 220                
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
225                 230                 235                 240
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
                245                 250                 255    
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
            260                 265                 270        
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
        275                 280                 285            
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
    290                 295                 300                
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
305                 310                 315                 320
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
                325                 330                 335    
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
            340                 345                 350        
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu
        355                 360                 365            
Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Asp
    370                 375                 380                
Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
385                 390                 395                 400
Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu
                405                 410                 415    
Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
            420                 425                 430        
His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
        435                 440                 445            
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
    450                 455                 460                
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His Thr
465                 470                 475                 480
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
                485                 490    
 
 
<210> 180
<211> 481
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb N-(VEPKSSDK接头) & C-末端
      K-044-085 dAb ((TGLDSP)x4)
 
<400> 180
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Val Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
        115                 120                 125            
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
    130                 135                 140                
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
145                 150                 155                 160
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
                165                 170                 175    
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
            180                 185                 190        
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
        195                 200                 205            
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
    210                 215                 220                
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
225                 230                 235                 240
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
                245                 250                 255    
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
            260                 265                 270        
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
        275                 280                 285            
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
    290                 295                 300                
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
305                 310                 315                 320
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
                325                 330                 335    
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr Gly Leu
            340                 345                 350        
Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr
        355                 360                 365            
Gly Leu Asp Ser Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
    370                 375                 380                
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
385                 390                 395                 400
Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
                405                 410                 415    
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro
            420                 425                 430        
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
        435                 440                 445            
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
    450                 455                 460                
Met Tyr Tyr Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
465                 470                 475                 480
Arg
   
 
 
<210> 181
<211> 475
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 带有C-末端 K-044-085 dAb ((TGLDSP)x4)的DMS1576
 
<400> 181
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
        115                 120                 125            
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
    130                 135                 140                
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
145                 150                 155                 160
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
                165                 170                 175    
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
            180                 185                 190        
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
        195                 200                 205            
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
    210                 215                 220                
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
225                 230                 235                 240
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
                245                 250                 255    
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
            260                 265                 270        
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
        275                 280                 285            
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
    290                 295                 300                
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
305                 310                 315                 320
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
                325                 330                 335    
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu
            340                 345                 350        
Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Asp
        355                 360                 365            
Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
    370                 375                 380                
Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu
385                 390                 395                 400
Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
                405                 410                 415    
His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
            420                 425                 430        
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
        435                 440                 445            
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His Thr
    450                 455                 460                
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
465                 470                 475
 
 
<210> 182
<211> 497
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb N-((TGLDSP)x4) & C-末端
      K-044-085 dAb ((TGLDSP)x4)
 
<400> 182
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro
        115                 120                 125            
Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr His Thr Cys
    130                 135                 140                
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
145                 150                 155                 160
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
                165                 170                 175    
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
            180                 185                 190        
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
        195                 200                 205            
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
    210                 215                 220                
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
225                 230                 235                 240
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
                245                 250                 255    
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
            260                 265                 270        
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
        275                 280                 285            
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
    290                 295                 300                
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
305                 310                 315                 320
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
                325                 330                 335    
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
            340                 345                 350        
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr Gly Leu
        355                 360                 365            
Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr
    370                 375                 380                
Gly Leu Asp Ser Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
385                 390                 395                 400
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
                405                 410                 415    
Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
            420                 425                 430        
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro
        435                 440                 445            
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
    450                 455                 460                 
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
465                 470                 475                 480
Met Tyr Tyr Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
                485                 490                 495     
Arg
   
 
 
<210> 183
<211> 491
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb N-((TGLDSP)x3 T113P突变Fc)
      & C-末端 K-044-085 dAb ((TGLDSP)x4)
 
<400> 183
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro
        115                 120                 125            
Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr His Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
    130                 135                 140                
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
145                 150                 155                 160
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
                165                 170                 175    
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
            180                 185                 190        
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
        195                 200                 205             
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
    210                 215                 220                
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
225                 230                 235                 240
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
                245                 250                 255    
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
            260                 265                 270         
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
        275                 280                 285            
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
    290                 295                 300                 
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
305                 310                 315                 320
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
                325                 330                 335    
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
            340                 345                 350        
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu
        355                 360                 365             
Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Asp
    370                 375                 380                
Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
385                 390                 395                 400
Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu
                405                 410                 415    
Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
            420                 425                 430        
His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
        435                 440                 445            
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
    450                 455                 460                
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His Thr
465                 470                 475                 480
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
                485                 490    
 
 
<210> 184
<211> 497
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb N-((TGLDSP)x4 T113P突变Fc)
      & C-末端 K-044-085 dAb ((TGLDSP)x4)
 
