CN103748088A - 酪氨酸激酶抑制剂 - Google Patents

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CN103748088A CN201280038959.3A CN201280038959A CN103748088A CN 103748088 A CN103748088 A CN 103748088A CN 201280038959 A CN201280038959 A CN 201280038959A CN 103748088 A CN103748088 A CN 103748088A
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Abstract

本申请公开了根据式I的化合物：其中变量如本文所述所定义，其抑制Btk。本文公开的化合物用于调控Btk的活性，并治疗与过度Btk活性相关的疾病。化合物进一步被用于治疗与异常B-细胞增殖作用相关的炎性和自身免疫性疾病，例如类风湿性关节炎。还公开了包含式I化合物和至少一种载体、稀释剂或赋形剂的组合物。

Description

酪氨酸激酶抑制剂
发明领域
本发明涉及抑制Btk并且可以用于治疗由异常B-细胞活化导致的自身免疫疾病和炎性疾病的新型衍生物的用途。本文所述的新型化合物用于类风湿性关节炎和哮喘的治疗。
蛋白质激酶组成人类酶的最大家族之一并且通过添加磷酸基团到蛋白质上来调节许多不同的信号传导过程(T.Hunter，Cell 1987 50：823-829)。特别地，酪氨酸激酶磷酸化蛋白质在酪氨酸残基的酚部分。酪氨酸激酶家族包括控制细胞生长、迁移和分化的成员。异常的激酶活性已经涉及许多人类疾病，包括癌症、自身免疫病症和炎性疾病。由于蛋白质激酶属于细胞信号传导的关键调节剂，它们提供用小分子激酶抑制剂来调节细胞功能的目标，并且因此成为了良好的药物设计靶标。除了激酶介导的疾病过程的治疗，激酶活性的选择性和有效抑制剂还可用于研究细胞信号传导过程和鉴定其他具有治疗意义的细胞靶标。
关于B细胞在自身免疫和/或炎性疾病的发病机制中的关键作用存在良好的证据。消耗B细胞的基于蛋白质的治疗剂如Rituxan针对自身抗体导致的炎性疾病如类风湿性关节炎是有效的(Rastetter等人Annu Rev Med2004 55：477)。因此，在B-细胞活化中发挥作用的蛋白质激酶的抑制剂应该是对于B细胞介导的疾病病理如自身抗体生成的有用的治疗剂。
通过B-细胞受体(BCR)的信号传导控制一系列B细胞应答，包括增殖和分化到成熟的抗体生成细胞。BCR是B-细胞活性的关键调节点并且异常的信号传导可以导致失调的B-细胞增殖和病原性自身抗体的形成，其导致多种自身免疫疾病和/或炎性疾病。酪氨酸蛋白激酶(Btk)是在BCR的膜近端和紧接下游的非-BCR相关的激酶。Btk的缺乏已经显示阻断BCR信号传导，并且因此Btk的抑制可以是阻断B细胞介导的疾病过程的有效治疗方法。
Btk是酪氨酸激酶Tec家族的成员，并且显示是早期B细胞形成以及成熟B细胞活化和存活的关键调节剂(Khan等人Immunity 1995 3：283；Ellmeier等人J.Exp.Med.2000 192：1611)。人中的Btk突变导致病症X染色体连锁性无γ球蛋白血症(XLA)(Rosen等人New Eng.J.Med.1995333：431和Lindvall等人Immunol.Rev.2005 203：200中综述)。这些患者是免疫受损的，并且显示受损的B细胞成熟，降低的免疫球蛋白和外周B细胞水平，减少的不依赖T细胞的免疫应答以及在BCR刺激后的减弱的钙动员。
关于Btk在自身免疫病症和炎性疾病中的作用的证据已经由Btk-缺陷型小鼠模型提供。在***性红斑狼疮(SLE)的临床前鼠模型中，Btk缺陷型小鼠显示疾病进展的显著改善。此外，Btk-缺陷型小鼠对胶原诱导的关节炎具有抗性(Jansson和Holmdahl Clin.Exp.Inmunol.1993 94：459)。已经证明选择性Btk抑制剂在小鼠关节炎模型中的剂量依赖性功效(Z.Pan等人，Chem.Med Chem.2007 2：58-61)。
Btk还由除了B-细胞之外可能涉及疾病过程的细胞表达。例如，Btk由肥大细胞表达并且Btk缺陷型骨髓来源的肥大细胞显示受损的抗原诱导的脱粒(Iwaki等人J.Biol.Chem.2005 280：40261)。这显示Btk可以用于治疗病理性肥大细胞反应如***反应和哮喘。此外，其中缺乏Btk活性的来自XLA患者的单核细胞显示在刺激后减少的TNFα生成(Horwood等人JExp Med 197：1603，2003)。因此，TNFα介导的炎症可以由小分子Btk抑制剂调节。此外，已经报道Btk在细胞凋亡中发挥作用(Islam和SmithImmunol.Rev.2000 178：49)，并且因此Btk抑制剂对于治疗某些B-细胞淋巴瘤和白血病将是有效的(Feldhahn等人J.Exp.Med.2005 201：1837)。
发明概述
本申请提供式I的Btk抑制剂化合物，它的使用方法，如本文下面所述：
本申请提供式I的化合物，
Figure BDA0000464558370000031
其中：
是单键或双键；
X各自独立地是CH、CH2、CHX’或N；
X’是低级烷基；
R是H、-R1、-R1-R2-R3、-R1-R3或-R2-R3；
R1是芳基、杂芳基、双环杂芳基、环烷基、杂环烷基或双环杂环基，其各自任选被一个或多个低级烷基、羟基、羟基低级烷基、低级烷氧基、卤代基、硝基、氨基、酰氨基、氰基、氧代或低级卤代烷基取代；
R2是-C(＝O)、-C(＝O)O、-C(＝O)NR2’、-NHC(＝O)O、-C(R2’)2、-O、-S、-C(＝NH)NR2’或-S(＝O)2；
R2’各自独立地为H或低级烷基；
R3是H或R4；
R4是低级烷基、低级卤代烷基、低级烷氧基、氨基、低级烷基氨基、环烷基氨基、低级二烷基氨基、芳基、芳基烷基、烷基芳基、杂芳基、低级烷基杂芳基、杂芳基低级烷基、环烷基、低级烷基环烷基、环烷基低级烷基、杂环烷基、低级烷基杂环烷基、杂环烷基低级烷基、双环环烷基、双环杂环烷基、螺环烷基、螺杂环烷基或双环螺杂环烷基，其各自任选被一个或多个低级烷基、卤代基、低级烷基氨基、低级二烷基氨基、羟基、羟基低级烷基、低级烷氧基、低级烷酰基、卤代基、硝基、氨基、酰氨基、酰基、氰基、氧代、磺酰基低级烷基磺酰基、胍基、羟基氨基、羧基、氨基甲酰基、氨基甲酸酯、卤代低级烷氧基、杂环烷基或卤代低级烷基取代，其中两个低级烷基基团可合起来形成一个环；
A、Y和Y1各自为CH或N，条件是A、Y和Y1至少一个必须为N；
Y2是CH或N；
Y3是H或F；
Y4是Y4a、Y4b、Y4c或Y4d；
Y4a是H或卤素；
Y4b是低级烷基，任选被一个或多个选自低级卤代烷基、卤素、羟基、氨基、氰基和低级烷氧基的取代基取代；
Y4c是低级环烷基，任选被一个或多个选自低级烷基、低级卤代烷基、卤素、羟基、氨基、氰基和低级烷氧基的取代基取代；且
Y4d是氨基，任选被一个或多个低级烷基、烷氧基低级烷基或羟基低级烷基取代；
或其药学可接受的盐。
本申请提供了用于治疗炎性和/或自身免疫病症的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的式I化合物的Btk抑制剂。
本申请提供了药物组合物，其包含任意一种式I的Btk抑制剂化合物与至少一种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
发明详述
定义
如本文使用的，短语“一(a)”或“一(an)”种实体是指一种或多种该实体；例如，一种化合物指一种或多种化合物或至少一种化合物。因此，术语“一种(a)”(或“一种(an)”)，“一种或多种”和“至少一种”可以在本文中可交换使用。
短语“如上文定义”是指如说明书概述或最宽权利要求中提供的每个基团的最宽定义。在下面提供的所有的其他实施方案中，可以在每个实施方案中存在并且没有明确定义的取代基保留在发明概述中提供的最宽定义。
如在此说明书中使用的，不管在过渡性短语中或在权利要求的主体中，术语″包含″和″包括″应当被解释为具有开放式的含义。即，该术语应当被解释为与短语″至少具有″或″至少包括″同义。当在方法的上下文中使用时，术语″包含″是指该方法至少包括所述的步骤，但是可以包括另外的步骤。当在化合物或组合物的上下文中使用时，术语″包含″是指该化合物或组合物至少包括所述的特征或组分，但是还可以包括另外的特征或组分。
如本文中所用的，除非另外具体指出，单词″或″的使用是“和/或”的“包括”意思，而不是“或/或”的“排它”意思。
本文中使用的术语″独立地″是指变量被用于任何一种情况，而不考虑在相同的化合物内存在或不存在具有相同或不同定义的变量。因此，在其中R″出现两次并且被定义为″独立地为碳或氮″的化合物中，两个R″可以是碳，两个R″可以是氮，或者一个R″可以是碳并且另一个是氮。
在描绘或描述本发明中采用的或要求保护的化合物的任何部分或式中，任何变量出现多于一次时，其在每一次出现时的定义独立于其在每一次另外出现时的定义。此外，取代基和/或变量的组合只有在这些化合物导致稳定的化合物的情况下才是允许的。
在键末端处的符号″*″或划过键的″------″分别是指官能团或其他化学部分与其作为一部分的分子的余下部分的连接点。因此，例如：
MeC(＝O)OR4其中
Figure BDA0000464558370000051
划入环体系中的键(与在明确的顶点处连接相反的)是指该键可以连接到任何适宜的环原子。
如本文中所用的术语“任选的”或“任选地”是指随后描述的事件或情形可以、但不是必须发生，并且是指该描述包括事件或情形发生的情况，和它不发生的情况。例如，“任选取代的”是指任选取代的部分可以结合氢原子或取代基。
短语“任选的键”是指该键可以存在或可以不存在，并且是指该描述包括单键、双键或叁键。如果取代基被指定为是″键″或″不存在″，则连接到该取代基上的原子直接连接。
本文使用的术语″约″是指大致地、在…的附近、粗略地或大约。当术语″约″与一个数值范围一起使用时，它通过将边界延伸高于和低于所列出的数值而改变该范围。通常，本文使用的术语″约″将数值改变到高于和低于所述的值20％的方差。
式I的某些化合物可以显示出互变异构现象。互变异构的化合物可以以两种或更多种可以相互转化的物种存在。质子转移的互变异构体由共价结合的氢原子在两个原子之间的迁移得到。互变异构体通常存在着平衡并且分离单个互变异构体的尝试通常制备出其化学和物理性质与化合物的混合物一致的混合物。平衡的位置取决于在分子内的化学特征。例如，在许多脂族醛和酮如乙醛的情况下，酮形式占优势，而在酚类中，烯醇形式占优势。常见的质子转移的互变异构体包括酮/烯醇
Figure BDA0000464558370000061
酰胺/亚氨酸
Figure BDA0000464558370000063
和脒
Figure BDA0000464558370000064
互变异构体。后两种在杂芳基和杂环中是特别常见的，并且本发明包括化合物的所有互变异构形式。
本文使用的技术和科学术语具有本发明所属技术领域内的技术人员所通常理解的含义，除非另外定义。本文参考本领域技术人员已知的各种方法和材料。列出药理学的通用原理的标准参考作品包括Goodman和Gilman′s The Pharmacological Basis of Therapeutics，第10版，McGrawHill Companies Inc.，New York(2001)。可以将本领域技术人员已知的任何适宜材料和/或方法用于实施本发明。但是，描述的是优选的材料和方法。在下面的说明和实施例中涉及的材料、试剂等可获自商业来源，除非另外指出。
本文所述的定义可以被附加以形成化学上相关的组合，如“杂烷基芳基”、“卤代烷基杂芳基”、“芳基烷基杂环基”、“烷基羰基”、“烷氧基烷基”等。当术语“烷基”被用作另一个术语之后的后缀时，如在“苯基烷基”或“羟基烷基”中时，它意在表示如上定义的烷基，其被一至两个选自所述的另外具体标名的基团的取代基取代。因此，例如“苯基烷基”是指具有1至2个苯基取代基的烷基，并且因此包括苄基、苯基乙基和联苯。“烷基氨基烷基”是具有1至2个烷基氨基取代基的烷基。“羟基烷基″包括2-羟基乙基、2-羟基丙基、1-(羟甲基)-2-甲基丙基、2-羟基丁基、2，3-二羟基丁基、2-(羟甲基)、3-羟基丙基等。因而，如本文中所用的，术语“羟基烷基”用来定义下面定义的杂烷基的子集。术语-(芳)烷基是指未取代的烷基或芳烷基。术语(杂(hetero))芳基或(杂(het))芳基是指芳基或杂芳基。
如本文中所用的术语“螺环烷基”是指螺环的环烷基，诸如，例如，螺[3.3]庚烷。如本文中所用的术语螺杂环烷基是指螺环的杂环烷基，诸如，例如，2，6-二氮杂螺[3.3]庚烷。
如本文中所用的术语“酰基”表示式-C(＝O)R的基团，其中R是氢或如本文中定义的低级烷基。如本文中所用的术语″烷基羰基″表示式-C(＝O)R的基团，其中R是如本文中定义的烷基。术语C1-6酰基是指基团-C(＝O)R含1-6个碳原子。如本文中所用的术语″芳基羰基″表示式C(＝O)R的基团，其中R是芳基；如本文中所用的术语″苯甲酰基″是其中R是苯基的″芳基羰基″。
如本文中所用的术语“酯”表示式-C(＝O)OR的基团，其中R是如本文所定义的低级烷基。
如本文中所用的术语“烷基”表示含有1至10个碳原子的非支链或支链的饱和一价烃残基。术语“低级烷基”表示含有1至6个碳原子的直链或支链烃残基。如本文中所用的″C1-10烷基″是指由1至10个碳构成的烷基。烷基的实例包括，但不限于低级烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基或戊基、异戊基、新戊基、己基、庚基和辛基。
当术语“烷基”被用作另一个术语之后的后缀时，如在“苯基烷基”或“羟基烷基”中时，它意在表示如上定义的烷基，其被一至两个选自所述的另外具体标名的基团的取代基取代。因此，例如“苯基烷基”表示基团R′R″-，其中R′是苯基，并且R″是如本文中定义的亚烷基，其中理解的是苯基烷基部分的连接点将在亚烷基上。芳基烷基的实例包括但是不限于苄基、苯基乙基、3-苯基丙基。术语“芳基烷基”或″芳烷基″被类似地解释，不同之处在于R′是芳基。术语″(杂)芳基烷基″或″(杂)芳烷基″被类似地解释，不同之处在于R′任选是芳基或杂芳基。
术语“卤代烷基”或“卤代-低级烷基”或“低级卤代烷基”是指含1至6个碳原子的直链或支链烃残基，其中一个或多个碳原子被一个或多个卤原子取代。
如本文中所用的术语″亚烷基(alkylene或alkylenyl)″表示1至10个碳原子的二价饱和直链烃基(例如(CH2)n)或2至10个碳原子的支链饱和二价烃基(例如-CHMe-或-CH2CH(i-Pr)CH2-)，除非另外指出。除了在亚甲基的情况下之外，亚烷基的开放价态不连接到相同的原子上。亚烷基的实例包括但是不限于：亚甲基、亚乙基、亚丙基、2-甲基-亚丙基、1，1-二甲基-亚乙基、亚丁基、2-乙基亚丁基。
如本文中所用的术语″烷氧基″表示-O-烷基，其中烷基如上定义，诸如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基，包括它们的异构体。如本文中所用的″低级烷氧基″表示具有如上面定义的″低级烷基″基团的烷氧基。如本文中所用的″C1-10烷氧基″是指-O-烷基，其中烷基是C1-10。
术语“PCy3”是指被三个环状部分三取代的膦。
术语“卤代烷氧基”或“卤代-低级烷氧基”或“低级卤代烷氧基”是指低级烷氧基，其中一个或多个碳原子被一个或多个卤原子取代。
如本文中所用的术语″羟基烷基″表示如本文中定义的烷基，其中在不同碳原子上的1至3个氢原子被羟基替代。
如本文中所用的术语″烷基磺酰基″和″芳基磺酰基″是指式-S(＝O)2R的基团，其中R分别是烷基或芳基，并且烷基和芳基如本文中定义。如本文中所用的术语“杂烷基磺酰基”表示式-S(＝O)2R的基团，其中R是如本文中定义的“杂烷基”。
如本文中所用的术语″烷基磺酰氨基″和″芳基磺酰氨基″是指式-NR′S(＝O)2R的基团，其中R分别是烷基或芳基，R′是氢或C1-3烷基，并且烷基和芳基如本文中所定义。
如本文中所用的术语“环烷基”是指含有3至8个碳原子的饱和碳环，即环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基。如本文中所用的″C3-7环烷基″是指由在碳环中的3至7个碳构成的低级环烷基。
如本文中所用的术语羧基-烷基是指烷基部分，其中一个氢原子已经被羧基替代，其中应理解，杂烷基的连接点是通过碳原子。术语“羧基(carboxy或carboxyl)”是指-CO2H部分。
如本文中所用的术语″杂芳基”或″杂芳族″是指5至12个环原子的单环或双环基团，其具有至少一个芳族或部分不饱和的环，每个环含有4至8个原子，结合有一个或多个N、O或S杂原子，其余环原子是碳，其中理解的是杂芳基的连接点将在芳族或部分不饱和的环上。如本领域中技术人员周知的，杂芳基环比它们的全碳副本具有更低的芳族特性。因此，对于本发明而言，杂芳基只需要具有一定程度的芳族特性。杂芳基部分的实例包括具有5至6个环原子和1至3个杂原子的单环芳族杂环，包括但不限于吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噁嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、4，5-二氢-噁唑基、5，6-二氢-4H-[1，3]噁唑基、异噁唑、噻唑、异噻唑、***啉、噻二唑和噁二唑啉(oxadiaxoline)，它们可以任选被1个或多个，优选1或2个取代基取代，所述的取代基选自羟基、氰基、烷基、烷氧基、硫代、低级卤代烷氧基、烷硫基、卤素、低级卤代烷基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、卤素、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基烷基、烷基氨基烷基和二烷基氨基烷基、硝基、烷氧基羰基和氨基甲酰基、烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、芳基氨基甲酰基、烷基羰基氨基和芳基羰基氨基。双环部分的实例包括但不限于4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基、喹啉基、异喹啉基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑、苯并异噁唑、苯并噻唑、萘啶基、5，6，7，8-四氢-[1，6]萘啶基和苯并异噻唑。双环部分可以在任一环上任选取代，但是连接点在含有杂原子的环上。
如本文中所用的术语″杂环基″、″杂环烷基″或″杂环″表示由一个或多个环，优选1至2个环(包括螺环***)组成的一价饱和环状基团，每个环3至8个原子，其结合有一个或多个环杂原子(选自N、O或S(O)0-2)，并且其可以任选独立地被一个或多个，优选1个或2个取代基取代，所述的取代基选自羟基、氧代、氰基、低级烷基、低级烷氧基、低级卤代烷氧基、烷硫基、卤素、低级卤代烷基、羟基烷基、硝基、烷氧基羰基、氨基、烷基氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、烷基氨基磺酰基、芳基氨基磺酰基、烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、烷基氨基羰基、芳基氨基羰基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基及其离子形式，除非另外指出。杂环基的实例包括但不限于吗啉基、哌嗪基、哌啶基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、六氢氮杂
Figure BDA0000464558370000101
基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、噁唑烷基、噻唑烷基、异噁唑烷基、四氢吡喃基、硫代吗啉基、奎宁环基和咪唑啉基及其离子形式。实例还可以是双环的，诸如，例如，3，8-二氮杂-双环[3.2.1]辛烷、2，5-二氮杂-双环[2.2.2]辛烷或八氢-吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪。
Btk抑制剂
本申请与2009年6月24日申请的美国专利7,902,194，2010年2月24日申请的美国专利申请序列号12/711,312和2011年1月10日申请的美国专利申请序列号12/978,187相关，其说明书在此整体加入作为参考。
本文所述的通式I化合物，在连接位置有吡啶基的标准芳环连接替代，给出了显著差异和出乎意料的改善的性质，例如：1)溶解度的总体增加，2)整个骨架极性分布的均匀度增加，因为两亲矢量不太明显，且3)血浆蛋白结合总体改善，使药物在人体和大鼠血浆中的游离浓度增加。
本申请提供了式I化合物，
Figure BDA0000464558370000111
其中：
是单键或双键；
X各自独立是CH、CH2、CHX’或N；
X’是低级烷基；
R是H、-R1、-R1-R2-R3、-R1-R3或-R2-R3；
R1是芳基、杂芳基、双环杂芳基、环烷基、杂环烷基或双环杂环基，其各自任选被一个或多个低级烷基、羟基、羟基低级烷基、低级烷氧基、卤代基、硝基、氨基、酰氨基、氰基、氧代或低级卤代烷基取代；
R2是-C(＝O)、-C(＝O)O、-C(＝O)NR2’、-NHC(＝O)O、-C(R2’)2、-O、-S、-C(＝NH)NR2’或-S(＝O)2；
R2’各自独立地是H或低级烷基；
R3是H或R4；
R4是低级烷基、低级卤代烷基、低级烷氧基、氨基、低级烷基氨基、环烷基氨基、低级二烷基氨基、芳基、芳基烷基、烷基芳基、杂芳基、低级烷基杂芳基、杂芳基低级烷基、环烷基、低级烷基环烷基、环烷基低级烷基、杂环烷基、低级烷基杂环烷基、杂环烷基低级烷基、双环环烷基、双环杂环烷基、螺环烷基、螺杂环烷基、或双环螺杂环烷基，其各自任选被一个或多个低级烷基、卤素、低级烷基氨基、低级二烷基氨基、羟基、羟基低级烷基、低级烷氧基、低级烷酰基、卤素、硝基、氨基、酰氨基、酰基、氰基、氧代、磺酰基、低级烷基磺酰基、胍基、羟基氨基、羧基、氨基甲酰基、氨基甲酸酯、卤代低级烷氧基、杂环烷基或卤代低级烷基取代，其中两个低级烷基基团可一起形成环；
A、Y和Y1各自是CH或N，条件是A、Y和Y1中至少一个必须是N；
Y2是CH或N；
Y3是H或F；
Y4是Y4a、Y4b、Y4c或Y4d；
Y4a是H或卤素；
Y4b是低级烷基，任选被一个或多个选自低级卤代烷基、卤素、羟基、氨基、氰基和低级烷氧基的取代基取代；
Y4c是低级环烷基，任选被一个或多个选自低级烷基、低级卤代烷基、卤素、羟基、氨基、氰基和低级烷氧基的取代基取代；且
Y4d是氨基，任选被一个或多个低级烷基、烷氧基低级烷基或羟基低级烷基取代；
或其药学上可接受的盐。
本申请提供了式I化合物，其中X是CH。
本申请提供了式I化合物，其中X是N。
本申请提供了式I化合物，其中
Figure BDA0000464558370000121
是双键。
本申请提供了式I化合物，其中
Figure BDA0000464558370000122
是单键。
本申请提供了式I化合物，其中
Figure BDA0000464558370000123
是双键且X是CH。
本申请提供了式I化合物，其中
Figure BDA0000464558370000124
是单键且X是CH2。
本申请提供了式I化合物，其中
Figure BDA0000464558370000125
是单键且X是CHR’。
本申请提供了式I化合物，其中
Figure BDA0000464558370000126
是双键且X是N。
本申请提供了式I化合物，其中
Figure BDA0000464558370000127
是单键且X是NH。
本申请提供了式I化合物，其中
Figure BDA0000464558370000128
是单键且X是NR’。
本申请提供了式I化合物，其中A是CH，Y是CH，且Y1是N。
本申请提供了式I化合物，其中A是N，Y是CH，且Y1是CH。
本申请提供了式I化合物，其中A是CH，Y是N，且Y1是CH。
本申请提供了式I化合物，其中
Figure BDA0000464558370000129
是双键，X是N，A是CH，Y是CH，且Y1是N。
本申请提供了式I化合物，其中X是CH，A是CH，Y是CH且Y1是N。
本申请提供了式I化合物，其中X是CH，A是CH，Y是CH且Y1是N。
本申请提供了式I化合物，其中Y3是H，
Figure BDA0000464558370000131
是双键，X是N，A是CH，Y是CH且Y1是N。
本申请提供了式I化合物，其中Y3是F，
Figure BDA0000464558370000132
是双键，X是N，A是CH，Y是CH且Y1是N。
本申请提供了式I化合物，其中Y4是叔丁基，Y3是F，
Figure BDA0000464558370000133
是双键，X是N，A是CH，Y是CH且Y1是N。
本申请提供了式I化合物，其中A是CH，Y是CH，Y1是N且Y2是N。
本申请提供了式I化合物，其中Y2是CH。
本申请提供了式I化合物，其中Y2是N。
本申请提供了式I化合物，其中Y是N且Y1是CH。
本申请提供了式I化合物，其中Y2是CH，Y是N且Y1是CH。
本申请提供了式I化合物，其中
Figure BDA0000464558370000134
是双键，X是N，Y2是CH，Y是N且Y1是CH。
本申请提供了式I化合物，其中Y3是H。
本申请提供了式I化合物，其中Y3是F。
本申请提供了式I化合物，其中是双键，X是N且Y3是F。
本申请提供了式I化合物，其中Y4是环丙基。
本申请提供了式I化合物，其中
Figure BDA0000464558370000136
是双键，X是N且Y4是环丙基。
本申请提供了式I化合物，其中Y3是F且Y4是环丙基。
本申请提供了式I化合物，其中
Figure BDA0000464558370000137
是双键，X是N，Y3是F，且Y4是环丙基。
本申请提供了式I化合物，其中Y4是二甲基氨基。
本申请提供了式I化合物，其中
Figure BDA0000464558370000138
是双键，X是N，且Y4是二甲基氨基。
本申请提供了式I化合物，其中Y3是F，且Y4是二甲基氨基。
本申请提供了式I化合物，其中是双键，X是N，Y3是F，且Y4是二甲基氨基。
本申请提供了式I化合物，其中Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中
Figure BDA0000464558370000142
是双键，X是N，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中Y3是F，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中
Figure BDA0000464558370000143
是双键，X是N，Y3是F，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-C(＝O)，且R3是吗啉基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-C(＝O)，R3是吗啉基，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-C(＝O)，R3是吗啉基，
Figure BDA0000464558370000144
是双键，X是N，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-C(＝O)，R3是吗啉基，Y3是F，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-C(＝O)，R3是吗啉基，
Figure BDA0000464558370000145
是双键，X是N，Y3是F，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是R1，且R1是4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基，任选被低级烷基、杂环烷基、环烷基或环烷基低级烷基取代。
本申请提供了式I化合物，其中R是R1，且R1是4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基，任选被低级烷基、杂环烷基、环烷基或环烷基低级烷基取代，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是R1，且R1是4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基，任选被低级烷基、杂环烷基、环烷基或环烷基低级烷基取代，
Figure BDA0000464558370000146
是双键，X是N，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是R1，且R1是4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基，任选被低级烷基、杂环烷基、环烷基或环烷基低级烷基取代，Y3是F，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是R1，且R1是4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基，任选被低级烷基、杂环烷基、环烷基或环烷基低级烷基取代，
Figure BDA0000464558370000151
是双键，X是N，Y3是F，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R3，R1是吡啶基，且R3是低级烷基杂环烷基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R3，R1是吡啶基，R3是低级烷基杂环烷基，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R3，R1是吡啶基，R3是低级烷基杂环烷基，
