CN103710285B - 一种用来进行植物蛋白发酵的纳豆芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种用来进行植物蛋白发酵的纳豆芽孢杆菌及其应用，纳豆芽孢杆菌为一种新的菌株，保藏号为：CGMCC6467，该菌株即可以脱除植物蛋白中的抗营养因子，从而大幅度提高植物蛋白饲料的利用率，又可以作为益生菌进入动物体肠道内，并长期存活，对动物生长发育起到增强机体免疫力并促进生长的作用。

Description

一种用来进行植物蛋白发酵的纳豆芽孢杆菌及其应用

技术领域：

本发明提供一种用来进行植物蛋白发酵的纳豆芽孢杆菌，本发明进一步提供了该菌株在植物蛋白固体发酵中的应用，属于微生物发酵工程领域。

背景技术：

饲料蛋白作为第一大和第一重要原料是制约中国畜牧业发展的第一大权重因子，主控权受制于国外，因此饲料蛋白成为我国畜牧业发展的第一大原料供给瓶径，和食物供给安全瓶径，具有重要的国计民生和国民经济意义，更具有重要的国家安全意义。

豆粕经过有益菌发酵处理后，可使豆粕中的各种抗原成分、抗营养因子被有效的降低或去除，豆粕中的蛋白质被分解成大豆肽，这种大豆肽中富含许多小肽，能直接被动物吸收，而且大豆肽抗原性较低，幼畜、幼禽、虾蟹使用后发生过敏反应的概率大大降低，可明显抑制消化道疾病的发生；提高动物机体免疫力，促进动物生长；同时可大幅度减少疫苗、抗生素等药物使用量；可作为断奶仔猪、幼禽、虾蟹，尤其是许多高档经济动物的优良蛋白质来源。这一产品的推广应用，将大大降低饲料工业对鱼粉等动物性饲料的依赖性，为我国节省大量用于进口鱼粉的外汇，推动饲料工业的技术进步，社会效益和生态效益明显，同时可产生可观的经济效益，发酵豆粕已成为豆粕开发生产的热点。

但是豆粕在发酵时所采用菌种的性能会直接影响最终产品的品质。可见，采用微生物发酵豆粕的关键在于菌种的选择和发酵工艺的控制。

发明内容：

本发明提供一种纳豆芽孢杆菌，为一种新的菌株，可用来进行植物蛋白发酵。

本发明公开了上述纳豆芽孢杆菌在植物蛋白固体发酵中的用途，该菌株即可以脱除植物蛋白中的抗营养因子，从而大幅度提高植物蛋白饲料的利用率，又可以作为益生菌进入动物体肠道内，并长期存活，对动物生长发育起到增强机体免疫力并促进生长的作用。

本发明提供的一种用来进行植物蛋白发酵的纳豆芽孢杆菌，命名为纳豆芽孢杆菌（Bacillus natto），该疫苗株已于2012年8月21日保藏在《中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心》，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为：CGMCC6467。

本发明所述的所述纳豆芽孢杆菌的筛选方法，包括以下步骤完成：

1）猪粪样品采集

收集样品，冷藏备用；

2）芽孢杆菌预筛选和增殖培养

将样品进行预加热处理，并用普通营养肉汤培养；

3）单个菌落的分离

利用重复划线法获得单菌落；

4）耐胆盐筛选

用含有猪胆盐的营养肉汤培养基进行耐受性筛选，从而获得耐胆盐性较高的芽孢杆菌；

5）芽孢杆菌对致病性大肠杆菌的抑制

采用琼脂扩散法测量抑菌圈的直径，从而获得抑制大肠杆菌性能较高的纳豆芽孢杆菌。

本发明纳豆芽孢杆菌固体发酵的应用：

单因素实验。根据微生物的特点，进行单因素实验，主要影响因素为温度、时间、和接种量。

正交实验：根据筛选出的最佳固液比，进行正交实验，主要影响因素为温度、时间、和接种量。单因素试验及正交试验主要测定指标为抗原蛋白的含量，并计算抗原蛋白降解率。

经过实验测定，芽孢杆菌发酵豆粕的最佳条件为温度36℃，pH6.5，接种量10%，固液比1:0.8，发酵时间3d时，抗原蛋白降解率最高。

本发明具有以下有益效果：

本发明提供的纳豆芽孢杆菌能抵抗动物肠道内的环境，包括胃中的酸性环境和十二指肠中的胆汁，顺利的在动物肠道内存活并发挥抑菌效果。以益生纳豆芽孢杆菌为发酵菌种，对大豆粕进行发酵，采用固态发酵法进行规模化生产，无论是在经济效益方面，还是在社会效益、生态效益方面，都大力推动了我国畜牧业向持续、健康、稳定的方向向前发展。

