CN103783261A - 微生物二次培育获得家畜用益生菌及次级代谢产物的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了微生物二次培育获得家畜用益生菌及次级代谢产物的方法，包括复合菌制备、培养液制备、物料混合、调节pH值、罐体杀菌、装罐培养、检测、产品，该方法能够充分利用菌体自生的作用和菌体次级贷产物的营养物质，还有培养液中的营养成分充分给家畜利用起来，所用的物料和营养成分都可以得到利用，而所用益生菌的次级代谢产物中并不含有有毒有害物质，即达到了高的营养物质利用率，也很高的活菌数量。

Description

微生物二次培育获得家畜用益生菌及次级代谢产物的方法

技术领域

本身发明涉及农业类其他类不包含的食品或食料中专门适用于动物的喂养饲料中补充营养物质益生菌的动物饲料领域，尤指微生物二次培育获得家畜用益生菌及次级代谢产物的方法。

背景技术

枯草芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌，是芽孢杆菌属的一种，单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀，无荚膜，周生鞭毛，能运动，革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭，需氧菌，可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚，在遗传学研究中应用广泛，对此菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。

枯草芽孢杆菌的作用：1．枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，这些活性物质对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用；2．枯草芽孢杆菌迅速消耗环境中的游离氧，造成肠道低氧，促进有益厌氧菌生长，并产生乳酸等有机酸类，降低肠道PH值，间接抑制其它致病菌生长；3．刺激动物免疫器官的生长发育，激活T、B淋巴细胞，提高免疫球蛋白和抗体水平，增强细胞免疫和体液免疫功能，提高群体免疫力；4．枯草芽孢杆菌菌体自身合成α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类，在消化道中与动物体内的消化酶类一同发挥作用；5．能合成维生素B1、B2、B6、烟酸等多种B族维生素，提高动物体内干扰素和巨噬细胞的活性。

地衣芽孢杆菌，地衣芽孢杆菌细胞形态和排列呈杆状、单生，可调整菌群失调达到治疗目的，可促使机体产生抗菌活性物质、杀灭致病菌，能产生抗活性物质，并具有独特的生物夺氧作用机制，能抑制致病菌的生长繁殖，具有较强的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性，促进饲料中营养素降解，使水产类动物对饲料的吸收利用更加充分。

地衣芽孢杆菌的作用：1、促进肠道内正常生理性厌氧菌的生长，调整肠道菌群失调，恢复肠道功能；2、对肠道细菌感染具有特效，对轻型或重型急性肠炎，轻型及普通型的急性菌痢等，均有明显疗效；3、能产生抗活性物质，并具有独特的生物夺氧作用机制，能抑制致病菌的生长繁殖。适用于细菌原因引起的肠道菌群失调症以及肠道需要保健的养殖动物。

乳酸菌，乳酸菌是一群能从可发酵性碳水化合物中产生大量乳酸的***的通称，广泛存在于人、畜、禽肠道、许多食品、物料及少数临床样品中，大量研究表明，乳酸菌能够调节机体胃肠道正常菌群、保持微生态平衡，提高食物消化率和生物价，降低血清胆固醇，控制内毒素，抑制肠道内腐败菌生长繁殖和腐败产物的产生，制造营养物质，刺激组织发育，从而对机体的营养状态、生理功能、细胞感染、药物效应、毒性反应、免疫反应、肿瘤发生、衰老过程和突然的应急反应等产生作用。

因为酵母菌的主要成分是蛋白质，几乎占了酵母干物质的一半含量，而且人体必需氨基酸含量充足，尤其是谷物中较缺乏的赖氨酸含量较多，另一方面，含有大量的维生素B1,维生素B2及尼克酸。

以上菌体对家畜的养殖和生长都具有很好的作用，现有技术中一般将以上几种菌体的芽胞化菌体和玉米芯粉、可溶性淀粉等混合获得复合菌体，将这些菌体的复合物加工成添加剂或饲料，直接给家畜食用或饮用，存在的问题是为了保证家畜使用过程中的活菌数达标，一般不低于1×10⁶CFU/g，而需要加入大于1×10⁶CFU/g的活菌进去，因为这些菌体不可能全部都被家畜食用，有些还会因为各种原因失活，这样带来的问题是成本的上升和使用效果的不明显。

