CN103604925A - 一步快速和监控肿瘤的免疫检测条 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种一步快速和监控肿瘤的免疫检测条,共分6个区,第一区加样垫,第二区固相化标记抗体,第三区检测区T,为包被抗体喷涂区带,T区固相化与第二区抗体相对应的特异性抗体,第四区对照区C,C区固相化非特异性抗体,第五区吸水区,所述的吸水区为纸纤维片,第六区硝基纤维层析膜,T区的颜色深浅与待测抗原含量成正比,用检测定量仪可以测出待测抗原浓度范围。本发明中的检测条具有如下技术效果:特异性高;灵敏性高;试验区(T)颜色深浅与肿瘤抗原浓度呈线性关系;能够一步快速检测。
Description
技术领域
本发明涉及一种一步快速和监控肿瘤的免疫检测条,属于生物诊断技术领域。
背景技术
根据流行病统计,毎70名妇女中有一人患卵巢肿瘤。患者存活率为30%。***肿瘤每年有数十万以上患者。而肠胃道肿瘤患者比例更高。目前,筛检测方法如下;卵巢肿瘤CA-125酶联法,***肿瘤CA-15-3酶联法,肠胃道肿瘤CA-199酶联法。筛检阳性者再以昂贵的方法做CT或MRI确诊。肿瘤指标的提升显示肿瘤发生或扩大;肿瘤指标的下降提示治疗的成功。
CA-125、CA-15-3、CA-199酶联法分别作为卵巢肿瘤、***肿瘤和肠胃道肿瘤的诊断和监控在美国和一些国家作为经典立法已经有若干年。但是尚没有一步法快速诊断和监控的报道。现有的酶联法具有如下不足之处:1)检测时间长,酶联法需要3小时出结果;2)保存时间短,保存要求高。需冰箱保存,而且只有6个月-12个月有效期。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足之处,提供一种一步快速和监控肿瘤的免疫检测条。
本发明是通过检测血液中与肿瘤相关的指标进行一步快速和监控肿瘤,与肿瘤相关的指标包括卵巢肿瘤CA-125、***肿瘤CA-15-3和肠胃道肿瘤CA-199。
本发明的免疫检测条共分6个区,第一区加样垫,第二区固相化标记抗体,第三区检测区T,为包被抗体喷涂区带,T区固相化与第二区抗体相对应的特异性抗体,第四区对照区C,C区固相化非特异性抗体,第五区吸水区,所述的吸水区为纸纤维片,第六区硝基纤维层析膜。T区的颜色深浅与待测抗原含量成正比,用检测定量仪扫描或照相T区颜色,再以软件可以测出待测抗原浓度范围。所述的待测物质为与肿瘤相关的抗原,包括用于检测卵巢肿瘤的CA-125、用于检测***肿瘤的CA-15-3或用于检测肠胃道肿瘤的CA-199。
所述的固相化标记抗体区的标记为可见颗粒标记抗体,如金标、硒标或碳标。
所述的对照区C区为硝基纤维素膜上包被兔抗鼠IgG或羊抗鼠IgG。
当检测条用于检测卵巢肿瘤的CA-125时,所述的第二区固相化标记抗体为固相化标记抗CA-125单克隆抗体,所述的检测区T区固相化特异性抗体为包被抗体,与标记抗体相配对的抗CA-125单克隆抗体。
当检测条用于检测卵巢肿瘤的CA-15-3时,所述的第二区固相化标记抗体为固相化标记抗CA-15-3单克隆抗体,所述的检测区T区固相化特异性抗体为包被抗体,与标记抗体相配对的抗CA-15-3单克隆抗体。
当检测条用于检测卵巢肿瘤的CA-199时,所述的第二区固相化标记抗体为固相化标记抗CA-199单克隆抗体,所述的检测区T区固相化特异性抗体为包被抗体,与标记抗体相配对的抗CA-199单克隆抗体。