Figure BDA0000464558370000152
是双键，X是N，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R3，R1是吡啶基，R3是低级烷基杂环烷基，Y3是F且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R3，R1是吡啶基，R3是低级烷基杂环烷基，是双键，X是N，Y3是F，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-O，且R3是杂环烷基低级烷基，任选被一个或多个卤素取代。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-O，R3是杂环烷基低级烷基，任选被一个或多个卤素取代，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-O，R3是杂环烷基低级烷基，任选被一个或多个卤素取代，
Figure BDA0000464558370000154
是双键，X是N，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-O，R3是杂环烷基低级烷基，任选被一个或多个卤素取代，Y3是F，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-O，R3是杂环烷基低级烷基，任选被一个或多个卤素取代，是双键，X是N，Y3是F，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-C(＝O)，且R3是二甲基氨基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-C(＝O)，R3是二甲基氨基，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-C(＝O)，R3是二甲基氨基，
Figure BDA0000464558370000162
是双键，X是N，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-C(＝O)，R3是二甲基氨基，Y3是F，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-C(＝O)，R3是二甲基氨基，
Figure BDA0000464558370000163
是双键，X是N，Y3是F，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-S(＝O)2，且R3是甲基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-S(＝O)2，R3是甲基，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-S(＝O)2，R3是甲基，
Figure BDA0000464558370000164
是双键，X是N且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-S(＝O)2，R3是甲基，Y3是F，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-S(＝O)2，R3是甲基，
Figure BDA0000464558370000165
是双键，X是N，Y3是F，且Y4是叔丁基。
本申请提供了式I化合物，其中
Figure BDA0000464558370000166
是双键，Y2是N，X是N，Y1是N，Y3是F，Y4是叔丁基，A是CH，且Y是CH。
本申请提供了选自以下的式I化合物：
6-叔丁基-8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(1′-甲基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-6-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-酞嗪-1-酮；
6-叔丁基-8-氟-2-(3-羟基甲基-4-{1-甲基-5-[5-((S)-1-甲基-吡咯烷-2-基)-吡啶-2-基氨基]-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基}-吡啶-2-基)-2H-酞嗪-1-酮；
6-叔丁基-8-氟-2-(3-羟基甲基-4-{1-甲基-5-[5-(吗啉-4-羰基)-吡啶-2-基氨基]-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基}-吡啶-2-基)-2H-酞嗪-1-酮；
6-叔丁基-8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[5-(5-甲磺酰基-吡啶-2-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-酞嗪-1-酮；
6-{6-[2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-3-羟基甲基-吡啶-4-基]-2-甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基氨基}-N，N-二甲基-烟酰胺；
6-{6-[2-(6-环丙基-8-氟-1-氧代-1H-异喹啉-2-基)-3-羟基甲基-吡啶-4-基]-2-甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基氨基}-N，N-二甲基-烟酰胺；
6-叔丁基-2-(3-羟基甲基-4-{1-甲基-5-[5-(吗啉-4-羰基)-吡啶-2-基氨基]-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基}-吡啶-2-基)-2H-酞嗪-1-酮；
2′-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-3′-羟基甲基-1-甲基-5-[5-(吗啉-4-羰基)-吡啶-2-基氨基]-1H-[3，4′]联吡啶-6-酮；
2′-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-3′-羟基甲基-5-(5-甲磺酰基-吡啶-2-基氨基)-1-甲基-1H-[3，4′]联吡啶-6-酮；
6-[2′-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-3′-羟基甲基-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-[3，4′]联吡啶-5-基氨基]-N，N-二甲基-烟酰胺；
2′-(6-环丙基-8-氟-1-氧代-1H-异喹啉-2-基)-3′-羟基甲基-1-甲基-5-[5-(吗啉-4-羰基)-吡啶-2-基氨基]-1H-[3，4′]联吡啶-6-酮；
6-叔丁基-2-(3-羟基甲基-4-{1-甲基-5-[5-((S)-1-甲基-吡咯烷-2-基)-吡啶-2-基氨基]-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基}-吡啶-2-基)-2H-酞嗪-1-酮；
6-叔丁基-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(1′-甲基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-6-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-酞嗪-1-酮；
6-叔丁基-2-{4-[5-(1′-乙基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-6-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-3-羟基甲基-吡啶-2-基}-8-氟-2H-酞嗪-1-酮；
2-(4-{5-[5-(2-氮杂环丁烷-1-基-1，1-二甲基-乙氧基)-吡啶-2-基氨基]-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基}-3-羟基甲基-吡啶-2-基)-6-叔丁基-8-氟-2H-酞嗪-1-酮；
2-(4-{5-[5-(2-氮杂环丁烷-1-基-1，1-二甲基-乙氧基)-吡啶-2-基氨基]-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基}-3-羟基甲基-吡啶-2-基)-6-叔丁基-2H-酞嗪-1-酮；
2-{4-[5-(5-氮杂环丁烷-1-基甲基-1-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-3-羟基甲基-吡啶-2-基}-6-叔丁基-8-氟-2H-酞嗪-1-酮；
6-叔丁基-8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-甲基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-酞嗪-1-酮；
6-叔丁基-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-甲基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-酞嗪-1-酮；
6-环丙基-8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-甲基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-异喹啉-1-酮；
6-叔丁基-8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-氧杂环丁烷-3-基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-酞嗪-1-酮；
6-叔丁基-2-{4-[5-(5-乙基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-3-羟基甲基-吡啶-2-基}-8-氟-2H-酞嗪-1-酮；
6-叔丁基-8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-甲基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-异喹啉-1-酮；
6-叔丁基-8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-氧杂环丁烷-3-基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-异喹啉-1-酮；
6-叔丁基-2-{4-[5-(5-乙基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-3-羟基甲基-吡啶-2-基}-8-氟-2H-异喹啉-1-酮；
6-叔丁基-2-{4-[5-(5-环丙基甲基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-3-羟基甲基-吡啶-2-基}-8-氟-2H-酞嗪-1-酮；
6-叔丁基-2-[4-(5-{5-[2-(3，3-二氟-氮杂环丁烷-1-基)-1，1-二甲基-乙氧基]-吡啶-2-基氨基}-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基)-3-羟基甲基-吡啶-2-基]-8-氟-2H-异喹啉-1-酮；
4-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-3-羟基甲基-1′-甲基-5′-[5-(吗啉-4-羰基)-吡啶-2-基氨基]-1′H-[2，3′]联吡啶-6′-酮，
4-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-3-羟基甲基-5′-(5-甲磺酰基-吡啶-2-基氨基)-1′-甲基-1′H-[2，3′]联吡啶-6′-酮；
6-叔丁基-2-[4-(5-{5-[2-(3，3-二氟-氮杂环丁烷-1-基)-1，1-二甲基-乙氧基]-吡啶-2-基氨基}-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基)-3-羟基甲基-吡啶-2-基]-8-氟-2H-酞嗪-1-酮；
2-(8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-甲基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-1-氧代-1，2-二氢-异喹啉-6-基)-2-甲基-丙腈；
2-{2-[4-(5-{5-[2-(3，3-二氟-氮杂环丁烷-1-基)-1，1-二甲基-乙氧基]-吡啶-2-基氨基}-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基)-3-羟基甲基-吡啶-2-基]-8-氟-1-氧代-1，2-二氢-异喹啉-6-基}-2-甲基-丙腈；
6-叔丁基-2-[4-(5-{5-[2-(3，3-二氟-氮杂环丁烷-1-基)-1，1-二甲基-乙氧基]-吡啶-2-基氨基}-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基)-3-羟基甲基-吡啶-2-基]-2H-酞嗪-1-酮；和
6-叔丁基-8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-甲基-5-氧基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-酞嗪-1-酮。
本申请提供了治疗炎性和/或自身免疫病症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供了治疗类风湿性关节炎的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供了治疗哮喘的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供了药物组合物，其包含式I的化合物。
本申请提供了药物组合物，其包含式I的化合物与至少一种药学可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
本申请提供了用作治疗活性物质的式I化合物。
本申请提供了式I的化合物在制备用于治疗炎性障碍的药物中的用途。
本申请提供了式I的化合物在制备用于治疗自身免疫障碍的药物中的用途。
本申请提供了式I的化合物在制备用于治疗类风湿性关节炎的药物中的用途。
本申请提供了式I的化合物在制备用于治疗哮喘的药物中的用途。
本申请提供了式I的化合物用于治疗炎性障碍的用途。
本申请提供了式I的化合物用于治疗自身免疫障碍的用途。
本申请提供了式I的化合物用于治疗类风湿性关节炎的用途。
本申请提供了式I的化合物用于治疗哮喘的用途。
本申请提供了用于治疗炎性障碍的式I化合物。
本申请提供了用于治疗自身免疫障碍的式I化合物。
本申请提供了用于治疗类风湿性关节炎的式I化合物。
本申请提供了用于治疗哮喘的式I化合物。
本申请提供了如本文所述的化合物、方法或组合物。
本申请提供了如本文所述的化合物、方法或组合物。
Btk抑制剂化合物
在下面的表中提供由本发明包含并且在本发明范围内的代表性化合物的实例。提供下面的这些实施例和制备以使本领域的技术人员能够更清楚地理解并且实践本发明。它们不应当被认为是限制本发明的范围，而仅为示例性的并且是其代表。
通常，本申请中使用的命名法基于AUTONOMTM v.4.0，一种用于产生IUPAC***命名的Beilstein Institute计算机化的***。如果在画出的结构和给出该结构的名称之间有差异，则画出的结构将给予更大的权重。此外，如果结构或结构的一部分的立体化学没有用例如粗体或虚线指示，则所述结构或结构的一部分将解释为包含其全部立体异构体。
表I描述了式I的哒嗪酮化合物的实例：
表I.
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合成
一般合成方案
在以下通用方案中，Y3可以是H或F，Y4可以是Y4a、Y4b、Y4c或Y4d；Y4a可以是H或卤素；Y4b可以是低级烷基，任选被一个或多个选自低级卤代烷基、卤素、羟基、氨基、氰基和低级烷氧基的取代基取代；Y4c可以是低级环烷基，任选被一个或多个选自低级烷基、低级卤代烷基、卤素、羟基、氨基、氰基和低级烷氧基的取代基取代；且Y4d可以是氨基，任选被一个或多个低级烷基、烷氧基低级烷基或羟基低级烷基取代。其中X可以是CH或N，R可以是H、-R1、-R1-R2-R3、-R1-R3或-R2-R3；R1可以是芳基、杂芳基、双环杂芳基、环烷基或杂环烷基，其各自可以任选地被一个或多个低级烷基、羟基、羟基低级烷基、低级烷氧基、卤代基、硝基、氨基、酰氨基、氰基、氧代或低级卤代烷基的取代基取代，R2可以是-C(＝O)、-C(＝O)O、-C(＝O)NR2’、-NHC(＝O)O、-C(R2’)2、-O、-S、-C(＝NH)NR2’或-S(＝O)2，R2’可以各自独立地是H或低级烷基；R3可以是H或R4；R4可以是低级烷基、低级卤代烷基、低级烷氧基、氨基、低级烷基氨基、环烷基氨基、低级二烷基氨基、芳基、芳基烷基、烷基芳基、杂芳基、烷基杂芳基、低级烷基杂芳基、杂芳基烷基、杂芳基低级烷基、环烷基、烷基环烷基、低级烷基环烷基、环烷基烷基、环烷基低级烷基、杂环烷基、烷基杂环烷基、低级烷基杂环烷基、杂环烷基烷基、杂环烷基低级烷基、双环环烷基、双环杂环烷基、螺环烷基、螺杂环烷基或双环螺杂环烷基，其各自可以任选被一个或多个低级烷基、卤代基、低级烷基氨基、低级二烷基氨基、羟基、羟基低级烷基、低级烷氧基、低级烷酰基、卤代基、硝基、氨基、酰氨基、酰基、氰基、氧代、磺酰基、低级烷基磺酰基、胍基、羟基氨基、羧基、氨基甲酰基、氨基甲酸酯、卤代低级烷氧基、杂环烷基或卤代低级烷基的取代基取代，其中两个低级烷基基团可一起形成环；R’可以是H、低级烷基、环烷基、环烷基低级烷基、或杂环烷基或低级卤代烷基，R3’可以是H、低级烷基，或一起形成螺环烷基；且R4’可以是H、低级烷基，或一起形成杂环烷基，任选被卤素取代。
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其中R可以是H、低级烷基、环烷基、环烷基低级烷基、或杂环烷基或低级卤代烷基。
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药物组合物与施用
可以以广泛种类的口服施用剂型和载体配制本发明的化合物。口服施用可以是片剂、包衣片剂、糖衣丸、硬和软明胶胶囊、溶液、乳剂、糖浆或混悬剂的形式。在其他施用途径中，当由包括持续(静脉内滴注)局部肠胃外、肌内、静脉内、皮下、透皮(其可以包含渗透增强剂)、含服、经鼻、吸入和栓剂施用的其他施用途径施用时，本发明的化合物是有效的。优选的施用方式通常是使用常规日服剂量方案进行口服，所述日服剂量方案可以根据痛苦的程度和患者对活性成分的反应进行调节。
本发明的一种化合物或多种化合物以及它们的药用盐，与一种或多种常规赋形剂、载体或稀释剂一起可以被置于药物组合物和单位剂量的形式中。药物组合物和单位剂型可以包括常规比例的常用的成分，存在另外的活性化合物或要素，或不存在另外的活性化合物或要素，并且所述单位剂型可以包含与所意欲使用的日剂量范围相当的任何适合的有效量的活性成分。所述药物组合物可以以固体如片剂或填充胶囊、半固体、粉末剂、持续释放制剂或液体如溶液、混悬剂、乳剂、酏剂或填充胶囊使用，进行口服应用；或以用于直肠或***施用的栓剂形式使用；或以用于肠胃外使用的无菌可注射溶液的形式使用。典型的制剂包含约5％到约95％的一种活性化合物或多种活性化合物(w/w)。术语“制剂”或“剂型”意欲包括活性化合物的固体和液体制剂并且本领域的技术人员将理解活性成分可以根据靶器官或组织并且根据需要的剂量和药物代谢动力学参数而以不同制剂存在。
术语“赋形剂”用于本文时指用于制备药物组合物的、通常是安全无毒并且没有生物学上或其他方面不适宜的化合物，并且包括可用于兽医使用以及人药物应用的赋形剂。本发明的化合物可以单独施用，但是通常与一种或多种根据意欲施用的途径和标准的药物实践选择的适合的药物赋形剂、稀释剂或载体混合施用。
“药学可接受的”是指其可以用于制备通常安全、无毒并且在生物学上和其他方面都没有不适宜的药物组合物，并且包括其对于兽医以及人类药物用途是可接受的。
活性成分的“药学可接受的盐”形式也可以在开始赋予活性成分需要的药物代谢动力学性质，所述药物代谢动力学性质在非盐形式中是缺乏的，并且就其体内治疗活性而论，可能甚至正面影响活性成分的药效学。短语化合物的“药学可接受的盐”指药物学上可接受的并且具有母体化合物的需要的药理活性的盐。所述盐包括：(1)酸加成盐，与无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成；或与有机酸如乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1，2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基二环[2.2.2]-辛-2-烯-1-甲酸、葡糖庚酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸等形成；或(2)当在母体化合物中存在的酸质子被金属离子例如碱金属离子、碱土离子或铝离子替换时形成的盐；或与有机碱如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等配位形成的盐。
固体形式制剂包括粉末、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂和可分散的颗粒。固体载体可以是一种或多种物质，其也可以充当稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包封材料。在粉末中，所述载体通常是细碎固体，其是与细碎活性成分的混合物。在片剂中，活性成分通常与具有必要的结合能力的载体以适合比例混合，并且被压制成需要的形状和大小。适合的载体包括但不限于碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。除了活性成分之外，固体形式的制剂可以包含着色剂、香料、稳定剂、缓冲剂、人工和天然的甜味剂、分散剂、增稠剂、溶解剂等。
液体制剂也适合于口服施用，包括液体制剂，包括乳剂、糖浆、酏剂、水溶液、水性混悬剂。这些包括意欲在即将使用前转化为液体形式制剂的固体形式制剂。乳剂可以以溶液形式例如以丙二醇水溶液的形式制备或可以包含乳化剂，如卵磷脂、去水山梨糖醇单油酸酯或***胶。可以通过将活性成分溶解在水中并加入适合的着色剂、香料、稳定剂和增稠剂来制备水溶液。可以通过将细碎的活性成分与粘性物质如天然或合成的树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠及其他的熟知的悬浮剂一起分散在水中来制备水性混悬剂。
本发明的化合物可以配制用于肠胃外施用(例如通过注射例如推注，或连续输注)并且可以以单位剂型在安瓿、预装注射器、小体积的输注液中或在多剂量容器中与加入的防腐剂一起存在。所述组合物可以采用这样的形式，如混悬剂、溶液或在油性或水性赋形剂中的乳剂形式，例如在水性聚乙二醇中的溶液。油性或非水性载体、稀释剂、溶剂或赋形剂的实例包括丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)和可注射有机酯(例如油酸乙酯)，并且可以包含配制剂如防腐剂、湿润剂、乳化剂或悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。备选地，所述活性成分可以以粉末形式存在，所述粉末通过无菌分离灭菌固体获得或通过从溶液中冻干获得，其在使用前用适合的赋形剂例如无菌的无热原的水进行重构。
可以配制本发明的化合物，作为软膏、乳膏或洗剂，或作为透皮贴片用于给表皮的局部施用。软膏和乳膏例如可以用水性或油性基质，在加入适宜的增稠剂和/或胶凝剂的情况下配制。洗剂可以用水性或油性基质配制，并且通常也将含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂或着色剂。适宜于口中局部施用的制剂包括：锭剂，其在调味基质中包含活性成分，所述的调味基质通常是蔗糖和***胶或黄蓍胶；软锭剂，其在惰性基质中包含活性成分，所述的惰性基质如明胶和甘油或蔗糖和***胶；以及漱口药，其在适宜液体载体中包含活性成分。
可以将本发明的化合物配制作为栓剂施用。首先将低熔点蜡，如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物融化，并且例如通过搅拌均匀分散活性成分。接着，将融化的均匀混合物倾入适宜尺寸的模具中，使其冷却并且固化。
可以将本发明的化合物配制用于***施用。***栓剂、棉球、乳膏剂、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾剂除了活性成分外，还包含如本领域已知是合适的载体。
可以配制本发明的化合物用于经鼻施用。由常规装置例如用滴管、吸管或喷雾器将溶液剂或混悬剂直接应用至鼻腔。制剂可以以单剂量或多剂量形式提供。在滴管或吸管的后一种情况下，这可以通过患者施用适宜的、预定体积的溶液剂或混悬剂来实现。在喷雾器的情况下，这可以通过例如计量的雾化喷雾泵来实现。
可以配制本发明的化合物用于气雾剂施用，特别是对呼吸道施用，并且包括鼻内施用。该化合物通常具有小的粒子大小，例如约五(5)微米或更小。这样的粒子大小可以通过本领域中已知的方式获得，例如通过微粉化获得。将活性成分提供在具有适宜推进剂的加压容器中，所述的推进剂如氯氟烃(CFC)，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷，或二氧化碳或其他适宜的气体。气雾剂还可以方便地含有表面活性剂如卵磷脂。药物的剂量可以通过计量阀来控制。备选地，活性成分可以以干粉的形式提供，例如化合物在适宜粉末基质中的粉末混合物，所述的粉末基质如乳糖、淀粉、淀粉衍生物如羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。粉末载体将在鼻腔中形成凝胶。粉末组合物可以以单位剂量形式存在，例如在如明胶的胶囊或药筒中，或泡眼包装中，这些包装中的粉末剂可以通过吸入器施用。
当需要时，可以用适合于活性成分的持续或控制释放施用的肠溶衣制备制剂。例如，本发明的化合物可以在透皮或皮下药物递送装置中配制。当所述化合物的持续释放是需要的时并且当患者顺应治疗方案是重要的时，这些递送***是有利的。在透皮递送***中的化合物经常附着于皮肤粘附性固体支持物。目的化合物还可以与渗透增强剂例如月桂氮
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酮(1-十二烷基氮杂-环庚-2-酮)组合。将持续释放递送***通过外科手术或注射皮下***皮下层。皮下植入物在脂溶性膜例如硅橡胶或可生物降解的聚合物例如聚乳酸(polyactic acid)中包封化合物。
在雷明顿：药物科学和实践(Remington：The Science和Practice ofPharmacy 1995，由E.W.Martin编辑，Mack出版公司，第19版，Easton，宾夕法尼亚州)中描述了适合的制剂以及药物载体、稀释剂和赋形剂。有经验的制剂科学家可以在本发明说明书教导的范围内改变制剂以提供多种制剂，其用于施用的具体途径，而不使本发明的组合物不稳定或有损它们的治疗活性。
使本发明的化合物在水或其他赋形剂中的溶解度增高的它们的修饰，例如可以容易地通过较小的修饰实现(形成盐，酯化等)，这都在本领域普通技能的范围内。也在本领域普通技能范围内的是，改变施用途径和具体化合物的剂量方案从而使本发明化合物的药物代谢动力学在患者中获得最大的有益效果。
用于本文时，术语″治疗有效量″是指减轻个体中的疾病的症状所需要的量。将在每个具体病例中，根据个体需要调整剂量。取决于多种因素，该剂量可以在广泛范围内改变，所述因素如待治疗的疾病的严重性，患者的年龄和一般健康状况，治疗患者的其他药物，施用的途径和形式，和涉及的执业医生的偏好和经验。对于口服施用，在每天约0.01-约1000mg/kg体重之间的日剂量应该在单一治疗和/或组合治疗情况中是适合的。优选的日剂量在每天约0.1-约500mg/kg体重之间，更优选在每天0.1-约100mg/kg体重之间，最优选在每天1.0-约10mg/kg体重/天之间。因此，对于给70kg的人施用，剂量范围是约7mg-0.7g/天。日剂量可以以单一剂量或以分剂量进行施用，典型地在1-5个剂量/天。一般而言，用比化合物的最佳剂量少的较小剂量开始治疗。随后，通过小增量增加剂量直到达到个体患者的最佳效果。治疗本文所述疾病的本领域普通技术人员能够不经过过度实验和根据个人的知识经验和本申请的公开内容来确定本发明化合物对于给定疾病和患者的治疗有效量。
药物制剂优选为单位剂量形式。在这种形式下，将制剂再分成含有适宜量的活性成分的单位剂量。单位剂量形式可以是包装制剂，该包装含有离散量的制剂，如小包片剂、胶囊和在管瓶或安瓿中的粉剂。此外，单位剂量形式可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂本身，或者它可以是适宜数量的包装形式的这些中的任何一种。
