CN103798140B - 显著提高野生百合胚性愈伤组织继代增殖率的培养方法 - Google Patents
显著提高野生百合胚性愈伤组织继代增殖率的培养方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103798140B CN103798140B CN201410037346.9A CN201410037346A CN103798140B CN 103798140 B CN103798140 B CN 103798140B CN 201410037346 A CN201410037346 A CN 201410037346A CN 103798140 B CN103798140 B CN 103798140B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- callus
- medium
- subculture
- agglomerate
- inoculated
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Abstract
本发明涉及植物快速繁殖技术领域，旨在提供显著提高野生百合愈伤组织继代增殖率的培养方法。该培养方法包括步骤：愈伤组织的诱导培养、愈伤组织的继代培养、愈伤组织的扩增培养。本发明以百合愈伤再生体系中的直径0.3～0.5cm的小团块的愈伤组织为对象，其突出的优势在于愈伤组织处理后在较短时间内获得非常高的增殖率，显著高于常规继代的愈伤组织增殖率，并且低温处理期间无需再进行继代，从而在节约人力时间的同时获得较高的增殖率，为以愈伤组织为基础的高效扩繁体系和遗传转化体系准备条件。
Description
技术领域
本发明涉及植物快速繁殖技术领域，尤其涉及显著提高野生百合愈伤组织继代增殖率的培养方法。
背景技术
百合胚性愈伤组织再生体系对建立遗传转化体系具有重要意义，通过继代培养保持愈伤组织系可以为后期的遗传转化提供可随时获得的原材料，由于转基因技术转化效率目前仍较低，高增殖率的愈伤组织是在短期内获得充足愈伤组织以保证不断进行转基因操作，以取得转基因的必要条件。
对于百合胚性愈伤组织的继代，现有技术主要是通过在同一种继代培养基及培养条件下培养，以4-8周为周期，将上一次继代的愈伤组织团块分成较小团块后，接种到新鲜培养基上培养，使其进一步增殖；针对现有技术的改良，已有报道主要是围绕继代培养基配方中植物生长调节剂等物质的浓度和比例的改变。但定期扩繁(每4-8周)需要较高的时间人力成本，同时扩繁增殖率相对较低。伴随继代次数增加，愈伤组织胚性退化、再生能力下降。如何能在节约人力时间的同时获得较高的愈伤组织增殖率是技术瓶颈。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，克服现有技术中的不足，提供一种显著提高野生百合胚性愈伤组织继代增殖率的培养方法。
为解决技术问题，本发明的解决方案是：
提供显著提高野生百合胚性愈伤组织继代增殖率的培养方法，包括以下步骤：
(1)愈伤组织的诱导培养：在超净工作台上，取野生百合组培苗鳞片进行愈伤诱导培养，方法是将组培苗鳞茎的鳞片用镊子或解剖刀剥离，将其鳞片尖端切除0.3cm，并在其近轴面用解剖刀划1～3个创口，接种时以创口朝下接触愈伤诱导培养基表面，愈伤诱导培养20～50天后，获得直径0.3～0.5cm的浅黄色、颗粒状的胚性愈伤组织团块，愈伤诱导率为63.3％～79.1％(其中，鳞片上的创口是产生愈伤组织的关键，创口接触培养基可以使植物充分感应培养基中的激素等物质，以产生愈伤)；
所述愈伤诱导培养是在完全黑暗、25℃的愈伤诱导培养条件下进行；用于接种的愈伤诱导培养基以MS培养基(MurashigeandSkoog,1962)为基本培养基，即每升培养基添加4.43gMS粉，所述愈伤诱导培养基中还含有浓度为0.1～2.0mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-dichlorophenoxyacetic，2,4-D)、0～1.0mg/Lα-萘乙酸(1-Naphthaleneaceticacid,NAA)、浓度为0.1～0.4mg/L的6-苄氨基腺嘌呤(6-benzyladenine,6-BA)、30g/L的蔗糖、6～8g/L琼脂，愈伤诱导培养基的pH值为5.8(其中，2,4-二氯苯氧乙酸对愈伤组织的诱导是关键的)；