附图说明：

图1为本发明纳豆芽孢杆菌对大肠杆菌的抑菌圈；

图2~图5为本发明固液比对芽孢杆菌固体发酵效果图。

具体实施方式

通过以下实施例进一步举例描述本发明，并不以任何方式限制本发明，在不背离本发明的技术解决方案的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。

实施例1

纳豆芽孢杆菌的获得与鉴定

本发明采用了以下技术路线进行筛选：

1、猪粪样品采集

2004年8月从长春市猪场大量采集健康长白仔猪的猪粪样品，共106份，装入灭菌塑料盒中，冷藏备用。

2、芽孢杆菌预筛选和增殖培养

分别将每份猪粪样品称取1g，与20ml的无菌水混合，于90℃的水浴中处理15min，再静置10min后，取10ml上清液加入到100m1 普通肉汤培养基(pH7.0)中，摇瓶培养(37℃, 120r/min)24h。

3、单个菌落的分离

将经历预筛选的菌悬液稀释107倍后涂平板，调取不同的单个菌落于平板画线，培养24h，每个单个菌落重复平板画线2～3次，直至获得纯菌株。

4、耐酸筛选

分别将已获得纯种的单个菌株增殖培养，取培养物20ml,其中10ml加入到pH为3.0的100m1普通肉汤培养基中，摇瓶震荡培养(37℃, 120r/min) 3h。另外l0ml加入到pH为7.0的100m1普通肉汤培养基中，摇瓶震荡培养(37℃, 120r/min) 3h，为对照组。用涂抹平板法计数，将试验数据与对照所得数据相除计算存活率。选取存活率达到50%以上的菌株。每个菌株做两个重复，取平均值。

5、耐胆盐筛选

分别将经过耐酸筛选的存活率达到50%以上的菌株增殖培养，取培养物20ml，其中10ml加入到pH为7.0、猪胆盐含量为0.5%的100m1普通肉汤培养基中，摇瓶培养(37℃, 120r/min) 24 h。另外10ml加入到pH为7.0、不含猪胆盐的100m1普通肉汤培养基中，摇瓶培养(37℃, 120r/min) 24 h。根据对照，选取培养基变混浊的菌株。每个菌株做两个重复。

6. 芽孢杆菌的鉴定

6.1 芽孢和菌落形态试验

将活化培养24h的菌悬液适当稀释涂布平板，置37℃培养24h，观察菌落形态，用光学显微镜观察单个菌的形态，测定其大小，并对其进行荚膜染色和鞭毛染色（方法见赵斌等的《微生物学试验》），判断其是否有荚膜和鞭毛。培养至36h，用光学显微镜观察芽孢形态。

6.1.1荚膜染色-负染色法

取洁净的载玻片一块，加蒸馏水一滴，取少量菌体放入水滴中混匀并涂片。将涂片放在空气中晾干。在涂片上加复红染色液，2～3分钟后用水洗去复红染色液。将染色片放在空气中晾干。在染色涂片左边加一小滴黑素，用一边缘光滑的载玻片轻轻接触黑素，使黑素沿玻片边缘散开，然后向右一拖，使黑素在染色涂片上形成一薄层，并迅速风干。然后镜检观察是否有荚膜的存在。

6.1.2鞭毛染色-镀银染色法

首先清洗玻片。选择光滑无痕的玻片，将其置于洗衣粉过滤液中煮沸20分钟。取出后用自来水冲洗，晾干。在放入浓洗液中浸泡5～6天，使用前取出玻片，用自来水冲去残酸，再用蒸馏水洗。将水沥干后，放入95%乙醇中脱水。

