CN103782938B - 一种获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法 - Google Patents

一种获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法，含以下步骤：（1）选取带有寄生才女虫的珍珠贝，打开壳体，露出壳体上的才女虫洞穴，预处理后获得才女虫洞穴；（2）在才女虫洞穴两端各设一个开口，自开口处注入麻醉液，等待3～5分钟后，完全打开才女虫洞穴，暴露出洞穴内的才女虫；（3）将才女虫取出，置于装有解麻醉剂的容器中，使才女虫苏醒，获得完整的才女虫个体，其中从注入麻醉液到开始解麻醉，时间控制在10～15min。该方法能避免由于才女虫的挣扎而引起的虫体断裂或死亡，或误伤、误断虫体，能获取活体的、完整的才女虫。

Description

一种获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法
技术领域
本发明属于才女虫技术领域，具体涉及一种获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法。
背景技术
才女虫病是珍珠贝养殖中最常见、危害极大的寄生虫病，能够钻入贝壳内，形成各种形状的洞穴，俗称珍珠贝“黑心肝病”。由于才女虫具有极强的钻孔能力，能够钻穿贝壳，侵入到珍珠贝实质组织，所以经常使珍珠贝的各种器官发生炎症、萎缩等病变，严重影响珍珠贝的生长与发育，甚至导致珍珠贝大规模死亡。活体特征是才女虫形态分类的重要依据，获得活体的才女虫也是研究才女虫习性、建立幼虫培养技术所必备的条件。完整的虫体是形态分类最基本的条件，失去才女虫的任何一部分都有可能导致分类上的错误。所以，获得活体、完整的才女虫对种类鉴定和生活史的研究都具有重要的意义。才女虫隶属于环节动物门多毛纲，是一种柔软、容易断裂的虫体，所以，想获取完整的才女虫具有一定的难度。而珍珠贝寄生的才女虫由于具有洞栖习性，坚硬贝壳的庇护和虫体本身柔软易断的特性使得获取完整活体才女虫的难度更大。
发明内容
本发明的目的在于一种获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法，该方法能避免由于才女虫的挣扎而引起的虫体断裂或死亡，或误伤、误断虫体，能获取活体的、完整的才女虫。
本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：一种获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法，含以下步骤：
(1)选取带有寄生才女虫的珍珠贝，打开壳体，露出壳体上的才女虫洞穴，预处理后获得才女虫洞穴；
(2)在才女虫洞穴两端各设一个开口，自开口处注入麻醉液，等待3～5分钟后，完全打开才女虫洞穴，暴露出洞穴内的才女虫；
(3)将才女虫取出，置于装有解麻醉剂的容器中，使才女虫苏醒，获得完整的才女虫个体，其中从注入麻醉液到开始解麻醉，时间控制在10～15min。
本发明步骤(1)中所述的预处理包括去除才女虫洞穴周边的珍珠贝内脏，并采用过滤海水清洗。
本发明步骤(2)中所述开口的长度优选为0.5～1.5cm。
本发明步骤(2)中所述麻醉液为氯化镁MgCl2和氯化钠NaCl的蒸馏水溶液，其中氯化镁MgCl2的浓度为0.2～0.4mol/L，氯化钠NaCl的浓度为0.11～0.14mol/L。
本发明所述氯化镁MgCl2的浓度为0.3mol/L，氯化钠NaCl的浓度为0.12mol/L。
本发明每个开口注入麻醉液的用量为10～15μL。
本发明步骤(3)中所述的解麻醉剂为过滤海水。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
(1)现有技术并不使用麻醉剂，而是直接挑开洞穴分离才女虫，这样得到完整才女虫的比率低，且耗时长，得到的不完整的才女虫的示意图见图5；而本发明首次在挑取才女虫时使用麻醉剂，既能提高获得虫体的完整率，又能缩短挑取虫体时间；
