CN103830189A - 一种重组甘精胰岛素制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种由独立存放的重组甘精胰岛素冻干粉针和专用溶剂两部分组成重组甘精胰岛素制剂，其中，所述的重组甘精胰岛素冻干粉针是将重组甘精胰岛素于西林瓶中冻干而得；专用溶剂分装于笔式注射器用中性硼硅玻璃套筒中；使用时，抽取专用溶剂，将主药溶解后，混合均匀，即可使用。本发明所得重组甘精胰岛素制剂只在临床用药时才溶解主药，有效地缩短了甘精胰岛素在溶液中的存放时间，最大程度的保证了主药稳定。同时，该重组甘精胰岛素冻干粉针成型性良好，冻前溶液外观澄清，冻干品复溶性好，复溶后的澄明度好，杂质含量低；该重组甘精胰岛素制剂经长期存放和加速试验表明，产品质量稳定。耐存储，方便户外运输、低温保存及使用。

Description

一种重组甘精胰岛素制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种重组甘精胰岛素制剂及其制备方法，属于药物制剂技术领域。

背景技术

重组甘精胰岛素(recombinant glycine-arginine insulin)是一种通过基因重组技术获得并用于治疗Ⅰ、Ⅱ型糖尿病的长效胰岛素类生物制品，其持续控制血糖的原理为：皮下注射后甘精胰岛素分子立即聚合，因而溶解度降低，形成甘精胰岛素沉淀物，机体吸收延迟，其降糖作用的时间也被延长。重组甘精胰岛素是当前治疗Ⅰ、Ⅱ型糖尿病十分方便和有效的药物。国外由Aventis公司生产的重组甘精胰岛素（商品名Lantus）与普通胰岛素的不同之处在于其A链羧基端21位的最后一个天门冬氨酸被甘氨酸所取代，B链羧基端30位苏氨酸后的31和32位连接了两个精氨酸。改造后的活性胰岛素即甘精胰岛素，由E.coli表达生产。可在糖尿病患者体内平稳发挥药效24小时以上，并且无明显的血药高峰值和低峰值，很适合用于低基础胰岛素的替代治疗。

重组甘精胰岛素在溶液体系中不稳定，随着放置时间的延长，其有关蛋白和高分子蛋白数值会逐渐升高。为此，现有技术中有关重组甘精胰岛素注射液加入稳定剂来增强其运输、存储过程中的稳定性。中国专利CN1662252A中公开了通过加入吐温-20等表面活性剂增强酸性胰岛素注射液的稳定性；中国专利CN1498113A公开了一种通过加入表面活性剂（乳化剂）等制备稳定的无锌或低锌离子胰岛素注射液。众所周知，吐温类表面活性剂用于注射剂，易发生过敏、溶血等不良反应，其安全性一直存在争议。

中国专利CN1266371A中描述了用TRIS或精氨酸缓冲液作为稳定剂的胰岛素注射液；中国专利CN102319422A公开了一种包含200～1000U/ml的甘精胰岛素的含水药物制剂及其用途，美国专利US5866538公开了通过含有浓度为5～100mM的甘油和NaCl使其稳定性增强的胰岛素注射液；美国专利US5948751公开了通过加入甘露醇或类似的糖获得物理稳定性增强的胰岛素制剂；中国专利CN101573133A公开了PEG化延长的胰岛素，期待改变其溶解性能、提高稳定性；中国专利CN102188367A公开了通过加入PEG和枸橼酸来提高甘精胰岛素注射液的稳定性。上述专利技术对于胰岛素制剂稳定性的研究多是针对其中的赋形剂，虽然取得了一定的成果，但是其稳定性仍然不能满足制剂在长期放置后稳定性的要求，从而造成注射剂的保存周期缩短，临床用药存在安全隐患。