适应症和治疗方法
本文所述的哒嗪酮衍生物是激酶抑制剂，特别是Btk抑制剂。这些抑制剂可用于在哺乳动物中治疗一种或多种对激酶抑制有应答的疾病，包括对Btk抑制和/或B-细胞增殖有应答的疾病。不希望束缚于任何具体理论，拒信本发明化合物与Btk的相互作用导致Btk活性的抑制，并因此带来这些化合物的药物效用。因此，本发明包括治疗患有对Btk活性的抑制作用和/或B-细胞增殖作用有应答的哺乳动物、例如人的方法，其包括给具有此类疾病的哺乳动物施用有效量的至少一种本文提供的化学实体。有效浓度可以试验确定，例如通过测定化合物的血液浓度，或理论上，提供计算生物利用度。除了Btk以外其他可能受影响的激酶包括但不限于，其他酪氨酸激酶和丝氨酸/苏氨酸激酶。
激酶在控制基本细胞过程如增殖、分化和死亡(细胞凋亡)的信号传导路径方面起着显著的作用。异常的激酶活性已经暗示于各种疾病中，所述的疾病包括多种癌症、自身免疫和/或炎性疾病和急性炎性反应。激酶在关键细胞信号传导路径中的多面性作用提供识别靶向激酶和信号传导路径的新药物的显著机会。
一个实施方案包括治疗具有自身免疫和/或炎性疾病或响应Btk活性和/或B细胞增殖的抑制的急性炎性反应的患者的方法。
使用根据本发明的化合物和组合物可以影响的自身免疫和/或炎性疾病包括但不限于：银屑病、***反应、克罗恩病、肠易激综合征、舍格伦病、组织移植物排斥反应和移植器官的超急性排斥反应、哮喘、***性红斑狼疮(和相关的肾小球肾炎)、皮肌炎、多发性硬化、硬皮病、血管炎(ANCA-相关的和其他的血管炎)、自身免疫溶血性和血小板减少性症状、古德帕斯综合征(和相关的肾小球肾炎和肺出血)、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、慢性的特发性血小板减少性紫癜(ITP)、艾迪生病、帕金森病、阿尔茨海默病、糖尿病、脓毒性休克和重症肌无力。
本文中包括的是治疗方法，其中将本文中提供的至少一种化学实体与抗炎药组合施用。抗炎药包括但不限于：NSAID、非特异性和COX-2特异性环氧合酶酶抑制剂、金化合物、皮质类固醇类、甲氨蝶呤、肿瘤坏死因子受体(TNF)受体拮抗剂、免疫抑制剂和甲氨蝶呤。
NSAID的实例包括但不限于，布洛芬、氟比洛芬、萘普生和萘普生钠、双氯芬酸、双氯芬酸钠和米索前列醇的组合、舒林酸、奥沙普秦、二氟尼柳、吡罗昔康、吲哚美辛、依托度酸、非诺洛芬钙、酮洛芬、萘丁美酮钠、柳氮磺吡啶、托美丁钠和羟氯喹。NSAID的实例还包括COX-2特异性抑制剂如塞来考昔、伐地考昔、芦米考昔和/或艾托考昔。
在一些实施方案中，抗炎药是水杨酸酯或盐。水杨酸酯或盐包括但不限于乙酰基水杨酸或阿斯匹林、水杨酸钠以及水杨酸胆碱和水杨酸镁。
抗炎药还可以是皮质类固醇类。例如，皮质类固醇类可以是可的松、***、甲泼尼龙、***龙、***龙磷酸钠或***。
在另外的实施方案中，抗炎药是金化合物如硫代苹果酸金钠或金诺芬。
本发明还包括其中抗炎药是代谢抑制剂如二氢叶酸还原酶抑制剂如甲氨蝶呤或二氢乳清酸盐脱氢酶抑制剂如来氟米特的实施方案。
本发明的其他实施方案涉及其中至少一种抗炎化合物是抗-C5单克隆抗体(如依库珠单抗或培克珠单抗)、TNF拮抗剂如依那西普(entanercept)或英利昔单抗的组合，所述英利昔单抗是一种抗-TNFα单克隆抗体。
本发明的再其他的实施方案涉及其中至少一种活性药是免疫抑制剂化合物如选自甲氨蝶呤、来氟米特、环胞素、他克莫司、硫唑嘌呤和吗替麦考酚酯中的免疫抑制剂化合物的组合。
表达BTK的B-细胞和B-细胞前体已经暗示于B细胞恶性的病理学中，B细胞恶性包括但不限于B细胞淋巴瘤、淋巴瘤(包括何杰金和非何杰金淋巴瘤)、毛细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、慢性和急性髓细胞源性白血病和慢性和急性淋巴细胞白血病。
已经表明BTK是在B-系淋巴样细胞中Fas/APO-1(CD-95)死亡诱导信号传导复合物(DISC)的抑制剂。白血病/淋巴瘤细胞的命运可能在于由DISC活化的半胱天冬蛋白酶的反向前细胞凋亡作用和包括BTK和/或其底物的上游抗细胞凋亡调节机理之间的平衡(Vassilev等人，J.Biol.Chem.1998，274，1646-1656)。
还发现BTK抑制剂可以用作化学敏化剂，因此可以用于与其他化学治疗药组合，所述的化学治疗药特别是诱导细胞凋亡的药。可以与化学敏化BTK抑制剂组合使用的其他化学治疗药的实例包括拓扑异构酶I抑制剂(喜树碱或托泊替康)、拓扑异构酶II抑制剂(如道诺霉素和依托泊苷)、烷化剂(如环磷酰胺、美法仑和BCNU)、微管蛋白导向的药剂(如泰素和长春碱)和生物制剂(例如抗体如抗CD20抗体、IDEC 8、免疫毒素和细胞因子)。
Btk活性还与一些表达由部分染色体9和22的易位导致的bcr-abl融合基因的白血病相关。这种异常通常在慢性髓细胞源性白血病中观察到。Btk本质上由bcr-abl激酶磷酸化，这引发在bcr-abl细胞中防止细胞凋亡的下游生存信号(N.Feldhahn等人J.Exp.Med.2005 201(11)：1837-1852)。
本发明的一个实施方案是治疗炎性病症和/或自身免疫病症的方法，其包括对有此需要的患者施用治疗有效量的本发明的Btk抑制剂化合物。
本发明的一个实施方案是治疗类风湿性关节炎的方法，其包括对有此需要的患者施用治疗有效量的本发明的Btk抑制剂化合物。
本发明的一个实施方案是治疗哮喘的方法，其包括对有此需要的患者施用治疗有效量的本发明的任何一种Btk抑制剂化合物。
本发明的一个实施方案是本发明化合物用作治疗活性物质的用途。
本发明的一个实施方案是用于治疗炎性病症和/或自身免疫病症的本发明的化合物。
本发明的一个实施方案是用于治疗类风湿性关节炎或哮喘的本发明的化合物。
本发明的一个实施方案是本发明化合物用于治疗炎性和/或自身免疫病症的用途。
本发明的一个实施方案是本发明化合物用于制备治疗炎性病症和/或自身免疫病症的药物的用途。
实施例
缩写
通常使用的缩写包括：乙酰基(Ac)，偶氮二异丁腈(AIBN)，大气压(Atm)，9-硼杂双环[3.3.1]壬烷(9-BBN或BBN)，2，2’-双(二苯基膦)-1，1’-联萘(BINAP)，叔丁氧羰基(Boc)，焦碳酸二叔丁酯(di-tert-butylpyrocarbonate)或boc酸酐(BOC2O)，苄基(Bn)，丁基(Bu)，化学文摘登记号(CASRN)，苄氧羰基(CBZ或Z)，羰基二咪唑(CDI)，1，4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(DABCO)，三氟化二乙氨基硫(DAST)，二亚苄基丙酮(dba)，1，5-二氮杂双环[4.3.0]壬-5-烯(DBN)，1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)，N，N′-二环己基碳二亚胺(DCC)，1，2-二氯乙烷(DCE)，二氯甲烷(DCM)，2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯并醌(DDQ)，偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)，偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)，氢化二异丁基铝(DIBAL或DIBAL-H)，二异丙基乙胺(DIPEA)，N，N-二甲基乙酰胺(DMA)，4-N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)，N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，二甲亚砜(DMSO)，1，1′-双-(二苯基膦基)乙烷(dppe)，1，1′-双-(二苯基膦基)二茂铁(dppf)，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)，2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氢喹啉(EEDQ)，乙基(Et)，乙酸乙酯(EtOAc)，乙醇(EtOH)，2-乙氧基-2H-喹啉-1-甲酸乙酯(EEDQ)，二***(Et2O)，乙基异丙基醚(EtOiPr)、O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N，N，N’N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐乙酸(HATU)，乙酸(HOAc)，1-N-羟基苯并***(HOBt)，高压液相色谱(HPLC)，异丙醇(IPA)，氯化异丙基镁(iPrMgCl)，六甲基二甲硅基胺(HMDS)，液相色谱质谱(LCMS)，六甲基锂二甲硅基胺(LiHMDS)，间-氯过氧苯甲酸(m-CPBA)，甲醇(MeOH)，熔点(mp)，MeSO2-(甲磺酰基或Ms)，甲基(Me)，乙腈(MeCN)，间氯过苯甲酸(MCPBA)，质谱(ms)，甲基叔丁基醚(MTBE)，甲基四氢呋喃(MeTHF)、N-溴琥珀酰亚胺(NBS)，n-丁基锂(nBuLi)，N-羧基酸酐(NCA)，N-氯琥珀酰亚胺(NCS)，N-甲基吗啉(NMM)，N-甲基-吡咯烷酮(NMP)，氯铬酸吡啶鎓(PCC)，二氯-((双-二苯基膦基)二茂铁基)钯(II)(Pd(dppf)Cl2)，醋酸钯(II)(Pd(OAc)2)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Pd2(dba)3)，重铬酸吡啶鎓(PDC)，苯基(Ph)，丙基(Pr)，异丙基(i-Pr)，磅/平方英寸(psi)，吡啶(pyr)，1，2，3，4，5-五苯基-1′-(二叔丁基膦基)二茂铁(Q-Phos)，室温(rt或RT)，仲丁基锂(sBuLi)，叔丁基二甲基甲硅烷基或t-BuMe2Si(TBDMS)，四正丁基氟化铵(TBAF)，三乙胺(TEA或Et3N)，2，2，6，6-四甲基哌啶1-氧基(TEMPO)，三甲基甲硅烷基乙氧基甲基(SEM)，三氟甲磺酸根或CF3SO2-(Tf)，三氟乙酸(TFA)，1，1′-双-2，2，6，6-四甲基庚烷-2，6-二酮(TMHD)，O-苯并***-1-基-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TBTU)，薄层色谱(TLC)，四氢呋喃(THF)，三甲代甲硅烷基或Me3Si(TMS)，一水合对甲苯磺酸(TsOH或pTsOH)，4-Me-C6H4SO2-或甲苯磺酰基(Ts)，N-氨基甲酸乙酯-N-羧基酸酐(UNCA)和2-二环己基膦-2’，4’，6’-三异丙基联苯(XPHOS)。当用于烷基部分时，包括前缀正(n)、异(i-)、仲(sec-)、叔(tert-)和新(neo)的常规命名法具有它们的惯用含义(J.Rigaudy和D.P.Klesney，Nomenclature in Organic Chemistry，IUPAC 1979Pergamon Press，Oxford.)。
I-1的制备
方案A
步骤1.6-硝基-3′，6′-二氢-2′H-[3，4′]联吡啶-1′-甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0000464558370000501
在500mL圆底烧瓶中，将5-溴-2-硝基吡啶(6.56g，32.3mmol，Eq：1)和4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-5，6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(10g，32.3mmol，Eq：1.00)与二噁烷(160ml)合并得到淡黄色溶液。加入Cs2CO3(21.1g，64.7mmol，Eq：2)和水(6ml)。反应混合物用氩气脱气，之后加入双(三苯基膦)二氯化钯(II)(2.27g，3.23mmol，Eq：0.1)。将反应混合物加热至80℃并搅拌15h。反应混合物被倾入500mL H2O中并用EtOAc(3x200mL)萃取。合并的萃取物用盐水洗涤，MgSO4干燥，滤过并真空浓缩。粗品用快速色谱纯化(硅胶，220g，10％至40％EtOAc在己烷中)得到粉色固体。得到的固体与***一起研磨，得到期望的固体产物(4.8g)。来自研磨的滤液与初次色谱的混合组分合并，并用快速色谱纯化(硅胶，220g，20％至40％EtOAc在己烷中)得到另外的产物(2.2g)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.52(s，9H)2.59(d，J＝1.52Hz，2H)3.72(t，J＝5.56Hz，2H)4.19(d，J＝3.03Hz，2H)6.35(br.s.，1H)7.97(dd，J＝8.46，2.40Hz，1H)8.27(d，J＝8.34Hz，1H)8.67(d，J＝2.27Hz，1H)。
步骤2.6-氨基-3′，4′，5′，6′-四氢-2′H-[3，4′]联吡啶-1′-甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0000464558370000502
在500mL圆底烧瓶中，在EtOH(300ml)和乙酸乙酯(75ml)中的4-(6-硝基吡啶-3-基)-5，6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(4.9g，16.0mmol，Eq：1.00)与钯碳(1.32g，1.24mmol，Eq：0.0773)合并。反应混合物用氢气抽两次，然后用充满氢气的气球搅拌过夜。LC/MS分析显示反应结束。反应混合物用氮气冲洗并通过硅藻土过滤。硅藻土滤饼用EtOAc洗涤数次。向无色的合并的滤液和洗涤液中加入CH2Cl2，将溶液蒸干。再次加入CH2Cl2，真空浓缩溶液得到定量收率的期望产物。(M+H)+＝278m/e。
步骤3.6-(6-氯-2-甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基氨基)-3′，4′，5′，6′-四氢-2′H-[3，4′]联吡啶-1′-甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0000464558370000511
在氩气氛下，将4-溴-6-氯-2-甲基哒嗪-3(2H)-酮(3.59g，16.0mmol，Eq：1.00)、4-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(4.45g，16.0mmol，Eq：1.00)、4，5-双(二苯基膦)-9，9-二甲基呫吨(696mg，1.2mmol，Eq：0.075)和碳酸铯(18.3g，56.2mmol，Eq：3.5)混悬于二噁烷(150ml)中。最终加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(551mg，602μmol，Eq：0.0375)。反应混合物在90℃加热过夜。反应混合物用硅藻土滤过，滤饼用二噁烷洗涤数次。合并的滤液与洗涤液真空浓缩，得到的固体与EtOAc一起研磨，用***洗涤，并在50℃真空干燥箱中过夜，得到4.57g期望的白色固体产物。合并的滤液与洗涤液蒸干，并溶于CH2Cl2(4ml)，粗品用快速色谱(硅胶，120g Analogix柱，20％至50％EtOAc在己烷中共20min)纯化得到另外582mg。总共得到(5.15g，12.3mmol，76.4％收率)。(M+H)+＝420m/e；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.50(s，9H)1.54-1.69(m，3H)1.83(d，J＝13.64Hz，2H)2.67(tt，J＝12.38，3.66Hz，1H)2.83(t，J＝13.14Hz，2H)3.82(s，3H)6.89(d，J＝8.59Hz，1H)7.51(dd，J＝8.46，2.40Hz，1H)8.25(d，J＝2.27Hz，1H)8.27(br.s.，1H)8.30(s，1H)。
步骤4a.6-氯-2-甲基-4-(1′-甲基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-6-基氨基)-2H-哒嗪-3-酮的制备
Figure BDA0000464558370000521
将4-(6-(6-氯-2-甲基-3-氧代-2，3-二氢哒嗪-4-基氨基)吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.0g，4.76mmol，Eq：1.00)溶于甲酸(40.0ml)与甲醛，37％(80.0ml)的混合溶剂中。反应混合物在70℃下搅拌过夜直至LCMS分析确定反应完全，然后冷却至环境温度。加水，得到的水性混合物用CH2Cl2洗涤，弃去CH2Cl2层。将水层的pH仔细地用固体K2CO3调至pH＝12，得到固体沉淀。滤过收集固体，用水洗涤，并在50℃真空干燥箱干燥72h得到1.4g的期望产物。(M+H)+＝334m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm1.84(dd，J＝8.31，3.02Hz，4H)1.99-2.19(m，2H)2.35(s，3H)2.42-2.68(m，1H)3.02(d，J＝12.09Hz，2H)3.81(s，3H)6.86(d，J＝8.31Hz，1H)7.52(dd，J＝8.50，2.46Hz，1H)8.16-8.33(m，3H)。
步骤4b.2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-4-碘-吡啶-3-甲醛的制备
在1L圆底烧瓶中，将6-叔丁基-8-氟酞嗪-1(2H)-酮(5.6g，25.4mmol，Eq：1.00)与THF(300ml)合并得到无色溶液。加入氢化钠(1.12g，28.0mmol，Eq：1.1)。反应混合物在环境温度下搅拌10min。加入2-氟-4-碘烟醛(7.02g，28.0mmol，Eq：1.1)，反应混合物在环境温度下搅拌1h。LCMS分析确定反应完全。用饱和NH4Cl终止反应。将反应混合物倾入200mL H2O中，并用CH2Cl2萃取3次。有机层用盐水洗涤，然后用Na2SO4干燥并真空浓缩。将得到的亮黄色固体转移至过滤漏斗中，烧瓶用少体积的EtOAc洗涤两次，以确保固体完全转移至漏斗中。将液体滤过。固体与Et2O一起研磨两次，真空干燥得到米色固体状的期望产物(8.09g，17.9mmol，70.5％收率)。(M+H)+＝452m/e。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.44(s，9H)7.49-7.54(m，1H)7.54(d，J＝1.77Hz，1H)8.03(d，J＝5.31Hz，1H)8.30(d，J＝2.53Hz，1H)8.37(d，J＝5.31Hz，1H)9.98(s，1H)。
步骤5.2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-4-[1-甲基-5-(1′-甲基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-6-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-3-甲醛
Figure BDA0000464558370000531
将6-氯-2-甲基-4-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮(1.4g，4.19mmol，Eq：1.00)、双(频哪醇)二硼(1.17g，4.61mmol，Eq：1.1)和醋酸钾(1.23g，12.6mmol，Eq：3)混悬于二噁烷(60ml)中。反应混合物在氩气下脱气。加入X-PHOS(300mg，629μmol，Eq：0.15)和醋酸钯(II)(47.1mg，210μmol，Eq：0.05)，反应混合物在氮气氛下在100℃(外温)搅拌1h。取样并溶于甲醇，用LCMS法查看起始的氯化物消失并伴随出现硼酸(M+1＝344)密切监控反应，但小心使去氯副产物(M+1＝300)的量降至最低。1h后反应完成。热浴温度回到80℃，并将烧瓶升离热浴，但持续搅拌。加入2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-碘烟醛(1.89g，4.19mmol，Eq：1.00)和碳酸钾(1.74g，12.6mmol，Eq：3)，之后加水(6.00ml)。加入三环己基膦(118mg，419μmol，Eq：0.1)和双(二苄亚基丙酮)钯(121mg，210μmol，Eq：0.05)。反应混合物在80℃下加热并剧烈搅拌，搅拌2h然后将反应混合物冷却至环境温度。反应混合物被倾入水中，并轻轻振摇萃取至EtOAc中(2X)。合并的EtOAc萃取物用盐水洗涤。水相用CH2Cl2萃取3次。合并CH2Cl2和乙酸乙酯层，合并的有机层用Na2SO4干燥，真空浓缩。粗品被混悬于50ml CH2Cl2中并加入200ml Et2O。滤过固体，并用Et2O洗涤。沉淀出第二批固体，并滤过收集，用***洗涤。两批具有相似的LCMS和1H-nmr光谱，与期望的产物一致，合并这两批得到1.62g产物。(M+H)+＝623m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.42(s，9H)1.88(br.s.，3H)2.39(br.s.，3H)2.46-2.64(m，1H)3.05(br.s.，2H)3.89(s，3H)6.91(d，J＝8.31Hz，1H)7.38-7.66(m，3H)7.76(d，J＝5.29Hz，1H)8.19-8.38(m，3H)8.81(s，1H)8.87(d，J＝5.29Hz，1H)10.11(s，1H)。
实施例1
步骤6.6-叔丁基-8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(1′-甲基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-6-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-酞嗪-1-酮
Figure BDA0000464558370000541
在250mL圆底烧瓶中，将2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢哒嗪-3-基)烟醛(1.62g，2.6mmol，Eq：1.00)与干燥的CH2Cl2(45ml)和干燥的MeOH(20mL)合并得到棕色溶液。加入硼氢化钠(177mg，4.68mmol，Eq：1.8)，反应在环境温度下搅拌1h，之后用饱和NH4Cl终止反应。反应混合物用50mLH2O稀释，并用CH2Cl2(3x150mL)萃取。有机层用Na2SO4干燥并真空浓缩。粗产物用快速色谱[硅胶，80g，0％至50％(60∶10∶1 CH2Cl2∶MeOH∶NH4OH)在CH2Cl2中]纯化得到略微不纯的泡沫。将泡沫混悬于30ml Et2O和10ml EtOAc中，并用搅拌棒缓慢搅拌1h，得到白色固体。过滤收集固体，50℃真空干燥48h，得到白色固体状的期望产物(880mg)。(M+H)+＝625m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.44(s，9H)1.87(br.s.，3H)2.15(br.s.，2H)2.39(br.s.，3H)2.52(t，J＝7.74Hz，1H)3.04(br.s.，2H)3.82-3.91(m，1H)3.93(s，3H)4.46-4.63(m，2H)6.93(d，J＝8.69Hz，1H)7.42-7.59(m，3H)7.64(d，J＝4.91Hz，1H)8.15-8.39(m，3H)8.70(s，1H)8.73(d，J＝4.91Hz，1H)。
I-2的制备
方案B
Figure BDA0000464558370000551
步骤1.2-氯-5-((S)-1-甲基-吡咯烷-2-基)-吡啶的制备
Figure BDA0000464558370000552
将100mL圆底烧瓶放置在氩气氛下，并用氩气真空脱气。将溶剂(己烷(4ml)和甲苯12ml))加入到烧瓶中，加入N，N-二甲基乙醇胺(1.07g，1.21ml，12.0mmol)。将反应混合物冷却至0℃。加入N-丁基锂(8.66ml 2.5M在己烷中，21.6mmol)。反应混合物在0℃下搅拌30min。将反应混合物冷却至-20℃。加入(S)-3-(1-甲基吡咯烷-2-基)吡啶(650mg，0.64ml，4.01mmol)。反应混合物-20℃搅拌1h。将反应混合物冷却至-78℃，加入六氯乙烷(3.8g，16.0mmol)在甲苯(8ml)中的溶液。反应混合物在-78℃下搅拌1h。用冷的饱和NaHCO3(4mL)终止反应。LCMS显示反应得到6∶1比例的期望的位置异构体与不期望的6-氯吡啶产物。将反应混合物倾入50mLH2O中，并用CH2Cl2(3x 125mL)萃取。有机层用Na2SO4干燥并真空浓缩。
粗品用快速色谱(硅胶，40g，0％至55％EtOAc在己烷中)纯化得到期望的产物(467mg，59％)。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.56-2.05(m，3H)2.16-2.40(m和重叠s，5H)3.09(t，J＝8.31Hz，1H)3.17-3.29(m，1H)7.23-7.32(m，1H)7.68(dd，J＝8.12，2.45Hz，1H)8.30(d，J＝2.27Hz，1H)。
步骤2.5-((S)-1-甲基-吡咯烷-2-基)-吡啶-2-基胺的制备
Figure BDA0000464558370000561
在75mL密封管中，将(S)-2-氯-5-(1-甲基吡咯烷-2-基)吡啶(622mg，3.16mmol)和2-(二环己基膦)联苯(222mg，633μmol)与THF(15ml)合并得到淡黄色溶液。溶液用氩气脱气。加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(290mg，316μmol)。加入LiHMDS(9.49ml 1M溶液在THF中，9.49mmol)。反应被置于氩气氛下并密封。反应混合物被加热至90℃并搅拌15h。通过tlc发现反应完全。将反应混合物冷却至室温，并用EtOAc稀释。将反应混合物倾入150mL饱和NH4Cl中，并用EtOAc(4x 75mL)萃取。有机层用MgSO4干燥并真空浓缩。粗品用逐步梯度的快速色谱纯化(硅胶，40g，10％至50％(60∶10∶1 CH2Cl2∶甲醇∶NH4OH)/CH2Cl2)梯度得到期望的产物(560mg，99％)。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.57-2.03(m，3H)2.04-2.39(m和重叠s，5H)2.92(t，J＝8.12Hz，1H)3.14-3.29(m，1H)4.40(br.s.，2H)6.51(d，J＝8.69Hz，1H)7.47(dd，J＝8.31，2.27Hz，1H)7.95(d，J＝2.27Hz，1H)。
步骤3.6-氯-2-甲基-4-[5-((S)-1-甲基-吡咯烷-2-基)-吡啶-2-基胺]-2H-哒嗪-3-酮的制备
Figure BDA0000464558370000571
在50mL圆底烧瓶中，将5-((S)-1-甲基-吡咯烷-2-基)-吡啶-2-基胺(560mg，3.16mmol)、4-溴-6-氯-2-甲基哒嗪-3(2H)-酮(847mg，3.79mmol)和碳酸铯(3.09g，9.48mmol)与二噁烷(25ml)合并得到橙色混悬液。加入4，5-双(二苯基膦)-9，9-二甲基呫吨(274mg，474μmol，Eq：0.15)，之后加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(145mg，158μmol，Eq：0.05)。反应用氩气脱气10min，并在95-105℃加热4h。无苯胺起始物料保留。反应混合物用200ml CH2Cl2稀释。加入MgSO4，混合物搅拌5min。滤过反应，并用CH2Cl2洗涤滤饼数次。将合并的滤液与洗涤液真空浓缩。粗品用快速色谱纯化(硅胶，40g，1％-2％MeOH在CH2Cl2中)得到期望的产物(522mg，52％)。(M+H)+＝320m/e。
实施例2
步骤4.6-叔丁基-8-氟-2-(3-羟基甲基-4-{1-甲基-5-[5-((S)-1-甲基-吡咯烷-2-基)-吡啶-2-基氨基]-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基}-吡啶-2-基)-2H-酞嗪-1-酮的制备
Figure BDA0000464558370000581
用与实施例1(步骤5-6)相似的方法制备，只是在第5步中用6-氯-2-甲基-4-[5-((S)-1-甲基-吡咯烷-2-基)-吡啶-2-基氨基]-2H-哒嗪-3-酮替换6-氯-2-甲基-4-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮，得到85mg的白色固体状标题化合物。(M+H)+＝611m/e。1H NMR 1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.41-1.46(m，9H)2.19(br.s.，3H)2.98-3.34(m，1H)3.88(s，1H)3.93(s，3H)4.46-4.64(m，2H)6.97(d，J＝8.31Hz，1H)7.43-7.79(m，4H)8.21-8.38(m，3H)8.65-8.84(m，2H)。
(M+H)+＝611m/e.