(2)本发明申请人对麻醉时间和麻醉剂剂量进行了探索发现，用纯粹海水作为溶剂配置的MgCl2溶液更容易导致虫体反应剧烈、挣扎或麻醉过度而导致死亡，而应用生理盐水(0.12mol/LNaCl溶液)作为溶剂配置MgCl2溶液具有以下优点：由于才女虫属于海水寄生虫，淡水配置的生理盐水对其具有一定的麻醉作用，但是麻醉作用不够强；但是，若与MgCl2混合配置麻醉剂却能达到很好效果，生理盐水的等渗作用同时能防止才女虫脱水而死，也能减轻才女虫的挣扎，增加虫体的完整率，虫体也具有更高的苏醒率。
附图说明
图1是本发明实施例1中选取的带有才女虫洞穴的珍珠贝，其中箭头所指的为才女虫洞穴；
图2是本发明实施例1中才女虫头部、尾部伸出洞穴外的示意图；
图3是本发明实施例1中才女虫在洞穴内麻醉后的完整才女虫；
图4是本发明实施例1中解麻醉后的完整的才女虫，该才女虫触手、尾部都齐全；其中1为尾部，2为头部；
图5是不完整的才女虫的示意图，该才女虫的头部无触手，尾部断裂。
具体实施方式
实施例1
本实施例提供的获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法，含以下步骤：
(1)用尖嘴钳在珍珠贝贝壳边缘撕开一道小口，螺丝刀自小口内***将贝壳撬开，小心除去洞穴旁边的内脏，过滤海水将洞穴区域冲洗干净，珍珠贝中的才女虫洞穴如图1中所示；
(2)分别在距洞穴两端1cm处用解剖刀切开一个小口，用解剖针挑开贝壳碎屑，直至将洞穴两端挑开长度约1cm的开口，才女虫头部、尾部伸出洞穴外的示意图如图2中所示；
(3)取样枪吸取10～15μL麻醉液，自洞穴开口处缓缓将其注入，洞穴两端都注入10～15μL，注入麻醉剂后等待3～5min，这时虫体处于麻醉状态，可以避免其挣扎而导致断裂等现象，两端共注射入麻醉剂20～30μL，其中麻醉液的用量非常重要，如果麻醉液用量过多，则会导致才女虫虫体不能苏醒而引起死亡，如果麻醉液用量过少，则不能起到足够的麻醉作用，会导致后续的才女虫不能完整及时的取出；麻醉时间也很重要，如麻醉时间过短，则才女虫虫体麻醉不足，会动，则不能取出完整的才女虫虫体，如麻醉时间过长，则会导致才女虫虫体死亡，不能取出活体的才女虫，具体关于麻醉时间的研究见下表1中所示。
其中，麻醉液为氯化镁MgCl2和氯化钠NaCl的蒸馏水溶液，其中氯化镁MgCl2的浓度为0.3mol/L，氯化钠NaCl的浓度为0.12mol/L，配制过程为：在100mL蒸馏水中，加入MgCl22.85g，加入Nacl0.7g，然后高温高压灭菌、保存待用。
表1麻醉时间实验结果
表1中的实验结果表明，麻醉1min并不能使虫体完全不动，麻醉效果不明显，而麻醉30min后，虫体苏醒率却很低，故麻醉时间应控制在3～15分钟以内，最佳是在3～5min内。
(4)用解剖刀在距离洞穴1cm左右的边缘处切开小口，然后用解剖针挑开碎屑，逐步向洞穴方向挑，直至将洞穴完全打开，暴露出洞穴内的才女虫，在洞穴内麻醉后的完整才女虫见图3中所示；
(5)用镊子将才女虫小心从洞穴内夹出，将其置于装有解麻醉剂(过滤海水)的平皿中，虫体会在3～5min内苏醒，从注入麻醉液到开始解麻醉，时间控制在10～15min，从注入麻醉剂到开始解麻醉，一般时间控制在10min，最多不能超过15min，否则才女虫不能苏醒，解麻醉后的完整的才女虫如图4中所示，该才女虫触手、尾部都齐全；其中1为尾部，2为头部；而不采用麻醉剂时，不完整的才女虫的示意图如图5中所示，该才女虫的头部无触手，尾部断裂。
其中解麻醉剂过滤海水通过以下方法获得：用真空抽滤泵将海水通过孔径为0.22μm的过滤膜，过滤后的海水即为解麻醉剂。
实施例2
本实施例提供的获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法，含以下步骤：
(1)用尖嘴钳在珍珠贝贝壳边缘撕开一道小口，螺丝刀自小口内***将贝壳撬开，小心除去洞穴旁边的内脏，过滤海水将洞穴区域冲洗干净；