重组甘精胰岛素注射液贮藏条件为2～8℃，不可冷冻，冷冻后复溶，会使药物降解、析出，无法使用。而冬天北方室外运输、转运和贮存过程中，药品极易结冰，无法使用。家庭存放重组甘精胰岛素注射液时，若不小心靠近冰箱壁，亦会使药物结晶，无法使用。因此，制备出稳定性高、方便户外运输和低温保存的重组甘精胰岛素制剂就显的十分必要。

中国专利CN101474399A公开了一种胰岛素肺吸入粉雾剂及其制备方法，该专利申请公开的胰岛素粉雾剂由胰岛素、甘露醇、氨基酸和肺表面活性剂组成，但其生物利用度比注射剂低的多，且由于用到较多的非吸入用辅料，长期用药的安全性难以保障。

发明内容

鉴于现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种稳定性好、使用方便的重组甘精胰岛素制剂。

本发明的目的是通过如下技术方案得以实现的。一种重组甘精胰岛素制剂，由独立存放的重组甘精胰岛素冻干粉针和专用溶剂两部分组成；将重组甘精胰岛素冻干于西林瓶中，专用溶剂分装于笔式注射器用中性硼硅玻璃套筒中，使用时抽取专用溶剂，将西林瓶中的主药溶解，再全部转移于分装专用溶剂的笔式注射器用中性硼硅玻璃套筒中，混合均匀，即可使用。

其中，重组甘精胰岛素冻干粉针可以通过如下步骤制得：将重组甘精胰岛素加入注射用水中，搅拌，滴加盐酸溶液，使重组甘精胰岛素全部溶解，调节溶液pH值为3.5～4.5，用注射用水定容，微孔滤膜除菌过滤得重组甘精胰岛素溶液；将重组甘精胰岛素溶液定量灌装于无菌洁净西林瓶中，半加胶塞，冻干。其中，盐酸溶液的浓度最好为0.1mol/L；调节溶液pH时最好用氢氧化钠溶液或/和盐酸溶液。重组甘精胰岛素溶液的浓度优选为2-5g/L，进一步优选为3.64g/L。

为获得质量更稳定，质地疏松均匀，外形饱满的重组甘精胰岛素冻干粉针剂，其冻干过程可以按如下步骤进行：

1）速冻阶段：

板层降温到-30～-40℃后，将半加胶塞的、定量装有重组甘精胰岛素溶液的无菌西林瓶放入冻干机，保温2h～3h；重组甘精胰岛素溶液可以快速结冰，从而减少重组甘精胰岛素溶液状态时发生的分解和氧化；

2）升华干燥：

在速冻阶段结束后，将板层升至-12～-8℃，保温6～8h；使升华水线在该阶段消失；

3）解析干燥：

在升华干燥结束后，板层以5-15℃/h的升温速度升温至25～30℃，保温2～4h,使水分充分挥发；优选板层的升温速度为6-9℃/h。

解析干燥后，压塞，轧盖，包装既得成品。

本发明技术方案中的专用溶剂包含如下成分：间甲酚、甘油、氯化锌和注射用水。其中，间甲酚、甘油和氯化锌的质量比为1:（6～7）:（0.007～0.025）。

本发明还提供专用溶剂的制备方法：将配方量的间甲酚、甘油、氯化锌和注射用水搅拌溶解，混合均匀，调节pH值为3.5～4.5，用微孔滤膜除菌过滤，即得本发明技术方案的专用溶剂。其中，调节pH最好用氢氧化钠溶液或/和盐酸溶液。

开启灌封机，将笔式注射器用溴化丁基橡胶活塞塞笔式注射器用中性硼硅玻璃套筒底部，将上述专用溶剂灌装于笔式注射器，药液应充满笔式注射器用中性硼硅玻璃套筒，轧封铝盖，装盘，灯检，包装既得。

与现有的甘精胰岛素注射剂相比，本发明技术方案存在以下优势：

（1）本发明所得重组甘精胰岛素制剂只在临床用药时才溶解主药，有效地缩短了甘精胰岛素在溶液中的存放时间，最大程度的保证了主药稳定。

（2）本发明所得重组甘精胰岛素制剂中的重组甘精胰岛素冻干粉针成型性良好，冻前溶液外观澄清，冻干品复溶性好，复溶后的澄明度好，杂质含量低，经长期存放和加速试验表明，产品质量稳定。