<400> 184
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro
        115                 120                 125            
Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr His Pro Cys
    130                 135                 140                
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
145                 150                 155                 160
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
                165                 170                 175    
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
            180                 185                 190        
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
        195                 200                 205             
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
    210                 215                 220                
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
225                 230                 235                 240
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
                245                 250                 255    
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
            260                 265                 270         
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
        275                 280                 285            
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
    290                 295                 300                 
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
305                 310                 315                 320
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
                325                 330                 335    
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
            340                 345                 350        
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr Gly Leu
        355                 360                 365             
Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr
    370                 375                 380                
Gly Leu Asp Ser Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
385                 390                 395                 400
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
                405                 410                 415    
Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
            420                 425                 430        
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro
        435                 440                 445            
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
    450                 455                 460                
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
465                 470                 475                 480
Met Tyr Tyr Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
                485                 490                 495    
Arg
   
 
 
<210> 185
<211> 480
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb N-(VEPKSSDK接头) & C-末端
      K-044-085 dAb除去C-末端R ((TGLDSP)x4)，经过密码子优化
 
<400> 185
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110         
Thr Val Ser Ser Val Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
        115                 120                 125            
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
    130                 135                 140                 
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
145                 150                 155                 160
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
                165                 170                 175    
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
            180                 185                 190        
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
        195                 200                 205             
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
    210                 215                 220                
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
225                 230                 235                 240
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
                245                 250                 255    
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
            260                 265                 270        
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
        275                 280                 285            
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
    290                 295                 300                 
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
305                 310                 315                 320
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
                325                 330                 335    
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr Gly Leu
            340                 345                 350        
Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr
        355                 360                 365            
Gly Leu Asp Ser Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
    370                 375                 380                
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
385                 390                 395                 400
Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
                405                 410                 415    
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro
            420                 425                 430        
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
        435                 440                 445            
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
    450                 455                 460                
Met Tyr Tyr Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
465                 470                 475                 480
 
 
<210> 186
<211> 482
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb N-(VEPKSSDK接头) & C-末端
      K-044-085 dAb + A ((TGLDSP)x4)，经过密码子优化
 
<400> 186
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Val Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
        115                 120                 125            
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
    130                 135                 140                
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
145                 150                 155                 160
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
                165                 170                 175    
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
            180                 185                 190        
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
        195                 200                 205            
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
    210                 215                 220                
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
225                 230                 235                 240
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
                245                 250                 255    
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
            260                 265                 270        
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
        275                 280                 285            
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
    290                 295                 300                
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
305                 310                 315                 320
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
                325                 330                 335    
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr Gly Leu
            340                 345                 350        
Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr
        355                 360                 365            
Gly Leu Asp Ser Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
    370                 375                 380                
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
385                 390                 395                 400
Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
                405                 410                 415    
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro
            420                 425                 430        
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
        435                 440                 445            
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
    450                 455                 460                
Met Tyr Tyr Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
465                 470                 475                 480
Arg Ala
       
 
 
<210> 187
<211> 484
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb N-(VEPKSSDK接头) & C-末端
      K-044-085 dAb +AAA ((TGLDSP)x4)，经过密码子优化
 
<400> 187
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Val Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
        115                 120                 125            
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
    130                 135                 140                
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
145                 150                 155                 160
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
                165                 170                 175    
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
            180                 185                 190         
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
        195                 200                 205            
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
    210                 215                 220                 
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
225                 230                 235                 240
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
                245                 250                 255    
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
            260                 265                 270        
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
        275                 280                 285             
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
    290                 295                 300                
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
305                 310                 315                 320
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
                325                 330                 335    
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr Gly Leu
            340                 345                 350        
Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr
        355                 360                 365            
Gly Leu Asp Ser Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
    370                 375                 380                 
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
385                 390                 395                 400
Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
                405                 410                 415    
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro
            420                 425                 430        
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
        435                 440                 445            
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
    450                 455                 460                
Met Tyr Tyr Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
465                 470                 475                 480
Arg Ala Ala Ala
               
 
 
<210> 188
<211> 482
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> DOM15-26-597 dAb N-(VEPKSSDK接头) & C-末端
      K-044-085 dAb +T ((TGLDSP)x4)，经过密码子优化
 
<400> 188
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Val Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
        115                 120                 125            
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
    130                 135                 140                
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
145                 150                 155                 160
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
                165                 170                 175     
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
            180                 185                 190        
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
        195                 200                 205             
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
    210                 215                 220                
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
225                 230                 235                 240
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
                245                 250                 255    
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
            260                 265                 270         
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
        275                 280                 285            
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
    290                 295                 300                 
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
305                 310                 315                 320
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
                325                 330                 335    
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr Gly Leu
            340                 345                 350        
Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr
        355                 360                 365            
Gly Leu Asp Ser Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
    370                 375                 380                
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
385                 390                 395                 400
Trp Ile Gly Pro Glu Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
                405                 410                 415    
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro
            420                 425                 430        
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
        435                 440                 445            
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
    450                 455                 460                
Met Tyr Tyr Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
465                 470                 475                 480
Arg Thr
       
 
 
<210> 189
<211> 474
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 带有C-末端 K-044-085 dAb除去C-末端R ((TGLDSP)x4)的DMS1576，
      经过密码子优化
 