(2)愈伤组织的继代培养：愈伤诱导培养60～90天后，在超净工作台上用镊子或解剖刀剔除愈伤组织团块中褐色的老化部分，接种到新鲜的继代培养基上；每个装有继代培养基的培养皿中接种20～30块愈伤组织团块，愈伤组织团块的直径在0.3～0.5cm之间，每4周继代一次，每次继代能获得每月2～2.5倍的增殖率，即愈伤组织团块经过一个月的培养，重量增加为接种时的2～2.5倍；
所述继代培养是在完全黑暗、25℃的继代培养条件下进行；用于接种的继代培养基以MS培养基(MurashigeandSkoog,1962)为基本培养基，即每升培养基添加4.43gMS粉，所述继代培养基中还含有浓度为0.1～2.0mg/L的2,4-D、0～1mg/Lα-萘乙酸(1-Naphthaleneaceticacid,NAA)、0.1～0.4mg/L的6-苄氨基腺嘌呤(6-benzyladenine,6-BA)、30g/L的蔗糖、4～8g/L琼脂，继代培养基的pH值为5.8(其中，2,4-二氯苯氧乙酸对愈伤组织脱分化状态的维持是关键的)；
(3)愈伤组织的扩增培养：
愈伤组织团块在继代培养基上继代培养1～8个月后，将愈伤组织团块分切成0.5cm的小块，接种到含继代培养基的培养皿上，依次用经过紫外灭菌的保鲜膜和锡纸包裹，然后进行30～60天的低温处理，低温处理条件为1～4℃，完全黑暗(低温处理能够抑制愈伤组织在继代培养基上出现的分化情况，保持愈伤组织在脱分化状态并有利于愈伤组织的增殖，黑暗条件有利于愈伤组织的诱导和增殖，保持愈伤组织的脱分化状态)；
再将低温处理后的愈伤组织团块接种到扩增培养基上，进行弱光培养，弱光培养是指在光照100～900lux、温度25℃的条件下进行，且扩增培养基装在口径为6.35cm，高度为9.20cm的柱形瓶中；
弱光培养60天后，将扩增后的愈伤组织团块分成0.3～0.5cm的小块，转接到新鲜的继代培养基上黑暗培养，黑暗培养是指：完全黑暗，温度25℃，继代培养基装在培养皿中(黑暗条件有利于愈伤组织的诱导和增殖，保持愈伤组织的脱分化状态)；经过低温处理和弱光培养后的愈伤组织团块，即为增殖率15～36.6的愈伤组织；
所述扩增培养基以MS培养基(MurashigeandSkoog,1962)为基本培养基，即每升培养基添加4.43gMS粉，扩增培养基中还含有浓度为30g/L的蔗糖和4～8g/L琼脂，扩增培养基的pH值5.8。
在本发明中，步骤(3)中，包裹培养皿的锡纸和保鲜膜间填充有脱脂棉，脱脂棉用于在低温处理和恢复常温中保护植物材料。
本发明提供的上述方法可以用于百合愈伤组织再生体系和遗传转化体系中，具体为：对上述方法获得的愈伤组织进行继代培养后分切成小块，接种到相应继代培养基上培养；用该愈伤组织在再生培养基上分化生根，炼苗、移栽即可获得百合的组织培养植株；或将该愈伤组织作为遗传转化体系的受体，经农杆菌转染或基因枪介导转化，经过筛选和鉴定，并在再生培养基上分化生根、炼苗、移栽获得百合的转基因植株。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
通过低温处理来源于野生百合鳞片的愈伤组织，再通过弱光常温培养和调整培养基配方，能够保存愈伤组织的活力和胚性、降低定期继代的时间劳力成本，并同时获得15～36.6倍的增殖率。
本发明以百合愈伤再生体系中的直径0.3～0.5cm的小团块的愈伤组织为对象，其突出的优势在于愈伤组织处理后在较短时间内获得非常高的增殖率，显著高于常规继代的愈伤组织增殖率，并且低温处理期间无需再进行继代，从而在节约人力时间的同时获得较高的增殖率，为以愈伤组织为基础的高效扩繁体系和遗传转化体系准备条件。
附图说明
图1为实施例中愈伤组织分化出心形胚的电镜观察图。
图2为实施例中愈伤组织分化出鱼雷形胚的电镜观察图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细描述，方便本专业的专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1巨球百合继代1次愈伤组织的培养