然后制片。挑取培养12～16小时处于对数期的菌液数环至1～2升无菌水中，使菌液处于轻度浑浊，将该试管放于37℃恒温箱中静置10分钟。然后吸取菌液置于玻片一端，立即将玻片倾斜，使菌液缓慢的流向另一端，用吸水纸吸去多余的菌液。涂片，空气中自然干燥。

最后染色。滴加甲液（丹宁酸5g，FeCl3 1.5g,***2.0ml,NaOH1.0ml蒸馏水100ml配置）染色4～5分钟，用蒸馏水充分洗净甲液，用乙液（AgNO32克，蒸馏水100ml配置）冲去残水，再加乙液于于玻片上，在酒精灯火焰上加热至冒气，维持0.5～1min。用蒸馏水洗，自然干燥，镜检。

6.1.3细胞大小测定

用置于镜台上的镜台测微尺校正目镜测微尺每一小格所代表的长度，然后换下镜台测微尺，换上菌体水浸片，测定菌体的长和宽，测定10个菌体，取平均值。

6.2 生理和生化试验

参照《伯杰氏细菌鉴定手册》(第9版)、东秀珠等的《常见细菌***鉴定手册》和赵斌等的《微生物学试验》进行。

6.2.1 接触酶试验

将24h培养的斜面菌株以铂丝接种环取一小环涂抹于已滴有5%过氧化氢的玻片上观察是否有气泡产生，有气泡产生为阳性，无气泡为阴性。

6.2.2 7%NaCl耐受试验

先将待测菌株于普通营养肉汤中培养24h活化，然后再以1%的接种量于含有7%NaCl的普通肉汤培养基中培养，培养24h观察其是否生长。

6.2.3 50℃条件下是否生长试验

先将待测菌株于普通营养肉汤中培养24h活化，然后接种于普通肉汤培养基中，置于50℃恒温培养箱中培养24h，观察其是否生长。

6.2.4 运动性试验

先将待测菌株于普通营养肉汤中培养24h活化，然后穿刺接种于半固体培养基中，培养24h后观察生长状态。

6.2.5 革兰氏染色试验

取干净载玻片一块，在载玻片的一侧滴一滴待测菌的菌悬液，用盖玻片将菌悬液制成薄的涂层。将涂片自然晾干。手执玻片一端，让菌层向上，将涂片通过火焰2～3次固定。将固定的涂片放在废液缸上的搁架上，加结晶紫染色1min。倾去染色液，再小心地用水洗去涂片上的染色液。滴加碘液媒染1min。用水洗去碘液。将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色至流出液无色，立即用水冲洗。滴加番红复染5min，用水洗去涂片上的染色液。镜检观察。红色为革兰氏阴性菌，紫为革兰氏阳性菌。

6.2.6 淀粉水解

分别用接种环取少量的待测菌株的培养液点接在淀粉培养基平板的表面，至于28℃恒温箱中培养24h。滴加少量的碘液于平板上，轻轻旋转，使碘液均匀坪铺满整个平板，如菌落周围出现透明圈，说明该菌有分解淀粉的能力，淀粉水解试验呈阳性，否则呈阴性。

6.2.7 明胶液化试验

先将待测菌株于普通营养肉汤中培养24h活化，然后将待测菌株穿刺接种于明胶培养基，置于24℃恒温培养箱中64h，观察有无液化情况。

6.2.8 V.P 试验

将待测芽孢杆菌接种于葡萄糖蛋白胨培养液中，于37℃培养48h后，取一定量的培养液加入等量的40%的KOH，再加入0.5～1mg的肌酸，猛烈震荡，2～10分钟之内有红色出现为V.P阳性反应。

6.2.9 柠檬酸盐利用

将待测的芽孢杆菌接种于柠檬酸纳斜面培养基上，指示剂为酚红水溶液，经37℃培养36h，斜面呈黄色为阴性，蓝色为阳性。

6.2.10 糖利用产酸试验

接种待测的芽孢杆菌于糖发酵培养液中,用另外一支不接种的培养基作对照,置于37℃恒温培养箱中,培养36h后观察,如指示剂变黄表示产酸。

6.2.11 甲基红试验

将菌株接种于葡萄糖蛋白胨培养液中，在37℃培养72h,滴加MR试剂（甲基红0.04g，95%酒精 120ml,蒸馏水80ml）数滴，观察结果。以不接菌的为对照，指示剂由红色变为黄色为阳性。