<400> 189
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
        115                 120                 125            
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
    130                 135                 140                
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
145                 150                 155                 160
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
                165                 170                 175    
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
            180                 185                 190        
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
        195                 200                 205            
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
    210                 215                 220                
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
225                 230                 235                 240
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
                245                 250                 255    
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
            260                 265                 270        
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
        275                 280                 285            
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
    290                 295                 300                
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
305                 310                 315                 320
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
                325                 330                 335    
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu
            340                 345                 350        
Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Asp
        355                 360                 365            
Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
    370                 375                 380                
Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu
385                 390                 395                 400
Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
                405                 410                 415    
His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
            420                 425                 430        
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
        435                 440                 445            
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His Thr
    450                 455                 460                
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
465                 470                
 
 
<210> 190
<211> 476
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 带有C-末端 K-044-085 dAb +A ((TGLDSP)x4)的DMS1576，
      经过密码子优化
 
<400> 190
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
        115                 120                 125            
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
    130                 135                 140                
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
145                 150                 155                 160
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
                165                 170                 175    
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
            180                 185                 190        
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
        195                 200                 205            
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
    210                 215                 220                
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
225                 230                 235                 240
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
                245                 250                 255    
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
            260                 265                 270        
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
        275                 280                 285            
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
    290                 295                 300                
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
305                 310                 315                 320
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
                325                 330                 335    
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu
            340                 345                 350        
Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Asp
        355                 360                 365            
Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
    370                 375                 380                
Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu
385                 390                 395                 400
Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
                405                 410                 415    
His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
            420                 425                 430        
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
        435                 440                 445            
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His Thr
    450                 455                 460                
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala
465                 470                 475    
 
 
<210> 191
<211> 478
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 带有C-末端 K-044-085 dAb +AAA ((TGLDSP)x4)的DMS1576，
      经过密码子优化
 
<400> 191
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
        115                 120                 125            
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
    130                 135                 140                
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
145                 150                 155                 160
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
                165                 170                 175    
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
            180                 185                 190        
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
        195                 200                 205            
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
    210                 215                 220                
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
225                 230                 235                 240
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
                245                 250                 255    
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
            260                 265                 270        
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
        275                 280                 285            
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
    290                 295                 300                
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
305                 310                 315                 320
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
                325                 330                 335    
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu
            340                 345                 350        
Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Asp
        355                 360                 365            
Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
    370                 375                 380                
Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu
385                 390                 395                 400
Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
                405                 410                 415    
His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
            420                 425                 430        
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
        435                 440                 445            
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His Thr
    450                 455                 460                
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala
465                 470                 475            
 
 
<210> 192
<211> 476
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 带有C-末端 K-044-085 dAb +T ((TGLDSP)x4)的DMS1576，
      经过密码子优化
 
<400> 192
Glu Val Gln Leu Leu Val Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15     
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ala Tyr
            20                  25                  30         
Pro Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
Ser Glu Ile Ser Pro Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
Ala Lys Asp Pro Arg Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110        
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
        115                 120                 125            
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
    130                 135                 140                
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
145                 150                 155                 160
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
                165                 170                 175    
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
            180                 185                 190        
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
        195                 200                 205            
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
    210                 215                 220                
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
225                 230                 235                 240
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
                245                 250                 255    
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
            260                 265                 270        
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
        275                 280                 285            
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
    290                 295                 300                
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
305                 310                 315                 320
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
                325                 330                 335    
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu
            340                 345                 350        
Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Leu Asp Ser Pro Asp
        355                 360                 365            
Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
    370                 375                 380                
Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Trp Ile Gly Pro Glu Leu
385                 390                 395                 400
Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
                405                 410                 415    
His Gly Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
            420                 425                 430        
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
        435                 440                 445            
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Met Tyr Tyr Pro His Thr
    450                 455                 460                
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
465                 470                 475    

Claims (51)