I-3的制备
步骤1.6-氯-2-甲基-4-[5-(吗啉-4-羰基)-吡啶-2-基氨基]-2H-哒嗪-3-酮的制备
Figure BDA0000464558370000582
在加热下将(6-氨基吡啶-3-基)(吗啉代)甲酮(58g，280mmol，Eq：1.00)、4-溴-6-氯-2-甲基哒嗪-3(2H)-酮(63.66g，285mmol，Eq：1.02)和(9，9-二甲基-9H-呫吨-4，5-二基)双(二苯基膦)(4.86g，8.4mmol，Eq：0.03)溶于DMF(1.1l)。加入碳酸铯(274g，840mmol，Eq：3)。最终在氩气氛下加入Pd2(dba)3(3.84g，4.2mmol，Eq：0.015)。将反应混合物加热至93℃(内温)3hr。将温热的反应混合物倾入水/冰(10l)中。滤过收集褐色沉淀，并用水(2l)洗涤。得到的固体被吸收至DCM(5l)中，滤过。滤液真空浓缩得到固体，将固体用异丙醇(700ml)研磨，滤过并真空干燥得到褐色固体状的期望产物(70.24g)。(M+H)+＝350m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 3.56-3.79(m，8H)3.83(s，3H)6.96(d，J＝8.31Hz，1H)7.77(dd，J＝8.31，2.27Hz，1H)8.34-8.42(m，2H)8.47(d，J＝2.27Hz，1H)。
实施例3
6-叔丁基-8-氟-2-(3-羟基甲基-4-{1-甲基-5-[5-(吗啉-4-羰基)-吡啶-2-基氨基]-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基}-吡啶-2-基)-2H-酞嗪-1-酮的制备
Figure BDA0000464558370000591
用与实施例1(步骤5-6)相似的方法制备，除了在第5步中用6-氯-2-甲基-4-[5-(吗啉-4-羰基)-吡啶-2-基氨基]-2H-哒嗪-3-酮替换6-氯-2-甲基-4-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮，得到165mg白色固体状的标题化合物。(M+H)+＝641m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.44(s，9H)3.54-3.84(m，8H)3.94(s，3H)4.57(s，2H)7.03(d，J＝8.69Hz，1H)7.45-7.59(m，2H)7.64(d，J＝4.91Hz，1H)7.79(dd，J＝8.69，2.27Hz，1H)8.33(d，J＝2.64Hz，1H)8.41-8.55(m，2H)8.74(d，J＝4.91Hz，1H)8.77(s，1H)。
I-4的制备
步骤1.6-氯-4-(5-甲磺酰基-吡啶-2-基氨基)-2-甲基-2H-哒嗪-3-酮的制备
Figure BDA0000464558370000601
在氩气下的圆底烧瓶中放入油分散物中的1.14g 95％氢化钠和90mL的四氢呋喃(Aldrich，无水，无抑制剂)。将混合物在冰浴中冷却，一次性加入3.10g的5-(甲基磺酰基)吡啶-2-胺。移去冷却浴，将混合物在室温下搅拌。15分钟后将混合物在冰浴中冷却，一次性加入4.103g的4-溴-6-氯-2-甲基哒嗪-3(2H)-酮。移去冷却浴，混合物在室温下搅拌。90分钟后，混合物在冰浴中冷却，并滴加90mL 0.5M盐酸(在头数滴时产生气体，颜色从红棕色变至浅褐色，加入15分钟)。移去冷却浴，混合物再搅拌15分钟，吸滤收集固体，用水、***洗涤。将固体风干过夜得到浅黄色固体状的期望的产物(5.05g)。H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 3.25(s，3H)3.69(s，3H)7.73(d，J＝8.69Hz，1H)8.16(dd，J＝1.00Hz，1H)8.42(s，1H)8.83(d，J＝2.27Hz，1H)。
实施例4
6-叔丁基-8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[5-(5-甲磺酰基-吡啶-2-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-酞嗪-1-酮的制备
Figure BDA0000464558370000602
用与实施例1(步骤5-6)相似的方法制备，只是第5步中用6-氯-4-(5-甲磺酰基-吡啶-2-基氨基)-2-甲基-2H-哒嗪-3-酮替换6-氯-2-甲基-4-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮得到65mg白色固体状的标题化合物。(M+H)+＝606m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.44(s，9H)3.11(s，3H)3.96(s，3H)4.58(s，2H)7.09(d，J＝9.06Hz，1H)7.49-7.59(m，2H)7.64(d，J＝4.91Hz，1H)8.11(dd，J＝8.69，2.27Hz，1H)8.34(d，J＝2.64Hz，1H)8.64(s，1H)8.75(d，J＝4.91Hz，1H)8.91(s，2H)。
I-5的制备
步骤1.6-氯-N，N-二甲基-烟酰胺的制备
Figure BDA0000464558370000611
在500mL圆底烧瓶中，在氩气下将6-氯烟酰氯(8g，45.5mmol，Eq：1.00)溶于DCM(200ml)中并冷却至0℃。向该溶液中，在15min里滴加二甲胺(90.9ml 2M在THF中，182mmol，Eq：4)。温度保持在10℃以下。移去冰浴，将反应搅拌3h。
将反应混合物用水(100mL)、20％碳酸钾(200mL)和水(100mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。除去溶剂得到黄色油状物，其静置后固化。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 2.76-3.27(m，6H)7.38(d，J＝8.31Hz，1H)7.74(dd，J＝8.12，2.46Hz，1H)8.46(d，J＝2.64Hz，1H)。
步骤2.6-叠氮基-N，N-二甲基-烟酰胺的制备
Figure BDA0000464558370000612
在500mL圆底烧瓶中，将6-氯-N，N-二甲基烟酰胺(8.15g，44.1mmol)与DMF(50.0ml)合并得到棕色溶液。加入叠氮化钠(3.44g，53.0mmol)，将反应混合物加热至120℃，搅拌60h。反应混合物用100mL H2O稀释，并用EtOAc(2x 200mL)萃取。合并有机层，用H2O(1x 50mL)、饱和NaCl(1x 100mL)洗涤，Na2SO4干燥，真空浓缩得到黄色油状物。加入MeOH，浓缩下整个混合物固化。粗品真空干燥过夜。糊状固体从EtOAc/Hex重结晶。滤过固体，并用较少量己烷洗涤。白色粉末在45℃下真空干燥3小时得到2.23g(26％)标题化合物。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δ：8.95(s，1H)，8.09(d，J＝9.1Hz，1H)，7.75(dd，J＝9.1，1.5Hz，1H)，3.15(br.s.，6H)。
步骤3.6-氨基-N，N-二甲基-烟酰胺的制备
Figure BDA0000464558370000621
在250mL圆底烧瓶中，将6-叠氮基-N，N-二甲基烟酰胺(2.26g，11.8mmol)与乙酸乙酯(50ml)和甲醇(30ml)合并得到黄色溶液。加入10％Pd/C(200mg，1.88mmol)，抽空反应混合物，并充入H2两次。反应混合物在气球压力H2下在25℃搅拌17h。将反应混合物用硅藻土过滤，滤饼用MeOH洗涤。将滤液真空浓缩，并45℃下真空干燥米色固体3小时得到定量收率的标题化合物。(M+H)+＝166m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δ：8.21(d，J＝2.3Hz，1H)，7.59(dd，J＝8.3，2.3Hz，1H)，6.50(d，J＝8.7Hz，1H)，4.69(br.s.，2H)，3.08(s，6H)。
实施例5
6-{6-[2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-3-羟基甲基-吡啶-4-基]-2-甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基氨基}-N，N-二甲基-烟酰胺的制备
Figure BDA0000464558370000631
用与实施例3相似的方法制备，除了用6-氨基-N，N-二甲基-烟酰胺替换(6-氨基吡啶-3-基)(吗啉代)甲酮得到163mg白色固体状的标题化合物。(M+H)+＝599m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.43(s，9H)3.12(s，6H)3.94(s，3H)4.57(s，2H)7.00(d，J＝8.69Hz，1H)7.48-7.59(m，2H)7.64(d，J＝4.91Hz，1H)7.80(dd，J＝8.50，2.08Hz，1H)8.32(d，J＝2.27Hz，1H)8.42-8.51(m，2H)8.74(d，J＝5.29Hz，1H)8.78(s，1H)。
I-6的制备
步骤1.2-(6-环丙基-8-氟-1-氧代-1H-异喹啉-2-基)-4-碘-吡啶-3-甲醛
Figure BDA0000464558370000632
在50mL圆底烧瓶中，将6-环丙基-8-氟异喹啉-1(2H)-酮(364mg，1.79mmol，Eq：1.00)与THF(13.00ml)合并得到略雾状无色溶液。加入双(三甲硅基)乙酰胺锂在THF(2.15ml 1M，2.15mmol，Eq：1.2)中的溶液。环境温度下搅拌20min。加入在5mL THF中的2-氟-4-碘烟醛(629mg，2.51mmol，Eq：1.4)。将反应混合物加热至65℃并搅拌3h，然后使其冷却至RT。将反应用饱和NH4Cl终止，用EtOAc萃取一次，二氯甲烷萃取三次。合并的有机层用盐水洗涤，Na2SO4干燥并真空浓缩。粗品用快速色谱纯化(硅胶，80g，1％至2％MeOH在DCM中)，然后用EtOAc使起泡沫，得到淡黄色粉末状的期望产物(90％纯度，423mg)。产物被原样用于下一步骤中。(M+H)+＝435m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 0.74-0.92(m，2H)1.03-1.20(m，2H)1.91-2.05(m，1H)6.56(dd，J＝7.74，2.08Hz，1H)6.78(dd，J＝12.84，1.51Hz，1H)7.02(d，J＝1.51Hz，1H)7.51(d，J＝7.93Hz，1H)7.89(d，J＝5.29Hz，1H)8.25(d，J＝5.29Hz，1H)9.91(s，1H)。
实施例6
步骤2.6-{6-[2-(6-环丙基-8-氟-1-氧代-1H-异喹啉-2-基)-3-羟基甲基-吡啶-4-基]-2-甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基氨基}-N，N-二甲基-烟酰胺的制备
Figure BDA0000464558370000641
用与实施例1(步骤5-6)中相似的方法制备，只是在第5步中用6-(6-氯-2-甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基氨基)-N，N-二甲基-烟酰胺替换6-氯-2-甲基-4-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮，并用2-(6-环丙基-8-氟-1-氧代-1H-异喹啉-2-基)-4-碘-吡啶-3-甲醛替换2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-碘烟醛，得到白色固体状的148mg标题化合物。(M+H)+＝582m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 0.81-0.93(m，2H)1.06-1.21(m，2H)1.90-2.14(m，1H)3.34-3.56(m，1H)3.94(s，3H)4.40-4.66(m，6H)6.51-6.62(m，1H)6.82(d，J＝12.84Hz，1H)7.02(d，J＝8.69Hz，1H)7.07(s，1H)7.19-7.31(m，4H)7.61(d，J＝4.91Hz，1H)7.80(dd，J＝8.31，2.27Hz，1H)8.42-8.52(m，2H)8.69(dd，J＝4.91，0.76Hz，1H)8.78(s，1H)。
I-7的制备
方案C
步骤1.2，5-二-叔丁基-3-羟基-2，3-二氢-异吲哚-1-酮的制备
Figure BDA0000464558370000652
在装有通起泡管线的加料漏斗、氮气入口的1L三颈瓶中，通N2，将N，4-二-叔丁基苯甲酰胺(5g，21.4mmol，Eq：1.00)与THF(200ml)合并得到淡黄色溶液。将反应冷却至-78℃。缓慢滴加在环己烷中的仲丁基锂(31.4ml 1.4M，43.9mmol，Eq：2.05)，并通N2。得到黄色溶液。将反应混合物温热至-15℃ 1h。得到淡黄色混悬液。将反应混合物冷却回至-78℃。滴加干燥的DMF(3.13g，3.32ml，42.9mmol，Eq：2)。
使反应混合物温热至室温，0℃下缓慢加入30mL饱和NH4Cl。将反应混合物倾入150mL H2O中，用EtOAc(3x 250mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，MgSO4干燥并真空浓缩。粗品用快速色谱纯化(硅胶，80g，0％至40％EtOAc在己烷中的溶液得到期望的产物(4.9g，88％收率)。(M+H)+＝262m/e。
步骤2.6-叔丁基-2H-酞嗪-1-酮的制备
Figure BDA0000464558370000661
在250mL圆底烧瓶中，将2，5-二-叔丁基-3-羟基异吲哚啉-1-酮(4.9g，18.7mmol，Eq：1.00)与醋酸(60ml)合并得到无色溶液。将反应加热至90℃。滴加水合肼(1.61g，1.57ml，20.6mmol，Eq：1.1)。反应混合物在90℃搅拌1h。反应混合物用24mL H2O稀释，并在3h中缓慢冷却至25℃。将反应混合物浓缩，但不很干。反应混合物被吸收至二氯甲烷中。将反应混合物倾入75mL饱和NaHCO3中并用二氯甲烷(3x 50mL)萃取。有机层用Na2SO4干燥，并真空浓缩，得到白色固体状的纯产物，其用快速色谱纯化(硅胶，80g，1％至4％MeOH在DCM中的溶液)得到白色固体状的期望产物(3.7g)。(M+H)+＝203m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 0.32(s，9H)6.58(d，J＝1.89Hz，1H)6.76(dd，J＝8.31，1.89Hz，1H)7.06(s，1H)7.26(d，J＝8.31Hz，1H)9.19(br.s.，1H)。
步骤3.2-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-4-碘-吡啶-3-甲醛的制备
Figure BDA0000464558370000662
在100mL圆底烧瓶中，将6-叔丁基酞嗪-1(2H)-酮(700mg，3.46mmol，Eq：1.00)与THF(30ml)合并得到无色溶液。加入氢化钠(152mg，3.81mmol，Eq：1.1)。反应混合物在环境温度下搅拌15min。2-氟-4-碘烟醛(956mg，3.81mmol，Eq：1.1)在10mL THF中的溶液被加至反应混合物中，在环境温度下搅拌3.5h。反应不完全。另加50mg NaH。反应再搅拌1.5h，之后加入饱和NH4Cl。将反应混合物倾入100mL H2O，用二氯甲烷(5x 50mL)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，并真空浓缩。产品用快速色谱纯化(硅胶，80g，10％至60％EtOAc在己烷中)得到略不纯的产物。产物与EtOAc一起研磨得到米色固体状的期望产物。将合并的滤液与研磨得到的洗涤液浓缩，用快速色谱再次纯化(硅胶，80g，10％至60％EtOAc在己烷中)，用EtOAc研磨得到米色固体的另外的产物。合并两批产物得到320mg期望的产物。1HNMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.44(s，9H)7.74(d，J＝1.89Hz，1H)7.89(dd，J＝8.50，1.70Hz，1H)8.02(d，J＝5.29Hz，1H)8.28-8.44(m，3H)9.92(s，1H)(M+H)+＝434m/e。
实施例7
6-叔丁基-2-(3-羟基甲基-4-{1-甲基-5-[5-(吗啉-4-羰基)-吡啶-2-基氨基]-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基}-吡啶-2-基)-2H-酞嗪-1-酮的制备
Figure BDA0000464558370000671
用与实施例1(步骤5-6)相似的方法制备，只是在第5步中用6-氯-2-甲基-4-[5-(吗啉-4-羰基)-吡啶-2-基氨基]-2H-哒嗪-3-酮替换6-氯-2-甲基-4-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮，用2-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-4-碘-吡啶-3-甲醛替换2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-碘烟醛，得到白色固体状的115mg标题化合物。(M-H)+＝621m/e。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.47(s，9H)3.58-3.87(m，6H)3.96(s，3H)4.57(br.s.，2H)7.05(dd，J＝8.53，0.50Hz，1H)7.65(d，J＝5.02Hz，1H)7.80(td，J＝4.27，2.26Hz，2H)7.95(dd，J＝8.41，1.88Hz，1H)8.41(s，1H)8.47(dd，J＝5.02，3.26Hz，2H)8.50(s，1H)8.77(d，J＝5.02Hz，1H)8.81(s，1H)。
实施例8
2′-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-3′-羟基甲基-1-甲基-5-[5-(吗啉-4-羰基)-吡啶-2-基氨基]-1H-[3，4′]联吡啶-6-酮的制备
Figure BDA0000464558370000681
在50mL圆底烧瓶中，将2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-碘烟醛(105mg，233μmol，Eq：1.00)和1-甲基-3-(5-(吗啉-4-羰基)吡啶-2-基氨基)-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮(123mg，279μmol，Eq：1.20)与二噁烷(5ml)合并得到淡黄色溶液。加入水(1mL)和碳酸钾(74.0mg，535μmol，Eq：2.3)。反应通过向溶液通氩气5min脱气。加入三环己基膦(6.53mg，23.3μmol，Eq：.1)和双(二苄亚基丙酮)钯(6.69mg，11.6μmol，Eq：0.05)。将反应混合物加热至75℃并搅拌1h。用2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-碘烟醛消耗的硼酸酯，如LCMS分析测定的，仍有剩余。加入另外30mg的1-甲基-3-(5-(吗啉-4-羰基)吡啶-2-基氨基)-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮和3mg配体，并加入催化剂，将反应混合物加热至75℃并搅拌1h。
反应混合物被倾入50mL H2O中，并用EtOAc(1X)和含有一些MeOH的DCM(＜5％)(3x 50mL)萃取。合并的有机层用MgSO4干燥并真空浓缩。产品用快速色谱纯化(硅胶，24g，0.5％至2％MeOH在DCM中)，得到50mg的2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-(吗啉-4-羰基)吡啶-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)烟醛。
在250mL圆底烧瓶中，将2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-(吗啉-4-羰基)吡啶-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)烟醛(50mg，78.4μmol，Eq：1.00)与二氯甲烷(6ml)和2mL MeOH合并得到黄色溶液。加入硼氢化钠(3.56mg，94.1μmol，Eq：1.2)。将无色溶液在环境温度下搅拌1h。加入1mL饱和NH4Cl；之后加入5mL H2O。混合物搅拌5min。反应混合物被倾入50mL H2O中，并用EtOAc(3x 50mL)萃取。有机层用Na2SO4干燥并真空浓缩。粗品用快速色谱纯化(硅胶，24g，1％至3％MeOH在DCM中的溶液)得到类白色粉末状的期望产物(41mg)。(M+H)+＝640m/e。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.46(s，9H)3.50-3.85(s和重叠m，11H)4.51(br.s.，2H)6.90(d，J＝8.59Hz，1H)7.51-7.63(m，3H)7.71(dd，J＝8.59，2.53Hz，1H)7.79(d，J＝2.53Hz，1H)8.26(br.s.，1H)8.37(d，J＝1.52Hz，2H)8.70(d，J＝5.05Hz，1H)8.82(d，J＝2.02Hz，1H)。
实施例9
2′-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-3′-羟基甲基-5-(5-甲磺酰基-吡啶-2-基氨基)-1-甲基-1H-[3，4′]联吡啶-6-酮的制备
Figure BDA0000464558370000691
在50mL圆底烧瓶中，将2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-碘烟醛(200mg，443μmol，Eq：1.00)和1-甲基-3-(5-(甲基磺酰基)吡啶-2-基氨基)-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮1(234mg，576μmol，Eq：1.3)合并于二噁烷中(5ml)，得到淡黄色溶液。加入水(1mL)和碳酸钾(141mg，1.02mmol，Eq：2.3)。反应用在整个溶液通氩气5min脱气。加入三环己基膦(12.4mg，44.3μmol，Eq：.1)和双(二苄亚基丙酮)钯(12.7mg，22.2μmol，Eq：0.05)。反应混合物被加热至70℃并搅拌3h。得到的反应混合物为橙色混悬液。将反应混合物冷却至环境温度，用EtOAc稀释并滤过。得到的固体用H2O洗涤三次，用少量EtOAc洗涤三次，***洗涤一次，得到154mg的2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-(甲基磺酰基)吡啶-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)烟醛。LCMS显示为纯的产物。(M+H)+＝603m/e。
在250mL圆底烧瓶中，将2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-(1-甲基-5-(5-(甲基磺酰基)吡啶-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)烟醛(154mg，256μmol，Eq：1.00)与二氯甲烷(24ml)和2mL MeOH合并。加入硼氢化钠(14.5mg，383μmol，Eq：1.5)，反应混悬液在环境温度下搅拌1h。加入1mL饱和NH4Cl；之后加入5mL H2O。混合物搅拌5min。将反应混合物倾入50mL H2O，并用二氯甲烷(3x 50mL)萃取。有机层用Na2SO4干燥，并真空浓缩。粗品用快速色谱纯化(硅胶，12g，1％至3％MeOH在DCM中的溶液)得到白色粉末状的期望产物(90mg)。(M+H)+＝605m/e。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.46(s，9H)3.10(s，3H)3.77(s，3H)4.51(br.s.，2H)6.94(d，J＝8.59Hz，1H)7.48-7.65(m，3H)7.88(d，J＝2.53Hz，1H)8.00(dd，J＝8.59，2.53Hz，1H)8.33-8.45(m，2H)8.71(d，J＝5.05Hz，1H)8.82(d，J＝2.53Hz，1H)8.92(d，J＝2.53Hz，1H)。
I-10的制备
方案D
Figure BDA0000464558370000701
步骤1.6-(5-溴-1-甲基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-基氨基)-N，N二甲基-烟酰胺的制备
Figure BDA0000464558370000711
将6-(5-溴-1-甲基-2-氧代-1，2-二氢吡啶-3-基氨基)烟酸(从甲酯(3.7g的80∶20纯酸∶酯，9.1mmol，1当量)、DIEA(1.77g，13.7mmol，1.5当量水解制备)、二甲胺(2M的6.85mL，13.7mmol，1.5equiv)和(1H-苯并[d][1，2，3]***-1-基氧基)三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐(V)(6.06g，13.7mmol，1.5当量)合并在200mL的THF中。反应混合物搅拌过夜，然后浓缩至几乎干。反应混合物用NH4Cl/水(300mL)稀释，并用EtOAc(3X250mL)萃取。有机相用NaHCO3/水(3X200mL)和水(3X200mL)洗涤。然后将合并的有机相浓缩得到固体，其从EtOH/Hex重结晶得到期望的产物(1.7g)。(M+H)+＝351,353m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 3.11(s，6H)3.61(s，3H)6.80(d，J＝8.31Hz，1H)7.03(d，J＝2.27Hz，1H)7.69(dd，J＝8.69，2.27Hz，1H)8.04(s，1H)8.42(d，J＝2.27Hz，1H)8.74(d，J＝2.64Hz，1H)。
步骤2.N，N-二甲基-6-[1-甲基-2-氧代-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼戊环2-基)-1，2-二氢-吡啶-3-基氨基]-烟酰胺的制备
Figure BDA0000464558370000712
在50mL圆底烧瓶中，将6-(5-溴-1-甲基-2-氧代-1，2-二氢吡啶-3-基氨基)-N，N-二甲基烟酰胺(1.0g，2.85mmol，Eq：1.00)和双(频哪醇)二硼(795mg，3.13mmol，Eq：1.1)与1，4-二噁烷(10.0ml)合并得到绿色溶液。搅拌反应混合物至其全部溶解。将混合物置于氩气下，然后加入醋酸钾(838mg，8.54mmol，Eq：3)。将醋酸钯(II)(12.8mg，56.9μmol，Eq：0.02)和X-PHOS(40.7mg，85.4μmol，Eq：0.03)加至反应混合物中。将混合物置于氩气氛下，并将反应混合物加热至75℃，N2下搅拌1h。使反应混合物冷却至65℃，然后硅藻土过滤。用温热的二噁烷(10ml)洗涤固体，并冷却至环境温度，然后加入己烷(30ml)。使混合物在环境温度下静置1h，然后滤过收集固体，并用己烷洗涤，并在50℃真空烘箱中干燥过夜，得到期望的产物(227mg)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.36(s，12H)3.13(s，6H)3.66(s，3H)6.81(d，J＝8.59Hz，1H)7.43(d，J＝1.52Hz，1H)7.69(dd，J＝8.59，2.53Hz，1H)7.96(br.s.，1H)8.48(d，J＝2.02Hz，1H)8.67(d，J＝1.52Hz，1H)。
实施例10
6-[2′-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-3′-羟基甲基-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-[3，4′]联吡啶-5-基氨基]-N，N-二甲基-烟酰胺的制备
Figure BDA0000464558370000721
用与实施例8相似的方法制备，只是用N，N-二甲基-6-[1-甲基-2-氧代-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼戊环-2-基)-1，2-二氢-吡啶-3-基氨基]-烟酰胺替换1-甲基-3-(5-(吗啉-4-羰基)吡啶-2-基氨基)-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮，得到类白色固体状的标题化合物54mg。(M+H)+＝598m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.44(s，9H)3.11(s，6H)3.74(s，3H)4.49(br.s.，2H)6.86(d，J＝8.31Hz，1H)7.49-7.62(m，3H)7.70(dd，J＝8.50，2.45Hz，1H)7.78(d，J＝2.27Hz，1H)8.16(br.s.，1H)8.36(dd，J＝8.88，2.45Hz，2H)8.68(d，J＝4.91Hz，1H)8.82(d，J＝2.27Hz，1H)。
实施例11
2′-(6-环丙基-8-氟-1-氧代-1H-异喹啉-2-基)-3′-羟基甲基-1-甲基-5-[5-(吗啉-4-羰基)-吡啶-2-基氨基]-1H-[3，4′]联吡啶-6-酮的制备
Figure BDA0000464558370000731
用与实施例8相似的方法制备，只是用2-(6-环丙基-8-氟-1-氧代-1H-异喹啉-2-基)-4-碘-吡啶-3-甲醛替换2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-碘烟醛，得到白色固体状的标题化合物83mg。(M+H)+＝623m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 0.78-0.97(m，2H)1.09-1.23(m，2H)1.60(br.s.，1H)1.94-2.10(m，1H)3.55-3.88(m和重叠单峰，11H)4.29-4.62(m，2H)6.61(dd，J＝7.55，1.89Hz，1H)6.79-6.96(m，2H)7.09(d，J＝1.51Hz，1H)7.21-7.27(m，1H)7.53(d，J＝5.29Hz，1H)7.68(dd，J＝8.69，2.27Hz，1H)7.96(d，J＝2.27Hz，1H)8.26(br.s.，1H)8.35(d，J＝2.27Hz，1H)8.62(d，J＝4.91Hz，1H)8.80(d，J＝2.27Hz，1H)。
实施例12
6-叔丁基-2-(3-羟基甲基-4-{1-甲基-5-[5-((S)-1-甲基-吡咯烷-2-基)-吡啶-2-基氨基]-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基}-吡啶-2-基)-2H-酞嗪-1-酮的制备
Figure BDA0000464558370000741
用与实施例1(步骤5-6)相似的方法制备，只是在第5步中用6-氯-2-甲基-4-[5-((S)-1-甲基-吡咯烷-2-基)-吡啶-2-基氨基]-2H-哒嗪-3-酮替换6-氯-2-甲基-4-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮，并用2-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-4-碘-吡啶-3-甲醛替换2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-碘烟醛，得到白色固体状的标题化合物78mg。(M+H)+＝593m/e。