（3）本发明所得重组甘精胰岛素制剂存放温度在低于8℃即可，可冷冻保存，方便户外运输和低温保存。

（4）本发明所得重组甘精胰岛素制剂在贮藏温度为25℃时，存放一个月，制剂质量稳定（3ml：300单位，一个月患者会用完），方便患者用药。

（5）与现有技术制备的甘精胰岛素制剂相比，本发明所得重组甘精胰岛素制剂经长期和加速试验验证，其稳定性大大提高。

具体实施方式

以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步作描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。

实施例1重组甘精胰岛素冻干粉针剂的制备

称取重组甘精胰岛素10.92g，加入注射用水3800ml，搅拌，滴加0.1mol/L盐酸溶液，使重组甘精胰岛素全部溶解，继续滴加0.1mol/L盐酸调节溶液pH值至3.5，然后用剩余注射用水定容至3000ml；定容后的溶液用0.22μm的微孔滤膜除菌过滤，然后按每支4ml灌装于10ml西林瓶中。冻干机板层降温到-30℃，将灌装后的西林瓶放入冻干机，保温2h；将板层温度升温到-8℃，保温6h，使升华水线在该阶段消失；将板层以12℃/h的升温速度升温到25℃，保温3h，压塞，轧盖，包装既得重组甘精胰岛素冻干粉针。

实施例2重组甘精胰岛素冻干粉针剂的制备

称取重组甘精胰岛素10.92g，加入注射用水2800ml，搅拌，滴加0.1mol/L盐酸溶液，使重组甘精胰岛素全部溶解，继续滴加0.1mol/L盐酸调节溶液pH值至3.7，然后用剩余注射用水定容至3000ml；定容后的溶液用0.22μm的微孔滤膜除菌过滤，然后按每支3ml灌装于10ml西林瓶中。冻干机板层降温到-40℃，将灌装后的西林瓶放入冻干机，保温2h；将板层温度升温到-12℃，保温8h，使升华水线在该阶段消失；将板层以10℃/h的升温速度升温到25℃，保温3h，压塞，轧盖，包装既得重组甘精胰岛素冻干粉针。

实施例3重组甘精胰岛素冻干粉针剂的制备

称取重组甘精胰岛素10.92g，加入注射用水2800ml，搅拌，滴加0.1mol/L盐酸溶液，使重组甘精胰岛素全部溶解，继续滴加0.1mol/L盐酸调节溶液pH值至3.9，然后用剩余注射用水定容至3000ml；定容后的溶液用0.22μm的微孔滤膜除菌过滤，然后按每支3ml灌装于10ml西林瓶中。冻干机板层降温到-35℃，将灌装后的西林瓶放入冻干机，保温2.5h；将板层温度升温到-10℃，保温7h，使升华水线在该阶段消失；将板层以6℃/h的升温速度升温到25℃，保温4h，压塞，轧盖，包装既得重组甘精胰岛素冻干粉针。

实施例4重组甘精胰岛素冻干粉针剂的制备

称取重组甘精胰岛素10.92g，加入注射用水2800ml，搅拌，滴加0.1mol/L盐酸溶液，使重组甘精胰岛素全部溶解，继续滴加0.1mol/L盐酸调节溶液pH值至4.0，然后用剩余注射用水定容至3000ml；定容后的溶液用0.22μm的微孔滤膜除菌过滤，然后按每支3ml灌装于10ml西林瓶中。冻干机板层降温到-40℃，将灌装后的西林瓶放入冻干机，保温3h；将板层温度升温到-12℃，保温8h，使升华水线在该阶段消失；将板层以9℃/h的升温速度升温到25℃，保温2h，压塞，轧盖，包装既得重组甘精胰岛素冻干粉针。