(2)分别在距洞穴两端1cm处用解剖刀切开一个小口，用解剖针挑开贝壳碎屑，直至将洞穴两端挑开长度约1cm的开口；
(3)取样枪吸取10～15μL麻醉液，自洞穴开口处缓缓将其注入，洞穴两端都注入10～15μL，注入麻醉剂后等待3～5min，这时虫体处于麻醉状态，可以避免其挣扎而导致断裂等现象，两端共注射入麻醉剂20～30μL，其中麻醉液的用量非常重要，如果麻醉液用量过多，则会导致才女虫虫体不能苏醒而引起死亡，如果麻醉液用量过少，则不能起到足够的麻醉作用，会导致后续的才女虫不能完整及时的取出；麻醉时间也很重要，如麻醉时间过短，则才女虫虫体麻醉不足，会动，则不能取出完整的才女虫虫体，如麻醉时间过长，则会导致才女虫虫体死亡，不能取出活体的才女虫；
其中，麻醉液为氯化镁MgCl2和氯化钠NaCl的蒸馏水溶液，其中氯化镁MgCl2的浓度为0.2mol/L，氯化钠NaCl的浓度为0.11mol/L。
(4)用解剖刀在距离洞穴1cm左右的边缘处切开小口，然后用解剖针挑开碎屑，逐步向洞穴方向挑，直至将洞穴完全打开，暴露出洞穴内的才女虫；
(5)用镊子将才女虫小心从洞穴内夹出，将其置于装有解麻醉剂(过滤海水)的平皿中，虫体会在3～5min内苏醒，从注入麻醉液到开始解麻醉，时间控制在10～15min，从注入麻醉剂到开始解麻醉，一般时间控制在10min，最多不能超过15min，否则才女虫不能苏醒。
其中解麻醉剂过滤海水通过以下方法获得：用真空抽滤泵将海水通过孔径为0.22μm的过滤膜，过滤后的海水即为解麻醉剂。
实施例3
本实施例提供的获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法，含以下步骤：
(1)用尖嘴钳在珍珠贝贝壳边缘撕开一道小口，螺丝刀自小口内***将贝壳撬开，小心除去洞穴旁边的内脏，过滤海水将洞穴区域冲洗干净；
(2)分别在距洞穴两端1cm处用解剖刀切开一个小口，用解剖针挑开贝壳碎屑，直至将洞穴两端挑开长度约1cm的开口；
(3)取样枪吸取10～15μL麻醉液，自洞穴开口处缓缓将其注入，洞穴两端都注入10～15μL，注入麻醉剂后等待3～5min，这时虫体处于麻醉状态，可以避免其挣扎而导致断裂等现象，两端共注射入麻醉剂20～30μL，其中麻醉液的用量非常重要，如果麻醉液用量过多，则会导致才女虫虫体不能苏醒而引起死亡，如果麻醉液用量过少，则不能起到足够的麻醉作用，会导致后续的才女虫不能完整及时的取出；麻醉时间也很重要，如麻醉时间过短，则才女虫虫体麻醉不足，会动，则不能取出完整的才女虫虫体，如麻醉时间过长，则会导致才女虫虫体死亡，不能取出活体的才女虫；
其中，麻醉液为氯化镁MgCl2和氯化钠NaCl的蒸馏水溶液，其中氯化镁MgCl2的浓度为0.4mol/L，氯化钠NaCl的浓度为0.14mol/L。
(4)用解剖刀在距离洞穴1cm左右的边缘处切开小口，然后用解剖针挑开碎屑，逐步向洞穴方向挑，直至将洞穴完全打开，暴露出洞穴内的才女虫；
(5)用镊子将才女虫小心从洞穴内夹出，将其置于装有解麻醉剂(过滤海水)的平皿中，虫体会在3～5min内苏醒，从注入麻醉液到开始解麻醉，时间控制在10～15min，从注入麻醉剂到开始解麻醉，一般时间控制在10min，最多不能超过15min，否则才女虫不能苏醒。
其中解麻醉剂过滤海水通过以下方法获得：用真空抽滤泵将海水通过孔径为0.22μm的过滤膜，过滤后的海水即为解麻醉剂。
实施例4
与实施例3不同的是，其中，麻醉液为氯化镁MgCl2和氯化钠NaCl的蒸馏水溶液，其中氯化镁MgCl2的浓度为0.1mol/L，氯化钠NaCl的浓度为0.12mol/L。
实施例5
与实施例3不同的是，其中，麻醉液为氯化镁MgCl2和氯化钠NaCl的蒸馏水溶液，其中氯化镁MgCl2的浓度为0.6mol/L，氯化钠NaCl的浓度为0.12mol/L。
对照实施例1
与实施例3不同的是，其中，麻醉液为氯化镁MgCl2的蒸馏水溶液，其中氯化镁MgCl2的浓度为0.1mol/L。
对照实施例2