1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.47(s，9H)1.52-2.49(m和重叠的单峰，6H)2.99-3.38(m，1H)3.95(s，3H)4.01(t，J＝7.03Hz，1H)4.57(d，J＝6.02Hz，2H)7.00(d，J＝8.53Hz，1H)7.66(d，J＝5.02Hz，1H)7.73(br.s.，1H)7.79(d，J＝1.76Hz，1H)7.94(dd，J＝8.41，1.88Hz，1H)8.26-8.37(m，2H)8.40(d，J＝0.50Hz，1H)8.47(d，J＝8.53Hz，1H)8.72-8.81(m，2H)。
实施例13
6-叔丁基-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(1′-甲基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-6-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-酞嗪-1-酮的制备
Figure BDA0000464558370000742
用与实施例1(步骤5-6)相似的方法制备，只是在第5步中用2-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-4-碘-吡啶-3-甲醛替换2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-碘烟醛，得到白色固体状的标题化合物68mg。(M+H)+＝607m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.46(s，9H)1.75-2.26(m，5H)2.38(br.s.，3H)2.44-2.61(m，1H)3.05(d，J＝10.20Hz，2H)3.93(s，3H)4.00(t，J＝6.99Hz，1H)4.55(d，J＝6.42Hz，2H)6.93(d，J＝8.69Hz，1H)7.54(dd，J＝8.50，2.45Hz，1H)7.64(d，J＝4.91Hz，1H)7.77(d，J＝1.89Hz，1H)7.92(dd，J＝8.50，1.70Hz，1H)8.20-8.31(m，2H)8.39(s，1H)8.45(d，J＝8.31Hz，1H)8.71(s，1H)8.74(d，J＝4.91Hz，1H)。
I-14的制备
6-氯-4-(1′-乙基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-6-基氨基)-2-甲基-2H-哒嗪-3-酮的制备
Figure BDA0000464558370000751
在250mL圆底烧瓶中，将4-(6-(6-氯-2-甲基-3-氧代-2，3-二氢哒嗪-4-基氨基)吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(620mg，1.48mmol，Eq：1.00)与二氯甲烷(30ml)合并得到黄色溶液。加入TFA(3.37g，2.28ml，29.5mmol，Eq：20)。在环境温度N2下搅拌反应24h。将反应混合物真空浓缩，重溶于二氯甲烷，并真空浓缩。将残余物混悬于***中，并真空浓缩得到TFA盐。(M+H)+＝320m/e。在250mL圆底烧瓶中，将得到的TFA盐与DCE(5.0ml)合并得到黄色混悬液。加入10mL二氯甲烷，以使固体进入溶液中。加入过量的乙醛(652mg，836μl，14.8mmol，Eq：10.0)。加入三乙氧基硼氢化钠(471mg，2.22mmol，Eq：1.5)。环境温度下搅拌反应混合物3h。加入饱和NaHCO3，并搅拌反应混合物5min，倾至10％NaHCO3中，用二氯甲烷萃取五次，Na2SO4干燥。粗品用快速色谱纯化(硅胶，24g，1％至6％MeOH在DCM中的溶液)得到期望的产物(400mg)。(M+H)+＝348m/e。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.18(br.s.，3H)1.87(br.s.，4H)2.07(br.s.，1H)2.54(br.s.，3H)3.16(br.s.，2H)3.83(s，3H)6.88(d，J＝8.34Hz，1H)7.55(d，J＝8.34Hz，1H)8.17-8.38(m，3H)。
实施例14
6-叔丁基-2-{4-[5-(1′-乙基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-6-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-3-羟基甲基-吡啶-2-基}-8-氟-2H-酞嗪-1-酮的制备
Figure BDA0000464558370000761
用与实施例1(步骤5-6)相似的方法制备，只是在第5步中用6-氯-4-(1′-乙基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-6-基氨基)-2-甲基-2H-哒嗪-3-酮替换6-氯-2-甲基-4-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮得到白色固体状的标题化合物61mg。(M+H)+＝639m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.03-1.24(m，3H)1.43(s，9H)1.69-2.20(m，6H)2.36-2.68(m，3H)3.12(d，J＝9.82Hz，2H)3.88(t，J＝7.18Hz，1H)3.92(s，3H)4.49-4.63(m，2H)6.92(d，J＝8.69Hz，1H)7.46-7.59(m，3H)7.64(d，J＝5.29Hz，1H)8.21-8.29(m，2H)8.32(d，J＝2.27Hz，1H)8.69(s，1H)8.73(d，J＝4.91Hz，1H)。
方案E
I-15的制备
Figure BDA0000464558370000771
步骤1.2-(6-氯吡啶-3-基氧基)-2-甲基丙酸乙酯的制备
Figure BDA0000464558370000772
向6-氯吡啶-3-醇(40g，309mmol，Eq：1.00)和2-溴-2-甲基丙酸乙酯(63.2g，48.1ml，324mmol，Eq：1.05)在300ml CH3CN的溶液中加入Cs2CO3(216g，664mmol，309mmol，Eq：2.15)，得到的反应混合物在氩气氛下搅拌48h。滤过反应混合物，滤饼用EtOAc洗涤。合并的滤液与洗涤液用水(300ml)稀释并振摇，收集有机相。水相用EtOAc(2X 150ml)反萃取。干燥合并的有机相(MgSO4)，滤过并真空浓缩。过200g硅胶塞纯化，用30％EtOAc/己烷洗脱得到淡黄色油状的期望产物(51.1g)。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.27(t，J＝7.18Hz，3H)1.61(s，6H)4.24(q，J＝7.18Hz，2H)7.12-7.25(m，2H)8.01(d，J＝2.64Hz，1H)。
步骤2.2-(6-氯吡啶-3-基氧基)-2-甲基丙醛的制备
Figure BDA0000464558370000781
向2-(6-氯吡啶-3-基氧基)-2-甲基丙酸乙酯(51.15g，210mmol，Eq：1.00)在干燥THF中的溶液(氮气下冷却至-20至-30℃(CH3CN/CO2))中在10min时间里滴加LiAlH4(294mL 1M在THF中，294mmol，1.4equiv)。反应在-20℃下搅拌1h。缓慢加H2O(6.1mL)终止反应，之后搅拌10分钟，加入5％NaOH(11.4ml)，之后搅拌10分钟，之后加H2O(11.4mL)，搅拌10分钟。加入MgSO4以吸收水，混合物用硅藻土塞滤过。硅藻土饼用THF(～400ml)充分洗涤。
滤过得到的固体铝盐在THF(300ml)中搅拌10分钟，滤过并用THF充分洗涤。将合并的滤液与洗涤液真空浓缩。得到的的残余物被溶于150ml二氯甲烷中，并用等体积的50％稀盐水洗涤。反萃取(2x 100ml二氯甲烷)水相。将合并的有机萃取物干燥(MgSO4)、滤过并真空浓缩得到浅棕色油状的2-(6-氯-吡啶-3-基氧基)-2-甲基-丙-1-醇(92％纯度，41.17g)。
将含有350ml干燥CH2Cl2的烘箱干燥的烧瓶氩气下冷却至-78℃。加入草酰氯(31.0g，20.7mL，244mmol，Eq：1.30)，之后滴加DMSO(28mL，394mmol，2.1当量)。将混合物搅拌10分钟，并缓慢滴加溶于60ml CH2Cl2中的2-(6-氯吡啶-3-基氧基)-2-甲基丙-1-醇(41.17g 92％纯物质，188mmol，Eq：1.00)。混合物在-78℃下搅拌30分钟。加入三乙胺(105mL，751mmol，4当量)，移去冷却浴，使反应混合物温热至环境温度，搅拌1小时。反应混合物用饱和NaHCO3(275mL)稀释，振摇，并收集有机相，用等体积的盐水洗涤。水相用DCM(2X 150ml)反萃取。干燥合并的有机相(MgSO4)，滤过并真空浓缩。如此得到的残余物用Analogix MPLC(SF40-240G柱)纯化，60分钟时间中用2％至30％EtOAC/Hex梯度洗脱，得到淡黄色油状的期望产物(37.1g)。(M+H)+＝200m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.44(s，6H)7.07-7.34(m，2H)8.05(d，J＝3.02Hz，1H)9.79(s，1H)。
步骤3.5-(2-氮杂环丁烷-1-基-1，1-二甲基-乙氧基)-2-氯-吡啶的制备
Figure BDA0000464558370000791
在100压力瓶中，将2-(6-氯吡啶-3-基氧基)-2-甲基丙醛(10g，50.1mmol，Eq：1.00)、乙酸(5.7mL，100mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(22.3g，105mmol，Eq：2.1)溶于二氯甲烷(58mL)中，并冷却至0℃。向该溶液滴加氮杂环丁烷(11.8mL，175mmol，3.5当量)。将反应在55℃加热过夜，然后冷却至环境温度。反应混合物用120ml饱和NaHCO3和80ml二氯甲烷稀释。振摇混合物，并收集二氯甲烷层。有机层再次用100ml 5％NaHCO3(aq)和等体积的50％稀盐水洗涤。水相用2x 70ml二氯甲烷反萃取。合并的有机相Na2SO4干燥，滤过并真空浓缩。粗品用Analogix MPLC(SF25-60克柱)纯化，用100％DCM至5％MeOH/DCM梯度洗脱，得到浅黄色油状的期望产物的70∶30混合物：2-(6-氯-吡啶-3-基氧基)-2-甲基-丙-1-醇(7.5g)。直接用于下一步。
步骤4.5-(1-(氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基丙-2-基氧基)吡啶-2-胺的制备
Figure BDA0000464558370000801
将5-(1-(氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基丙-2-基氧基)-2-氯吡啶(3.5g，14.5mmol，Eq：1.00)溶于四氢呋喃(78.0ml)。氩气氛下加入2-(二环己基膦)联苯(1.02g，2.91mmol，Eq：0.2)，然后加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(1.33g，1.45mmol，Eq：0.1)。最终滴加在THF(43.6ml，43.6mmol，Eq：3)中的1M双(三甲硅基)乙酰胺锂。反应混合物在75℃氩气氛下搅拌过夜。将反应混合物倾入100ml饱和NH4Cl中，并用EtOAc(100ml)萃取。有机相用50％稀盐水洗涤。水相用2X 80ml EtOAc反萃取。干燥合并的有机相(MgSO4)。滤过并真空浓缩。粗品用Analogix MPLC(40g柱(1％至10％MeOH在DCM中的溶液洗脱)纯化得到棕色粘稠油状的期望产物(1.66g)。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.18(s，6H)2.10(quin，J＝7.08Hz，2H)2.54(s，2H)3.33(t，J＝6.99Hz，4H)4.25(br.s.，2H)6.43(d，J＝8.69Hz，1H)7.12(dd，J＝8.69，2.64Hz，1H)7.79(d，J＝2.64Hz，1H)。
步骤5.4-[5-(2-氮杂环丁烷-1-基-1，1-二甲基-乙氧基)-吡啶-2-基氨基]-6-氯-2-甲基-2H-哒嗪-3-酮的制备
Figure BDA0000464558370000802
将4-溴-6-氯-2-甲基哒嗪-3(2H)-酮(2.18g，9.75mmol，Eq：1.30)、5-(1-(氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基丙-2-基氧基)吡啶-2-胺(1.66g，7.5mmol，Eq：1.00)、Xantphos(651mg，1.13mmol，0.15当量)和Cs2CO3(8.55g，26.3mmol，3.5当量)合并于二噁烷中，将反应混合物用氩气置换真空脱气。向该溶液中加入Pd2(dba)3(515mg，563μM，0.075当量)，混合物用氩气再次脱气。反应混合物在氩气下90℃搅拌18小时，之后冷却至环境温度。反应混合物用硅藻土塞滤过。硅藻土饼用THF和二氯甲烷洗涤。将合并的滤液与洗涤液真空浓缩。粗品用Analogix MPLC(60g柱；用0.5％至15％MeOH/DCM洗脱)纯化得到褐色固体状的期望产物(1.43g)。(M+H)+＝364m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.24(s，6H)2.12(quin，J＝7.08Hz，2H)2.59(s，2H)3.35(t，J＝6.99Hz，4H)3.81(s，3H)6.83(d，J＝8.69Hz，1H)7.32(dd，J＝8.88，2.83Hz，1H)8.09(d，J＝3.02Hz，1H)8.18(s，1H)8.25(s，1H)。
实施例15
2-(4-{5-[5-(2-氮杂环丁烷-1-基-1，1-二甲基-乙氧基)-吡啶-2-基氨基]-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基}-3-羟基甲基-吡啶-2-基)-6-叔丁基-8-氟-2H-酞嗪-1-酮的制备
Figure BDA0000464558370000811
用与实施例1(步骤5-6)相似的方法制备，只是在第5步用4-[5-(2-氮杂环丁烷-1-基-1，1-二甲基-乙氧基)-吡啶-2-基氨基]-6-氯-2-甲基-2H-哒嗪-3-酮替换6-氯-2-甲基-4-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮得到白色固体状的99mg标题化合物。(M+H)+＝655m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.25(s，6H)1.43(s，9H)2.13(br.s.，2H)2.61(br.s.，2H)3.37(br.s.，4H)3.85(t，J＝6.99Hz，1H)3.92(s，3H)4.46-4.63(m，2H)6.91(d，J＝8.69Hz，1H)7.34(dd，J＝9.06，2.64Hz，1H)7.45-7.58(m，2H)7.64(d，J＝4.91Hz，1H)8.09(d，J＝2.64Hz，1H)8.24-8.37(m，2H)8.61(s，1H)8.73(d，J＝4.91Hz，1H)。
实施例16
2-(4-{5-[5-(2-氮杂环丁烷-1-基-1，1-二甲基-乙氧基)-吡啶-2-基氨基]-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基}-3-羟基甲基-吡啶-2-基)-6-叔丁基-2H-酞嗪-1-酮的制备
Figure BDA0000464558370000821
用与实施例1(步骤5-6)相似的方法制备，只是在第5步中用4-[5-(2-氮杂环丁烷-1-基-1，1-二甲基-乙氧基)-吡啶-2-基氨基]-6-氯-2-甲基-2H-哒嗪-3-酮替换6-氯-2-甲基-4-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮，用2-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-4-碘-吡啶-3-甲醛替换2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-碘烟醛，得到类白色固体状的标题化合物37mg。(M+H)+＝637m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.27(br.s.，6H)1.46(s，9H)2.16(br.s.，2H)2.64(br.s.，2H)3.39(br.s.，4H)3.93(s，3H)3.97(t，J＝7.18Hz，1H)4.54(d，J＝6.42Hz，2H)6.91(d，J＝8.69Hz，1H)7.35(d，J＝7.55Hz，1H)7.64(d，J＝4.91Hz，1H)7.77(d，J＝1.51Hz，1H)7.92(dd，J＝8.50，1.70Hz，1H)8.09(d，J＝2.64Hz，1H)8.28(s，1H)8.39(s，1H)8.45(d，J＝8.31Hz，1H)8.63(s，1H)8.74(d，J＝4.91Hz，1H)。
I-17的制备
方案F
在0℃下向5-硝基-1H-吡唑-3-甲酸(1.13g，7.19mmol)在无水甲醇(20ml)中的溶液中滴加氯化亚砜(2.23g，1.37ml，18.7mmol)。将得到的溶液回流加热2h。将冷却的溶液蒸干得到白色固体状的5-硝基-2H-吡唑-3-甲酸甲酯(1.17g，95％)。
向5-硝基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(1.87g，10.9mmol)在无水二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液中加入碳酸钾(3.02g，21.9mmol)和碘甲烷(2.02g，0.89mL，14.2mmol)，得到的溶液在室温下搅拌18h。得到的混合物用水稀释(1x 150mL)，并用二氯甲烷(3x 75mL)萃取。将合并的有机层用硫酸镁干燥。滤过混合物并蒸发，残余物用快速色谱(硅胶，25g，20％至60％二氯甲烷在己烷中的溶液)得到白色固体状的2-甲基-5-硝基-2H-吡唑-3-甲酸甲酯和1-甲基-5-硝基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(1.64g，81％)的混合物。
在0℃下向2-甲基-5-硝基-2H-吡唑-3-甲酸甲酯和1-甲基-5-硝基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(1.18g，6.37mmol)在四氢呋喃(20mL)中的溶液滴加入氢化锂铝溶液(1.0M在四氢呋喃中，7.65mL，7.65mmol)。在0℃下搅拌得到的混合物20min。向此溶液中加入乙酸乙酯(1mL)，之后加入少量十水硫酸钠结晶。搅拌得到的混合物30min并滤过，滤饼用乙酸乙酯洗涤并蒸发滤液。残余物用快速色谱纯化(硅胶，80g，50％至70％乙酸乙酯在己烷中的溶液)得到白色固体状的1-甲基-3-硝基-1H-吡唑基-5-基)甲醇(496mg，50％)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 3.90(s，3H)4.53(d，J＝5.67Hz，2H)5.55(t，J＝5.48Hz，1H)6.93(s，1H)。
在0℃下向(1-甲基-3-硝基-1H-吡唑-5-基)甲醇(496mg，3.16mmol)在氯仿(10mL)中通过注射器滴加三溴化磷(854mg，0.30mL，3.16mmol)。将得到的溶液温热至室温并搅拌1h。得到的溶液被冷却至0℃，用二氯甲烷(50ml)稀释。得到的溶液用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)使成碱性(pH 8.5)。分层，水层用二氯甲烷(3x 20mL)萃取。合并的有机层用硫酸镁干燥。滤过得到的混合物，并真空浓缩，残余物用快速色谱纯化(硅胶，40g，20％至40％乙酸乙酯在己烷中的溶液)得到白色固体状的5-(溴甲基)-1-甲基-3-硝基-1H-吡唑(436mg，63％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 3.94(s，3H)4.85(s，2H)7.14(s，1H)。
向5-(溴甲基)-1-甲基-3-硝基-1H-吡唑(436mg，1.98mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液滴加入氮杂环丁烷(141mg，0.17mL，2.48mmol)和异丙基乙胺(307mg，0.42mL，2.38mmol)，得到的混合物在室温下搅拌24h。将溶液浓缩，残余物溶于二氯甲烷(50mL)，用水洗涤(50mL)。水层用二氯甲烷(2x 50mL)萃取，合并有机相并用硫酸镁干燥。滤过得到的混合物，并蒸发，将残余物用快速色谱纯化(40g，1％至5％甲醇在二氯甲烷中的溶液)得到无色油状的5-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-1-甲基-3-硝基-1H-吡唑(349mg，90％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 1.97(quin，J＝6.99Hz，2H)3.15(t，J＝6.99Hz，4H)3.59(s，2H)3.88(s，3H)6.89(s，1H)。
5-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-1-甲基-3-硝基-1H-吡唑(349mg，1.78mmol)在乙醇(20mL)中的溶液用钯碳(10％，50mg)处理。在氢气下(1atm)搅拌所得混合物48h。反应混合物通过硅藻土垫滤过，将滤垫用乙醇洗涤。滤液真空浓缩，得到淡黄色油状的5-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-1-甲基-1H-吡唑基-3-胺(292mg，99％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 1.93(quin，J＝6.89Hz，2H)3.06(t，J＝6.99Hz，4H)3.34(s，2H)3.46(s，3H)4.36(s，2H)5.25(s，4H)。
将5-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-1-甲基-1H-吡唑基-3-胺(292mg，1.76mmol)、4-溴-6-氯-2-甲基哒嗪-3(2H)-酮(393mg，1.76mmol)碳酸铯(2.00g，6.15mmol)和4，5-双(二苯基膦)-9，9-二甲基呫吨(152mg，0.26mmol)在二噁烷(10ml)中的溶液通氩气，之后加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(121mg，0.13mmol)，得到的溶液在90℃下加热18h。将混合物冷却至室温，并用二氯甲烷(50mL)和水稀释。分层，水层用二氯甲烷(2x 25mL)萃取。合并有机层，硫酸镁干燥。将得到的混合物滤过并真空浓缩。滤过分离生成的沉淀，用***洗涤，真空干燥得到淡黄色固体状的4-(5-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-6-氯-2-甲基哒嗪-3(2H)-酮(272mg，50％)。(M+H)+＝309m/e。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 1.96(quin，J＝6.99Hz，2H)3.11(t，J＝6.99Hz，4H)3.31(s，2H)3.63(s，3H)3.71(s，3H)6.07(s，1H)7.68(s，1H)9.53(s，1H)。
实施例17
2-{4-[5-(5-氮杂环丁烷-1-基甲基-1-甲基-1H-比唑基-3-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-3-羟基甲基-吡啶-2-基}-6-叔丁基-8-氟-2H-酞嗪-1-酮的制备
Figure BDA0000464558370000861
用与实施例1(步骤5-6)相似的方法制备，只是在第5步中用4-(5-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-6-氯-2-甲基哒嗪-3(2H)-酮替换6-氯-2-甲基-4-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮得到类白色固体状的标题化合物70mg。(M+H)+＝600m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.43(s，9H)2.12(quin，J＝6.99Hz，2H)3.27(t，J＝6.80Hz，4H)3.55(s，2H)3.81(s，3H)3.90(s，3H)3.99(t，J＝7.18Hz，1H)4.54(d，J＝6.04Hz，2H)5.98(s，1H)7.42-7.57(m，2H)7.62(d，J＝4.91Hz，1H)7.90(s，1H)7.93(s，1H)8.31(d，J＝2.64Hz，1H)8.71(d，J＝5.29Hz，1H)。
I-18的制备
方案G
Figure BDA0000464558370000871
向5-硝基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(5.97g，35mmol)在丙酮(100mL)中的溶液中加入碳酸钾(24g，174mmol)和1，2-二溴乙烷(19.7g，9.02mL，105mmol)，得到的溶液加热回流2h。使得到的混合物温热至室温过夜，滤过，浓缩，残余物用快速色谱纯化(硅胶，400g，20％至70％乙酸乙酯在己烷中的溶液)得到淡黄色固体状的11∶2的1-(2-溴乙基-3-硝基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯和2-(2-溴-乙基)-5-硝基-2H-吡唑-3-甲酸甲酯(4.86g，50％)的混合物。主要异构体成分1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 3.77-4.05(m，40H)5.02(t，J＝6.04Hz，16H)7.61(s，5.65H)7.70(s，1H)。
在0℃下向硼氢化锂(755mg，34.7mmol)在四氢呋喃(100mL)中的混悬液中缓慢加入1-(2-溴乙基-3-硝基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(4.82g，17.3mmol)在10mL THF中的溶液。使得到的混合物温热至室温2h。向得到的混合物加入乙酸乙酯(20ml)和水(20ml)。分离两相混合物，用乙酸乙酯(3x 20mL)萃取水层。合并的有机层用硫酸镁干燥，滤过得到的混合物，真空浓缩得到淡黄色油状的粗品2-(2-溴-乙基)-5-硝基-2H-吡唑-3-基]-甲醇和(1-(2-溴乙基-3-硝基-1H-比唑-5-基)甲醇(4.24，97％)的混合物，其被直接用于下面的反应。
向冷却至0℃的(1-(2-溴乙基-3-硝基-1H-吡唑基-5-基)甲醇(4.24g，17mmol)在氯仿(100mL)中的溶液中滴加三溴化磷(4.59g，1.6mL，17mmol)。将得到的溶液温热至室温，搅拌2h。得到的溶液被冷却至0℃，并用二氯甲烷(50ml)稀释。得到的溶液用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)使成碱性(pH 8.5)。分层，水层用二氯甲烷(3x 50mL)萃取。合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，硫酸镁干燥。滤过得到的混合物，真空浓缩。粗品用快速色谱纯化(硅胶，SF40-240g，15％至40％EtOAc在己烷中的溶液)得到白色固体状的1-(2-溴乙基-5-(溴甲基)-3-硝基-1H-吡唑(3.58g，67％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 3.92(t，J＝6.23Hz，2H)4.69(t，J＝6.23Hz，2H)4.89(s，2H)7.19(s，1H)。
在250mL圆底烧瓶中，将1-(2-溴乙基-5-(溴甲基)-3-硝基-1H-吡唑(3.58g，11.4mmol，Eq：1.00)与THF(120ml)合并得到淡黄色溶液。向此甲胺中，滴加2.0M在THF中的溶液(40.0ml，80.1mmol，Eq：7.00)，反应混合物在室温下搅拌76小时。此时后，将反应浓缩，得到的固体与EtOAc(50mL)和10％K2CO3水溶液(30mL)的混合物搅拌。分层，水层用EtOAc(2x30mL)反萃取。合并的有机层用MgSO4干燥，真空浓缩近干。粗产物用快速色谱纯化(硅胶，240g，1％至10％MeOH在DCM中的溶液)。合并含产物的级分，浓缩并从MeOH中重结晶。滤出固体，用***洗涤得到类白色固体状的期望产物(1.6g)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 2.38(s，3H)2.89(t，J＝5.67Hz，2H)3.61(s，2H)4.19(t，J＝5.48Hz，2H)6.83(s，1H)。
5-甲基-2-硝基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪(1.6g，8.7mmol)在乙醇(20mL)中的溶液用钯碳(10％，300mg)处理，并通氩气。得到的混合物在氢气(1atm)下搅拌过夜。得到的混合物在氢气下(1atm)搅拌过夜。反应混合物通过硅藻土垫滤过，用乙醇洗涤滤垫。滤液真空浓缩得到淡黄色固体状的5-甲基-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-胺(1.35g，定量)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 2.30(s，3H)2.71(t，J＝5.67Hz，2H)3.37(s，2H)3.74(t，J＝5.67Hz，2H)4.46(s，2H)5.14(s，1H)。
将5-甲基-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-胺(342mg，2.25mmol)、4-溴-6-氯-2-甲基哒嗪-3(2H)-酮(527mg，2.36mmol)、碳酸铯(2.2g，6.74mmol)和4，5-双(二苯基膦)-9，9-二甲基呫吨(195mg，0.34mmol)在二噁烷(15ml)中的溶液通氩气，之后加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(154mg，0.17mmol)，得到的溶液在密封管中在110℃下加热18h。将混合物冷却至室温，硅藻土过滤。滤饼用二氯甲烷洗涤。合并的滤液和洗涤液用3M HCl稀释并分离。DCM层用HCl水溶液反萃取并弃去。合并的HCl水溶液萃取液用3MNaOH使成碱性。得到的水相用DCM萃取2次。合并的DCM萃取液真空浓缩，得到的固体用***研磨，滤过，干燥得到类白色固体状的6-氯-2-甲基-4-(5-甲基-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮(455mg，69％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 2.35(s，3H)2.81(t，J＝5.48Hz，2H)3.51(s，2H)3.63(s，3H)4.03(t，J＝5.48Hz，2H)5.98(s，1H)7.71(s，1H)9.60(s，1H)。
实施例18
