CN102511391B - 风信子离体快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种生物技术领域内的风信子离体快速繁殖方法，所述方法包括如下步骤：(a)取露地种植2～3个月的风信子种球，消毒，剥除外层鳞片；(b)剥取小花花瓣，平放在MS固体培养基上进行不定芽的诱导生长培养，获得带有不定芽丛的组织块；(c)纵分组织块，在芽伸长培养基上进行芽伸长培养；(d)不定芽伸长至2～4cm时，切分后放入生根培养基中进行诱导生根培养，获得风信子幼苗。本发明的方法利用风信子的幼嫩小花瓣片为外植体，直接再生大量不定芽，继而得到再生苗，与使用鳞片作为外植体进行组织培养相比，本发明的方法再生效率增高，出芽率达到100％左右，平均每个外植体诱导再生的芽数量可达20个左右。
Description
技术领域
本发明涉及一种生物技术领域内的快速繁殖方法，具体涉及一种风信子离体快速繁殖方法。
背景技术
风信子(Hyacinthus orientalis L.)是百合科风信子属多年生草本植物，原产地中海和南非，是世界各地广泛应用的极具观赏性的春季球根花卉。我国于上世纪八十年代从荷兰引进种植，但传统的繁殖方法耗时较长，繁殖效率较低，同时种球的价格昂贵，不能满足市场的需求，限制了风信子在国内的种植。因此，通过组织培养进行风信子的快速繁殖是有效的技术手段，有利于加大风信子在我国的推广。
风信子鳞片是最为常用的快速繁殖的组培材料。研究表明，风信子叶片和子房也可以再生形成小苗。以鳞茎为外植体进行再生虽然取材相对较方便，但由于鳞茎带菌严重，常常导致消毒不彻底，培养过程中反复污染现象非常严重，增大工作量，而且以鳞片为外植体再生效率并不十分理想。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种风信子离体快速繁殖方法。本发明的方法再生效率增高，污染率降低，通过调节培养基条件提高了诱导率，缩短了再生周期，此再生体系适用于多个风信子品种。
本发明是通过以下的技术方案实现的，本发明的风信子离体快速繁殖方法，包括如下步骤：取风信子小花花瓣作为外植体，进行再生培养，获得风信子幼苗。
优选地，所述的风信子离体快速繁殖方法，包括如下步骤：
(a)取露地种植2～3个月的风信子种球，消毒，剥除外层鳞片；
(b)剥取小花花瓣，平放在MS固体培养基上进行不定芽的诱导生长培养，获得带有不定芽丛的组织块；
(c)纵分组织块，在芽伸长培养基上进行芽伸长培养；
(d)不定芽伸长至2～4cm时，切分后放入生根培养基中进行诱导生根培养，获得风信子幼苗。
优选地，步骤(b)中，所述MS固体培养基为MS+BA 2.0mg/L+NAA 1.0mg/L，pH 5.8，蔗糖30g/L，琼脂5g/L。
优选地，步骤(b)中，所述诱导生长培养的条件为：温度25℃，光照：16光期/8暗期。
优选地，步骤(c)中，所述芽伸长培养基为MS+BA0.5mg/L+NAA1.0mg/L，pH5.8，蔗糖30g/L，琼脂5g/L。
优选地，步骤(c)中，所述芽伸长培养的条件为：温度25℃，光照：16光期/8暗期。
优选地，步骤(d)中，所述生根培养基为：MS+NAA0.5mg/L+活性炭1.0g/L，pH 5.8，蔗糖30g/L，琼脂5g/L。
优选地，步骤(d)中，所述诱导生根培养的条件为：温度25℃，光照：16光期/8暗期。
本发明具有如下的有益效果：本发明的方法利用风信子的幼嫩小花瓣片为外植体，直接再生大量不定芽，继而得到再生苗，与使用鳞片作为外植体进行组织培养相比，本发明的方法再生效率增高，出芽率为100％左右，平均每个外植体诱导再生的芽数量可达20个左右，污染率降低，培养过程中不会出现反复污染的情况，通过调节培养基条件可提高诱导率并缩短再生周期。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1
选择优良风信子品种吉普赛女王(Gipsy Queen)于当年11月左右种植于大田中，次年1月中旬挖取种球；
取幼嫩小花瓣片为外植体进行芽诱导培养，培养基为MS+BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L，pH 5.8，蔗糖30g/L，琼脂5g/L。培养条件为：温度25℃，光照：16光期/8暗期。出芽率可以达到70％，平均每个外植体诱导再生的芽数量为8个左右。
40天后花瓣片上出现大量芽丛，将芽丛切分后，放入芽伸长培养基中进行培养，培养基为MS+NAA0.5mg/L，pH5.8，蔗糖30g/L，琼脂5g/L。培养条件同上。
30天后芽伸长到2-4cm，切分芽丛，放入生根培养基中培养，生根培养基为MS+NAA0.5mg/L，pH 5.8，蔗糖30g/L，琼脂5g/L。培养条件同上。20天后生出3-4条根后得到再生苗。炼苗后移栽至小盆中或露地，适当遮荫一周，再生苗可正常生长。培养过程中无反复污染情况。
实施例2
选择优良风信子品种吉普赛女王(Gipsy Queen)于当年11月左右种植于大田中，次年1月中旬挖取种球；
取幼嫩小花瓣片为外植体进行芽诱导培养，培养基为MS+BA2.0mg/L+NAA1.0mg/L，pH 5.8，蔗糖30g/L，琼脂5g/L。培养条件为：温度25℃，光照：16光期/8暗期。出芽率可以达到100％，平均每个外植体诱导再生的芽数量为20个左右。