本发明的工作原理如下:待测样滴加于第一区加样垫,借或不借助展开剂上行至第二区固相化标记抗体区,血样中如存在抗原CA-125或CA-15-3或CA-199,则与标记抗体形成“抗原-标记抗体”复合物。该复合物按毛细管原理在检测条的第6区上上行,行至第3区检测区,与T区一条固相包被线的另一特异抗体形成“标记抗体-抗原-固相包被抗体”复合沉淀线。该沉淀线的色带深浅与抗原血样中浓度有线性关系。上行至第4区对照区上,与C区的固相包被兔抗鼠IgG或羊抗鼠IgG相遇,因为单克隆抗体都属于小鼠单克隆抗体,因此不管抗原存在与否,C区总会有一条沉淀线出现,此条色带一般作为质量控制,如果C区色带不出现,则说明检测条失活。
在检测时间15分钟,将层析检测盒放置于QKTECH4000金标定量分析仪中读取结果。
检测条的制备方法:
1、标记抗体的制备:将所需抗体加入所需量胶体金溶液,搅拌10分钟后,加入1/10体积的1%小牛血清蛋白液作稳定剂,高速离心,取得玫瑰红色沉淀物,即标记抗体。
2、将上述沉淀物溶解于缓冲剂(JAJInternationalInc,SanDiego,CA,USA产品)。中,铺于玻璃纸上,真空抽干;
3、包被抗体制备:将与标记抗体相对应的另一抗体溶液用喷雾方法划线于硝基纤维膜上,于37摄氏度烘干20分钟;
4、装配:将上述各组分贴在有胶面的塑料薄板上,上下两端再贴上吸水纸。切割成条,再装入塑壳之中。
免疫检测条的肿瘤抗原配对抗体
经研发和制作,并用定量分析仪分析,本发明的肿瘤抗原配对抗体一步法研制结果汇总于表1。
表1肿瘤抗原配对抗体一步法研制结果
上述特异配对抗体所制作成的检测方法,仅需加入2滴待测血样,于15分钟时将检测盒放置予定量分析仪***孔。定量分析仪将启动照相或扫描,检测出该检测区(T)颜色深浅,或测试线强度。进入检测分析仪的电脑程序存储,其计算机结果以数字方式显示或打印出来。
本发明中的检测条具有如下技术效果:1、特异性高:所需配对抗体仅作用于相关肿瘤抗原;2、灵敏性高:所需配对抗体以高灵敏度检测相关肿瘤抗原;3、所需配对抗体所制作成的检测盒检测相关肿瘤抗原试验区(T)颜色深浅或测试线强度与肿瘤抗原浓度呈线性关系;4、能够一步快速检测:所需配对抗体制作成的检测盒只需滴加待测血样,在10-20分钟便能测得结果。
附图说明
图1是本发明的一步快速和监控肿瘤的免疫检测条的结构示意图。
其中,1为第一区,2为第二区,3为第三区,4为第四区,5为第五区,6为第六区。
具体实施方式
本发明的实施例中的材料来源如下:
a.肿瘤抗原CA-125;CA-15-3;CA-199购自Sigma-AldrichAtlanta,CA,USA。
b.肿瘤抗原相关特异抗体购自JAJInternationalInc,SanDiego,CA,USA。
c.缓冲剂购自JAJInternationalInc,SanDiego,CA,USA。
实施例1制备免疫检测条及用于检测条检测肿瘤抗原CA-125
制备免疫检测条:包被抗体#125-4012,以2mg/ml喷涂第3区。标记抗体#125-3401制备金标抗体垫,置予第2区。按图1装制检测条,并将检测条置予塑料盒备用。
检测肿瘤抗原CA-125:将肿瘤抗原CA-125按下例浓度稀释至阴性血清中;0,35,70,140,280,560(单位/毫升),加入上述样品2滴予检测盒加样孔中,予15分钟定量分析仪读数,读数结果汇总予表2.