(1)愈伤组织的诱导培养：取巨球百合(LiliumbrowniiF.E.BrownexMiellezvar.giganteumG.Y.Li&Z.H.Chen)组培苗鳞片进行愈伤诱导培养，方法是将组培苗鳞茎的鳞片用镊子或解剖刀剥离，将其鳞片尖端切除0.3cm，并在其近轴面用揭解剖刀划2个创口，接种时以创口朝下接触愈伤诱导培养表面，在完全黑暗、25℃的愈伤诱导培养条件下培养50天后，获得直径0.5cm的浅黄色、颗粒性良好的胚性愈伤组织团块,愈伤诱导率为79.1％。
用于接种的愈伤诱导培养基以MS培养基(MurashigeandSkoog,1962)为基本培养基，即每升培养基添加4.43gMS粉，还含有浓度为1mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-dichlorophenoxyacetic，2,4-D)、浓度为0.2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤(6-benzyladenine,6-BA)、30g/L的蔗糖、8g/L琼脂，愈伤诱导培养基的pH为5.8。
(2)愈伤组织的继代培养：愈伤诱导培养80天后，在超净工作台上用镊子或解剖刀剔除愈伤组织团块中褐色的老化部分，接种到新鲜的继代培养基上，每个培养皿接种30块愈伤组织团块，每块愈伤组织团块直径0.3cm。在完全黑暗、25℃的继代培养条件下进行培养，每4周继代一次，获得每月2.3倍的增值率。
用于接种的愈伤继代培养基以MS培养基(MurashigeandSkoog,1962)为基本培养基，即每升培养基添加4.43gMS粉，还含有浓度为1mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-dichlorophenoxyacetic，2,4-D)、浓度为0.2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤(6-benzyladenine,6-BA)、30g/L的蔗糖、4g/L琼脂，继代培养基的pH为5.8。
(3)愈伤组织的扩增培养：愈伤组织团块在继代培养基上培养1个月后，获得2.3倍的增殖率，将愈伤组织团块分切成0.5cm的小块，接种到含相同的继代培养基的培养皿上，用无菌滤膜封口后，用紫外消毒后的保鲜膜和锡纸包裹，中间夹少量脱脂棉，进行30天的低温处理，低温处理条件为1℃，完全黑暗。将低温处理后的愈伤组织团块接种到扩增培养基上，扩增培养基装在口径为6.35cm，高度为9.20cm的柱形瓶中，在光照500lux，温度25℃条件下进行弱光培养。弱光培养60天后，将扩增后的愈伤组织团块分成0.3cm的小块，转接到新鲜的继代培养基上黑暗培养，黑暗培养是在完全黑暗，温度25℃下，继代培养基装在培养皿培中。
扩增培养基以MS培养基(MurashigeandSkoog,1962)为基本培养基，即每升培养基添加4.43gMS粉，还含有浓度为30g/L的蔗糖和4g/L琼脂，扩增培养基的pH为5.8。
经过扩增培养，愈伤团块增长迅速，愈伤团块体积大而不规则，接种到扩增培养前相同的含继代培养基的培养皿上，可获得900块直径5mm的愈伤组织团块，增殖率达到1:30。
实施例2巨球百合短期继代愈伤组织培养
(1)取巨球百合(LiliumbrowniiF.E.BrownexMiellezvar.giganteumG.Y.Li&Z.H.Chen)组培苗鳞片进行愈伤诱导培养，方法是将组培苗鳞茎的鳞片用镊子或解剖刀剥离，将其鳞片尖端切除0.3cm，并在其近轴面用解剖刀划1个创口，接种时以创口朝下接触愈伤诱导培养表面，在完全黑暗、25℃的愈伤诱导培养条件下培养40天后，获得直径0.4cm的浅黄色、颗粒性良好的胚性愈伤组织团块,愈伤诱导率为63.3％。
用于接种的愈伤诱导培养基以MS培养基(MurashigeandSkoog,1962)为基本培养基，即每升培养基添加4.43gMS粉，还含有浓度为2mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-dichlorophenoxyacetic，2,4-D)、0.5mg/Lα-萘乙酸(1-Naphthaleneaceticacid,NAA)、浓度为0.4mg/L的6-苄氨基腺嘌呤(6-benzyladenine,6-BA)、30g/L的蔗糖、7g/L琼脂，愈伤诱导培养基的pH为5.8。