30天后花瓣片上出现大量芽丛，将芽丛切分后，放入芽伸长培养基中进行培养，培养基为MS+BA0.5mg/L+NAA1.0mg/L，pH5.8，蔗糖30g/L，琼脂5g/L。培养条件同上。
20天后待芽伸长到2-4cm，切分芽丛，放入生根培养基中培养，生根培养基为MS+NAA0.5mg/L+活性炭1.0g/L，pH 5.8，蔗糖30g/L，琼脂5g/L。培养条件同上。10天后待生出3-4条根后得到再生苗。炼苗后移栽至小盆中或露地，适当遮荫一周，再生苗可正常生长。培养过程中无反复污染情况。
实施例3
选择优良风信子品种吉普赛女王(Gipsy Queen)于当年11月左右种植于大田中，次年1月中旬挖取种球；
取幼嫩小花瓣片为外植体进行芽诱导培养，培养基为MS+BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L，pH 5.8，蔗糖30g/L，琼脂5g/L。培养条件为：温度25℃，光照：16光期/8暗期。出芽率可以达到80％，平均每个外植体诱导再生的芽数量为12个左右。
35天后花瓣片上出现大量芽丛，将芽丛切分后，放入芽伸长培养基中进行培养，培养基为MS+NAA1.0mg/L，pH5.8，蔗糖30g/L，琼脂5g/L。培养条件同上。
25天后待芽伸长到2-4cm，切分芽丛，放入生根培养基中培养，生根培养基为MS+NAA0.5mg/L+活性炭2.0g/L，pH 5.8，蔗糖30g/L，琼脂5g/L。培养条件同上。12天后待生出3-4条根后得到再生苗。炼苗后移栽至小盆中或露地，适当遮荫一周，再生苗可正常生长。培养过程中无反复污染情况。
实施例4
选择优良风信子品种安娜玛丽(Anna Marie)于当年11月左右种植于大田中，次年1月中旬挖取种球；
取幼嫩小花瓣片为外植体进行芽诱导培养，培养基为MS+BA2.0mg/L+NAA1.0mg/L，pH 5.8，蔗糖30g/L，琼脂5g/L。培养条件为：温度25℃，光照：16光期/8暗期。出芽率可以达到100％，平均每个外植体诱导再生的芽数量为22个左右。
30天后花瓣片上出现大量芽丛，将芽丛切分后，放入芽伸长培养基中进行培养，培养基为MS+BA0.5mg/L+NAA1.0mg/L，pH5.8，蔗糖30g/L，琼脂5g/L。培养条件同上。
20天后待芽伸长到2-4cm，切分芽丛，放入生根培养基中培养，生根培养基为MS+NAA0.5mg/L+活性炭1.0g/L，pH 5.8，蔗糖30g/L，琼脂5g/L。培养条件同上。10天后待生出3-4条根后得到再生苗。炼苗后移栽至小盆中或露地，适当遮荫一周，再生苗可正常生长。培养过程中无反复污染情况。
实施例5
选择优良风信子品种星空(Sky Jacket)于当年11月左右种植于大田中，次年1月中旬挖取种球；
取幼嫩小花瓣片为外植体进行芽诱导培养，培养基为MS+BA2.0mg/L+NAA1.0mg/L，pH 5.8，蔗糖30g/L，琼脂5g/L。培养条件为：温度25℃，光照：16光期/8暗期。出芽率可以达到100％，平均每个外植体诱导再生的芽数量为18个左右。
30天后花瓣片上出现大量芽丛，将芽丛切分后，放入芽伸长培养基中进行培养，培养基为MS+BA0.5mg/L+NAA1.0mg/L，pH5.8，蔗糖30g/L，琼脂5g/L。培养条件同上。
20天后待芽伸长到2-4cm，切分芽丛，放入生根培养基中培养，生根培养基为MS+NAA0.5mg/L+活性炭1.0g/L，pH 5.8，蔗糖30g/L，琼脂5g/L。培养条件同上。10天后待生出3-4条根后得到再生苗。炼苗后移栽至小盆中或露地，适当遮荫一周，再生苗可正常生长。培养过程中无反复污染情况。
综上所述，本发明的方法再生效率增高，污染率降低，通过调节培养基条件提高了诱导率，缩短了再生周期，此再生体系适用于多个风信子品种。
Claims (4)
1.一种风信子离体快速繁殖方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)取露地种植2～3个月的风信子种球，消毒，剥除外层鳞片；
(b)剥取小花花瓣，平放在MS固体培养基上进行不定芽的诱导生长培养，获得带有不定芽丛的组织块；
(c)纵分组织块，在芽伸长培养基上进行芽伸长培养；
(d)不定芽伸长至2～4cm时，切分后放入生根培养基中进行诱导生根培养，获得风信子幼苗；
步骤(b)中，所述MS固体培养基为MS + BA 2.0mg/L + NAA 1.0mg/L，pH 5.8，蔗糖30g/L，琼脂5g/L；
步骤(c)中，所述芽伸长培养基为MS + BA0.5mg/L + NAA1.0mg/L，pH5.8，蔗糖30g/L，琼脂5g/L；
步骤(d)中，所述生根培养基为：MS + NAA0.5mg/L＋活性炭1.0g/L，pH 5.8，蔗糖30g/L，琼脂5g/L。
2.如权利要求1所述的风信子离体快速繁殖方法，其特征在在于，步骤(b)中，所述诱导生长培养的条件为：温度25℃，光照：16光期/8暗期。
3.如权利要求1所述的风信子离体快速繁殖方法，其特征在在于，步骤(c)中，所述芽伸长培养的条件为：温度25℃，光照：16光期/8暗期。
4.如权利要求1所述的风信子离体快速繁殖方法，其特征在在于，步骤(d)中，所述诱导生根培养的条件为：温度25℃，光照：16光期/8暗期。
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