实施例5专用溶剂的制备

配方如下：

称取处方量的间甲酚、甘油、ZnCl₂，加处方量注射用水，搅拌溶解，混合均匀，用0.1mol/L的盐酸溶液调节pH值至4.0，用0.22μm的微孔滤膜除菌过滤，开启灌封机，将笔式注射器用溴化丁基橡胶活塞塞入3ml规格的笔式注射器用中性硼硅玻璃套筒底部，将上述专用溶剂灌装于笔式注射器，药液应充满笔式注射器用中性硼硅玻璃套筒，即定量灌装量为3ml。扎封铝盖，装盘，灯检，包装既得专用溶剂。

对比实施例1

按照专利CN102188367A实施例1提供的方法。

先将10000IU（363.78mg）甘精胰岛素加入到30ml注射用水中，以枸橼酸调节溶液pH至3.8，使其完全溶解，后加入10g（10%w/v用量）PEG400，搅拌混合均匀，于4℃低温下搅拌放置12h，得溶液Ⅰ。另将处方量的锌、间甲酚加入到剩余量的注射用水中，搅拌使溶解，以枸橼酸调节溶液pH至4，放冷至室温得溶液Ⅱ。取溶液Ⅰ搅拌下全部加入到溶液Ⅱ中，搅拌均匀，调节药液pH至3.8～4.2，使其最终药液中含有30μg/ml的锌、2.7mg/ml的间甲酚、100IU/ml的甘精胰岛素、100mg/ml的PEG400，药液经0.22μm滤膜除菌过滤，分装于3ml注射小瓶中，轧盖、灯检既得。

验证实施例

有关蛋白取供试品适量，照效价测定项下的方法测定，记录色谱图，按峰面积归一化法计算（扣除间甲酚的吸收峰），最大有关蛋白不得过0.5%，总有关蛋白不得过2.0%。

高分子量蛋白取供试品适量，用0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中约含2mg的溶液，作为供试品溶液。照分子排阻色谱法（中国药典2010年版三部附录ⅢD）进行试验。以亲水硅胶为填充剂；冰乙酸-乙腈-水（20：30：50），用25%氨水调节pH值至3.0为流动相；流速为每分钟0.5ml；检测波长为276nm。取重组人胰岛素单体-二聚体对照品，用0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中约含1mg的溶液；取100μl注入液相色谱仪，记录色谱图，以重组人胰岛素单体和二聚体之间的峰谷高与重组人胰岛素二聚体峰高之比作为分离度，分离度应不大于0.6。取供试品溶液100μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，扣除保留时间大于重组甘精胰岛素主峰的其他峰面积，按峰面积归一化法计算，保留时间小于重组甘精胰岛素主峰的所有峰面积之和不得大于0.3%。

效价测定取供试品，照高效液相色谱法（中国药典2010年版三部附录ⅢB）测定，本品含重组甘精胰岛素应为标示量的95.0%～105.0%。

每1ml供试品含3.64mg的重组甘精胰岛素活性物质，相当于100IU人胰岛素。

色谱条件与***适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为磷酸盐缓冲液-乙腈-水-氯化钠（250ml：250ml：500ml：18.4g），流动相B为磷酸盐缓冲液-乙腈-水-氯化钠（250ml：650ml：100ml：3.2g）；取磷酸二氢钠20.7g，加水800ml溶解，再用85%磷酸调节pH值至2.5，定容至1L，过滤，得磷酸盐缓冲液。线性梯度洗脱，柱温为35℃；检测波长为214nm。取***适用性试验溶液（以0.01mol/L盐酸溶液为溶剂，制成每1ml含甘精胰岛素和OA-Arg甘精胰岛素分别约为0.75mg和0.06mg的溶液）10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，甘精胰岛素和OA-Arg甘精胰岛素的分离度应大于1.5，甘精胰岛素的拖尾因子应不大于1.8。

测定法取供试品，用0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml约含10IU的溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取甘精胰岛素对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。