6-叔丁基-8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-甲基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-酞嗪-1-酮的制备
Figure BDA0000464558370000891
用与实施例1(步骤5-6)相似的方法制备，只是在第5步中用6-氯-2-甲基-4-(5-甲基-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮替换6-氯-2-甲基-4-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮，得到类白色固体状的标题化合物1.02g。(M+H)+＝586m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.43(s，9H)2.52(s，3H)2.94(t，J＝5.48Hz，2H)3.66(s，2H)3.90(s，3H)3.97(t，J＝6.99Hz，1H)4.15(t，J＝5.48Hz，2H)4.46-4.61(m，2H)5.84(s，1H)7.45-7.58(m，2H)7.62(d，J＝4.91Hz，1H)7.91(s，1H)7.97(s，1H)8.31(d，J＝2.64Hz，1H)8.71(d，J＝4.91Hz，1H)。
实施例19
6-叔丁基-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-甲基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-酞嗪-1-酮的制备
Figure BDA0000464558370000901
用与实施例1(步骤5-6)相似的方法制备，只是在第5步中用6-氯-2-甲基-4-(5-甲基-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮替换6-氯-2-甲基-4-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮，并用2-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-4-碘-吡啶-3-甲醛替换2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-碘烟醛，得到类白色固体状的标题化合物72mg。(M+H)+＝568m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.45(s，9H)2.54(s，3H)2.97(br.s.，2H)3.68(s，2H)3.90(s，3H)4.08(t，J＝6.99Hz，1H)4.17(t，J＝5.48Hz，2H)4.47-4.56(m，2H)5.86(s，1H)7.62(d，J＝4.91Hz，1H)7.77(d，J＝1.89Hz，1H)7.86-8.01(m，3H)8.38(s，1H)8.44(d，J＝8.31Hz，1H)8.72(d，J＝4.91Hz，1H)。
实施例20
6-环丙基-8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-甲基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-异喹啉-1-酮的制备
用与实施例1(步骤5-6)相似的方法制备，只是在第5步中用6-氯-2-甲基-4-(5-甲基-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮替换6-氯-2-甲基-4-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮，并用2-(6-环丙基-8-氟-1-氧代-1H-异喹啉-2-基)-4-碘-吡啶-3-甲醛替换2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-碘烟醛，得到类白色固体状的标题化合物33mg。(M+H)+＝569m/e。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 0.81-0.93(m，2H)1.07-1.22(m，2H)1.95-2.09(m，1H)2.54(s，3H)2.96(br.s.，2H)3.68(br.s.，2H)3.92(s，3H)4.17(t，J＝5.43Hz，2H)4.24(dd，J＝10.48，2.91Hz，1H)4.45-4.64(m，2H)5.91(s，1H)6.57(dd，J＝7.58，2.02Hz，1H)6.83(dd，J＝12.63，1.52Hz，1H)7.08(d，J＝1.52Hz，1H)7.26(d，J＝7.33Hz，2H)7.62(d，J＝5.05Hz，1H)7.93(s，1H)8.01(s，1H)8.68(d，J＝5.05Hz，1H)。
I-21的制备
步骤1.2-硝基-5-氧杂环丁烷-3-基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪的制备
Figure BDA0000464558370000921
在250mL圆底烧瓶中，将1-(2-溴乙基-5-(溴甲基)-3-硝基-1H-吡唑(1.54g，4.92mmol，Eq：1.00)与CH3CN(60ml)合并得到淡黄色溶液。向此氧杂环丁烷-3-胺(432mg，5.91mmol，Eq：1.20)中滴加DIPEA(1.14g，1.55ml，8.86mmol，Eq：1.80)，反应混合物室温下搅拌24hr。
浓缩该混合物，将残余物吸收至EtOAc(50mL)，并用水(50mL)洗涤。有机层用MgSO4干燥，真空浓缩。粗品用快速色谱纯化(硅胶，SF25-40g，50％EtOAc在己烷中的溶液至100％EtOAc)，得到期望的产物(674mg)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 2.94-3.01(m，2H)3.71(s，2H)3.87(quin，J＝6.32Hz，1H)4.31-4.39(m，2H)4.67-4.75(m，2H)4.77-4.84(m，2H)6.68(s，6H)。
步骤2.5-氧杂环丁烷-3-基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基胺的制备
Figure BDA0000464558370000922
在250mL圆底烧瓶中，将2-硝基-5-氧杂环丁烷-3-基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪(674mg，2.99mmol，Eq：1.00)与EtOH(50ml)合并得到淡黄色混悬液。反应混合物真空通氩气三次，然后加入10％Pd/C(159mg，1.5mmol，Eq：0.5)，氢气球下搅拌反应混合物过夜。反应经硅藻土垫过滤。硅藻土垫用乙醇洗涤。合并的滤液与洗涤液经真空浓缩得到期望的产物(555mg)。(M+H)+＝195m/e。
步骤3.6-氯-2-甲基-4-(5-氧杂环丁烷-3-基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]-吡嗪-2-基氨基)-2H-哒嗪3-酮的制备
Figure BDA0000464558370000931
在250mL圆底烧瓶中，将5-(氧杂环丁烷-3-基)-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-胺(555mg，2.86mmol，Eq：1.00)、4-溴-6-氯-2-甲基哒嗪-3(2H)-酮(638mg，2.86mmol，Eq：1.00)碳酸铯(3.26g，10.0mmol，Eq：3.50)和4，5-双(二苯基膦)-9，9-二甲基呫吨(248mg，429μmol，Eq：0.15)与二噁烷(40ml)合并，反应混合物真空通氩气3次。加入双(二苄亚基丙酮)钯(123mg，214μmol，Eq：0.075)，反应在90℃下加热18hr。冷却至室温后，用50mL二氯甲烷和水稀释。水层用DCM(2x 25mL)反萃取。合并的有机层用MgSO4干燥，真空浓缩至近干。滤过收集得到的固体，并用***洗涤。滤过收集滤液和洗涤液中形成的第二拨固体，***洗涤。合并的固体被真空干燥得到固体状的期望产物(669mg)。(M+H)+＝337m/e。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 3.01(t，J＝5.18Hz，2H)3.73(s，2H)3.81(s，3H)3.92(t，J＝6.44Hz，1H)4.26(t，J＝5.43Hz，2H)4.79(d，J＝6.57Hz，4H)5.77(s，1H)7.60(s，1H)7.88(s，1H)。
实施例21
6-叔丁基-8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-氧杂环丁烷-3-基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-酞嗪-1-酮的制备
Figure BDA0000464558370000941
用与实施例1(步骤5-6)相似的方法制备，只是在第5步中用6-氯-2-甲基-4-(5-氧杂环丁烷-3-基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]-吡嗪-2-基氨基)-2H-哒嗪-3-酮替换6-氯-2-甲基-4-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮，得到白色固体状的标题化合物106mg。(M+H)+＝628m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.44(s，9H)2.91(t，J＝5.48Hz，2H)3.65(s，2H)3.83(t，J＝6.23Hz，1H)3.91(s，3H)4.18(t，J＝5.48Hz，2H)4.54(s，2H)4.75(quin，J＝6.52Hz，4H)5.89(s，1H)7.47-7.58(m，2H)7.62(d，J＝5.29Hz，1H)7.91(s，1H)7.98(s，1H)8.32(d，J＝2.64Hz，1H)8.71(d，J＝4.91Hz，1H)。
I-22的制备
步骤1.5-乙基-2-硝基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪的制备
Figure BDA0000464558370000942
在100mL圆底烧瓶中，将1-(2-溴乙基-5-(溴甲基)-3-硝基-1H-吡唑(0.7g，2.24mmol，Eq：1.00)与THF(25ml)合并得到浅黄色溶液。向该乙胺(7.83ml2M在THF中，15.7mmol，Eq：7)中滴加，反应混合物在环境温度下搅拌12小时。浓缩反应混合物，得到的固体与EtOAc(250mL)和10％K2CO3水溶液(200mL)的混合液搅拌。分层，水层用EtOAc(2x100mL)反萃取。合并的有机层用MgSO4干燥，真空浓缩。粗品用快速色谱纯化(硅胶，40g，1％至4％MeOH在DCM中)。合并含产物的级分，浓缩得到期望的产物(427mg)。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.20(t，J＝7.18Hz，3H)2.68(q，J＝7.18Hz，2H)3.01(t，J＝5.48Hz，2H)3.72(s，2H)4.29(t，J＝5.67Hz，2H)6.64(s，1H)。
步骤2.5-乙基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基胺的制备
Figure BDA0000464558370000951
在250mL圆底烧瓶中，将5-乙基-2-硝基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪(427mg，2.17mmol，Eq：1.00)与EtOH(50ml)合并得到浅黄色混悬液。反应混合物真空通氩气三次，然后加入10％Pd/C(115mg，1.08mmol，Eq：0.5)，反应混合物在氢气球下搅拌过夜。硅藻土垫滤过反应。用乙醇洗涤硅藻土垫。合并的滤液与洗涤液真空浓缩得到期望的产物(350mg)。(M+H)+＝167m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.16(t，J＝7.18Hz，3H)2.59(q，J＝7.18Hz，2H)2.79-3.03(m，2H)3.57(重叠s，4H)3.87-4.12(m，2H)5.35(s，1H)。
步骤3.6-氯-4-(5-乙基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-2-甲基-2H-哒嗪-3-酮的制备
Figure BDA0000464558370000952
在250mL圆底烧瓶中，将5-乙基-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-胺(350mg，2.11mmol，Eq：1.00)、4-溴-6-氯-2-甲基哒嗪-3(2H)-酮(471mg，2.11mmol，Eq：1.00)、碳酸铯(2.4g，7.37mmol，Eq：3.50)和4，5-双(二苯基膦)-9，9-二甲基呫吨(183mg，316μmol，Eq：0.15)与二噁烷(40ml)合并，反应混合物通氩气。然后加入双(二苄亚基丙酮)钯(90.8mg，158μmol，Eq：0.075)，将反应混合物在90℃下加热18hr。冷却至室温后，用50mL二氯甲烷和水稀释。水层用DCM(2x 25mL)反萃取。合并的有机层用MgSO4干燥，真空浓缩。粗品用快速色谱(硅胶，40g，0％至3％MeOH在DCM中的溶液)纯化。纯级分用EtOAc研磨。混合级分与滤液用色谱纯化得到纯品，其与研磨的固体合并得到期望的产物(500mg)。(M+H)+＝309m/e。
1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.21(t，J＝7.18Hz，3H)2.67(d，J＝6.80Hz，2H)2.99(br.s.，2H)3.69(br.s.，2H)3.79(s，3H)4.16(d，J＝5.29Hz，2H)5.72(s，1H)7.56(s，1H)7.85(s，1H)。
实施例22
6-叔丁基-2-{4-[5-(5-乙基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-3-羟基甲基-吡啶-2-基}-8-氟-2H-酞嗪-1-酮的制备
Figure BDA0000464558370000961
用与实施例1(步骤5-6)相似的方法制备，只是在第5步中用6-氯-4-(5-乙基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-2-甲基-2H-哒嗪-3-酮替换6-氯-2-甲基-4-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮，得到类白色固体状的标题化合物196mg。(M+H)+＝600m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.21(td，J＝6.99，2.27Hz，3H)1.43(s，9H)2.66(d，J＝6.80Hz，2H)2.98(br.s.，2H)3.69(br.s.，2H)3.90(s，3H)3.97(t，J＝6.99Hz，1H)4.15(t，J＝4.53Hz，2H)4.47-4.60(m，2H)5.85(s，1H)7.46-7.57(m，2H)7.62(d，J＝4.91Hz，1H)7.89(s，1H)7.97(s，1H)8.31(d，J＝2.64Hz，1H)8.71(d，J＝4.91Hz，1H)。
I-23的制备
方案H
步骤1.4，N-二-叔丁基-2-氟-6-羟基甲基-苯甲酰胺的制备
室温下向2，5-二-叔丁基-7-氟-3-羟基异吲哚啉-1-酮(4.3g，15.4mmol，Eq：1.00)在MeOH(100ml)和CH2Cl2(150ml)的混合物的溶液中加入硼氢化钠(582mg，15.4mmol，Eq：1.00)。反应混合物在相同温度下搅拌1h。然后再次加入硼氢化钠(582mg，15.4mmol，Eq：1.00)，反应混合物再搅拌1h。在此时，再次加入硼氢化钠(582mg，15.4mmol，Eq：1.00)，反应混合物搅拌1h。将反应混合物倾入(仔细)HCl水溶液(10％，100mL)。产物用CH2Cl2(2x100mL)萃取。合并有机萃取液，干燥(Na2SO4)，真空蒸发得到4.2g产物(97％收率)；LC/MS，m/z 282[M+H]+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.33(s，9H)1.49(s，9H)4.59(s，2H)6.02(br.s.，2H)7.08(dd，J＝12.63，1.77Hz，1H)7.22(d，J＝1.77Hz，1H)。
步骤2.4，N-二-叔丁基-2-氟-6-甲基-苯甲酰胺的制备
向N，4-二-叔丁基-2-氟-6-(羟基甲基)苯甲酰胺(4.3g，15.3mmol，Eq：1.00)在MeOH(100ml)中的溶液中加入Pd-C 10％(50％湿)(1.19g)，反应混合液在H2气氛(气球)下搅拌3h。反应混合物经硅藻土垫滤过，用EtOH(3x50mL)洗涤硅藻土垫。合并的滤液与洗涤液真空蒸发得到白色固体状的产物4.01g(99％收率)；LC/MS，m/z 266[M+H]+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.30(s，9H)1.48(s，9H)2.41(s，3H)5.60(br.s.，2H)6.90-6.95(m，1H)7.00(d，J＝0.51Hz，1H)。
步骤3.4-叔丁基-2-氟-6-甲基-苯甲酰胺的制备
N，4-二-叔丁基-2-氟-6-甲基苯甲酰胺(4.01g，15.1mmol，Eq：1.00)在TFA(48ml)(4x12mL，微波瓶)中的溶液在100℃下微波辅助条件下搅拌3h。合并四个微波瓶中的内容物，真空蒸发，残余物被倾入(仔细)NaHCO3饱和水溶液(100mL)，产物用CH2Cl2(2x100mL)萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)，真空蒸发。粗品用色谱纯化(SiO2，CH2Cl2100％至30％AcOEt，在30min中)得到白色固体状的期望产物(2.55g，81％收率)。LC/MS，m/z 210[M+H]+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.32(s，9H)2.49(t，J＝0.63Hz，3H)5.86(br.s.，2H)6.94-7.00(m，1H)7.05(dd，J＝1.26，0.51Hz，1H)。
步骤4.4-叔丁基-n-[1-二甲基氨基-亚甲基]-2-氟-6-甲基-苯甲酰胺的制备
向4-叔丁基-2-氟-6-甲基苯甲酰胺(1.28g，6.12mmol，Eq：1.00)在THF(49.2ml)中的溶液中加入N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛(802mg，897μl，6.73mmol，Eq：1.1)，反应混合物被加热至回流温度3h。反应混合物真空蒸干，得到期望的产物(1.6g，99％收率)。粗品未经进一步纯化被用于下一步。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.30(s，9H)2.42(s，3H)3.16(s，3H)3.20(s，3H)6.93(dd，J＝11.75，1.64Hz，1H)6.99(s，1H)8.57(s，1H)。
步骤5.6-叔丁基-8-氟-2H-异喹啉-1-酮，钾盐的制备
向(E)-4-叔丁基-N-((二甲基氨基)亚甲基)-2-氟-6-甲基苯甲酰胺(1.6g，6.05mmol，Eq：1.00)在THF(38mL)中的溶液中加入叔丁醇钾(1M的7.87ml，7.87mmol，Eq：1.30)，将反应混合物加热至回流温度2h(形成沉淀)。将反应混合物冷却至室温，加入***(40ml)。搅拌混合物30min。滤过收集固体(真空下)，用***洗涤(40ml)，得到白色固体状的产物1.22g(78％收率)；LC/MS，m/z 220[M+H]+。
步骤6.6-叔丁基-8-氟-2H-异喹啉-1-酮的制备
向6-叔丁基-8-氟-2H-异喹啉-1-酮、钾盐(2.4g，9.29mmol，Eq：1.00)在DCM(200ml)中的混悬液中加入HCl水溶液(100mL)，反应混合物RT下搅拌30min。分离有机层，干燥(Na2SO4)，真空蒸发得到白色粉末的产物(1.9g)93％收率；LC/MS，m/z 220[M+H]+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 7.70(dd，J＝7.20，1.14Hz，1H)8.32(dd，J＝7.07，5.81Hz，1H)8.42(dd，J＝13.89，1.77Hz，1H)8.60(d，J＝1.77Hz，1H)。
步骤7.2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-异喹啉-2-基)-4-碘-吡啶-3-甲醛的制备
室温下向6-叔丁基-8-氟异喹啉-1(2H)-酮(225mg，1.03mmol，Eq：1.00)在THF(11.1ml)中的溶液中加入双(三甲硅基)乙酰胺锂在THF中(1M)(1.13ml，1.13mmol，Eq：1.1)。同样温度下搅拌反应混合物20min。然后加入在THF(5mL)中的2-氟-4-碘烟醛(335mg，1.33mmol，Eq：1.3)。反应混合物被加热至65℃，搅拌3h。然后将反应倾入NH4Cl饱和水溶液(30mL)中，产物用EtOAc(2x50mL)萃取。干燥合并的有机萃取物(Na2SO4)，真空蒸干。粗品用CH2Cl2(2mL)稀释，色谱纯化(SiO2，Hex∶AcOEt，100％至70％在25min中)得到淡黄色粉末状的期望产物(350mg)。LC/MS，m/z451[M+H]+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.39(s，9H)6.65(dd，J＝7.58，2.02Hz，1H)7.21(dd，J＝13.64，1.77Hz，1H)7.31(d，J＝1.77Hz，1H)7.55(d，J＝7.58Hz，1H)7.91(d，J＝5.05Hz，1H)8.28(d，J＝5.31Hz，1H)9.94(s，1H)。
实施例23
6-叔丁基-8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-甲基-4，5，6，7-四氨-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-异喹啉-1-酮的制备
Figure BDA0000464558370001001
用与实施例1(步骤5-6)相似的方法制备，只是在第5步中用6-氯-2-甲基-4-(5-甲基-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮替换6-氯-2-甲基-4-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮，用2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-异喹啉-2-基)-4-碘-吡啶-3-甲醛替换2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-碘烟醛，得到类白色固体状的标题化合物60mg。(M+H)+＝585m/e。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.42(s，9H)2.55(s，3H)2.98(br.s.，2H)3.70(br.s.，2H)3.92(s，3H)4.18(br.s.，2H)4.24(dd，J＝10.74，3.16Hz，1H)4.44-4.63(m，2H)5.91(s，1H)6.64(dd，J＝7.58，2.02Hz，1H)7.24(dd，J＝13.64，1.77Hz，1H)7.28(d，J＝7.58Hz，1H)7.35(d，J＝1.77Hz，1H)7.62(d，J＝5.05Hz，1H)7.93(s，1H)8.00(s，1H)8.68(d，J＝5.05Hz，1H)。
实施例24
6-叔丁基-8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-氧杂环丁烷-3-基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-异喹啉-1-酮的制备
Figure BDA0000464558370001011
用与实施例1(步骤5-6)相似的方法制备，只是在第5步中用6-氯-2-甲基-4-(5-氧杂环丁烷-3-基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]-吡嗪-2-基氨基)-2H-哒嗪-3-酮替换6-氯-2-甲基-4-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮，并用2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-异喹啉-2-基)-4-碘-吡啶-3-甲醛替换2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-碘烟醛，得到类白色固体状的标题化合物100mg。(M+H)+＝627m/e。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm1.42(s，9H)2.84-2.96(m，2H)3.60-3.71(m，2H)3.80-3.87(m，1H)3.92(s，3H)4.19(t，J＝5.43Hz，2H)4.46-4.60(m，2H)4.70-4.75(m，2H)4.76-4.81(m，2H)5.96(s，1H)6.65(dd，J＝7.45，2.15Hz，1H)7.21-7.27(m，2H)7.27(d，J＝7.8Hz，1H)7.35(d，J＝1.77Hz，1H)7.62(d，J＝5.05Hz，1H)7.92(s，1H)8.02(s，1H)8.68(d，J＝5.05Hz，1H)。
实施例25
6-叔丁基-2-{4-[5-(5-乙基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-3-羟基甲基-吡啶-2-基}-8-氟-2H-异喹啉-1-酮的制备
Figure BDA0000464558370001021
用与实施例1(步骤5-6)相似的方法制备，只是在第5步中用6-氯-4-(5-乙基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-2-甲基-2H-哒嗪-3-酮替换6-氯-2-甲基-4-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮，并用2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-异喹啉-2-基)-4-碘-吡啶-3-甲醛替换2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-碘烟醛，得到淡黄色固体状的标题化合物65mg。(M+H)+＝599m/e。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.17-1.27(m，3H)1.41(s，9H)2.68(br.s.，2H)2.98(br.s.，2H)3.70(br.s.，2H)3.92(s，3H)4.14(br.s.，2H)4.24(dd，J＝10.61，3.28Hz，1H)4.43-4.63(m，2H)5.92(s，1H)6.64(dd，J＝7.58，2.02Hz，1H)7.24(dd，J＝13.39，1.77Hz，1H)7.28(d，J＝7.4Hz，1H)7.35(d，J＝1.52Hz，1H)7.62(d，J＝5.05Hz，1H)7.91(s，1H)8.00(s，1H)8.68(d，J＝5.05Hz，1H)。
实施例26
6-叔丁基-2-{4-[5-(5-环丙基甲基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-3-羟基甲基-吡啶-2-基}-8-氟-2H-酞嗪-1-酮的制备
Figure BDA0000464558370001022
用与实施例21相似的方法制备，只是在第1步中用环丙基甲胺替换氧杂环丁烷-3-胺，得到淡黄色固体状的标题化合物100mg。(M+H)+＝626m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 0.01(d，J＝4.15Hz，2H)0.42(d，J＝7.55Hz，2H)0.77(br.s.，1H)1.22(s，9H)2.30(br.s.，2H)2.86(br.s.，2H)3.58(br.s.，2H)3.69(s，3H)3.77(t，J＝7.18Hz，1H)3.96(br.s.，2H)4.32(d，J＝7.18Hz，2H)5.65(s，1H)7.26-7.36(m，2H)7.41(d，J＝4.91Hz，1H)7.68(s，1H)7.76(s，1H)8.10(d，J＝2.64Hz，1H)8.50(d，J＝5.29Hz，1H)。
方案I
I-27的制备
Figure BDA0000464558370001031
步骤1.2-(6-氨基-吡啶-3-基氧基)-2-甲基丙酸乙酯的制备
Figure BDA0000464558370001041
向装有6-氨基吡啶-3-醇氢溴酸盐(2g，10.5mmol)和乙基-2-溴-2-甲基丙酯(2.04g，10.5mmol)在无水乙腈(25ml)中的瓶中，加入碳酸铯(10.7g，33mmol)，氩气氛下搅拌16小时。加入水(60ml)和乙酸乙酯(60ml)，在分液漏斗中振摇。收集有机相，水相用乙酸乙酯(2x 50ml)反萃取。用硫酸镁干燥合并的有机相，滤过并真空浓缩，得到金棕色固体(1.626g)(M+H)+＝225m/e。
步骤2.2-[6-(6-氯-2-甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基氨基)-吡啶-3-基氧基]-2-甲基丙酸乙酯的制备
Figure BDA0000464558370001042
将装有2-(6-氨基-吡啶-3-基氧基)-2-甲基-丙酸乙酯(1.365g，6.09mmol)、4-溴-6-氯-2-甲基哒嗪-3(2H)-酮(1.77g，7.91mmol)、4，5-双(二苯基膦)-9，9-二甲基呫吨(528mg，0.913mmol)和碳酸铯(6.94g，21.3mmol)在干燥二噁烷(60ml)中的瓶抽真空，回充氩气(重复3次)。加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(418mg，0.457mmol)，将瓶抽真空，回充氩气(重复3次)。将瓶置于加热至90℃的油浴，氩气氛下搅拌16小时。瓶冷却至环境温度，并将瓶中物质用硅藻土塞过滤，用二噁烷洗涤。将可挥发物真空浓缩，残余物用硅胶色谱纯化，用5％至25％乙酸乙酯/己烷洗脱得到浅黄棕色粉末状的期望产物(2.035g)。(M+H)+＝367m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.30(t，J＝7.18Hz，3H)1.59(s，6H)3.80(s，3H)4.26(q，J＝7.18Hz，2H)6.83(d，J＝9.06Hz，1H)7.26-7.30(m，1H)8.04(d，J＝3.02Hz，1H)8.18(s，1H)8.22(s，1H)。
步骤3.6-氯-4-[5-(2-羟基-1，1-二甲基-乙氧基)-吡啶-2-基氨基]-2-甲基-2H-哒嗪-3-酮的制备
Figure BDA0000464558370001051