作为改进技术有的将这些菌体加工成了饲料，但其本质还是使用芽胞化的菌体，问题并未解决，同时还在加工过程中会导致部分菌体失活的概率变大。

公开号：CN101756044A的中国专利，专利名称：利用微生物发酵生产猪益生菌发酵饲料的方法，该发明公开了一种利用微生物发酵生产猪益生菌发酵饲料的方法，由下述步骤组成：(1)培养好氧真菌作为生产菌种；(2)产乳酸芽孢杆菌的培养；(3)固态培养：①将豆粕、棉粕、醋糟与麦麸或/和米糠充分混合，加水，制成混合物；②接入步骤(1)和步骤(2)制得的生产菌种；③进行堆积或装袋堆码培养，制得猪无抗发酵饲料。本发明的方法简便、产品性能稳定、易于大规模生产，并通过该方法制备的猪饲料能够有效降低了饲料的抗营养因子，并对棉粕有脱毒作用，降低了饲料中无机磷的投入量，提高了饲料原料中有机磷的利用，促进了猪对饲料中营养物质的吸收，降低了饲料对环境的污染。其本身主要是通过发酵这个过程降低了豆类植物中的植酸磷含量，将植酸磷转化成猪更易吸收的有机磷，提高了饲料营养的吸收率，并没有涉及到益生菌的作用效果，该技术中的益生菌作用效果也和复合菌差不多，甚至还有所下降。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了微生物二次培育获得家畜用益生菌及次级代谢产物的方法，该方法能够充分利用菌体自生的作用和菌体次级贷产物的营养物质，还有培养液中的营养成分充分给家畜利用起来，所用的物料和营养成分都可以得到利用，而所用益生菌的次级代谢产物中并不含有有毒有害物质，即达到了高的营养物质利用率，也很高的活菌数量。

为达到上述效果，本发明采用以下技术实现，微生物二次培育获得家畜用益生菌及次级代谢产物的方法，包括复合菌制备、培养液制备、物料混合、调节pH值、罐体杀菌、装罐培养、检测、产品，其中步骤如下：

a、复合菌体制备：将乳酸菌、地衣芽孢杆菌、枯草杆菌、酵母菌组成获得复合菌群，所述复合菌群中乳酸菌占菌群总重量的40%，地衣芽孢杆菌占菌群总重量的15%，枯草杆菌占菌群总重量的15%，酵母菌占菌群总重量的30%，每千克复合菌群与500g载体混合搅拌获得复合菌；

b、培养液制备：将酵母浸出粉5g，红糖20g，硫酸铵2g，硫酸锰0.05g，氯化钙0.1g，食盐5g，磷酸二氢钾2g，维生素3g，氨基酸4g，抗静肽6g，蛋白粉4g，糖精钠1g，依次加入到1kg的蒸馏水中搅拌均匀，获得所需的培养液；

c、物料混合：按每千克培养液中加入复合菌的比例为培养液重量的1-5%加入复合菌，并搅拌均匀，获得菌体混合液；

d、调节pH值：使用稀酸和稀碱来对应调节菌体混合液的pH值，将pH值调节至3.5即可；

e、罐体清洗：70～90℃的热水清洗罐体，清洗次数为1～3次；

f、装罐培养：将调节好pH值的菌体混合液导入完成杀菌的培养罐中，将罐体内的温度设定为32～37℃，搅拌器转动速度为45r/min，培养时间为24小时，不通入杀菌空气；

g、检测：培养结束后提取部分培养液进行检测，要求活菌数大于1×10⁶CFU/g，有毒有害成分低于国家标准或行业标准，活菌数都够的继续培养，继续培养时每个1小时检测一次；