(2)愈伤组织的继代培养：愈伤诱导培养90天后，在超净工作台上用镊子或解剖刀剔除愈伤组织团块中褐色的老化部分，接种到新鲜的继代培养基上，每个培养皿25块愈伤组织团块，每块愈伤直径0.4cm。在完全黑暗、25℃的继代培养条件下进行培养，每4周继代一次，可获得每月2倍的增值率。
用于接种的愈伤继代培养基以MS培养基(MurashigeandSkoog,1962)为基本培养基，即每升培养基添加4.43gMS粉，含有浓度为2mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-dichlorophenoxyacetic，2,4-D)、0.5mg/Lα-萘乙酸(1-Naphthaleneaceticacid,NAA)、浓度为0.4mg/L的6-苄氨基腺嘌呤(6-benzyladenine,6-BA)、30g/L的蔗糖、6g/L琼脂，愈伤继代培养基的pH为5.8。
(3)愈伤组织的扩增培养：愈伤组织团块在继代培养基上培养3个月后，获得每月2倍的增殖率，将愈伤组织团块分切成0.5cm的小块，接种到含相同的继代培养基的培养皿上，用无菌滤膜封口后，用紫外消毒后的保鲜膜和锡纸包裹，中间夹少量脱脂棉，进行60天的低温处理，低温处理条件为3℃，完全黑暗。将进过低温处理后的愈伤组织团块接种到扩增培养基上，扩增培养基装在口径为6.35cm、高度为9.20cm的柱形瓶中，在光照100lux，温度25℃条件下进行弱光培养60天后，将扩增后的愈伤组织团块分成0.4cm的小块，转接到新鲜的继代培养基上黑暗培养，黑暗培养是指完全黑暗、温度25℃的条件，继代培养基装在培养皿培中。
扩增培养基以MS培养基(MurashigeandSkoog,1962)为基本培养基，即每升培养基添加4.43gMS粉，还含有浓度为30g/L的蔗糖和6g/L琼脂，扩增培养基的pH为5.8。
经过扩增培养，愈伤团块增长迅速，愈伤团块体积大而不规则，接种到扩增培养前相同的含继代培养基的培养皿上，可获得450块直径5mm的愈伤组织团块，增殖率达到1:15。
实施例3巨球百合长期继代愈伤组织的培养
(1)取巨球百合(LiliumbrowniiF.E.BrownexMiellezvar.giganteumG.Y.Li&Z.H.Chen)组培苗鳞片进行愈伤诱导培养，方法是将组培苗鳞茎的鳞片用镊子或解剖刀剥离，将其鳞片尖端切除0.3cm，并在其近轴面用揭解剖刀划3个创口，接种时以创口朝下接触培养基表明为宜，在完全黑暗、25℃的愈伤诱导培养条件下培养20天后，获得直径0.3cm的浅黄色、颗粒性良好的胚性愈伤组织团块，愈伤诱导率为78.1％。
用于接种的愈伤诱导培养基以MS培养基(MurashigeandSkoog,1962)为基本培养基，即每升培养基添加4.43gMS粉，还含有浓度为0.1mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-dichlorophenoxyacetic，2,4-D)、1.0mg/Lα-萘乙酸(1-Naphthaleneaceticacid,NAA)、浓度为0.1mg/L的6-苄氨基腺嘌呤(6-benzyladenine,6-BA)、30g/L的蔗糖、6g/L琼脂，愈伤诱导培养基的pH为5.8。
(2)愈伤组织的继代培养：愈伤诱导培养60天后，在超净工作台上用镊子或解剖刀剔除愈伤组织团块中褐色的老化部分，接种到新鲜的继代培养基上，每个培养皿20块愈伤组织团块，每块愈伤组织团块直径0.5cm。在完全黑暗、25℃的继代培养条件下进行培养，每4周继代一次，可获得每月2.5倍的增殖率。
用于接种的愈伤继代培养基以MS培养基(MurashigeandSkoog,1962)为基本培养基即每升培养基添加4.43gMS粉，还含有浓度为0.1mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-dichlorophenoxyacetic，2,4-D)、1.0mg/Lα-萘乙酸(1-Naphthaleneaceticacid,NAA)、浓度为0.1mg/L的6-苄氨基腺嘌呤(6-benzyladenine,6-BA)、30g/L的蔗糖，8g/L琼脂，愈伤继代培养基的pH为5.8。