1.抗原结合构建体，其包含通过抗体的单链Fc区域分隔的两个表位结合结构域，其中每个表位结合结构域能够结合至VEGF。
2.权利要求1的抗原结合构建体，其中每个表位结合结构域是域抗体（dAb）。
3.权利要求2的抗原结合构建体，其中一个dAb连接至所述单链Fc区域的N-末端，且另一个dAb连接至所述单链Fc区域的C-末端。
4.权利要求3的抗原结合构建体，其中连接至所述单链Fc区域的N-末端的所述dAb是重链dAb。
5.权利要求3的抗原结合构建体，其中连接至所述单链Fc区域的N-末端的所述dAb是轻链dAb。
6.权利要求3-5中任一项的抗原结合构建体，其中连接至所述单链Fc区域的C-末端的所述dAb是轻链dAb。
7.权利要求5或权利要求6的抗原结合构建体，其中所述轻链dAb是κ或λ轻链dAb。
8.权利要求2-7中任一项的抗原结合构建体，其中每个dAb独立地选择且包含与DOM 15-26-593、DOM 15-26-597、DT02-K-044-085、DT02-K-044-251、DT02-K-044-232、DT02-K-044-236或DT02-K-044-255的序列至少90%相同的氨基酸序列。
9.权利要求2-8中任一项的抗原结合构建体，其中每个dAb独立地选择且包含与DOM 15-26-593、DOM 15-26-597、DT02-K-044-085、DT02-K-044-251、DT02-K-044-232、DT02-K-044-236或DT02-K-044-255的序列至少97%相同的氨基酸序列。
10.权利要求2-9中任一项的抗原结合构建体，其中每个dAb独立地选自：DOM 15-26-593、DOM 15-26-597、DT02-K-044-085、DT02-K-044-251、DT02-K-044-232、DT02-K-044-236和DT02-K-044-255。
11.权利要求3-10中任一项的抗原结合构建体，其中连接至所述单链Fc区域的N-末端的所述dAb包含与DOM 15-26-597或DT02-K-044-085的序列至少90%相同的氨基酸序列。
12.权利要求3-11中任一项的抗原结合构建体，其中连接至所述单链Fc区域的N-末端的所述dAb包含与DOM 15-26-597或DT02-K-044-085的序列至少97%相同的氨基酸序列。
13.权利要求11或权利要求12的抗原结合构建体，其中连接至所述单链Fc区域的N-末端的所述dAb是DOM 15-26-597或DT02-K-044-085。
14.权利要求3-13中任一项的抗原结合构建体，其中连接至所述单链Fc区域的C-末端的所述dAb包含与DT02-K-044-085、DT02-K-044-251、DT02-K-044-232、DT02-K-044-236或DT02-K-044-255的序列至少90%相同的氨基酸序列。
15.权利要求3-14中任一项的抗原结合构建体，其中连接至所述单链Fc区域的C-末端的所述dAb包含与DT02-K-044-085、DT02-K-044-251、DT02-K-044-232、DT02-K-044-236或DT02-K-044-255的序列至少97%相同的氨基酸序列。
16.权利要求14或权利要求15的抗原结合构建体，其中连接至所述单链Fc区域的C-末端的所述dAb是DT02-K-044-085、DT02-K-044-251、DT02-K-044-232、DT02-K-044-236或DT02-K-044-255。
17.权利要求16的抗原结合构建体，其中连接至所述单链Fc区域的C-末端的所述dAb是DT02-K-044-085。
18.权利要求2-7中任一项的抗原结合构建体，其中每个dAb独立地选择并且包含：
viii) CDR序列SEQ ID No. 111、112和113中的一个或多个；
ix) CDR序列SEQ ID No. 114、115和116中的一个或多个；
x) CDR序列SEQ ID No. 117、118和119中的一个或多个；
xi) CDR序列SEQ ID No. 120、121和122中的一个或多个；
xii) CDR序列SEQ ID No. 123、124和125中的一个或多个；
xiii) CDR序列SEQ ID No. 126、127和128中的一个或多个；或
xiv) CDR序列SEQ ID No. 129、130和131中的一个或多个。
19.权利要求18的抗原结合蛋白，其中连接至抗体的Fc区域的N-末端的所述dAb包含一个或多个CDR序列SEQ ID No. 114、115和116，且连接至抗体的Fc区域的C-末端的所述dAb包含一个或多个CDR序列SEQ ID No. 117、118和119。
20.抗原结合构建体，其包含连接至抗体的单链Fc区域的一个表位结合结构域，其中所述表位结合结构域是包含与DT02-K-044-085、DT02-K-044-251、DT02-K-044-232、DT02-K-044-236或DT02-K-044-255的序列至少90%相同的氨基酸序列的dAb，并且进一步地其中所述表位结合结构域能够结合至VEGF。
21.抗原结合构建体，其包含连接至抗体的单链Fc区域的一个表位结合结构域，其中所述表位结合结构域是包含与DT02-K-044-085、DT02-K-044-251、DT02-K-044-232、DT02-K-044-236或DT02-K-044-255的序列至少97%相同的氨基酸序列的dAb，并且进一步地其中所述表位结合结构域能够结合至VEGF。
22.权利要求20或权利要求21的抗原结合构建体，其中所述dAb是DT02-K-044-085、DT02-K-044-251、DT02-K-044-232、DT02-K-044-236或DT02-K-044-255。
23.权利要求20或权利要求21的抗原结合构建体，其中所述dAb包含：