h、产品：检测合格后将培养罐内的菌体混合液导出，导出的菌体混合液用消毒后的塑料桶密封储存，该阶段可以直接供家畜食用，也可以用于加工添加剂。

作为本发明的进一步改进，所述载体为可溶性淀粉、米糠。

作为本发明的进一步改进，所述维生素包括维生素C。

作为本发明的进一步改进，所述蛋白粉包括大豆蛋白粉。

作为本发明的进一步改进，所述蒸馏水可以用麦芽汁代替。

本身发明与现有技术相比具有以下有益效果：

    1、该方法能够充分利用菌体自生的作用和菌体次级贷产物的营养物质，还有培养液中的营养成分充分给家畜利用起来，所用的物料和营养成分都可以得到利用，而所用益生菌的次级代谢产物中并不含有有毒有害物质，即达到了高的营养物质利用率，也很高的活菌数量；

2、再该培养液下以上几种菌体繁殖很快，次级代谢产物有效的抑制其他杂菌的生长，减少了工艺操作步骤，所以罐体清洗只需要70～90℃的热水清洗罐体，清洗次数为1～3次。

附图说明

图1是微生物二次培育获得家畜用益生菌及次级代谢产物的工艺流程；

图2是培养液的组成成分；

图3是复合菌的组成成分。

具体实施方式

实施例1

如图1至图3所示微生物二次培育获得家畜用益生菌及次级代谢产物的方法，包括复合菌制备、培养液制备、物料混合、调节pH值、罐体杀菌、装罐培养、检测、产品，其中步骤如下：

a、复合菌体制备：将乳酸菌、地衣芽孢杆菌、枯草杆菌、酵母菌组成获得复合菌群，所述复合菌群中乳酸菌占菌群总重量的40%，地衣芽孢杆菌占菌群总重量的15%，枯草杆菌占菌群总重量的15%，酵母菌占菌群总重量的30%，每千克复合菌群与500g载体混合搅拌获得复合菌；

b、培养液制备：将酵母浸出粉5g，红糖20g，硫酸铵2g，硫酸锰0.05g，氯化钙0.1g，食盐5g，磷酸二氢钾2g，维生素3g，氨基酸4g，抗静肽6g，蛋白粉4g，糖精钠1g，依次加入到1kg的蒸馏水中搅拌均匀，获得所需的培养液；

c、物料混合：按每千克培养液中加入复合菌的比例为培养液重量的1-5%加入复合菌，并搅拌均匀，获得菌体混合液；

d、调节pH值：使用稀酸和稀碱来对应调节菌体混合液的pH值，将pH值调节至3.5即可；

e、罐体清洗：70℃的热水清洗罐体，清洗次数为3次；

f、装罐培养：将调节好pH值的菌体混合液导入完成杀菌的培养罐中，将罐体内的温度设定为32℃，搅拌器转动速度为45r/min，培养时间为24小时，不通入杀菌空气；

g、检测：培养结束后提取部分培养液进行检测，要求活菌数大于1×10⁶CFU/g，有毒有害成分低于国家标准或行业标准，活菌数都够的继续培养，继续培养时每个1小时检测一次；

h、产品：检测合格后将培养罐内的菌体混合液导出，导出的菌体混合液用消毒后的塑料桶密封储存，该阶段可以直接供家畜食用，也可以用于加工添加剂，所述载体为可溶性淀粉、米糠，所述维生素包括维生素C，所述蛋白粉包括大豆蛋白粉，所述蒸馏水可以用麦芽汁代替。

实施例2

如图1至图3所示微生物二次培育获得家畜用益生菌及次级代谢产物的方法，包括复合菌制备、培养液制备、物料混合、调节pH值、罐体杀菌、装罐培养、检测、产品，其中步骤如下：

a、复合菌体制备：将乳酸菌、地衣芽孢杆菌、枯草杆菌、酵母菌组成获得复合菌群，所述复合菌群中乳酸菌占菌群总重量的40%，地衣芽孢杆菌占菌群总重量的15%，枯草杆菌占菌群总重量的15%，酵母菌占菌群总重量的30%，每千克复合菌群与500g载体混合搅拌获得复合菌；