6.2.12 硝酸盐还原试验

将于普通肉汤中培养24h活化的待测菌株接种于硝酸钠蛋白胨培养基内，培养96h，加A液（氨基苯磺酸 0.5g，5mol/L醋酸 100ml）0.2ml，B液(α-萘胺0.8g,5mol/L醋酸 100ml)0.2ml ,观察结果,阳性者呈橙黄色,不变色者为阴性.用一支未接种的为对照管。

6.2.13 卵磷脂酶试验

吸取0.4ml 20%的卵黄盐水悬液，放于小试管中，再加入0.2ml待测菌培养物溶液，充分摇匀后，37℃恒温培养，间隔2h观察一次，至24h。以不加待测菌液的试管为对照。与对照相比，出现浑浊为阳性。

6.3试验结果

6.3.1 芽孢和菌落形态试验

当培养于肉汤琼脂平板上时,菌落近似圆形，乳白色,不透明, 边缘不整齐。菌落与培养基紧贴,不易挑取。菌体呈杆状,两端钝圆, 长约1.8～2μm ,宽约0.8～1.0μm 有荚膜，周生鞭毛。芽孢椭圆形、近中生,芽孢囊不明显膨大。

6.3.2 生理生化试验

共对B12做了17个生理生化实验。具体结果如下：接触酶试验呈阳性，可在含7%NaCl的培养基上生长，可在50℃条件下生长，具有运动性，可利用柠檬酸盐，可水解淀粉，甲基红试验呈阴性，革兰氏染色阳性，卵磷脂酶试验阴性，V. P 试验阳性，可利用硝酸盐，PH为5.7的营养肉汤下生长，可发酵D-葡萄糖、L-***糖、D-木糖和D-甘露醇产酸，可使明胶液化（表1）。

表1  B12的生理生化特征

特   征	纳豆	B12	特  征	纳豆	B12
						接触酶试验	+	+	V. P 试验	+	+
7%NaCl耐受试验	+	+	硝酸盐利用试验	+	+
						50℃条件下是否生长试验	+	+	PH为5.7的营养肉汤下是否生长	+	+
运动性试验	+	+	D-葡萄糖产酸	+	+
						柠檬酸盐利用	+	+	L-***糖产酸	+	+
淀粉水解试验	+	+	D-木糖产酸	+	+
						甲基红试验	-	-	D-甘露醇产酸	+	+
革兰氏染色	+	+	明胶液化试验	+	+
						卵磷脂酶试验	-	-

备注：“＋”表示阳性；“－”表示阴性

7、芽孢杆菌对致病性大肠杆菌的抑制-琼脂扩散法

制作厚度为4mm营养琼脂平板，并在平板上打孔（孔径5mm左右），封底。将致病菌（血清型为k88、k99、987p的大肠杆菌）浓度为106 的菌悬液200ul涂布于该平板上。将各菌株37℃培养24h后，取各菌株的发酵液加满于孔中，然后再37℃培养24h。测量抑菌圈的直径。每个试验做三个重复，取平均值。

8、芽孢杆菌发酵结果

 固液比对芽孢杆菌固体发酵效果的影响

豆粕在36℃，自然pH，接种量为8%的条件下，经芽孢杆菌固体发酵4d。由表2可知，在6种不同的固液比例水平下，豆粕中抗原蛋白含量均降低，从图2和图3可以看出，当固液比为1:1时的抗原蛋白含量最低，为211 mg/kg，抗原蛋白降解率为56.85%。由图4和图5可以看出，干物质中粗蛋白的含量以1:0.8的固液比最高，为49.11%，同样产率也最高为96.79%。且从其它方面的性状来看，气味呈酱酸香味，烘干后味道变淡。当固液比在1:1～1:2之间时，抗原蛋白的含量为211～225mg/kg，但由于液体的含量过多，发酵结束后很多都粘在器壁上，不容易把产物全部收回，且烘干较慢。

综上所述，固液比为1:0.8时抗原蛋白的含量为213mg/kg，其它方面发酵效果最优，且外观呈黄色湿粉状易于发酵操作；参见图2~图5。

固液比对芽孢杆菌固体发酵结果：

表2

项目

外观

气味

初始pH

发酵后pH

抗原蛋白 (mg/kg)