vi) CDR序列SEQ ID No. 117、118和119中的一个或多个；
vii) CDR序列SEQ ID No. 120、121和122中的一个或多个；
viii) CDR序列SEQ ID No. 123、124和125中的一个或多个；
ix) CDR序列SEQ ID No. 126、127和128中的一个或多个；或
x) CDR序列SEQ ID No. 129、130和131中的一个或多个。
24.前述权利要求中任一项的抗原结合构建体，其中所述Fc区域是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG4PE；或其片段或变体。
25.权利要求24的抗原结合构建体，其中所述Fc区域包含CH1、CH2和CH3恒定区抗体结构域中的一个或多个，和任选包含铰链区（即在CH1和CH2之间）。
26.权利要求25的抗原结合构建体，其中所述Fc区域包含CH2和CH3恒定区抗体结构域。
27.权利要求24的抗原结合构建体，其中所述Fc区域是SEQ ID No. 110的IgG1序列。
28.前述权利要求中任一项的抗原结合构建体，其中所述表位结合结构域中的一个或两个通过接头连接至Fc区域。
29.权利要求28的抗原结合构建体，其中每个接头独立地选择且包含1-150个氨基酸。
30.权利要求29的抗原结合构建体，其中每个接头独立地选择且包含多于7个氨基酸。
31.权利要求28的抗原结合构建体，其中每个接头独立地选自IgG1铰链、AS、纤连蛋白x 3、纤连蛋白x 4、和螺旋状接头。
32.权利要求31的抗原结合构建体，其中经其将表位结合结构域连接至所述Fc区域的N-末端的所述接头是IgG1铰链、AS或Fib-3。
33.权利要求32的抗原结合构建体，其中经其将表位结合结构域连接至所述Fc区域的N-末端的所述接头是IgG1铰链或AS。
34.权利要求31-33中任一项的抗原结合构建体，其中经其将表位结合结构域连接至所述Fc区域的C-末端的所述接头是Fib-4或螺旋状接头。
35.权利要求34的抗原结合构建体，其中经其将表位结合结构域连接至所述Fc区域的C-末端的所述接头是Fib-4。
36.权利要求1的抗原结合构建体，其为：
(a) DOM 15-26-597–AS–Fc (SEQ ID No. 110)–纤连蛋白x 4–DT02-K-044-085；或
(b) DOM 15-26-597–IgG1铰链–Fc (SEQ ID No. 110)–纤连蛋白x 4–DT02-K-044-085；或
h) (c) (a)或b)的变体，其在整个序列上具有至少97%的氨基酸同一性；或
i) (d) (a)或b)的变体，其中每个dAb序列与特定的dAb的序列具有至少97%的序列同一性。
37.权利要求2-36中任一项的抗原结合构建体，其中一个或多个dAb包含：
a) 由序列VTVS(S)nX [对于VH dAb]或VEIKpRqX [对于VL dAb]组成的C-末端序列；和还任选地
b) 与人种系框架序列相比，在位置14、41、108、110或112处的一个或多个氨基酸取代；
其中：
n代表独立地选自0或1的整数；
p和q各自代表0或1，从而当p代表1时，q可以是0或1，并且从而当p代表0时，q也代表0；
X可以存在或不存在，并且如果存在，则代表1-8个氨基酸残基的氨基酸延伸；
另外的条件是如果X不存在。
38.权利要求37的抗原结合构建体，其中对于VL dAb，所述C-末端序列是VEIKpRqX且p是1，q是0且X不存在。
39.权利要求37的抗原结合构建体，其中对于VL dAb，所述C-末端序列是VEIKpRqX且p是1，q是1且X是A、AAA或T。
40.二聚体，其包含两个前述权利要求中任一项的抗原结合构建体。
41.权利要求40的二聚体，其为异二聚体或同二聚体。
42.药物组合物，其包含权利要求40或权利要求41的二聚体，和一种或多种药学上可接受的载体。
43.权利要求40或权利要求41的二聚体，其用于药物。
44.权利要求40或权利要求41的二聚体，其用于治疗与VEGF信号转递相关的疾病，例如癌症和/或眼部疾病，例如糖尿病性黄斑水肿(DME)、湿性AMD、糖尿病性视网膜病变、RVO、和角膜新生血管形成。
45.权利要求40或权利要求41的二聚体的用途，其用于制造治疗与VEGF信号转递相关的疾病的药物，所述疾病例如癌症和/或眼部疾病，例如糖尿病性黄斑水肿(DME)、湿性AMD、糖尿病性视网膜病变、RVO、和角膜新生血管形成。
46.用于治疗患有与VEGF信号转递相关的疾病的患者的方法，所述疾病例如癌症和眼部疾病，例如糖尿病性黄斑水肿(DME)、湿性AMD、糖尿病性视网膜病变、RVO和角膜新生血管形成，所述方法包括施用治疗量的权利要求40或权利要求41的二聚体。
47.权利要求44-46中任一项的二聚体，其用于人患者的治疗和预防。
48.多核苷酸序列，其编码权利要求1-39中任一项的抗原结合构建体。
49.重组的转化或转染的宿主细胞，其包含一个或多个编码权利要求1-39中任一项的抗原结合构建体的多核苷酸序列。
50.生产权利要求1-39的抗原结合构建体的方法，所述方法包括培养权利要求39的宿主细胞和分离所述抗原结合构建体的步骤。
51.抗原结合构建体，其通过权利要求50的方法生产。
CN201280047197.3A 2011-07-27 2012-07-25 融合至Fc结构域的抗VEGF单可变结构域 Pending CN103842380A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161512138P 2011-07-27 2011-07-27
US61/512138 2011-07-27
PCT/EP2012/064632 WO2013014208A2 (en) 2011-07-27 2012-07-25 Antigen binding constructs