将2-[6-(6-氯-2-甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基氨基)-吡啶-3-基氧基]-2-甲基-丙酸乙酯(1.23g，3.35mmol，Eq：1.00)溶于无水THF(25ml)中，氮气氛下冷却至-30℃(干冰/乙腈冷却浴)。在10分钟里以滴加的方式缓慢加入氢化铝锂溶液(4.7ml，4.69mmol，1.0M在THF中)。混合物搅拌1小时，同时保持浴温约-20℃。加水(0.1ml)小心终止反应，环境下搅拌10分钟。然后加入5％氢氧化钠溶液(0.19ml)，将混合物搅拌10min。加水(0.19ml)，再持续搅拌10分钟。最终加入硫酸镁，硅藻土塞滤过，用四氢呋喃充分洗涤。合并的滤液与洗涤液在旋转蒸发仪上浓缩至约一半体积。加入乙酸乙酯(50ml)和水(70ml)，在分液漏斗中振摇。收集有机相，水相用乙酸乙酯(2x 40ml)反萃取。合并有机相，硫酸镁干燥，滤过，真空浓缩。残余物用热二氯甲烷/己烷研磨，得到浅黄棕色固体状的期望产物(1.041g)。(M+H)+＝325m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.28(s，6H)3.81(s，3H)6.92(d，J＝8.69Hz，1H)7.30(s，1H)7.36(dd，J＝8.69，2.64Hz，1H)8.12(d，J＝2.64Hz，1H)8.28(s，1H)。
步骤4.2-[6-(6-氯-2-甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基氨基)-吡啶-3-基氧基]-2-甲基-丙醛的制备
Figure BDA0000464558370001061
向6-氯-4-(5-(1-羟基-2-甲基丙-2-基氧基)吡啶-2-基氨基)-2-甲基哒嗪-3(2H)-酮(750mg，2.31mmol，Eq：1.00)在DCM(100ml)中的混悬液中加入戴斯马丁氧化剂(1.27g，3.00mmol，Eq：1.30)。室温搅拌反应混合物约40分钟。加入***(100mL)，之后加入50ml NaOH溶液(1M)。混合物再搅拌15分钟，转移至分液漏斗中。有机层用等体积的NaOH(1M)水(50mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，真空蒸发得到浅棕色粉末的期望产物(668mg)。(M+H)+＝323m/e。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.36(s，6H)3.68(s，3H)7.43-7.47(m，1H)7.51-7.55(m，1H)8.10(dd，J＝3.03，0.51Hz，1H)8.27(s，1H)9.69(s，1H)9.82(s，1H)。
步骤5.6-氯-4-{5-[2-(3，3-二氟-氮杂环丁烷-1-基)-1，1-二甲基-乙氧基]-吡啶-2-基氨基}-2-甲基-2H-哒嗪-3-酮的制备
Figure BDA0000464558370001062
向2-(6-(6-氯-2-甲基-3-氧代-2，3-二氢哒嗪-4-基氨基)吡啶-3-基氧基)-2-甲基丙醛(665mg，2.06mmol，Eq：1.00)在DCE(70ml)中的溶液中加入3，3-二氟氮杂环丁烷盐酸盐(347mg，2.68mmol，Eq：1.30)。RT下搅拌混合物1h，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(655mg，3.09mmol，Eq：1.5)，持续搅拌18h。反应混合物用饱和NaHCO3溶液稀释，用DCM(5x20mL)萃取。干燥有机层(MgSO4)，真空浓缩。得到的残余物进行色谱纯化(SiO2-50g，Hex∶AcOEt，7∶3在20min中，然后50％在30min中)得到白色粉末状的期望产物(566mg)。(M+H)+＝400m/e。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm1.29(s，6H)2.79(br.s.，2H)3.70-3.81(m，4H)3.83(s，3H)6.87(dd，J＝8.84，0.51Hz，1H)7.32(d，J＝8.59Hz，1H)8.10(d，J＝2.78Hz，1H)8.22(s，1H)8.28(s，1H)。
实施例27
6-叔丁基-2-[4-(5-{5-[2-(3，3-二氟-氮杂环丁烷-1-基)-1，1-二甲基-乙氧基]-吡啶-2-基氨基}-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基)-3-羟基甲基-吡啶-2-基]-8-氟-2H-异喹啉-1-酮的制备
用与实施例1(步骤5-6)相似的方法制备，只是在第5步中用6-氯-4-{5-[2-(3，3-二氟-氮杂环丁烷-1-基)-1，1-二甲基-乙氧基]-吡啶-2-基氨基}-2-甲基-2H-哒嗪-3-酮替换6-氯-2-甲基-4-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮，并用2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-异喹啉-2-基)-4-碘-吡啶-3-甲醛替换2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-碘烟醛，得到类白色固体状的标题化合物95mg。(M+H)+＝690m/e。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.30(s，6H)1.41(s，9H)2.80(br.s.，1H)3.76(br.s.，4H)3.94(s，3H)4.14(dd，J＝11.12，3.03Hz，1H)4.45-4.67(m，2H)6.65(dd，J＝7.58，2.02Hz，1H)6.96(d，J＝8.84Hz，1H)7.24(dd，J＝13.64，1.77Hz，1H)7.30(d，J＝7.33Hz，2H)7.31-7.36(m，2H)7.63(d，J＝5.05Hz，1H)8.09(d，J＝2.78Hz，1H)8.31(s，1H)8.64(s，1H)8.71(d，J＝5.05Hz，1H)。
I-28的制备
步骤1.4-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-氯-吡啶-3-甲醛
Figure BDA0000464558370001081
在50mL圆底烧瓶中，将2-氯-4-碘烟醛(389mg，1.45mmol，Eq：1.6)、6-叔丁基-8-氟酞嗪-1(2H)-酮(200mg，908μmol，Eq：1.00)和碳酸钾(251mg，1.82mmol，Eq：2)与DMSO(8ml)合并得到黄色溶液。将溶液用氩气脱气5min。加入碘化亚铜(I)(173mg，908μmol，Eq：1.00)。将反应混合物加热至110℃C，搅拌2h，使反应冷却至室温。反应用1∶1 H2O/饱和NH4Cl(80mL)稀释，滤过收集得到的固体。固体用1∶1 H2O/饱和NH4Cl洗涤数次，然后用水(2X)和EtOAc∶己烷(3∶1，2X)洗涤。在有机相中许多颜色。保留棕色固体。固体用EtOAc、然后用CH2Cl2洗涤数次。合并的有机提取物用水洗涤，MgSO4干燥，真空浓缩。得到的残余物用快速色谱纯化(硅胶，40g，5％至30％EtOAc在己烷中的溶液)得到白色固体状的期望产物(170mg)。(M+H)+＝360m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.42(s，9H)7.40-7.65(m，3H)8.24(d，J＝2.64Hz，1H)8.66(d，J＝5.29Hz，1H)10.32(s，1H)。
实施例28
4-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-3-羟基甲基-1′-甲基-5′-[5-(吗啉-4-羰基)-吡啶-2-基氨基]-1′H-[2，3′]联吡啶-6′-酮的制备
Figure BDA0000464558370001091
用与实施例8相似的方法制备，只是用4-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-氯-吡啶-3-甲醛替换2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-4-碘-吡啶-3-甲醛，得到类白色固体状的标题化合物54mg。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.46(s，9H)3.57-3.86(s和重叠m，11H)4.05(br.s.，1H)4.52(br.s.，2H)6.88(d，J＝8.53Hz，1H)7.35(d，J＝5.27Hz，1H)7.55-7.64(m，2H)7.69(dd，J＝8.53，2.26Hz，1H)7.91(d，J＝2.26Hz，1H)8.11(s，1H)8.36(dd，J＝11.29，2.26Hz，2H)8.83(d，J＝5.02Hz，1H)9.05(d，J＝2.26Hz，1H)。
实施例29
4-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-3-羟基甲基-5′-(5-甲磺酰基-吡啶-2-基氨基)-1′-甲基-1′H-[2，3′]联吡啶-6′-酮的制备
用与实施例9相似的方法制备，只是用4-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-氯-吡啶-3-甲醛替换2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-4-碘-吡啶-3-甲醛，得到类白色固体状的标题化合物54mg。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.30(s，9H)2.92(s，3H)3.61(s，3H)3.80-4.02(m，1H)4.36(s，2H)6.76(d，J＝9.06Hz，1H)7.21(d，J＝5.29Hz，1H)7.35-7.52(m，2H)7.73-7.90(m，2H)8.15(s，2H)8.19(d，J＝2.64Hz，1H)8.60-8.73(m，2H)9.01(d，J＝2.27Hz，1H)。
实施例30
6-叔丁基-2-[4-(5-{5-[2-(3，3-二氟-氮杂环丁烷-1-基)-1，1-二甲基-乙氧基]-吡啶-2-基氨基}-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基)-3-羟基甲基-吡啶-2-基]-8-氟-2H-酞嗪-1-酮的制备
Figure BDA0000464558370001101
用与实施例1(步骤5-6)相似的方法制备，只是在第5步中用6-氯-4-{5-[2-(3，3-二氟-氮杂环丁烷-1-基)-1，1-二甲基-乙氧基]-吡啶-2-基氨基}-2-甲基-2H-哒嗪-3-酮替换6-氯-2-甲基-4-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮，并用2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-异喹啉-2-基)-4-碘-吡啶-3-甲醛替换2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-碘烟醛，得到类白色固体状的标题化合物110mg。(M+H)+＝691m/e。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.28(s，6H)1.44(s，9H)2.77(br.s.，2H)3.75(br.s.，4H)3.85(t，J＝7.07Hz，1H)3.93(s，3H)4.55(br.s.，2H)6.92(d，J＝8.84Hz，1H)7.31(d，J＝8.08Hz，1H)7.46-7.57(m，2H)7.64(d，J＝5.05Hz，1H)8.08(d，J＝2.78Hz，1H)8.23-8.35(m，2H)8.63(s，1H)8.74(d，J＝4.80Hz，1H)。
I-31的制备
方案H
步骤1.2-(3-溴-5-氟-苯基)-2-甲基-丙腈的制备
在2-5℃下将双(三甲硅基)乙酰胺锂在THF(326ml 1M，326mmol，1.05当量)中的溶液滴加至1-溴-3，5-二氟苯(60g，311mmol，1.0equiv.)和异丁腈(25.8g，373mmol，1.2当量)在360mL THF的溶液中。搅拌20h后，仍有13％的起始试剂剩余，又另加0.1eq的双(三甲硅基)乙酰胺锂。再搅拌6小时后，仍剩余10％起始试剂，因此又加入0.1当量双(三甲硅基)乙酰胺锂和0.1当量的异丁腈。将反应混合物搅拌过夜。用1N HCl溶液终止反应混合物，然后浓缩除去一些THF。反应混合物用甲基叔丁基醚萃取(2次)，减压浓缩得到粗品(75.3g)，直接使用。
步骤2.2-溴-N-叔丁基-4-(氰基-二甲基-甲基)-6-氟苯甲酰胺的制备
在-75℃下向2-(3-溴-5-氟苯基)-2-甲基丙腈(30g，124mmol，1.0当量)在180mL THF中的溶液中滴加入二异丙酰胺锂(82.6ml 1.8M，149mmol，1.2当量)。反应混合物在-76℃下搅拌2小时。在-75℃下滴加异氰酸叔丁酯(18.4g，21.8ml，186mmol，1.5当量)，持续搅拌2小时。另加0.5当量异氰酸叔丁酯，使反应混合物逐步温热至室温，搅拌过夜。反应混合物用180mL水终止反应，然后在60℃下减压真空除去THF。在60℃下加入IPA，在60℃下产物从180mL H2O和120mL IPA中结晶。混合物被缓慢冷却至室温过夜。滤过收集结晶，用H2O、H2O/IPA(1/1)和庚烷洗涤，干燥过夜，得到＞99％HPLC纯度的白色结晶固体状的2-溴-N-叔丁基-4-(2-氰基丙-2-基)-6-氟苯甲酰胺(34.7g，102mmol，82.1％收率)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 1.34(s，9H)1.70(s，6H)7.47(dd，J＝10.01，1.70Hz，1H)7.60(s，1H)8.34(s，1H)。
步骤3.2-(8-氟-1-氧代-1，2-二氢-异喹啉-6-基)-2-甲基-丙腈的制备
500mL圆底烧瓶中加入2-溴-N-叔丁基-4-(2-氰基丙-2-基)-6-氟苯甲酰胺(34.5g，101mmol，1当量)和碳酸钾(27.9g，202mmol，2当量)，瓶中接着通氮气(3次)。加入1，4-二噁烷(242ml)和水(34.5ml)。然后用注射器加入E-2-(2-乙氧基乙烯基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环(28.0g，142mmol，1.4当量)。将反应混合物加热至40℃。向混合物中加入双(二苄亚基丙酮)钯(2.33g，4.04mmol，0.04当量)和三环己基膦(2.27g，8.09mmol，0.08当量)，得到的混合物在90℃(内温)/100℃(浴温)下搅拌加热2h直至反应完全。反应混合物冷却至环境温度，用20％NaHSO3溶液(150mL)终止反应，之后搅拌2小时。混合物用EtOAc萃取(2次)，MgSO4干燥，减压浓缩。得到的产物在350mL压力瓶中溶于TFA(138ml)，加热至100℃(浴温)3小时。将反应混合物转移至加有甲苯的圆底烧瓶，减压除去TFA，然后用20％K2CO3溶液碱化。反应混合物用EtOAc萃取，然后用DCM萃取。从甲基-叔丁基醚结晶得到棕色固体状的2-(8-氟-1-氧代-1，2-二氢异喹啉-6-基)-2-甲基丙腈(16.2g，69.6％yield)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 1.74(s，6H)6.60(dd，J＝6.99，1.70Hz，1H)7.16-7.28(m，1H)7.36(dd，J＝13.03，1.70Hz，1H)7.61(d，J＝1.89Hz，1H)11.31(br.s.，1H)。
步骤4.2-[8-氟-2-(3-甲酰基-4-碘-吡啶-2-基)-1-氧代-1，2-二氢-异喹啉-6-基]-2-甲基-丙腈的制备
在100mL圆底烧瓶中，将2-(8-氟-1-氧代-1，2-二氢异喹啉-6-基)-2-甲基丙腈(800mg，3.47mmol，1当量)与THF(32.0ml)合并得到黄色混悬液。加入双(三甲硅基)乙酰胺锂在THF 1M(4.52ml，4.52mmol，1.3当量)中的溶液。室温搅拌反应混合物15min。向得到的琥珀色溶液中加入2-氟-4-碘烟醛(1.31g，5.21mmol，1.5当量)。反应混合物在50℃下加热搅拌15h。将反应混合物倾入5mL饱和NH4Cl和100mL H2O中，并用DCM(3x 100mL)萃取。用Na2SO4干燥有机层，真空浓缩。粗品用快速色谱纯化(硅胶，80g，0％，然后0％至0.5％MeOH在DCM中的溶液)，之后与***∶己烷(1∶8)研磨得到淡黄色固体状的2-[8-氟-2-(3-甲酰基-4-碘-吡啶-2-基)-1-氧代-1，2-二氢-异喹啉-6-基]-2-甲基-丙腈(830mg)。(M+H)+＝462m/e。
步骤5.2-(8-氟-2-{3-甲酰基-4-[1-甲基-5-(5-甲基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-1-氧代-1，2二氢-异喹啉-6-基)-2-甲基-丙腈的制备
将6-氯-2-甲基-4-(5-甲基-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮(511mg，1.73mmol，1当量)、双(频哪醇)二硼(485mg，1.91mmol，1.1当量)和醋酸钾(511mg，5.2mmol，Eq：3)混悬于二噁烷(25ml)中。反应混合物氩气下脱气。加入X-PHOS(124mg，260μmol，Eq：0.15)和醋酸钯(II)(19.5mg，86.7μmol，0.05当量)，反应混合物在100℃氩气氛下(外温)搅拌40min直至反应完全。将浴温降至80℃。瓶子升高离开热浴，但持续搅拌。加入2-(8-氟-2-(3-甲酰基-4-碘吡啶-2-基)-1-氧代-1，2-二氢异喹啉-6-基)-2-甲基丙腈(800mg，1.73mmol，1.0当量)和碳酸钾(719mg，5.2mmol，3当量)，之后加入2.5mL H2O。加入三环己基膦(48.6mg，173μmol，0.1当量)和双(二苄亚基丙酮)钯(49.9mg，86.7μmol，0.05当量)。反应混合物在剧烈搅拌下80℃加热，搅拌1小时。反应混合物被倾入水中。加入一些盐水以破乳，混合物用DCM萃取(4次)。合并的有机萃取物用Na2SO4干燥，真空浓缩。得到的固体加入10mL EtOAc之后加入75mL***研磨。滤过收集固体，并用***洗涤数次，得到淡绿色/灰色固体(800mg)。(M+H)+＝594m/e。产物未经进一步纯化原样用于下一步。
实施例31
步骤6.2-(8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-甲基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-1-氧代-1，2-二氢-异喹啉-6-基)-2-甲基-丙腈的制备
Figure BDA0000464558370001141
在25mL圆底烧瓶中，将2-(8-氟-2-{3-甲酰基-4-[1-甲基-5-(5-甲基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-1-氧代-1，2二氢-异喹啉-6-基)-2-甲基-丙腈(800mg，1.35mmol，1.0当量)与干燥的DCM(25ml)和干燥的甲醇(5mL)合并得到浅黄色溶液。将反应混合物冷却至0℃，加入硼氢化钠(91.8mg，2.43mmol，Eq：1.8)。反应混合物在0℃搅拌40min，然后用2mL饱和NH4Cl搅拌5min终止反应。反应混合物被倾入100mL H2O中，用DCM(3x 150mL)稀释。合并的有机层用Na2SO4干燥，真空浓缩。粗品泡沫被吸收至20mL DCM和15mL甲醇中。向该混合物中加入200mg 10％Pd/C(Degussa品牌)。反应混合物在室温下搅拌2h。滤过除去固体，用10％甲醇的DCM溶液洗涤数次。将合并的滤液与洗涤液真空浓缩。粗品用快速色谱纯化(硅胶，40g，0％至4％MeOH，保持梯度到每个峰都出现)。中心切掉的级分被浓缩得到玻璃样物质，其与***研磨得到类白色固体状的2-(8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-甲基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-1-氧代-1，2-二氢-异喹啉-6-基)-2-甲基-丙腈。(M+H)+＝596m/e。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 1.81(s，6H)2.52(s，3H)2.94(t，J＝5.67Hz，2H)3.65(d，J＝2.27Hz，2H)3.90(s，3H)4.05-4.22(m，3H)4.42-4.60(m，2H)5.85(s，1H)6.66(dd，J＝7.55，1.89Hz，1H)7.22(dd，J＝12.46，1.89Hz，1H)7.35(d，J＝7.55Hz，1H)7.53(d，J＝1.89Hz，1H)7.62(d，J＝4.91Hz，1H)7.92(s，1H)7.99(s，1H)8.68(d，J＝4.91Hz，1H)。
实施例32
6-叔丁基-2-[4-(5-{5-[2-(3，3-二氟-氮杂环丁烷-1-基)-1，1-二甲基-乙氧基]-吡啶-2-基氨基}-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基)-3-羟基甲基-吡啶-2-基]-2H-酞嗪-1-酮的制备
Figure BDA0000464558370001151
用与实施例1(步骤5-6)相似的方法制备，只是在第5步中用6-氯-4-{5-[2-(3，3-二氟-氮杂环丁烷-1-基)-1，1-二甲基-乙氧基]-吡啶-2-基氨基}-2-甲基-2H-哒嗪-3-酮替换6-氯-2-甲基-4-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮，并用2-(6-叔丁基-1-氧代-1H-异喹啉-2-基)-4-碘-吡啶-3-甲醛替换2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-碘烟醛，得到类白色固体状的标题化合物149mg。(M+H)+＝673m/e。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.28(br.s.，6H)1.46(s，9H)2.77(br.s.，2H)3.75(br.s.，4H)3.93(s，3H)3.98(t，J＝7.07Hz，1H)4.54(br.s.，2H)6.93(d，J＝8.84Hz，1H)7.31(d，J＝7.07Hz，1H)7.64(d，J＝5.05Hz，1H)7.78(d，J＝1.52Hz，1H)7.90-7.95(m，1H)8.07(d，J＝2.53Hz，1H)8.29(s，1H)8.39(d，J＝0.76Hz，1H)8.45(d，J＝8.34Hz，1H)8.64(s，1H)8.75(d，J＝5.05Hz，1H)。
实施例33
2-{2-[4-(5-{5-[2-(3，3-二氟-氮杂环丁烷-1-基)-1，1-二甲基-乙氧基]-吡啶-2-基氨基}-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基)-3-羟基甲基-吡啶-2-基]-8-氟-1-氧代-1，2-二氢-异喹啉-6-基}-2-甲基-丙腈的制备
Figure BDA0000464558370001161
用与实施例1(步骤5-6)相似的方法制备，只是在第5步中用6-氯-4-{5-[2-(3，3-二氟-氮杂环丁烷-1-基)-1，1-二甲基-乙氧基]-吡啶-2-基氨基}-2-甲基-2H-哒嗪-3-酮替换6-氯-2-甲基-4-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基氨基)哒嗪-3(2H)-酮，得到类白色固体状的标题化合物135mg。(M+H)+＝701m/e1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.30(br.s.，6H)1.81(s，6H)2.81(br.s.，2H)3.81(br.s.，4H)3.93(s，3H)4.01(dd，J＝10.36，3.28Hz，1H)4.43-4.62(m，2H)6.67(dd，J＝7.58，2.02Hz，1H)6.93(d，J＝8.84Hz，1H)7.23(dd，J＝12.25，1.89Hz，1H)7.32(br.s.，1H)7.37(d，J＝7.33Hz，1H)7.52-7.56(m，1H)7.64(d，J＝4.80Hz，1H)8.08(d，J＝2.78Hz，1H)8.31(s，1H)8.63(s，1H)8.71(d，J＝5.05Hz，1H)。
实施例34
2-(6-(2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-3-(羟基甲基)吡啶-4-基)-2-甲基-3-氧代-2，3-二氢哒嗪-4-基氨基)-5-甲基-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡嗪5-氧化物的制备
Figure BDA0000464558370001171
向6-叔丁基-8-氟-2-(3-(羟基甲基)-4-(1-甲基-5-(5-甲基-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢哒嗪-3-基)吡啶-2-基)酞嗪-1(2H)-酮(500mg，854μmol，1当量)在DCM(10ml)中的溶液中加入3-氯过氧化苯甲酸(191mg，854μmol，1当量)。将反应混合物搅拌18小时。反应混合物用二氯甲烷稀释，并用1.0N NaOH(aq)洗涤。分层，有机层用盐水洗涤，硫酸钠干燥，滤过，真空下浓缩得到液体，其过夜逐渐硬化至低熔点黄色固体。固体被溶于最少量的甲醇中，用二氯甲烷稀释，上柱。粗品用快速色谱纯化(硅胶，40g，50％60∶10∶1 DCM∶MeOH∶NH4OH在DCM中)得到黄色固体状的2-(6-(2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-3-(羟基甲基)吡啶-4-基)-2-甲基-3-氧代-2，3-二氢哒嗪-4-基氨基)-5-甲基-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡嗪5-氧化物(158.5mg，263μmol，30.9％收率)。(M+H)+＝602m/e。1H NMR(300MHz，甲醇-d4)d ppm 1.47(s，9H)3.45(s，3H)3.74(dt，J＝12.46，2.46Hz，1H)3.89(s，3H)4.07(td，J＝11.80，4.72Hz，1H)4.25-4.43(m，1H)4.45-4.62(m，2H)4.61-4.85(m，3H)6.13(s，1H)7.54-7.79(m，2H)7.87(d，J＝1.51Hz，1H)8.07(s，1H)8.50(d，J＝2.64Hz，1H)8.66(d，J＝5.29Hz，1H)。
生物学测定数据
酪氨酸激酶(Btk)抑制测定
该测定是通过过滤捕获放射性33P磷酸化产物。Btk、生物素化的SH2肽底物(Src同源性)与ATP的相互作用导致肽底物的磷酸化。生物素化的产物是结合的链霉抗生物素蛋白琼脂糖珠。所有结合的、放射性标记的产物通过闪烁计数器检测。
测定的板是96-孔聚丙烯(Greiner)和96孔1.2μm亲水性PVDF过滤板(Millipore)。在此处报道的浓度是最终测定浓度：在DMSO(Burdick和Jackson)中的10-100μM化合物、5-10nM Btk酶(His-标记的，全长)、30μM肽底物(生物素-Aca-AAAEEIYGEI-NH2)、100μM ATP(西格玛(Sigma))、8mM咪唑(西格玛，pH7.2)、8mM甘油-2-磷酸(西格玛)、200μM EGTA(罗氏诊断(Roche Diagnostics))、1mM MnCl2(西格玛)、20mM MgCl2(西格玛)、0.1mg/ml BSA(西格玛)、2mM DTT(西格玛)、1μCi 33P ATP(Amersham)、20％链霉抗生物素蛋白琼脂糖珠(Amersham)、50mM EDTA(Gibco)、2MNaCl(Gibco)、2M NaCl w/1％磷酸(Gibco)、microscint-20(铂尔金爱尔默(Perkin Elmer)。
使用从标准的96孔板测定模板产生的数据，从每个化合物的10个数据点计算IC50测定值。在每个板上测试一种对照化合物和七种未知抑制剂，每个板进行两次。典型地，以半对数(half-log)稀释化合物，从100μM开始并且以3nM结束。对照化合物是星形孢菌素。在不存在肽底物时计数背景。在存在肽底物时，测定总活性。使用下列方法来测定Btk抑制。
1)样品制备：将测试化合物以半对数增量在测定缓冲液(咪唑、甘油-2-磷酸、EGTA、MnCl2、MgCl2、BSA)中稀释。
2)珠制备
a.)通过在500g离心漂洗珠
b.)用PBS和EDTA重构所述珠，产生20％珠的浆状物
3)在30℃预温育不含底物的反应混合物(测定缓冲液、DTT、ATP、33P ATP)和具有底物的混合物(测定缓冲液、DTT、ATP、33P ATP、肽底物)达15分钟。
4)为了起始测定，在室温预温育10μL在酶缓冲液(咪唑、甘油-2-磷酸、BSA)中的Btk和10μL的测试化合物达10分钟。
5)将30μL不含有或含有底物的反应混合物加入到Btk和化合物中。
6)在30℃温育50μL的总测定混合物达30分钟。
7)将40μL的测定物转移到过滤板中的150μL珠浆状物中来终止反应。
8)在30分钟后，用下列步骤洗涤过滤板：
a.3x 250μL NaCl
b.3x 250μL NaCl，其包含1％磷酸
c.1x 250μL H2O
9)在65℃干燥板1小时或在室温干燥板过夜。
10)加入50μL microscint-20并在闪烁计数器上计数33P cpm。
从以cpm表示的原始数据计算百分比活性
百分比活性＝(样品-bkg)/(总活性-bkg)x 100
使用一位点(one-site)剂量反应S形曲线模型从百分比活性计算IC50
y＝A+((B-A)/(1+((x/C)D))))
x＝化合物(cmpd)浓度，y＝％活性，A＝min，B＝max，C＝IC50，D＝1(希尔(hill)斜率)
通过CD69表达测量的全血中的B细胞活化的抑制
用于测试Btk抑制剂抑制在人血液中B细胞的B细胞受体介导的活化的能力的程序如下：
人全血(HWB)获自健康志愿者，满足以下限制：24hr不用药，不吸烟者。通过静脉穿刺将血液收集到用肝素钠抗凝化的Vacutainer管中。测试化合物在PBS中稀释至10倍所需初始药物浓度(20x)，接着在10％的在PBS中的DMSO中三倍系列稀释，得到9点的剂量响应曲线。将5.5μl的每种化合物稀释液一式两份添加到2ml 96孔V型底的板(Analytical Salesand Services，#59623-23)上；向对照和无刺激孔中添加5.5μl的10％在PBS中的DMSO。向每孔添加HWB(100μl)，在混合后将板在37C、5％CO2、100％湿度温育30分钟。在搅拌下向每孔(无刺激孔除外)添加羊F(ab’)2抗人IgM(Southern Biotech，#2022-14)(10μl的500μg/ml溶液，50μg/ml最终浓度)，并且将板温育另外20小时。
在20小时温育结束时，将样品与荧光探针标记的抗体(15μl PE小鼠抗人CD20，BD Pharmingen，#555623，和/或20μl APC小鼠抗人CD69，BD Pharmingen#555533)在37C、5％CO2、100％湿度温育30分钟。包括用于补偿调节和初始电压设置的诱导对照、未染色的和单染色剂。然后将样品用1ml的1X Pharmingen Lyse Buffer(BD Pharmingen#555899)裂解，并且将板在1800rpm离心5分钟。通过抽吸除去上清液，将残留的团粒用另外1ml的1X Pharmingen Lyse Buffer再次裂解，并且将板如前离心(spundown)。吸出上清液，将残留的团粒在FACs缓冲液(PBS+1％FBS)中洗涤。在最后旋转后，除去上清液，并且将团粒重悬浮在180μl的FACs缓冲液中。将样品转移至适于在BD LSR II流式细胞器的HTS 96孔体系上运行的96孔板。
采用适合所用荧光团的激发和发射波长，获取数据并且采用Cell QuestSoftware获得百分比阳性细胞值。结果最初用FACS分析软件(Flow Jo)分析。测试化合物的IC50定义为使CD69阳性细胞的百分比下降50％的浓度，所述CD69阳性细胞在用抗IgM刺激后也是CD20阳性的(8个对照孔的平均，在扣除8个无刺激背景的孔的平均值后)。IC50值是使用XLfit软件版本3，公式201计算的。
该测定的代表性化合物的数据列于下表II中。
表II.