抗原蛋白降解率(%)

DM中粗蛋白含量(%)

产率(%)

1:0

金黄色粉末

清淡

—

—

489±6.56

—

47.12±0.85

100±0.00

1:0.6

黄色微湿粉状

酱酸香

5.4

5.1

248±7.55

49.28±1.55

48.44±0.46

96.12±0.87

1:0.8

黄色湿粉状

酱酸香

5.4

5.1

213±3.61

56.44±0.74

49.11±0.34

96.79±1.04

1:1

褐色块状

酱酸香

5.4

4.9

211±4.58

56.85±0.93

49.07±0.21

94.58±0.85

1:1.2

棕色粘稠状

酱酸香

5.5

4.9

217±3.46

55.62±0.71

48.75±0.39

93.26±1.21

1:1.5

棕黑色稀泥状

酱酸香

5.5

4.9

225±2.65

53.99±0.54

48.93±0.18

93.35±0.44

1:2

棕褐色稀粥状

酱酸香

5.5

4.9

220±1.73

55.01±0.35

48.89±0.33

92.41±0.71

正交试验结果及极差分析：

表3

试验结果：

1、耐酸试验

分离到的耐热的单个菌株共69株。这些菌株经耐酸处理3h后存活率达50%以上的有16株,编号是4、7、12、14、17、21、25、29、30、33、39、41、49、53等。试验结果见表4（表中数据是平均值，并取整）。

表4

2、耐胆盐试验

耐酸的16株菌株在含有0.3%的胆盐的培养基中培养24h后，其中有14株菌的培养基变浑浊。编号为7和41的菌株不生长。见表5。

表5

菌 株

4

7

12

14

17

21

25

27

是否浑浊

＋

－

＋

＋

＋

＋

＋

＋

菌 株

29

30

33

39

41

45

49

53

是否浑浊

＋

＋

＋

＋

－

＋

＋

＋

是否浑浊

＋

＋

＋

＋

－

＋

＋

＋

备注：“＋”表示混浊；“－”表示不混浊

3、菌种的鉴定

菌株B12的个体形态特征,菌落形态特征,革兰氏染色阳性,以及有关生理生化特性,与纳豆芽孢杆菌标准菌株的特性相同,而与其他芽孢杆菌具有明显差别（见图1）鉴定为纳豆芽孢杆菌；

4、抑菌试验

14株耐酸和胆盐的芽孢杆菌中有两株对致病性大肠杆菌具有抑制作用，其编号是12和14号。B12对三种血清型的致病性大肠杆菌（K88、K99、987P）均有抑制活性，其抑制半径分别为1.01cm、0.96cm、0.95cm，而B14只对K88、K99二种血清型的致病性大肠杆菌有抑制活性，抑制半径分别为0.51cm和0.45cm（见表6）。

表6     B12、B14培养24h时对三种致病性大肠杆菌的抑制作用 （单位：cm）

菌株	K88	K99	987P
				12	1.01	0.96	0.95
14	0.51	0.45	0.00

    经过90℃15min，并且在pH3.0的环境中处理3h后，存活率达到50%以上的菌株共16株。对这16菌株的耐胆盐的特性进行研究后发现，其中14株符合要求。并且经过光学显微镜观察和芽孢染色后确定这14株菌均可以产生芽孢，均是芽孢杆菌。然后又通过琼脂扩散法对这14株芽孢杆菌的抑制致病性大肠杆菌的活性进行试验，得到2株具有抑制活性的芽孢杆菌。其编号为B12、B14。其中B12对三种血清型的致病性大肠杆菌（K88、K99、987P）均有抑制活性，其抑制半径分别为1.01cm、0.96cm、0.95cm，而B14只对K88、K99二种血清型的致病性大肠杆菌有抑制活性，抑制半径分别为0.51cm和0.45cm。本发明选取抑菌效果较好的B12号菌株作为发酵植物蛋白的菌株（见图1）。