将实施例1-4的冻干粉、实施例5所得专用溶剂以及对比实施例1所得样品分别置于25℃，RH60%的环境下进行加速试验，分别于第0、1、2、3、6个月取样进行考察，考察指标包括有关蛋白、高分子量蛋白、效价等指标。其中，实施例1-4的冻干粉与实施例5所得专用溶剂在加速试验后，分析检测前混合得供试品。具体结果见下表1。

表1甘精胰岛素制剂稳定性考察结果

通过上表1可以看出，本发明制备的重组甘精胰岛素制剂经加速试验6个月后的最大有关蛋白、总有关蛋白和高分子量蛋白等指标，仍符合质量标准；而现有技术制备的重组甘精胰岛素制剂经加速试验6个月后的最大有关蛋白和高分子量蛋白，已不符合质量标准的规定。本发明产品稳定性优于现有技术。

Claims (10)

1.一种重组甘精胰岛素制剂，其特征在于，所述重组甘精胰岛素制剂由独立存放的重组甘精胰岛素冻干粉针和专用溶剂两部分组成，其中，所述的专用溶剂为间甲酚、甘油、氯化锌和注射用水。

2.如权利要求1所述的一种重组甘精胰岛素制剂，其特征在于，所述的间甲酚、甘油和氯化锌的质量比为1:（6～7）:（0.007～0.025）。

3.如权利要求2所述的一种重组甘精胰岛素制剂，其特征在于，所述的专用溶剂的制备方法如下：将配方量的间甲酚、甘油、氯化锌和注射用水搅拌溶解，混合均匀，调节pH值为3.5～4.5，用微孔滤膜除菌过滤，即得重组甘精胰岛素制剂专用溶剂。

4.如权利要求2所述的一种重组甘精胰岛素制剂，其特征在于，所述的重组甘精胰岛素冻干粉针是将重组甘精胰岛素于西林瓶中冻干而得；专用溶剂分装于笔式注射器用中性硼硅玻璃套筒中；使用时，抽取专用溶剂，将主药溶解后，混合均匀，即可使用。

5.如权利要求1-4任一权利要求所述的一种重组甘精胰岛素制剂，其特征在于，所述的重组甘精胰岛素冻干粉针由以下步骤制得：将重组甘精胰岛素加入注射用水中，搅拌，滴加盐酸溶液，使重组甘精胰岛素全部溶解，调节溶液pH值为3.5～4.5，用注射用水定容，微孔滤膜除菌过滤得重组甘精胰岛素溶液；将重组甘精胰岛素溶液定量灌装于无菌洁净西林瓶中，半加胶塞，冻干即得重组甘精胰岛素冻干粉针。

6.如权利要求5所述的一种重组甘精胰岛素制剂，其特征在于，重组甘精胰岛素溶液的浓度为2-5g/L。

7.如权利要求5所述的一种重组甘精胰岛素制剂，其特征在于，溶解重组甘精胰岛素所用盐酸溶液的浓度为0.1mol/L。

8.如权利要求5所述的一种重组甘精胰岛素制剂，其特征在于，调节溶液pH时用氢氧化钠溶液或/和盐酸溶液。

9.如权利要求5所述的一种重组甘精胰岛素制剂，其特征在于，所述的重组甘精胰岛素冻干粉针剂的冻干过程可按如下步骤进行：

1）速冻阶段：

板层降温到-30～-40℃后，将半加胶塞的、定量装有重组甘精胰岛素溶液的无菌西林瓶放入冻干机，保温2h～3h；

2）升华干燥：

在速冻阶段结束后，将板层升至-12～-8℃，保温6～8h；

3）解析干燥：

在升华干燥结束后，板层以5-15℃/h的升温速度升温至25～30℃，保温2～4h；

解析干燥后，压塞，轧盖，包装既得成品重组甘精胰岛素冻干粉针剂。

10.如权利要求9所述的一种重组甘精胰岛素制剂，其特征在于，在重组甘精胰岛素冻干过程中步骤3）解析干燥过程中，板层的升温速度为6-9℃/h。