(3)愈伤组织的扩增培养：愈伤组织团块在继代培养基上继代培养8个月后，将愈伤组织团块分切成0.5cm的小块，接种到含相同的继代培养基的培养皿上，用无菌滤膜封口后，用紫外消毒后的保鲜膜和锡纸包裹，中间夹少量脱脂棉，进行45天的低温处理，低温处理条件为4℃，完全黑暗。将进过低温处理后的愈伤组织团块接种到扩增培养基上，扩增培养基装在口径为6.35cm、高度为9.20cm的柱形瓶中，在光照900lux，温度25℃条件下进行弱光培养60天后，将扩增后的愈伤组织团块分成0.5cm的小块，转接到新鲜的继代培养基上黑暗培养，黑暗培养是指完全黑暗、温度25℃的条件，继代培养基装在培养皿培中。
扩增培养基以MS培养基(MurashigeandSkoog,1962)为基本培养基，即每升培养基添加4.43gMS粉，还含有浓度为30g/L的蔗糖、8g/L琼脂，扩增培养基的pH为5.8。
经过扩增培养，愈伤团块增长迅速，愈伤团块体积大而不规则，接种到扩增培养前相同的含继代培养基的培养皿上，可获得1100块直径5mm的愈伤组织团块，增殖率达到1:36.6。
最后，需要注意的是，以上列举的仅是本发明的具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有很多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容中直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
Claims (1)
1.显著提高野生百合胚性愈伤组织继代增殖率的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)愈伤组织的诱导培养：在超净工作台上，取野生百合组培苗鳞片进行愈伤诱导培养，方法是将组培苗鳞茎的鳞片用镊子或解剖刀剥离，将其鳞片尖端切除0.3cm，并在其近轴面用解剖刀划1～3个创口，接种时以创口朝下接触愈伤诱导培养基表面，愈伤诱导培养20～50天后，获得直径0.3～0.5cm的浅黄色、颗粒状的胚性愈伤组织团块，愈伤诱导率为63.3％～79.1％；
所述愈伤诱导培养是在完全黑暗、25℃的愈伤诱导培养条件下进行；用于接种的愈伤诱导培养基以MS培养基为基本培养基，即每升培养基添加4.43gMS粉，所述愈伤诱导培养基中还含有浓度为0.1～2.0mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸、0～1.0mg/Lα-萘乙酸、浓度为0.1～0.4mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、30g/L的蔗糖、6～8g/L琼脂，愈伤诱导培养基的pH值为5.8；
(2)愈伤组织的继代培养：愈伤诱导培养60～90天后，在超净工作台上用镊子或解剖刀剔除愈伤组织团块中褐色的老化部分，接种到新鲜的继代培养基上；每个装有继代培养基的培养皿中接种20～30块愈伤组织团块，愈伤组织团块的直径在0.3～0.5cm之间，每4周继代一次，每次继代能获得每月2～2.5倍的增殖率，即愈伤组织团块经过一个月的培养，重量增加为接种时的2～2.5倍；
所述继代培养是在完全黑暗、25℃的继代培养条件下进行；用于接种的继代培养基以MS培养基为基本培养基，即每升培养基添加4.43gMS粉，所述继代培养基中还含有浓度为0.1～2.0mg/L的2,4-D、0～1mg/Lα-萘乙酸、0.1～0.4mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、30g/L的蔗糖、4～8g/L琼脂，继代培养基的pH值为5.8；
(3)愈伤组织的扩增培养：
愈伤组织团块在继代培养基上继代培养1～8个月后，将愈伤组织团块分切成0.5cm的小块，接种到含继代培养基的培养皿上，依次用经过紫外灭菌的保鲜膜和锡纸包裹，然后进行30～60天的低温处理，低温处理条件为1～4℃，完全黑暗；且包裹培养皿的锡纸和保鲜膜间填充有脱脂棉，脱脂棉用于在低温处理和恢复常温中保护植物材料；
再将低温处理后的愈伤组织团块接种到扩增培养基上，进行弱光培养，弱光培养是指在光照100～900lux、温度25℃的条件下进行，且扩增培养基装在口径为6.35cm，高度为9.20cm的柱形瓶中；
弱光培养60天后，将扩增后的愈伤组织团块分成0.3～0.5cm的小块，转接到新鲜的继代培养基上黑暗培养，黑暗培养是指：完全黑暗，温度25℃，继代培养基装在培养皿中；经过低温处理和弱光培养后的愈伤组织团块，即为增殖率15～36.6的愈伤组织；