表2不同浓度CA-125检测结果
CA-125浓度单位/毫升 | 检测值O.D |
0 | 0.02 |
35 | 0.10 |
70 | 0.21 |
140 | 0.54 |
280 | 0.92 |
560 | 1.62 |
实验结果:表2显示一步法免疫层析快速检测所得OD光密度与待测抗原CA-125浓度成正比例性线关系
实施例2使用实施例1的免疫检测条和酶联法进行比较检测
采集临床上确诊的卵巢肿瘤病患者血清样本47例和正常妇女血清样本55例。用酶联法和本免疫层析法比较检测,两种方法相关性为100%.CA-125酶联法和免疫层析法检测结果的比较,结果如表3所示。
表3CA-125酶联法和免疫层析法检测结果的比较
临界值:35单位/毫升
实施例3制备免疫检测条及用于检测肿瘤抗原CA-15-3
制备免疫检测条:包被抗体#153-782以2mg/ml喷涂第3区。标记抗体153-678制备金标抗体垫,置予第2区。按图1装制检测条,并将检测条置予塑料盒备用。
检测肿瘤抗原CA-15-3:将***肿瘤CA-15-3按下例浓度稀释至阴性血清中;0,35,70,140,280,560(单位/毫升),加入上述样品2滴予检测盒加样孔中,予15分钟定量分析仪读数,读数结果汇总予表4。
表4不同浓度CA-15-3检测结果
CA-15-3浓度单位/毫升 | 检测值O.D |
0 | 0.08 |
35 | 0.17 |
70 | 0.31 |
140 | 0.58 |
280 | 0.94 |
560 | 1.70 |
检测结果:表4显示一步法免疫层析快速检测所得OD光密度与待测抗原CA-15-3浓度成正比例线性关系。
实施例4使用实施例3的免疫检测条和酶联法进行比较检测
采集临床上确诊的***肿瘤病患者血清样本29例和正常妇女血清样本42例。用酶联法和本免疫层析法-比较检测,两种方法相关性为100%.CA-15-3酶联法和免疫层析法检测结果比较,结果如表5所示。
表5CA-15-3酶联法和免疫层析法检测结果比较
临界值:35单位/毫升
实施例5制备免疫检测条及用于检测肿瘤抗原CA-199
制备免疫检测条:包被抗体#199-1033以2mg/ml喷涂第3区。标记抗体#199-1214制备金标抗体垫,置予第2区。按图1装制检测条,并将检测条置予塑料盒备用。
检测方法:表明将肠胃道肿瘤CA-199按下例浓度稀释至阴性血清中;0,35,70,140,280,560(单位/毫升),加入上述样品2滴予检测盒加样孔中,予15分钟定量分析仪读数,读数结果汇总予表6.
表6不同浓度CA-199检测结果
CA-199浓度单位/毫升 | 检测值O.D |
0 | 0.04 |
35 | 0.12 |
70 | 0.27 |
140 | 0.51 |
280 | 0.98 |
560 | 1.81 |
检测结果:表6显示一步法免疫层析快速检测所得OD光密度与待测抗原CA-199浓度成正比例线性关系。
实施例6使用实施例5的免疫检测条和酶联法进行比较检测
采集临床上确诊的肠胃道肿瘤病患者血清样本18例和正常人血清样本36例。用酶联法和本免疫层析法-比较检测,两种方法相关性为100%.CA-199酶联法和免疫层析法检测结果比较,结果如表7所示。
表7.CA-199酶联法和免疫层析法检测结果比较
临界值:35单位/毫升
实施例7
临床16例卵巢癌症实例,与用酶联法所测得手术前和手术后的检测值相比较,与临床结果相符。其结果集总于表8。显示本发明的检测条与用酶联法检测结果完全一致。
表8.CA-125酶联法和免疫层析法检测结果比较
Claims (4)
1.一步快速和监控肿瘤的免疫检测条,其特征在于,所述的免疫检测条共分6个区,第一区加样垫,第二区固相化标记抗体,第三区检测区T,为包被抗体喷涂区带,T区固相化与第二区抗体相对应的特异性抗体,第四区对照区C,C区固相化非特异性抗体,第五区吸水区,所述的吸水区为纸纤维片,第六区硝基纤维层析膜,T区的颜色深浅与待测抗原含量成正比,用检测定量仪可以测出待测抗原浓度范围,所述的待测物质为与肿瘤相关的抗原,包括用于检测卵巢肿瘤的CA-125、用于检测***肿瘤的CA-15-3或用于检测肠胃道肿瘤的CA-199。
2.根据权利要求1所述的一步快速和监控肿瘤的免疫检测条,其特征在于,所述的第二区固相化标记抗体区的标记为可见颗粒标记抗体。
3.根据权利要求1所述的一步快速和监控肿瘤的免疫检测条,其特征在于,所述的可见颗粒标记为金标、硒标或碳标。
4.根据权利要求1所述的一步快速和监控肿瘤的免疫检测条,其特征在于,可置予一种外壳,以利于检测程序。
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