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN103842380A true CN103842380A (zh) 2014-06-04

Family

ID=46579044

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201280047197.3A Pending CN103842380A (zh) 2011-07-27 2012-07-25 融合至Fc结构域的抗VEGF单可变结构域

Country Status (18)

Country Link
US (2) US9499612B2 (zh)
EP (1) EP2736925A2 (zh)
JP (1) JP5987057B2 (zh)
KR (1) KR101632620B1 (zh)
CN (1) CN103842380A (zh)
AU (1) AU2012288846B2 (zh)
BR (1) BR112014001855A2 (zh)
CA (1) CA2842099A1 (zh)
CL (1) CL2014000204A1 (zh)
CO (1) CO7020847A2 (zh)
CR (1) CR20140047A (zh)
DO (1) DOP2014000017A (zh)
EA (1) EA028886B1 (zh)
HK (1) HK1198446A1 (zh)
MA (1) MA35352B1 (zh)
MX (1) MX2014001019A (zh)
PE (1) PE20141659A1 (zh)
WO (1) WO2013014208A2 (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109021103A (zh) * 2017-06-12 2018-12-18 上海睿智化学研究有限公司 抗人血管内皮生长因子的抗体及其制备方法和应用
WO2023016516A1 (zh) * 2021-08-13 2023-02-16 信达生物制药(苏州)有限公司 抗vegf a和vegf c双特异性抗体及其用途
WO2024055995A1 (zh) * 2022-09-14 2024-03-21 寻济生物科技（北京）有限公司 一种抗vegfa融合蛋白及其制备方法和应用

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11644471B2 (en) 2010-09-30 2023-05-09 Ablynx N.V. Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobulin single variable domains
MX2013005847A (es) * 2010-11-24 2013-12-12 Glaxo Group Ltd Proteinas de union a antigeno multiespecificas que eligen como blanco a hgf.
KR102240318B1 (ko) 2011-06-23 2021-04-15 아블린쓰 엔.브이. 면역글로불린 단일 가변 도메인을 수반하는 어세이에서 비특이적 단백질 간섭을 예측하고 검출하고 감소시키는 기법
US9840553B2 (en) 2014-06-28 2017-12-12 Kodiak Sciences Inc. Dual PDGF/VEGF antagonists
EA201791029A1 (ru) 2014-11-10 2017-12-29 Дженентек, Инк. Антитела против интерлейкина-33 и их применение
TW201643179A (zh) 2015-03-11 2016-12-16 葛蘭素史克智慧財產發展有限公司 Ｔｓｌｐ結合蛋白
CN108712911A (zh) 2015-12-30 2018-10-26 科达制药股份有限公司 抗体及其缀合物
EP3429624A4 (en) * 2016-03-16 2020-04-22 The Regents of The University of California PROTEIN A BINDING POLYPEPTIDES, ANTI-EPHA2 ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF
AU2017247796A1 (en) 2016-04-05 2018-09-27 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Inhibition of TGFBeta in immunotherapy
JP2020514301A (ja) * 2017-01-06 2020-05-21 モメンタ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 改変されたＦｃ抗原結合ドメイン構築体に関する組成物および方法
JP2022553640A (ja) 2019-10-10 2022-12-26 コディアック サイエンシーズ インコーポレイテッド 眼障害を処置する方法
JP2023517345A (ja) 2020-03-13 2023-04-25 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗インターロイキン－３３抗体及びその使用
WO2022175481A1 (en) * 2021-02-19 2022-08-25 Dotbio Pte. Ltd. Vegfa-binding molecules
WO2023014892A1 (en) * 2021-08-04 2023-02-09 Alpine Biotherapeutics Corporation Sustainable ocular cell-mediated intraocular delivery of cellular therapeutics for treatment of ocular diseases or disorders
KR20240019034A (ko) * 2022-08-02 2024-02-14 주식회사 파노로스바이오사이언스 변형된 융합 단백질 및 이의 용도

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101039959A (zh) * 2004-06-30 2007-09-19 杜门蒂斯有限公司 用于治疗炎性疾病的组合物和方法
CN101061140A (zh) * 2004-09-17 2007-10-24 多曼蒂斯有限公司 单价结合cd40l的组合物和应用方法
CN101802197A (zh) * 2007-05-14 2010-08-11 比奥根艾迪克Ma公司 单链FC（ScFc）区、包含其的结合多肽及与其相关的方法
CN101802004A (zh) * 2007-06-06 2010-08-11 杜门蒂斯有限公司 多肽、抗体可变域和拮抗剂
CN102131827A (zh) * 2007-12-13 2011-07-20 葛兰素集团有限公司 用于肺部传递给药的组合物