所述扩增培养基以MS培养基为基本培养基，即每升培养基添加4.43gMS粉，扩增培养基中还含有浓度为30g/L的蔗糖和4～8g/L琼脂，扩增培养基的pH值5.8。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410037346.9A CN103798140B (zh) | 2014-01-26 | 2014-01-26 | 显著提高野生百合胚性愈伤组织继代增殖率的培养方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410037346.9A CN103798140B (zh) | 2014-01-26 | 2014-01-26 | 显著提高野生百合胚性愈伤组织继代增殖率的培养方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103798140A CN103798140A (zh) | 2014-05-21 |
| CN103798140B true CN103798140B (zh) | 2016-04-20 |
Family
ID=50695916
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410037346.9A Expired - Fee Related CN103798140B (zh) | 2014-01-26 | 2014-01-26 | 显著提高野生百合胚性愈伤组织继代增殖率的培养方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103798140B (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104126505B (zh) * | 2014-07-07 | 2016-03-23 | 沈阳农业大学 | 用于细叶百合遗传转化和种球快繁的体细胞胚离体再生方法 |
| CN104255711B (zh) * | 2014-09-15 | 2016-03-09 | 上海交通大学 | 一种提高百合胚性愈伤组织保存效果的方法 |
| CN107173236A (zh) * | 2017-07-19 | 2017-09-19 | 合肥申沃园艺有限公司 | 一种野生百合组织培养方法 |
| CN112470932A (zh) * | 2020-12-14 | 2021-03-12 | 连云港市农业科学院 | 一种利用ems试剂诱变进行耐盐百合新品系选育的方法 |
| CN115125267B (zh) * | 2022-06-21 | 2023-11-21 | 沈阳农业大学 | 一种提高东方百合‘西伯利亚’遗传转化效率的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0446374A1 (en) * | 1989-09-30 | 1991-09-18 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | Method of producing seedling |
| CN1613297A (zh) * | 2003-11-07 | 2005-05-11 | 云南省农业科学院园艺作物研究所 | 切花百合组培种苗一次成苗的方法 |
| CN101238794A (zh) * | 2008-03-07 | 2008-08-13 | 贵阳医学院 | 野百合试管鳞茎的诱导方法 |
| CN102696483A (zh) * | 2012-06-19 | 2012-10-03 | 西安文理学院 | 绿花百合快速繁殖方法 |
-
2014
- 2014-01-26 CN CN201410037346.9A patent/CN103798140B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0446374A1 (en) * | 1989-09-30 | 1991-09-18 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | Method of producing seedling |