与实施例3不同的是，其中，麻醉液为氯化镁MgCl2的蒸馏水溶液，其中氯化镁MgCl2的浓度为0.3mol/L。
对照实施例3
与实施例3不同的是，其中，麻醉液为氯化镁MgCl2的蒸馏水溶液，其中氯化镁MgCl2的浓度为0.6mol/L。
对照实施例4
与实施例3不同的是，其中，麻醉液为氯化钠NaCl的蒸馏水溶液，其中氯化钠NaCl的浓度为0.12mol/L。
上述实施例1、4、5和对照实施例1-4中的麻醉效果如下表2中所示：
表2实施例1、4、5和对照实施例1-4的麻醉效果实验结果
表2中的实验结果表明，0.12mol/LNacl溶液对虫体具有一定的麻醉作用；0.1mol/LMgCl2溶液麻醉作用不明显，虫体在挑取过程中活动剧烈，取得完整虫体的几率小；0.6mol/LMgCl2溶液麻醉作用明显，但是滴加麻醉剂开始阶段发现，虫体反应比滴加原池水反应更加激烈，进入麻醉阶段时间也很短，苏醒率比其他浓度组明显降低；0.3mol/LMgCl2溶液具有较高的完整虫体率和苏醒率，是实验组中最适合的浓度；另外，MgCl2—Nacl混合液的麻醉作用总体都比单独使用MgCl2溶液或Nacl溶液要好，0.12mol/LNaCl溶液是生理盐水的浓度，不但具有一定的麻醉作用，而且具有维持渗透压的作用，能够避免才女虫细胞破裂，不会让细胞过分吸水或脱水，这样能保证麻醉后的才女虫有更好的苏醒率。
本发明可用其他的不违背本发明的精神或主要特征的具体形式来概述。本发明的上述实施例都只能认为是对本发明的说明而不是限制，凡是依据本发明的实质技术对以上实施例所作的任何细微修改、等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。

Claims (7)

1.一种获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法，其特征是含以下步骤：
（1）选取带有寄生才女虫的珍珠贝，打开壳体，露出壳体上的才女虫洞穴，预处理后获得才女虫洞穴；
（2）在才女虫洞穴两端各设一个开口，自开口处注入麻醉液，等待3～5分钟后，完全打开才女虫洞穴，暴露出洞穴内的才女虫；
（3）将才女虫取出，置于装有解麻醉剂的容器中，使才女虫苏醒，获得完整的才女虫个体，其中从注入麻醉液到开始解麻醉，时间控制在10～15min。
2.根据权利要求1所述的获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法，其特征是：步骤（1）中所述的预处理包括去除才女虫洞穴周边的珍珠贝内脏，并采用过滤海水清洗。
3.根据权利要求1所述的获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法，其特征是：步骤（2）中所述开口的长度为0.5～1.5cm。
4.根据权利要求1所述的获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法，其特征是：步骤（2）中所述麻醉液为氯化镁MgCl2和氯化钠NaCl的蒸馏水溶液，其中氯化镁MgCl2的浓度为0.2～0.4mol/L，氯化钠NaCl的浓度为0.11～0.14mol/L。
5.根据权利要求4所述的获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法，其特征是：所述氯化镁MgCl2的浓度为0.3mol/L，氯化钠NaCl的浓度为0.12mol/L。
6.根据权利要求4或5所述的获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法，其特征是：每个开口注入麻醉液的用量为10～15μL。
7.根据权利要求1所述的获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法，其特征是：步骤（3）中所述的解麻醉剂为过滤海水。
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