实施例2

纳豆芽孢杆菌发酵豆粕工艺：

按豆粕与水的重量比为1:0.5～1.0的比例加入30℃～40℃的水润料，润料时间为1～2小时；

将培养好的纳豆芽孢杆菌菌液按接种量10%混入已润好的豆粕原料中；

控温发酵，发酵温度为35℃，控温方式为机械翻料和强制通风；

当发酵物料粗蛋白含量达到50%时，结束发酵，发酵时间大约为3d；

发酵后处理，烘干→粉碎→检验→包装→成品。

应用该纳豆芽孢杆菌发酵后，豆粕中的7S蛋白被完全降解，11S蛋白降解率达95%，胰蛋白酶抑制剂的消除率达90%，胀气因子被完全降解。

实施例3

纳豆芽孢杆菌发酵豆粕工艺：

按豆粕与水的重量比为1:0.5～1.0的比例加入30℃～40℃的水润料，润料时间为1～2小时；

将培养好的纳豆芽孢杆菌菌液按接种量10%混入已润好的豆粕原料中；

控温发酵，发酵温度为35℃，控温方式为机械翻料和强制通风；

当发酵物料粗蛋白含量达到50%时，结束发酵，发酵时间大约为3d；

发酵后处理，烘干→粉碎→检验→包装→成品。

应用该纳豆芽孢杆菌发酵后，豆粕中的7S蛋白被完全降解，11S蛋白降解率达95%，胰蛋白酶抑制剂的消除率达90%，胀气因子被完全降解。

实施例4

纳豆芽孢杆菌发酵菜籽粕工艺：

按菜籽粕与水的重量比为1:0.8的比例加入30℃～40℃的水润料，润料时间为2小时；

将培养好的纳豆芽孢杆菌菌液按接种量10%混入已润好的菜籽粕原料中；

控温发酵，发酵温度为36℃，控温方式为机械翻料和强制通风；

当发酵物料粗蛋白含量达到30%时，结束发酵，发酵时间大约为4d；

发酵后处理，烘干→粉碎→检验→包装→成品。

应用该纳豆芽孢杆菌发酵后，菜籽粕中的7S蛋白被完全降解，11S蛋白降解率达90%，胰蛋白酶抑制剂的消除率达95%，胀气因子被完全降解。

实施例5

纳豆芽孢杆菌发酵花生粕工艺：

按花生粕与水的重量比为1:0.6的比例加入30℃～40℃的水润料，润料时间为1.5小时；

将培养好的纳豆芽孢杆菌菌液按接种量5%混入已润好的花生粕原料中；

控温发酵，发酵温度为35℃，控温方式为机械翻料和强制通风；

当发酵物料粗蛋白含量达到50%时，结束发酵，发酵时间大约为3d；

发酵后处理，烘干→粉碎→检验→包装→成品。

应用该纳豆芽孢杆菌发酵后，花生粕中的7S蛋白被完全降解，11S蛋白降解率达95%。

实施例6

纳豆芽孢杆菌发酵棉粕工艺：

按棉粕与水的重量比为1:0.8的比例加入30℃～40℃的水润料，润料时间为2小时；

将培养好的纳豆芽孢杆菌菌液按接种量10%混入已润好的棉粕原料中；

控温发酵，发酵温度为36℃，控温方式为机械翻料和强制通风；

当发酵物料粗蛋白含量达到30%时，结束发酵，发酵时间大约为3d；

发酵后处理，烘干→粉碎→检验→包装→成品。

应用该纳豆芽孢杆菌发酵后，棉粕中的7S蛋白被完全降解，11S蛋白降解率达90%，胰蛋白酶抑制剂的消除率达90%。

实施例7

纳豆芽孢杆菌发酵芝麻粕工艺：

按芝麻粕与水的重量比为1:0.6的比例加入30℃～40℃的水润料，润料时间为2小时；

将培养好的纳豆芽孢杆菌菌液按接种量5%混入已润好的芝麻粕原料中；

控温发酵，发酵温度为35℃，控温方式为机械翻料和强制通风；

当发酵物料粗蛋白含量达到60%时，结束发酵，发酵时间大约为3d；

发酵后处理，烘干→粉碎→检验→包装→成品。

应用该纳豆芽孢杆菌发酵后，芝麻粕中的7S蛋白被完全降解，11S蛋白降解率达90%。

Claims (2)

1.一种纳豆芽孢杆菌，命名为纳豆芽孢杆菌（Bacillus natto），已于2012年8月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.6467。

2. 权利要求1所述的纳豆芽孢杆菌在制备植物蛋白固体发酵饲料中的用途。