b、培养液制备：将酵母浸出粉5g，红糖20g，硫酸铵2g，硫酸锰0.05g，氯化钙0.1g，食盐5g，磷酸二氢钾2g，维生素3g，氨基酸4g，抗静肽6g，蛋白粉4g，糖精钠1g，依次加入到1kg的蒸馏水中搅拌均匀，获得所需的培养液；

c、物料混合：按每千克培养液中加入复合菌的比例为培养液重量的1-5%加入复合菌，并搅拌均匀，获得菌体混合液；

d、调节pH值：使用稀酸和稀碱来对应调节菌体混合液的pH值，将pH值调节至3.5即可；

e、罐体清洗：90℃的热水清洗罐体，清洗次数为1次；

f、装罐培养：将调节好pH值的菌体混合液导入完成杀菌的培养罐中，将罐体内的温度设定为37℃，搅拌器转动速度为45r/min，培养时间为24小时，不通入杀菌空气；

g、检测：培养结束后提取部分培养液进行检测，要求活菌数大于1×10⁶CFU/g，有毒有害成分低于国家标准或行业标准，活菌数都够的继续培养，继续培养时每个1小时检测一次；

h、产品：检测合格后将培养罐内的菌体混合液导出，导出的菌体混合液用消毒后的塑料桶密封储存，该阶段可以直接供家畜食用，也可以用于加工添加剂，所述载体为可溶性淀粉、米糠，所述维生素包括维生素C，所述蛋白粉包括大豆蛋白粉，所述蒸馏水可以用麦芽汁代替。

Claims (5)

1.微生物二次培育获得家畜用益生菌及次级代谢产物的方法，包括复合菌制备、培养液制备、物料混合、调节pH值、罐体杀菌、装罐培养、检测、产品，其特征在于，步骤如下：

a、复合菌体制备：将乳酸菌、地衣芽孢杆菌、枯草杆菌、酵母菌组成获得复合菌群，所述复合菌群中乳酸菌占菌群总重量的40%，地衣芽孢杆菌占菌群总重量的15%，枯草杆菌占菌群总重量的15%，酵母菌占菌群总重量的30%，每千克复合菌群与500g载体混合搅拌获得复合菌；

b、培养液制备：将酵母浸出粉5g，红糖20g，硫酸铵2g，硫酸锰0.05g，氯化钙0.1g，食盐5g，磷酸二氢钾2g，维生素3g，氨基酸4g，抗静肽6g，蛋白粉4g，糖精钠1g，依次加入到1kg的蒸馏水中搅拌均匀，获得所需的培养液；

c、物料混合：按每千克培养液中加入复合菌的比例为培养液重量的1-5%加入复合菌，并搅拌均匀，获得菌体混合液；

d、调节pH值：使用稀酸和稀碱来对应调节菌体混合液的pH值，将pH值调节至3.5即可；

e、罐体清洗：70-90℃的热水清洗罐体，清洗次数为1-3次；

f、装罐培养：将调节好pH值的菌体混合液导入完成杀菌的培养罐中，将罐体内的温度设定为32～37℃，搅拌器转动速度为45r/min，培养时间为24小时，不通入杀菌空气；

g、检测：培养结束后提取部分培养液进行检测，要求活菌数大于1×10⁶CFU/g，有毒有害成分低于国家标准或行业标准，活菌数都够的继续培养，继续培养时每个1小时检测一次；

h、产品：检测合格后将培养罐内的菌体混合液导出，导出的菌体混合液用消毒后的塑料桶密封储存，该阶段可以直接供家畜食用，也可以用于加工添加剂。

2.根据权利要求1所述微生物二次培育获得家畜用益生菌及次级代谢产物的方法，其特征在于：所述载体为可溶性淀粉、米糠。

3.根据权利要求1所述微生物二次培育获得家畜用益生菌及次级代谢产物的方法，其特征在于：所述维生素包括维生素C。

4.根据权利要求1所述微生物二次培育获得家畜用益生菌及次级代谢产物的方法，其特征在于：所述蛋白粉包括大豆蛋白粉。

5.根据权利要求1所述微生物二次培育获得家畜用益生菌及次级代谢产物的方法，其特征在于：所述蒸馏水可以用麦芽汁代替。

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