Family Cites Families (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4666884A (en) 1984-04-10 1987-05-19 New England Deaconess Hospital Method of inhibiting binding of von Willebrand factor to human platelets and inducing interaction of platelets with vessel walls
US4873316A (en) 1987-06-23 1989-10-10 Biogen, Inc. Isolation of exogenous recombinant proteins from the milk of transgenic mammals
EP0521985B1 (en) 1990-03-20 1997-09-24 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Chimeric antibodies with receptor binding ligands in place of their constant region
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
ATE463573T1 (de) 1991-12-02 2010-04-15 Medimmune Ltd Herstellung von autoantikörpern auf phagenoberflächen ausgehend von antikörpersegmentbibliotheken
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
CA2118508A1 (en) 1992-04-24 1993-11-11 Elizabeth S. Ward Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
US5747035A (en) 1995-04-14 1998-05-05 Genentech, Inc. Polypeptides with increased half-life for use in treating disorders involving the LFA-1 receptor
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5702892A (en) 1995-05-09 1997-12-30 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Phage-display of immunoglobulin heavy chain libraries
WO1997043316A1 (en) 1996-05-10 1997-11-20 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Physiologically active molecules with extended half-lives and methods of using same
GB9722131D0 (en) 1997-10-20 1997-12-17 Medical Res Council Method
AU758240B2 (en) 1998-02-25 2003-03-20 Merck Patent Gmbh Enhancing the circulating half-life of antibody-based fusion proteins
DK1078051T3 (da) 1998-05-13 2008-04-07 Domantis Ltd Fagvisningsselektionssystem til selektion af korrekt foldede proteiner
EP1105427A2 (en) 1998-08-17 2001-06-13 Abgenix, Inc. Generation of modified molecules with increased serum half-lives
IL127127A0 (en) 1998-11-18 1999-09-22 Peptor Ltd Small functional units of antibody heavy chain variable regions
KR101077001B1 (ko) 1999-01-15 2011-10-26 제넨테크, 인크. 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체
ES2571230T3 (es) 1999-04-09 2016-05-24 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Procedimiento para controlar la actividad de una molécula inmunofuncional
CA2388245C (en) 1999-10-19 2012-01-10 Tatsuya Ogawa The use of serum-free adapted rat cells for producing heterologous polypeptides
GB2375112A (en) 2000-02-03 2002-11-06 Domantis Ltd Combinatorial protein domains
US6374470B1 (en) 2000-10-06 2002-04-23 Milliken & Company Face plate for spun-like textured yarn
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
EP1355919B1 (en) 2000-12-12 2010-11-24 MedImmune, LLC Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
US20060073141A1 (en) * 2001-06-28 2006-04-06 Domantis Limited Compositions and methods for treating inflammatory disorders
EP1423510A4 (en) 2001-08-03 2005-06-01 Glycart Biotechnology Ag ANTIBODY GLYCOSYLATION VARIANTS WITH INCREASED CELL CYTOTOXICITY DEPENDENT OF ANTIBODIES
US7696320B2 (en) * 2004-08-24 2010-04-13 Domantis Limited Ligands that have binding specificity for VEGF and/or EGFR and methods of use therefor
EP1776385A1 (en) 2004-07-21 2007-04-25 Glycofi, Inc. Immunoglobulins comprising predominantly a glcnac2man3glcnac2 glycoform
US7563443B2 (en) * 2004-09-17 2009-07-21 Domantis Limited Monovalent anti-CD40L antibody polypeptides and compositions thereof
EP1921090B1 (en) 2005-07-22 2015-01-14 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Genetically modified antibody composition
US7923538B2 (en) 2005-07-22 2011-04-12 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Recombinant antibody composition
GB0724331D0 (en) * 2007-12-13 2008-01-23 Domantis Ltd Compositions for pulmonary delivery
US20090148905A1 (en) * 2007-11-30 2009-06-11 Claire Ashman Antigen-binding constructs
JP6157046B2 (ja) * 2008-01-07 2017-07-05 アムジェン インコーポレイテッド 静電的ステアリング（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃｓｔｅｅｒｉｎｇ）効果を用いた抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を作製するための方法
EP2401298A1 (en) * 2009-02-24 2012-01-04 Glaxo Group Limited Antigen-binding constructs
BRPI1013807A2 (pt) * 2009-05-28 2019-09-24 Glaxo Group Ltd composição, uso de uma composição, antagonista, sequência de polinucleotídeo, célula hospedeira recombinante transformada ou transfectada, método para a produção de uma composição, método para prevenir ou tratar um paciente, molécula de ligação de antígeno de marcação dual, e, proteína de ligação de antígeno.
US8703132B2 (en) * 2009-06-18 2014-04-22 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific, tetravalent antigen binding proteins
WO2011063348A1 (en) * 2009-11-23 2011-05-26 Amgen Inc. Monomeric antibody fc
MX2013005847A (es) * 2010-11-24 2013-12-12 Glaxo Group Ltd Proteinas de union a antigeno multiespecificas que eligen como blanco a hgf.
EP2670778A1 (en) * 2011-02-02 2013-12-11 Glaxo Group Limited Novel antigen binding proteins