| CN1613297A (zh) * | 2003-11-07 | 2005-05-11 | 云南省农业科学院园艺作物研究所 | 切花百合组培种苗一次成苗的方法 |
| CN101238794A (zh) * | 2008-03-07 | 2008-08-13 | 贵阳医学院 | 野百合试管鳞茎的诱导方法 |
| CN102696483A (zh) * | 2012-06-19 | 2012-10-03 | 西安文理学院 | 绿花百合快速繁殖方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 杨柏云等.龙牙百合体细胞胚的诱导及植株再生.《南昌大学学报（理科版）》.2005,第29卷(第6期),第536-539页，尤其是第1-2节. * |
| 翟彦等.百合体细胞胚胎发生和植株再生.《西北植物学报》.2011,第31卷(第4期),第834-841页，尤其是第2.3.2节. * |
| 陆美莲等.均匀正交设计在百合组织培养中的应用.《西南农业大学学报（自然科学版）》.2004,第26卷(第6期),第699-702页，尤其是摘要及第1.3节. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103798140A (zh) | 2014-05-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102119655B (zh) | 铁皮石斛自然光快繁育苗方法 | |
| CN103798140B (zh) | 显著提高野生百合胚性愈伤组织继代增殖率的培养方法 | |
| CN103733995B (zh) | 一种芍药愈伤组织诱导方法 | |
| CN102783419A (zh) | 一种薄荷节间茎段高效再生体系的方法 | |
| CN104396742A (zh) | 用五步法诱导淡黄花百合珠芽愈伤组织再分化出无菌苗 | |
| CN103444523A (zh) | 一种花药快速诱导胚性愈伤组织再生植株的方法 | |
| CN101548647A (zh) | 牡丹愈伤组织诱导方法 | |
| CN109430056B (zh) | 一种诱导矾根不定芽再生的方法 | |
| CN106106178B (zh) | 一种糖果鸢尾的组织培养方法 | |
| CN104719158A (zh) | 一种以种子为外植体的快速建立中型狼尾草组织培养再生体系的方法 | |
| CN102511391B (zh) | 风信子离体快速繁殖方法 | |
| CN103583357A (zh) | 一种生石花无菌播种及再生体系建立的方法 | |
| CN103270950A (zh) | 一种菊花简化组织培养的方法 | |
| CN106258976B (zh) | 一种芥菜型油菜的组织培养快速育苗方法 | |
| CN102726302B (zh) | 香蕉组织培养的暗培养方法 | |
| CN102067818B (zh) | 试管藕诱导方法 | |
| CN101946711A (zh) | 紫花苜蓿高效组织培养再生的方法 | |
| CN103548695A (zh) | 一种岩黄连组织培养快速繁殖方法 | |
| CN102668991B (zh) | 青霉素在葡萄试管简易繁殖上的应用及葡萄试管繁殖新技术 | |
| CN109349108A (zh) | 一种甜荞体细胞胚胎发生与植株再生方法 | |
| CN101574057A (zh) | 一种夏蜡梅组培快繁方法 | |
| CN104285816A (zh) | 一种文冠果的组织培养快繁方法 | |
| CN108094200A (zh) | 一种热处理结合茎尖剥离获得安祖花脱毒苗的培育方法 | |
| CN103125387A (zh) | 一种利用植物组织培养技术生产百合鳞茎的方法 | |
| CN108967201B (zh) | 一种植物通用型增殖培养基及组织培养方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20160420 Termination date: 20190126 |