化合物 HWB IC50(nM)
I-1 11
I-2 5
I-3 14
I-4 95
I-5 30
I-6 77
I-7 101
I-8 27
I-9 35
I-10 9
I-11 15
I-12 28
I-13 47
I-14 6
I-15 3
I-16 28
I-17 30
I-18 29
I-19 24
I-20 74
I-21 18
I-22 44
I-23 15
I-24 6
I-25 3
I-26
I-27 62
I-28 74
I-29 162
I-30 55
I-31 36
I-32 106
I-33 212
I-34 3500
B-细胞活化的抑制-在Ramos细胞中的B细胞FLIPR测定
通过测定测试化合物对于抗-IgM刺激的B细胞应答的影响，证明本发明的化合物对B细胞活化的抑制。
B细胞FLIPR测定是测定潜在抑制剂对于由抗-IgM抗体刺激导致的细胞内钙增加的影响的、基于细胞的功能方法。将Ramos细胞(人Burkitt’s淋巴瘤细胞系。ATCC-No.CRL-1596)培养在生长培养基(下述)中。在测定前一天，将Ramos细胞重悬浮在新鲜的生长培养基(与上相同)中并且以0.5x 106/mL的浓度放置在组织培养瓶中。在测定当天，对细胞计数并且将其以1x 106/mL的浓度放入在组织培养瓶中补充了1μMFLUO-3AM(TefLabs目录号0116，在无水DMSO和10％嵌段聚醚酸(Pluronic acid)中制备)的生长培养基中，并且在37℃(4％CO2)温育1小时。为了去除细胞外染料，通过离心(5分钟，1000rpm)收集细胞，并以1x 106细胞/mL重新悬浮在FLIPR缓冲液(下述)中，接着以1x 105细胞/孔分配在96-孔聚-D-赖氨酸包被的黑色/透明的板(BD目录号356692)中。加入从100μM到0.03μM范围内的各个浓度(7个浓度，下面详述)的测试化合物，并且使其与细胞一起在室温温育30分钟。通过加入10μg/mL抗-IgM(Southern Biotech，目录号2020-01)刺激Ramos细胞Ca2+信号传导并且在FLIPR(Molecular Devices，使用具有在480nM激发的氩激光器的CCD照相机捕获96孔板的图像)上测量。
介质/缓冲液：
生长培养基：RPMI 1640培养基，其含有L-谷氨酰胺(Invitrogen，目录号61870-010)，10％胎牛血清(FBS，Summit Biotechnology目录号FP-100-05)；1mM丙酮酸钠(Invitrogen目录号11360-070)。
FLIPR缓冲液：HBSS(Invitrogen，目录号141175-079)，2mMCaCl2(西格玛，目录号C-4901)，HEPES(Invitrogen，目录号15630-080)，2.5mM丙磺舒(西格玛，目录号P-8761)，0.1％BSA(西格玛，目录号A-7906)，11mM葡萄糖(西格玛，目录号G-7528)。
化合物稀释细节：
为了获得100μM的最高最终测定浓度，将24μL的10mM化合物贮存溶液(在DMSO中制备)直接加入到576μL的FLIPR缓冲液中。将测试化合物稀释在FLIPR缓冲液中(使用Biomek 2000自动移液器)得到下列稀释方案：溶剂，1.00x 10-4M，1.00x 10-5，3.16x 10-6，1.00x 10-6，3.16x 10-7，1.00x 10-7，3.16x 10-8。
测定和分析：
使用最大-最小统计(使用Molecular Devices FLIPR对照和统计输出软件，从由加入所述刺激抗体导致的峰减去静止的基线)报道钙的细胞内增加。使用非线性曲线拟合(GraphPad Prism软件)确定IC50。
小鼠胶原蛋白-诱导的关节炎(mCIA)
在第0天，将小鼠用II型胶原蛋白在完全弗氏佐剂(CFA)中的乳剂注射，在尾巴基部或在背部上的几个位置皮内注射(i.d.)。在胶原免疫之后，动物将在约21至35天出现关节炎。关节炎的发作通过在第21天***施用在不完全弗氏佐剂(IFA；i.d.)中的胶原蛋白而同步(增强)。在第20天之后每天检查动物轻微关节炎(1或2分；参考下面的评分描述)的任何发作，这是增强的信号。在增强后，将小鼠评分并且将候选的治疗剂以预定的时间(典型地2-3周)和给药频率给药，每天一次(QD)或每天两次(BID)。
大鼠胶原蛋白-诱导的关节炎(rCIA)
在第0天，将大鼠用II型牛胶原蛋白在不完全弗氏佐剂(IFA)中的乳剂注射，在背部上的几个位置皮内注射(i.d.)。在约第7天在尾巴基部或背部的备选位点提供胶原蛋白乳剂的加强注射(i.d.)。在初始胶原蛋白注射之后的12-14天通常观察到关节炎。从第14天起，如下面所述(关节炎的评价)可以评价动物的关节炎的进展。将动物用候选的治疗剂以预防的方式，开始于二次激发时给药，并且以预定的时间(典型地2-3周)和给药频率给药，每天一次(QD)或每天两次(BID)。
关节炎的评价：
在两种模型中，使用评分***对爪和肢关节的炎症发展进行定量，所述的评分***包括按照下面所述的标准对4个爪的评估：
评分：1＝爪或一个趾的肿胀和/或发红。
2＝两个或更多个关节肿胀。
3＝爪的总体肿胀，涉及多于两个关节。
4＝整个爪和趾的严重关节炎。
如下进行评估：在第0天进行基线测量，在第一个征候或肿胀时再次开始，每周可达三次，直至实验结束。通过将四个单爪评分加和来获得每只小鼠的关节炎指数，每只动物的最大分数为16。
大鼠体内哮喘模型
将雄性棕挪威(Brown-Norway)大鼠用在0.2ml明矾中的100μgOA(卵清蛋白)每周i.p.致敏一次，致敏三周(第0、7和14天)。在第21天(最后致敏后一周)，将大鼠用溶剂或化合物制剂皮下q.d.给药，0.5小时后进行OA气溶胶激发(1％OA，历时45分钟)并且在激发4或24小时后终止。在处死时，从所有动物收集血清和血浆用于分别进行血清学研究和PK。***气管套管并且将肺用PBS灌洗3X。分析BAL流体的总白细胞数和差别白细胞计数。细胞等份试样(20-100μl)中的总白细胞数是通过库尔特计数器确定的。对于差别白细胞计数，将50-200μl样品在Cytospin中离心并且用Diff-Quik将载玻片染色。采用标准形态学标准，在光学显微镜下计数单核细胞、嗜酸性粒细胞、中性白细胞和淋巴细胞的比例，并且用百分比表示。Btk的代表性抑制剂显示：OA致敏的和激发的大鼠的BAL中总白细胞计数与对照水平相比下降。
已经通过举例说明和实施例的方式比较详细地描述了上述发明，以用于阐述和理解的目的。对于本领域技术人员显而易见的是，可以在后附权利要求的范围内进行改变和改进。因此，应该理解上述说明意在是举例说明性的而不是限制性的。因此，本发明的范围不应该参考上述说明书而确定，而应该参考下列后附的权利要求以及由权利要求授权的等价物的全部范围而确定。
将本申请中引用的全部专利、专利申请和出版物的全部内容通过引用并入本文作为参考以满足全部目的到这样的程度，就如同每个专利、专利申请或出版物是分别指明的一样。

Claims (23)

1.式I化合物，
Figure FDA0000464558360000011
其中：
Figure FDA0000464558360000012
是单键或双键；
X各自独立地是CH、CH2、CHX’或N；
X’是低级烷基；
R是H、-R1、-R1-R2-R3、-R1-R3或-R2-R3；
R1是芳基、杂芳基、双环杂芳基、环烷基、杂环烷基或双环杂环基，其中各自任选地被一个或多个低级烷基、羟基、羟基低级烷基、低级烷氧基、卤代基、硝基、氨基、酰氨基、氰基、氧代或低级卤代烷基取代；
R2是-C(＝O)、-C(＝O)O、-C(＝O)NR2’、-NHC(＝O)O、-C(R2’)2、-O、-S、-C(＝NH)NR2’或-S(＝O)2；
R2’各自独立地是H或低级烷基；
R3是H或R4；
R4是低级烷基、低级卤代烷基、低级烷氧基、氨基、低级烷基氨基、环烷基氨基、低级二烷基氨基、芳基、芳基烷基、烷基芳基、杂芳基、低级烷基杂芳基、杂芳基低级烷基、环烷基、低级烷基环烷基、环烷基低级烷基、杂环烷基、低级烷基杂环烷基、杂环烷基低级烷基、双环环烷基、双环杂环烷基、螺环烷基、螺杂环烷基或双环螺杂环烷基，其各自任选被一个或多个低级烷基、卤代基、低级烷基氨基、低级二烷基氨基、羟基、羟基低级烷基、低级烷氧基、低级烷酰基、卤代基、硝基、氨基、酰氨基、酰基、氰基、氧代、磺酰基、低级烷基磺酰基、胍基、羟基氨基、羧基、氨基甲酰基、氨基甲酸酯、卤代低级烷氧基、杂环烷基或卤代低级烷基取代。其中两个低级烷基基团在一起可形成环；
A、Y和Y1各自是CH或N，条件是A、Y和Y1中至少一个必须是N；
Y2是CH或N；
Y3是H或F；
Y4是Y4a、Y4b、Y4c或Y4d；
Y4a是H或卤素；
Y4b是低级烷基，任选被一个或多个选自低级卤代烷基、卤素、羟基、氨基、氰基和低级烷氧基的取代基取代；
Y4c是低级环烷基，任选被一个或多个选自低级烷基、低级卤代烷基、卤素、羟基、氨基、氰基和低级烷氧基的取代基取代；且
Y4d是氨基，任选被一个或多个选自低级烷基、烷氧基低级烷基或羟基低级烷基的取代基取代；
或其药学上可接受的盐。
2.权利要求1的化合物，其中
Figure FDA0000464558360000021
是双键且X是N。
3.权利要求1或2的化合物，其中A是CH，Y是CH，Y1是N，且Y2是N。
4.权利要求1-3中任意一项的化合物，其中Y3是H。
5.权利要求1-3中任意一项的化合物，其中Y3是F。
6.权利要求1-5中任意一项的化合物，其中Y4是环丙基、二甲基氨基或叔丁基。
7.权利要求1-6中任意一项的化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-C(＝O)，且R3是吗啉基。
8.权利要求1-6中任意一项的化合物，其中R是R1，R1是4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基，任选被低级烷基、杂环烷基、环烷基或环烷基低级烷基取代。
9.权利要求1-6中任意一项的化合物，其中R是-R1-R3，R1是吡啶基，且R3是低级烷基杂环烷基。
10.权利要求1-6中任意一项的化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-O，且R3是杂环烷基低级烷基，任选被一个或多个卤代基取代。
11.权利要求1-6中任意一项的化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-C(＝O)，且R3是二甲基氨基。
12.权利要求1-6中任意一项的化合物，其中R是-R1-R2-R3，R1是吡啶基，R2是-S(＝O)2，且R3是甲基。
13.权利要求1-12中任意一项的化合物，其选自：
6-叔丁基-8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(1′-甲基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-6-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-酞嗪-1-酮；
6-叔丁基-8-氟-2-(3-羟基甲基-4-{1-甲基-5-[5-((S)-1-甲基-吡咯烷-2-基)-吡啶-2-基氨基]-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基}-吡啶-2-基)-2H-酞嗪-1-酮；
6-叔丁基-8-氟-2-(3-羟基甲基-4-{1-甲基-5-[5-(吗啉-4-羰基)-吡啶-2-基氨基]-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基}-吡啶-2-基)-2H-酞嗪-1-酮；
6-叔丁基-8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[5-(5-甲磺酰基-吡啶-2-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-酞嗪-1-酮；
6-{6-[2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-3-羟基甲基-吡啶-4-基]-2-甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基氨基}-N，N-二甲基-烟酰胺；
6-{6-[2-(6-环丙基-8-氟-1-氧代-1H-异喹啉-2-基)-3-羟基甲基-吡啶-4-基]-2-甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基氨基}-N，N-二甲基-烟酰胺；
6-叔丁基-2-(3-羟基甲基-4-{1-甲基-5-[5-(吗啉-4-羰基)-吡啶-2-基氨基]-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基}-吡啶-2-基)-2H-酞嗪-1-酮；
2′-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-3′-羟基甲基-1-甲基-5-[5-(吗啉-4-羰基)-吡啶-2-基氨基]-1H-[3，4′]联吡啶-6-酮；
2′-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-3′-羟基甲基-5-(5-甲磺酰基-吡啶-2-基氨基)-1-甲基-1H-[3，4′]联吡啶-6-酮；
6-[2′-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-3′-羟基甲基-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-[3，4′]联吡啶-5-基氨基]-N，N-二甲基-烟酰胺；
2′-(6-环丙基-8-氟-1-氧代-1H-异喹啉-2-基)-3′-羟基甲基-1-甲基-5-[5-(吗啉-4-羰基)-吡啶-2-基氨基]-1H-[3，4′]联吡啶-6-酮；
6-叔丁基-2-(3-羟基甲基-4-{1-甲基-5-[5-((S)-1-甲基-吡咯烷-2-基)-吡啶-2-基氨基]-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基}-吡啶-2-基)-2H-酞嗪-1-酮；
6-叔丁基-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(1′-甲基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-6-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-酞嗪-1-酮；
6-叔丁基-2-{4-[5-(1′-乙基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-6-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-3-羟基甲基-吡啶-2-基}-8-氟-2H-酞嗪-1-酮；
2-(4-{5-[5-(2-氮杂环丁烷-1-基-1，1-二甲基-乙氧基)-吡啶-2-基氨基]-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基}-3-羟基甲基-吡啶-2-基)-6-叔丁基-8-氟-2H-酞嗪-1-酮；
2-(4-{5-[5-(2-氮杂环丁烷-1-基-1，1-二甲基-乙氧基)-吡啶-2-基氨基]-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基}-3-羟基甲基-吡啶-2-基)-6-叔丁基-2H-酞嗪-1-酮；
2-{4-[5-(5-氮杂环丁烷-1-基甲基-1-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-3-羟基甲基-吡啶-2-基}-6-叔丁基-8-氟-2H-酞嗪-1-酮；
6-叔丁基-8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-甲基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-酞嗪-1-酮；
6-叔丁基-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-甲基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-酞嗪-1-酮；
6-环丙基-8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-甲基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-异喹啉-1-酮；
6-叔丁基-8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-氧杂环丁烷-3-基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-酞嗪-1-酮；
6-叔丁基-2-{4-[5-(5-乙基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-3-羟基甲基-吡啶-2-基}-8-氟-2H-酞嗪-1-酮；
6-叔丁基-8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-甲基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-异喹啉-1-酮；
6-叔丁基-8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-氧杂环丁烷-3-基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-异喹啉-1-酮；
6-叔丁基-2-{4-[5-(5-乙基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-3-羟基甲基-吡啶-2-基}-8-氟-2H-异喹啉-1-酮；
6-叔丁基-2-{4-[5-(5-环丙基甲基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-3-羟基甲基-吡啶-2-基}-8-氟-2H-酞嗪-1-酮；
6-叔丁基-2-[4-(5-{5-[2-(3，3-二氟-氮杂环丁烷-1-基)-1，1-二甲基-乙氧基]-吡啶-2-基氨基}-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基)-3-羟基甲基-吡啶-2-基]-8-氟-2H-异喹啉-1-酮；
4-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-3-羟基甲基-1′-甲基-5′-[5-(吗啉-4-羰基)-吡啶-2-基氨基]-1′H-[2，3′]联吡啶-6′-酮，
4-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-3-羟基甲基-5′-(5-甲磺酰基-吡啶-2-基氨基)-1′-甲基-1′H-[2，3′]联吡啶-6′-酮；
6-叔丁基-2-[4-(5-{5-[2-(3，3-二氟-氮杂环丁烷-1-基)-1，1-二甲基-乙氧基]-吡啶-2-基氨基}-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基)-3-羟基甲基-吡啶-2-基]-8-氟-2H-酞嗪-1-酮；
2-(8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-甲基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-1-氧代-1，2-二氢-异喹啉-6-基)-2-甲基-丙腈；
2-{2-[4-(5-{5-[2-(3，3-二氟-氮杂环丁烷-1-基)-1，1-二甲基-乙氧基]-吡啶-2-基氨基}-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基)-3-羟基甲基-吡啶-2-基]-8-氟-1-氧代-1，2-二氢-异喹啉-6-基}-2-甲基-丙腈；
6-叔丁基-2-[4-(5-{5-[2-(3，3-二氟-氮杂环丁烷-1-基)-1，1-二甲基-乙氧基]-吡啶-2-基氨基}-1-甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基)-3-羟基甲基-吡啶-2-基]-2H-酞嗪-1-酮；和
6-叔丁基-8-氟-2-{3-羟基甲基-4-[1-甲基-5-(5-甲基-5-氧基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-3-基]-吡啶-2-基}-2H-酞嗪-1-酮。
14.治疗炎性和/或自身免疫病症的方法，包括给需要这种治疗的患者施用治疗有效量的权利要求1-13的任意一项Btk抑制剂化合物。
15.治疗类风湿性关节炎的方法，包括给需要这种治疗的患者施用治疗有效量的权利要求1-13的任意一项的Btk抑制剂化合物。
16.治疗哮喘的方法，包括给需要这种治疗的患者施用治疗有效量的权利要求1-13的任意一项的Btk抑制剂化合物。
17.药物组合物，其包含权利要求1-13的任意一项的Btk抑制剂化合物。
18.药物组合物，其包含权利要求1-13的任意一项的Btk抑制剂化合物与至少一种药学上可接受载体、赋形剂或稀释剂。
19.权利要求1-13的任意一项化合物作为治疗活性物质的用途。
20.用于治疗炎性和/或自身免疫病症的权利要求1-13的任意一项化合物。
21.权利要求1-13的任意一项化合物用于治疗炎性和/或自身免疫病症的用途。
22.权利要求1-13的任意一项化合物用于制备治疗炎性和/或自身免疫病症药物的用途。
23.如上所述的发明。
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