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101039959A (zh) * 2004-06-30 2007-09-19 杜门蒂斯有限公司 用于治疗炎性疾病的组合物和方法
CN101061140A (zh) * 2004-09-17 2007-10-24 多曼蒂斯有限公司 单价结合cd40l的组合物和应用方法
CN101802197A (zh) * 2007-05-14 2010-08-11 比奥根艾迪克Ma公司 单链FC（ScFc）区、包含其的结合多肽及与其相关的方法
CN101802004A (zh) * 2007-06-06 2010-08-11 杜门蒂斯有限公司 多肽、抗体可变域和拮抗剂
CN102131827A (zh) * 2007-12-13 2011-07-20 葛兰素集团有限公司 用于肺部传递给药的组合物

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109021103A (zh) * 2017-06-12 2018-12-18 上海睿智化学研究有限公司 抗人血管内皮生长因子的抗体及其制备方法和应用
WO2023016516A1 (zh) * 2021-08-13 2023-02-16 信达生物制药(苏州)有限公司 抗vegf a和vegf c双特异性抗体及其用途
WO2024055995A1 (zh) * 2022-09-14 2024-03-21 寻济生物科技（北京）有限公司 一种抗vegfa融合蛋白及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
WO2013014208A2 (en) 2013-01-31
EA028886B1 (ru) 2018-01-31
MX2014001019A (es) 2014-05-13
EA201391812A1 (ru) 2014-06-30
AU2012288846A1 (en) 2014-02-06
US20140205604A1 (en) 2014-07-24
US9499612B2 (en) 2016-11-22
PE20141659A1 (es) 2014-11-21
CL2014000204A1 (es) 2014-07-25
BR112014001855A2 (pt) 2017-02-21
KR20140041908A (ko) 2014-04-04
HK1198446A1 (zh) 2015-04-24
CR20140047A (es) 2014-03-24
DOP2014000017A (es) 2014-04-30
EP2736925A2 (en) 2014-06-04
CO7020847A2 (es) 2014-08-11
JP5987057B2 (ja) 2016-09-06
AU2012288846B2 (en) 2016-05-19
JP2014523746A (ja) 2014-09-18
KR101632620B1 (ko) 2016-06-23
MA35352B1 (fr) 2014-08-01
CA2842099A1 (en) 2013-01-31
US20170029494A1 (en) 2017-02-02
WO2013014208A3 (en) 2013-05-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101632620B1 (ko) Ｆｃ 도메인에 융합된 항­ｖｅｇｆ 단일 가변 도메인
KR102648966B1 (ko) Folr1 및 cd3에 대한 t 세포 활성화 이중특이적 항원 결합 분자
KR102514330B1 (ko) Pd-1 및 lag-3와의 면역반응성을 가진 공유 결합된 디아바디, 및 그것의 사용 방법
DK3075745T3 (en) Mutated interleukin-2 polypeptides
CN110461873A (zh) 包含抗4-1bb克隆20h4.9的双特异性抗原结合分子
CN109311973A (zh) 含有c端融合的tnf家族配体三聚体的抗原结合分子
KR20180054877A (ko) 공자극 tnf 수용체에 대해 4가를 갖는 이중특이적 항체
CN107206072A (zh) T细胞活化性双特异性抗原结合分子CD3 ABD叶酸受体1(FolR1)和PD‑1轴结合拮抗剂的组合疗法
AU2016329120A1 (en) Bispecific antibodies specific for a costimulatory TNF receptor
TW201106963A (en) Antigen-binding proteins
EA032828B1 (ru) Иммунотерапевтические средства против комплекса tcr
CN109705218A (zh) Asgpr抗体及其用途
CN109071652A (zh) 包含tnf家族配体三聚体和生腱蛋白结合模块的抗原结合分子
TWI733661B (zh) 以高親合性、結合性及特異性結合轉化生長因子－β１的經修飾ＩｇＧ抗體
TW201434858A (zh) 針對ｅｐｏ之抗體之組合物及方法
KR20210082444A (ko) 개선된 항-flt3 항원 결합 단백질
US20170157251A1 (en) Bi-Specific Monovalent Diabodies That are Capable of Binding CD19 and CD3, and Uses Thereof
US20230398182A1 (en) Treatments for hermansky-pudlak syndrome
KR20230105972A (ko) 혈관신생 억제제가 결합된 항-C3b 항체 또는 항-C5 항체 및 이의 용도
KR20220117300A (ko) 고형 종양의 치료를 위한 메소텔린-표적화 cd40 작용성 다중특이성 항체 작제물
BR112016030447B1 (pt) Diacorpo biespecífico de fc capaz de ligação imunoespecífica a um epítopo de pd-1 e a um epítopo de lag-3, composição farmacêutica, e uso do diacorpo biespecífico de fc
CN110437337A (zh) 双特异性t细胞活化性抗原结合分子

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
AD01 Patent right deemed abandoned

Effective date of abandoning: 20180601

AD01 Patent right deemed abandoned